CN110082465A - 一种测定人全血中铅、镉含量的方法 - Google Patents

一种测定人全血中铅、镉含量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及微量元素含量检测技术领域，尤其涉及一种测定人全血中铅、镉含量的方法。采用ICP‑MS(电感耦合等离子体质谱)法测定人全血中铅、镉含量，包括血液样本的前处理和电感耦合等离子体质谱(ICP‑MS)的分析步骤。通过内标法对待测血液样本中铅、镉含量进行定量。本发明将内标法与电感耦合等离子体质谱法相结合，提高了定量结果的准确性，消除系统误差，使检测过程简便快速，能准确反映出人全血样本中微量元素的含量高低，以辅助相关疾病的诊断，为临床个性化用药提供参考。

Description

一种测定人全血中铅、镉含量的方法
技术领域
本发明涉及微量元素含量检测技术领域，尤其涉及一种测定人全血中铅、镉含量的方法。
背景技术
近年来,社会工业化进程加剧,对环境造成的影响加重,极大污染了生态环境和水源。在生长环境中与镉、铅烟尘长期接触,是主要诱导慢性铅、镉中毒的原因。检测微量元素铅镉含量,对相关疾病的防控有非常重要的参考价值。
目前应用石墨炉原子吸收光谱测定样品中铅、镉元素，存在基体干扰严重、测定信号弱、误差较大，最低定量下限较大等问题。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种测定人全血中铅、镉含量的方法，采用ICP-MS法，把内标法与电感耦合等离子体质谱相结合，建立一种快速、灵敏的测定人全血中铅(Pb)、镉(Cd)含量的方法。
具体技术方案如下：
一种测定人全血中铅、镉含量的方法，采用电感耦合等离子体质谱进行检测，包含以下步骤：
(1)标准工作液的配制
用移液枪移取4.5mL浓度为100mg/L的标准原液，加入40.5mL 1％HNO3溶液，混匀，配制成10mg/L的Pb储备液A，密封避光保存于4℃；
用移液枪移取4.5mL浓度为100mg/L的标准原液加入40.5mL 1％HNO3溶液，混匀，配制成10mg/L的Cd储备液B，密封避光保存于4℃；用1％HNO3溶液将储备液A、B进行稀释，稀释成0.0625-2μg/L浓度的各标曲工作液，4℃保存备用；
(2)内标工作液的配制
用移液枪移取0.1mL浓度为1000mg/L的铋、铟单标液，加入49.8mL 1％HNO3溶液，混匀，配制成2mg/L的内标储备液C，密封避光保存于4℃备用，有效期3个月；取1.15mL内标储备液C加入44.85mL 1％HNO3，混匀，配制成0.05mg/L的内标工作液D，密封避光保存于4℃备用；
(3)调谐工作液的配制
用移液枪移取浓度为1000mg/L的In、Bi、Ce单标液100μL，浓度为1000mg/L的Co、Mn单标液250μL，浓度为1000mg/L的Be单标液500μL，加入1％HNO3溶液48.70mL，混匀，配制成中间液E，用移液枪移取50μL中间液E，加入1％HNO3溶液49.95mL，混匀，配制成调谐工作液F，密封避光保存于4℃备用；
(4)检测血液准备
取待检测血液至少2mL，盛于采血管中放置4℃冰箱保存，低温运输；
(5)待测样本处理
用移液枪移取全血样品0.2mL于1.5mL离心管中、加入1mL 5％HNO3溶液，在2500rpm的转速下涡旋震荡混合15s，在12000rpm的转速下高速离心5min，用移液枪移取上清液0.8mL，加入3.2mL 1％HNO3溶液，在2500rpm的转速下涡旋震荡混合2min，静置1min，得到的溶液即为待测样品；
(6)待测样品的测定
取步骤(3)中配好的调谐工作液F，对仪器进行调谐，调谐通过后，采用在线内标进样，样品管和内标管分开，使用电感耦合等离子体质谱分析仪器对上述步骤(5)中的待测样品和内标工作液D进行监测，通过各个元素的强度与其内标元素强度的比值对应溶液浓度制作标准曲线，从而计算出待测样本中微量元素的含量。
所述标准工作液浓度为标准工作液中所含有铅、镉的浓度，内标工作液浓度为内标工作液中所含有Bi、In的浓度；步骤(1)中所述储备液A稀释成含有0.0625μg/L、0.125μg/L、0.25μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L浓度的铅溶液的六种不同浓度的标准工作液；储备液B稀释成含有0.0625μg/L、0.125μg/L、0.25μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L浓度的镉溶液的五种不同浓度的标准工作液。
所述采血管为含EDTA抗凝剂的紫帽采血管。
所述Pb储备液A、Cd储备液B、标曲工作液的有效期为3个月，储存超过3个月需要重新配制。
与现有技术相比，本发明具有如下有益技术效果：
