CN110398562B - 一种妇科调经片中甘草的薄层色谱鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种妇科调经片中甘草的薄层色谱鉴别方法。所述薄层色谱鉴别方法如下:取妇科调经片供试品溶液、甘草对照药材溶液、甘草苷对照品溶液及阴性对照溶液点样于同一硅胶薄层板上,以体积比为28~32:0.8~1.2:2.5~3.5:1.8~2.2:0.1~0.2的乙酸乙酯‑丙酮‑冰乙酸‑水‑盐酸作为展开剂,展开、取出、晾干后喷显色剂显色,加热至斑点清晰,最后在365nm紫外灯下视检。本发明首次提出将体积比为28~32:0.8~1.2:2.5~3.5:1.8~2.2:0.1~0.2的乙酸乙酯‑丙酮‑冰乙酸‑水‑盐酸作为用于甘草鉴别的薄层色谱展开剂,结合优化研究的供试品制备方法,薄层色谱鉴别得到的图谱主次斑点完全分离且阴性无干扰。
Description
技术领域
本发明涉及药品质控技术领域,具体地,涉及一种妇科调经片中甘草的薄层色谱鉴别方法。
背景技术
妇科调经片由当归、川穹、香附(醋炙)、白术(麸炒)、白芍、赤芍、延胡索(醋炙)、熟地黄、大枣、甘草作为原料药制成(辅料白糊精)。妇科调经片能养血,调经,止痛。用于月经不调,经期腹痛。
由于妇科调经片中成分复杂,目前尚未有关于妇科调经片中甘草鉴别的简易鉴别方法。因此,研究一种适合妇科调经片中甘草的薄层色谱鉴别方法尤为重要。
薄层色谱又称薄层层析,是以涂布于支持板上的支持物作为固定相,以合适的溶剂为流动相,对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。专利201611147307.X中提供了一种对芩黄清肺散中甘草成分进行薄层色谱鉴别的方法,结合芩黄清肺散组方的特征和甘草的性质,采用盐酸加热回流后先用乙醚得到低极性的物质,除去色素,再让氨水与甘草次酸和其它成分结合,后加盐酸得到甘草次酸,然后再用乙醚萃取得到更纯的甘草次酸和甘草它他成分,将其溶解在甲醇溶液中作为芩黄清肺散中甘草成分薄层色谱鉴别的供试品溶液,采用所述供试品溶液与对照药材溶液和阴性对照液,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸作为展开剂进行薄层色谱鉴别,能够得到准确的鉴别结果。但是该方法较为复杂,同时由于妇科调经片与芩黄清肺散的成分有巨大的差异,该方法并不适用于妇科调经片中甘草的鉴别。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术缺乏妇科调经片中甘草鉴别技术的缺陷,对适于妇科调经片中甘草薄层色谱鉴别的展开剂和样品处理方式进行研究,提供一种妇科调经片中甘草的薄层色谱鉴别方法,该方法得到的图谱主次斑点完全分离且阴性无干扰。
本发明目的是提供一种妇科调经片中甘草的薄层色谱鉴别方法。
为实现上述目的,本发明采用的技术方案如下:
一种妇科调经片中甘草的薄层色谱鉴别方法,所述薄层色谱鉴别方法如下:
取妇科调经片供试品溶液、甘草对照药材溶液、甘草苷对照品溶液及阴性对照溶液点样于同一硅胶薄层板上,以体积比为28~32:0.8~1.2:2.5~3.5:1.8~2.2:0.1~0.2的乙酸乙酯-丙酮-冰乙酸-水-盐酸作为展开剂,展开、取出、晾干后喷显色剂显色,加热至斑点清晰,最后在365nm紫外灯下视检。
本发明提供的妇科调经片供试品的制备方法得到的薄层色谱图的主次斑点更加清晰,杂质更少,保留的特征成分更多。
优选地,所述展开剂为体积比为30:1:3:2:0.15的乙酸乙酯-丙酮-冰乙酸-水-盐酸。发明人发现当选用上述展开剂时,得到的薄层色谱图的主次斑点特别清晰,主次斑点完全分离且阴性无干扰。
优选地,所述妇科调经片供试品溶液的制备方法如下:
S1:取样品除去薄膜衣、研细,添加乙醇并置于温水浴回流,然后滤过,蒸干滤液,残渣加乙醇溶解;
S2:将S1所得溶液过中性氧化铝柱,用乙醚洗脱,弃去洗脱液,然后用甲醇洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加水溶解;
