CN110251671B - 鹅星状病毒卵黄抗原抗体复合物制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了鹅星状病毒卵黄抗原抗体复合物制备方法，涉及兽用生物制品领域，为达到上述目的，本发明的技术方案包括如下步骤：1)用保藏编号为CCTCCNO：V201815的鹅星状病毒SD株作为疫苗生产毒株，制成灭活抗原备用；2)对所述灭活抗原分别水相制备和油相制备，然后将水相和油相混合、初次乳化得到免疫抗原；3)用所述免疫抗原接种产蛋鸡，制备高免蛋；4)由高免蛋收集卵黄，经消毒、分离蛋黄、稀释、酸化、萃取、制取抗体原液、过滤、浓缩和灭活得到鹅星状病毒精制卵黄抗体，可以有效预防鹅星状病毒，且可保护鹅整个生长周期，显著提高养殖收益。

Description

鹅星状病毒卵黄抗原抗体复合物制备方法
技术领域
本发明涉及一种鹅星状病毒卵黄抗原抗体复合物制备方法，主要涉及兽用生物制品领域。
背景技术
2013年以来，我国主要鹅养殖地区的雏鹅流行一种临床症状为精神沉郁、采食量下降、消瘦、拉白色石灰样稀便等和剖检症状为肾脏肿大、斑驳，输尿管、肌肉和关节有尿酸盐沉积，心脏和肝脏表面有尿酸盐附着的疾病，临床称为鹅“痛风”，该病的致病病原经鉴定为鹅星状病毒。该病主要侵害35日龄以内雏鹅，2周龄以内雏鹅病死率40-70％以内，3-4周龄雏鹅病死率为20％左右，5周龄以上鹅发病率和死亡率较低，该病用常规的抗病毒(中药、西药)和抗菌(抗生素)治疗方法无效，给国内鹅养殖业造成了巨大的经济损失。
实验室条件下进行攻毒后治疗的试验表明：鹅星状病毒卵黄抗体按1.5-2ml/只剂量，对发病早期(个别鹅出现精神沉郁、采食量下降)的鹅有大于等于80％治愈率，对发病中后期(全群发病、出现死亡病例)的鹅治疗无效。在临床实际条件下，因该病发病早期的临床症状与其他鹅的疾病如小鹅瘟类似，养殖户及基层兽医无法通过临床症状正确判断致病原，非实验室诊断不能确诊，当出现死亡病例，通过剖检观察病理变化确诊时再用鹅星状病毒卵黄抗体治疗已经无效，错失了最佳治疗时机。
实验室研究表明：用鹅星状病毒卵黄抗体接种1日龄雏鹅0.5-0.7ml/只可预防鹅星状病毒，预防保护期为5-7日，环境持续带毒条件下，鹅在6日龄左右需重复注射1次，剂量1ml/只，可保护至2周龄；用鹅星状病毒灭活疫苗接种1日龄雏鹅0.2ml/只，在接种7-9日后可预防鹅星状病毒，预防保护期为60日左右。
综合上述结果，得出如下结论：(1)常规的抗病毒(中药、西药)和抗菌(抗生素)治疗方法对鹅星状病毒感染导致的鹅“痛风”无效；(2)鹅星状病毒卵黄抗体可预防鹅星状病毒，一次注射，预防保护期为5-7日，疫情严重的需重复注射；(3)鹅性状病毒灭活疫苗接种后7-9日开始可预防鹅星状病毒至60日龄，存在免疫空白期至少7日。
鹅星状病毒卵黄抗体的缺点是预防保护期、需重复注射；鹅性状病毒灭活疫苗的缺点是有免疫空白期，在免疫空白期内鹅易感鹅星状病毒而发病。
发明内容
针对以上现有技术的不足，本发明提出一种鹅星状病毒卵黄抗原抗体复合物制备方法，可以有效预防鹅星状病毒，且可保护鹅整个生长周期，显著提高养殖收益。
为达到上述目的，本发明的技术方案是：所述卵黄抗体是用保藏编号为CCTCC NO：V201815的鹅星状病毒SD株制备的灭活疫苗作为抗原制备的。
鹅星状病毒卵黄抗原抗体复合物制备方法，包括如下步骤：
1)用保藏编号为CCTCC NO：V201815的鹅星状病毒SD株作为疫苗生产毒株，制成灭活抗原备用；2)对所述灭活抗原分别水相制备和油相制备，然后将水相和油相混合、初次乳化得到免疫抗原；3)用所述免疫抗原接种产蛋鸡，制备高免蛋；4)由高免蛋收集卵黄，经消毒、分离蛋黄、稀释、酸化、萃取、制取抗体原液、过滤、浓缩和灭活得到鹅星状病毒精制卵黄抗体；5)取一份所述免疫抗原加入两份鹅星状病毒精制卵黄抗体，二次乳化得到鹅星状病毒抗原抗体复合物。