电感耦合等离子体质谱法测定微量元素灵敏度高、专属性强、重现性好；可同时检测多种微量元素，极大程度的短了分析时间，降低了最低定量下限。
附图说明
图1为实施例3中铅、镉标准曲线色谱图。
图2为实施例3中铅、镉低浓度色谱峰。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明，但本发明的保护范围不受附图和实施例所限。
实施例中采血管为BD公司的含EDTA抗凝剂的紫帽采血管，实施例中使用的仪器主要工作参数设定如表1所示：
表1仪器主要工作参数
实施例中使用的蠕动泵设置如表2所示：
表2蠕动泵设置
Low High
溶剂清洗/s 0 20
样品清洗/s 15 45
辅助清洗/s 0 0
转速/rpm 20 60
实施例3
(一)标准工作液的配制
用移液枪移取4.5mL标准原液(100mg/L)加入40.5mL 1％HNO3溶液，混匀，配制成10mg/L的Pb储备液A，密封避光保存于4℃，有效期3个月。
用移液枪移取4.5mL标准原液(100mg/L)加入40.5mL 1％HNO3溶液，混匀，配制成10mg/L的Cd储备液B，密封避光保存于4℃，有效期3个月。用1％HNO3溶液将储备液A、B进行稀释，稀释成0.0625-2ug/L浓度的各标曲工作液，4℃保存备用，有效期3个月。
(二)内标工作液的配制
用移液枪移取0.1mL铋(Bi)，铟(In)单标液(1000mg/L)加入49.8mL 1％HNO3溶液，混匀，配制成2mg/L的内标储备液C，密封避光保存于4℃备用，有效期3个月。取1.15mL内标储备液C加入44.85mL 1％HNO3，混匀，配制成0.05mg/L的内标工作液D，密封避光保存于4℃备用。
(三)调谐工作液的配制
用移液枪移取In、Bi、Ce(铈)单标液(1000mg/L)100μL，Co(钴)、Mn(锰)单标液(1000mg/L)250μL，Be(铍)单标液(1000mg/L)500μL，加入1％HNO3溶液48.70mL，混匀，配制成中间液E，用移液枪移取50μL中间液E，加入1％HNO3溶液49.95mL，混匀，配制成调谐工作液F，密封避光保存于4℃备用。
(四)检测血液准备
取待检测血液至少2mL，于4℃冰箱保存，低温运输。备注：选用BD公司的含EDTA抗凝剂的紫帽采血管。
(五)待测样本处理
(1)用移液枪移取全血样品0.2mL于1.5mL离心管中、加入1mL 5％HNO3溶液，在2500rpm的转速下涡旋震荡混合15s，在12000rpm的转速下高速离心5min。
(2)用移液枪移取(1)中的上清液0.8mL，加入3.2mL 1％HNO3溶液，在2500rpm的转速下涡旋震荡混合2min，静置1min，得到的溶液即为待测样品。
(六)待测样品的测定
(1)仪器主要工作参数设定
(2)蠕动泵设置
Low High
溶剂清洗/s 0 20
样品清洗/s 15 45
辅助清洗/s 0 0
转速/rpm 20 60
(3)仪器调谐
取(三)中配好的调谐工作液F，对仪器进行调谐。
(4)标准曲线的制备
调谐通过后，采用在线内标进样，样品管和内标管分开，使用电感耦合等离子体质谱分析仪器对步骤(一)中得到的Pb的六种不同浓度标准工作液，Cd的五种不同浓度的标准工作液进行检测，得出以目标物强度与内标物强度的比值作为标准曲线图的纵坐标y，以标准工作液配制后待测目标物的浓度作为标准曲线图的横坐标x，得到标准曲线方程图1。
(5)待测样品的测定
调谐通过后，采用在线内标进样，样品管和内标管分开，使用电感耦合等离子体质谱分析仪器对上述步骤(五)(2)中待测的样品和(二)内标工作液D进行监测，通过各个元素的强度与其内标元素强度的比值对应溶液浓度制作标准曲线，从而计算出待测样本中微量元素的含量。
方法学验证
该方法的线性关系和定量限：按上述(4)中方法得到标准曲线，结果表明铅的线性范围和定量限如下：(1)定量限(LOQ)：0.0625ug/L；(2)线性范围：在0.0625ug/L到2.0ug/L范围内，线性良好，相关系数R>0.99；镉的线性范围和定量限如下：(1)定量限(LOQ)：0.0625ug/L；(2)线性范围：在0.0625ug/L到1.0ug/L范围内，线性良好，相关系数R>0.99。
该方法精密度：取铅、镉储备液配制成高、中、低3个浓度进行精密度实验，按实施例3进行预处理，按实施例3进行测定，重复测定3个批次，铅精密度在高、中、低3个浓度水平内的相对标准偏差为3.10％～4.07％。镉精密度在高、中、低3个浓度水平内的相对标准偏差为3.78％～4.52％。
综合上述验证实验，本方法的精密度等各项技术指标均符合要求，方法检测全血中铅、镉含量，重现性良好，检测精确度高。
本方法使用内标法进行定量，消除了系统误差，使目标化合物的分析更为准确，并且分析时间短、干扰小。

