CN109422780B - 一种中药组合物中十八种成分的分离方法 - Google Patents

一种中药组合物中十八种成分的分离方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109422780B
CN109422780B CN201710789895.5A CN201710789895A CN109422780B CN 109422780 B CN109422780 B CN 109422780B CN 201710789895 A CN201710789895 A CN 201710789895A CN 109422780 B CN109422780 B CN 109422780B
Authority
CN
China
Prior art keywords
parts
ods
compound
methanol
recovering
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201710789895.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109422780A (zh
Inventor
沈硕
张创峰
毕丹
魏峰
孙云波
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Yiling Pharmaceutical Co ltd
Original Assignee
Beijing Yiling Pharmaceutical Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Yiling Pharmaceutical Co ltd filed Critical Beijing Yiling Pharmaceutical Co ltd
Priority to CN201710789895.5A priority Critical patent/CN109422780B/zh
Priority to US16/643,632 priority patent/US11458417B2/en
Priority to SG11202001801PA priority patent/SG11202001801PA/en
Priority to KR1020207009024A priority patent/KR102404533B1/ko
Priority to EP18853153.7A priority patent/EP3680248A4/en
Priority to PCT/CN2018/104148 priority patent/WO2019047848A1/zh
Publication of CN109422780A publication Critical patent/CN109422780A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109422780B publication Critical patent/CN109422780B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/06—Separation; Purification
    • C07H1/08—Separation; Purification from natural products
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/265—Adsorption chromatography
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/63—Oleaceae (Olive family), e.g. jasmine, lilac or ash tree
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/56—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds from heterocyclic compounds
    • C07C45/562—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds from heterocyclic compounds with nitrogen as the only hetero atom
    • C07C45/565—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds from heterocyclic compounds with nitrogen as the only hetero atom by reaction with hexamethylene-tetramine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/78—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/78—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C45/79—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by solid-liquid treatment; by chemisorption
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C67/56—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by solid-liquid treatment; by chemisorption
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/66—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
    • C07C69/73—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids
    • C07C69/738—Esters of keto-carboxylic acids or aldehydo-carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/18—Acyclic radicals, substituted by carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/26—Acyclic or carbocyclic radicals, substituted by hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
    • C07H17/06—Benzopyran radicals
    • C07H17/065—Benzo[b]pyrans
    • C07H17/07—Benzo[b]pyran-4-ones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/55—Liquid-liquid separation; Phase separation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/12—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring
    • C07C2601/16—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring the ring being unsaturated

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

本发明提供一种中药组合物的化学成分的分离方法，在其总浸膏大孔吸附树脂柱的30%乙醇部位分离并鉴定了18个化合物，分别为连翘酯苷A(1)、连翘酯苷I(2)、连翘酯苷H(3)、Lugrandoside(4)、Isolugrandoside(5)、Ferruginoside A(6)、Lianqiaoxingan C(7)、Calceolarioside C(8)、连翘酯苷E(9)、Ferruginoside B(10)、D‑苦杏仁苷(11)、L‑苦杏仁苷(12)、Sambunigrin(13)、Cornoside(14)、4‑Hydroxy‑4‑methylenecarbomethoxy‑cyclohexa‑2,5‑dienone(15)、Liriodendrin(16)、甘草素‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷(17)、3,4‑二羟基苯甲醛(18)。其中，化合物2‑8,10,13‑18为首次从本发明总浸膏中分离得到，化合物4‑6,10,15,16未见从复方单味药中分离的报道，并首次对化合物8在DMSO‑d6溶剂中的核磁数据进行归属。

Description

一种中药组合物中十八种成分的分离方法
技术领域
本发明属于中药的质量分析控制领域，具体的涉及到一种中药组合物中多种成分的分离方法。
背景技术
中药复方是中医用药的主要形式，在经过几千年的临床使用中，复方可以获得比单味药更强的治疗效果，这已经充分证明了复方构成的科学性。
本发明药物组合物由连翘、金银花和麻黄等13味中药组成，具有清瘟解毒、宣肺泄热之功效，用于治疗流行性感冒。
临床研究证实本发明药物组合物治疗流感、急性上呼吸道感染疗效确切、效果显著。
为阐明复方的药理作用机制以及复方药物配伍规律的科学内含，对其物质基础进行系统的研究十分必要。
基于此，对于本发明药物组合物的化学成分进行了深入研究，在其总浸膏大孔吸附树脂柱的30 %乙醇部位分离并鉴定了18个化合物，分别为连翘酯苷A (1)、连翘酯苷I(2)、连翘酯苷H (3)、Lugrandoside (4)、Isolugrandoside (5)、Ferruginoside A (6)、Lianqiaoxingan C (7)、Calceolarioside C (8)、连翘酯苷E (9)、Ferruginoside B(10)、D-苦杏仁苷 (11)、L-苦杏仁苷 (12)、Sambunigrin (13)、Cornoside (14)、4-Hydroxy-4-methylenecarbomethoxy-cyclohexa-2,5-dienone (15)、Liriodendrin (16)、甘草素-7-O-β-D-葡萄糖苷 (17)、3,4-二羟基苯甲醛 (18)。
其中，化合物2-8, 10, 13-18为首次从本发明总浸膏中分离得到，化合物4-6,10, 15, 16未见从复方单味药中分离的报道，并首次对化合物8在DMSO-d 6 溶剂中的核磁数据进行归属。
发明内容
本发明提供一种中药组合物的18中化合物的分离方法。
该中药组合物由如下重量份的原料药制成：连翘200-300 、麻黄60-100 、大黄40-60 、鱼腥草200-300、金银花200-300 、板蓝根200-300、广藿香60-100、绵马贯众200-300、红景天60-100、薄荷脑5-9、苦杏仁60-100 、甘草60-100 、石膏200-300
本发明所述分离方法包括以下步骤：
（1）该中药组合物总浸膏经AB-8型号大孔树脂分离，依次用水、10%乙醇、30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，回收溶剂，得30%乙醇浸膏；