优选地，步骤1)对抗原灭活之前需要对病毒繁殖：
优选地，所述病毒繁殖方法如下：鹅星状病毒SD株生产种子用生理盐水稀释，经尿囊腔接种易感鹅胚，收集接种72～216小时死亡鹅胚，冷藏6-12小时，无菌操作收获胚液。
优选地，步骤1)对抗原灭活方法如下：
胚液解冻后加入氯仿，振摇、离心，取上清液浓缩，浓缩液加入甲醛溶液，置37～37.5℃温箱中灭活即实现抗原灭活。
优选地，步骤2)中所述油相和水相按体积比2：1混合。
本发明的技术原理及有益效果如下：
本发明复合物为水包油包水剂型，既含有鹅星状病毒卵黄抗体又含有鹅星状病毒灭活抗原。可以有效预防鹅星状病毒，且可保护鹅整个生长周期，显著提高养殖收益。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的其中两幅，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为鹅星状病毒SD株基因同源性比对；
图2为鹅星状病毒SD株系统进化分析。
具体实施方式
下面将结合附图，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的较佳实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例
本发明用鹅星状病毒SD株(2018年4月25日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号：CCTCC NO：V201815，)接种易感鹅胚，收获死亡鹅胚液，制备鹅星状病毒抗原抗体复合物，该复合物为水包油包水剂型，既含有鹅星状病毒卵黄抗体又含有鹅星状病毒灭活抗原，接种1日龄雏鹅0.5ml/只，外层的鹅星状病毒卵黄抗体直接缓释到体液中，起到中和鹅星状病毒作用，预防保护期为9-10日；内层的油包水鹅星状病毒抗原刺激机体产生鹅星状病毒抗体，起效日期为接种后7-9日，预防保护期至60日龄，此时鹅对鹅星状病毒易感性极低，即使感染鹅星状病毒，发病率和死亡率也较低，再饲养10-20日鹅已达到上市销售的标准了。
本发明的优点是鹅1次注射鹅星状病毒抗原抗体复合物可预防鹅星状病毒至60
日，预防保护期长，提高养殖收益。
具体操作步骤如下：
1鹅星状病毒抗原制备
1.1鹅星状病毒SD株部分序列
CCCTTATGATGGCACCATACCAGGACAAACTTTTTTGGCGTATTAAAAGATGAGATTCTTTTTTCTTAAGGAAAAGTACCAAAGAAAATATAAAGACCTCTATAATTGGTACATTGCAAACTTACTTGAAAAAATCATCTTGTTACCAACTGGTGAGGTGTGTCAGGTCAAGAAAGGAAATCCATCTGGTCAATTTTCAACCACTGTCGACAATAATTTCTGTAATGTATGGCTTACAACATTTGAGTTTGGGTACTTACATTATACCCAAAAAGGGGTTTTCCCTAGTGCAGAGCAACTTATAGCAAATGTTAAGTATATTTGCTATGGAGATGATAGGTTGCTATCATACAACGCAGATTTTGTTGACTATGACCGGGACACTATCATAAAGATGTATGCCGATGTCTTTGGTAGTGGGTCAAA。
与Genbank上其他鹅星状病毒的同源性比对