S3:用水饱和的正丁醇提取S2所得溶液,然后正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤,将正丁醇液蒸干,加乙醇溶解即得供试品溶液。
与原标准方法相比,本发明提供的上述供试品溶液的制备方法得到的薄层色谱图斑点更加清晰,杂质更少,保留的特征成分更多,效果更好。
在本发明中,所述甲醇为体积分数为40%的甲醇溶液。
优选地,点样量为5~10μl。
优选地,所述中性氧化铝柱的内径为1.5cm,其中氧化铝的目数为100~200目,质量为5g。
优选地,所述显色剂为体积分数为8~12%的硫酸乙醇溶液;更为优选地,所述显色剂为体积分数为10%硫酸乙醇溶液。
优选地,所述加热的温度为102~108℃;更为优选地,所述加热的温度为105℃。
优选地,所述硅胶薄层板为硅胶G薄层板。
与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
本发明首次提出将体积比为28~32:0.8~1.2:2.5~3.5:1.8~2.2:0.1~0.2的乙酸乙酯-丙酮-冰乙酸-水-盐酸作为用于甘草鉴别的薄层色谱展开剂,本发明提供的展开剂及鉴别方法得到的图谱主次斑点完全分离且阴性无干扰。
附图说明
图1为原标准方法和A法提供的供试品的制备方法点样后置于展开剂后所得的图片。
图2为A法和B法提供的供试品的制备方法点样后置于展开剂后所得的图片。
图3为实施例2提供的供试品的制备方法所制备的供试品溶液点样后置于展开剂1中所得到的图片。
图4为对比例1提供的供试品溶液点样后置于展开剂2中所得到的图片。
图5为对比例2提供的供试品溶液点样后置于展开剂3中所得到的图片。
图6为对比例3提供的供试品溶液点样后置于展开剂4中所得到的图片。
图7为对比例4提供的供试品溶液点样后置于展开剂5中所得到的图片。
图8为对比例5提供的供试品溶液点样后置于展开剂6中所得到的图片。
图9为对比例6提供的供试品溶液点样后置于展开剂7中所得到的图片。
图10为对比例7提供的供试品溶液点样后置于展开剂8中所得到的图片。
图11为对比例8提供的供试品溶液点样后置于展开剂9中所得到的图片。
图12为对比例9提供的供试品溶液点样后置于展开剂10中所得到的图片。
图13为对比例10提供的供试品溶液点样后置于展开剂11中所得到的图片。
图14为对比例11提供的供试品溶液点样后置于展开剂12中所得到的图片。
具体实施方式
以下结合具体实施例和附图来进一步说明本发明,但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明,本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明,本发明所用试剂和材料均为市购。
实施例1妇科调经片供试品溶液制备方法研究
1、三种供试品溶液制备方法对比
(1)制备方法1:原标准方法制备供试品溶液
取妇科调经片50片除去薄膜衣,研细,加乙醚50ml,置温水浴回流1小时,滤过,弃去乙醚液,药渣挥尽乙醚,加乙醇50ml。置水浴上回流2h,滤过,滤液置于水浴上蒸干,残渣加水30ml,使溶解,用水饱和的正丁醇提取两次,每次30ml,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇5ml,使溶解,加入已处理好的中性氧化铝柱(100~200目,5g,内径1.5cm)上,用40%的甲醇100ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取甘草对照药材1g,同法制成对照药材溶液。
(2)制备方法2:A法制备供试品溶液
