CN109415368A - 用于治疗感染性疾病的羧基6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中R1至R3如上所述。该化合物可用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染。

Description

用于治疗感染性疾病的羧基6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡 嗪化合物
本发明涉及用于哺乳动物的治疗和/或预防的有机化合物，特别是用于治疗乙型肝炎病毒感染的有机化合物，及其药物活性、制备、含有它们的药物组合物及其作为药物的潜在用途。
发明领域
本发明涉及式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，
或其可药用盐、对映体或非对映体，其中R1至R4如下所述。本发明的化合物可用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染。
乙型肝炎病毒(HBV)感染是世界范围内的主要公共卫生问题，世界上大约30％的人口显示当前或过去感染的血清学证据。尽管在20世纪80年代早期引入了安全有效的对抗病毒的预防性疫苗，但据估计全世界仍有超过2.4亿的慢性HBV携带者，其中很大一部分最终会发展为肝硬化或肝细胞癌(HCC)(WHO Hepatitis B.Fact Sheet N°204)。在2010年全球疾病负担研究中(R Lozano等人，Lancet，380(2012)，2095-2128)，HBV感染位列全球重点疾病之首，并且是导致死亡的第十大原因(每年780,000例死亡)。最近的研究表明，慢性HBV感染患者向肝硬化和HCC的进展与循环HBV DNA水平显着相关。因此，抗HBV的抗病毒治疗对于预防进展为肝硬化或HCC的发展至关重要。
HBV是一种小型包膜病毒，属于嗜肝DNA病毒家族。它含有部分双链DNA基因组，具有约3200个碱基对。HBV非常倾向于感染人肝细胞。当HBV通过其包膜蛋白附着于宿主细胞膜时，其生命周期开始。病毒进入的确切机制尚未完全阐明。含有核衣壳的病毒松弛环状DNA(rcDNA)被释放到细胞质并转运到细胞核中。在细胞核中，rcDNA由病毒和细胞酶修复，形成共价闭合的环状DNA(cccDNA)。有证据表明，每个感染的细胞含有1-50个cccDNA分子作为独特的游离型微染色体。利用细胞转录机制，从cccDNA转录亚基因组RNA(sgRNA)和前基因组RNA(pgRNA)。核输出后，pgRNA被翻译成核心蛋白和病毒聚合酶。sgRNA被翻译成调节性X蛋白和三种包膜蛋白。含RNA的病毒核衣壳的自组装通过pgRNA与核心蛋白和聚合酶形成复合物而发生。在核衣壳内，pgRNA被逆转录为负链DNA。然后通过来自负链DNA的正链合成产生rcDNA。核衣壳或者被重新导入细胞核以进行cccDNA扩增，或者被包裹并通过内质网(ER)释放。逆转录酶缺乏校对活性；因此，病毒基因组的突变频繁，并导致在感染个体中同时存在遗传上不同的病毒物种(准种)。
目前，已有七种治疗方法被批准用于慢性乙型肝炎(CHB)，包括两种干扰素(IFN)制剂(常规IFN和PEG-IFN)和五种核苷(核苷酸)类似物(NUC：拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦、替比夫定和替诺福韦酯)。免疫调节剂和NUC之间的主要区别在于，PEG-IFN具有使用持续时间有限的优点，而NUC的使用持续时间是不确定的。PEG-IFN的主要缺点是其不良事件的频率高。一些病毒基因型对干扰素治疗的反应不良。另一方面，长期使用NUC会带来耐药性的风险。CHB抗病毒治疗的最终目标是通过根除HBV或持续的病毒抑制来预防进展为肝硬化或HCC。目前治疗的大多数患者未能实现这一目标。如上所述，核衣壳组装是HBV基因组复制的关键步骤。由于病毒DNA的合成仅在核衣壳内发生，因此必须精确调节核衣壳的组装和分解以确保病毒基因组的正确包装和释放。核衣壳组装是一种限制HBV多样性的进化约束过程，它甚至对微小的分子干扰也非常敏感。核衣壳的组装和分解使得该过程成为开发针对各种HBV基因型和耐药性分离株的新抗病毒疗法的有吸引力的治疗靶标。已经报道了一些与衣壳有关的抗HBV化合物。例如，杂芳基二氢嘧啶(HAP)，包括名为Bay 41-4109、Bay38-7690和Bay 39-5493的化合物(Deres K.等人，Science 2003,893)，和苯基丙烯酰胺衍生物，例如AT 61和AT 130(Feld J.等人，Antiviral Research 2007,168-177)。衣壳已经成为一种有前景的药物靶标，已有多种分子处于临床阶段。仍然需要开发用于预防和治疗乙型肝炎病毒感染的新疗法。
发明概述
本发明涉及式(I)的新化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，
其中
R1是被羧基C1-6烷基取代的氧代氧杂二氮杂双环[3.3.1]壬基；或
氧代吡咯烷基，所述氧代吡咯烷基被羧基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基、羧基苯基、羧基吡啶基、羧基苯基氨基、卤代羧基苯基或羧基吡咯烷基取代一次；或被羧基吡咯烷基和C1-6烷基取代两次；
R2是H或C1-6烷基；
R3是C1-6烷基；
R4是苯基，所述苯基被卤素取代三次。
本发明的目的是式(I)的新化合物、其制备、基于本发明化合物的药物及其生产，以及式(I)化合物作为HBV抑制剂和用于治疗或预防HBV感染的用途。
发明详述
定义
术语“C1-6烷基”表示1-6个碳原子的一价直链或支链饱和烃基。在具体的实施方案中，C1-6烷基基于1至6个碳原子，在更具体的实施方案中，具有1至4个碳原子。C1-6烷基的例子包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基。
术语“卤代”或“卤素”在本文中可互换使用并且表示氟、氯、溴或碘。
术语“羧基苯基”表示其中苯基的一个氢原子被羧基取代了的苯基。
术语“卤代羧基苯基”表示其中苯基的至少一个氢原子被卤素取代了的羧基苯基基团。卤代羧基苯基的例子是氯羧基苯基、氟羧基苯基、二氟羧基苯基和氯氟羧基苯基。
术语“氧代”表示二价氧原子＝O。
术语“非对映体”是指具有两个或多个手性中心并且其分子不互为镜像的立体异构体。非对映体具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱特性和反应性。
术语“对映体”是指化合物的两种彼此互为不能重叠的镜像的立体异构体。
术语“可药用盐”表示没有生物学或其他方面的不受欢迎之处的盐。可药用盐包括酸加成盐和碱加成盐。
术语“可药用酸加成盐”表示与无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸和选自下列的有机酸形成的那些可药用盐：脂族、环脂族、芳族、芳脂族、杂环、羧酸和磺酸类有机酸，例如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、天冬氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、邻氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、扑酸、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸和水杨酸。
术语“可药用碱加成盐”表示与有机或无机碱形成的那些可药用盐。可接受的无机碱的实例包括钠、钾、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰和铝盐。衍生自可药用有机无毒碱的盐包括伯、仲和叔胺、取代的胺，包括天然存在的取代的胺、环胺和碱性离子交换树脂的盐，例如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙基氨基乙醇、三甲胺、二环己基胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、哈胺、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶和多胺树脂的盐。
包含一个或多个手性中心的通式(I)的化合物可以以外消旋体、非对映体混合物或光学活性的单一异构体的形式存在。可以根据已知方法将外消旋体分离成对映体。具体地讲，通过与光学活性的酸例如D-或L-酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或樟脑磺酸反应从外消旋混合物形成可以通过结晶分离的非对映异构体盐。
HBV的抑制剂
本发明提供了(i)具有通式(I)的新化合物或其可药用盐、对映体或非对映体
其中
R1是被羧基C1-6烷基取代的氧代氧杂二氮杂双环[3.3.1]壬基；或
氧代吡咯烷基，所述氧代吡咯烷基被羧基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基、羧基苯基、羧基吡啶基、羧基苯基氨基、卤代羧基苯基或羧基吡咯烷基取代一次；或被羧基吡咯烷基和C1-6烷基取代两次；
R2是H或C1-6烷基；
R3是C1-6烷基；
R4是苯基，所述苯基被卤素取代三次。
本发明的又一个实施方案是式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中
R1是被羧基C1-6烷基取代的氧代氧杂二氮杂双环[3.3.1]壬基；或
氧代吡咯烷基，所述氧代吡咯烷基被羧基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基、羧基苯基、羧基苯基氨基、卤代羧基苯基或羧基吡咯烷基取代一次；或被羧基吡咯烷基和C1-6烷基取代两次；
R2是H或C1-6烷基；
R3是C1-6烷基；
R4是苯基，所述苯基被卤素取代三次。
本发明的又一个实施方案是(ii)式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中
R1是羧基甲基(甲基)氨基氧代吡咯烷基、羧基吡咯烷基氧代吡咯烷基、羧基吡咯烷基(甲基)氧代吡咯烷基、羧基苯基氧代吡咯烷基、羧基吡啶基氧代吡咯烷基、羧基苯基氨基氧代吡咯烷基、氟羧基苯基氧代吡咯烷基或羧基甲基氧代氧杂二氮杂双环[3.3.1]壬基；
R2是H或甲基；
R3是甲基；
R4是三氟苯基。
本发明的又一个实施方案是式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，其中
R1是羧基甲基(甲基)氨基氧代吡咯烷基、羧基吡咯烷基氧代吡咯烷基、羧基吡咯烷基(甲基)氧代吡咯烷基、羧基苯基氧代吡咯烷基、羧基苯基氨基氧代吡咯烷基、氟羧基苯基氧代吡咯烷基或羧基甲基氧代氧杂二氮杂双环[3.3.1]壬基；
R2是H或甲基；
R3是甲基；
R4是三氟苯基。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的具体化合物(iii)选自：
(2S)-1-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸；
(2S)-1-[(2S)-2-甲基-1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸；
2-[甲基-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]氨基]乙酸；
(2R)-1-[(2S)-2-甲基-1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸；
1-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-3-甲酸；
(2S)-1-[1-[(6S,7S)-6,7-二甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸；
2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸；
3-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸；
(2R)-1-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸；
3-氟-2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸；
2-氟-6-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸；
2-[[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]氨基]苯甲酸；
2-[7-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-6-氧代-3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]乙酸；
4-氟-2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸；
5-氟-2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸；
4-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸；
6-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡啶-2-甲酸；和
2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡啶-3-甲酸。
合成
本发明的化合物可以通过任何常规手段制备。用于合成这些化合物的合适方法以及它们的起始原料在以下流程和实施例中提供。除非另有指明，所有取代基，特别是R1至R4如上所定义。此外，除非另有明确说明，否则所有反应、反应条件、缩写和符号具有有机化学领域的普通技术人员熟知的含义。
方案1:
式IV的化合物(环A)是被羧基C1-6烷基取代的氧代氧杂二氮杂双环[3.3.1]壬烷；或是氧代吡咯烷，所述氧代吡咯烷被羧基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基、羧基苯基、羧基苯基氨基、卤代羧基苯基或羧基吡咯烷基取代一次，或被羧基吡咯烷基和C1-6烷基取代两次。X是溴或碘。
如方案1中所示，本发明化合物的合成可以从式(II)的双环化合物开始，将其用卤化试剂例如N-碘琥珀酰亚胺或N-溴琥珀酰亚胺处理，得到式(III)的化合物。式(III)化合物和式(IV)化合物在铜催化剂例如CuI存在下的偶联反应生成式(V)的化合物。随后在酸性条件下例如HCl/EtOAc或TFA/DCM条件下的Boc脱保护以及与胺R3NH2在光气等效物例如三光气和羰基二咪唑的存在下形成脲，可以得到最终的式(I)的化合物。在上述的脲形成反应中，还使用了适宜的异氰酸酯或氨基甲酸苯酯(Padiya,K.J.等人,Org Lett.2012,14,2814以及其中引用的参考文献)。
本发明还涉及制备式(I)化合物的方法，其包括如下反应:
(a)将式(V)的化合物与酸反应，
然后与胺R4NH2在光气等效物的存在下形成脲；
其中R1和R4如上所定义。
在步骤(a)中，酸可以是例如HCl/EtOAc和TFA/DCM；光气等效物可以是例如三光气和羰基二咪唑。
按照上述方法制备的式(I)化合物也是本发明的目的之一。
药物组合物和给药
另一个实施方案提供含有本发明的化合物和治疗上惰性的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物或药物，以及使用本发明的化合物来制备这些组合物和药物的方法。在一个实施例中，式(I)的化合物可以通过在环境温度下、在适当pH下并以所需的纯度与生理学可接受的载体(即，在所采用的剂量和浓度下对接受者是无毒的载体)混合而配制成盖仑制剂给药形式。制剂的pH主要取决于化合物的具体用途和浓度，但通常优选约3至约8的范围。在一个实施例中，式(I)的化合物在pH 5的乙酸盐缓冲液中配制。在另一个实施方案中，式(I)的化合物是无菌的。化合物可以例如作为固体或无定形组合物、作为冻干制剂或作为水溶液储存。
组合物以符合良好医学实践的方式进行配制、定剂量和给药。在此上下文中考虑的因素包括被治疗的具体病症、被治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床病症、病症的病因、药剂的递送部位、给药方法、给药时间安排和执业医师已知的其他因素。要给药的化合物的“有效量”将受这些考虑控制，并且是抑制血清HBV DNA水平，或HBeAg血清转化为HBeAb，或HBsAg消失或丙氨酸氨基转移酶水平正常化和肝脏组织学改善所需的最小量。例如，这样的量可以低于对正常细胞或哺乳动物整体有毒的量。
在一个实施例中，每个剂量胃肠外给药的本发明化合物的药物有效量将在约0.01至100mg/kg，或者约0.1至20mg/kg患者体重/天的范围内，其中所使用的化合物的典型初始范围为0.3至15mg/kg/天。在另一个实施方案中，口服单位剂型如片剂和胶囊含有约0.1至约1000mg的本发明化合物。
本发明的化合物可以通过任何合适的方式给药，包括经口、局部(包括含服和舌下)、直肠、阴道、透皮、胃肠外、皮下、腹膜内、肺内、皮内、鞘内和硬膜外及鼻内给药，以及在期望用于局部治疗时，病变内给药。胃肠外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给药。
本发明的化合物可以以任何方便的给药形式给药，例如片剂、散剂、胶囊、溶液、分散液、混悬剂、糖浆剂、喷雾剂、栓剂、凝胶、乳液、贴剂等。这些组合物可以含有药物制剂中常见的组分，例如稀释剂、载体、pH调节剂、甜味剂、填充剂和其他活性物质。
典型制剂通过混合本发明的化合物和载体或赋形剂进行制备。合适的载体和赋形剂是本领域技术人员熟知的并且详细记载于例如Ansel,Howard C.等人,Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2004；Gennaro,Alfonso R.等人,Remington:The Science and Practice of Pharmacy.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins,2000；和Rowe,Raymond C.Handbook of Pharmaceutical Excipients.Chicago,PharmaceuticalPress,2005。制剂还可以包含一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、矫味剂、稀释剂和其它公知的添加剂，以便使药物(即本发明的化合物或其药物组合物)具有优美的外观或有助于药物产品(即药物)的生产。
适合的口服剂型的实例是包含约0.1mg至1000mg本发明的化合物、约30mg至90mg无水乳糖、约5mg至40mg交联羧甲基纤维素钠、约5mg至30mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30和约1mg至10mg硬脂酸镁的片剂。首先将粉状成分混合在一起，然后与PVP的溶液混合。可以将所得组合物干燥、制粒、与硬脂酸镁混合并使用常规设备压制成片剂。气雾剂制剂的一个实例可以通过将例如5mg至400mg的本发明化合物溶解在合适的缓冲溶液例如磷酸盐缓冲液中，在需要时添加张力剂例如盐如氯化钠而制备。所述溶液可以过滤，例如使用0.2微米滤器过滤，以除去杂质和污染物。
因此，一个实施方案包括包含式(I)的化合物或其立体异构体或可药用盐的药物组合物。在另一个实施方案中，包括包含式(I)的化合物或其立体异构体或可药用盐以及可药用载体或赋形剂药物组合物。
适应症和治疗方法
本发明的化合物可以抑制HBV的DNA合成并降低HBV DNA水平。因此，本发明的化合物可用于治疗或预防HBV感染。
本发明涉及式(I)的化合物用于治疗或预防HBV感染的用途。
本发明的一个目的是式(I)的化合物在制备用于治疗或预防与HBV感染有关的疾病的药物中的用途。
本发明尤其涉及式(I)的化合物在制备用于治疗或预防HBV感染的药物中的用途。
另一个实施方案包括一种治疗或预防HBV感染的方法，所述方法包括施用有效量的式(I)的化合物、其立体异构体、互变异构体、前药或可药用盐。
实施例
通过参考以下实施例将更全面地理解本发明。然而，它们不应被解释为限制本发明的范围。
文中使用的缩写如下:
CbzCl: 氯甲酸苄酯
DCE: 1,2-二氯乙烯
DIAD: 偶氮二甲酸二异丙酯
DIPEA: N,N-二异丙基乙基胺
EA或EtOAc: 乙酸乙酯
EC50: 半数最大有效浓度
HPLC: 高效液相色谱
LCMS 液相色谱-质谱
MS: 质谱
MsCl: 甲磺酰氯
NIS: N-碘琥珀酰亚胺
PE: 石油醚
prep-HPLC: 制备型高效液相色谱
prep-TLC: 制备型薄层色谱
psi: 磅/平方英寸
SFC: 超临界流体色谱
TEA: 三甲胺
t-BuXPhos: 2-二-叔丁基膦-2′,4′,6′-三异丙基联苯
TMG: 1,1,3,3-四甲基胍
Pd2(dba)3: 三(二亚苄基丙酮)二钯(0)
pgRNA: 前基因组RNA
qPCR: 定量聚合酶链反应
v/v 体积比
通用实验条件
中间体和最终化合物通过快速色谱使用以下仪器之一进行纯化：i)Biotage SP1系统和Quad 12/25Cartridge组件；ii)ISCO组合快速色谱仪。硅胶品牌和孔径：i)KP-SIL粒度：40-60μm；ii)CAS注册号：硅胶：63231-67-4，粒度：47-60微米硅胶；iii)来自青岛海洋化工股份有限公司(Qingdao Haiyang Chemical Co.,Ltd)的ZCX，孔：200-300或300-400。
中间体和最终化合物通过使用X BridgeTM Perp C18(5μm,OBDTM30×100mm)柱或SunFireTM Perp C18(5μm,OBDTM 30×100mm)柱的反相柱制备型HPLC纯化。Waters AutoP纯化系统(柱:XBridgeTM Prep-C18,30×100mm,样品管理器2767,泵2525,检测器:MicromassZQ和UV2487,溶剂系统:乙腈和0.1％氢氧化铵水溶液)。
化合物的LC/MS光谱使用LC/MS(WatersTM Alliance 2795-Micromass ZQ)获得。LC/MS条件如下(运行时间6分钟):
酸性条件：A：0.1％甲酸的H2O溶液；B：0.1％甲酸的乙腈溶液；
碱性条件：A：0.1％NH3·H2O的H2O溶液；B：乙腈；
中性条件：A：H2O；B：乙腈。
质谱(MS)：通常仅报告指示母核质量的离子，并且除非另有说明，引述的质量离子是正质量离子(M+H)+。
微波辅助反应在Biotage Initiator Sixty或CEM Discover中进行。
NMR谱图使用Bruker Avance 400MHz获得。
所有涉及空气敏感试剂的反应均在氩气氛下进行。除非另有说明，试剂在从商业供应商处获得后不经进一步纯化直接使用。
以下实施例旨在说明本发明的含义，但决不代表对本发明含义的限制。
制备实施例
通过参考以下实施例将更全面地理解本发明。然而，它们不应被解释为限制本发明的范围。
中间体I-1
(6S)-3-碘-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯
中间体I-1按照如下方案制备：
步骤1：N-[(1S)-2-羟基-1-甲基-乙基]-N-(1H-吡唑-5-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物I-1b)的制备
向1H-吡唑-5-甲醛(化合物I-1a,54.0g,562.5mmol)的MeOH(300mL)溶液中加入(2S)-2-氨基丙-1-醇(41.2g,675mmol)并将反应混合物于25℃搅拌1小时。于0℃下加入NaBH4(25.9g,675.0mmol)并将反应混合物继续搅拌1小时，然后加入H2O(300mL)和Boc2O(147.1g,675.0mmol)。将形成的混合物在室温下搅拌12小时，然后用EtOAc(600mL)萃取。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：0％～5％MeOH的DCM溶液)得到无色油状的化合物I-1b(80g)。LCMS(M+H+):334。
步骤2：[(2S)-2-[叔丁氧基羰基(1H-吡唑-5-基甲基)氨基]丙基]甲磺酸酯(化合物I-1c)的制备
向N-[(1S)-2-羟基-1-甲基-乙基]-N-(1H-吡唑-5-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物I-1b,80.0g,117.2mmol)和Et3N(100.5g,995.6mmol)在DCM(800mL)中的混合物中在0℃下缓慢加入MsCl(57.3g,497.8mmol)。将形成的混合物在室温下搅拌2小时，然后用水(500mL)、盐水(500mL)洗涤并用Na2SO4干燥。将有机层浓缩得到化合物I-1c(100g,粗品)，将其直接用于下一步骤。
步骤3：(6S)-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(化合物I-1d)的制备
向[(2S)-2-[叔丁氧基羰基(1H-吡唑-5-基甲基)氨基]丙基]甲磺酸酯(化合物I-1c,100.0g,313.4mmol)的DMF(1000mL)溶液中在0℃下分批加入NaH(15.0g,376.2mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌12小时，倒入水(2000mL)并用EtOAc(1000mL)萃取两次。将合并的有机层浓缩并将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：10％～80％EtOAc的石油醚溶液)得到无色油状的化合物I-1d(18.0g)。LCMS(M+H+):238。
步骤4：(6S)-3-碘-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(中间体I-1)的制备
向6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(化合物53c,3.3g,14.8mmol)的CH3CN(40mL)溶液中缓慢加入NIS(5.0g,22.1mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时然后用EtOAc(50mL)萃取并用盐水(50mL)洗涤。将有机层用硫酸钠干燥并浓缩，将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：10％～80％EtOAc的石油醚溶液)得到白色固体状中间体I-1(4.8g)。
中间体I-2
(6S,7S)-3-碘-6,7-二甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯
中间体I-2按照如下方案制备：
步骤1：(4R,5R)-4,5-二甲基-1,3,2-二氧杂硫杂环戊烷2,2-二氧化物(化合物I-2b)的制备
将SOCl2(7.26g,4.45mL,61mmol)的DCM(50mL)溶液在0℃下滴加到搅拌中的(2R,3R)-丁-2,3-二醇(5g,55.5mmol)、咪唑(18.9g,277mmol)和三乙胺(19.6g,27.1mL,194mmol)在DCM(200mL)中的混合物中并将反应混合物在0℃下搅拌1小时。将反应混合物用H2O终止反应并用DCM萃取两次。将合并的有机层用水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩得到残余物。向搅拌中的粗品残余物的乙腈(200mL)溶液中在0℃下依次加入高碘酸钠(17.8g,83.2mmol)、水(150mL)和氯化铑(III)(1.16g,5.55mmol)并将反应混合物于0℃搅拌3小时。将两层分离并将水层用EtOAc萃取三次。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，然后用硫酸镁干燥，过滤并浓缩得到无色油状的化合物I-2b(8g)。
步骤2：(2R,3S)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丁-2-醇(化合物I-2c)的制备
将(4R,5R)-4,5-二甲基-1,3,2-二氧杂硫杂环戊烷2,2-二氧化物(化合物I-2b,8g,52.6mmol)、4-溴-1H-吡唑(11.6g,78.9mmol)和Cs2CO3(34.3g,105mmol)在DMF(50mL)中的混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物过滤并浓缩。将得到的残余物溶于400mLTHF/50％aq.H2SO4(v/v 1/2)并剧烈搅拌48小时。然后将反应混合物小心地用10M NaOH水溶液碱化并将各层分离。将水层用DCM萃取两次并将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩得到无色油状的化合物I-2c(8g)。LCMS(M+H+):219
步骤3：2-((2S,3S)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丁-2-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物I-2d)的制备
向(2R,3S)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丁-2-醇(化合物I-2c,8g,36.5mmol)、异二氢吲哚-1,3-二酮(5.91g,40.2mmol)和三苯基膦(12.5g,47.5mmol)在THF(75mL)中的混合物中在室温下滴加DIAD(11.1g,54.8mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌2小时并真空浓缩。将粗产物通过快速色谱纯化(硅胶,0％至50％EtOAc的己烷溶液)得到白色固体状的化合物I-2d(5g)。LCMS(M+H+):348
步骤4：(2S,3S)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丁-2-胺(化合物I-2e)的制备
将2-((2S,3S)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丁-2-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物I-2d,5g,14.4mmol)和水合肼(7.19g,144mmol)在MeOH(50mL)中的混合物于80℃搅拌15小时。将反应混合物真空浓缩。将残余物溶于DCM，将固体滤出并将滤液浓缩得到浅黄色油状的化合物I-2e(3g)。LCMS(M+H+):218
步骤5：(2S,3S)-N-苄基-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丁-2-胺(化合物I-2f)的制备
将(2S,3S)-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丁-2-胺(化合物I-2e,3g,13.8mmol)和苯甲醛(1.61g,15.1mmol)在MeOH(50mL)中的混合物在室温下搅拌2小时。然后在0℃下在30分钟内缓慢加入硼氢化钠(624mg,16.5mmol)并将反应混合物在室温下继续搅拌30分钟。将反应混合物倒入100mL H2O中并用EtOAc(100mL)萃取两次。将合并的有机层用硫酸钠干燥然后真空浓缩。将粗产物通过快速色谱纯化(硅胶,0％至50％EtOAc的己烷溶液)得到淡黄色油状的化合物I-2f(4g)。LCMS(M+H+):308
步骤6：(6S,7S)-5-苄基-3-溴-6,7-二甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪(化合物I-2g)的制备
向搅拌中的(2S,3S)-N-苄基-3-(4-溴-1H-吡唑-1-基)丁-2-胺(化合物I-2f,4g,13mmol)的乙腈(50mL)溶液中加入低聚甲醛(1.95g,64.9mmol)和2,2,2-三氟乙酸(296mg,2.6mmol)并将反应混合物于70℃搅拌6小时。将反应混合物浓缩并将残余物溶于EtOAc，然后用NaHCO3水溶液和盐水洗涤。将有机层浓缩并将残余物在硅胶柱上纯化(庚烷:EtOAc1:0至9:1)得到无色油状的化合物I-2g(2.3g)。LCMS(M+H+):320
步骤7：(6S,7S)-6,7-二甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(化合物I-2h)的制备
将(6S,7S)-5-苄基-3-溴-6,7-二甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪(化合物I-2g,1.5g,4.68mmol)、二碳酸二叔丁酯(2.18mL,9.37mmol)和Pd(OH)2/C(329mg)在MeOH(50mL)中的混合物加热至50℃并在氢气氛下搅拌15小时。然后将固体滤出并将滤液浓缩。将残余物溶于THF/MeOH(v/v 5:1,50ml)，加入二碳酸二叔丁酯(2.18ml,9.37mmol)和Na2CO3(496mg,4.68mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时然后用硅藻土过滤，将滤液浓缩并将粗品物质通过快速色谱纯化(硅胶,10％至50％EtOAc的己烷溶液,EtOAc含10％MeOH)。LCMS(M+H+):252。
步骤8：(6S,7S)-3-碘-6,7-二甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(中间体I-2)的制备
向(6S,7S)-6,7-二甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-甲酸叔丁酯(化合物I-2h,1.2g,4.77mmol)的MeCN(20mL)溶液中加入NIS(1.61g,7.16mmol)然后在室温下搅拌16小时。将反应混合物用NaHSO3水溶液终止反应，用EtOAc萃取，干燥并浓缩。将粗品物质通过快速色谱纯化(硅胶,0％至50％EtOAc的己烷溶液)得到1.2g无色油状的中间体I-2。LCMS(M+H+):378。
中间体I-3
N-(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酸苯酯
中间体I-3按照如下方案制备：
向3,4,5-三氟苯胺(1.47g,10mmol)的DCM(30mL)溶液中加入DIPEA(2.06mL,12mmol)，然后在0℃下滴加氯甲酸苯酯(1.38mL,11mmol)。加完后，将反应混合物升温至室温并搅拌过夜。将反应混合物用DCM稀释，用水洗涤。将有机相分离，用Na2SO4干燥并浓缩。将残余物通过柱色谱纯化得到1.87g白色固体状中间体I-3。LCMS(M+H+):268。
实施例1
(2S)-1-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸
标题化合物按照如下方案制备：
步骤1：(2S)-1-(5-氧代吡咯烷-3-基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(化合物1b)的制备
将吡咯烷-2,4-二酮(化合物1a,200mg,2.02mmol)、(2S)-吡咯烷-2-甲酸甲酯(334mg,2.02mmol)和Pd/C(100mg)在MeOH(20mL)中的混合物在50psi H2气氛下室温搅拌40小时。将反应混合物过滤并将滤液浓缩得到棕色油状的化合物1b(400mg,粗品)。
步骤2：(6S)-3-[4-[(2S)-2-甲氧基羰基吡咯烷-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基]-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(化合物1c)的制备
将(2S)-1-(5-氧代吡咯烷-3-基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(化合物1b,400mg)、(6S)-3-碘-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(中间体I-1,684mg,1.88mmol)、(1R,2R)-N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺(54mg,0.38mmol)、CuI(72mg,0.38mmol)和K3PO4(800mg,3.78mmol)在二恶烷(20mL)中的混合物脱气并用N2回填，于110℃在氮气氛下搅拌16小时。将反应混合物过滤，将滤液浓缩并将粗产物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状化合物1c(200mg)。LCMS(M+H+):448.3。
步骤3：(2S)-1-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸甲酯(化合物1d)的制备
向(6S)-3-[4-[(2S)-2-甲氧基羰基吡咯烷-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基]-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(化合物1c,200mg,0.447mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入HCl的MeOH溶液(4M,5mL,20mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后浓缩得到棕色固体状粗品物质(0.18g)。将固体溶于DMF(4mL)，向其中加入DIPEA(0.16g,1.18mmol)和N-(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酸苯酯(中间体I-3,0.15g,0.56mmol)。将反应混合物于30℃搅拌12稀释，用H2O(20mL)稀释并用EtOAc萃取三次(每次20mL)。将合并的有机相浓缩并将得到的残余物通过制备型TLC纯化(DCM/MeOH＝10/1)得到棕色固体状化合物1d(0.15g)。LCMS(M+H+):521.4
步骤4：(2S)-1-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸(实施例1)的制备
向(2S)-1-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸甲酯(化合物1d,150mg,0.28mmol)在MeOH(2mL)和H2O(1mL)中的混合物中加入LiOH(28mg,1.15mmol)，将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后用2M HCl水溶液酸化至pH＝5并浓缩。将得到的残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状的实施例1(30mg)。LCMS(M+H+):507.2,1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 7.71-7.61(m,1H),7.40-7.24(m,2H),5.15-5.05(m,1H),5.05-4.92(m,1H),4.58-4.45(m,1H),4.40-3.90(m,6H),3.90-3.75(m,1H),3.26-3.15(m,1H),3.15-2.85(m,2H),2.56-2.42(m,1H),2.31-2.20(m,1H),2.20-2.04(m,1H),2.04-1.88(m,1H),1.32-1.24(m,3H)。
实施例2
(2S)-1-[(2S)-2-甲基-1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸
标题化合物按照如下方案制备：
步骤1：(2S)-3-[(2S)-2-甲氧基羰基吡咯烷-1-基]-2-甲基-5-氧代-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(化合物2b)的制备
向(2S)-2-甲基-3,5-二氧代-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(500mg,2.34mmol,合成参见Hosseini,M.等人,Org.Letters 2006,8,2103)在DCE(10mL)中的混合物中加入(2S)-吡咯烷-2-甲酸甲酯(395mg,2.81mmol)和AcOH(5滴)，将反应混合物在40℃下搅拌5小时，然后加入NaCNBH3(294mg,4.68mmol)。将反应混合物于40℃搅拌12小时然后用EtOAc(100mL)稀释，过滤并将滤液浓缩，将残余物通过柱色谱纯化(PE/EtOAc＝1/1)得到无色油状的粗品化合物2b(1.2g,粗品)。
步骤2：(2S)-1-[(2S)-2-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸甲酯(化合物2c)的制备
向(2S)-3-[(2S)-2-甲氧基羰基吡咯烷-1-基]-2-甲基-5-氧代-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(化合物2b,1.2g,粗品)在EtOAc(5mL)中的混合物中加入HCl(20mL L,80mmol,4M的二恶烷溶液)，将反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到无色油状的化合物2c(186mg)。LCMS(M+H+):227.0。
步骤3：(6S)-3-[(2S)-3-[(2S)-2-甲氧基羰基吡咯烷-1-基]-2-甲基-5-氧代-吡咯烷-1-基]-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(化合物2d)
向(6S)-3-碘-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(中间体I-1,482mg,1.33mmol)的二恶烷(20mL)溶液中加入(2S)-1-[(2S)-2-甲基-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸甲酯(349mg,1.54mmol)、(1R,2R)-N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺(39mg,0.27mmol)、K3PO4(565mg,2.66mmol)和CuI(52mg,0.27mmol)。将反应混合物在氮气氛下于110℃搅拌12小时，然后用EtOAc(50mL)稀释，过滤，将滤液浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到棕色固体状化合物2d(0.25g)。LCMS:(M+H+)462.2
步骤4：(2S)-1-[(2S)-2-甲基-1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸甲酯(化合物2e)的制备
向(6S)-3-[(2S)-3-[(2S)-2-甲氧基羰基吡咯烷-1-基]-2-甲基-5-氧代-吡咯烷-1-基]-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(化合物2d,250mg,0.54mmol)的EtOAc(5mL)溶液中加入HCl(10mL,40mmol,4M的EtOAc溶液)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后浓缩得到棕色残余物(220mg)。将残余物(150mg)溶于DMF(2mL)，向其中加入DIPEA(128mg,0.95mmol)和N-(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酸苯酯(中间体I-3,113mg,0.42mmol)。将反应混合物在室温下搅拌12小时，用H2O(20mL)稀释并用EtOAc萃取3次。将合并的有机相干燥并浓缩得到棕色固体状化合物2e(249mg,粗品)。LCMS:(M+H+)535.2。
步骤5：(2S)-1-[(2S)-2-甲基-1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸(实施例2)的制备
向(2S)-1-[(2S)-2-甲基-1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸甲酯(化合物2e,249mg)在THF/H2O(4mL,v/v 3/1)中的混合物中加入LiOH·H2O(49mg,1.14mmol)，将反应混合物在室温下搅拌3小时。将反应液酸化至pH＝5，浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到白色固体状实施例2(77mg)。LCMS(M+H+):520.9，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 7.61(s,1H),7.34-7.21(m,2H),5.01(d,J＝16.9Hz,1H),4.97-4.90(m,1H),4.49-4.37(m,2H),4.36-4.28(m,3H),4.22-4.15(m,1H),3.90-3.78(m,1H),3.45-3.30(m,1H),3.06(dd,J＝11.2,16.1Hz,1H),2.78(dd,J＝7.7,16.1Hz,1H),2.63-2.50(m,1H),2.31-2.09(m,3H),1.43(d,J＝6.5Hz,3H),1.23(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例3
2-[甲基-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]氨基]乙酸
实施例3按照与实施例1类似的方法，通过用2-(甲基氨基)乙酸甲酯代替(2S)-吡咯烷-2-甲酸甲酯进行制备。得到白色固体状的实施例3(10mg)。LCMS(M+H+):480.9，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 7.70-7.65(m,1H),7.30-7.20(m,2H),5.10-5.01(m,1H),4.95-4.73(m,1H),4.47(d,J＝17.1Hz,1H),4.44-4.34(m,1H),4.32-4.00(m,6H),3.10–2.85(m,5H),1.30–1.15(m,3H)。
实施例4
(2R)-1-[(2S)-2-甲基-1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸
实施例4按照与实施例2类似的方法，通过用(2R)-吡咯烷-2-甲酸甲酯代替(2S)-吡咯烷-2-甲酸甲酯进行制备。得到白色固体状的实施例4(38mg)。LCMS(M+H+):520.9，1HNMR:(400MHz,甲醇-d4)δppm 7.62(s,1H),7.35-7.23(m,2H),5.04(d,J＝17.1Hz,1H),5.00–4.85(m,1H),4.53-4.40(m,3H),4.38-4.27(m,2H),4.23-4.15(m,1H),3.80–3.70(m,1H),3.45-3.35(m,1H),3.07(dd,J＝9.5,16.4Hz,1H),2.96-2.87(m,1H),2.59-2.47(m,1H),2.45-2.36(m,1H),2.28-2.16(m,1H),2.15-2.03(m,1H),1.37(d,J＝6.3Hz,3H),1.25(d,J＝6.9Hz,3H)。
实施例5
1-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-3-甲酸
实施例5按照与实施例1类似的方法，通过用吡咯烷-3-甲酸甲酯代替(2S)-吡咯烷-2-甲酸甲酯进行制备。得到白色固体状的实施例5(10mg)。LCMS(M+H+)506.9，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.19(s,1H),8.30(br s,1H),7.61(s,0.5H),7.60(s,0.5H),7.48-7.38(m,2H),5.03-4.92(m,1H),4.91-4.80(m,1H),4.44-4.32(m,1H),4.24-4.15(m,1H),4.14-4.06(m,1H),3.89-3.83(m,2H),3.50-3.40(m,1H),3.22-3.11(m,1H),2.98-2.86(m,1H),2.86-2.75(m,1H),2.70-2.50,3H),2.48-2.32(m,1H),2.05-1.90(m,2H),1.20-1.05(m,3H)。
实施例6
(2S)-1-[1-[(6S,7S)-6,7-二甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸
实施例6按照与实施例1类似的方法，通过用(6S,7S)-3-碘-6,7-二甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(中间体I-2)代替(6S)-3-碘-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(中间体I-1)进行制备。经制备型HPLC纯化得到实施例6的两种异构体，实施例6-1和实施例6-2。
得到白色固体状的实施例6-1(14mg)。LCMS(M+H+):521.2，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 7.64(s,1H),7.55-7.40(m,2H),5.21(d,J＝17.0Hz,1H),4.82(q,J＝6.8Hz,1H),4.52(d,J＝17.0Hz,1H),4.38(q,J＝6.5Hz,1H),4.31-4.15(m,2H),4.03(dd,J＝4.5,9.7Hz,1H),3.98-3.80(m,2H),3.20(dt,J＝6.6,10.6Hz,1H),3.14-3.03(m,1H),2.99-2.89(m,1H),2.58-2.41(m,1H),2.34-2.22(m,1H),2.15(tdd,J＝3.2,6.6,13.2Hz,1H),2.05-1.94(m,1H),1.43(d,J＝6.6Hz,3H),1.25(d,J＝6.8Hz,3H)。
得到白色固体状的实施例6-2(27mg)。LCMS(M+H+):521.2，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ＝7.66(s,1H),7.42-7.30(m,2H),5.08(d,J＝16.9Hz,1H),4.80(q,J＝7.2Hz,1H),4.52(d,J＝16.9Hz,1H),4.43-4.27(m,2H),4.20-4.06(m,2H),3.95(br dd,J＝4.8,9.8Hz,1H),3.74(br t,J＝7.0Hz,1H),3.24-3.13(m,1H),3.08-2.98(m,1H),2.92-2.83(m,1H),2.54-2.41(m,1H),2.32-2.22(m,1H),2.12(tdd,J＝3.5,6.6,9.7Hz,1H),2.00-1.92(m,1H),1.45(d,J＝6.6Hz,3H),1.24(d,J＝7.0Hz,3H)。
实施例7
2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸
标题化合物按照如下方案制备：
步骤1：叔丁基-[(2-碘苯基)甲氧基]-二甲基-硅烷(化合物7b)的制备
向(2-碘苯基)甲醇(化合物7a,2.34g,10.0mmol)的DCM(15mL)溶液中加入咪唑(2.04g,30.0mmol)，然后滴加叔丁基氯二甲基硅烷(1.81g,12.0mmol)的DCM(5mL)溶液。将形成的悬浮液在室温下搅拌2小时。将反应混合物浓缩。将残余物溶于PE/EA(v/v＝5/1)并用水洗涤。将水相用PE/EA(v/v＝5/1)萃取两次。将合并的有机相浓缩并将残余物通过柱色谱纯化得到化合物7b(3.31g)。LCMS(M+H+):349。
步骤2：3-[2-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基甲基]苯基]丙-2-烯酸乙酯(化合物7c)的制备
向叔丁基-[(2-碘苯基)甲氧基]-二甲基-硅烷(化合物7b,6.0g,17.2mmol)、丙烯酸乙酯(6.9g,7.34mL,68.9mmol)、TEA(7.0g,9.6mL,68.9mmol)、三-邻甲苯基膦(524mg,1.72mmol)的乙腈(20mL)溶液中加入乙酸钯(387mg,1.72mmol)。将反应混合物用氩气净化，然后于90℃加热过夜。将反应混合物冷却，用冰水终止反应，用PE/EA(v/v＝10/1)洗涤两次。将合并的有机相浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：5％EtOAc的石油醚溶液)得到化合物7c(5.2g)。LCMS(M+H+):321。
步骤3：3-[2-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基甲基]苯基]-4-硝基-丁酸乙酯(化合物7d)的制备
向化合物3-[2-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基甲基]苯基]丙-2-烯酸乙酯(化合物7c,3.20g,10.0mmol)的硝基甲烷(20mL)溶液中加入1,1,3,3-四甲基胍(230.0mg,2.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，于85℃加热过夜然后浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：5％-10％EtOAc的石油醚溶液)得到化合物7d(1.80g)。LCMS(M+H+):382。
步骤4：4-[2-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基甲基]苯基]吡咯烷-2-酮(化合物7e)的制备
向3-[2-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基甲基]苯基]-4-硝基-丁酸乙酯(化合物7d,1.72g,4.5mmol)的EtOAc(10mL)和EtOH(10mL)溶液中加入饱和氯化铵水溶液(10mL)和锌(2.35g,36.0mmol)。将反应混合物于90℃加热过夜，然后冷却并过滤。将滤液浓缩。将残余物用水处理，用2.5M NaOH水溶液碱化至pH 8.0并用EtOAc萃取两次。将合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到化合物7e(1.37g,粗品)，将其直接用于下一步骤。LCMS(M+H+):306。
步骤5：(6S)-3-[4-[2-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基甲基]苯基]-2-氧代-吡咯烷-1-基]-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(化合物7f)的制备
向4-[2-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基甲基]苯基]吡咯烷-2-酮(化合物7e,1.0g,3.30mmol)的DMSO(15mL)溶液中加入(6S)-3-碘-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(中间体I-1,1.2g,3.30mmol)、K3PO4(1.4g,6.60mmol)、(1R,2R)-N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺(188.0mg,1.32mmol)和CuI(126.0mg,661μmol)。将反应混合物用氮气净化，密封并在微波下于110℃加热2小时。将反应混合物冷却，用冰水终止反应并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过柱色谱纯化得到化合物7f(1.4g)。LCMS(M+H+):541。
步骤6：(6S)-3-[4-[2-(羟基甲基)苯基]-2-氧代-吡咯烷-1-基]-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(化合物7g)的制备
将(6S)-3-[4-[2-[[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基甲基]苯基]-2-氧代-吡咯烷-1-基]-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(化合物7f,1.41g,2.6mmol)和四丁基氟化铵溶液(1.0M的THF溶液,3mL)的混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物浓缩并将残余物通过柱色谱纯化得到化合物7g(1.1g)。LCMS(M+H+):427。
步骤7：2-[1-[(6S)-5-叔丁氧基羰基-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸(化合物7h)的制备
向(6S)-3-[4-[2-(羟基甲基)苯基]-2-氧代-吡咯烷-1-基]-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(化合物7g,700.0mg,1.64mmol)在乙腈(5mL)和水(10mL)中的溶液中加入2,2,6,6-四甲基哌啶-N-氧化物(25.6mg,164μmol)和溴化钾(19.5mg,164μmol)。10分钟后，滴加次氯酸钠(14.5％,2.45mol/L,3.35mL,8.20mmol)。然后加入2N氢氧化钠水溶液调节pH＝8-10。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后在50℃下搅拌3小时。加入另一批NaClO(14.5％,3.35mL)并将混合物于50℃继续搅拌3小时，然后用乙醇终止反应，浓缩并酸化至pH＝4-5，用EtOAc萃取两次。将有机相干燥并浓缩得到粗品化合物7h(723.0mg,粗品)。LCMS(M+H+):441。
步骤8：2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸(实施例7)的制备
将2-[1-[(6S)-5-叔丁氧基羰基-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸(化合物7h,723.0mg,1.64mmol)、2,2,2-三氟乙酸(5.0mL)和DCM(2.5mL)的混合物在室温下搅拌30分钟。将反应混合物浓缩，然后加入甲苯进行共沸蒸馏。将残余物溶于DCE(10mL)，向其中加入DIPEA(2.0mL)和N-(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酸苯酯(中间体I-3,658.0mg,2.46mmol)。将反应混合物于40℃加热3小时然后浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化，然后通过制备型HPLC纯化得到实施例7(460mg)。LCMS(M+H+):514.2，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 7.96(d,J＝7.6Hz,1H),7.68-7.55(m,3H),7.43-7.36(m,1H),7.34-7.24(m,2H),5.14-5.04(m,1H),5.00-4.93(m,1H),4.70–4.58(m,1H),4.58-4.50(m,1H),4.34-4.20(m,2H),4.20–4.13(m,1H),3.96-3.87(m,1H),3.02(dd,J＝9.2,17.2Hz,1H),2.77(dd,J＝7.5,17.2Hz,1H),1.29(d,J＝7.0Hz,3H)。
实施例7可以通过SFC(手性柱,OD-H,5μm,20×250mm；移动相,80％CO2和20％MeOH(MeOH+0.5％NH3H2O)；流速65mL/min,背压100巴)分离成两种异构体，实施例7-1(峰1)和实施例7-2(峰2)。
实施例7-1,LCMS(M+H+):514.4，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 7.85(d,J＝7.3Hz,1H),7.66(s,1H),7.60-7.51(m,2H),7.39-7.34(m,1H),7.34-7.25(m,2H),5.08(d,J＝17.0Hz,1H),5.03-4.95(m,1H),4.65-4.50(m,1H),4.56(d,J＝16.9Hz,1H),4.30(dd,J＝4.4,12.8Hz,1H),4.26–4.19(m,1H),4.16(dd,J＝1.0,12.7Hz,1H),3.93(dd,J＝6.7,9.6Hz,1H),3.01(dd,J＝9.2,17.2Hz,1H),2.79(dd,J＝7.7,17.1Hz,1H),1.28(d,J＝6.8Hz,3H)
实施例7-2,LCMS(M+H+):514.4，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ＝7.91(d,J＝7.7Hz,1H),7.66(s,1H),7.61-7.53(m,2H),7.41-7.35(m,1H),7.34-7.25(m,2H),5.09(d,J＝16.9Hz,1H),5.00-4.94(m,1H),4.65-4.57(m,1H),4.54(d,J＝17.0Hz,1H),4.36-4.23(m,2H),4.19-4.13(m,1H),3.90(dd,J＝6.4,9.6Hz,1H),3.02(dd,J＝9.2,17.1Hz,1H),2.79(dd,J＝7.5,17.1Hz,1H),1.28(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例8
3-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸
标题化合物按照如下方案制备：
(6S)-3-[4-(3-甲氧基羰基苯基)-2-氧代-吡咯烷-1-基]-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(化合物8e)的制备
化合物8e按照与化合物7f类似的方法，通过用3-碘苯甲酸甲酯(化合物8a)代替叔丁基-[(2-碘苯基)甲氧基]-二甲基-硅烷(化合物7b)进行制备。得到固体状的化合物8e(263mg)。LCMS(M+H+):455。
3-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸甲酯(化合物8f)的制备
将(6S)-3-[4-(3-甲氧基羰基苯基)-2-氧代-吡咯烷-1-基]-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(化合物8e,260.0mg,572μmol)、2,2,2-三氟乙酸(2mL)和DCM(1mL)的混合物在室温下搅拌30分钟。将反应混合物浓缩，然后加入甲苯进行共沸蒸馏。将残余物溶于DCM(3mL)，然后向其中加入DIPEA(1.0mL)和N-(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酸苯酯(中间体I-3,229mg,858μmol)。将反应混合物于40℃加热3小时然后浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(洗脱剂：50％-60％EtOAc(含10％MeOH)的石油醚溶液)得到化合物8f(287mg)。LCMS(M+H+):528。
3-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸(实施例8)的制备
向3-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸甲酯(化合物8f,260mg,493μmol)的THF(1.3mL)溶液中加入氢氧化锂水溶液(2M,1.3mL,2.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，酸化至pH＝4-5并浓缩。将残余物通过制备型HPLC纯化得到实施例8(120mg)。LCMS(M+H+):514.1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ＝8.11-8.04(m,1H),8.00-7.94(m,1H),7.72-7.63(m,2H),7.55-7.49(m,1H),7.33-7.25(m,2H),5.16-5.06(m,1H),5.03-4.94(m,1H),4.63-4.52(m,1H),4.35-4.15(m,3H),3.99-3.89(m,2H),3.08-2.98(m,1H),2.82-2.71(m,1H),1.33-1.24(m,3H)。
实施例9
(2R)-1-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸
实施例9按照与实施例1类似的方法，通过用(2R)-吡咯烷-2-甲酸甲酯代替(2S)-吡咯烷-2-甲酸甲酯进行制备。得到白色固体状的实施例9(54mg)。LCMS(M+H+)507.3，1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 7.71-7.62(m,1H),7.39-7.25(m,2H),5.13-5.02(m,1H),5.00–4.85(m,1H),4.53-3.98(m,7H),3.88-3.76(m,1H),3.39-3.34(m,1H),3.14-3.05(m,1H),2.98-2.85(m,1H),2.65-2.49(m,1H),2.40-2.27(m,1H),2.26-2.15(m,1H),2.11-1.93(m,1H),1.30–1.20(m,3H)。
实施例10
3-氟-2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸
实施例10按照与实施例7类似的方法，通过用(2-溴-3-氟-苯基)甲醇代替(2-碘苯基)甲醇进行制备。通过SFC分离终产物得到实施例10的两种异构体，实施例10-1和实施例10-2。SFC条件：手性柱,OZ-H,5μm,20×250mm；移动相,80％CO2和20％MeOH(MeOH+0.5％NH3H2O)；流速,65mL/min,背压100巴。
得到白色固体状的实施例10-1(12mg)。LCMS(M+H)+:532.2，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 7.55(s,1H),7.39(d,J＝7.0Hz,1H),7.29-7.06(m,4H),4.97(d,J＝16.9Hz,1H),4.93-4.84(m,1H),4.49-4.42(m,2H),4.24-4.14(m,1H),4.10-4.00(m,2H),3.97-3.86(m,1H),2.88-2.72(m,2H),1.17(d,J＝6.8Hz,3H)。
得到白色固体状的实施例10-2(8mg)。LCMS(M+H)+:532.2，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 7.67(s,1H),7.57(d,J＝7.6Hz,1H),7.45-7.20(m,4H),5.14(d,J＝17.1Hz,1H),5.03-4.95(m,1H),4.64(br d,J＝8.2Hz,1H),4.55(d,J＝17.0Hz,1H),4.31(dd,J＝4.5,12.5Hz,1H),4.25-4.13(m,2H),4.03-3.96(m,1H),3.01-2.85(m,2H),1.29(d,J＝7.0Hz,3H)。
实施例11
2-氟-6-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸
实施例11按照与实施例7类似的方法，通过用(2-溴-6-氟-苯基)甲醇代替(2-碘苯基)甲醇进行制备。通过SFC分离终产物得到实施例11的两种异构体，实施例11-1和实施例11-2。SFC条件:手性柱,OZ-H,5μm,20×250mm；移动相,80％CO2和20％MeOH(MeOH+0.5％NH3H2O)；流速,65mL/min,背压100巴。
得到白色固体状的实施例11-1(22mg)。LCMS(M+H)+:532.2，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 7.55(s,1H),7.39-7.29(m,1H),7.26-7.14(m,3H),6.97(t,J＝8.7Hz,1H),4.95(d,J＝16.9Hz,1H),4.91-4.83(m,1H),4.46(d,J＝16.9Hz,1H),4.26-4.14(m,1H),4.12-4.01(m,2H),3.99-3.81(m,2H),2.93-2.80(m,1H),2.76-2.65(m,1H),1.16(d,J＝6.8Hz,3H)。
得到白色固体状的实施例11-2(22mg)。LCMS(M+H)+:532.2，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 7.66(s,1H),7.47-7.26(m,4H),7.08(t,J＝8.4Hz,1H),5.16(d,J＝16.9Hz,1H),5.05-4.96(m,1H),4.53(d,J＝16.9Hz,1H),4.34-4.12(m,3H),4.11-3.90(m,2H),3.04-2.93(m,1H),2.93-2.81(m,1H),1.28(d,J＝6.8Hz,3H)。
实施例12
2-[[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]氨基]苯甲酸
标题化合物按照如下方案制备：
步骤1：2-[(5-氧代吡咯烷-3-基)氨基]苯甲酸甲酯(化合物12a)的制备
将吡咯烷-2,4-二酮(300mg,3.03mmol)和2-氨基苯甲酸甲酯(0.43mL,3.33mmol)、AcOH(182mg,3.03mmol)在DCE(10mL)中的混合物于50℃搅拌16小时。将反应混合物浓缩得到黄色固体。将固体溶于甲醇(10mL)，向其中加入Pd/C(69mg,0.3mmol)。将形成的混合物在H2(50psi)下室温搅拌16小时然后过滤。将滤液浓缩并将残余物通过制备型TLC纯化(PE:EtOAc＝1:1)得到无色油状的化合物12a(170mg)。LCMS(M+H+)235.0。
步骤2：(6S)-3-[4-(2-甲氧基羰基苯氨基)-2-氧代-吡咯烷-1-基]-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(化合物12b)的制备
将2-[(5-氧代吡咯烷-3-基)氨基]苯甲酸甲酯(化合物12a,170mg,0.73mmol)、(6S)-3-碘-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(中间体I-1,290mg,0.8mmol)、(1R,2R)-N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺(21mg,0.15mmol)、CuI(28mg,0.15mmol)和K3PO4(308mg)在1,4-二恶烷(15mL)中的混合物于110℃下在氮气氛下搅拌32小时。将反应混合物过滤并将滤液浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化(PE:EtOAc,v/v＝1/3)得到黄色油状的化合物12b(30mg)。LCMS(M+H+)470.2。
步骤3：2-[[1-[(6S)-6-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]氨基]苯甲酸(化合物12c)的制备
向(6S)-3-[4-(2-甲氧基羰基苯氨基)-2-氧代-吡咯烷-1-基]-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(化合物12b,30mg)在THF(2mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)中的溶液中加入LiOH(6mg)。将反应混合物在室温下搅拌2小时然后浓缩。将得到的残余物溶于EtOAc(2mL)，向其中加入HCl的EtOAc溶液(4M,0.08mL)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后浓缩得到白色固体状的化合物12c粗品(21mg)。LCMS(M+H+)356.1。
步骤4：2-[[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]氨基]苯甲酸(实施例12)的制备
将2-[[1-[(6S)-6-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]氨基]苯甲酸(化合物12c,21mg)和N-(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酸苯酯(18mg)和三乙胺(0.02mL)在DCM(3mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化得到黄色油状的实施例12。LCMS(M+H+)529.1，1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.90–7.80(m,1H),7.80–7.65(m,1H),7.60–7.50(m,1H),7.35–7.20(m,1H),6.80–6.70(m,1H),6.65–6.52(m,1H),5.25–5.00(m,1H),4.95-4.85(m,1H),4.49–4.29(m,2H),4.28–4.01(m,3H),3.70–3.50(m,1H),3.07–2.87(m,1H),2.39-2.23(m,1H),1.20–1.10(m,3H)。
实施例13
2-[7-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-6-氧代-3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]乙酸
标题化合物按照如下方案制备：
O9-苄基O7-叔丁基6-氧代-3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬烷-7,9-二甲酸酯(化合物13a)的制备
向3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬烷-7-甲酸叔丁酯(400mg,1.75mmol)和Et3N(0.49mL,3.5mmol)的DCM(10mL)溶液中在室温下加入CbzCl(448mg,2.63mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时然后加入水(10.0mL)，将混合物用EtOAc萃取三次(每次30mL)。将合并的有机相用硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(PE:EtOAc,从10:1至2:1)得到白色固体(300mg)。将固体溶于ACN(8mL)和水(2mL)，向其中加入RuCl3(35mg,0.170mmol)和NaIO4(532mg,2.48mmol)。将反应混合物在室温下搅拌36小时然后加入水(10mL)，将混合物用EtOAc(20mL)萃取三次。将合并的有机相用硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过柱色谱纯化(PE:EtOAc,从10:1至1:1)得到黄色油状的所需产物13a(150mg)。LCMS(M-100+H+)277.1。
7-[(6S)-5-叔丁氧基羰基-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-6-氧代-3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-甲酸苄酯(化合物13b)的制备
向O9-苄基O7-叔丁基6-氧代-3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬烷-7,9-二甲酸酯(化合物13a,150mg,0.400mmol)的EtOAc(5mL)溶液中加入HCl的EtOAc溶液(4M,10mL)。将混合物在室温下搅拌2小时然后并浓缩。将粗品物质溶于1,4-二恶烷(10mL)，在氮气氛下向其中加入(6S)-3-碘-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(中间体I-1,158mg,0.430mmol)和K3PO4(154mg,0.720mmol)、CuI(14mg,0.070mmol)、(1R,2R)-N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺(11mg,0.070mmol)。将形成的混合物在室温下搅拌14小时。冷却后，将反应混合物过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(PE:EtOAc,从10:1至1:1)得到黄色油状的化合物13b(80mg)。LCMS(M+H+)512.2。
(6S)-3-[9-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-6-氧代-3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-7-基]-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(化合物13c)的制备
将7-[(6S)-5-叔丁氧基羰基-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-6-氧代-3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-甲酸苄酯(化合物13b,40mg,0.080mmol)和Pd/C(2mg,0.020mmol)在MeOH(5mL)中的混合物在H2下室温搅拌14小时。将反应混合物过滤并浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化(DCM:MeOH＝10:1)得到无色油状的(6S)-6-甲基-3-(6-氧代-3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-7-基)-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(18mg)。将该化合物溶于ACN(10mL)，向其中加入K2CO3(14mg,0.10mmol)和2-溴乙酸乙酯(0.01mL,0.070mmol,1.5eq)。将反应混合物在室温下搅拌14小时，然后浓缩得到黄色油状的化合物13c粗品(18mg)。LCMS(M+H+)464.1。
2-[7-[(6S)-6-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-6-氧代-3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]乙酸(化合物13d)的制备
向(6S)-3-[9-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-6-氧代-3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-7-基]-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(化合物13c,18mg,0.04mmol)在水(1mL)、甲醇(1mL)和THF(1mL)中的混合物中在室温下加入LiOH(4mg,0.08mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化(DCM:MeOH＝10:1)得到黄色油状的2-[7-[(6S)-5-叔丁氧基羰基-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-6-氧代-3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]乙酸(12mg)。将该酸溶于EtOAc(5mL)，向其中加入HCl的EtOAc溶液(10mL,0.03mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后浓缩得到黄色油状的化合物13d粗品(11mg)。
2-[7-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-6-氧代-3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]乙酸(实施例13)的制备
向2-[7-[(6S)-6-甲基-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-6-氧代-3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]乙酸(化合物13d,11mg,0.03mmol)和DIPEA(0.01mL,0.070mmol)在DMF(2mL)中的混合物中加入N-(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酸苯酯(中间体I-3,11mg,0.04mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时然后浓缩。将残余物通过HPLC纯化得到白色固体状的实施例13(3.5mg)。LCMS(M+H+)509.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.30–9.20(m,1H),7.66(s,0.5H),7.65(s,0.5H),7.50–7.38(m,1H),4.91-4.73(m,2H),4.43(s,1H),4.32(m,1H),4.27-4.12(m,3H),4.07-3.85(m,3H),3.78-3.62(m,5H),1.20–1.10(m,3H)。
实施例14
4-氟-2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸
标题化合物按照如下方案制备：
步骤1：4-氟-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸甲酯(化合物14b)的制备
将2-溴-4-氟苯甲酸甲酯(化合物14a,1g,4.29mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(1.63g,6.44mmol)、PdCl2(DPPF)(350mg,429μmol)和乙酸钾(632mg,6.44mmol)在二恶烷(30mL)中的混合物加热至90℃并在氮气氛下搅拌2小时。将粗反应混合物真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化(硅胶,40g,0％至10％EtOAc的石油醚溶液)得到无色油状的化合物14b(1g),LCMS(M+H+):281。
步骤2：4-氟-2-(5-氧代-1,2-二氢吡咯-3-基)苯甲酸甲酯(化合物14c)的制备将4-氟-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲酸甲酯(化合物14b,951mg,3.4mmol)、2-氧代-4-(甲苯磺酰氧基)-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(0.8g,2.26mmol,其合成参见J.Org.Chem.2002,67,4702)、PdCl2(DPPF)(162mg,226μmol)和K2CO3(626mg,4.53mmol)在二恶烷/H2O(10:1)(20mL)中的混合物加热至90℃并在氮气氛下搅拌2小时。将反应混合物用硅藻土过滤。将滤液真空浓缩。将残余物通过快速色谱纯化(硅胶,40g,0％至100％EtOAc的石油醚溶液,EtOAc含10％MeOH)得到淡黄色油状的化合物14c(150mg)。LCMS(M+H+):236。
步骤3：4-氟-2-(5-氧代吡咯烷-3-基)苯甲酸甲酯(化合物14d)的制备
将4-氟-2-(5-氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-3-基)苯甲酸甲酯(化合物14c,100mg,425μmol)和Pd-C(50mg)在MeOH(20mL)中的混合物加热至55℃并在氢气囊气氛下搅拌20小时。将反应混合物用硅藻土过滤并将滤液浓缩得到白色固体状的化合物14d(40mg)。LCMS(M+H+):238。
步骤4：(6S)-3-[4-(5-氟-2-甲氧基羰基-苯基)-2-氧代-吡咯烷-1-基]-6-甲基-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-5-甲酸叔丁酯(化合物14e)的制备
向10mL的微波瓶中加入(S)-3-碘-6-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-甲酸叔丁基酯(中间体I-1,100mg,275μmol)、(1R,2R)-N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺(15.7mg,110μmol)、4-氟-2-(5-氧代吡咯烷-3-基)苯甲酸甲酯(化合物14d,40mg,169μmol)、碘化亚铜(I)(10.5mg,55.1μmol)和磷酸钾(117mg,551μmol)的DMSO(5mL)溶液。将小瓶加盖并将反应混合物在微波中于120℃搅拌加热4小时。冷却至室温后，将反应混合物倒入20mL EtOAc中并用H2O(20mL)和盐水(20mL)洗涤。将有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。将粗产物通过快速色谱纯化(硅胶,12g,0％至100％EtOAc的石油醚溶液,EtOAc含10％MeOH)得到淡黄色油状的化合物14e(40mg)。LCMS(M+H+):473。
步骤5：4-氟-2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸甲酯(化合物14f)的制备
将(6S)-3-(4-(5-氟-2-(甲氧基羰基)苯基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-6-甲基-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4H)-甲酸叔丁酯(化合物14e,40mg,84.7μmol)在DCM/TFA(1:1,4mL)中的混合物于20℃搅拌1小时。将反应混合物浓缩并将残余物溶于DMF(2mL)，然后加入N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(109mg,847μmol)和(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酸苯酯(中间体I-3,33.9mg,127μmol)。将反应混合物于70℃搅拌1小时。然后将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤。将有机层浓缩得到淡黄色油状的化合物14f(40mg)。LCMS(M+H+):546。
步骤6：4-氟-2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸(实施例14)的制备
将4-氟-2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸甲酯(化合物14f,30mg,55μmol)和NaOH(550μl,1M)在MeOH(5mL)中的混合物于20℃搅拌1小时，然后将混合物调至pH＝6，然后将溶液通过制备型HPLC纯化得到白色固体状实施例14(4mg)。LCMS(M+H+):532.2，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 7.86-7.82(m,1H),7.54(s,1H),7.29-7.10(m,3H),7.02-6.99(m,1H),4.97(dd,J＝7.0,16.9Hz,1H),4.91-4.83(m,1H),4.65-4.48(m,1H),4.43(dd,J＝5.9,16.9Hz,1H),4.27-3.95(m,3H),3.82-3.78(m,1H),2.92-2.85(m,1H),2.70-2.63(m,1H),1.17(d,J＝6.8Hz,1.5H),1.15(d,J＝6.8Hz,1.5H)。
实施例15
5-氟-2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸
实施例15按照与实施例14类似的方法，通过用2-溴-5-氟苯甲酸甲酯代替2-溴-4-氟苯甲酸甲酯(化合物14a)进行制备。得到白色固体状的实施例15(7mg)。LCMS(M+H+):532.2.1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm7.53(d,J＝0.9Hz,1H),7.51-7.41(m,2H),7.26-7.09(m,3H),4.96(dd,J＝7.4,16.9Hz,1H),4.89-4.81(m,1H),4.54-4.37(m,2H),4.23-3.99(m,3H),3.82-3.74(m,1H),2.91-2.85(m,1H),2.68-2.64(m,1H),1.17(d,J＝6.8Hz,1.5H),1.15(d,J＝6.8Hz,1.5H)。
实施例16
4-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸
实施例16按照与实施例8类似的方法，通过用4-碘苯甲酸甲酯代替3-碘苯甲酸甲酯(化合物8a)进行制备。得到白色固体状的实施例16(120mg)。LCMS(M+H+):514.4，1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 8.07-8.03(m,2H),7.68(s,1H),7.55-7.50(m,2H),7.33-7.25(m,2H),5.14-5.03(m,1H),5.01-4.91(m,1H),4.61-4.49(m,1H),4.34-4.15(m,3H),4.00-3.91(m,2H),3.06-2.97(m,1H),2.84-2.75(m,1H),1.29(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例17
6-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡啶-2-甲酸
实施例17按照与实施例8类似的方法，通过用6-溴吡啶-2-甲酸乙酯代替3-碘苯甲酸甲酯(化合物8a)进行制备。得到白色固体状的实施例17(100mg)。LCMS(M+H+):515.2，1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm 8.09(d,J＝7.2Hz,1H),7.99(t,J＝7.7Hz,1H),7.69(s,1H),7.65(d,J＝7.4Hz,1H),7.34-7.26(m,2H),5.16-5.04(m,1H),5.03-4.94(m,1H),4.59(t,J＝16.4Hz,1H),4.34-4.27(m,1H),4.26-4.06(m,4H),3.07-2.95(m,2H),1.28(d,J＝7.0Hz,3H)。
实施例18
2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡啶-3-甲酸
实施例18按照与实施例8类似的方法，通过用2-溴吡啶-3-甲酸叔丁酯代替3-碘苯甲酸甲酯(化合物8a)进行制备。得到白色固体状的实施例18(11mg)。LCMS(M+H+):515.5，1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm8.78-8.73(m,1H),8.36-8.32(m,1H),7.63(s,1H),7.45-7.39(m,1H),7.34-7.25(m,2H),5.15-5.03(m,1H),5.01-4.93(m,1H),4.86-4.81(m,1H),4.53(d,J＝16.9Hz,1H),4.34-4.23(m,2H),4.20-4.13(m,1H),4.10-3.99(m,1H),3.04-2.96(m,2H),1.32-1.24(m,3H)。
实施例19:HBV抑制试验
细胞系和培养条件：
HepG2.2.15是含有HBV基因组的稳定转染的细胞系。它通过参考文献MA Selles等人(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1987,84,1005-1009)所述的公开方法衍生自肝母细胞瘤细胞系Hep G2(美国典型培养物保藏中心，HB-8065TM)。将细胞系维持在Dulbecco改良的Eagle培养基和营养混合物F-12(DMEM/F-12,Gibco,Cat.#:11320-033)中，其中补充有10％胎牛血清(Gibco,Cat.#:10099-141)、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素(Gibco,Cat.#:15140-122)和0.3mg/mL G418硫酸盐(Gibco,Cat.#:10131-027)。
体外抗HBV活性:
将HepG2.2.15细胞以每孔3×104个细胞的密度接种于96孔板中，培养基为100μLDMEM/F-12，其中补充有2.5％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素并在37℃培养过夜。将测试化合物在DMSO中连续半对数稀释，然后在培养基中稀释100倍。将含有稀释化合物的100μL培养基加入板中，每孔中DMSO的终浓度为0.5％。化合物处理5天后，收集培养上清液用于进一步分析。
对于细胞外HBV DNA的定量PCR检测，将培养上清液通过500μg/mL蛋白酶K(Sigma,Cat.#:P2308)在50℃消化处理1小时。在95℃热酶灭活15分钟后，通过qPCR对样品进行HBVDNA定量。测定HBV复制被抑制50％的有效化合物浓度(EC50)。
在如本文所述的上述测定中测试本发明的实施例化合物，结果发现在HepG2.2.15测定中的EC50<0.5μM，如下表1中所示。
表1.本发明化合物在HepG2.2.15测定中的活性

Claims (12)

1.式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，
其中
R1是被羧基C1-6烷基取代的氧代氧杂二氮杂双环[3.3.1]壬基；或
氧代吡咯烷基，所述氧代吡咯烷基被羧基C1-6烷基(C1-6烷基)氨基、羧基苯基、羧基吡啶基、羧基苯基氨基、卤代羧基苯基或羧基吡咯烷基取代一次；或被羧基吡咯烷基和C1-6烷基取代两次；
R2是H或C1-6烷基；
R3是C1-6烷基；
R4是苯基，所述苯基被卤素取代三次。
2.根据权利要求1所述的式(I)的化合物或其可药用盐、对映体或非对映体，
其中
R1是羧基甲基(甲基)氨基氧代吡咯烷基、羧基吡咯烷基氧代吡咯烷基、羧基吡咯烷基(甲基)氧代吡咯烷基、羧基苯基氧代吡咯烷基、羧基吡啶基氧代吡咯烷基、羧基苯基氨基氧代吡咯烷基、氟羧基苯基氧代吡咯烷基或羧基甲基氧代氧杂二氮杂双环[3.3.1]壬基；
R2是H或甲基；
R3是甲基；
R4是三氟苯基。
3.选自下列的化合物：
(2S)-1-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸；
(2S)-1-[(2S)-2-甲基-1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸；
2-[甲基-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]氨基]乙酸；
(2R)-1-[(2S)-2-甲基-1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸；
1-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-3-甲酸；
(2S)-1-[1-[(6S,7S)-6,7-二甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸；
2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸；
3-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸；
(2R)-1-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡咯烷-2-甲酸；
3-氟-2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸；
2-氟-6-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸；
2-[[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]氨基]苯甲酸；
2-[7-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-6-氧代-3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]乙酸；
4-氟-2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸；
5-氟-2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸；
4-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]苯甲酸；
6-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡啶-2-甲酸；和
2-[1-[(6S)-6-甲基-5-[(3,4,5-三氟苯基)氨基甲酰基]-6,7-二氢-4H-吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-5-氧代-吡咯烷-3-基]吡啶-3-甲酸。
4.制备根据权利要求1至3任意一项所述的化合物的方法，其包括如下步骤：
(a)将式(V)的化合物与酸反应，
然后与胺R4NH2在光气等效物的存在下形成脲；其中R1和R4如权利要求1至3任意一项所定义。
5.用作治疗活性物质的根据权利要求1至3任意一项所述的化合物或可药用盐、对映体或非对映体。
6.包含根据权利要求1至3任意一项所述的化合物和治疗惰性载体的药物组合物。
7.根据权利要求1至3任意一项所述的化合物用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的用途。
8.根据权利要求1至3任意一项所述的化合物在制备用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的药物中的用途。
9.用于治疗或预防乙型肝炎病毒感染的根据权利要求1至3任意一项所述的化合物或可药用盐、对映体或非对映体。
10.按照权利要求4所述的方法制备的根据权利要求1至3任意一项所述的化合物或可药用盐、对映体或非对映体。
11.治疗或预防乙型肝炎病毒感染的方法，所述方法包括施用治疗有效量的根据权利要求1至3任意一项所定义的化合物。
12.如上所述的本发明。
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