Claims (4)

1.一种测定人全血中铅、镉含量的方法，其特征在于：采用电感耦合等离子体质谱进行检测，包含以下步骤：
(1)标准工作液的配制
用移液枪移取4.5mL浓度为100mg/L的标准原液，加入40.5mL1％HNO3溶液，混匀，配制成10mg/L的Pb储备液A，密封避光保存于4℃；
用移液枪移取4.5mL浓度为100mg/L的标准原液加入40.5mL1％HNO3溶液，混匀，配制成10mg/L的Cd储备液B，密封避光保存于4℃；用1％HNO3溶液将储备液A、B进行稀释，稀释成0.0625-2μg/L浓度的各标曲工作液，4℃保存备用；
(2)内标工作液的配制
用移液枪移取0.1mL浓度为1000mg/L的铋、铟单标液，加入49.8mL1％HNO3溶液，混匀，配制成2mg/L的内标储备液C，密封避光保存于4℃备用，有效期3个月；取1.15mL内标储备液C加入44.85mL1％HNO3，混匀，配制成0.05mg/L的内标工作液D，密封避光保存于4℃备用；
(3)调谐工作液的配制
用移液枪移取浓度为1000mg/L的In、Bi、Ce单标液100μL，浓度为1000mg/L的Co、Mn单标液250μL，浓度为1000mg/L的Be单标液500μL，加入1％HNO3溶液48.70mL，混匀，配制成中间液E，用移液枪移取50μL中间液E，加入1％HNO3溶液49.95mL，混匀，配制成调谐工作液F，密封避光保存于4℃备用；
(4)检测血液准备
取待检测血液至少2mL，盛于采血管中放置4℃冰箱保存，低温运输；
(5)待测样本处理
用移液枪移取全血样品0.2mL于1.5mL离心管中、加入1mL5％HNO3溶液，在2500rpm的转速下涡旋震荡混合15s，在12000rpm的转速下高速离心5min，用移液枪移取上清液0.8mL，加入3.2mL1％HNO3溶液，在2500rpm的转速下涡旋震荡混合2min，静置1min，得到的溶液即为待测样品；
(6)待测样品的测定
取步骤(3)中配好的调谐工作液F，对仪器进行调谐，调谐通过后，采用在线内标进样，样品管和内标管分开，使用电感耦合等离子体质谱分析仪器对上述步骤(5)中的待测样品和内标工作液D进行监测，通过各个元素的强度与其内标元素强度的比值对应溶液浓度制作标准曲线，从而计算出待测样本中微量元素的含量。
2.根据权利要求1所述的测定人全血中铅、镉含量的方法，其特征在于：所述标准工作液浓度为标准工作液中所含有铅、镉的浓度，内标工作液浓度为内标工作液中所含有Bi、In的浓度；步骤(1)中所述储备液A稀释成含有0.0625μg/L、0.125μg/L、0.25μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L浓度的铅溶液的六种不同浓度的标准工作液；储备液B稀释成含有0.0625μg/L、0.125μg/L、0.25μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L浓度的镉溶液的五种不同浓度的标准工作液。
3.根据权利要求1所述的测定人全血中铅、镉含量的方法，其特征在于：所述采血管为含EDTA抗凝剂的紫帽采血管。
4.根据权利要求1所述的测定人全血中铅、镉含量的方法，其特征在于：所述Pb储备液A、Cd储备液B、标曲工作液的有效期为3个月，储存超过3个月需要重新配制。
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