取妇科调经片50片除去薄膜衣,研细,加乙醚50ml,置温水浴回流1小时,滤过,弃去乙醚液,药渣挥尽乙醚,加乙醇50ml。置水浴上回流2h,滤过,滤液置于水浴上蒸干,残渣加水30ml,使溶解,用水饱和的正丁醇提取两次,每次30ml,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇5ml,使溶解,加入已处理好的中性氧化铝柱(100~200目,5g,内径1.5cm)上,用40%的甲醇100ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加30ml水,使溶解,用水饱和的正丁醇提取,正丁醇液水洗三次,每次30ml,正丁醇液蒸干,加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取甘草对照药材1g,同法制成对照药材溶液。
(3)制备方法3:B法制备供试品溶液
取妇科调经片50片除去薄膜衣,研细,加乙醇50ml,置温水浴回流1小时,滤过,滤液置于水浴上蒸干,残渣加乙醇5ml,使溶解,加入已处理好的中性氧化铝柱(100~200目,5g,内径1.5cm)上,用50ml乙醚洗脱,弃去洗脱液,用40%的甲醇40ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加30ml水,使溶解,用40ml水饱和的正丁醇提取,正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤三次,每次30ml,正丁醇液蒸干,加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取甘草对照药材1g,同法制成对照药材溶液。
2、薄层色谱条件:
展开剂:乙酸乙酯-乙酸-水(30:3:1);点样量5ul~10ul;显色方式:喷10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点清晰,在紫外(365nm)下视检。
3、展开结果见图1和图2。
图1中,1和11为阴性;2为甘草苷对照品;3和10为甘草对照药材;4,5,6,7为供试品(A法制备);8,9为供试品(原标准方法制备)。图2中,1和13为阴性;2和13为甘草苷对照品;3和12为甘草对照药材;4和11为供试品(A法制备);5,6,7,8,9,10为供试品(B法制备)。
由图1可见采用原标准方法制备供试品与采用A法制备的供试品相比,后者薄层色谱图斑点更加清晰,杂质更少。由图2可见采用A法制备的供试品与采用B法制备的供试品薄层色谱图主斑点都比较清晰,但是后者的次斑点更清晰。因此B法制备供试品杂质更少保留的特征成分更多,更适合作为妇科调经片供试品制备。
实施例2
一种妇科调经片中甘草的薄层色谱鉴别方法:
取妇科调经片供试品溶液、甘草对照药材溶液、甘草苷对照品溶液及阴性对照溶液点样到同一硅胶G薄层板上,以体积比为30:1:3:2:0.15的乙酸乙酯-丙酮-冰乙酸-水-盐酸作为展开剂1,展开、取出、晾干后喷10%硫酸乙醇溶液显色,105℃加热至斑点清晰,最后分别在365nm紫外灯和日光下视检。
其中,所述供试品溶液的制备方法如下:
(1)取妇科调经片样品50片除去薄膜衣、研细,添加乙醇50ml并置于温水浴回流1h,然后滤过,蒸干滤液,残渣加乙醇5ml溶解;
(2)将(1)所得溶液过中性氧化铝柱(100~200目,5g,内径1.5cm),用50ml乙醚洗脱,弃去洗脱液,然后用40%甲醇40ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加水30ml溶解;
(3)用40ml水饱和的正丁醇提取(2)所得溶液,正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤三次,每次30ml,将正丁醇液蒸干,加乙醇1ml溶解即得供试品溶液。
分别另取甘草对照药材1g,甘草阴性样品15g,同法制成甘草对照药材溶液和阴性对照溶液。
取甘草苷对照品适量,制成浓度为0.6mg/L对照品溶液。
图3中,1为阴性,2为甘草苷对照品,3和4为甘草对照药材,4~8为供试品;由图3可知,供试品特征斑点及对照药材主次斑点完全分离,阴性无干扰。
