CN110403200A - 葛仙米组合物及其在缓解眼部疲劳、改善眼部黄斑病变中的应用 - Google Patents
葛仙米组合物及其在缓解眼部疲劳、改善眼部黄斑病变中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于食品医药健康领域,涉及一种葛仙米组合物及其在缓解眼部疲劳和/或改善眼部黄斑病变中的应用。本发明公开了以葛仙米为主要原料,通过不同配方组合和不同制备方法得到分别具有提高皮肤胶原蛋白含量和/或改善皮肤弹性和/或改善皮肤松弛度、缓解眼部疲劳、控制血糖和/或治疗糖尿病、控制血脂、预防和/或治疗动脉粥样硬化、改善腹泻、减轻肠道炎症和提高认知/记忆能力的产品。本发明中,葛仙米组合物中各组成成分具有协同提高皮肤胶原蛋白含量和/或改善皮肤弹性和/或改善皮肤松弛度、明目、控制血糖和/或治疗糖尿病、控制血脂、预防和/或治疗动脉粥样硬化、改善腹泻、对肠道炎症的控制、提高认知/记忆能力的作用。
Description
本申请要求2018年8月7日提交的,申请号为201810889705.1,发明名称为葛仙米或葛仙米加工制品及其应用的发明专利申请的优先权。
技术领域
本发明属于食品医药健康领域,具体涉及葛仙米组合物及其在缓解眼部疲劳、改善眼部黄斑病变中的应用。
背景技术
葛仙米是念珠藻属(Nostoc Vauch)中的球状念珠藻(NostocsphaeoidesKützing)的俗称。又称天仙米、天仙菜、珍珠菜、水木耳、田木耳,是我国传统食用的一种珍贵野生食药两用淡水固氮蓝藻。葛仙米富含活性多糖、蛋白质、多种维生素和矿物质元素,在我国食用历史悠久,不仅是营养丰富的传统佳肴,还具有一些传统保健功效。2018年葛仙米被国家卫生健康委员会批准为新食品原料,这加快了葛仙米在功能食品方面的开发和应用。
发明内容
本发明首次创新提出,以葛仙米为主要原料,通过不同配方组合和不同的制备方法得到的分别具有提高皮肤胶原蛋白含量和改善皮肤弹性和/或改善皮肤松弛度、缓解眼部疲劳、控制血糖和/或治疗糖尿病、控制血脂、改善腹泻、减轻肠道炎症和提高认知/记忆能力的产品。本发明提出了包含葛仙米加工制品的葛仙米组合物在制备用于提高皮肤胶原蛋白含量和/或改善皮肤弹性和/或改善皮肤松弛度、明目、控制血糖和/或治疗糖尿病、控制血脂、预防和/或治疗动脉粥样硬化、改善腹泻、对肠道炎症的控制、提高认知/记忆能力等功效的食品、保健品、医疗用品中的应用。
本发明提出了包含葛仙米加工制品的葛仙米组合物在制备用于提高皮肤胶原蛋白含量和/或改善皮肤弹性和/或改善皮肤松弛度、缓解眼部疲劳、控制血糖和/或治疗糖尿病、抑制血脂升高、预防和/或治疗动脉粥样硬化、改善腹泻、减轻肠道炎症、和/或提高认知/记忆能力的产品中的应用。
本发明中,所述葛仙米加工制品包括葛仙米提取物和/或葛仙米超微粉,可以用于控制血糖和/或治疗糖尿病,控制血脂,改善腹泻、减轻肠道炎症,改善认知/记忆能力。
其中,所述葛仙米提取物通过以下步骤制备得到:取葛仙米干品粉碎至60~80目,加入500倍水浸泡12小时;浸泡完成后加热至100℃,保温提取2h,将提取得到的溶液浓缩至原重量的25%,经干燥,得到所述葛仙米提取物。
其中,所述葛仙米超微粉通过以下步骤制备得到:将葛仙米干品经超微粉碎至500目以上,即得到所述葛仙米超微粉。
本发明还提出了一种包括葛仙米加工制品的用于提高人体皮肤胶原蛋白含量并改善皮肤弹性和/或改善皮肤松弛度的葛仙米组合物。
其中,所述葛仙米加工制品包括葛仙米提取物和/或葛仙米超微粉。
其中,所述葛仙米组合物进一步包括茉莉花,胡椒,胚芽米,加或不加胶原蛋白肽。
进一步地,所述葛仙米组合物和胶原蛋白肽一起使用,效果更佳。
所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米1~20,茉莉花1~20,胡椒1~20,胚芽米1~10,胶原蛋白肽0~20;或,葛仙米1~15,茉莉花11~20,胡椒1~12,胚芽米3~10,胶原蛋白肽0~20;或,葛仙米15~20,茉莉花1~11,胡椒12~20,胚芽米1~3,胶原蛋白肽0~20。
所述该组合物可以提高人体皮肤中胶原蛋白的含量,使皮肤更加紧致,富有弹性。
优选地,所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米1,茉莉花20,胡椒1,胚芽米10;或,葛仙米20,茉莉花1,胡椒20,胚芽米1;或,葛仙米15,茉莉花11,胡椒12,胚芽米3;或,葛仙米15,茉莉花11,胡椒12,胚芽米3,胶原蛋白肽20。
其中,所述葛仙米为葛仙米干品。
其中,所述组成成分葛仙米的加工方法为:取葛仙米干品粉碎至60~80目,加入500倍水浸泡12小时。浸泡完成后,加热至100℃,保温提取2h,得到提取液。将提取液浓缩至原重量的25%,经干燥后得到葛仙米提取物。或,葛仙米干品经超微粉碎至500目以上,得到葛仙米超微粉。
本发明还提供了所述包含葛仙米加工制品的葛仙米组合物在制备用于提高皮肤胶原蛋白含量和/或改善皮肤弹性和/或改善皮肤松弛度的产品中的应用。
所述葛仙米加工制品包括葛仙米提取物和/或葛仙米超微粉。
所述葛仙米组合物进一步包括茉莉花,胡椒,胚芽米,加或不加胶原蛋白肽。
进一步地,所述葛仙米组合物和胶原蛋白肽一起使用,效果更佳。
所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米1~20,茉莉花1~20,胡椒1~20,胚芽米1~10,胶原蛋白肽0~20;或,葛仙米1~15,茉莉花11~20,胡椒1~12,胚芽米3~10,胶原蛋白肽0~20;或,葛仙米15~20,茉莉花1~11,胡椒12~20,胚芽米1~3,胶原蛋白肽0~20。
所述该组合物可以提高人体皮肤中胶原蛋白的含量,使皮肤更加紧致,富有弹性。
优选地,所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米1,茉莉花20,胡椒1,胚芽米10;或,葛仙米20,茉莉花1,胡椒20,胚芽米1;或,葛仙米15,茉莉花11,胡椒12,胚芽米3;或,葛仙米15,茉莉花11,胡椒12,胚芽米3,胶原蛋白肽20。
在一具体实施方案中,所述组成成分葛仙米的加工方法为:取葛仙米干品粉碎至80目,加入500倍水浸泡12小时。浸泡完成后,加热至100℃,保温提取2h,得到提取液。将提取液浓缩至原重量的25%,得到葛仙米浓缩液。进一步地,葛仙米浓缩液经干燥后得到葛仙米提取物。
其中,所述各组成成分茉莉花、胡椒、胚芽米的加工方法为常规工艺,通过水提取、过滤分离、浓缩、干燥等工艺步骤制成所述茉莉花、胡椒、胚芽米的提取物。三种提取物可以单独提取,也可以混合提取。也可以通过市售的方式获得。
上述原料通过加入不同的辅料,采用不同的制剂工艺,从而制成粉剂、果汁饮料、片剂等剂型。优选地剂型为果汁饮料。
本发明还提出一种包括葛仙米加工制品的能够缓解眼部疲劳,改善眼部黄斑病变的葛仙米组合物。
所述葛仙米加工制品包括葛仙米提取物和/或葛仙米超微粉。
所述葛仙米组合物进一步包括茉莉花,胡椒,胚芽米,加或不加胶原蛋白肽。
所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米1~20,茉莉花1~20,胡椒1~20,胚芽米1~10,胶原蛋白肽0~20;或,葛仙米1~15,茉莉花11~20,胡椒1~12,胚芽米3~10,胶原蛋白肽0~20;或,葛仙米15~20,茉莉花1~11,胡椒12~20,胚芽米1~3,胶原蛋白肽0~20。
