CN108593758A - 一种测定生物组织及体液中痕量金属含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种测定生物组织及体液中痕量金属含量的方法，该方法包括以下步骤：取混匀的生物组织样品或体液，加入20～40体积倍的质量浓度为2％～5％的TritonX‑100溶液，涡旋震荡，60℃～90℃恒温水浴处理15min～50min，离心后冰浴至0℃，取上清液，得到待测样品进样液；然后采用电感耦合等离子体质谱法对待测样品进样液进行分析，得到生物组织或体液样品中痕量金属元素的含量。本发明只要先采用2％～5％的TritonX‑100溶液将组织和体液样品中复杂的干扰基质分离，再采用电感耦合等离子体质谱法即可进行痕量金属检测，较现有技术具有操作简易，结果快速准确的优点。

Description

一种测定生物组织及体液中痕量金属含量的方法

技术领域

本发明涉及借助于测定材料的化学或物理性质来测试或分析材料，具体涉及一种测定生物组织和体液中痕量金属含量的分析方法。

背景技术

人体由多种化学元素组成，自然界中的元素在人体内已经检测出81种，依据对人体的作用分为必需元素、非必需元素和有毒元素三种，依据在人体中的含量则可以分为常量元素和微量元素。由于人体内的元素普遍存在与环境中，所以有毒元素在人体内的含量不总会为零。有毒元素与体内的酶相结合，使原本正常的酶失活，进而影响正常新陈代谢。例如Tl中毒时表现为脱发脱发，头痛，食欲减退等症状；Ni元素致癌；环境含Hg废水和含Cd废水污染导致“水俣病”和“痛疼病”；Pb中毒主要作用于神经系统、消化系统以及造血系统，对孕妇和胎儿影响巨大。随着人体元素与疾病和将康之间关系的研究的深入，对人体金属含量的精确快速检测具有重大意义。

目前，常用元素分析方法有原子吸收光谱法(AAS)、电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)和电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)等。采用AAS测定生物基质中元素时，需要相应的基体改进剂，且样品前处理过程繁琐；ICP-AES测定元素的灵敏度不高，尤其对于汞、镉、硒等元素，检测灵敏度较低。相比之下，ICP-MS具有灵敏度高、测量线性范围宽(数量级为10^-12～10^-6g/mL)、可进行多元素同时分析及样品需用量少等优点，适用于大批量样品的测定，是目前首选的元素分析方法。但采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测量生物组织和体液中金属含量需要对生物样品进行消解、赶酸、定容等前处理达到分离纯化的目的，导致检测周期长，过程繁琐。痕量金属元素需要富集步骤，例如，添加络合剂和表面活性剂，相分离后把金属目标物萃取富集于下层表面活性剂相。然而表面活性剂相粘度大，需使用溶剂稀释后再上机检测，且此种做法容易将基质同时富集，造成检测干扰，影响检测的准确度、精密度和稳定性，通常需要将样品预先消解。其他富集方法如液液萃取和固相萃取，在复杂样品基质净化效果仍不理想。因此，建立一种新的简易、高效的方法，实现生物组织和体液中的痕量金属含量的快速准确分析具有重要意义。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种测定生物组织及体液中痕量金属含量的方法，该方法具有操作简易、无需消解、快速准确的优点。

本发明解决上述技术问题的技术方案是：

一种测定生物组织及体液中痕量金属含量的方法，该方法包括以下步骤：

(1)制备待测样品进样液：取混匀的生物组织或体液样品，加入20～40体积倍质量浓度为2％～5％的TritonX-100溶液，涡旋震荡，60℃～90℃恒温水浴处理15min～50min，离心，冰浴，取上清液，得到待测样品进样液；

其中，所述的生物组织样品是指动物或人体脏器、肌肉等生物组织，体液样品是指动物或人体血液、血浆、尿液、唾液等液体样品；所述的质量浓度为2％～5％的TritonX-100溶液是将Triton X-100和体积浓度为0.1％的硝酸溶液混匀制得；