实施例3展开剂的优化选择
1、对比例1
本对比例提供的鉴别方法同实施例2,不同之处在于,本对比例选用的展开剂2为体积比为30:10:1的三氯甲烷-甲醇-水。
图4中,4、5、8为甘草对照药材;1~3、6~7、9~10为供试品;由图4可知,选用本对比例提供的展开剂展开后,供试品特征斑点未能与杂质斑点分离,对照药材主次斑点未能完全分离。
2、对比例2
本对比例提供的鉴别方法同实施例2,不同之处在于,本对比例选用的展开剂3为体积比为15:1:1:2的乙酸乙酯-甲酸-冰乙酸-水。
图5中,1、2、8为甘草对照药材;3~7为供试品;由图5可知,选用本对比例提供的展开剂展开后,供试品特征斑点未能与杂质斑点分离,对照药材主次斑点未能完全分离。
3、对比例3
本对比例提供的鉴别方法同实施例2,不同之处在于,本对比例选用的展开剂4为体积比为15:0.5:1:2的乙酸乙酯-甲酸-冰乙酸-水,选用的硅胶板为H板。
图6中,1、9为阴性,2、8为甘草对照药材,3和7为甘草对照品,4~6、10为供试品;由图6可知,选用本对比例提供的展开剂展开后,供试品特征斑点未能与杂质斑点分离,对照药材主次斑点未能完全分离,阴性样品有干扰。
4、对比例4
本对比例提供的鉴别方法同实施例2,不同之处在于,本对比例选用的展开剂5为体积比为15:1:1:2的乙酸乙酯-甲酸-冰乙酸-水,选用的硅胶板为1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G板。
图7中,1、2为阴性,3~8为供试品,9~11为甘草对照药材;由图7可知,选用本对比例提供的展开剂展开后,供试品特征斑点未能与杂质斑点分离,对照药材主次斑点未能完全分离。
5、对比例5
本对比例提供的鉴别方法同实施例2,不同之处在于,本对比例选用的展开剂6为体积比为15:0.5:1:2的乙酸乙酯-甲酸-冰乙酸-水,选用的硅胶板为1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G板。
图8中,1~2为阴性,3~4、11为甘草对照药材,5~10为供试品;由图8可知,选用本对比例提供的展开剂展开后,供试品特征斑点未能与杂质斑点分离,对照药材主次斑点未能完全分离,特征斑点Rf值太小。
6、对比例6
本对比例提供的鉴别方法同实施例2,不同之处在于,本对比例选用的展开剂7为体积比为15:1:0.5的乙酸乙酯-冰乙酸-水,选用的硅胶板为H板。
图9中,1、2、12为阴性,3、11为对照品溶液,4、10为对照药材,5~9为供试品;由图9可知,选用本对比例提供的展开剂展开后,供试品特征斑点未能与杂质斑点分离,对照药材主次斑点未能完全分离,特征斑点Rf值太小。
7、对比例7
本对比例提供的鉴别方法同实施例2,不同之处在于,本对比例选用的展开剂8为体积比为15:2:0.5的乙酸乙酯-冰乙酸-水,选用的硅胶板为H板。
图10中,1、12为阴性,2、11为苷草苷对照品,3、10为甘草对照药材,4~9为供试品;由图10可知,选用本对比例提供的展开剂展开后,供试品特征斑点的主次斑点未能完全分离。
8、对比例8
本对比例提供的鉴别方法同实施例2,不同之处在于,本对比例选用的展开剂9为体积比为30:3:1的乙酸乙酯-冰乙酸-水,选用的硅胶板为H板。
图11中,1、11为阴性,2、10为苷草苷对照品,3、9为甘草对照药材,4~8为供试品;由图11可知,选用本对比例提供的展开剂展开后,供试品特征斑点的主次斑点未能完全分离。
9、对比例9
本对比例提供的鉴别方法同实施例2,不同之处在于,本对比例选用的展开剂10为体积比为15:0.5:1:1的乙酸乙酯-甲酸-冰乙酸-水,选用的硅胶板为H板。
图12中,1、2为阴性,3、11为苷草苷对照品,4、9、10为甘草对照药材,5~8为供试品;由图12可知,选用本对比例提供的展开剂展开后,供试品特征斑点及对照药材主次斑点完全分离,阴性有干扰。
10、对比例10