优选地,所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米1,茉莉花20,胡椒1,胚芽米10;或,葛仙米20,茉莉花1,胡椒20,胚芽米1;或,葛仙米15,茉莉花11,胡椒12,胚芽米3;或,葛仙米15,茉莉花11,胡椒12,胚芽米3,胶原蛋白肽20。
所述葛仙米组合物进一步包括枣和朝鲜蓟。
所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米1~20,枣0~20,朝鲜蓟0~20;或,葛仙米1~10,枣15~20,朝鲜蓟15~20;或,葛仙米10~20,枣0~15,朝鲜蓟0~15。该组合物可以减少自由基对眼部的氧化损伤,缓解眼疲劳。优选地,所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米10,枣15,朝鲜蓟15;或,葛仙米1,枣20,朝鲜蓟20。
其中,所述葛仙米为葛仙米干品。
本发明还提供了包含葛仙米加工制品的葛仙米组合物在制备用于缓解眼部疲劳和/或改善眼部黄斑病变的产品中的应用。
所述葛仙米加工制品包括葛仙米提取物和/或葛仙米超微粉。
所述葛仙米组合物进一步包括茉莉花,胡椒,胚芽米,加或不加胶原蛋白肽。
所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米1~20,茉莉花1~20,胡椒1~20,胚芽米1~10,胶原蛋白肽0~20;或,葛仙米1~15,茉莉花11~20,胡椒1~12,胚芽米3~10,胶原蛋白肽0~20;或,葛仙米15~20,茉莉花1~11,胡椒12~20,胚芽米1~3,胶原蛋白肽0~20。
优选地,所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米1,茉莉花20,胡椒1,胚芽米10;或,葛仙米20,茉莉花1,胡椒20,胚芽米1;或,葛仙米15,茉莉花11,胡椒12,胚芽米3;或,葛仙米15,茉莉花11,胡椒12,胚芽米3,胶原蛋白肽20。
所述葛仙米组合物进一步包括枣和朝鲜蓟。
所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米1~20,枣0~20,朝鲜蓟0~20;或,葛仙米1~10,枣15~20,朝鲜蓟15~20;或,葛仙米10~20,枣0~15,朝鲜蓟0~15。
优选地,所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米10,枣15,朝鲜蓟15;或,葛仙米1,枣20,朝鲜蓟20。
许多学者认为视网膜的脂质过氧化与黄斑病变的发生密切相关。[张蕾,周占宇,牛膺筠,等.促红细胞生成素对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护[J].中华眼科杂志,2008,44(7):645-648.]抗氧化是改善眼部黄斑病变的途径之一。
葛仙米含有较丰富的多糖组分。研究表明,葛仙米多糖具有较好的抗氧化和清除自由基能力,在百草枯诱导的氧化应激增加的情况下,葛仙米多糖可以提高秀丽线虫存活率,降低ROS水平和蛋白质羰基和MDA含量,并增强秀丽线虫的SOD和CAT活性。[Haifeng Li,Linnan Su,etc.Physicochemical Characterization and Functional Analysis of thePolysaccharide from the Edible Microalga Nostoc sphaeroides[J].Molecules,2018,23,508]
所述缓解眼部疲劳包括降低眼屈光度。
所述组成成分葛仙米的加工方法为:取葛仙米干品粉碎至60~80目,加入500倍水浸泡12小时。浸泡完成后,加热至100℃,保温提取2h,得到提取液。将提取液浓缩至原重量的25%,经干燥后得到葛仙米提取物。
在一具体实施方案中,所述组成成分葛仙米的加工方法为:取葛仙米干品粉碎至80目,加入500倍水浸泡12小时。浸泡完成后,加热至100℃,保温提取2h,得到提取液。将提取液浓缩至原重量的25%,得到葛仙米浓缩液。进一步地,葛仙米浓缩液经干燥后得到葛仙米提取物。
其中,所述组成成分枣、朝鲜蓟的加工方法为常规工艺,通过水提取、过滤分离、浓缩、干燥等工艺步骤制成所述枣、朝鲜蓟的提取物。所述组成成分枣、朝鲜蓟的提取物可以单独提取,也可以混合提取。也可以通过市售的方式获得。
上述原料通过加入不同的辅料,采用不同的制剂工艺,从而制成粉剂、果汁饮料、片剂等剂型。优选的剂型为果汁饮料。
本发明还提供一种包括葛仙米加工制品的能够调节血糖和/或治疗糖尿病的葛仙米组合物及其制备方法。
所述葛仙米加工制品包括葛仙米提取物和/或葛仙米超微粉。
所述葛仙米组合物进一步包括枣和朝鲜蓟。
所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米1~20,枣0~20,朝鲜蓟0~20;或,葛仙米1~10,枣15~20,朝鲜蓟15~20;或,葛仙米10~20,枣0~15,朝鲜蓟0~15。
优选地,所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米10,枣15,朝鲜蓟15;或,葛仙米1,枣20,朝鲜蓟20。
其中,所述葛仙米的加工方法为:取葛仙米干品粉碎至60-80目,加入500倍水浸泡12小时。浸泡完成后,加热至100℃,保温提取2h,得到提取液。将提取液浓缩至原重量的25%,得到葛仙米浓缩液。进一步,葛仙米浓缩液经干燥后得到葛仙米提取物。或,葛仙米干品经超微粉碎至500目以上,得到葛仙米超微粉。
上述原料通过加入不同的辅料,采用不同的制剂工艺,从而制成粉剂、液体饮料、片剂等剂型。
本发明还提供了包含葛仙米加工制品的葛仙米组合物在制备用于调节血糖和/或治疗糖尿病的产品中的应用。
所述葛仙米加工制品包括葛仙米提取物和/或葛仙米超微粉。
所述葛仙米组合物进一步包括枣和朝鲜蓟。
优选地,所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米1~20,枣0~20,朝鲜蓟0~20;或,葛仙米1~10,枣15~20,朝鲜蓟15~20;或,葛仙米10~20,枣0~15,朝鲜蓟0~15。
所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米10,枣15,朝鲜蓟15;或,葛仙米1,枣20,朝鲜蓟20。
本发明还提供一种包括葛仙米加工制品的能够调节血脂,和/或,预防和/或治疗动脉粥样硬化的葛仙米组合物及其制备方法。
所述葛仙米组合物包括葛仙米提取物和/或葛仙米超微粉。
所述葛仙米组合物进一步包括枣和朝鲜蓟。
所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米1~20,枣0~20,朝鲜蓟0~20;或,葛仙米1~10,枣15~20,朝鲜蓟15~20;或,葛仙米10~20,枣0~15,朝鲜蓟0~15。