(2)采用电感耦合等离子体质谱法对所述待测样品进样液进行定量检测，得到生物组织或体液样品中痕量金属元素的含量；

其中，其中，所述的电感耦合等离子体质谱法的工作条件如下：液体样品采用雾化进样方式，载气、辅助气、冷却气流量，等离子射频功率等条件根据仪器的推荐设置以及调谐优化来确定。

本发明所述的测定生物组织及体液中痕量金属含量的方法，其中所述的TritonX-100的最佳质量浓度为3％。

本发明所述的测定生物组织及体液中痕量金属含量的方法，其中所述的痕量金属为锂(Li)、铍(Be)、硼(B)、镁(Mg)、铝(Al)、钙(Ca)、钛(Ti)、钒(V)、铬(Cr)、锰(Mn)、钴(Co)、镍(Ni)、铜(Cu)、锌(Zn)、铷(Rb)、锶(Sr)、钼(Mo)、银(Ag)、镉(Cd)、锡(Sn)、锑(Sb)、钡(Ba)、铊(Tl)、铅(Pb)、钍(Th)和铀(U)26种金属元素中的一种或两种以上。

本发明还提供一种实施本发明所述的测定生物组织及体液中痕量金属含量的方法的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括以下试剂：

试剂A：稀释液，该稀释液是体积浓度为1％的硝酸溶液；

试剂B：内标工作溶液，该溶液由钪(45Sc)、锗(74Ge)、钇(89Y)、铟(115In)和铽(159Tb)五种元素加入所述稀释液配制成浓度为20μg/L制得；

试剂C：质量浓度为2％～5％的TritonX-100溶液，该溶液由Triton X-100和体积浓度为0.1％的硝酸溶液混匀制得；

试剂D：混合元素系列标准储备液，由所述26种元素的标准溶液加入所述稀释液逐级稀释至浓度为1～30000μg/L制得；

试剂E：全血质控品溶液，该溶液由粉末状全血质控品0.25g加入3mL水制得。

本发明摒弃了现有技术添加络合剂的步骤，只要先采用步骤(1)所述试剂和方法即将组织及体液样品中复杂的干扰基质分离，再根据痕量金属元素的特性，选择相宜的电感耦合等离子体质谱条件进行检测得到组织样品中金属含量，较现有技术具有操作简易，测定结果快速准确的显著效果。

附图说明

图1为下述具体实施方式中的制取待测样品进样液的反应过程及机理图解。

图2为不同浓度Triton X-100对血液样品处理后的效果图，图中a为加入质量浓度为0.1％的TritonX-100溶液进行处理后得到的血液样品，图b为加入质量浓度为3％的TritonX-100溶液进行处理后得到的血液样品。

具体实施方式

实施例1(检测血液样品中痕量金属含量)

1.仪器、试剂与样品

1.1.主要仪器：电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)(PerkinElmer NexION 350X)；G13U台式离心机；精密常微量酸度计(SevenCompactTMS210-K)；电子天平(BS423S)；涡旋混合器(Vortex-6)；超纯水处理系统(Milli-Q Element A10System)；XMTD-204恒温水浴锅；塑料容量瓶(50mL)；离心管(2mL、50mL)；量筒(500mL)；移液器。

1.2.主要试剂：ICP-MS调谐溶液(Be、Ce、Fe、In、Li、Mg、Pb、U)1μg/L；内标元素标准液(Sc、Ge、Y、In、Tb)1000mg/L；各元素标准溶液：Li、Be、B、Mg、Al、Ca、Ti、V、Cr、Mn、Co、Ni、Cu、Zn、Rb、Sr、Mo、Ag、Cd、Sn、Sb、Ba、Tl、Pb、Th、U(浓度均为1000mg/L)；Triton X-100(纯度>98％)；硝酸(GR(65％≤纯度≤68％))；超纯水由Milli-Q Element A10System超纯水处理器制备。

1.3.溶液的配制

1.3.1.稀释液：将硝酸5mL，加超纯水定容至500mL，混匀即得1％硝酸稀释液；

1.3.2.ICP-MS调谐溶液：将元素Be、Ce、Fe、In、Li、Mg、Pb、U标准液(浓度均为1000mg/L)用稀释液配制成浓度为10mg/L的ICP-MS调谐储备液，取储备液0.05mL，用稀释液定容至500mL，得到1μg/L的ICP-MS调谐溶液。调节仪器载气流速、射频功率、透镜电压等参数是仪器的灵敏度、氧化物产率、二价离子产率，调谐指标及满足条件如表1所示。