（2）将步骤（1）得到的30%乙醇浸膏，加入反相硅胶ODS-AQ-HG（S-50μm）拌样，待拌样ODS自然晾干后，将拌样ODS加入到上样柱内，上中压制备液相进行分离（分离柱填料为ODS-AQ-HG（S-50μm）），依次用10%甲醇，根据洗脱顺序得到5个流份，分别编号为10%-1、10%-2、10%-3、10%-4、10%-5；20%甲醇洗脱，根据洗脱顺序得到6个流份，分别编号为20%-1、20%-2、20%-3、20%-4、20%-5和20%-6，分别收集洗脱液，回收溶剂，得编号为10%-1、10%-2、10%-3、10%-4、10%-5洗脱干膏和20%-1、20%-2、20%-3、20%-4、20%-5和20%-6洗脱干膏；
（3）将步骤（2）得到的编号为10%-1洗脱干膏，用30%甲醇溶解，溶解液过0.45μm微孔滤膜，采用高效液相色谱法进行初步分离，流动相为甲醇-水 22:78，流速为1ml/min，检测波长210nm，分别收集保留时间为3-9min、9-11min、19-22min、22-26min、26-30min、37-41min、和44-48min的色谱峰，并减压回收溶剂，并分别进行以下分离：
3-9min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水, 5:95，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间25-27min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物14：Cornoside；
9-11min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水, 12:88，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间32-35min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物10：Ferruginoside B；
19-22min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水, 18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间31-35min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物9：连翘酯苷E；
22-26min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水, 16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间32-37min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物18：3,4-二羟基苯甲醛；
26-30min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水, 18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间38-42min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物11：D-苦杏仁苷 和化合物12：L-苦杏仁苷的混合物；
37-41min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水, 18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间52-56min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物13：Sambunigrin；
44-48min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水, 22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间41-44min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物15：4-Hydroxy-4-methylenecarbomethoxy-cyclohexa-2,5-dienone；
（4）将步骤（2）得到的编号为20%-2洗脱干膏，用30%甲醇溶解，并经过0.45μm微孔滤膜过滤，高效液相色谱法进行初步分离，流动相：甲醇-水, 22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10μm，分别收集保留时间为14-17min、17-19min、22-24min、29-34min和35-40min的色谱峰，并减压回收溶剂，并分别进行以下分离：
14-17min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈-水, 15:85，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间38-40min和45-47min的色谱峰，收集的保留时间为45-47min色谱峰减压回收溶剂后，得到化合物化合物7 ：Lianqiaoxingan C；保留时间为38-40min流份再经高效液相色谱法纯化，流动相：乙腈-水, 13:87，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，收集此条件下52-56min色谱峰，减压回收溶剂，得到化合物6 ：Ferruginoside A；
17-19min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈-水, 15:85，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间28-30min和37-44min的色谱峰，减压回收溶剂后，分别得到化合物16：Liriodendrin，和化合物2：连翘酯苷I；
22-24min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈-水, 17:83，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间22-25min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物8： Calceolarioside C；
29-34min色谱峰，在减压回收溶剂后，在放置过程中有白色固体析出，5000rpm离心得到化合物17：甘草素-7-O-β-D-葡萄糖苷；上清液经高效液相进一步纯化，流动相：乙腈-水, 16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间40-45min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物3：连翘酯苷H；
35-40min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈-水, 16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间34-45min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物1：连翘酯苷A；
（5）将步骤（2）得到的编号为20%-4和20%-5流份合并，采用30%甲醇溶解，并经过0.45μm微孔滤膜过滤，高效液相色谱法进行初步分离，流动相：乙腈-水, 15:85，流速：15ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，分别收集保留时间为15-17 min和35-40 min的色谱峰，并减压回收溶剂，得到15-17 min的色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈-水, 15:85，流速：12ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间15-16min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物5：Isolugrandoside；得到的35-40min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水, 25:75，流速：12ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间26-29min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物4：Lugrandoside；
优选的十八种成分的分离方法，为所述步骤（1）中，洗脱剂水、10%乙醇、30%乙醇的用量为1g中药组合物总浸膏用水40ml、10%乙醇17.6ml、30%乙醇45ml。
优选的十八种成分的分离方法，为所述步骤（2）中反相硅胶ODS-AQ-HG的用量为：1g步骤（1）所得30%乙醇浸膏用8g反相硅胶ODS-AQ-HG，其中3g用于与1g步骤（1）所得30%乙醇浸膏拌样，5g用做中压分离柱的填料。
优选的十八种成分的分离方法，为所述步骤（2）中依次用10%甲醇，根据洗脱顺序得到5个流份，每个流份的洗脱剂用量为：1g步骤（1）所得30%乙醇浸膏用66.7ml的10%甲醇；20%甲醇洗脱，根据洗脱顺序得到6个流份，每个流份的洗脱剂用量为：1g步骤（1）所得30%乙醇浸膏用44.4-66.7ml的10%甲醇。
优选的，中药组合物是由如下重量份的原料药制成：
连翘 200 、金银花 300 、板蓝根 200、大黄 40 、广藿香 60、绵马贯众 300 、红景天 100 、薄荷脑 9 、麻黄 60 、苦杏仁 100、鱼腥草 200 、甘草 100 、石膏200。
优选的，中药组合物是由如下重量份的原料药制成：
连翘 300 、金银花 200 、板蓝根 300 、大黄 60、广藿香100、绵马贯众 200、红景天 60、薄荷脑 5 、麻黄100 、苦杏仁 60 、鱼腥草 300、甘草 60 、石膏 300。
优选的，中药组合物是由如下重量份的原料药制成：
连翘 278 、金银花 294 、板蓝根 285、大黄 55、广藿香 95、绵马贯众 290 、红景天 87 、薄荷脑 8.5、麻黄 88 、苦杏仁 80、鱼腥草 284、甘草 95 、石膏277。
本发明所述中药组合物总浸膏由以下步骤制成：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间8小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用12倍量70%的乙醇提取3次，每次2.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加12倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加入乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得总浸膏，备用。
具体实施方式
实施例1
按比例称取：连翘 20kg、金银花 30kg、板蓝根 20kg、大黄 4kg、广藿香 6kg、绵马贯众 30kg、红景天 10kg、薄荷脑 0.9kg、麻黄 6kg、苦杏仁 10kg、鱼腥草 20kg、甘草10kg、石膏20kg，按照以下工艺提取：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间8小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用12倍量70%的乙醇提取3次，每次2.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加12倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.15的清膏，加入乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.20的清膏，干燥，得总浸膏，备用。