优选地,所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米10,枣15,朝鲜蓟15;或,葛仙米1,枣20,朝鲜蓟20。
本发明还提供了包含葛仙米加工制品的葛仙米组合物在制备用于调节血脂,和/或,预防和/或治疗动脉粥样硬化的产品中的应用。
所述葛仙米加工制品包括葛仙米提取物和/或葛仙米超微粉。
所述葛仙米组合物进一步包括枣和朝鲜蓟。
所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米1~20,枣0~20,朝鲜蓟0~20;或,葛仙米1~10,枣15~20,朝鲜蓟15~20;或,葛仙米10~20,枣0~15,朝鲜蓟0~15。
优选地,所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米10,枣15,朝鲜蓟15;或,葛仙米1,枣20,朝鲜蓟20。
其中,所述葛仙米的加工方法为:取葛仙米干品粉碎至60-80目,加入500倍水浸泡12小时。浸泡完成后,加热至100℃,保温提取2h,得到提取液。将提取液浓缩至原重量的25%,得到葛仙米浓缩液。进一步,葛仙米浓缩液经干燥后得到葛仙米提取物。或者葛仙米经超微粉碎至500目以上,得到葛仙米超微粉。
上述原料通过加入不同的辅料,采用不同的制剂工艺,从而制成粉剂、液体饮料、片剂等剂型。
本发明还提出了一种包括葛仙米加工制品的改善认知能力的葛仙米组合物,通过增强体内抗氧化能力,降低脑部脂质过氧化物来改善认知能力。
所述葛仙米加工制品包括葛仙米提取物和/或葛仙米超微粉。
其中,所述葛仙米的加工方法为:取葛仙米干品粉碎至60-80目,加入500倍水浸泡12小时。浸泡完成后,加热至100℃,保温提取2h,得到提取液。将提取液浓缩至原重量的25%,得到葛仙米浓缩液。进一步地,葛仙米浓缩液经干燥后得到葛仙米提取物。或者,葛仙米经超微粉碎至500目以上,得到葛仙米超微粉。
上述原料通过加入不同的辅料,采用不同的制剂工艺,从而制成粉剂、液体饮料、片剂等剂型。
本发明还提供了包含葛仙米加工制品的葛仙米组合物在制备用于改善认知能力的产品中的应用。
所述葛仙米加工制品包括葛仙米提取物和/或葛仙米超微粉。
目前对改善认知的机理学说较多,主要有tau蛋白异常修饰假说和β淀粉样蛋白(Aβ)毒性假说。其中β淀粉样蛋白可诱导产生自由基,对生物膜造成损害,脑中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphatedehydrogenase,G-6-PD)活性增高,谷氨酰胺合成酶(glutamine synthase,GS)活性降低,脂质过氧化物增多。这表明自由基和过氧化物损伤会导致认知能力下降。[沈阳,陈宇,等.老年痴呆症的分子机制[J].生命科学,2014,26(6):550-559.]
葛仙米含有较丰富的多糖组分。研究表明,葛仙米多糖具有较好的抗氧化和清除自由基能力,在百草枯诱导的氧化应激增加的情况下,葛仙米多糖可以提高秀丽线虫存活率,降低ROS水平和蛋白质羰基和MDA含量,并增强秀丽线虫的SOD和CAT活性。[Haifeng Li,Linnan Su,etc.Physicochemical Characterization and Functional Analysis of thePolysaccharide from the Edible Microalga Nostoc sphaeroides[J].Molecules,2018,23:508.]
本发明还提供一种包括葛仙米加工制品的能够减轻肠道炎症合并改善腹泻的葛仙米组合物及其制备方法。
所述葛仙米加工制品包括葛仙米提取物和/或葛仙米超微粉。
其中,所述葛仙米的加工方法为:取葛仙米干品粉碎至60-80目,加入500倍水浸泡12小时。浸泡完成后,加热至100℃,保温提取2h,得到提取液。将提取液浓缩至原重量的25%,得到葛仙米浓缩液。进一步,葛仙米浓缩液经干燥后得到葛仙米提取物。或者,葛仙米干品经超微粉碎至500目以上,得到葛仙米超微粉。
上述原料通过加入不同的辅料,采用不同的制剂工艺,从而制成粉剂、液体饮料、片剂等剂型。
本发明还提供了包含葛仙米加工制品的葛仙米组合物在制备用于改善腹泻和/或减轻肠道炎症的产品中的应用。
所述葛仙米加工制品包括葛仙米提取物和/或葛仙米超微粉。
本发明提出的包含葛仙米加工制品的葛仙米组合物,可以用于控制血糖和/或治疗糖尿病、控制血脂、改善腹泻、减轻肠道炎症、改善认知/记忆能力等广泛应用中。
其中,所述葛仙米的加工方法为:取葛仙米干品粉碎至60~80目,加入500倍水浸泡12小时。浸泡完成后,加热至100℃,保温提取2h,得到提取液。将提取液浓缩至原重量的25%,经干燥后得到葛仙米提取物。或者,葛仙米经超微粉碎至500目以上,得到葛仙米超微粉。
本发明中,以上葛仙米组合物经常规制剂工艺,可以制成多种剂型,如饮料、颗粒剂、粉剂、片剂、胶囊剂等。
本发明创新之处及有益效果包括:葛仙米组合物,具有提高皮肤胶原蛋白含量和/或改善皮肤弹性和/或改善皮肤松弛度、缓解眼部疲劳、控制血糖和/或治疗糖尿病、控制血脂、预防和/或治疗动脉粥样硬化、改善腹泻、减轻肠道炎症和提高认知/记忆能力等多方面的功效;葛仙米组合物与胶原蛋白等物质进行搭配组合,使其协同也具有上述所述的提高皮肤胶原蛋白含量和/或改善皮肤弹性和/或改善皮肤松弛度等功效。
附图说明
图1为COLI1A1A、COLI1A1B和COLI1A2三种基因的相对表达量,注:相对于正常对照组,*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001。
图2为人体皮肤中胶原蛋白密度变化,其中,注:与第0周相比,*p<0.05。
图3为人体皮肤松弛度变化,其中,注:与第0周相比,*p<0.05。
图4为小鼠空腹血糖变化情况,其中图4a、4b分别为第4周和第8周小鼠空腹血糖变化情况,注,与正常对照组相比,*p<0.05,**p<0.01。
图5a、5b分别为葡萄糖耐量和相应曲线下面积,注:与正常对照组相比,##p<0.01;与模型对照组相比,*p<0.05,**p<0.01。
图6相对ROS生产量,与正常对照组相比,###p<0.001;与模型对照组相比,***p<0.001。
图7为寻找洞口时间(s),注,与正常对照组相比,*p<0.05,**p<0.01。
图8为探索时间(s),注:与旧物体探索时间相比,*p<0.05,**p<0.01。
图9为肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量变化(ng·g-1),注,与模型对照组相比,*p<0.05,**p<0.01。
图10为一氧化氮(NO)含量变化(μmol·g-1),注,与模型对照组相比,*p<0.05,**p<0.01。
图11为大肠中IL-1β、IL-6的mRNA相对表达量,注:与模型对照组相比,*p<0.05,**p<0.01。
图12为排泄水样大便时间(min),注:与模型对照组相比,*p<0.05,**p<0.01。
图13为肠道渗透性(荧光强度),注:与模型对照组相比,*p<0.05,**p<0.01。
图14为潜伏期、有效象限滞留时间、有效区域进入次数,与模型组相比,*p<0.05。
具体实施方式
结合以下具体实施例和附图,对本发明作进一步的详细说明。实施本发明的过程、条件、实验方法等,除以下专门提及的内容之外,均为本领域的普遍知识和公知常识,本发明没有特别限制内容。
实施例1~5
配方按照下表1的比例进行组合。
表1
葛仙米 | 茉莉花 | 胡椒 | 胚芽米 | 胶原蛋白肽 | |
实施例1 | 1 | 20 | 1 | 10 | 0 |
实施例2 | 20 | 1 | 20 | 1 | 0 |
实施例3 | 15 | 11 | 12 | 3 | 0 |
实施例4 | 15 | 11 | 12 | 3 | 20 |
实施例5 | 0 | 0 | 0 | 0 | 20 |
上述实施例1~4中,葛仙米提取物按照前述的方法进行制备。茉莉花、胡椒和胚芽米经过水提取、过滤分离、浓缩、干燥等工艺步骤制成所述茉莉花提取物、胡椒提取物和胚芽米提取物。胶原蛋白肽分子量2000道尔顿,为鱼皮来源或者兽皮(牛皮、猪皮等)来源,市售获得。
实施例1~3葛仙米组合物样品制备:将葛仙米提取物加入50倍水中,加热至80℃,开启搅拌,保温20min,待葛仙米提取物完全溶解后,依次加入茉莉花提取物、胡椒提取物、胚芽米提取物,搅拌10min后,加水补足余量,继续搅拌,80℃保温15min,均质,通过UHT杀菌后进行灌装,分别得到实施例1~3样品。
实施例4葛仙米组合物制备:将胶原蛋白肽加入20倍水中,加热至80℃,开启搅拌,保温15min,待完成溶解后,备用。将葛仙米提取物加入50倍水中,加热至80℃,开启搅拌,保温20min,待葛仙米提取物完全溶解后,依次加入茉莉花提取物、胡椒提取物、胚芽米提取物,搅拌10min后,与胶原白蛋肽溶液混合,再次搅拌10min。加水补足余量,继续搅拌,80℃保温15min,均质,通过UHT杀菌后进行灌装,得到实施例4样品。
实施例5样品制备:将胶原蛋白肽加入20倍水中,加热至80℃,开启搅拌,保温15min,待完成溶解后,加水补足余量,继续搅拌,80℃保温15min,均质,通过UHT杀菌后进行灌装,得到实施例5样品。
应用实施例1葛仙米组合物对COLI1A1A、COLI1A1B和COLI1A2基因表达的影响
皮肤胶原主要是I型胶原蛋白,I型胶原由两条α1链和一条α2链组成。这两种多肽链分别由COLI1A1A、COLI1A1B和COLI1A2基因编码,从而形成三螺旋结构。因此,COLI1A1A、COLI1A1B和COLI1A2三种基因表达关系到皮肤胶原蛋白的合成。
试验方法:
随机选取540尾受精后5天(5dpf)野生型AB系斑马鱼于六孔板中,同时设置正常对照组(养鱼用水处理正常斑马鱼)。每组设立三个平行对照组,每孔(实验组)均处理30尾斑马鱼,每组分别水溶给予实施例1~5样品,每孔药液容量为3mL。供试品处理1天后,使用经典Trizol法提取各实验组斑马鱼总RNA后,利用Thermo超微量分光光度计对总RNA浓度和纯度进行测定。取2μg斑马鱼样品总RNA,按照cDNA第一链合成试剂盒说明操作,合成20μLcDNA置于-20℃保存。用β-actin作为基因表达的内参,计算COLI1A1A、COLI1A1B和COLI1A2基因的RNA相对表达量。
试验组别:
试验组1 正常对照组
试验组2 实施例1样品
试验组3 实施例2样品
试验组4 实施例3样品
试验组5 实施例4样品
试验组6 实施例5样品
试验结果:
如图1所示,实施例1~5样品均能够促进COLI1A1A、COLI1A1B和COLI1A2基因表达。在不含胶原蛋白肽的样品中,实施例3样品的效果最好。实施例4样品(葛仙米组合物与胶原蛋白肽合同)对三种基因相对表达量的促进效果要优于单独使用葛仙米组合物和胶原蛋白肽。另外,上述数据表明,实施例5样品(单独使用胶原蛋白肽)对促进三种基因相对表达量的效果没有实施例3样品的效果好。
应用实施例2人体皮肤中胶原蛋白密度和松弛度变化试验
试验方法:
选取年龄为30-45岁之间的女性15人,随机分成3组。采自身对照方式进行,比较受试者饮用前后的情形。受试者每天饮用50ml受试品,且持续饮用4周,并于饮用前、饮用后2周、饮用后4周进行肌肤胶原蛋白密度及松弛度检测,检测位置于全脸。
试验仪器:
Combo超音波肤质分析仪20MHz高频率超音波扫描模组,用于皮肤胶原蛋白密度检测及数据分析。
C+Kdual MPA580多探头肤质分析仪,用于分析皮肤松弛度。
试验分组:
试验组1:实施例3样品
试验组2:实施例4样品
试验组3:实施例5样品
试验结果:
如图2所示,试验组1~3(实施例3~5样品)在坚持服用4周后,人体皮肤胶原蛋白密度均有显著性提高。但是在第2周时,虽然试验组1~3人体皮肤胶原蛋白密度都比第0周时高,但是只有试验组2(实施例4样品)具有统计学差异(p<0.05)。
如图3所示,试验组1~3(实施例3~5样品)在坚持服用4周后,人体皮肤松弛度著性下降。在第2周时,虽然试验组1~3人体皮肤松弛度都比第0周时低,但是只有试验组2(实施例4样品)具有统计学差异(p<0.05)。实施例3~5样品可以改善人体皮肤弹性。
上述试验数据表明,葛仙米组合物可以提高人体皮肤中胶原蛋白密度并改善皮肤弹性及松弛度,与胶原蛋白肽合用效果更好,而且起效的时间更短。
应用实施例3抑制斑马鱼眼凋亡试验
随机选取540尾1dpf野生型AB品系斑马鱼于六孔板中,每孔(实验组)均处理30尾斑马鱼,分别水溶给予实施例1~5样品,同时设置正常对照组和模型对照组,用吗替麦考酚酯诱导建立眼部细胞凋亡模型,每孔(实验组)容量为3mL。处理24h后,用吖啶橙染色,洗脱后,每组随机取10条斑马鱼在荧光显微镜下观察斑马鱼眼部、拍照并保存图片。使用图像处理软件进行图像分析,计算斑马鱼眼部细胞凋亡荧光强度总和(S),以眼部细胞凋亡荧光强度总和的统计学意义分别评价供试品对吗替麦考酚酯诱发的斑马鱼眼保护作用。眼凋亡抑制作用计算公式如下:
统计学分析采用方差分析和Dunnett’s T-检验进行统计学分析,p<0.05表明具有显著性差异。
试验组别:
试验组1 正常对照组
试验组2 模型对照组
试验组3 实施例1样品
试验组4 实施例2样品
试验组5 实施例3样品
试验组6 实施例4样品
试验组7 实施例5样品
试验结果:
表2
与正常对照组比较,###p<0.001;与模型对照组比较,*p<0.05,**p<0.01。
模型对照组斑马鱼眼部细胞凋亡荧光强度总和(355195像素)与正常对照组眼部细胞凋亡荧光强度总和(154039像素)比较p<0.001,表明模型建立成功。本发明实施例1~5样品组,对眼保护作用分别为31%、33%、40%、45%和0,其中,本发明实施例1~4样品组与模型组相比具有统计学差异(p<0.05&p<0.01),而实施例5样品组对眼部无保护作用。可见单独使用胶原蛋白对眼凋亡没有抑制作用,而使用葛仙米组合物则具有抑制眼凋亡的作用,且与胶原蛋白共用效果更好。
实施例6-8
表3
葛仙米 | 枣 | 朝鲜蓟 | |
实施例6 | 10 | 15 | 15 |
实施例7 | 1 | 20 | 20 |
实施例8 | 20 | 0 | 0 |
上述实施例6~8中,葛仙米提取物按照前述的方法进行制备。枣和朝鲜蓟经过水提取、过滤分离、浓缩、干燥等工艺步骤制成所述枣提取物和朝鲜蓟提取物。
实施例6~7葛仙米组合物样品制备:将葛仙米提取物加入50倍水中,加热至80℃,开启搅拌,保温20min,待葛仙米提取物完全溶解后,依次加入枣提取物和朝鲜蓟提取物,搅拌10min后,加水补足余量,继续搅拌,80℃保温15min,均质,通过UHT杀菌后进行灌装,分别得到实施例6~7样品。