表1调谐指标及满足条件

1.3.3.内标工作溶液：将钪(45Sc)、锗(74Ge)、钇(89Y)、铟(115In)、铽(159Tb)五种元素标准液用稀释液配制成浓度为20μg/L的内标工作溶液；内标校准元素如表2所示。

表2内标校准元素

1.3.4.质量浓度为3％的TritonX-100溶液：将Triton X-100和体积浓度为0.1％的硝酸溶液以3:97的质量比震荡涡旋混匀，得到3％Triton X-100溶液；

1.3.5.混合元素系列标准储备液：将26种元素标准溶液用稀释液逐级稀释得标准储备液，各元素系列标准浓度如表3所示。

标准储备液具体配置方法如下：

1)配制金属元素储备液：

将Li、Be、Co、Ag、Cd、Sb、Ba、Tl、Th、U的单元素标准液等量混合稀释成100mg/L，得到储备混合溶液1，再把储备混合溶液1稀释50倍，得到储备混合溶液2；

将B、Ni、Mo的单元素标准液等量混合稀释成100mg/L，得到储备混合溶液3；

将Al的单元素标准液稀释成100mg/L，得到储备溶液4；

将Mg的单元素标准液稀释成100mg/L，得到储备溶液5；

将Ti、V、Cr、Mn、Sr、Sn、Pb的单元素标准液等量混合稀释成200mg/L，得到储备混合溶液6，再把储备混合溶液6稀释100倍，得到储备混合溶液7；

将Cu、Zn的单元素标准液等量混合稀释成100mg/L，得到储备混合溶液8；

将Rb的单元素标准液稀释成100mg/L，得到储备溶液9；

分别从Li、Be、B、Ti、V、Cr、Mn、Co、Ni、Rb、Sr、Mo、Ag、Cd、Sn、Sb、Ba、Tl、Pb、Th、U的单元素标准液中取1.25、0.1、2.5、1.25、0.25、1、1、0.05、1、0.5、0.5、2.5、0.5、0.25、1.25、0.25、1.25、0.05、1、1、0.25ml，并用稀释液定容至50ml，得到储备混合溶液10，再把储备混合溶液10稀释20倍，得到储备混合溶液11；

其中，单元素标准液起始浓度均为1000mg/L；

2)配制混合元素系列标准储备液：

分别从储备混合液1、3、4、6及Mg、Ca、Cu、Zn、Rb单元素标准液中取1、1、1、1.25、1.5、1.5、0.5、0.5、0.5ml，并用稀释液定容至50mL，配成std6；

分别从储备混合液1、3、4、6及Mg、Ca、Cu、Zn、Rb单元素标准液中取0.5、0.5、0.75、0.75、1、1、0.25、0.25、0.25ml，并用稀释液定容至50mL，配成std5；

分别从储备混合液1、3、4、6、8、9及Mg、Ca单元素标准液中取0.125、0.25、0.6、0.25、0.75、0.75、0.25、0.75ml，并用稀释液定容至50mL，配成std4；

分别从储备混合液2、3、4、6、8、9及Mg、Ca单元素标准液中取2.5、0.1、0.5、0.05、0.4、0.3、0.1、0.5ml，并用稀释液定容至50mL，配成std3；

分别从储备混合液2、3、4、5、7、8、9及Ca单元素标准液中取1.25、0.05、0.4、0.25、1.25、0.2、0.05、0.4ml，并用稀释液定容至50mL，配成std2；