本对比例提供的鉴别方法同实施例2,不同之处在于,本对比例选用的展开剂11为体积比为15:0.5:1:2的乙酸乙酯-甲酸-冰乙酸-水,选用的硅胶板为H板。
图13中,1、2为阴性,3、11为苷草苷对照品,4、9、10为甘草对照药材,5~8为供试品;由图13可知,选用本对比例提供的展开剂展开后,供试品特征斑点及对照药材主次斑点完全分离,阴性有干扰。
11、对比例11
本对比例提供的鉴别方法同实施例2,不同之处在于,本对比例选用的展开剂12为体积比为30:1:3:2的乙酸乙酯-丙酮-冰乙酸-水,选用的硅胶板为G板高效板。
图14中,1、12为阴性,2为苷草苷对照品,9~11为甘草对照药材,3~8为供试品;由图14可知,选用本对比例提供的展开剂展开后,供试品特征斑点及对照药材主次斑点完全分离,阴性无干扰。但是本对比例选用的硅胶板为高效版,因此与实施例2相比,实施例2提供的展开剂展开条件更优。
实施例4展开剂比例优化选择
以同实施例2的鉴别方法,对展开剂中乙酸乙酯-丙酮-冰乙酸-水-盐酸的体积比进行评估研究。结果显示,控制乙酸乙酯-丙酮-冰乙酸-水-盐酸的体积比为28~32:0.8~1.2:2.5~3.5:1.8~2.2:0.1~0.2时,图谱主次斑点完全分离且阴性无干扰,能保证较好的鉴别效果,最佳体积比为30:1:3:2:0.15。
实施例5显色剂选择
以同实施例2的鉴别方法,研究茚三酮溶液、磷钼酸乙醇溶液、氯化铝溶液、三氯化铁乙醇溶液、碘化铋钾溶液等显色剂对鉴别效果的影响。结果显示,硫酸乙醇溶液最适宜作为本发明妇科调经片中甘草的薄层色谱鉴别的显色剂。且硫酸乙醇溶液适宜浓度为8~12%。
显然,本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例,而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种妇科调经片中甘草的薄层色谱鉴别方法,其特征在于:
(1)取妇科调经片样品除去薄膜衣、研细,添加乙醇并置于温水浴回流,然后滤过,蒸干滤液,残渣加乙醇溶解;
(2)将S1所得溶液过中性氧化铝柱,用乙醚洗脱,弃去洗脱液,然后用甲醇洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加水溶解;
(3)用水饱和的正丁醇提取S2所得溶液,然后正丁醇液用正丁醇饱和的水洗涤,将正丁醇液蒸干,加乙醇溶解即得供试品溶液;
(4)取妇科调经片供试品溶液、甘草对照药材溶液、甘草苷对照品溶液及阴性对照溶液点样于同一硅胶薄层板上,以体积比为28~32:0.8~1.2:2.5~3.5:1.8~2.2:0.1~0.2的乙酸乙酯-丙酮-冰乙酸-水-盐酸作为展开剂,展开、取出、晾干后喷显色剂显色,加热至斑点清晰,最后在365nm紫外灯下视检。
2.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述展开剂为体积比为30:1:3:2:0.15的乙酸乙酯-丙酮-冰乙酸-水-盐酸。
3.根据权利要求1所述方法,其特征在于,点样量为5~10μl。
4.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述中性氧化铝柱的内径为1.5cm,其中氧化铝的目数为100~200目,质量为5g。
5.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述显色剂为体积分数为8~12%的硫酸乙醇溶液。
6.根据权利要求5所述方法,其特征在于,所述显色剂为体积分数为10%硫酸乙醇溶液。
7.根据权利要求6所述方法,其特征在于,所述加热的温度为102~108℃。
8.根据权利要求7所述方法,其特征在于,所述加热的温度为105℃。
9.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述硅胶薄层板为硅胶G薄层板。
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