实施例8样品制备:将葛仙米提取物加入50倍水中,加热至80℃,开启搅拌,保温20min,待葛仙米提取物完全溶解后,加水补足余量,继续搅拌,80℃保温15min,均质,通过UHT杀菌后进行灌装,分别得到实施例8样品。
应用实施例4抑制黄斑部血管增生试验
黄斑部是视力最明锐的地方,一旦黄斑病变,表现有眼前有暗影,视物变形,视力下降等。黄斑部血管增生则是评价黄斑病变的一个指标。
试验方法:
随机选取150尾1dpf转基因血管荧光斑马鱼于六孔板中,每孔(实验组)均处理30尾斑马鱼,分别水溶给予实施例6~8样品14μL/mL,同时设置正常对照组和模型对照组。用氯化钴诱导建立眼部血管增生模型,每孔(实验组)容量为5mL。处理5天后,每组随机取10条斑马鱼在荧光显微镜下观察斑马鱼眼部血管、拍照并保存图片。用图像处理软件进行图像分析,计算斑马鱼眼部血管面积,以眼部血管面积的统计学意义分别评价实施例6~8样品对氯化钴诱发的斑马鱼眼部血管增生的抑制作用。
试验组别:
试验组1 正常对照组
试验组2 模型对照组
试验组3 实施例6样品
试验组4 实施例7样品
试验组5 实施例8样品
试验结果:
表4实施例样品对眼部血管增生的抑制作用(n=10)
注:与正常对照组相比较,###p<0.001;与模型对照组比较,*p<0.05,**p<0.01
模型对照组斑马鱼眼部血管面积(9270像素)与正常对照组眼部血管面积(6032像素)比较p<0.001,表明模型建立成功。本发明实施例6~8样品对斑马鱼眼部血管面积分别为7024、8443和8012像素,与模型对照组比较,p<0.01&p<0.05&p<0.05,对眼部血管增生抑制作用分别为68%、60%和62%。
上述结果表明,葛仙米本身就有较好的抑制眼部血管增生作用,与枣提取物、朝鲜蓟提取物合同后,在优化的配比下,葛仙米组合物对抑制眼部血管增生的效果更好。
应用实施例5改善视力试验
试验方法:选取裸眼屈光度≤-3.0,年龄在20~30岁之间办公室人员22人为试用对象,每人服用实施例6样品100ml,连续服用28天。分别在在第0天和第28天进行眼部疲劳感评价和屈光度测试。
试验结果:
表5试用前后眼部疲劳感变化情况(n=22)
表6试用前后眼屈光度平均值变化情况(n=22)
眼屈光度(第0天) | 眼屈光度(第28天) | 显著率 |
1.88±0.56 | 1.45±0.33 | P<0.05 |
试验表明,22个试用者中,眼视疲劳感人数显著减少(P<0.01),平均眼屈光度明显下降(P<0.05)。
应用实施例6降血糖试验
试验方法:
腹腔注射四氧嘧啶生理盐水溶液(对照组为正常小鼠组,注射等体积生理盐水),建立糖尿病动物模型,分为模型组、实施例6~8样品组。正常对照组与模型对照组造模7天后每天纯水20mL/kg灌胃,受试样品组每天灌胃给药(4ml/kg)1次,连续28天。第28天给药后禁食12h,尾静脉取血测定空腹血糖
试验组别:
试验组1 正常对照组
试验组2 模型对照组
试验组3 实施例6样品
试验组4 实施例7样品
试验组5 实施例8样品
试验结果:
表7
组别 | 第0天血糖值/mmol·L<sup>-1</sup> | 第28天血糖值/mmol·L<sup>-1</sup> |
正常对照组 | 3.64±0.11 | 3.64±0.12 |
模型对照组 | 19.54±1.22 | 25.43±2.67 |
实施例6样品 | 19.12±2.67 | 10.89±3.28** |
实施例7样品 | 20.01±2.74 | 9.78±3.97** |
实施例8样品 | 19.73±2.78 | 14.67±4.11* |
注:与模型组相比,*p<0.05,**p<0.01
本发明实施例6~8样品可以有效降低糖尿病模型小鼠的血糖值,与模型对照组比较,具有统计学差异(p<0.05&p<0.01)。其中,本发明实施例6样品和实施例7样品的效果要优于实施例8样品,可见葛仙米和枣、朝鲜蓟一起使用,对降血糖有协同作用。
应用实施例7降血脂试验
试验方法:
采用高脂喂养模型。试验小鼠分为正常对照组、模型对照组、受试组。对照组为正常小鼠,模型组为高脂喂养并给予蒸馏水灌胃,受试组为高脂喂养并给予受试样品灌胃(4ml/kg),每天一次,连续4周。最后一天,禁食12小时后,检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)的含量。
试验组别:
试验组1 正常对照组
试验组2 模型对照组
试验组3 实施例6样品
试验组4 实施例7样品
试验组5 实施例8样品
试验结果:
表8
与模型组相比,*p<0.05,**p<0.01
本发明实施例6~8样品均可以有效降低高脂喂养小鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)的含量,与模型对照组比较,具有统计学差异(p<0.05&p<0.01)。其中,本发明实施例6样品和实施例7样品的效果要优于实施例8样品,可见葛仙米和枣、朝鲜蓟一起使用,对降血脂有协同作用。
实施例9
葛仙米提取物
葛仙米提取物的制备过程为:取葛仙米干品粉碎至80目,加入500倍水浸泡12小时。浸泡完成后,加热至100℃,保温提取2h,得到提取液。将提取液浓缩至原重量的25%,得到葛仙米浓缩液。进一步的,葛仙米浓缩液经干燥后得到葛仙米提取物。
实施例10
葛仙米超微粉
葛仙米超微粉的制备过程为:葛仙米经超微粉碎至500目以上,得到葛仙米超微粉。
实施例11
将葛仙米超微粉,果蔬粉,食品添加剂混合均匀,灌装成粉包。
其中,葛仙米超微粉的制备参照实施例10。
其中,果蔬粉为水果和蔬菜浓缩汁的干燥粉,包括但不限于以下品种:苹果、蓝莓、葡萄、苦瓜、芹菜等。
其中,食品添加剂为甜味剂、增稠剂和食用香精等。甜味剂为甜菊糖苷、罗汉果甙、三氯蔗糖中的一种或者多种组合。增稠剂为果胶、黄原胶、卡拉胶、银耳多糖、魔芋胶中的一种或者多种组合。
实施例12
将常规压片制剂辅料(如微晶纤维素)和葛仙米提取物一起混合均匀,加入95%乙醇润湿,整粒,干燥,整粒过筛,颗粒再和硬脂酸镁混合均匀,制成片剂。
其中,葛仙米提取物的制备参照实施例9。
实施例13
将葛仙米提取物加入50倍水中,加热至80℃,开启搅拌,保温20min,待葛仙米提取物完全溶解后,再加入浓缩果蔬汁,食品添加剂,搅拌10min后,加水补足余量,继续搅拌,80℃保温15min,经均质机后,进行灌装,制成液体饮料。
其中,葛仙米提取物的制备参照实施例9。
其中,浓缩果蔬汁为水果和蔬菜的浓缩汁,包括但不限于以下品种:苹果、蓝莓、葡萄、紫胡萝卜等。
其中,食品添加剂为甜味剂、护色剂、增稠剂。甜味剂为甜菊糖苷、罗汉果甙、三氯蔗糖中的一种或者多种组合。护色剂为抗坏血酸、异抗坏血酸、柠檬酸中的一种或者多种组合。增稠剂为果胶、黄原胶、卡拉胶、银耳多糖、魔芋胶中的一种或者多种组合。
应用实施例8空腹血糖调节试验
试验方法:
5周龄db/db小鼠(二型糖尿病小鼠)适应环境一周后,随机分成5组,正常对照组使用常规饲料喂养,受试组分别喂养掺有实施例9样品或者实施例10样品的饲料。分别在试验开始后第4和第8周时测定饥饿3小时后的血糖水平。
试验组别:
试验组1 正常对照组