如图1所示，利用DNAstar软件中的MegAlign功能将鹅星状病毒SD株序列与Genbank中序列进行比对，结果发现该毒株与鹅星状病毒FLX株(登录号KY271027.1)的基因同源性为93.9％，与鹅星状病毒AHDY株(登录号MH410610.1)的基因同源性为98.8％。
系统进化树
如图2所示，与鹅星状病毒FLX株和鹅星状病毒AHDY株比较，鹅星状病毒SD株处于一个独立进化分支。
病毒繁殖
鹅星状病毒SD株生产种子用生理盐水1000倍稀释，经尿囊腔接种12日龄易感鹅胚，0.3ml/胚，收集接种72～216小时死亡鹅胚，于4℃冷藏6-12小时，无菌操作收获胚液，收获胚液时逐个检查，胚体病变不明显和疑似污染的鹅胚弃掉不收集胚液。胚液分装，标记日期和名称，于-20℃保存。
1.2抗原检验
1.2.1病毒含量
抗原用灭菌生理盐水作10倍系列稀释，取10-4、10-5和10-6等3个稀释度各经尿囊腔接种12日龄易感鹅胚5枚，每胚0.3ml，用蜡封孔，于37～37.3℃静置孵育，24小时前死胚弃去，记录24～216小时各稀释度接种的死胚数，按Reed-Muench法计算ELD50。病毒含量应≥105.0ELD50/0.3ml。
1.2.2特异性
抗原用灭菌生理盐水稀释至200ELD50/0.3ml，与等量鹅星状病毒阳性血清混合，置37℃作用1小时，经尿囊腔接种12日龄易感鹅胚10枚，每胚0.3ml；设病毒对照10枚，每胚接种同条件处理的病毒与灭菌生理盐水等量混合液0.3ml。用蜡封孔，于37～37.3℃静置孵育，观察至216小时。血清中和组鹅胚应全部健活，病毒对照组鹅胚应全部死亡。
1.2.3纯净性
抗原按现行《中国兽药典》附录检验，应无菌和无支原体生长及无外源病毒污染。鹅星状病毒精制卵黄抗体制备
2.1抗原浓缩与灭活
2.1.1中胚液于2～8℃条件下解冻、混合批组，加入终浓度(V/V)为4.8％氯仿，振摇10min，于4℃条件下4000r/min离心30min，取上清液用截留分子量为6KD的中空纤维超滤柱浓缩5倍，浓缩液加入终浓度(V/V)为0.2％的甲醛溶液(含量：HCHO为37.0～40.0％)，置37～37.5℃温箱中灭活24小时(其间4～6小时振摇1次，每次3分钟)，于2～4℃保存，备用。
2.2灭活抗原检验
2.2.1无菌按现行《中国兽药典》附录检验，应无菌生长。
2.2.2灭活检验灭活抗原经尿囊腔接种12日龄易感鹅胚5枚，每胚0.3ml，用蜡封孔，于37～37.3℃静置孵育，观察至216小时，鹅胚应全部健活。
2.3免疫抗原的制备
2.3.1油相制备
取94份注射用白油，加入2份硬脂酸铝，边加边搅拌，加热直至完全透明，再加入6份司本-80，充分混匀，121℃高压灭菌30min，冷却至室温。
2.3.2水相制备
灭活抗原96份加入4份灭菌的吐温-80，充分振摇后使吐温-80完全溶解。2.3.3乳化
油相与水相按体积比2:1的比例初步混合、振摇3～5分钟，加入均质机料斗，调节压力
为34～37MPa进行乳化3～5分钟。
2.3.4分装保存分装，标记名称为鹅星状病毒免疫抗原和制备时间，于2～8℃保存。
2.4免疫抗原检验
2.4.1外观应为乳白色乳剂。
2.4.2剂型油包水型。取少量免疫抗原滴于冷水中，除第一滴外，均应不扩散。
2.4.3稳定性取10ml免疫抗原加入离心管中，以3000r/min离心15min，管底析出的水相应≤0.5ml。
2.4.4黏度按现行《中国兽药典》附录检验，应符合规定。
2.4.5无菌检验按现行《中国兽药典》附录检验，应无菌生长。
2.4.6安全检验3～5周龄SPF鸡10只，每只颈背部皮下注射免疫抗原2.0ml，隔离器内饲养观察14日，应全部健活。
2.5高免鸡蛋的生产
用鹅星状病毒免疫抗原按如下免疫程序接种产蛋鸡：
基础免疫鸡皮下注射免疫抗原1.0ml/只。
加强免疫基础免疫后14日，鸡皮下注射免疫抗原2.0ml/只。
强化免疫加强免疫后21日，鸡皮下注射免疫抗原2.0ml/只。
强化免疫后7日，抽样取蛋检测鹅星状病毒卵黄中和抗体效价≥1:512为合格。收集鸡蛋，于湿度30～60％、温度10～15℃条件下避光储存，应不超过10日。当高免鸡蛋的鹅星状病毒卵黄中和抗体效价临界1:512时，维持接种1次，鸡皮下注射免疫抗原2.0ml/只。
2.6鹅星状病毒精制卵黄抗体制造
2.6.1消毒将蛋壳有粪污的高免鸡蛋单独挑出，用自来水清洗干净，与蛋壳洁净的高免鸡蛋一起摆入塑料蛋盘中，浸入40℃的0.1％苯扎溴铵水溶液中15min，而后在95℃自来水中浸泡5s。
2.6.2分离卵黄手工或机械打蛋，除去蛋清、胚盘和系带，收集卵黄。
2.6.3稀释卵黄转入反应罐中，搅拌呈膏状，加入与卵黄等体积的注射用水(25℃
左右)，搅拌均匀。
2.6.4酸化加入7倍于原卵黄体积的酸化水(用醋酸-醋酸钠缓冲液调pH值至5.2的注射用水)，搅拌均匀，降温至2～4℃，静置12～15小时。
2.6.5萃取吸取上清液，转入搅拌罐中，加入终浓度(V/V)为1.0％的辛酸，搅拌均匀，室温(20～25℃)条件下作用4～6小时。
2.6.6抗体原液收集80～90％下层液，用孔径为1μm的筒式滤芯粗滤，收集滤液。将罐内剩余物搅拌均匀，用连续管式离心机离心，收集离心液。合并滤液和离心液。
2.6.7过滤用1～2M氢氧化钠溶液调节pH值为5.5～7.5，用孔径为0.45μm的筒式滤芯过滤澄清，用孔径为0.22μm筒式滤芯过滤除菌。
2.6.8浓缩根据高免鸡蛋的鹅星状病毒卵黄中和抗体效价和卵黄稀释倍数，滤液用截留分子量为30KD的中空纤维超滤器进行适当倍数的浓缩，预期使鹅星状病毒中和抗体效价≥1:1024。
2.6.9灭活浓缩液加入终浓度(V/V)为0.05％的甲醛溶液(含量：HCHO为37.0～40.0％)，搅拌均匀，用孔径为0.22μm筒式滤芯过滤，滤液转入灭活罐中，于室温条件下灭活24小时，加入4％的灭菌吐温-80，充分搅拌使吐温-80完全溶解，分装，即为鹅星状病毒精制卵黄抗体，于4℃保存备用。
2.6.10检验
2.6.10.1无菌检验鹅星状病毒精制卵黄抗体按现行《中国兽药典》附录检验，应无菌生长。
2.6.10.2效价测定鹅星状病毒精制卵黄抗体的鹅星状病毒中和抗体效价应≥1:1024。
3鹅星状病毒抗原抗体复合物
3.1油相按2.3.1方法制备油相。
3.2水相按2.3.2方法制备水相。
3.3初次乳化油相与水相按2.3.3方法乳化，取样按2.4.2检验应合格。
3.4二次乳化取3.3中的乳化物1份，加入2份2.6.9中的鹅星状病毒精制卵黄抗体，按2.3.3方法乳化，分装、标记，于4℃保存。
鹅星状病毒抗原抗体复合物质量标准
【性状】本品为乳白色均匀乳剂。
【剂型】水包油包水型。取少量本品滴于冷水中，呈云雾状扩散。
【稳定性】取10ml本品加入离心管中，以3000r/min离心15min，管底析出的水相应≤0.5ml。
【黏度】按现行《中国兽药典》附录检验，应符合规定。
【无菌检验】按现行《中华人民共和国兽药典》检测，应无细菌生长。
【支原体检验】按现行《中华人民共和国兽药典》检测，应无支原体生长。【外源病毒检验】按现行《中华人民共和国兽药典》检测，应无外源病毒污染。
【安全检验】1日龄健康雏鹅10只，每只皮下注射本品1.0ml，连续观察14日，雏鹅应全部健活。
【效力检验】按如下方法检验，应符合规定：
1、中和抗体效价检测用灭菌生理盐水做2倍系列稀释，取1:128、1:256和1:512等3个稀释度，分别与200ELD50/0.3ml的检验用毒种鹅星状病毒SD株等量混合，置37℃下作用1小时，每个稀释度经尿囊腔接种12日龄易感鹅胚5枚，每胚0.3ml；设病毒对照5枚，每胚接种同条件处理的病毒与生理盐水等量混合液0.3ml；设空白对照5枚，每胚接种灭菌生理盐水0.3ml。鹅胚用蜡封孔，于37～37.3℃静置孵育，24小时前死亡鹅胚弃去不计，24～216小时死亡鹅胚随时取出，计算其半数保护量(PD50)。病毒对照组鹅胚应全部死亡，空白对照组鹅胚应全部健活，能使50％鹅胚保护的最高稀释倍数即为抗体的中和效价。中和抗体效价应≥1:512。
2、血清学方法检测用1日龄健康易感雏鹅10只，颈背部皮下注射0.5ml/只，接种后21日后，连同条件相同的对照鹅5只，分别采血，分离血清，按中和抗体效价法检测。对照鹅的鹅星状病毒血清中和抗体效价应为阴性，免疫鹅应至少有8只的鹅星状病毒血清中和抗体效价≥1:256。
【甲醛残留】按现行《中华人民共和国兽药典》检测，应符合规定。
【规格】250ml/瓶。
【贮藏与有效期】2～8℃贮存，有效期为12个月。
5鹅星状病毒抗原抗体复合物使用说明
【作用与用途】用于预防鹅星状病毒感染导致的鹅“痛风”。
【用法用量】皮下注射。1～4日龄雏鹅每只0.5ml；5日龄及以上雏鹅每只0.7ml。
【不良反应】一般无可见不良反应。
【注意事项】
1本品一次注射免疫保护期为60日。
2用过的器具和包材应无害化处理。
应用实例1
与抗体比较，1次注射预防保护期长、显著提高养殖收益
1.1试验地点及其情况山东菏泽某鹅养殖场进行试验。该场在2018年11月23日至2019年2月16日饲养的3207只皖西白鹅发生过鹅星状病毒(经实验室确诊)感染导致的鹅“痛风”，鹅在6日龄时开始发病死亡至23日龄，期间共计死亡1371只，死亡率42.8％，而后只是零星死亡，因发生鹅痛风，该批鹅延迟上市销售11日，增加了饲养成本，连同死亡鹅在内，该批鹅亏损1.6万元(人工费不计)。
1.2试验时间2019年2月24日至5月6日。
1.3试验方案在对养殖场地彻底消毒后，2019年2月24日，该场新进雏鹅3880只，随机分为两组饲养，一组为2000只，二组为1880只。一组雏鹅在1日龄时皮下注射鹅星状病毒抗原抗体复合物(免费试验品)0.5ml/只；二组鹅皮下鹅星状病毒精制卵黄抗体(免费试验品)0.5ml/只，接种后观察统计鹅星状病毒感染导致的鹅“痛风”发病、死亡情况至鹅上市销售。另外，两组鹅在3日龄时统一肌肉注射小鹅瘟精制卵黄抗体0.7ml/只，用于预防小鹅瘟。
1.4结果
至8日龄，两组鹅均基本生长良好，期间一组和二组分别死亡弱雏各11只和9只，属于正常死亡。
从9日龄开始，二组鹅个别表现出精神沉郁、行动迟缓的发病症状，立即全组皮下注射鹅星状病毒精制卵黄抗体1.5ml/只，同时取发病鹅进行实验室诊断，确诊为鹅星状病毒，至15日龄，死亡177只，后续有零星死亡，截止5月6日上市销售，存活鹅共计1656只，成活率88.1％，鹅平均体重6.74斤/只，平均净利润(不计人工成本)3.53元/只。
一组鹅未发生鹅星状病毒，养殖期间有正常的死淘，截止5月6日上市销售，存活鹅共计1947只，成活率97.4％，鹅平均体重7.36斤/只，平均净利润(不计人工成本)11.08元/只。
1.5讨论
在污染鹅星状病毒养殖场实际条件下用鹅星状病毒抗原抗体复合物和鹅星状病毒精制卵黄抗体进行预防鹅星状病毒的试验，评价两种制品的预防效果及收益。结果显示鹅星状病毒抗原抗体复合物可有效预防鹅星状病毒，且可保护鹅整个生长周期；鹅星状病毒精制卵黄抗体预防保护期短，只有8日，发病后及时用于治疗有效(存活率≥80％)。鹅星状病毒抗原抗体复合物的养殖收益比单纯使用鹅星状病毒精制卵黄抗体高7.55元/只，得到了养殖户的交口称赞。
应用实例2
与疫苗比较，无免疫空白期
2.1试验地点某实验动物房。
2.2试验时间2019年4月5日至4月30日。
2.3试验方案1日龄健康易感雏鹅140只，随机分为28组，5只/组。取1组作为健康对照组，单独隔离饲养于健康实验动物房；另外27组编号为F1-F9、K1-K9、G1-G9，饲养于强毒舍。F1-F9为接种鹅星状病毒抗原抗体复合物组，皮下注射鹅星状病毒抗原抗体复合物0.5ml/只；K1-K9为接种鹅星状病毒免疫抗原(疫苗)组，皮下注射鹅星状病毒免疫抗原0.2ml/只；G1-G9为攻毒对照组。接种后1日，取F1、K1和G1组，每只鹅分别用检验用毒种鹅星状病毒SD株肌肉注射接种1ml(含100LD50)；以此类推，于接种后3日、5日、6日、7日、8日、9日、10日和11日分别取相应组攻毒，攻毒后观察14日，记录各组鹅的鹅星状病毒发病(鹅感染星状病毒的临床症状为精神沉郁、采食量下降、拉稀导致肛周羽毛被稀便污染)和死亡情况，判定鹅星状病毒抗原抗体复合物和鹅星状病毒免疫抗原的免疫空白期。
试验成立条件:健康对照组鹅全部健活，攻毒对照组鹅死亡≥4/5。
鹅星状病毒抗原抗体复合物和鹅星状病毒免疫抗原预防组鹅健活≥4/5为保护。
2.4结果
各组鹅的发病、死亡情况等的统计见表1。在试验成立条件下，鹅星状病毒抗原抗体复合物接种后1日、3日、5日、.6日、7日、8日、9日、10日和11日攻毒均可100％保护，无免疫空白期；鹅星状病毒免疫抗原接种后自8日开始保护，有免疫空白期至少7日。
表1各组鹅的发病、死亡情况的结果
Figure GDA0004002173440000071
Figure GDA0004002173440000081
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种鹅星状病毒卵黄抗原抗体复合物制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)用保藏编号为CCTCC NO：V201815的鹅星状病毒SD株作为疫苗生产毒株，制成灭活抗原备用；
2)对所述灭活抗原分别水相制备和油相制备，然后将水相和油相混合、初次乳化得到免疫抗原；
3)用所述免疫抗原接种产蛋鸡，制备高免蛋；
4)由高免蛋收集卵黄，经消毒、分离蛋黄、稀释、酸化、萃取、制取抗体原液、过滤、浓缩和灭活得到鹅星状病毒精制卵黄抗体；
5)取一份所述免疫抗原加入两份鹅星状病毒精制卵黄抗体，二次乳化得到鹅星状病毒抗原抗体复合物。
2.根据权利要求1所述的鹅星状病毒卵黄抗原抗体复合物制备方法，其特征在于：步骤1)对抗原灭活之前需要对病毒繁殖。
3.根据权利要求2所述的鹅星状病毒卵黄抗原抗体复合物制备方法，其特征在于：所述病毒繁殖方法如下：鹅星状病毒SD株生产种子用生理盐水稀释，经尿囊腔接种易感鹅胚，收集接种72～216小时死亡鹅胚，冷藏6-12小时，无菌操作收获胚液。
4.根据权利要求3所述的鹅星状病毒卵黄抗原抗体复合物制备方法，其特征在于：步骤1)对抗原灭活方法如下：
胚液解冻后加入氯仿，振摇、离心，取上清液浓缩，浓缩液加入甲醛溶液，置37～37.5℃温箱中灭活即实现抗原灭活。
5.根据权利要求2所述的鹅星状病毒卵黄抗原抗体复合物制备方法，其特征在于：步骤2)中所述油相和水相按体积比2：1混合。
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