分别从储备混合溶液4、5、8、11及Ca单元素标准液中取0.3、0.1、0.1、1、0.25mL，并用稀释液定容至50mL，配成std1；

表3混合元素系列标准储备液

1.3.6配制3种浓度水平的全血质控品：已知金属元素浓度的全血样品(是有证标准物质)，采用本方法进行处理后进样检测。在多个未知样品分析过程中，每间隔一段时间进行全血质控品的进样分析，考察测定值与标示值的偏差，以判断仪器状态、样本处理是否存在异常，用于质量控制。在每瓶外购的粉末状全血质控品(每瓶0.25g)中加入3mL的超纯水，持续轻微震荡约30min，得到3种浓度水平的全血质控品，具体浓度见表4。本实施例采用表4中L-2的全血质控样验证方法的准确度。

表4三种浓度全血质控品26种元素浓度

注：带a表示此水平无该元素。

1.4样品

血液样品

2.方法

2.1.制取待测血液样品进样液

往2mL的EP管中加入90μL混匀的血液样品，加入1800μL的质量浓度为3％的TritonX-100溶液，涡旋震荡，90℃恒温水浴处理20min，12000r/min离心5min，然后0℃冰浴5min，取上清液，得到待测样品进样液(反应过程及机理图解见图1)；

2.2.制取空白进样液及混合元素系列标准进样液

将超纯水90μL加入1个2mL的EP管中，经过与实施例1的2.1相同方法处理后，取上清液，即空白进样液；将混合元素系列标准储备液(浓度见表3)分别取90μL加入6个2mL的EP管中经过与实施例1的2.1相同方法处理后，取上清液，得到混合元素系列标准进样液。

2.3.采用电感耦合等离子体质谱法对待测样品进样液进行分析，得到血液样品中痕量金属元素的含量；

仪器工作调谐：仪器点火后让仪器预热运行30min，待仪器达到较平稳状态后，再进行调谐和样品测定。先使用ICP-MS调谐溶液对仪器的灵敏度、氧化物、二价离子等进行调谐至达到检测要求，仪器优化后的工作参数如表5所示。

表5 ICP-MS工作参数

由于碰撞反应池对减少干扰、提高检测限有明显帮助，因此，采用氦气的碰撞池模式检测26种金属元素。

3.检测方法验证

3.1线性关系和检出限

定性分析：原子质谱法(Mass Spectrometry,MS)即用电场和磁场将运动的离子(带电荷的原子)按它们的质荷比分离后进行检测的方法。质荷比即带电离子的质量数(m)与所带电荷(z)的比值，用m/z表示。电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析中，每种元素均带一个正电荷(z＝+1)，质荷比的值与元素相应同位素的质量数相等。例如自然界中铅以204Pb、206Pb、207Pb、208Pb四种同位素的存在，在ICP-MS以一价正离子存在，所以对应的质量数和质荷比均分别为204、206、207、208。由于每种元素各同位素的天然丰度是固定的(即同位素之间比例是固定的)，可以只监控其中一种同位素的质荷比来对元素总含量进行定性定量分析。如果我们只监控208Pb来检测Pb的含量，选择质荷比208，检测该通道的信号强弱。只要样品在208质荷比通道检出的信号扣除空白值后，计算所得的浓度(通过线性回归方程计算，见“定量分析”)高于仪器的检出限，可认为样品中含有铅，以此作为定性分析。本方各元素所采用的同位素质荷比见表6。

定量分析：采用在线内标法进行定量。引入样品的样品管和引入内标物的内标管通过三通接头连接，剩下一个通道连接仪器。内标物是一个已知准确浓度的、与待测元素不同的元素标准溶液。通过样品管进入的待测样品或标准品与通过内标管进入的内标物在三通接头处混合进入仪器被检测，同时得到待测元素的信号和内标元素的信号，两者信号的比值作为定量的信号用于计算待测样品中待测组分的含量。内标元素溶液全程一直从内标管输入，样品管的进样顺序如下：空白进样液(制取方法见实施例1的2.2)，然后依次从低浓度到高浓度进混合元素系列标准进样液(制取方法见实施例1的2.2)，以获得校准曲线数据；第二次空白进样液(制取方法见实施例1的2.2)，以获得空白值数据；待测血液样品进样液，以获得待测样品数据。进样液包括待测血液样品进样液、加标血液样品进样液、全血质控样品进样液。

本方法以表2中的待测元素与内标元素的信号响应值比(y)对混合元素系列标准储备液浓度(x，μg/L)进行线性回归，得到斜率b、各元素的线性回归方程及相关系数(r)值。检出限测定方法为在同样的仪器条件下，对空白溶液连续进行11次信号响应值的测量，求出其标准偏差(Sb)，方法的检出限LOD＝3Sb/b；方法的定量限LOQ＝10Sb/b。检测结果显示，26种元素线性关系良好(相关系数r>0.9990)，方法的检出限为0.076～1.2×10³μg/L，线性方程、定量限和曲线范围如表6所示。

表6方法的检出限、定量限、回归方程、相关系数及曲线范围

3.2加标回收实验

准确移取6份血液，按2.1处理后，测定各元素本底值。

为了验证方法的准确度，根据2015年药典中生物样品定量分析方法验证指导原则，采用低、中、高三个水平浓度进行加标回收。每个浓度用6个样品。浓度水平覆盖标准曲线范围：低浓度设置为不高于定量下限浓度的3倍，中浓度设置为标准曲线范围中部附近的质控样品，高浓度设置为标准曲线范围上限约75％处。

取同一来源的血液24份，其中低、中、高三个浓度点的加标血液及不加标的血液各6份，同时按照实施例1中2.1所述的方法对样品进行处理后得到进样液，测定进样液中痕量金属浓度，计算加标回收率即准确度与精密度。按照此方法，连续三日进行此加标回收实验测定，计算连续三日的检测结果日间精密度。

表7中测得值的计算方法为：测得值＝上机检测获得的浓度×21。(因为原本是90μL的血液，往里加入1800μL曲拉通后体积就变为了1890μL，1890μL除以90μL即为21，也就是说血液里的各种元素的浓度相当于被稀释了21倍。)

加标回收率＝(测得值/添加值)×100％。

日内精密度即为当天实验的6个样品测得值测得的RSD，日间精密度为连续三日共18个加标样品的测得值得RSD。结果见表7，准确度为83％-118％，日内精密度为0.7％-9.6％，日间精密度为0.8％-9.8％，方法符合检测要求。

表7检测血液中26种元素血液精密度和准确度

3.3全血质控样品分析

对质控样品Seronorm^TM Trace Elements Whole Blood L-2平行样品的结果进行分析，计算三个平行样品的相对标准偏差RSD，得到方法的精密度；对平均值与标准物质给出的值进行比较，得出方法的准确度(计算方法同加标实验)。

如表8所示，质控样品Seronorm^TM Trace Elements Whole Blood L-2平行样品检测的准确度为81％-117％，精密度为0.3％-9.8％，结果显示所选用方法对质控样品Seronorm^TM Trace Elements whole Blood L-2中26种元素的检测结果均在标准值参考范围内，方法可行。

表8血液标准物质的检测结果以及精密度和准确度

注：带a的元素标准值＜LOQ，故无法得到测定值

实施例2(检测牛肝中痕量金属含量)

1.仪器、试剂与样品

1.1.主要仪器：同实施例1。

1.2.主要试剂：同实施例1。

1.3.溶液的配制

1.3.1.稀释液：将硝酸5mL，加超纯水定容至500mL，混匀即得1％硝酸稀释液；

1.3.2.内标工作溶液：将内标元素钪(45Sc)、锗(74Ge)、钇(89Y)、铟(115In)、铽(159Tb)五种元素标准液用稀释液配制成浓度为20μg/L的内标工作溶液；

1.3.3.质量浓度为3％的TritonX-100溶液：将Triton X-100和体积浓度为0.1％的硝酸溶液以3:97的质量比震荡涡旋混匀，得到3％的Triton X-100溶液；

1.3.4.混合元素系列标准储备液：将8种元素标准溶液用稀释液逐级稀释得标准储备液，各元素系列标准浓度如表9所示。

标准储备液具体配置方法如下：

1)配制金属元素储备液：

将Li、Sb、Ba、Tl的单元素标准液等量混合稀释成100mg/L，得到储备混合溶液1，再把储备混合溶液1稀释50倍，得到储备混合溶液2；

将B、Mo的单元素标准液等量混合稀释成100mg/L，得到储备混合溶液3；

将V、Sr的单元素标准液等量混合稀释成200mg/L，得到储备混合溶液4，再把储备混合溶液4稀释100倍，得到储备混合溶液5；

分别从Li、B、V、Sr、Mo、Sb、Ba、Tl的单元素标准液中取1.25、2.5、0.25、0.5、2.5、0.25、1.25、0.05ml，并用稀释液定容至50ml，得到储备混合溶液6，再把储备混合溶液6稀释20倍，得到储备混合溶液7；

其中，单元素标准液起始浓度均为1000mg/L；

2)配制混合元素系列标准储备液：

分别从储备混合液1、3、4中取1、1、1.25ml，并用稀释液定容至50ml，配成std4；

分别从储备混合液1、3、4中取0.5、0.5、0.55ml，并用稀释液定容至50ml，配成std5；

分别从储备混合液1、3、4中取0.125、0.25、0.25ml，并用稀释液定容至50ml，配成std4；

分别从储备混合液2、3、4中取2.5、0.1、0.05ml，并用稀释液定容至50ml，配成std3；

分别从储备混合液2、3、5中取1.25、0.05、1.25ml，并用稀释液定容至50ml，配成std2；

从储备混合液7中取1ml，并用稀释液定容至50ml，配成std1；

表9 8种金属元素系列标准储备液

1.4.样品

组织样品：将新鲜的牛肝用去离子水洗去其表面杂质，然后用基本型分散机将牛肝组织充分匀浆。将牛肝匀浆转移至50mL的离心管，并置于4℃保存。

2.方法

2.1.制取待测组织样品进样液

采用重量法，往2mL的EP管中加入90mg上述牛肝匀浆，加入1800μL的质量浓度为3％的Triton X-100溶液，涡旋振荡处理，使用水浴锅90℃恒温水浴20min，12000r/min离心5min，然后0℃冰浴5min，得到上清液为待测组织样品进样液(反应过程及机理图解见图1)。

2.2.制取空白进样液及混合元素系列标准进样液

同实施例1的2.2诉述制取。

2.3.采用电感耦合等离子体质谱法对待测样品进样液进行分析，得到牛肝中痕量金属元素的含量；

仪器工作调谐：同实施例1的2.3所述调谐，仪器优化后的工作参数如表10所示。

表10 ICP-MS工作参数

由于碰撞反应池对减少干扰、提高检测限有明显帮助，因此，采用氦气的碰撞池模式检测8种金属元素。

3.检测方法验证

3.1线性关系和检出限

定性分析与定量分析同实施例1的3.1诉述进行。

检出限测定方法为在同样的仪器条件下，对空白溶液连续进行11次信号响应值的测量，求出其标准偏差(Sb)，方法的检出限LOD＝3Sb/b；方法的定量限LOQ＝10Sb/b。检测结果显示，8种元素线性关系良好(相关系数r>0.9949),方法的检出限为7.5×10^-2～9.7×10⁰μg/L，线性方程、定量限和曲线范围如表11所示。

表11方法的检出限、定量限、回归方程、相关系数及曲线范围

3.2加标实验

准确称量6份牛肝样品，处理后，测定各元素本底值。

为了验证方法的准确度，根据2015年药典中生物样品定量分析方法验证指导原则，采用低、中、高三个水平浓度进行加标回收。每个浓度用6个样品。浓度水平覆盖标准曲线范围：低浓度设置为不高于定量下限浓度的3倍，中浓度设置为标准曲线范围中部附近的质控样品，高浓度设置为标准曲线范围上限约75％处。

称量24份匀质好的牛肝样品，每份为90mg。其中低、中、高三种浓度点的加标牛肝样品及不加标的空白牛肝样品各6份，同时按照实施例2中2.1所述的方法对样品进行处理得到进样液，测定进样液中痕量金属的浓度，计算加标回收率，即准确度与精密度。按照此方法，连续三日进行此加标回收实验测定，计算连续三日的检测结果日间精密度。

表9中测得值的计算方法为：

测得值＝(加标样品上机检测获得的浓度×1830μL×10^-6)/(90mg×10^-3)。

加标回收率＝(测得值/添加值)×100％。

日内精密度即为当天实验的6个样品测得值测得的RSD，日间精密度为连续三日共18个加标样品的测得值得RSD。结果见表12，准确度为78.2％-111.0％，日内精密度为1.2％-15.1％，日间精密度为2.4％-13.6％，方法符合检测要求。

表12检测牛肝样品8种元素的精密度和准确度

实施例3(不同浓度Triton X-100对血液样品处理结果的影响)

1.配制质量浓度为0.1％的Triton X-100溶液：将Triton X-100和体积浓度为0.1％的硝酸溶液以1:999的质量比例混合，震荡涡旋混匀，得到质量浓度为0.1％的TritonX-100溶液；

2.取两个2mL的EP管，先分别加入90μL混匀的血液样品，再分别加入1800μL质量浓度为3％的Triton X-100溶液和质量浓度为0.1％的Triton X-100溶液，两管分别进行涡旋振荡处理；加入质量浓度为3％的Triton X-100溶液的EP管再使用水浴锅90℃恒温水浴20min，12000r/min离心5min，然后冰浴5min至0℃；观察两EP管中血液样品呈现的现象。

3.结果显示，加入质量浓度为0.1％的Triton X-100溶液经处理后，血液样品浑浊，无分层现象，如图2a所示，说明该方法不能对血液进行净化；加入质量浓度为3％的Triton X-100溶液，涡旋振荡处理后，再经过水浴、离心和冰浴处理的血液样品，出现明显的分层现象，如图2b所示，上清液呈棕色透明状，说明本发明所述的方法能实现基质的沉淀分离，能够净化血液样品。

实施例4(试剂盒产品例)

本实施例的试剂盒包括以下试剂：

试剂A：稀释液，该稀释液取硝酸5mL，加超纯水定容至500mL；

试剂B：内标工作溶液，将钪(45Sc)、锗(74Ge)、钇(89Y)、铟(115In)、铽(159Tb)五种内标元素标准液用稀释液配制成浓度为20μg/L的内标工作溶液100g；

试剂C：质量浓度为3％的TritonX-100溶液，将3g Triton X-100和97g 0.1％硝酸溶液以3:97的质量比例混合，震荡涡旋混匀，得到质量浓度为3％的Triton X-100溶液100g；

试剂D：标准储备液，将26种元素的标准溶液加入稀释液逐级稀释至浓度为1～30000μg/L制得，由下述方法步骤制备得到；

1)配制金属元素储备液：

将Li、Be、Co、Ag、Cd、Sb、Ba、Tl、Th、U的单元素标准液等量混合稀释成100mg/L，得到储备混合溶液1，再把储备混合溶液1稀释50倍，得到储备混合溶液2；

将B、Ni、Mo的单元素标准液等量混合稀释成100mg/L，得到储备混合溶液3；

将Al的单元素标准液稀释成100mg/L，得到储备溶液4；

将Mg的单元素标准液稀释成100mg/L，得到储备溶液5；

将Ti、V、Cr、Mn、Sr、Sn、Pb的单元素标准液等量混合稀释成200mg/L，得到储备混合溶液6，再把储备混合溶液6稀释100倍，得到储备混合溶液7；

将Cu、Zn的单元素标准液等量混合稀释成100mg/L，得到储备混合溶液8；

将Rb的单元素标准液稀释成100mg/L，得到储备溶液9；

分别从Li、Be、B、Ti、V、Cr、Mn、Co、Ni、Rb、Sr、Mo、Ag、Cd、Sn、Sb、Ba、Tl、Pb、Th、U的单元素标准液中取1.25、0.1、2.5、1.25、0.25、1、1、0.05、1、0.5、0.5、2.5、0.5、0.25、1.25、0.25、1.25、0.05、1、1、0.25ml，并用稀释液定容至50ml，得到储备混合溶液10，再把储备混合溶液10稀释20倍，得到储备混合溶液11；

其中，单元素标准液起始浓度均为1000mg/L；

2)配制混合元素系列标准储备液：

分别从储备混合液1、3、4、6及Mg、Ca、Cu、Zn、Rb单元素标准液中取1、1、1、1.25、1.5、1.5、0.5、0.5、0.5ml，并用稀释液定容至50ml，配成std6；

分别从储备混合液1、3、4、6及Mg、Ca、Cu、Zn、Rb单元素标准液中取0.5、0.5、0.75、0.75、1、1、0.25、0.25、0.25ml，并用稀释液定容至50ml，配成std5；

分别从储备混合液1、3、4、6、8、9及Mg、Ca单元素标准液中取0.125、0.25、0.6、0.25、0.75、0.75、0.25、0.75ml，并用稀释液定容至50ml，配成std4；

分别从储备混合液2、3、4、6、8、9及Mg、Ca单元素标准液中取2.5、0.1、0.5、0.05、0.4、0.3、0.1、0.5ml，并用稀释液定容至50ml，配成std3；

分别从储备混合液2、3、4、5、7、8、9及Ca单元素标准液中取1.25、0.05、0.4、0.25、1.25、0.2、0.05、0.4ml，并用稀释液定容至50ml，配成std2；

分别从储备混合溶液4、5、8、11及Ca单元素标准液中取0.3、0.1、0.1、1、0.25ml，并用稀释液定容至50ml，配成std1；

各元素系列标准储备液浓度如表10所示；

表10 26种元素系列标准储备液浓度

试剂E：全血质控品溶液，该溶液由粉末状全血质控品0.25g加入3mL水制得。将试剂A、B、C、D和E用灭菌包装成试剂盒，并于低温保存。

本例所述试剂盒的使用方法可参照上述实施例1实施。

Claims (3)

1.一种测定生物组织及体液中痕量金属含量的方法，该方法由以下步骤组成：

(1)制备待测样品进样液：取混匀的生物组织或体液样品，加入20～40体积倍质量浓度为2％～5％的TritonX-100溶液，涡旋震荡，60℃～90℃恒温水浴处理15min～50min，离心，冰浴，取上清液，得到待测样品进样液；

其中，所述的生物组织样品是指动物或人体脏器、肌肉等生物组织，体液样品是指动物或人体血液、血浆、尿液、唾液等液体样品；所述的质量浓度为2％～5％的TritonX-100溶液是将Triton X-100和体积浓度为0.1％的硝酸溶液混匀制得；

(2)采用电感耦合等离子体质谱法对所述待测样品进样液进行定量检测，得到生物组织或体液样品中痕量金属元素的含量；

其中，所述的电感耦合等离子体质谱法的工作条件如下：液体样品采用雾化进样方式，载气、辅助气、冷却气流量，等离子射频功率等条件根据仪器的推荐设置以及调谐优化来确定。

2.根据权利要求1所述的一种测定生物组织及体液中痕量金属含量的方法，其特征在于，所述的痕量金属为锂(Li)、铍(Be)、硼(B)、镁(Mg)、铝(Al)、钙(Ca)、钛(Ti)、钒(V)、铬(Cr)、锰(Mn)、钴(Co)、镍(Ni)、铜(Cu)、锌(Zn)、铷(Rb)、锶(Sr)、钼(Mo)、银(Ag)、镉(Cd)、锡(Sn)、锑(Sb)、钡(Ba)、铊(Tl)、铅(Pb)、钍(Th)和铀(U)26种金属元素中的一种或两种以上。

3.一种实施权利要求1或2所述的测定生物组织及体液中痕量金属含量的方法的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括以下试剂：

试剂A：稀释液，该稀释液是体积浓度为1％的硝酸溶液；

试剂B：内标工作溶液，该溶液由钪(45Sc)、锗(74Ge)、钇(89Y)、铟(115In)和铽(159Tb)五种元素加入所述稀释液配制成浓度为20μg/L制得；

试剂C：质量浓度为2％～5％的TritonX-100溶液，该溶液由Triton X-100和体积浓度为0.1％的硝酸溶液混匀制得；

试剂D：混合元素系列标准储备液，由所述26种元素的标准溶液加入所述稀释液逐级稀释至浓度为1～30000μg/L制得；

试剂E：全血质控品溶液，该溶液由粉末状全血质控品0.25g加入3mL水制得。