试验组2 实施例9样品低剂量组(小鼠剂量:1g/kg)
试验组3 实施例9样品高剂量组(小鼠剂量:3g/kg)
试验组4 实施例10样品低剂量组(小鼠剂量:2g/kg)
试验组5 实施例10样品高剂量组(小鼠剂量:5g/kg)
试验结果:
如图4a所示,在第4周时,实施例9样品(试验组2和试验组3)可以明显降低db/db小鼠空腹血糖水平,具有统计学差异(p<0.05&p<0.01);实施例10样品(试验组4和试验组5)空腹血糖变化没有统计学差异(p>0.05)。
如图4b所示,在第8周时,正常对照组小鼠的空腹血糖比第4周时又有升高,实施例9样品(试验组2和试验组3)可以明显降低db/db小鼠空腹血糖水平,具有统计学差异(p<0.01);实施例10样品(试验组4和试验组5)空腹血糖水平也明显降低,具有统计学差异(p<0.05)。
上述试验表明,实施例9样品和实施例10样品可以降低II型糖尿病小鼠的空腹血糖。应用实施例9葡萄糖耐量(OGTT)试验
试验方法:
8周龄的C57BL/6J的小鼠,适应环境一周后,随机分成5组,正常对照组使用常规饲料喂养,模型对照组采用高脂饲料喂养,试验组小鼠除喂养高脂饲料外,每天接受实施例样品灌胃(实施例13样品浓缩处理后再灌胃)。在试验开始后第8周,小鼠经饥饿过夜处理后注射1.5g/kg体重的葡萄糖,每隔30分钟用快速葡萄糖监测仪测定血糖浓度,至120分钟结束,根据数据绘出变化曲线,并计算曲线下面积(AUC)。
试验组别:
试验组1 正常对照组
试验组2 模型对照组
试验组3 实施例11样品(小鼠剂量:4g/kg葛仙米超微粉)
试验组4 实施例12样品(小鼠剂量:2g/kg葛仙米提取物)
试验组5 实施例13样品(小鼠剂量:1g/kg葛仙米提取物)
试验结果:
如图5所示,通过计算曲线下面积可知,在第8周时,实施例11~13样品对高脂喂养小鼠的葡萄糖耐量均有明显的改善效果,并且具有统计学差异(p<0.05,p<0.01,p<0.05)。应用实施例10蓝光诱发人视网膜上皮细胞ROS损伤试验
试验方法:
用白色冷光源通过波长范围为470~520nm蓝色滤光片,光照强度2000±500LUX的蓝光照射人视网膜上皮细胞24小时,检测ROS浓度。
试验分组:
试验组1 正常对照组不照射蓝光
试验组2 模型对照组照射蓝光
试验组3 实施例9样品+照射蓝光
试验组4 实施例10样品+照射蓝光
试验结果:
如图6所示,本发明实施例9样品和实施例10样品可以显著的降低蓝光所诱发的ROS损伤,与模型对照组相比,具有统计学差异(p<0.001)。即,本发明实施例9样品和实施例10样品可以降低蓝光对人眼的伤害。
应用实施例11改善腹泻试验
试验方法:
采用番泻叶导致小鼠腹泻的模型进行试验研究。试验小鼠分为正常对照组和受试组。灌胃给药,每天1次(空白组给予同等量的蒸馏水),连续3天。第3天禁食12h后,分别灌胃给药(空白组给予同等量的蒸馏水),末次给药1h后正常对照组和受试组分别以番泻叶混悬液灌胃,然后将小鼠置于滤纸上,并扣于烧杯下,连续观察6h,每小时换一次滤纸,计算腹泻指数。
试验分组:
试验组1 正常对照组
试验组2 实施例9样品低剂量组(小鼠剂量:1g/kg)
试验组3 实施例9样品高剂量组(小鼠剂量:2g/kg)
试验组4 实施例10样品低剂量组(小鼠剂量:2g/kg)
试验组5 实施例10样品高剂量组(小鼠剂量:4g/kg)
试验结果:
表9
组别 | 腹泻指数 |
正常对照组 | 25.35±4.16 |
实施例9低剂量组 | 8.11±2.63** |
实施例9高剂量组 | 5.48±1.74** |
实施例10低剂量组 | 13.96±3.66* |
实施例10高剂量组 | 9.23±3.86** |
注:*与正常对照组相比,p<0.05,**与正常对照组相比,p<0.01
根据表9可知,两种样品的高低剂量组均可以有效降低腹泻指数,实施例9样品和实施例10样品能明显抑制番泻叶导致的小鼠腹泻。
应用实施例12调节血脂和改善动脉粥样硬化指数
试验方法:
选取成年SD雄性小鼠,随机分成5组,每组10只。正常对照组使用常规饲料喂养,模型对照组采用高脂饲料喂养,试验组小鼠受试组分别喂养掺有实施例9样品或者实施例10样品的饲料。第6周天后禁食16小时,检测血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL)水平。并根据以下公式计算动脉粥样硬化指数:
动脉硬化指数(AI)=[血总胆固醇(TC)-高密度脂蛋白(HDL-C)]÷高密度脂蛋白(HDL-C)
试验组别:
试验组1 正常对照组
试验组2 模型对照组
试验组3 实施例9样品(小鼠剂量:2g/kg)
试验组4 实施例10样品(小鼠剂量:4g/kg)
试验结果:
表10第6周小鼠血清中脂质变化mmol/L
注,与正常对照组相比,#p<0.05,##p<0.01;与模型对照组相比,*p<0.05,**p<0.01
表11动脉粥样硬化指数
注,与正常对照组相比,#p<0.05,##p<0.01;与模型对照组相比,*p<0.05,**p<0.01
试验结果表明,实施例9样品和实施例10样品均可以明显降低高脂喂养小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,与模型对照组相比具有统计学差异(p<0.05,实施例9样品TG变化p<0.01)。
实施例9样品和实施例10样品都可以显著降低因高脂喂养导致的动脉粥样硬化指数,与模型对照组相比具有统计学差异(p<0.01)。
可见,本发明实施例9样品和实施例10样品有降低血脂和改善动脉粥样硬化的作用。
应用实施例13对肝脏氧化指标的影响
自由基诱导的脂质过氧化是人体动脉粥样硬化的最危险因素。高胆固醇血症时生物膜的脂质组分发生改变,易遭受自由基攻击,产生大量过氧化脂质及中间产物,损伤动脉壁内皮细胞和平滑肌细胞,并抑制前列腺素合成,破坏前列腺素与血栓素A2的动态平衡,导致动脉粥样硬化的发生和发展。同时,血液中LDL-C含量升高,其脂质中的不饱和脂肪酸同样很容易发生脂质过氧化反应,使LDL被氧化修饰成ox-LDL,促进白细胞和血小板在动脉内膜的勃附和聚集,最终导致平滑肌细胞移植和脂质沉着,形成病变。在高脂血动物模型中,动物体内过氧化脂质含量明显升高,且其含量与TC和TG正相关。内源性抗氧化物质可抑制过氧化脂质的形成,从而具有抗动脉粥样硬化作用。因此,内源性抗氧化能力是下降是造成血脂升高和动脉粥样硬化的一个原因。
试验方法:应用实施例7试验中的小鼠最后取完血后处死,收集肝脏,处理后检测总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)的水平。
试验组别:
试验组1 正常对照组
试验组2 模型对照组
试验组3 实施例9样品(小鼠剂量:2g/kg)
试验组4 实施例10样品(小鼠剂量:4g/kg)
试验结果:
表12肝脏抗氧化指标变化
注,与正常对照组相比,#p<0.05,##p<0.01;与模型对照组相比,*p<0.05,**p<0.01
与模型对照组相比,实施例9样品可以明显降低肝脏中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)的水平,具有统计学差异(p<0.01);实施例10可以明显降低丙二醛(MDA)水平,具有统计学差异(p<0.05),增加了抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平,但是没有统计学差异(p>0.05)。
上述试验表明,葛仙米及其加工物可以通过提高内源性抗氧化能力,从而起到降低血脂和改善动脉粥样硬化的作用。
应用实施例14对人体血脂调节的作用
试验方法:
采用自身对照及组间对照试验设计,选取合适的高血脂人群,根据血脂水平,随机分成试食组和对照组,每组56或57人。试食组服用受试样品,正常对照组则服用安慰剂。60天后再次检测受试者血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。
改善判定:TC降低>10%,TG降低>15%,HDL-C上升>0.104mmol/L,动脉粥样硬化指数<4。未达标准者则判定无效。观察血脂总胆固醇(TC)改善率、甘油三酯(TG)改善率、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)改善率、总改善率和动脉粥样硬化指数改善率。试验组别:
正常对照组:安慰剂
试食组:实施例12样品(其中葛仙米提取物人体剂量为2g/d)
试验结果:
表13试食前资料比较
食用前两组人群的性别、年龄、各项指标比较均无显著性差异(p>0.05)。
表14食用后受试者改善率比较
注:与正常对照组比较,*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001
试食后试食组总胆固醇(TC)改善率、甘油三酯(TG)改善率、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)改善率和总改善率分别为54.39%、50.88%、38.60%和77.19%,与正常对照组比较有显著性差异。动脉粥样硬化指数改善率为43.86%,与正常对照组比较有显著性差异。说明服用实施例12样品可以明显改善高血脂人群的血脂指标,并有效降低动脉粥样硬化指数。
应用实施例15改善老龄小鼠空间认知能力
试验方法:
12月龄的BALB/c老龄小鼠适应环境一周后,随机分为5组,正常对照组喂养高脂饲料,其他4组高脂肪饮食结合受试样品处理,按照计划对其进行喂养8周。使用高脂肪饮食的原因在于高脂肪饮食可以促进认知损伤。实验开始前一天,将动物单个从目标洞置于目标箱内适应4min。试验时,将动物置于迷宫中央的塑料圆桶(直径20cm,高27cm)内限制活动5s。移开圆桶,启动计时器,动物四肢均进入目标箱,则计为一次逃避(escape),并让动物在箱内停留30s。动物每天训练两次,连续5天。
试验组别:
试验组1 正常对照组
试验组2 实施例9样品低剂量组(小鼠剂量:1g/kg)
试验组3 实施例9样品高剂量组(小鼠剂量:3g/kg)
试验组4 实施例10样品低剂量组(小鼠剂量:2g/kg)
试验组5 实施例10样品高剂量组(小鼠剂量:5g/kg)
试验结果:
如图7所示,实施例9样品(试验组2和试验组3)可以明显降低小鼠寻找洞口的时间,具有统计学差异(p<0.01);实施例10样品(试验组4和试验组5)也可以明显降低小鼠寻找洞口的时间,具有统计学差异(p<0.05)。
上述试验表明,实施例9样品和实施例10样品可以改善老龄小鼠长期的空间记忆功能。
应用实施例16提升幼龄小鼠的认知能力
试验方法:
4-5周龄雄性小鼠适应环境一周后,随机分成5组,正常对照组喂养常规饲料,其他4组受试样品处理,按照计划对其进行喂养8周。通过新物体识别试验,根据小鼠对见过的熟悉物体(旧物体)和没有见过的新物体的探究时间的长短来评价被测试动物的记忆能力,即当被测试动物未遗忘环境中见过的熟悉物体时,便会用更多的时间探究没有见过的新物体。小鼠在适应过程中和目标物体适应接触,适应目标物体后接触新目标,记录下其对新目标的探索次数。之后移除新目标,小鼠再次进行一系列测试。
试验组别:
试验组1 正常对照组
试验组2 实施例9样品低剂量组(小鼠剂量:1g/kg)
试验组3 实施例9样品高剂量组(小鼠剂量:3g/kg)
试验组4 实施例10样品低剂量组(小鼠剂量:2g/kg)
试验组5 实施例10样品高剂量组(小鼠剂量:5g/kg)
试验结果:
如图8所示,试验结果可见,正常对照组的新事物探索时间与旧事物探索时间没有统计学差异,实施例9样品(实验组2和试验组3)可以显著增加小鼠对新物体的探索时间,与旧物体探索时间相比,具有统计学差异(p<0.01);实施例10样品(试验组4和试验组5)可以明显增加小鼠对新物体的探索时间,与旧物体探索时间相比,具有统计学差异(p<0.05)。
通过新物体识别试验表明,实施例9样品和实施例10样品可以明显改善幼龄小鼠的认知能力。
应用实施例17人体记忆商测试
试验方法:
选择50~60岁,文化程度基本相同(初中或者高中程度),未接受过此类测试,近一年没有服用过改善记忆产品的人群62人,前期记忆商测试(A版本)比较后(测试顺序:指向记忆、联想学习、图像自由回忆、无意义图像再确认和人像特点联系回忆),随即分成受试组(31人)和正常对照组(31人)。受试组:实施例13样品。对照组:服用安慰剂(无葛仙米提取物组分,其他成分和实施例13样品一致)。服用方法及服用量:每天2次,每次100mg,相当于每天服用葛仙米提取物3g/d,连续服用30天。30天后使用B版本测试题测试记忆商,计算总量表分并比较前后两次得分差异,按表查得记忆商。
试验结果:
表15两组试验前后各项差值比较
注,与正常对照组相比,*p<0.05
表16两组试验前后记忆商比较
注,与试验前对比,*p<0.05,*p<0.01;与正常对照组相比,##p<0.01
受试组指向记忆、联想学习、图像自由回忆、无意义图像再确认和人像特点联系回忆的测量表分前后升高差值与正常对照组比较,均有明显的提高,具有统计学差异(P<0.05)。
正常对照组和受试组试验后记忆商都明显高于试验前,具有统计学差异(P<0.01&P<0.05),受试组差异更大些;而受试组试验后记忆商及试验前后升高差值明显高于正常对照组,具有统计学差异(P<0.01)。
人体记忆商测试试验表明,本发明实施例13样品可以有效改善人体记忆力水平。
应用实施例18高能X线照射导致大鼠肠炎的模型试验
试验方法:
采用Wistar雄性大鼠60只,分为正常对照组、模型对照组、4组受试组。正常对照组为不做照射处理;模型组照射处理后给予蒸馏水灌胃,受试组照射处理后给予受试样品灌胃,每天1次,连续4周。处死动物后,取5cm末端回肠,刮下黏膜,研磨匀浆,离心后取上清液测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量和一氧化氮(NO)含量。
试验组别:
试验组1 正常对照组
试验组2 模型对照组
试验组3 实施例9样品低剂量组(大鼠剂量:0.5g/kg)
试验组4 实施例9样品高剂量组(大鼠剂量:1.0g/kg)
试验组5 实施例10样品低剂量组(大鼠剂量:1g/kg)
试验组6 实施例10样品高剂量组(大鼠剂量:2g/kg)
试验结果:
如图9所示,对肿瘤坏死因子α水平的影响,实施例9样品(试验组3和试验组4)和实施例10样品(试验组5和试验组6)都可以明显降低大鼠回肠中肿瘤坏死因子α的含量,具有统计学差异(实施例9样品p<0.01,实施例10样品p<0.05)。
如图10所示,一氧化氮水平的影响,实施例9样品(试验组3和试验组4)和实施例10样品(试验组5和试验组6)都可以明显降低大鼠回肠中一氧化氮的含量,具有统计学差异(实施例9样品低剂量和实施例10样品低剂量p<0.05,实施例9样品高剂量和实施例10样品高剂量p<0.01)。
上述试验表明,实施例9样品和实施例10样品能明显改善受高能X线照射大鼠的肠道炎症状况。
应用实施例19DSS导致肠道炎症模型试验
试验方法:
Wistar雄性大鼠60只,适应性喂养1周后,随机分为6组,即正常对照组、模型对照组、4组受试组。正常对照组常规饲料喂养,模型对照组和受试组使用含有3%DSS(葡聚糖硫酸钠)的饮用水喂养5天。之后受试组使用受试样品灌胃,连续4周。4周后,隔夜禁食12h,处死,取大肠组织,检测IL-1β和IL-6的mRNA浓度,计算相对表达量。
试验组别:
试验组1 正常对照组
试验组2 模型对照组
试验组3 实施例9样品低剂量组(大鼠剂量:0.5g/kg)
试验组4 实施例9样品高剂量组(大鼠剂量:1.0g/kg)
试验组5 实施例10样品低剂量组(大鼠剂量:1g/kg)
试验组6 实施例10样品高剂量组(大鼠剂量:2g/kg)
试验结果:
如图11所示,实施例9样品(试验组3和试验组4)可以显著降低大肠IL-1β和IL-6的mRNA相对表达量,与模型对照组相比,具有统计学差异(p<0.01)。
实施例10样品(试验组5和试验组6)可以显著降低大肠IL-1β和IL-6的mRNA相对表达量,与模型对照组相比,具有统计学差异(p<0.05)。
上述试验表明,实施例9样品和实施例10样品能明显改善DSS诱导肠道炎症模型大鼠炎症因子mRNA的相对表达量。
应用实施例20改善腹泻试验
试验方法:
6~8周龄雌性小鼠将饲养于受控的光照环境中(12小时明暗循环),随机分成5组(每组10只):模型对照组,灌入0.2ml蓖麻油;受试组,小鼠灌入蓖麻油前15分钟对其给予受试样品处理。灌入蓖麻油15分钟之后对其灌入150ml伊文思蓝(5%伊文思蓝溶解于预热的含1.5%甲基纤维素的0.9%氯化钠溶液),之后将小鼠放回各自的笼内。每五分钟对小鼠进行监控。记录从灌入开始到水样粪便所经过的时间,记录为总体肠道运输时间。每组小鼠空腹一夜之后被灌入100微升100mg/ml的FITC-Dextran(荧光标记葡聚糖)。灌胃90分钟之后取小鼠下颌静脉血,稀释后检测血液中荧光强度,分析肠道渗透性。
实验分组:
试验组1 模型对照组
试验组2 实施例9样品低剂量组(小鼠剂量:1g/kg)
试验组3 实施例9样品高剂量组(小鼠剂量:2g/kg)
试验组4 实施例10样品低剂量组(小鼠剂量:2g/kg)
试验组5 实施例10样品高剂量组(小鼠剂量:4g/kg)
试验结果:
如图12所示,实施例9样品低剂量组(试验组2)和实施例10样品低剂量组(试验组4)均能明显延长蓖麻油造模后小鼠水样大便排泄时间,与模型对照组相比,具有统计学差异(p<0.05)。
实施例9样品高剂量组(试验组3)和实施例10样品高剂量组(试验组5)均能显著延长蓖麻油造模后小鼠水样大便排泄时间,与模型对照组相比,具有统计学差异(p<0.01)。
如图13所示,实施例9样品(试验组2和试验组3)能显著降低蓖麻油造模后小鼠肠道渗透性,与模型对照组相比,具有统计学差异(p<0.01)。
实施例10样品(试验组4和试验组5)能显著降低蓖麻油造模后小鼠肠道渗透性,与模型对照组相比,具有统计学差异(p<0.05)。
上述试验表明,实施例9样品和实施例10样品可以明显改善蓖麻油造模后小鼠的腹泻作用。
应用实施例21改善记忆试验
实验方法:
采用D-半乳糖衰老小鼠模型进行试验研究。试验小鼠分为正常对照组、模型对照组、受试组。正常对照组为正常小鼠组,模型对照组为D-半乳糖造模后给予蒸馏水灌胃,受试组为D-半乳糖造模同时给予实施例9~10样品灌胃,每天给药一次,连续8周。
试验分组:
试验组1 正常对照组
试验组2 模型对照组
试验组3 实施例9样品(小鼠剂量:2g/kg)
试验组4 实施例10样品(小鼠剂量:4g/kg)
试验结果:如图14所示,D-半乳糖造模后能明显增加水迷宫潜伏期,降低有效象限滞留时间、有效区域进入次数,实施例9样品和实施例10样品均能有效缩短小鼠潜伏期,增加有效象限滞留时间和有效区域进入次数,提高了小鼠的学习记忆能力。与模型组相比,具有统计学差异(p<0.05)。
本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离本发明构思的精神和范围下,本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中,并且以所附的权利要求书为保护范围。
Claims (10)
1.一种包括葛仙米加工制品的用于缓解眼部疲劳和/或改善眼部黄斑病变的葛仙米组合物。
2.如权利要求1所述的葛仙米组合物,其特征在于,所述葛仙米加工制品包括葛仙米提取物和/或葛仙米超微粉。
3.如权利要求2所述的葛仙米组合物,其特征在于,所述葛仙米组合物进一步包括茉莉花,胡椒,胚芽米,加或不加胶原蛋白肽。
4.如权利要求3所述的葛仙米组合物,其特征在于,所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米1~20,茉莉花1~20,胡椒1~20,胚芽米1~10,胶原蛋白肽0~20;或,葛仙米1~15,茉莉花11~20,胡椒1~12,胚芽米3~10,胶原蛋白肽0~20;或,葛仙米15~20,茉莉花1~11,胡椒12~20,胚芽米1~3,胶原蛋白肽0~20。
5.如权利要求4所述的葛仙米组合物,其特征在于,所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米1,茉莉花20,胡椒1,胚芽米10;或,葛仙米20,茉莉花1,胡椒20,胚芽米1;或,葛仙米15,茉莉花11,胡椒12,胚芽米3;或,葛仙米15,茉莉花11,胡椒12,胚芽米3,胶原蛋白肽20。
6.如权利要求2所述的葛仙米组合物,其特征在于,所述葛仙米组合物进一步包括枣和朝鲜蓟。
7.如权利要求6所述的葛仙米组合物,其特征在于,所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米1~20,枣0~20,朝鲜蓟0~20;或,葛仙米1~10,枣15~20,朝鲜蓟15~20;或,葛仙米10~20,枣0~15,朝鲜蓟0~15。
8.如权利要求7所述的葛仙米组合物,其特征在于,所述葛仙米组合物包括以下质量份配比的活性物组成成分:葛仙米10,枣15,朝鲜蓟15;或,葛仙米1,枣20,朝鲜蓟20。
9.如权利要求2所述的葛仙米组合物,其特征在于,所述葛仙米提取物按以下步骤加工制作:取葛仙米干品粉碎至60~80目,加入500倍水浸泡12小时;浸泡完成后加热至100℃,保温提取2h,将提取得到的溶液浓缩至原重量的25%,经干燥,得到葛仙米提取物;和/或,所述葛仙米超微粉按以下步骤加工制作:将葛仙米干品经超微粉碎至500目以上,得到葛仙米超微粉。
10.如权利要求1-9之任一项所述葛仙米组合物在制备用于缓解眼部疲劳和/或改善眼部黄斑病变的产品中的应用。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20191105 |