分离方法步骤如下：
1. 仪器和材料
Bruker AVIIIHD 600 核磁共振波谱仪（瑞士 Bruker 公司）；Agilent NMR VNMRS600 核磁共振波谱仪（美国Agilent公司）；Synapt G2-S Mass 质谱仪（美国 Waters公司）；Combi Flash Rf中低压制备液相色谱仪（美国Teledvne ISCO公司）；Waters 2489-1525 制备液相色谱仪（美国Waters公司）；NU3000型制备液相色谱仪（江苏汉邦科技有限公司）；Milli-Q 纯水净化器(美国 Millipore 公司)；AL204分析电子天平（美国Mettler Toledo公司）；AB135-S分析电子天平（美国Mettler Toledo公司）；TGL-16G离心机（上海安亭科学仪器厂）；YMC ODS-A-HG 50 μm反相硅胶（日本YMC公司）；YMC-Pack R&D ODS-A（250×20mm，S-10 μm，日本YMC公司）；本发明药物组合物总浸膏（石家庄以岭药业股份有限公司，批号：B1509001）；色谱纯乙腈、甲醇（上海阿达玛斯试剂公司）；分析纯试剂（北京化工厂）。
提取和分离
本发明药物组合物总浸膏5 kg（批号：B1509001），经AB-8大孔树脂吸附，顺次采用200升水、88升10%乙醇、225升30%乙醇、250升50%乙醇、150升70%乙醇和162升95%乙醇洗脱，回收溶剂得到相应浸膏，其中30%乙醇洗脱部分浸膏625.0g。
取30 %乙醇洗脱部分浸膏90.0 g，加入反相硅胶ODS-AQ-HG （S-50 μm）270.0g拌样，待拌样ODS自然晾干后，将拌样ODS加入上样柱内，上中压制备液相进行分离（分离柱规格：49×460mm，填料：450g ODS-AQ-HG （S-50 μm）），分别用30升10 %甲醇、32升20 %甲醇、24升30 %甲醇、22升35%甲醇、18升40 %甲醇、18升45 %甲醇、12升50 %甲醇、10升70 %甲醇、6升无水甲醇洗脱，各洗脱部分采用减压方式回收溶剂；其中10%洗脱部分根据洗脱顺序得到5个流份（每个流份的溶剂用量为6升），分别编号为10%-1 4.5 g、10%-2 4.0 g、10%-33.5 g、10%-4 2.0 g和10%-5 0.9 g；其中20%洗脱部分根据洗脱顺序得到6个流份（每个流份的溶剂用量为4-6升），分别编号为20%-1 2.4 g、20%-2 8.6 g、20%-3 3.8 g、20%-4 3.1g、20%-5 4.0 g和20%-6 1.7 g。
取流份10%-1 2.5 g，采用30%甲醇溶解，并经过0.45μm微孔滤膜过滤，高效液相色谱法进行初步分离（流动相：甲醇-水, 22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A（250×20 mm，S-10 μm）），分别收集保留时间为3-9min、9-11min、、19-22min、22-26min、26-30min、37-41min、和44-48min的色谱峰，并减压回收溶剂；上述流份经过进一步的高效液相色谱法纯化得到多个单体化合物，具体分离条件如下：
化合物14的分离：3-9min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：甲醇-水, 5:95，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A（250×20 mm，S-10 μm）），在此条件下收集保留时间25-27min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物14 (22mg)。
化合物10的分离：9-11min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：甲醇-水, 12:88，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A（250×20 mm，S-10 μm）），在此条件下收集保留时间32-35min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物10 (15mg)。
化合物9的分离：19-22min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：甲醇-水, 18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A（250×20 mm，S-10 μm）），在此条件下收集保留时间31-35min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物9 (79mg)。
化合物18的分离：22-26min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：甲醇-水, 16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A（250×20 mm，S-10 μm）），在此条件下收集保留时间32-37min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物18 (8mg)。
化合物11和化合物12的分离：26-30min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：甲醇-水, 18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A（250×20 mm，S-10 μm）），在此条件下收集保留时间38-42min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物11和12混合物 (159 mg)。
化合物13的分离：37-41min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：甲醇-水, 18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A（250×20 mm，S-10 μm）），在此条件下收集保留时间52-56min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物13 (8mg)。
化合物15的分离：44-48min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：甲醇-水, 22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A（250×20 mm，S-10 μm）），在此条件下收集保留时间41-44min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物15 (10mg)。
取流份20%-2 2.9 g，采用30%甲醇溶解，并经过0.45μm微孔滤膜过滤，高效液相色谱法进行初步分离（流动相：甲醇-水, 22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A（250×20 mm，S-10 μm）），分别收集保留时间为14-17min、17-19min、22-24min、29-34min和35-40min的色谱峰，并减压回收溶剂；上述各流份经过进一步的高效液相色谱法纯化得到多个单体化合物，具体分离条件如下：
化合物6和化合物7的分离：14-17min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：乙腈-水, 15:85，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A（250×20 mm，S-10 μm）），在此条件下收集保留时间38-40min和45-47min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物化合物38-40min流份和7(4 mg)，38-40min流份再经高效液相色谱法纯化（流动相：乙腈-水, 13:87，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A（250×20 mm，S-10 μm）），收集此条件下52-56min色谱峰，减压回收溶剂，得到化合物6(4 mg)。
化合物16和化合物2的分离：17-19min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：乙腈-水, 15:85，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A（250×20 mm，S-10 μm）），在此条件下收集保留时间28-30min和37-44min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物化合物16(3 mg)和2(117 mg)。
化合物8的分离：22-24min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：乙腈-水, 17:83，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A（250×20 mm，S-10 μm）），在此条件下收集保留时间22-25min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物化合物8(36 mg)。
化合物17和化合物3的分离：29-34min色谱峰，在减压回收溶剂后，在放置过程中有白色固体析出，5000rpm离心得到化合物17（10mg），上清液经高效液相进一步纯化（流动相：乙腈-水, 16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A（250×20 mm，S-10 μm）），在此条件下收集保留时间40-45min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物3(19 mg)。
化合物1的分离：35-40min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：乙腈-水, 16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A（250×20 mm，S-10 μm）），在此条件下收集保留时间34-45min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物化合物1(161 mg)。
化合物4和化合物5的分离：将20%-4和20%-5流份合并，取混合流份2.0g，采用30%甲醇溶解，并经过0.45μm微孔滤膜过滤，高效液相色谱法进行初步分离（流动相：乙腈-水,15:85，流速：15ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A（250×20 mm，S-10 μm）），分别收集保留时间为13-15 min和15-17 min的色谱峰，并减压回收溶剂。
35-40min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：甲醇-水, 25:75，流速：12ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A（250×20 mm，S-10 μm）），在此条件下收集保留时间26-29min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物化合物4 (32 mg)。
15-17 min的色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：乙腈-水, 15:85，流速：12ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A（250×20 mm，S-10 μm）），在此条件下收集保留时间15-16min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物化合物5 (4 mg)。
结构鉴定
化合物1 浅绿色玻璃状固体（甲醇），ESI-MS m/z: 623.2 [M-H]-，结合NMR数据确定该化合物的分子式为C29 H36 O15。
1H-NMR (DMSO-d 6 , 600 MHz)δ H : 6.63 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2), 6.64 (1H,d, J = 8.1 Hz, H-5), 6.50 (1H, dd, J = 8.1, 1.9 Hz, H-6), 2.69 (2H, m, H-7),4.31 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1'), 4.51 (1H, br s, H-1''), 1.05 (1H, d, J = 6.2Hz, H-6''), 7.05 (1H, br s, H-2'''), 6.77 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-5'''), 7.00(1H, br s, H-6'''), 7.50 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-7'''), 6.26 ( 1H, d, J = 15.8Hz, H-8''')。
13C-NMR (DMSO-d 6 , 150 MHz) δ C : 129.3 (C-1), 115.6 (C-2), 145.1 (C-3),143.6 (C-4), 116.4 (C-5), 119.6 (C-6), 35.2 (C-7), 70.4 (C-8), 103.0 (C-1'),73.1 (C-2'), 73.6 (C-3'), 71.0 (C-4'), 74.0 (C-5'), 66.2 (C-6'), 100.6 (C-1''), 70.7 (C-2''), 70.4 (C-3''), 71.9 (C-4''), 68.5 (C-5''), 17.9 (C-6''),125.6 (C-1'''), 115.0 (C-2'''), 145.7 (C-3'''), 148.6 (C-4'''), 115.9 (C-5'''), 121.5 (C-6'''), 145.7 (C-7'''), 113.9 (C-8'''), 166.0 (C-9''')。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为连翘酯苷A。
化合物2 浅绿色玻璃状固体（甲醇），ESI-MS m/z: 623.2 [M-H]-，结合NMR数据确定该化合物的分子式为C29 H36 O15。
1H-NMR (DMSO-d 6 , 600 MHz)δ H : 6.62 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-2), 6.64 (1H,d, J = 8.1 Hz, H-5), 6.50 (1H, dd, J = 8.1, 1.8 Hz, H-6), 2.69 (2H, m, H-7),4.35 (1H, d, J = 7.7 Hz, H-1'), 4.60 (1H, br s, H-1''), 1.14 (1H, d, J = 6.2Hz, H-6''), 7.05 (1H, br s, H-2'''), 6.77 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5'''), 7.01(1H, dd, J = 8.0, 1.7 Hz, H-6'''), 7.47 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-7'''), 6.28 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-8''')。
13C-NMR (DMSO-d 6 , 150 MHz) δ C : 129.3 (C-1), 115.6 (C-2), 144.9 (C-3),143.6 (C-4), 116.4 (C-5), 119.7 (C-6), 35.2 (C-7), 70.3 (C-8), 102.8 (C-1'),71.5 (C-2'), 77.6 (C-3'), 68.3 (C-4'), 75.2 (C-5'), 66.6 (C-6'), 100.8 (C-1''), 70.8 (C-2''), 70.6 (C-3''), 72.0 (C-4''), 68.5 (C-5''), 18.1 (C-6''),125.8 (C-1'''), 114.9 (C-2'''), 145.7 (C-3'''), 148.4 (C-4'''), 115.9 (C-5'''), 121.3 (C-6'''), 145.1 (C-7'''), 114.8 (C-8'''), 166.2 (C-9''')。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为连翘酯苷I。
化合物3 透明玻璃状固体（甲醇），ESI-MS m/z: 623.2 [M-H]-，结合NMR数据确定该化合物的分子式为C29 H36 O15。
1H-NMR (DMSO-d 6 , 600 MHz)δ H : 6.54 (1H, br s, H-2), 6.55 (1H, d, J =8.2 Hz, H-5), 6.41 (1H, dd, J = 8.2, 2.0 Hz, H-6), 2.56 (2H, m, H-7), 4.49(1H, d, J = 8.1 Hz, H-1'), 4.60 (1H, br s, H-1''), 1.14 (1H, d, J = 6.8 Hz,H-6''), 7.06 (1H, d, J = 1.9 Hz, H-2'''), 6.77 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-5'''),7.02 (1H, dd, J = 8.2, 1.9 Hz, H-6'''), 7.49 (1H, d, J =15.8 Hz, H-7'''),6.28 ( 1H, d, J = 15.8 Hz, H-8''')。
13C-NMR (DMSO-d 6 , 150 MHz) δ C : 129.1 (C-1), 115.4 (C-2), 144.8 (C-3),143.4 (C-4), 116.2 (C-5), 119.5 (C-6), 35.0 (C-7), 69.8 (C-8), 100.2 (C-1'),73.4 (C-2'), 74.1 (C-3'), 70.6 (C-4'), 75.4 (C-5'), 66.6 (C-6'), 100.7 (C-1''), 70.4 (C-2''), 70.3 (C-3''), 71.9 (C-4''), 68.4 (C-5''), 17.9 (C-6''),125.6 (C-1'''), 114.9 (C-2'''), 145.5 (C-3'''), 148.3 (C-4'''), 115.8 (C-5'''), 121.2 (C-6'''), 144.8 (C-7'''), 114.2 (C-8'''), 165.6 (C-9''')。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为连翘酯苷H。
化合物4 透明玻璃状固体（甲醇），ESI-MS m/z: 639.2 [M-H]-，结合NMR数据确定该化合物的分子式为C29 H36 O16。
1H-NMR (DMSO-d 6 , 600 MHz)δ H : 6.64 (1H, o, H-2), 6.64 (1H, o, H-5),6.51 (1H, br d, J = 7.3 Hz, H-6), 2.69 (2H, m, H-7), 4.31 (1H, d, J = 7.5 Hz,H-1'), 4.19 (1H, d, J = 7.7 Hz, H-1''), 7.06 (1H, br s, H-2'''), 6.77 (1H, o,H-5'''), 7.01 (1H, d, J = 7.1 Hz, H-6'''), 7.49 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-7'''),6.26 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-8''')。
13C-NMR (DMSO-d 6 , 150 MHz) δ C : 129.7 (C-1), 116.8 (C-2), 145.4 (C-3),140.0 (C-4), 116.3 (C-5), 120.0 (C-6), 35.5 (C-7), 71.7 (C-8), 103.1 (C-1'),73.9 (C-2'), 74.4 (C-3'), 70.7 (C-4'), 73.7 (C-5'), 68.6 (C-6'), 103.7 (C-1''), 74.0 (C-2''), 77.0 (C-3''), 70.4 (C-4''), 77.3 (C-5''), 61.4 (C-6''),125.9 (C-1'''), 115.4 (C-2'''), 146.1 (C-3'''), 149.1 (C-4'''), 116.0 (C-5'''), 121.9 (C-6'''), 145.4 (C-7'''), 114.2 (C-8'''), 166.7 (C-9''')。
以上碳谱数据与文献[9]报道基本一致，鉴定该化合物为Lugrandoside。
化合物5 透明色玻璃状固体（甲醇），ESI-MS m/z: 639.2 [M-H]-，结合NMR数据确定该化合物的分子式为C29 H36 O16。
1H-NMR (DMSO-d 6 , 600 MHz)δ H : 6.64 (2H, br s, H-2, 5), 6.52 (1H, dd, J= 8.0, 1.7 Hz, H-6), 2.69 (2H, m, H-7), 4.36 (1H, d, J = 7.7 Hz, H-1'), 4.25(1H, d, J = 7.7 Hz, H-1''), 7.06 (1H, br s, H-2'''), 6.78 (1H, d, J = 7.9 Hz,H-5'''), 7.01 (1H, d, J = 7.9 Hz, H-6'''), 7.48 (1H, d, J =15.9 Hz, H-7'''),6.30 (1H, d, J = 15.9 Hz, H-8''')。
13C-NMR (DMSO-d 6 , 150 MHz) δ C : 129.8 (C-1), 116.8 (C-2), 145.3 (C-3),143.9 (C-4), 116.3 (C-5), 120.1 (C-6), 35.5 (C-7), 70.6 (C-8), 103.0 (C-1'),71.9 (C-2'), 78.0 (C-3'), 68.3 (C-4'), 75.8 (C-5'), 68.5 (C-6'), 103.8 (C-1''), 74.0 (C-2''), 77.3 (C-3''), 70.5 (C-4''), 77.1 (C-5''), 61.5 (C-6''),126.1 (C-1'''), 116.0 (C-2'''), 145.4 (C-3'''), 148.7 (C-4'''), 116.3 (C-5'''), 121.7 (C-6'''), 146.0 (C-7'''), 115.2 (C-8'''), 166.6 (C-9''')。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为Isolugrandoside。
化合物6 浅棕色玻璃状固体（甲醇），ESI-MS m/z: 639.2 [M-H]-，结合NMR数据确定该化合物的分子式为C29 H36 O16。
1H-NMR (DMSO-d 6 , 600 MHz)δ H : 6.55 (1H, br s, H-2), 6.54 (1H, d, J =8.0 Hz, H-5), 6.42 (1H, dd, J = 8.0, 1.9 Hz, H-6), 2.56 (2H, m, H-7), 4.49(1H, d, J = 8.1 Hz, H-1'), 4.24 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1''), 7.06 (1H, br s,H-2'''), 6.77 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-5'''), 7.02 (1H, dd, J = 8.1, 1.9 Hz, H-6'''), 7.49 (1H, d, J =15.8 Hz, H-7'''), 6.28 ( 1H, d, J = 15.8 Hz, H-8''')。
13C-NMR (DMSO-d 6 , 150 MHz) δ C : 129.3 (C-1), 115.9 (C-2), 145.0 (C-3),143.5 (C-4), 116.3 (C-5), 119.7 (C-6), 35.1 (C-7), 69.9 (C-8), 100.2 (C-1'),74.3 (C-2'), 75.8 (C-3'), 70.2 (C-4'), 73.5 (C-5'), 68.4 (C-6'), 103.5 (C-1''), 73.6 (C-2''), 77.0 (C-3''), 70.1 (C-4''), 76.8 (C-5''), 61.2 (C-6''),125.7 (C-1'''), 115.5 (C-2'''), 145.7 (C-3'''), 148.4 (C-4'''), 115.5 (C-5'''), 121.4 (C-6'''), 145.2 (C-7'''), 115.0 (C-8'''), 165.8 (C-9''')。
以上氢谱特征及碳谱数据文献报道基本一致，鉴定该化合物为Ferruginoside A。
化合物7 浅棕色玻璃状固体（甲醇），ESI-MS m/z: 609.2 [M-H]-，结合NMR数据确定该化合物的分子式为C28H34O15。
1H-NMR (DMSO-d 6 , 600 MHz)δ H : 6.63 (1H, brs, H-2), 6.62 (1H, d, J = 8.0Hz, H-5), 6.50 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz, H-6), 2.69 (2H, m, H-7), 4.33 (1H,d, J = 7.7 Hz, H-1'), 4.89 (1H, t, J = 9.4 Hz, H-3'), 4.19 (1H, d, J = 7.6Hz, H-1''), 7.05 (1H, br s, H-2'''), 6.77 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5'''), 7.01(1H, dd, J = 8.0, 1.9 Hz, H-6'''), 7.47 (1H, d, J =15.7 Hz, H-7'''), 6.29 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-8''')。
13C-NMR (DMSO-d 6 , 150 MHz) δ C : 129.3 (C-1), 116.5 (C-2), 145.1 (C-3),143.6 (C-4), 115.9 (C-5), 119.7 (C-6), 35.2 (C-7), 70.3 (C-8), 102.7 (C-1'),71.5 (C-2'), 77.6 (C-3'), 67.9 (C-4'), 75.4 (C-5'), 68.1 (C-6'), 104.2 (C-1''), 73.4 (C-2''), 76.7 (C-3''), 69.7 (C-4''), 65.8 (C-5''), 125.8 (C-1'''),114.8 (C-2'''), 145.7 (C-3'''), 148.4 (C-4'''), 115.6 (C-5'''), 121.3 (C-6'''), 145.1 (C-7'''), 114.9 (C-8'''), 166.3 (C-9''')。
以上氢谱特征与文献报道基本一致，进一步结合二维光谱对该化合物的结构进行确认，并对碳信号进行归属，鉴定该化合物为Lianqiaoxingan C。
化合物8 浅棕色玻璃状固体（甲醇），ESI-MS m/z: 609.2 [M-H]-，结合NMR数据确定该化合物的分子式为C28H34O15。
1H-NMR (DMSO-d 6 , 600 MHz)δ H : 6.64 (1H, brs, H-2), 6.63 (1H, d, J = 8.0Hz, H-5), 6.51 (1H, dd, J = 8.0, 1.8 Hz, H-6), 2.70 (2H, m, H-7), 3.62, 3.89(2H, m, H-8), 4.30 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-1'), 4.64 (1H, t, J = 9.8 Hz, H-4'),4.15 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-1''), 7.06 (1H, br s, H-2'''), 6.77 (1H, d, J =7.9 Hz, H-5'''), 7.02 (1H, dd, J = 7.9, 1.4 Hz, H-6'''), 7.49 (1H, d, J =15.8Hz, H-7'''), 6.27 ( 1H, d, J = 15.8 Hz, H-8''')。
13C-NMR (DMSO-d 6 , 150 MHz) δ C : 129.3 (C-1), 115.6 (C-2), 145.7 (C-3),143.6 (C-4), 116.4 (C-5), 119.6 (C-6), 35.2 (C-7), 70.3 (C-8), 102.8 (C-1'),74.0 (C-2'), 73.6 (C-3'), 71.3 (C-4'), 73.3 (C-5'), 68.2 (C-6'), 103.9 (C-1''), 73.4 (C-2''), 76.5 (C-3''), 69.6 (C-4''), 65.8 (C-5''), 125.6 (C-1'''),115.0 (C-2'''), 145.0 (C-3'''), 148.6 (C-4'''), 115.9 (C-5'''), 121.6 (C-6'''), 145.8 (C-7'''), 113.9 (C-8'''), 166.3 (C-9''')。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，并通过二维核磁数据对碳氢信号进行了归属，鉴定该化合物为Calceolarioside C。
化合物9 透明玻璃状固体（甲醇），ESI-MS m/z: 461.2 [M-H]-，结合NMR数据确定该化合物的分子式为C20H30O12。
1H-NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz) δ H : 6.59 (1H, d, J = 3.2 Hz, H-2), 6.61 (1H,d, J = 8.0 Hz, H-5), 6.47 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz, H-6), 2.64 (2H, t, J =7.6Hz, H-7), 1.11 (3H, d, J = 6.4 Hz, H-6″)。
13C-NMR (DMSO-d 6 , 100 MHz) δ C : 129.3 (C-1), 116.3 (C-2), 144.9 (C-3),143.5 (C-4), 115.5 (C-5), 119.5 (C-6), 35.2 (C-7), 70.1 (C-8), 103.0 (C-1′),73.4 (C-2′), 76.7 (C-3′), 70.2 (C-4′), 75.4 (C-5′), 67.0 (C-6′), 100.8 (C-1″), 70.7 (C-2″), 70.5 (C-3″), 72.0 (C-4″), 68.4 (C-5″), 18.0 (C-6″)。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为连翘酯苷E。
化合物10 透明玻璃状固体（甲醇），ESI-MS m/z: 477.2 [M-H]-，结合NMR数据确定该化合物的分子式为C20H30O13。
1H-NMR(DMSO-d 6 , 600 MHz) δ H : 6.60 (1H, d, J =1.8 Hz, H-2), 6.61 (1H,d, J = 8.2 Hz, H-5), 6.47 (1H, dd, J = 8.2, 1.8 Hz, H-6), 4.15 (1H, d, J =7.8 Hz, H-1′), 4.22 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1′)。
13C-NMR (DMSO-d 6 , 150 MHz) δ C : 129.3 (C-1), 116.3 (C-2), 144.9 (C-3),143.5 (C-4), 115.5 (C-5), 119.5 (C-6), 35.1 (C-7), 70.0 (C-8), 102.8 (C-1′),73.4 (C-2′), 76.7 (C-3′), 69.9 (C-4′), 75.7 (C-5′), 68.4 (C-6′), 103.3 (C-1″), 73.4 (C-2″), 76.9 (C-3″), 70.0 (C-4″), 76.7 (C-5″), 61.0 (C-6″)。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为FerruginosideB。
化合物11和化合物12 为白色粉末状固体（甲醇），核磁共振光谱显示待测成分为一对差向异构体的混合物。
将核磁数据与文献报道对照，可以确认该成分为D-苦杏仁苷和L-苦杏仁苷的混合物，该混合物的分子量为ESI-MS m/z: 456.2 [M-H]-。
化合物11 D-苦杏仁苷核磁数据归属如下：1H-NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz)δ H : 7.55(2H, o, H-4, 8), 7.48 (3H, o, H-5, 6, 7), 5.99 (1H, s, H-2), 4.20-4.60 (2H,o, H-1',1'')；13C-NMR (DMSO-d 6 , 100 MHz) δ C : 118.9 (C-1), 68.5 (C-2), 133.9 (C-3), 129.6 (C-6), 127.3 (C-5,7), 129.0 (C-4,8), 103.7 (C-1'), 73.1 (C-2'),76.8 (C-3'), 70.1 (C-4'), 76.6 (C-5'), 66.8 (C-6'), 101.6 (C-1''), 73.8 (C-2''), 76.8 (C-3''), 70.1 (C-4''), 76.5 (C-5''), 61.1 (C-6'')。
化合物12 L-苦杏仁苷核磁数据归属如下：1H-NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz)δ H : 7.55(2H, o, H-4, 8), 7.48 (3H, o, H-5,6,7), 5.99 (1H, s, H-2), 4.20-4.60 (2H, o,H-1', 1'')；13C-NMR (DMSO-d 6 , 100 MHz) δ C : 118.2 (C-1), 69.0 (C-2), 133.8 (C-3), 128.9 (C-4,8), 127.5 (C-5,7), 129.6 (C-6), 104.0 (C-1'), 72.9 (C-2'),76.8 (C-3'), 70.3 (C-4'), 76.5 (C-5'), 67.1 (C-6'), 101.0 (C-1''), 73.6(C-2''), 76.8 (C-3''), 70.0 (C-4''), 76.2 (C-5''), 61.1 (C-6'')。
化合物13 无定形固体（甲醇）ESI-MS m/z: 340.1 [M+HCOO]- ,结合NMR数据确定该化合物的分子式为C14H17NO6。
1H-NMR (DMSO-d 6 , 600 MHz) δ H : 7.56 (2H, d, J = 7.7 Hz, H-2,6), 7.48(2H, o, H-3,5), 7.48 (1H, o, H-4), 6.03 (1H, s, H-7), 4.19 (1H, d, J = 6.6Hz, H-1'), 3.70 (1H, br d, J = 11.6 Hz, H-6'a), 3.51 (1H, br d, J = 11.0 Hz,H-6'b), 3.09 (4H, o, H-2', H-3', H-4', H-5');13C-NMR (DMSO-d 6 , 150 MHz)δc:134.4 (C-1), 128.1 (C-2,6), 129.7 (C-3,5), 130.3 (C-4), 67.3 (C-7), 119.5 (C-8), 101.8 (C-1'), 73.9 (C-2'), 77.2 (C-3'), 70.6 (C-4'), 78.0 (C-5'), 61.8(C-6'). 以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为Sambunigrin。
化合物14 不定形固体（甲醇），ESI-MS m/z: 315.1［M-H]-，结合NMR数据确定该化合物的分子式为C14H20O8。
1H-NMR (DMSO-d 6 , 600 MHz)δ H : 6.04 (2H, d, J = 10.1 Hz, H-2, 6), 6.97(2H, dd, J = 10.1 Hz, 2.6 Hz H-3, 5), 4.07 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1'), 1.89(2H, m, H-1'')。
13C-NMR (DMSO-d 6 , 150 MHz) δ C : 185.3 (C-1), 126.4 (C-2, 6), 153.4 (C-3or C-5), 153.3 (C-3 or C-5), 67.3 (C-4), 39.7 (C-1'), 63.9 (C-2'), 102.9 (C-1''), 73.4 (C-2''), 76.9 (C-3''), 70.0 (C-4''), 76.7 (C-5''), 61.0 (C-6'')。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为Cornoside。
化合物15 不定形固体（甲醇），ESI-MS m/z: 195.1 [M-H]-，结合NMR数据确定该化合物的分子式为C10H12O4。
1H-NMR (DMSO-d 6 , 600 MHz)δ H : 7.02 (2H, br d, J = 10.0 Hz H-2, 6), 6.08(2H, br d, J = 10.0 Hz, H-3, 5), 2.69 (2H, s, H-1'), 4.01 (2H, q, J = 14.2Hz, 7.1 Hz, H-3'), 1.13 (3H, td, J = 7.1 Hz, 1.4 Hz, H-4')。
13C-NMR (DMSO-d 6 , 150 MHz) δ C : 185.2 (C-1), 126.8 (C-2, C-6), 151.7(C-3, C-5), 66.6 (C-4), 44.9 (C-1'), 168.6 (C-2'), 60.2 (C-3'), 14.1 (C-4')。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为4-Hydroxy-4-methylenecarbomethoxy-cyclohexa-2,5-dienone。
化合物16 白色结晶（甲醇），ESI-MS m/z: 787.2 [M+HCOO]-, 765.3 [M+Na]+，结合NMR数据确定该化合物的分子式为C34H46O18。
1H-NMR (DMSO-d 6 , 600 MHz) δ H : 3.76 (12H, s, OCH3-2, 2', 6, 6'), 6.66(4H, s, H-3, 3', 5, 5'), 4.67 (2H, d, J = 3.8 Hz, H-7, 7'), 4.20 (2H, m, H-9α, 9'α), 3.83 (2H, dd, J = 9.2, 3.4 Hz, H-9β, 9'β)。
13C-NMR (DMSO-d 6 , 150 MHz) δc: 137.3 (C-1, 1'), 152.8 (C-2, 2', 6,6'), 104.3 (C-3, 3', 5, 5'), 133.8 (C-4, 4'), 85.2 (C-7, 7'), 53.7 (C-8, 8'),71.5 (C-9, 9'), 56.6 (OCH3 -2, 2', 6, 6'), 102.8 (C-1'', 1'''), 74.3 (C-2'',2'''), 77.3 (C-3'', 3'''), 70.0 (C-4'', 4'''), 76.6 (C-5'', 5'''), 61.0 (C-6'', 6''')。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为Liriodendrin。
化合物17 白色粉末（甲醇）， ESI-MS m/z: 417.1 [M-H]-，结合NMR数据确定该化合物的分子式为C21H22O9。
1H-NMR (DMSO-d 6 , 600 MHz) δ H : 5.53 (1H, dd, J = 12.7, 2.8 Hz, H-2),7.65 (1H, d, J = 8.6 Hz, H-5), 6.35 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-8), 6.51 (1H, dd, J = 8.6, 2.2 Hz, H-6), 7.45 (2H, d, J = 8.7 Hz, H-2', 6'), 7.07 (2H, d, J = 8.8Hz, H-3', 5'), 3.15 (1H, o, H-3a) 2.68 (1H, dd, J = 16.7, 2.9 Hz, H-3b), 3.2-3.5 (4H, m, , 2'', 3'', 4'', 5''), 4.89 (1H, d, J = 7.5 Hz, H-6''a), 3.70(1H, d, J = 12.0 Hz, H-6''b). 13C-NMR (DMSO-d 6 , 150 MHz) δ C : 78.8 (C-2), 43.3(C-3), 190.0 (C-4), 132.5 (C-5), 110.7 (C-6), 164.8 (C-7), 113.6 (C-8), 163.2(C-9), 102.7 (C-10), 128.5 (C-1'), 128.1 (C-2', 6'), 116.3 (C-3', 5'), 157.6(C-4'), 100.4 (C-1''), 73.3 (C-2''), 76.7 (C-3''), 69.8 (C-4''), 77.2 (C-5''), 60.8 (C-6''). 以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为甘草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。
化合物18 淡黄色不定形固体（甲醇），ESI-MS m/z: 137.0［M-H]-，结合NMR数据确定该化合物的分子式为C7H6 O3。
1H-NMR (DMSO-d 6 , 600 MHz)δ H : 9.68 (CHO), 7.22 (1H, br s, H-2), 6.89(1H, d, J = 8.4 Hz, H-3), 7.25 (1H, br d, J = 7.8 Hz, H-4)。
13C-NMR (DMSO-d 6 , 150 MHz) δ C : 191.1 (CHO), 128.8 (C-1), 115.5 (C-2),145.9 (C-3), 152.2 (C-4), 114.3 (C-5), 124.5 (C-6)。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为3,4-二羟基苯甲醛。
实施例2
按比例称取：连翘 30kg、金银花 20kg、板蓝根 30kg、大黄 6kg、广藿香10kg、绵马贯众 20kg、红景天 6kg、薄荷脑 0.5kg、麻黄10kg、苦杏仁 6kg、鱼腥草 30kg、甘草 6kg、石膏 30kg，按照以下工艺提取：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间8小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用12倍量70%的乙醇提取3次，每次2.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加12倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10的清膏，加入乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15的清膏，干燥，得总浸膏，备用。
分离方法步骤同实施例1，结果分离得到十八种化合物。
实施例3
原料药配方为：连翘 27.8kg、金银花 29.4kg、板蓝根 28.5kg、大黄 5.5kg、广藿香 9.5kg、绵马贯众29kg 、红景天 8.7kg、薄荷脑 0.85kg、麻黄 8.8kg、苦杏仁 8kg、鱼腥草 28.4kg、甘草 9.5kg、石膏27.7kg，按照以下工艺提取：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间8小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用12倍量70%的乙醇提取3次，每次2.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加12倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.13的清膏，加入乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.18的清膏，干燥，得总浸膏，备用。
分离方法步骤同实施例1，结果分离得到十八种化合物。

Claims (7)

1. 一种中药组合物中十八种成分的分离方法，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：连翘200-300 、麻黄60-100 、大黄40-60 、鱼腥草200-300、金银花200-300 、板蓝根200-300、广藿香60-100、绵马贯众200-300、红景天60-100、薄荷脑5-9、苦杏仁60-100 、甘草60-100 、石膏200-300，所述中药组合物总浸膏由以下步骤制成：
(1) 按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间8小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用12倍量70%的乙醇提取3次，每次2.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加12倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加入乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5) 将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得总浸膏，备用；
其特征在于，所述分离方法包括以下步骤：
（1）该中药组合物总浸膏经AB-8型号大孔树脂分离，依次用水、10%乙醇、30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，回收溶剂，得30%乙醇浸膏；
（2）将步骤（1）得到的30%乙醇浸膏，加入反相硅胶ODS-AQ-HG，S-50μm，拌样，待拌样ODS自然晾干后，将拌样ODS加入到上样柱内，上中压制备液相进行分离，分离柱填料为ODS-AQ-HG，S-50μm，依次用10%甲醇，根据洗脱顺序得到5个流份，分别编号为10%-1、10%-2、10%-3、10%-4、10%-5；20%甲醇洗脱，根据洗脱顺序得到6个流份，分别编号为20%-1、20%-2、20%-3、20%-4、20%-5和20%-6，分别收集洗脱液，回收溶剂，得编号为10%-1、10%-2、10%-3、10%-4、10%-5洗脱干膏和20%-1、20%-2、20%-3、20%-4、20%-5和20%-6洗脱干膏；
（3）将步骤（2）得到的编号为10%-1洗脱干膏，用30%甲醇溶解，溶解液过0.45μm微孔滤膜，采用高效液相色谱法进行初步分离，流动相为甲醇-水 22:78，流速为1ml/min，检测波长210nm，分别收集保留时间为3-9min、9-11min、19-22min、22-26min、26-30min、37-41min、和44-48min的色谱峰，并减压回收溶剂，并分别进行以下分离：
3-9min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水, 5:95，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间25-27min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物14：Cornoside；
9-11min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水, 12:88，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间32-35min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物10：Ferruginoside B；
19-22min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水, 18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间31-35min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物9：连翘酯苷E；
22-26min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水, 16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间32-37min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物18：3,4-二羟基苯甲醛；
26-30min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水, 18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间38-42min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物11：D-苦杏仁苷 和化合物12：L-苦杏仁苷的混合物；
37-41min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水, 18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间52-56min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物13：Sambunigrin；
44-48min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水, 22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间41-44min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物15：4-Hydroxy-4-methylenecarbomethoxy-cyclohexa-2,5-dienone；
（4）将步骤（2）得到的编号为20%-2洗脱干膏，用30%甲醇溶解，并经过0.45μm微孔滤膜过滤，高效液相色谱法进行初步分离，流动相：甲醇-水, 22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10μm，分别收集保留时间为14-17min、17-19min、22-24min、29-34min和35-40min的色谱峰，并减压回收溶剂，并分别进行以下分离：
14-17min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈-水, 15:85，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间38-40min和45-47min的色谱峰，其中45-47min色谱峰减压回收溶剂后，得到化合物化合物7 ：Lianqiaoxingan C；保留时间为38-40min色谱峰，减压回收溶剂后再经高效液相色谱法纯化，流动相：乙腈-水, 13:87，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，收集此条件下52-56min色谱峰，减压回收溶剂，得到化合物6 ：Ferruginoside A；
17-19min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈-水, 15:85，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间28-30min和37-44min的色谱峰，减压回收溶剂后，分别得到化合物16：Liriodendrin，和化合物2：连翘酯苷I；
22-24min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈-水, 17:83，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间22-25min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物8： Calceolarioside C；
29-34min色谱峰，在减压回收溶剂后，在放置过程中有白色固体析出，5000rpm离心得到化合物17：甘草素-7-O-β-D-葡萄糖苷；上清液经高效液相进一步纯化，流动相：乙腈-水,16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间40-45min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物3：连翘酯苷H；
35-40min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈-水, 16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间34-45min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物1：连翘酯苷A；
（5）将步骤（2）得到的编号为20%-4和20%-5流份合并，采用30%甲醇溶解，并经过0.45μm微孔滤膜过滤，高效液相色谱法进行初步分离，流动相：乙腈-水, 15:85，流速：15ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，分别收集保留时间为15-17 min和35-40 min的色谱峰，并减压回收溶剂；其中，5-17 min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈-水, 15:85，流速：12ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&D ODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间15-16min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物5：Isolugrandoside；35-40min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水, 25:75，流速：12ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-Pack R&DODS-A，250×20 mm，S-10 μm，在此条件下收集保留时间26-29min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物4：Lugrandoside。
2.根据权利要求1所述的十八种成分的分离方法，其特征在于，所述步骤（1）中，洗脱剂水、10%乙醇、30%乙醇的用量为1g中药组合物总浸膏用水40ml、10%乙醇17.6ml、30%乙醇45ml。
3.根据权利要求1所述的十八种成分的分离方法，其特征在于，所述步骤（2）中反相硅胶ODS-AQ-HG的用量为：1g步骤（1）所得30%乙醇浸膏用8g反相硅胶ODS-AQ-HG，其中3g用于与1g步骤（1）所得30%乙醇浸膏拌样，5g用做中压分离柱的填料。
4.根据权利要求1所述的十八种成分的分离方法，其特征在于，所述步骤（2）中依次用10%甲醇，根据洗脱顺序得到5个流份，每个流份的洗脱剂用量为：1g步骤（1）所得30%乙醇浸膏用66.7ml的10%甲醇；20%甲醇洗脱，根据洗脱顺序得到6个流份，每个流份的洗脱剂用量为：1g步骤（1）所得30%乙醇浸膏用44.4-66.7ml的20%甲醇。
5.根据权利要求1-4任一项所述的十八种成分的分离方法，其特征在于，所述中药组合物是由如下重量份的原料药制成：
连翘 200 、金银花 300 、板蓝根 200、大黄 40 、广藿香 60、绵马贯众 300 、红景天100 、薄荷脑 9 、麻黄 60 、苦杏仁 100、鱼腥草 200 、甘草 100 、石膏200。
6.根据权利要求1-4任一项所述的十八种成分的分离方法，其特征在于，所述中药组合物是由如下重量份的原料药制成：
连翘 300 、金银花 200 、板蓝根 300 、大黄 60、广藿香100、绵马贯众 200、红景天60、薄荷脑 5 、麻黄100 、苦杏仁 60 、鱼腥草 300、甘草 60 、石膏 300。
7.根据权利要求1-4任一项所述的十八种成分的分离方法，其特征在于，所述中药组合物是由如下重量份的原料药制成：
连翘 278 、金银花 294 、板蓝根 285、大黄 55、广藿香 95、绵马贯众 290 、红景天87 、薄荷脑 8.5、麻黄 88 、苦杏仁 80、鱼腥草 284、甘草 95 、石膏277。
CN201710789895.5A 2017-09-05 2017-09-05 一种中药组合物中十八种成分的分离方法 Active CN109422780B (zh)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710789895.5A CN109422780B (zh) 2017-09-05 2017-09-05 一种中药组合物中十八种成分的分离方法
US16/643,632 US11458417B2 (en) 2017-09-05 2018-09-05 Method for separating eighteen components in traditional Chinese medicine composition
SG11202001801PA SG11202001801PA (en) 2017-09-05 2018-09-05 Method for separating eighteen components in traditional chinese medicine composition
KR1020207009024A KR102404533B1 (ko) 2017-09-05 2018-09-05 전통 한약 조성물에서 18가지 성분을 분리하는 방법
EP18853153.7A EP3680248A4 (en) 2017-09-05 2018-09-05 PROCEDURE FOR SEPARATING EIGHTEEN COMPONENTS IN A COMPOSITION OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
PCT/CN2018/104148 WO2019047848A1 (zh) 2017-09-05 2018-09-05 一种中药组合物中十八种成分的分离方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710789895.5A CN109422780B (zh) 2017-09-05 2017-09-05 一种中药组合物中十八种成分的分离方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109422780A CN109422780A (zh) 2019-03-05
CN109422780B true CN109422780B (zh) 2021-07-13

Family

ID=65513453

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710789895.5A Active CN109422780B (zh) 2017-09-05 2017-09-05 一种中药组合物中十八种成分的分离方法

Country Status (6)

Country Link
US (1) US11458417B2 (zh)
EP (1) EP3680248A4 (zh)
KR (1) KR102404533B1 (zh)
CN (1) CN109422780B (zh)
SG (1) SG11202001801PA (zh)
WO (1) WO2019047848A1 (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112014481B (zh) * 2019-05-29 2022-10-25 湖北梦阳药业股份有限公司 一种生白口服液指纹图谱的检测方法
CN111337586B (zh) * 2020-01-09 2022-09-20 西南大学 一种基于代谢组筛选的标记类黄酮评价金银花特性的方法
CN114573539A (zh) * 2020-12-02 2022-06-03 中国科学院大连化学物理研究所 一种从桑黄药材中制备化合物Phellibaumin D的方法
CN116626183B (zh) * 2023-04-07 2024-02-06 湖南易能生物医药有限公司 一种包含黄芩的中药复方的指纹图谱构建方法及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101862391A (zh) * 2009-04-17 2010-10-20 北京以岭药业有限公司 一种中药组合物在制备治疗人禽流感药物中的应用
CN104547209A (zh) * 2013-10-25 2015-04-29 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物的制备方法
CN105287610A (zh) * 2014-06-27 2016-02-03 石家庄以岭药业股份有限公司 连翘酯苷i的应用及其制备方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1194752C (zh) 2003-07-01 2005-03-30 河北以岭医药研究院有限公司 一种抗病毒中药组合物及制备方法
CN1318439C (zh) 2003-12-24 2007-05-30 天津市南开医院 苦杏仁苷的制备方法和苦杏仁苷在制备促进心脑胰及伤口血液循环的苦杏仁苷制剂中的应用
CN100350916C (zh) * 2005-01-24 2007-11-28 王永钧 复方积雪草中药组合物有效成分的提取方法
CN101797307B (zh) * 2010-04-09 2011-08-10 广州中医药大学 一种含苯乙醇苷的枇杷叶紫珠提取物及其制备方法
CN102727653B (zh) * 2011-04-01 2015-09-09 北京中医药大学 防治急性冠脉综合征的药物组合物的制备方法及其活性部位
CN103304609B (zh) * 2012-03-10 2016-01-20 中国科学院广州生物医药与健康研究院 鱼腥草素杂合黄酮体及其制备方法和用途
CN103800523B (zh) * 2012-11-13 2018-09-25 河北以岭医药研究院有限公司 一种抗病毒中药组合物的制备方法及指纹图谱的测定方法
CN104861015A (zh) * 2015-01-16 2015-08-26 李玉山 一种甘草中有效成分的协同清洁化提取方法
CN105461765B (zh) 2015-11-25 2018-11-02 江苏康缘药业股份有限公司 一种苦杏仁苷的制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101862391A (zh) * 2009-04-17 2010-10-20 北京以岭药业有限公司 一种中药组合物在制备治疗人禽流感药物中的应用
CN104547209A (zh) * 2013-10-25 2015-04-29 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物的制备方法
CN105287610A (zh) * 2014-06-27 2016-02-03 石家庄以岭药业股份有限公司 连翘酯苷i的应用及其制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
大孔吸附树脂分离纯化连翘酯苷A 的工艺研究;胡晨旭，等;《中草药》;20100531;第41卷(第5期);第732-735页 *
连花清瘟胶囊的化学成分研究（III）;沈硕，等;《中草药》;20190228;第50卷(第4期);第814-820页 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP3680248A4 (en) 2021-06-16
WO2019047848A1 (zh) 2019-03-14
US11458417B2 (en) 2022-10-04
KR102404533B1 (ko) 2022-06-02
EP3680248A1 (en) 2020-07-15
SG11202001801PA (en) 2020-03-30
CN109422780A (zh) 2019-03-05
US20200398188A1 (en) 2020-12-24
KR20200040886A (ko) 2020-04-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109776635B (zh) 一种中药组合物中八种成分的分离方法
CN109422780B (zh) 一种中药组合物中十八种成分的分离方法
CN112094176A (zh) 一种从山橿中提取的二苯乙烯类化合物及其制备方法与应用
CN102531851A (zh) 虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取与纯化方法
CN109879921B (zh) 从知母中分离的具有抗肿瘤活性的化合物及其制备方法
CN108373474B (zh) 一种从银杏叶中提取的银杏内酯化合物及其制备方法
CN101024604B (zh) 从龙血竭中分离纯化的二氢查耳酮化合物及其制备方法
CN111150739B (zh) 扁蓄苷的用途以及从珠芽蓼中提取扁蓄苷的方法
Jadhav et al. A new furanoditerpenoid marker for the distinction between the seeds of two species of Caesalpinia
CN105037124B (zh) 一种selaginellin N的制备方法
CN116003240B (zh) 一种单萜化合物、制备方法及其应用
CN110590694A (zh) 一种新骨架大环混合肽聚酮化合物及其制备方法和用途
CN110078619B (zh) 从青竹标中提取及分离纯化的环丁四醇酯类化合物及其方法
CN115850295B (zh) 一种双酮类化合物八角莲双黄酮a-e的制备方法及其应用
CN110526809B (zh) 一种查耳酮类化合物及其制备方法和用途
RU2776898C1 (ru) Способ получения мирицитрина из коры ореха черного, обладающего нейротропной активностью
Lei et al. Two new kaempferol glycosides from Androsace umbellata
Alali et al. A New colchicinoid from Colchicum tauri, an unexplored meadow saffron native to Jordan
CN115850226A (zh) 一种双酮类化合物八角莲双黄酮f、g的制备方法及其应用
CN105294410B (zh) 从狭叶金粟兰中分离纯化的一对苯基不饱和三元醇异构体化合物及其制备方法和应用
CN105669787A (zh) 一种从杜仲提取环橄榄树脂素9-糖苷的方法
Dawa et al. Isolation and Characterization of Bis (2-Ethylhexyl) Benzene-1, 2-Dicarboxylate from the Roots of Detarium microcarpum
KR20230164793A (ko) 항염증 효과를 갖는 희귀 진세노사이드 Rg3 함유 조성물의 제조 방법
CN117164652A (zh) 化合物及其制备方法和用途
CN117886863A (zh) 一种从黄花蒿中分离得到的化合物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant