CN114573539A - 一种从桑黄药材中制备化合物Phellibaumin D的方法 - Google Patents
一种从桑黄药材中制备化合物Phellibaumin D的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114573539A CN114573539A CN202011398708.9A CN202011398708A CN114573539A CN 114573539 A CN114573539 A CN 114573539A CN 202011398708 A CN202011398708 A CN 202011398708A CN 114573539 A CN114573539 A CN 114573539A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phellibaumin
- compound
- filler
- phase
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 48
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- HODNKSQSWYYPLV-UHFFFAOYSA-N phellibaumin D Natural products OC=1C=C(C=CC=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC(=O)C=1C(C(=O)O)=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 HODNKSQSWYYPLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 52
- HODNKSQSWYYPLV-IHRVKPHJSA-N (z)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-[6-[(e)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethenyl]-4-hydroxy-2-oxopyran-3-yl]prop-2-enoic acid Chemical compound OC=1C=C(\C=C\C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC(=O)C=1/C(C(=O)O)=C/C1=CC=C(O)C(O)=C1 HODNKSQSWYYPLV-IHRVKPHJSA-N 0.000 title claims description 50
- 241000123113 Phellinus igniarius Species 0.000 title claims description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 title description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 35
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims abstract description 33
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 241000001727 Tropicoporus linteus Species 0.000 claims abstract description 13
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims abstract description 13
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 13
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 29
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 claims description 15
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 15
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims description 15
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 12
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 10
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 8
- 239000012466 permeate Substances 0.000 claims description 8
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 7
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 7
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 7
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 6
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 4
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 4
- 238000012856 packing Methods 0.000 claims description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 4
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 3
- 239000011343 solid material Substances 0.000 claims description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 2
- 229930194635 phellibaumin Natural products 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims 1
- 238000001323 two-dimensional chromatography Methods 0.000 claims 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 6
- 241000123107 Phellinus Species 0.000 abstract description 4
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 abstract description 2
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 abstract 1
- HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N formic acid;hydrate Chemical compound O.OC=O HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- SGJNQVTUYXCBKH-HNQUOIGGSA-N hispidin Chemical class O1C(=O)C=C(O)C=C1\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 SGJNQVTUYXCBKH-HNQUOIGGSA-N 0.000 description 5
- ZDYUUBIMAGBMPY-UHFFFAOYSA-N oxalic acid;hydrate Chemical compound O.OC(=O)C(O)=O ZDYUUBIMAGBMPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- SGJNQVTUYXCBKH-UHFFFAOYSA-N hispidin Natural products O1C(=O)C=C(O)C=C1C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 SGJNQVTUYXCBKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000004780 2D liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- -1 pyrone polyphenol compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N trans-caffeic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- ACEAELOMUCBPJP-UHFFFAOYSA-N (E)-3,4,5-trihydroxycinnamic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ACEAELOMUCBPJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FFRBMBIXVSCUFS-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitro-1-naphthol Chemical group C1=CC=C2C(O)=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C2=C1 FFRBMBIXVSCUFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWCIXZKNLVQESJ-HNQUOIGGSA-N 2-[3-[(e)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethenyl]-8,9-dihydroxy-1-oxo-6h-pyrano[4,3-c]isochromen-6-yl]acetic acid Chemical compound O1C(=O)C=2C3=CC(O)=C(O)C=C3C(CC(=O)O)OC=2C=C1\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 ZWCIXZKNLVQESJ-HNQUOIGGSA-N 0.000 description 1
- VJLLDPFYQAJLKH-UHFFFAOYSA-N 3-(2-phenylethenyl)pyran-2-one Chemical compound O=C1OC=CC=C1C=CC1=CC=CC=C1 VJLLDPFYQAJLKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RXORBHSDVJWVOW-HNQUOIGGSA-N 3-[(e)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethenyl]-7,8-dihydroxypyrano[4,3-b][1]benzofuran-1-one Chemical compound C1=C(O)C(O)=CC=C1\C=C\C(OC1=O)=CC2=C1C1=CC(O)=C(O)C=C1O2 RXORBHSDVJWVOW-HNQUOIGGSA-N 0.000 description 1
- CZNFRXIZUQPRDG-CTOXAEOWSA-N 3-[(z)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)-1-[6-[(e)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethenyl]-4-hydroxy-2-oxopyran-3-yl]ethenyl]-8,9-dihydroxypyrano[4,3-c]isochromene-1,6-dione Chemical compound C1=C(O)C(O)=CC=C1\C=C\C(OC1=O)=CC(O)=C1\C(C=1OC(=O)C=2C3=CC(O)=C(O)C=C3C(=O)OC=2C=1)=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CZNFRXIZUQPRDG-CTOXAEOWSA-N 0.000 description 1
- 241000222382 Agaricomycotina Species 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 description 1
- 235000018185 Betula X alpestris Nutrition 0.000 description 1
- 235000018212 Betula X uliginosa Nutrition 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 235000008708 Morus alba Nutrition 0.000 description 1
- 240000000249 Morus alba Species 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 241000222341 Polyporaceae Species 0.000 description 1
- 241000222383 Polyporales Species 0.000 description 1
- 241000124033 Salix Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 159000000032 aromatic acids Chemical class 0.000 description 1
- JZRMMLYGOBWIGY-UHFFFAOYSA-N baumin Natural products O1C(CC(=O)OC)=CC(=O)C(C=2C(OC(C=CC=3C=C(O)C(O)=CC=3)=CC=2O)=O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1 JZRMMLYGOBWIGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 229940074360 caffeic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000004883 caffeic acid Nutrition 0.000 description 1
- OTAFHZMPRISVEM-UHFFFAOYSA-N chromone Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C=COC2=C1 OTAFHZMPRISVEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N cis-caffeic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 1
- ILJIUGHJNCYQIT-PGODXZJGSA-N ethyl (z)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-[6-[(e)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethenyl]-4-hydroxy-2-oxopyran-3-yl]prop-2-enoate Chemical compound OC=1C=C(\C=C\C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC(=O)C=1/C(C(=O)OCC)=C/C1=CC=C(O)C(O)=C1 ILJIUGHJNCYQIT-PGODXZJGSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 description 1
- 150000002213 flavones Chemical class 0.000 description 1
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 description 1
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007365 immunoregulation Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- JZRMMLYGOBWIGY-HZFVGLMFSA-N methyl 2-[(2s,3r)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3-[6-[(e)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethenyl]-4-hydroxy-2-oxopyran-3-yl]-4-oxo-2,3-dihydropyran-6-yl]acetate Chemical compound C1([C@@H]2[C@H](C(=O)C=C(O2)CC(=O)OC)C=2C(OC(\C=C\C=3C=C(O)C(O)=CC=3)=CC=2O)=O)=CC=C(O)C(O)=C1 JZRMMLYGOBWIGY-HZFVGLMFSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 238000005691 oxidative coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000024241 parasitism Effects 0.000 description 1
- RXORBHSDVJWVOW-UHFFFAOYSA-N phellibaumin A Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C=CC(OC1=O)=CC2=C1C1=CC(O)=C(O)C=C1O2 RXORBHSDVJWVOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWCIXZKNLVQESJ-SFHVURJKSA-N phellibaumin B Natural products OC(=O)C[C@@H]1OC2=C(C(=O)OC(=C2)C=Cc3ccc(O)c(O)c3)c4cc(O)c(O)cc14 ZWCIXZKNLVQESJ-SFHVURJKSA-N 0.000 description 1
- CZNFRXIZUQPRDG-UHFFFAOYSA-N phellibaumin C Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C=CC(OC1=O)=CC(O)=C1C(C=1OC(=O)C=2C3=CC(O)=C(O)C=C3C(=O)OC=2C=1)=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 CZNFRXIZUQPRDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILJIUGHJNCYQIT-UHFFFAOYSA-N phellibaumin E Natural products OC=1C=C(C=CC=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC(=O)C=1C(C(=O)OCC)=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 ILJIUGHJNCYQIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 description 1
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
- C07D309/34—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D309/36—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with oxygen atoms directly attached to ring carbon atoms
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供了一种从桑黄药材中制备化合物Phellibaumin D的方法，该方法将桑黄药材用乙醇水提取，采用制备色谱二维正交技术，一维利用耐纯水C18YE硅胶填料富集获得化合物Phellibaumin D粗品，二维利用高密度键合C18TDE硅胶填料进行制备纯化，获得纯度>90％化合物Phellibaumin D。本发明制备过程重复性好，溶剂可回收利用，收率高，自动化程度高，易于操作，可以满足大规模生产的需求。
Description
技术领域
本方法涉及分离纯化技术领域，具体是一种从桑黄药材中制备化合物Phellibaumin D的方法。更进一步的，本发明是利用二维液相色谱技术从桑黄药材中制备高纯度化合物Phellibaumin D的方法，纯度可以达到90％以上。
背景技术
桑黄是一种珍贵的多年生大型药用真菌，素有“森林黄金”之美称之美称，在《本草纲目》中有记载。属于担子菌门层菌纲非褶菌目多孔菌科针层孔菌属，在我国分布有四十个种。主要寄生在桑、柳、桦杨栎等树干上，其中以野生的桑树桑黄最为珍贵。
桑黄作为我国传统真菌类中药，是目前国际公认的生物治癌领域中有效率排在第一位的药用菌。其包含多种结构类型的化学成分，包括多糖、黄酮、三萜类、芳香酸、氨基酸等；现代药理学实验也表明，桑黄具抗癌、免疫调节、抗肥胖、抗氧化和抗炎等多种药理学活性。
桑黄真菌可以代谢产生很多种苯乙烯吡哺酮(Hispidin)衍生物，这类化合物被认为是由Hispidin前体和多酚类化合物在氧化酶的催化下氧化耦合产生的。主要有苯乙烯基吡喃酮(hispidin)骨架和苯并吡喃酮骨架，近十年来，国内外对桑黄吡喃酮多酚类化合物研究较多，发现了较多新化合物，而且该类化合物有许多是以新奇的骨架被报道的，该类化合物多具有抗氧化以及自由基清除活性，具有抗氧化、抗病毒、抗血脂、减缓阿茲海默症之效用。
基于前人对Hispidin类化合物生物合成途径提出的假设。有文献报道提出Phellibaumins A-D可能的生物合成途径，Phellibaumin B及Phellibaumin D可能都是由一分子Hispidin和一分子咖啡酸偶联产生，但是不同的氧化方式而产生两个不同的化合物。Phellibaumin D与乙醇反应，产生Phellibaumin E。Phellibaumin C很可能正是Phelligridin H的前体。Phellibaumin A可能是由Phelligridin D脱去一分子CO而来的。
phellibaumin D性状为金黄色粉末，结构式如下：
化合物Phellibaumin D罕有报道，没有相关药理活性文献报道，谱效关系不明确，因此制备该化合物对桑黄物质基础研究和药理活性研究具有重要意义；
鉴于以上技术背景及发展前景，提出本发明。
发明内容
本发明提供一种以桑黄药材为原料，采用二维液相色谱制备化合物PhellibauminD的方法，操作步骤如下：
1.作为优选，桑黄药材的提取采用60～80％乙醇水进行醇提，料液比1:15～50，浸泡10～24小时，加热水提1～3小时，提取2～3次，合并得到醇提液；
2.作为优选，采用膜过滤技术对醇提液进行陶瓷膜过滤，陶瓷膜滤芯孔径200～500nm，透过液浓缩至浓度为10～100mg/mL；
3.作为优选，所用一维色谱填料为耐纯水C18YE硅胶填料，对化合物PhellibauminD具有很好的富集效果，填料为粒径30～60μm，孔径为80～100
，富集获得化合物Phellibaumin D粗品；
4.为了实现一维制备富集化合物Phellibaumin D粗品的目的，本发明采用了以下制备方案：
制备采用的洗脱条件为甲醇或乙醇(有机相)与甲酸水或草酸水(水相)混合，按照有机相50～70％梯度，水相为甲酸或草酸比例为0.1～1.5％(v/v)，流速为0.1～0.2倍填料体积/min，温度20～40℃，载样量0.5～1.0％(样品液固体质量与填料质量之比)，检测器为DAD紫外检测器，洗脱时间为50～80min，按照检测器色谱峰曲线收集馏分，对所有馏分进行液相分析，确认Phellibaumin D馏分，合并后浓缩至10～50mg/mL为一维富集PhellibauminD粗品；
5.作为优选，二维制备采用高密度键合C18TDE硅胶填料，填料粒径为5～20μm，孔径为
制备获得纯度>90％化合物Phellibaumin D；
6.为了实现二维制备化合物Phellibaumin D的目的，本发明采用了以下制备方案：
二维液相色谱制备采用洗脱条件为甲醇或乙醇(有机相)与甲酸水或草酸水(水相)混合，按照有机相50～70％梯度或台阶等度，水相为甲酸或草酸比例为0.1～0.8％(v/v)，流速为0.2～0.3倍填料体积/min，温度20～40℃，载样量0.2～0.4％(样品液固体质量与填料质量之比)，检测器为DAD紫外检测器，洗脱时间为30～60min，按照检测器色谱峰曲线对Phellibaumin D的组分进行收集，所得馏分真空干燥，即可得到纯度>90％的化合物Phellibaumin D。
本发明具有如下优点：
本发明与现有技术相比具有以下特点：
1.对桑黄药材采用乙醇水的提取方式，可以更好的将弱极性物质提取出来，目标化合物Phellibaumin D浸出率更高。
2.一维制备富集采用耐纯水C18YE硅胶填料，可以对纯水相样品进行大体积上样，对化合物Phellibaumin D具有很好的富集效果，避免普通C18键合填料的键合相卷曲，失去保留的问题；二维制备采用高密度键合C18TDE硅胶填料，对化合物Phellibaumin D具有很好的保留，同时与一维制备也有很好的正交性、互补性，可以除去更多的杂质。
3.经过二维制备得到的化合物Phellibaumin D纯度高：由于本发明所用的技术方法，直接针对药材中所含的化合物Phellibaumin D进行制备，无需经过加热、酸碱的变化，化合物Phellibaumin D以在药材中本身存在的状态被制备出来，没有水解产物掺杂，因此得到的化合物Phellibaumin D纯度高，达到90％以上。
4.本发明所涉及的制备化合物Phellibaumin D的方法，重复性好，收率高，溶剂可回收利用，操作简便，仪器自动化程度高，可以满足大规模生产的需求。
附图说明
图1是实施例1的化合物Phellibaumin D一维制备谱图；
图2是实施例1的化合物Phellibaumin D二维制备谱图；
图3是实施例1的化合物Phellibaumin D液相分析谱图。
具体实施方式
现结合实例，对本发明做进一步说明。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。实例仅限于说明本发明，本发明不仅限于此。
实施例1
称取桑黄药材100g，加3L 70％乙醇水溶液，浸泡24小时；然后加热煮沸醇提8小时，收集醇提液，固体物料再次按加入3L水溶液重复加水煮沸提收集醇提液，得到桑黄药材醇提溶液，陶瓷膜膜过滤，陶瓷膜膜芯孔径为100nm，透过液浓缩至20mg/mL，得到陶瓷膜透过浓缩液。
一维制备条件，色谱条件采用C18YE填料(制备柱规格：100×250mm，粒径30μm，孔径
质量1200g，华谱新创科技有限公司)，流动相采用(A)甲醇(有机相)-(B)0.1％甲酸水(水相，v/v)，梯度洗脱方式：甲醇(流动相A)体积浓度由50％经60min提高到60％(其余为流动相B)梯度洗脱60min，采用DAD紫外检测器254nm选择吸收波长，制备温度25℃，进样量为300mL/针，载样量0.6％(样品溶液固体质量与填料质量之比)，流动相流速为300mL/min，按照检测器色谱峰曲线收集馏分，对所有馏分进行液相分析，确认Phellibaumin D馏分，合并后浓缩至50mg/mL，得到一维制备化合物Phellibaumin D粗品，纯度36.51％，收率86.9％。
二维制备条件，色谱条件采用高密度键合C18TDE硅胶填料(制备柱规格：50×250mm，粒径10μm，孔径
质量300g，华谱新创科技有限公司)，流动相选择(A)乙醇(有机相)-(B)含0.1％甲酸水(水相，v/v，采用体积浓度55％乙醇(流动相A)等度洗脱(其余为流动相B)，采用DAD紫外检测器254nm选择吸收波长，制备温度为25℃，进样量为20mL/针(一维制备的浓缩液浓度为50mg/mL)，流动相流速为60mL/min，按照检测器色谱峰曲线对Phellibaumin D的馏分进行收集(按色谱峰收集)，旋转蒸发至干，得到化合物Phellibaumin D化合物(产物经核磁和高分辨质谱结构解析，确定其为化合物Phellibaumin D)，经液相色谱分析，纯度为93.55％，收率91.1％。
实施例2
称取桑黄药材100g，加2L 50％乙醇水溶液，浸泡36小时；然后加热煮沸水提6小时，收集醇提液，固体物料再次加入2L50％乙醇水溶液，煮沸提取收集醇提液，合并得到醇提液，陶瓷膜膜过滤，陶瓷膜膜芯孔径为100nm，透过液浓缩至30mg/mL。
一维制备条件，色谱条件采用耐纯水C18YE硅胶填料(制备柱规格：100×250mm，粒径60μm，孔径
质量1200g，华谱新创科技有限公司)，流动相采用(A)乙醇(有机相)-(B)0.1％草酸水(水相，v/v)，台阶等度洗脱方式：纯水洗脱20min，乙醇(流动相A)体积浓度55％等度(其余为流动相B)洗脱60min，采用DAD紫外检测器254nm选择吸收波长，制备温度20℃，进样量为300mL/针，载样量0.75％(样品溶液固体质量与填料质量之比)，流动相流速为300mL/min，按照检测器色谱峰曲线收集馏分，对所有馏分进行液相分析，确认Phellibaumin D馏分，合并后浓缩至20mg/mL，得到一维制备化合物Phellibaumin D粗品，液相分析纯度46.82％，收率90.1％。
二维制备条件，色谱条件采用高密度键合C18TDE填料(制备柱规格：50×250mm，粒径10μm，孔径
质量300g，华谱新创科技有限公司)，流动相选择(A)甲醇(有机相)-(B)0.5％草酸水(水相，v/v)，采用体积浓度50％甲醇(流动相A)60min提高至65％甲醇(其余为流动相B)梯度洗脱，采用DAD紫外检测器254nm选择吸收波长，制备温度为15℃，进样量为20mL/针，流动相流速为60mL/min，按照检测器色谱峰曲线对Phellibaumin D的馏分进行收集(按色谱峰收集)，旋转蒸发至干，得到化合物Phellibaumin D化合物(产物经核磁和高分辨质谱结构解析，确定其为化合物Phellibaumin D)，经液相色谱分析，纯度为92.68％，收率93.5％。
对比例1
与实施例1不同之处在于，以非基团修饰的硅胶(100～200目)为分离材料，其它条件同实施例1，无法富集得到Phellibaumin D粗品，因此无法进行二维制备分离纯化，无法得到高纯化合物Phellibaumin D。
对比例2
与实施例1不同之处在于，用纯水对桑黄药材进行提取，其它条件同实施例1，水提液经过陶瓷膜过滤浓缩，通过一维制备富集得到化合物Phellibaumin D粗品，纯度36.82％，收率50.1％；经过二维制备分离纯化，化合物Phellibaumin D纯度为54.1％，收率61.82％。
对比例3
与实施例1不同之处在于，一维分离填料采用普通的十八烷基硅烷键合硅胶，其余制备条件相同，一维制备化合物Phellibaumin D粗品，液相分析纯度36.38％，收率40.1％。
二维分离填料采用普通的十八烷基硅烷键合硅胶，其余制备条件相同，经液相色谱分析，纯度为71.32％，收率66.1％。
Claims (5)
1.一种从桑黄药材中制备化合物Phellibaumin D的方法，步骤如下：
(1)将桑黄药材进行乙醇水煮沸提取，获得桑黄醇提液；
(2)将桑黄醇提液进行陶瓷膜过滤，得到陶瓷膜透过液，再浓缩得到陶瓷膜透过浓缩液；
(3)利用耐纯水C18YE硅胶填料将陶瓷膜透过浓缩液进行一维富集，获得化合物Phellibaumin D粗品；所用色谱填料为耐纯水C18YE硅胶填料,洗脱条件为甲醇、乙醇中的一种或二种有机相与酸水为水相作为流动相，水相为甲酸或草酸中的一种或二种，比例为0.05～5.0％(v/v)，按照有机相20～80％等度，20～80％线性梯度或台阶梯度，流速为0.05～1.5倍填料体积/min，温度10～60℃，载样量0.1～8.0％(样品溶液固体质量与填料质量之比)，检测器为DAD紫外检测器，洗脱时间为10～200min，按照检测器色谱峰曲线收集馏分，对所有馏分进行液相分析，确认Phellibaumin D馏分，合并后浓缩至20～200mg/mL为一维制备Phellibaumin D粗品；
(4)将化合物Phellibaumin D粗品进行二维色谱制备纯化，得到高纯化合物Phellibaumin D，所采用色谱填料为高密度键合C18TDE硅胶填料，洗脱条件为甲醇、乙醇中的一种或二种为有机相与酸水为水相作为流动相，水相为甲酸或草酸中的一种或两种，比例为0.1～3.0％(v/v)，按照有机相30～80％等度，30～80％线性梯度或台阶梯度，流速为0.05～1.5倍填料体积/min，温度10～60℃，载样量0.1～5.0％(样品溶液固体质量与填料质量之比)，检测器为DAD紫外检测器，洗脱时间为10～200min，按照检测器色谱峰曲线对Phellibaumin D的组分进行收集，所得馏分真空干燥，即可得到纯度>90％的化合物Phellibaumin D。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，利用乙醇水浓度40～95％(v/v)对桑黄药材进行醇提，料液比1:10～1:100(m/v)，浸泡1～48小时；然后加热煮沸提取1～10小时，收集醇提液，固体物料再次按料液比1:10～1:100(m/v)重复加乙醇水煮沸提取，收集醇提液，共重复提取1～5次，合并得到醇提液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用膜过滤技术对醇提液进行陶瓷膜过滤，陶瓷膜滤芯孔径20～1000nm，透过液浓缩至浓度为1.0～200mg/mL。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，对陶瓷膜透过浓缩液进行一维制备富集，所用色谱填料为C18YE硅胶填料，对化合物Phellibaumin D有很好的富集作用，填料为粒径5～200μm，孔径为
富集获得化合物Phellibaumin D粗品。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，二维制备所用色谱填料为高密度键合C18TDE硅胶填料，对化合物Phellibaumin D有很好的保留，同时与一维分离有很好的正交性，可以将更多的杂质进行分离去除，从而获得高纯化合物Phellibaumin D，填料粒径5～200μm，孔径为
制备获得纯度>90％化合物Phellibaumin D。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011398708.9A CN114573539A (zh) | 2020-12-02 | 2020-12-02 | 一种从桑黄药材中制备化合物Phellibaumin D的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011398708.9A CN114573539A (zh) | 2020-12-02 | 2020-12-02 | 一种从桑黄药材中制备化合物Phellibaumin D的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114573539A true CN114573539A (zh) | 2022-06-03 |
Family
ID=81768131
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011398708.9A Pending CN114573539A (zh) | 2020-12-02 | 2020-12-02 | 一种从桑黄药材中制备化合物Phellibaumin D的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114573539A (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104059080A (zh) * | 2014-03-24 | 2014-09-24 | 浙江省中医药研究院 | 火木层孔菌桑黄中单体成分Hypholomine B的制备方法 |
| CN109422780A (zh) * | 2017-09-05 | 2019-03-05 | 北京以岭药业有限公司 | 一种中药组合物中十八种成分的分离方法 |
-
2020
- 2020-12-02 CN CN202011398708.9A patent/CN114573539A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104059080A (zh) * | 2014-03-24 | 2014-09-24 | 浙江省中医药研究院 | 火木层孔菌桑黄中单体成分Hypholomine B的制备方法 |
| CN109422780A (zh) * | 2017-09-05 | 2019-03-05 | 北京以岭药业有限公司 | 一种中药组合物中十八种成分的分离方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| CHANG-SHENG WU: "Phenolic Compounds with Nf-κB Inhibitory Effects from the Fungus Phellinus baumii", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, vol. 42, 30 April 2011 (2011-04-30), pages 3 - 4 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102976909B (zh) | 一种从生姜中提取纯化6-姜酚的方法 | |
| CN101289478B (zh) | 一种红景天苷的分离制备方法 | |
| CN100439319C (zh) | 一种丹参酚酸a的制备方法 | |
| CN105859803B (zh) | 一种没食子酰基葡萄糖的制备方法 | |
| CN101838299B (zh) | 一种天然麦角甾苷的分离纯化方法 | |
| CN105503786B (zh) | 裂木脂素类化合物—荨麻裂环木脂素苷e及其制备方法 | |
| CN101289480A (zh) | 一种甘草苷的分离制备方法 | |
| CN111704544A (zh) | 一种半日花烷型二萜类化合物及其分离方法和应用 | |
| CN107837301B (zh) | 一种大叶蒟提取物及其制备方法与应用 | |
| CN1546503A (zh) | 虎杖苷和白藜芦醇的新制备方法 | |
| CN1268631C (zh) | 短瓣金莲花总黄酮和几种高纯度药用物质的制备工艺 | |
| CN108373474B (zh) | 一种从银杏叶中提取的银杏内酯化合物及其制备方法 | |
| CN114573539A (zh) | 一种从桑黄药材中制备化合物Phellibaumin D的方法 | |
| CN108272890B (zh) | 一种从木材加工副产物杨树皮脱脂后再提取酚酸类成分的制备方法 | |
| CN101024604B (zh) | 从龙血竭中分离纯化的二氢查耳酮化合物及其制备方法 | |
| CN110526890A (zh) | 一种从藤茶组织中分离纯化和鉴定二氢杨梅素的方法 | |
| CN114874098A (zh) | 一种从宿萼木中提取分离的化合物及其制备方法和应用 | |
| CN1864725A (zh) | 虎眼万年青活性提取物的制备方法及用途 | |
| CN109627153B (zh) | 一种从地木耳提取分离对羟基苯甲醛的方法 | |
| CN102093210A (zh) | 6种银杏酸单体的纯化制备方法 | |
| CN114573446B (zh) | 一种从桑黄药材中制备原儿茶酸的方法 | |
| CN110526891A (zh) | 一种从藤茶组织中分离纯化和鉴定花旗松素的方法 | |
| CN108530505A (zh) | 一种黄酮苷类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN113087749B (zh) | 唐古特虎耳草中一种新的杜鹃素糖苷类自由基抑制剂及其分离制备工艺和应用 | |
| CN101723953A (zh) | 从虎皮楠中分离提取两种双黄酮的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |