JP7034133B2 - 感染性疾患の処置のためのカルボキシ ６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン化合物 - Google Patents

Description

本発明は、哺乳類におけるＢ型肝炎ウイルス感染症の治療および／または予防、特に治療のために有用な有機化合物、ならびにそれらの医薬活性、製造、それらを含有する医薬組成物、および医薬としてのそれらの使用の可能性に関する。

本発明は、式（Ｉ）の化合物

またはその医薬的に許容できる塩、鏡像異性体もしくはジアステレオマー［式中のＲ^１～Ｒ^４は後記に記載するものである］に関する。本発明の化合物はＢ型肝炎ウイルス感染症の治療または予防に有用である。

Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染症は世界的に重大な保健問題であり、世界中の集団のほぼ３０％が現在または過去の感染の血清学的証拠を示す。このウイルスに対する安全で有効な予防ワクチンが１９８０年代初期に導入されたにもかかわらず、なお世界中で２億４０００万人の慢性ＨＢＶキャリヤーがいると推定され、それらのうち高い割合が最終的に肝硬変または肝細胞癌(hepatocellular carcinoma)（ＨＣＣ）を発症するであろう(WHO Hepatitis B. Fact Sheet N°204)。2010 Global Burden of Disease study (R Lozano, et al. Lancet, 380 (2012), 2095-2128)において、ＨＢＶ感染症は世界中で上位の保健優先事項にランク付けされ、死亡の１０番目の主因であった（年間７８０，０００人の死亡）。最近の研究が、慢性ＨＢＶ感染症を伴なう患者における肝硬変およびＨＣＣへの進行は循環ＨＢＶ ＤＮＡレベルと有意に関連することを示した。よって、ＨＢＶに対する抗ウイルス療法は、肝硬変への進行およびＨＣＣの発症を阻止するために実施される。

ＨＢＶはヘパドナウイルス科(Hepadnaviridae)に属する小型のエンベロープ保有ウイルスである。それはおおよそ３２００塩基対の部分二本鎖ＤＮＡゲノムをもつ。ＨＢＶはヒト肝細胞に感染する強い嗜好性をもつ。そのライフサイクルは、ＨＢＶがそれのエンベロープタンパク質を介して宿主細胞膜に結合した時点で開始する。ウイルス侵入の厳密なメカニズムは完全には解明されていない。ウイルスの弛緩型環状ＤＮＡ(relaxed circular DNA)（ｒｃＤＮＡ）を含むヌクレオカプシドが細胞質内へ放出され、核へ輸送される。核において、ｒｃＤＮＡはウイルスと細胞の両方の酵素により修復されて、共有結合閉環型環状ＤＮＡ(covalently closed circular DNA)（ｃｃｃＤＮＡ）を形成する。感染した細胞はそれぞれ１～５０のｃｃｃＤＮＡ分子をユニークなエピソームミニ染色体(episomal minichromosome)として含むという証拠がある。サブゲノムＲＮＡ(subgenomic RNA)（ｓｇＲＮＡ）およびプレゲノムＲＮＡ(pregenomic RNA)（ｐｇＲＮＡ）の両方が、ｃｃｃＤＮＡから細胞の転写機構を使って転写される。核外搬出の後、ｐｇＲＮＡはコアタンパク質およびウイルスポリメラーゼに翻訳される。ｓｇＲＮＡは調節Ｘタンパク質(regulatory X protein)および３種類のエンベロープタンパク質に翻訳される。ＲＮＡ含有ウイルスヌクレオカプシドのセルフアセンブリー（自己集合）は、複雑なｐｇＲＮＡ形成を介してコアタンパク質およびポリメラーゼにより行なわれる。ヌクレオカプシド内部で、ｐｇＲＮＡは逆転写されてマイナス鎖ＤＮＡになる。次いで、マイナス鎖ＤＮＡからのプラス鎖合成によりｒｃＤＮＡが作製される。ヌクレオカプシドはｃｃｃＤＮＡ増幅のために核へ再輸送されるか、あるいはエンベロープ収容されて小胞体(endoplasmic reticulum)（ＥＲ）を介して放出される。逆転写酵素はプルーフリーディング活性（校正活性）(proofreading activity)を欠如する；よって、ウイルスゲノムの変異が頻繁に起き、その結果、感染した個体には遺伝的に異なるウイルス種(quasispecies（類似種）)が共存する。

現在、慢性Ｂ型肝炎（ＣＨＢ）について７種類の処置が承認されており、それには２種類のインターフェロン（ＩＦＮ）（一般的なＩＦＮおよびＰＥＧ－ＩＦＮ）配合物、および５種類のヌクレオシ（チ）ド アナログ（ＮＵＣ：ラミブジン(lamivudine)、アデホビル ジピボキシル(adefovir dipivoxil)、エンテカビル(entecavir)、テルビブジン(telbivudine)、およびテノホビル ジソプロキシル(tenofovir disoproxil))が含まれる。免疫調節薬とＮＵＣとの主な違いは、ＰＥＧ－ＩＦＮは使用期間が確定しているという利点をもち、これに対しＮＵＣの使用は不確定であることである。ＰＥＧ－ＩＦＮの主な欠点は、それの有害事象の頻度が高いことである。あるウイルス遺伝子型はインターフェロン療法に対して良好な応答を示さない。他方で、ＮＵＣの長期使用は薬物耐性のリスクを提起する。ＣＨＢに対する抗ウイルス療法の最終目標は、ＨＢＶの根絶または持続的なウイルス抑制により、肝硬変またはＨＣＣへの進行を阻止することである。現在処置されている患者の大部分はこの目標を達成できない。前記に指摘したように、ヌクレオカプシドアセンブリーはＨＢＶゲノム複製の重要な工程である。ウイルスＤＮＡの合成は専らヌクレオカプシド内で行なわれるので、ウイルスゲノムの適正なパッケージングおよび放出を確実にするためにはヌクレオカプシドのアセンプリーおよびディスアセンブリーが厳密に調節されなければならない。ヌクレオカプシドアセンブリーはＨＢＶの多様性を制限する進化的に拘束されたプロセスであり、それは微細な分子攪乱に対してすら著しく敏感である。ヌクレオカプシドのアセンブリーとディスアセンブリーの両方が、このプロセスを種々のＨＢＶ遺伝子型および薬物耐性分離株に対する新規な抗ウイルス療法の開発のための魅力的な治療標的にしている。わずかなカプシド関連の抗ＨＢＶ化合物がレポートされている。たとえば、Ｂａｙ ４１－４１０９、Ｂａｙ ３８－７６９０およびＢａｙ ３９－５４９３と名付けられた化合物を含むヘテロアリールジヒドロピリミジン（ＨＡＰ）(Deres K. et al. Science 2003, 893)、ならびにフェニルプロペンアミド誘導体、たとえばＡＴ－６１およびＡＴ－１３０(Feld J. et al. Antiviral Research 2007, 168-177)。カプシドは有望な薬物標的となっており、幾つかの分子が臨床試験下にある。依然として、Ｂ型肝炎ウイルス感染症の予防および治療のための新たな処置を開発することに対するニーズがある。

WHO Hepatitis B. Fact Sheet N°204 2010 Global Burden of Disease study (R Lozano, et al. Lancet, 380 (2012), 2095-2128) Deres K. et al. Science 2003, 893 Feld J. et al. Antiviral Research 2007, 168-177

本発明は、式（Ｉ）の新規化合物

［式中：
Ｒ^１は、カルボキシＣ_１－６アルキルにより置換されたオキソオキサジアザビシクロ［３．３．１］ノナニルであるか；あるいはオキソピロリジニルであり、そのオキソピロリジニルは、カルボキシＣ_１－６アルキル（Ｃ_１－６アルキル）アミノ、カルボキシフェニル、カルボキシピリジニル、カルボキシフェニルアミノ、ハロカルボキシフェニルもしくはカルボキシピロリジニルにより１回置換されているか、またはカルボキシピロリジニルおよびＣ_１－６アルキルにより２回置換されている；
Ｒ^２は、ＨまたはＣ_１－６アルキルである；
Ｒ^３は、Ｃ_１－６アルキルである；
Ｒ^４は、フェニルであり、そのフェニルはハロゲンにより３回置換されている］
またはその医薬的に許容できる塩、鏡像異性体もしくはジアステレオマーに関する。

本発明の目的は、式（Ｉ）の新規化合物、それらの製造、本発明による化合物をベースとする医薬およびそれらの調製、ならびにＨＢＶ阻害薬としての、およびＨＢＶ感染症の治療または予防のための、式（Ｉ）の化合物の使用である。

定義
用語“Ｃ_１－６アルキル”は、炭素原子１～６個の一価直鎖または分枝鎖炭化水素基を表わす。具体的態様において、Ｃ_１－６アルキルは１～６個の炭素原子、より具体的態様において１～４個の炭素原子をもつ。Ｃ_１－６アルキルの例には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチルまたはｔｅｒｔ－ブチルが含まれる。

用語“ハロ”または“ハロゲン”は本明細書中で互換性をもって用いられ、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを表わす。

用語“カルボキシフェニル”は、フェニル基の水素原子の１つがカルボキシにより置き換えられたフェニル基を表わす。

用語“ハロカルボキシフェニル”は、フェニル基の水素原子の少なくとも１つがハロゲンにより置き換えられたカルボキシフェニル基を表わす。ハロカルボキシフェニルの例は、クロロカルボキシフェニル、フルオロカルボキシフェニル、ジフルオロカルボキシフェニルおよびクロロフルオロカルボキシフェニルである。

用語“オキソ”は、二価酸素原子＝Ｏを表わす。

用語“ジアステレオマー”は、２以上のキラリティー中心をもち、それらの分子が互いに鏡像ではない立体異性体を表わす。ジアステレオマーは異なる物理的特性、たとえば融点、沸点、スペクトル特性、活性および反応性をもつ。

用語“鏡像異性体”は、ある化合物の互いに重ね合わせることができない鏡像である２種類の立体異性体を表わす。

用語“医薬的に許容できる塩”は、生物学的または他の点で不都合ではない塩類を表わす。医薬的に許容できる塩には酸付加塩および塩基付加塩の両方が含まれる。

用語“医薬的に許容できる酸付加塩”は、下記のものを用いて形成された医薬的に許容できる塩を表わす：無機酸、たとえば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、炭酸、リン酸、ならびに脂肪族、脂環式、芳香族、芳香脂肪族、複素環式、炭素環式、およびスルホン酸クラスの有機酸から選択される有機酸、たとえばギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、アントラニル酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、エンボン酸(embonic acid)、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、およびサリチル酸。

用語“医薬的に許容できる塩基付加塩”は、有機または無機の塩基を用いて形成された医薬的に許容できる塩を表わす。許容できる無機塩基の例には、ナトリウム、カリウム、アンモニア、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、およびアルミニウムの塩が含まれる。医薬的に許容できる無毒性の有機塩基から誘導される塩には、下記のものの塩類が含まれる：第一級、第二級および第三級のアミン、天然の置換アミンを含めた置換アミン、環状アミン、ならびに塩基性イオン交換樹脂、たとえばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２－ジエチルアミノエタノール、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン類、ピペリジン(piperizine)、ピペリジン(piperidine)、Ｎ－エチルピペリジン、およびポリアミン樹脂。

１つまたは幾つかのキラル中心を含む一般式（Ｉ）の化合物は、ラセミ体、ジアステレオマー混合物、または光学活性である単一異性体のいずれかとして存在することができる。ラセミ体は、既知の方法に従って鏡像異性体に分離することができる。特に、結晶化により分離できるジアステレオマー塩が、ラセミ混合物から、光学活性酸、たとえばＤ－もしくはＬ－酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸またはカンファースルホン酸との反応により形成される。

ＨＢＶの阻害薬
本発明は、（ｉ）一般式（Ｉ）を有する新規化合物

［式中：
Ｒ^１は、カルボキシＣ_１－６アルキルにより置換されたオキソオキサジアザビシクロ［３．３．１］ノナニルであるか；あるいはオキソピロリジニルであり、そのオキソピロリジニルは、カルボキシＣ_１－６アルキル（Ｃ_１－６アルキル）アミノ、カルボキシフェニル、カルボキシピリジニル、カルボキシフェニルアミノ、ハロカルボキシフェニルもしくはカルボキシピロリジニルにより１回置換されているか、またはカルボキシピロリジニルおよびＣ_１－６アルキルにより２回置換されている；
Ｒ^２は、ＨまたはＣ_１－６アルキルである；
Ｒ^３は、Ｃ_１－６アルキルである；
Ｒ^４は、フェニルであり、そのフェニルはハロゲンにより３回置換されている］
またはその医薬的に許容できる塩、鏡像異性体もしくはジアステレオマーを提供する。

本発明のさらなる態様は、下記の式（Ｉ）の化合物：
式中：
Ｒ^１は、カルボキシＣ_１－６アルキルにより置換されたオキソオキサジアザビシクロ［３．３．１］ノナニルであるか；あるいはオキソピロリジニルであり、そのオキソピロリジニルは、カルボキシＣ_１－６アルキル（Ｃ_１－６アルキル）アミノ、カルボキシフェニル、カルボキシフェニルアミノ、ハロカルボキシフェニルもしくはカルボキシピロリジニルにより１回置換されているか、またはカルボキシピロリジニルおよびＣ_１－６アルキルにより２回置換されている；
Ｒ^２は、ＨまたはＣ_１－６アルキルである；
Ｒ^３は、Ｃ_１－６アルキルである；
Ｒ^４は、フェニルであり、そのフェニルはハロゲンにより３回置換されている］
またはその医薬的に許容できる塩、鏡像異性体もしくはジアステレオマーである。

本発明のさらなる態様は、（ｉｉ）式（Ｉ）の化合物：
式中：
Ｒ^１は、カルボキシメチル（メチル）アミノオキソピロリジニル、カルボキシピロリジニルオキソピロリジニル、カルボキシピロリジニル（メチル）オキソピロリジニル、カルボキシフェニルオキソピロリジニル、カルボキシピリジニルオキソピロリジニル、カルボキシフェニルアミノオキソピロリジニル、フルオロカルボキシフェニルオキソピロリジニルまたはカルボキシメチルオキソオキサジアザビシクロ［３．３．１］ノナニルである；
Ｒ^２は、Ｈまたはメチルである；
Ｒ^３は、メチルである；
Ｒ^４は、トリフルオロフェニルである；
またはその医薬的に許容できる塩、鏡像異性体もしくはジアステレオマーである。

本発明のさらなる態様は、下記の式（Ｉ）の化合物：
式中：
Ｒ^１は、カルボキシメチル（メチル）アミノオキソピロリジニル、カルボキシピロリジニルオキソピロリジニル、カルボキシピロリジニル（メチル）オキソピロリジニル、カルボキシフェニルオキソピロリジニル、カルボキシフェニルアミノオキソピロリジニル、フルオロカルボキシフェニルオキソピロリジニルまたはカルボキシメチルオキソオキサジアザビシクロ［３．３．１］ノナニルである；
Ｒ^２は、Ｈまたはメチルである；
Ｒ^３は、メチルである；
Ｒ^４は、トリフルオロフェニルである；
またはその医薬的に許容できる塩、鏡像異性体もしくはジアステレオマーである。

本発明のさらなる態様において、本発明の具体的化合物は（ｉｉｉ）下記のものから選択される：
（２Ｓ）－１－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボン酸；
（２Ｓ）－１－［（２Ｓ）－２－メチル－１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボン酸；
２－［メチル－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］アミノ］酢酸；
（２Ｒ）－１－［（２Ｓ）－２－メチル－１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボン酸；
１－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－３－カルボン酸；
（２Ｓ）－１－［１－［（６Ｓ，７Ｓ）－６，７－ジメチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボン酸；
２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸；
３－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸；
（２Ｒ）－１－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボン酸；
３－フルオロ－２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸；
２－フルオロ－６－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸；
２－［［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］アミノ］安息香酸；
２－［７－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－６－オキソ－３－オキサ－７，９－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－９－イル］酢酸；
４－フルオロ－２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸；
５－フルオロ－２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸；
４－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸；
６－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピリジン－２－カルボン酸；および
２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピリジン－３－カルボン酸。

合成
本発明の化合物は、いずれかの一般的な手段で製造できる。これらの化合物およびそれらの出発物質を合成するのに適した方法を下記のスキームおよび実施例に提示する。すべての置換基、特にＲ^１～Ｒ^４は、別に指示しない限り前記に定めたとおりである。さらに、そうではないと明白に指示しない限り、すべての反応、反応条件、略号および記号は有機化学における当業者に周知の意味をもつ。

スキーム１：

式ＩＶの化合物（環Ａ）は、カルボキシＣ_１－６アルキルにより置換されたオキソオキサジアザビシクロ［３．３．１］ノナンであるか；あるいはオキソピロリジンであり、そのオキソピロリジンは、カルボキシＣ_１－６アルキル（Ｃ_１－６アルキル）アミノ、カルボキシフェニル、カルボキシフェニルアミノ、ハロカルボキシフェニルもしくはカルボキシピロリジニルにより１回置換されているか、またはカルボキシピロリジニルおよびＣ_１－６アルキルにより２回置換されている。Ｘはブロモまたはヨードである。

スキーム１に示すように、本発明化合物の合成は式（ＩＩ）の二環式化合物から出発することができ、それをハロゲン化剤、たとえばＮ－ヨードスクシンイミドまたはＮ－ブロモスクシンイミドで処理して、式（ＩＩＩ）の化合物を得た。銅触媒、たとえばＣｕＩの存在下での式（ＩＩＩ）の化合物と式（ＩＶ）の化合物のカップリング反応により、式（Ｖ）の化合物が得られた。それに続いて、酸性条件、たとえばＨＣｌ／ＥｔＯＡｃまたはＴＦＡ／ＤＣＭ下での、Ｂｏｃ－脱保護、およびホスゲン等価体、たとえばトリホスゲンおよびカルボニルジイミダゾールの存在下での、アミンＲ^３ＮＨ_２によるウレア形成により、式（Ｉ）の最終化合物を得ることができた。上記のウレア形成反応において、適切なイソシアネートまたはカルバミン酸フェニルも同様に適用された(Padiya, K. J. et al. Org Lett. 2012, 14, 2814、およびそれに引用された参考文献)。

本発明はまた、下記の反応を含む、式（Ｉ）の化合物を製造するための方法に関する：
（ａ）式（Ｖ）の化合物

を酸と反応させ、続いてホスゲン等価体の存在下においてアミンＲ^４ＮＨ_２でウレア形成する；式中のＲ^１およびＲ^４は前記に定めたものである。

工程（ａ）において、酸はたとえばＨＣｌ／ＥｔＯＡｃおよびＴＦＡ／ＤＣＭであってもよい；ホスゲン等価体は、たとえばトリホスゲンおよびカルボニルジイミダゾールであってもよい。

前記方法に従って製造した式（Ｉ）の化合物も本発明の対象である。

医薬組成物および投与
他の態様は、本発明の化合物、および治療上不活性なキャリヤー、希釈剤または賦形剤を含有する、医薬組成物または医薬、ならびにそのような組成物および医薬を調製するために本発明の化合物を使用する方法を提供する。一例において、式（Ｉ）の化合物は、周囲温度で適宜なｐＨにおいて、および希望する純度で、生理的に許容できるキャリヤー、すなわち投与剤形中に用いる用量および濃度でレシピエントに対して無毒性であるキャリヤーと混合することにより配合できる。配合物のｐＨは、主に化合物の具体的な用途および濃度に依存するが、好ましくは約３から約８までのいずれかの範囲である。一例において、式（Ｉ）の化合物をｐＨ５の酢酸緩衝液中に配合する。他の態様において、式（Ｉ）の化合物は無菌である。本化合物は、たとえば固体もしくは非晶質組成物として、凍結乾燥配合物として、または水溶液として保存できる。

組成物は、医薬品適正製造基準に適合する様式で配合、服用および投与される。これに関して考慮する要因には、処置される具体的な障害、処置される具体的な哺乳類、個々の患者の臨床状態、障害の原因、その薬剤の送達部位、投与方法、投与計画、および医療専門家に既知である他の要因が含まれる。投与する化合物の“有効量”はそのような考慮事項により支配され、血清ＨＢＶ ＤＮＡレベルの抑制、またはＨＢｅＡｇからＨＢｅＡｂへのセロコンバージョン(seroconversion)、またはＨＢｓＡｇ消失、またはアラニンアミノトランスフェラーゼレベルの正常化、および肝臓の組織学的状態の改善のために必要な、最小量である。たとえば、そのような量は正常細胞または哺乳類全身に対して無毒な量より少ないであろう。

一例において、非経口投与する本発明化合物の１回当たりの医薬有効量は約０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ、あるいは約０．１～２０ｍｇ／ｋｇ（患者体重）の範囲であり、化合物の典型的な初回範囲は０．３～１５ｍｇ／ｋｇ／日であろう。他の態様において、経口単位剤形、たとえば錠剤およびカプセル剤は、約０．１から約１０００ｍｇまでの本発明化合物を含有する。

本発明の化合物はいずれか適切な手段で投与することができ、それには経口、局所（口腔および舌下を含む）、直腸、膣、経皮、非経口、皮下、腹腔内、肺内、皮内、クモ膜下および硬膜外ならびに鼻腔内、ならびに局所処置のために望ましければ病巣内投与が含まれる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。

本発明の化合物はいずれかの一般的投与形態、たとえば錠剤、散剤、カプセル剤、液剤、分散液剤、懸濁液剤、シロップ剤、スプレー剤、坐剤、ゲル剤、乳剤、パッチ剤などで投与できる。そのような組成物は、医薬製剤において一般的な成分、たとえば希釈剤、キャリヤー、ｐＨ調節剤、甘味剤、増量剤、およびさらなる有効薬剤を含有することができる。

代表的配合物は、本発明の化合物とキャリヤーまたは賦形剤を混合することにより調製される。適切なキャリヤーおよび賦形剤は当業者に周知であり、たとえばAnsel, Howard C., et al., Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2004; Gennaro, Alfonso R., et al. Remington: The Science and Practice of Pharmacy. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; および Rowe, Raymond C. Handbook of Pharmaceutical Excipients. Chicago, Pharmaceutical Press, 2005に詳細に記載されている。配合物は１種類以上の緩衝剤、安定剤、界面活性剤、湿潤剤、滑沢剤、乳化剤、懸濁化剤、保存剤、抗酸化剤、不透明化剤、流動剤、加工助剤、着色剤、甘味剤、香料、矯味矯臭剤、希釈剤、および薬物（すなわち、本発明の化合物またはその医薬組成物）にエレガントな体裁を付与するかまたは医薬製剤（すなわち、医薬）の製造を補助するための他の既知添加剤を含有することもできる。

適切な経口剤形の例は、約０．１ｍｇ～１０００ｍｇの本発明化合物に、約３０ｍｇ～９０ｍｇの無水乳糖、約５ｍｇ～４０ｍｇのクロスカルメロースナトリウム、約５ｍｇ～３０ｍｇのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）Ｋ３０、および約１ｍｇ～１０ｍｇのステアリン酸マグネシウムを配合したものを含有する錠剤である。粉末状成分をまず混和し、次いでＰＶＰの溶液と混合する。得られた組成物を乾燥させ、造粒し、ステアリン酸マグネシウムと混合し、一般的な装置を用いて圧縮して錠剤形態にすることができる。エアゾール配合物の一例は、５ｍｇ～４００ｍｇの本発明化合物を、適切な緩衝液、たとえばリン酸緩衝液に溶解し、所望によりたとえば等張化剤、たとえば塩化ナトリウムなどの塩を添加することにより調製することができる。その溶液を、たとえば０．２ミクロンのフィルターを用いて濾過して不純物および夾雑物を除去することができる。

したがって、ある態様では、式（Ｉ）の化合物またはその立体異性体もしくは医薬的に許容できる塩を含む医薬組成物が含まれる。さらなる態様には、式（Ｉ）の化合物、またはその立体異性体もしくは医薬的に許容できる塩を、医薬的に許容できるキャリヤーまたは賦形剤と共に含む医薬組成物が含まれる。

適応症および処置方法
本発明の化合物は、ＨＢＶのＤＮＡ合成を阻害し、ＨＢＶ ＤＮＡレベルを低減することができる。したがって、本発明の化合物はＨＢＶ感染症の治療または予防のために有用である。

本発明は、ＨＢＶ感染症の治療または予防のための、式（Ｉ）の化合物の使用に関する。

ＨＢＶ感染に関係する疾患の治療または予防に有用な医薬の調製のための式（Ｉ）の化合物の使用が本発明の目的である。

本発明は特に、ＨＢＶ感染症の治療または予防のための医薬を調製するための、式（Ｉ）の化合物の使用に関する。

他の態様には、ＨＢＶ感染症の治療または予防のための方法が含まれ、その方法は有効量の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、互変異成体、プロドラッグまたは医薬的に許容できる塩を投与することを含む。

本発明は下記の実施例を参照することによってより十分に理解されるであろう。ただし、それらは本発明の範囲を限定すると解釈すべきではない。

本明細書中で用いる略号は下記のものである：
ＣｂｚＣｌ：クロロギ酸ベンジル
ＤＣＥ： １，２－ジクロロエチレン
ＤＩＡＤ： アゾジカルボン酸ジイソプロピル
ＤＩＰＥＡ： Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＥＡまたはＥｔＯＡｃ： 酢酸エチル
ＥＣ_５０： 半数効果濃度
ＨＰＬＣ： 高速液体クロマトグラフィー
ＬＣＭＳＣ： 液体クロマトグラフィー－質量分析
ＭＳ： 質量分析
ＭｓＣｌ： メタンスルホニルクロリド
ＮＩＳ： Ｎ－ヨードスクシンイミド
ＰＥ： 石油エーテル
ｐｒｅｐ－ＨＰＬＣ： 分取高速液体クロマトグラフィー
ｐｒｅｐ－ＴＬＣ： 分取薄層クロマトグラフィー
ｐｓｉ： ポンド／平方インチ
ＳＦＣ： 超臨界流体クロマトグラフィー
ＴＥＡ： トリメチルアミン
ｔ－ＢｕＸＰｈｏｓ： ２－ジ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィノ－２’，４’，６’－トリイソプロピルビフェニル
ＴＭＧ： １，１，３，３－テトラメチルグアニジン
Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３： トリス（ジベンジリデンアセトン）二パラジウム（０）
ｐｇＲＮＡ： プレゲノムＲＮＡ
ｑＰＣＲ： 定量ポリメラーゼ連鎖反応
ｖ／ｖ： 体積比

一般的な実験条件
中間体および最終化合物を、下記の機器のうち１つを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した：ｉ）Ｂｉｏｔａｇｅ ＳＰ１システムおよびＱｕａｄ １２／２５Ｃａｒｔｒｉｄｇｅモジュール。ｉｉ）ＩＳＣＯ ｃｏｍｂｉ－フラッシュクロマトグラフィー機器。シリカゲル商品名およびポアサイズ：ｉ）ＫＰ－ＳＩＬ ６０Å、粒径：４０～６０μＭ；ｉｉ）ＣＡＳ登録ＮＯ：Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ：６３２３１－６７－４，粒径：４７～６０ミクロンシリカゲル；ｉｉｉ）ＺＣＸ，Ｑｉｎｇｄａｏ Ｈａｉｙａｎｇ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄから，ポア：２００～３００または３００～４００。

中間体および最終化合物を、逆相カラム上で分取ＨＰＬＣにより下記を用いて精製した；Ｘ Ｂｒｉｄｇｅ（商標） Ｐｅｒｐ Ｃ_１８（５μｍ，ＯＢＤ（商標）３０×１００ｍｍ）カラムまたはＳｕｎＦｉｒｅ（商標） Ｐｅｒｐ Ｃ_１８（５μｍ，ＯＢＤ（商標） ３０×１００ｍｍ）カラム。Ｗａｔｅｒｓ ＡｕｔｏＰ精製システム（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ（商標） Ｐｒｅｐ－Ｃ１８，３０×１００ｍｍ，Ｓａｍｐｌｅ Ｍａｎａｇｅｒ ２７６７，ポンプ２５２５，検出器：Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱおよびＵＶ ２４８７，溶媒系：アセトニトリル、および水中の０．１％水酸化アンモニウム）。

化合物のＬＣ／ＭＳスペクトルは、ＬＣ／ＭＳ（Ｗａｔｅｒｓ（商標） Ａｌｌｉａｎｃｅ ２７９５－Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱ）を用いて得られた。ＬＣ／ＭＳ条件は下記のとおりであった（操作時間６分）：
酸性条件：Ａ：Ｈ_２Ｏ中の０．１％ギ酸；Ｂ：アセトニトリル中の０．１％ギ酸；
塩基性条件：Ａ：Ｈ_２Ｏ中の０．１％ ＮＨ_３・Ｈ_２Ｏ；Ｂ：アセトニトリル；
中性条件：Ａ：Ｈ_２Ｏ；Ｂ：アセトニトリル；
質量スペクトル（ＭＳ）：一般に親質量を示すイオンのみをレポートし、別に記載しない限り引用した質量イオンは正質量イオン（Ｍ＋Ｈ）^＋である；
マイクロ波支援による反応は、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ ＳｉｘｔｙまたはＣＥＭ Ｄｉｓｃｏｖｅｒで実施された。

ＮＭＲスペクトルはＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ４００ＭＨｚを用いて得られた。

空気感受性試薬を用いるすべての反応をアルゴン雰囲気下で実施した。試薬は、別に記載しない限り業者から受け取ったままの状態で、さらに精製することなく用いられた。

下記の例は本発明の意味を説明するためのものであるが、決して本発明の意味の範囲内での限定を表わすものではない。

製造例
下記の例を参照することによって本発明はより十分に理解されるであろう。ただし、それらは本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。

中間体Ｉ－１
ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－ヨード－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート

中間体Ｉ－１を下記のスキームに従って製造した：

工程１：ｔｅｒｔ－ブチル Ｎ－［（１Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－エチル］－Ｎ－（１Ｈ－ピラゾール－５－イルメチル）カルバメート（化合物Ｉ－１ｂ）の製造
１Ｈ－ピラゾール－５－カルボアルデヒド（化合物Ｉ－１ａ，５４．０ｇ，５６２．５ｍｍｏｌ）の、ＭｅＯＨ（３００ｍＬ）中における溶液に、（２Ｓ）－２－アミノプロパン－１－オール（４１．２ｇ，６７５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を２５℃で１時間撹拌した。ＮａＢＨ_４（２５．９ｇ，６７５．０ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、反応混合物をさらに１時間撹拌し、続いてＨ_２Ｏ（３００ｍＬ）およびＢｏｃ_２Ｏ（１４７．１ｇ，６７５．０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で１２時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）で抽出した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０％－５％ ＭｅＯＨで溶離）により精製して、化合物Ｉ－１ｂ（８０ｇ）を無色の油として得た。LCMS (M+H⁺): 334。

工程２：［（２Ｓ）－２－［ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（１Ｈ－ピラゾール－５－イルメチル）アミノ］プロピル］メタンスルホネート（化合物Ｉ－１ｃ）の製造
ｔｅｒｔ－ブチル Ｎ－［（１Ｓ）－２－ヒドロキシ－１－メチル－エチル］－Ｎ－（１Ｈ－ピラゾール－５－イルメチル）カルバメート（化合物Ｉ－１ｂ，８０．０ｇ，１１７．２ｍｍｏｌ）およびＥｔ_３Ｎ（１００．５ｇ，９９５．６ｍｍｏｌ）の、ＤＣＭ（８００ｍＬ）中における混合物に、ＭｓＣｌ（５７．３ｇ，４９７．８ｍｍｏｌ）を徐々に０℃で添加した。得られた混合物を室温で２時間撹拌し、次いで水（５００ｍＬ）、ブライン（５００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。有機層を濃縮すると化合物Ｉ－１ｃ（１００ｇ，粗製）が得られ、それをそのまま次の工程に用いた。

工程３：ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（化合物Ｉ－１ｄ）の製造
［（２Ｓ）－２－［ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（１Ｈ－ピラゾール－５－イルメチル）アミノ］プロピル］メタンスルホネート（化合物Ｉ－１ｃ，１００．０ｇ，３１３．４ｍｍｏｌ）の、ＤＭＦ（１０００ｍＬ）中における溶液に、ＮａＨ（１５．０ｇ，３７６．２ｍｍｏｌ）を少量ずつ０℃で添加した。反応混合物を次いで室温で１２時間撹拌し、水（２０００ｍＬ）に注入し、ＥｔＯＡｃ（１０００ｍＬ）で２回抽出した。有機層を合わせて濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の１０％－８０％ ＥｔＯＡｃで溶離）により精製して、化合物Ｉ－１ｄ（１８．０ｇ）を無色の油として得た。LCMS (M+H⁺): 238。

工程４：ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－ヨード－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（中間体Ｉ－１）の製造
ｔｅｒｔ－ブチル ６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（化合物５３ｃ，３．３ｇ，１４．８ｍｍｏｌ）の、ＣＨ_３ＣＮ（４０ｍＬ）中における溶液に、ＮＩＳ（５．０ｇ，２２．１ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出し、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の１０％－８０％ ＥｔＯＡｃで溶離）により精製して、中間体Ｉ－１（４．８ｇ）を白色固体として得た。

中間体Ｉ－２
ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ，７Ｓ）－３－ヨード－６，７－ジメチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート

中間体Ｉ－２を下記のスキームに従って製造した：

工程１：（４Ｒ，５Ｒ）－４，５－ジメチル－１，３，２－ジオキサチオラン ２，２－ジオキシド（化合物Ｉ－２ｂ）の製造
ＳＯＣｌ_２（７．２６ｇ，４．４５ｍＬ，６１ｍｍｏｌ）の、ＤＣＭ（５０ｍＬ）中における溶液を、（２Ｒ，３Ｒ）－ブタン－２，３－ジオール（５ｇ，５５．５ｍｍｏｌ）、イミダゾール（１８．９ｇ，２７７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１９．６ｇ，２７．１ｍＬ，１９４ｍｍｏｌ）の、ＤＣＭ（２００ｍＬ）中における撹拌混合物に、０℃で添加し、反応混合物を０℃で１時間撹拌した。反応混合物をＨ_２Ｏで反応停止し、ＤＣＭで２回抽出した。有機層を合わせてＨ_２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮すると残留物が得られた。この粗製残留物の、アセトニトリル（２００ｍＬ）中における撹拌溶液に、０℃で過ヨウ素酸ナトリウム（１７．８ｇ，８３．２ｍｍｏｌ）、水（１５０ｍＬ）および塩化ロジウム（ＩＩＩ）（１．１６ｇ，５．５５ｍｍｏｌ）を順に添加し、反応混合物を０℃で３時間撹拌した。２層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機層を合わせて飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液およびブラインで洗浄し、次いでＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、化合物Ｉ－２ｂを無色の油（８ｇ）として得た。

工程２：（２Ｒ，３Ｓ）－３－（４－ブロモ－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）ブタン－２－オール（化合物Ｉ－２ｃ）の製造
（４Ｒ，５Ｒ）－４，５－ジメチル－１，３，２－ジオキサチオラン ２，２－ジオキシド（化合物Ｉ－２ｂ，８ｇ，５２．６ｍｍｏｌ）、４－ブロモ－１Ｈ－ピラゾール（１１．６ｇ，７８．９ｍｍｏｌ）およびＣｓ_２ＣＯ_３（３４．３ｇ，１０５ｍｍｏｌ）の、ＤＭＦ（５０ｍＬ）中における混合物を、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濃縮した。得られた残留物を４００ｍＬのＴＨＦ／５０％ Ｈ_２ＳＯ_４水溶液（ｖ／ｖ １／２）に装入し、４８時間、激しく撹拌した。反応混合物を次いで１０Ｍ ＮａＯＨ水溶液で慎重に塩基性にし、層を分離した。水層をＤＣＭで２回抽出し、有機層を合わせてブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、化合物Ｉ－２ｃを無色の油（８ｇ）として得た。LCMS (M+H⁺): 219。

工程３：２－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－ブロモ－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）ブタン－２－イル）イソインドリン－１，３－ジオン（化合物Ｉ－２ｄ）の製造
（２Ｒ，３Ｓ）－３－（４－ブロモ－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）ブタン－２－オール（化合物Ｉ－２ｃ，８ｇ，３６．５ｍｍｏｌ）、イソインドリン－１，３－ジオン（５．９１ｇ，４０．２ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（１２．５ｇ，４７．５ｍｍｏｌ）の、ＴＨＦ（７５ｍＬ）中における混合物に、ＤＩＡＤ（１１．１ｇ，５４．８ｍｍｏｌ）を室温で滴加した。次いで反応混合物を室温で２時間撹拌し、真空中で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル，ヘキサン中の０％－５０％ ＥｔＯＡｃ）により精製して、化合物Ｉ－２ｄを白色固体（５ｇ）として得た。LCMS (M+H⁺): 348。

工程４：（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－ブロモ－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）ブタン－２－アミン（化合物Ｉ－２ｅ）の製造
２－（（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－ブロモ－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）ブタン－２－イル）イソインドリン－１，３－ジオン（化合物Ｉ－２ｄ，５ｇ，１４．４ｍｍｏｌ）およびヒドラジン水和物（７．１９ｇ，１４４ｍｍｏｌ）の、ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中における混合物を、８０℃で１５時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮した。残留物をＤＣＭに溶解し、固体を濾去し、濾液を濃縮して、化合物Ｉ－２ｅをわずかに黄色の油（３ｇ）として得た。LCMS (M+H⁺): 218。

工程５：（２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－ベンジル－３－（４－ブロモ－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）ブタン－２－アミン（化合物Ｉ－２ｆ）の製造
（２Ｓ，３Ｓ）－３－（４－ブロモ－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）ブタン－２－アミン（化合物Ｉ－２ｅ，３ｇ，１３．８ｍｍｏｌ）およびベンズアルデヒド（１．６１ｇ，１５．１ｍｍｏｌ）の、ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中における混合物を、室温で２時間撹拌した。次いで水素化ホウ素ナトリウム（６２４ｍｇ，１６．５ｍｍｏｌ）を０℃において３０分で徐々に添加し、反応混合物を室温でさらに３０分間撹拌した。反応混合物を１００ｍＬのＨ_２Ｏに注入し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で２回抽出した。有機層を合わせてＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、次いで真空中で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル，ヘキサン中の０％－５０％ ＥｔＯＡｃ）により精製して、化合物Ｉ－２ｆを淡黄色の油（４ｇ）として得た。LCMS (M+H⁺): 308。

工程６：（６Ｓ，７Ｓ）－５－ベンジル－３－ブロモ－６，７－ジメチル－４，５，６，７－テトラヒドロピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン（化合物Ｉ－２ｇ）の製造
（２Ｓ，３Ｓ）－Ｎ－ベンジル－３－（４－ブロモ－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）ブタン－２－アミン（化合物Ｉ－２ｆ，４ｇ，１３ｍｍｏｌ）の、アセトニトリル（５０ｍＬ）中における撹拌溶液に、パラホルムアルデヒド（１．９５ｇ，６４．９ｍｍｏｌ）および２，２，２－トリフルオロ酢酸（２９６ｍｇ，２．６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を７０℃で６時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物を次いでＥｔＯＡｃに装入し、ＮａＨＣＯ_３水溶液およびブラインで洗浄した。有機層を濃縮し、残留物をシリカゲルカラム（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ １：０－９：１）で精製して、化合物Ｉ－２ｇを無色の油（２．３ｇ）として得た。LCMS (M+H⁺): 320。

工程７：ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ，７Ｓ）－６，７－ジメチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（化合物Ｉ－２ｈ）の製造
（６Ｓ，７Ｓ）－５－ベンジル－３－ブロモ－６，７－ジメチル－４，５，６，７－テトラヒドロピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン（化合物Ｉ－２ｇ，１．５ｇ，４．６８ｍｍｏｌ）、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（２．１８ｍＬ，９．３７ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＯＨ）_２／Ｃ（３２９ｍｇ）の、ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中における混合物を、５０℃に加熱し、水素下で１５時間撹拌した。次いで固体を濾去し、濾液を濃縮した。残留物をＴＨＦ／ＭｅＯＨ（ｖ／ｖ ５：１，５０ｍｌ）に溶解し、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（２．１８ｍｌ，９．３７ｍｍｏｌ）およびＮａ_２ＣＯ_３（４９６ｍｇ，４．６８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次いでセライト(celite)により濾過し、濾液を濃縮し、粗製物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル，ヘキサン中の１０％－５０％ ＥｔＯＡｃ，ＥｔＯＡｃは１０％のＭｅＯＨを含有）により精製した。LCMS (M+H⁺): 252。

工程８：ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ，７Ｓ）－３－ヨード－６，７－ジメチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（中間体Ｉ－２）の製造
（６Ｓ，７Ｓ）－ｔｅｒｔ－ブチル ６，７－ジメチル－６，７－ジヒドロピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５（４Ｈ）－カルボキシレート（化合物Ｉ－２ｈ，１．２ｇ，４．７７ｍｍｏｌ）の、ＭｅＣＮ（２０ｍＬ）中における溶液に、ＮＩＳ（１．６１ｇ，７．１６ｍｍｏｌ）を添加し、次いで室温で１６時間撹拌した。反応混合物をＮａＨＳＯ_３水溶液で反応停止し、ＥｔＯＡｃで抽出し、乾燥させ、濃縮した。粗製物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル，ヘキサン中の０％－５０％ ＥｔＯＡｃ）により精製して、中間体Ｉ－２を無色の油１．２ｇとして得た。LCMS (M+H⁺): 378。

中間体Ｉ－３
Ｎ－（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバミン酸フェニル

中間体Ｉ－３を下記のスキームに従って精製した：

３，４，５－トリフルオロアニリン（１．４７ｇ，１０ｍｍｏｌ）の、ＤＣＭ（３０ｍＬ）中における溶液に、ＤＩＰＥＡ（２．０６ｍＬ，１２ｍｍｏｌ）を添加し、続いてクロロギ酸フェニル（１．３８ｍＬ，１１ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。添加後、反応混合物を室温にまで高め、一夜撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、水で洗浄した。有機相を分離し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮した。残留物をカラムにより精製して、中間体Ｉ－３を白色固体１．８７ｇとして得た。LCMS (M+H⁺): 268。

実施例１
(２Ｓ）－１－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボン酸

表題化合物を下記のスキームに従って製造した：

工程１：メチル （２Ｓ）－１－（５－オキソピロリジン－３－イル）ピロリジン－２－カルボキシレート（化合物１ｂ）の製造
ピロリジン－２，４－ジオン（化合物１ａ，２００ｍｇ，２．０２ｍｍｏｌ）、（２Ｓ）－ピロリジン－２－カルボン酸メチル（３３４ｍｇ，２．０２ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（１００ｍｇ）の、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中における混合物を、室温で４０時間、５０ｐｓｉのＨ_２雰囲気下で撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮して、化合物１ｂ（４００ｍｇ，粗製）を褐色の油として得た。

工程２：ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－［４－［（２Ｓ）－２－メトキシカルボニルピロリジン－１－イル］－２－オキソ－ピロリジン－１－イル］－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（化合物１ｃ）の製造
メチル （２Ｓ）－１－（５－オキソピロリジン－３－イル）ピロリジン－２－カルボキシレート（化合物１ｂ，４００ｍｇ）、ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－ヨード－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（中間体Ｉ－１，６８４ｍｇ，１．８８ｍｍｏｌ）、（１Ｒ，２Ｒ）－Ｎ１，Ｎ２－ジメチルシクロヘキサン－１，２－ジアミン（５４ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（７２ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）およびＫ_３ＰＯ_４（８００ｍｇ，３．７８ｍｍｏｌ）の、ジオキサン（２０ｍＬ）中における混合物を、脱気し、Ｎ_２を再充填し、１１０℃でＮ_２下において１６時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮し、粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物１ｃ（２００ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H⁺): 448.3。

工程３：メチル （２Ｓ）－１－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボキシレート（化合物１ｄ）の製造
ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－［４－［（２Ｓ）－２－メトキシカルボニルピロリジン－１－イル］－２－オキソ－ピロリジン－１－イル］－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（化合物１ｃ，２００ｍｇ，０．４４７ｍｍｏｌ）の、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中における溶液に、ＭｅＯＨ中のＨＣｌ溶液（４Ｍ，５ｍＬ，２０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いで濃縮すると、粗製物質（０．１８ｇ）が褐色固体として得られた。その固体をＤＭＦ（４ｍＬ）に溶解し、それにＤＩＰＥＡ（０．１６ｇ，１．１８ｍｍｏｌ）およびＮ－（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバミン酸フェニル（中間体Ｉ－３，０．１５ｇ，０．５６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を３０℃で１２時間撹拌し、Ｈ_２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（それぞれ２０ｍＬ）で３回抽出した。有機相を合わせて濃縮し、得られた残留物を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０／１）により精製して、化合物１ｄ（０．１５ｇ）を褐色固体として得た。LCMS (M+H⁺): 521.4。

工程４：（２Ｓ）－１－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボン酸（実施例１）の製造
メチル （２Ｓ）－１－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボキシレート（化合物１ｄ，１５０ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ）の、ＭｅＯＨ（２ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（１ｍＬ）中における混合物に、ＬｉＯＨ（２８ｍｇ，１．１５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いで２Ｍ ＨＣｌ水溶液でｐＨ＝５に酸性化し、濃縮した。得られた残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例１（３０ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H⁺): 507.2, ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d₄) δ ppm 7.71 - 7.61 (m, 1H), 7.40 - 7.24 (m, 2H), 5.15 - 5.05 (m, 1H), 5.05 - 4.92 (m, 1H), 4.58 - 4.45 (m, 1H), 4.40 - 3.90 (m, 6H), 3.90 - 3.75 (m, 1H), 3.26 - 3.15 (m, 1H), 3.15 - 2.85 (m, 2H), 2.56 - 2.42 (m, 1H), 2.31 - 2.20 (m, 1H), 2.20 - 2.04 (m, 1H), 2.04 - 1.88 (m, 1H), 1.32 - 1.24 (m, 3H)。

実施例２
（２Ｓ）－１－［（２Ｓ）－２－メチル－１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボン酸

表題化合物を下記のスキームに従って製造した：

工程１：ｔｅｒｔ－ブチル （２Ｓ）－３－［（２Ｓ）－２－メトキシカルボニルピロリジン－１－イル］－２－メチル－５－オキソ－ピロリジン－１－カルボキシレート（化合物２ｂ）の製造
ｔｅｒｔ－ブチル （２Ｓ）－２－メチル－３，５－ジオキソ－ピロリジン－１－カルボキシレート（５００ｍｇ，２．３４ｍｍｏｌ，それの合成についてはHosseini, M. et al Org. Letters 2006, 8, 2103を参照）の、ＤＣＥ（１０ｍＬ）中における混合物に、（２Ｓ）－ピロリジン－２－カルボン酸メチル（３９５ｍｇ，２．８１ｍｍｏｌ）およびＡｃＯＨ（５滴）を添加し、反応混合物を４０℃で５時間撹拌し、次いでＮａＣＮＢＨ_３（２９４ｍｇ，４．６８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０℃で１２時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、濾過し、濾液を濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１／１）により精製して、粗製化合物２ｂ（１．２ｇ，粗製）を無色の油として得た。

工程２：メチル （２Ｓ）－１－［（２Ｓ）－２－メチル－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボキシレート（化合物２ｃ）の製造
ｔｅｒｔ－ブチル （２Ｓ）－３－［（２Ｓ）－２－メトキシカルボニルピロリジン－１－イル］－２－メチル－５－オキソ－ピロリジン－１－カルボキシレート（化合物２ｂ，１．２ｇ，粗製）の、ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中における混合物に、ＨＣｌ（２０ｍＬ Ｌ，８０ｍｍｏｌ，ジオキサン中４Ｍ）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物２ｃ（１８６ｍｇ）を無色の油として得た。LCMS (M+H⁺): 227.0。

工程３：ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－［（２Ｓ）－３－［（２Ｓ）－２－メトキシカルボニルピロリジン－１－イル］－２－メチル－５－オキソ－ピロリジン－１－イル］－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（化合物２ｄ）
ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－ヨード－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（中間体Ｉ－１，４８２ｍｇ，１．３３ｍｍｏｌ）の、ジオキサン（２０ｍＬ）中における溶液に、メチル （２Ｓ）－１－［（２Ｓ）－２－メチル－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボキシレート（３４９ｍｇ，１．５４ｍｍｏｌ）、（１Ｒ，２Ｒ）－Ｎ１，Ｎ２－ジメチルシクロヘキサン－１，２－ジアミン（３９ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）、Ｋ_３ＰＯ_４（５６５ｍｇ，２．６６ｍｍｏｌ）およびＣｕＩ（５２ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１１０℃で１２時間、Ｎ_２雰囲気下で撹拌し、次いでＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）により希釈し、濾過し、濾液を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物２ｄ（０．２５ｇ）を褐色固体として得た。LCMS: (M+H⁺) 462.2。

工程４：メチル （２Ｓ）－１－［（２Ｓ）－２－メチル－１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボキシレート（化合物２ｅ）の製造
ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－［（２Ｓ）－３－［（２Ｓ）－２－メトキシカルボニルピロリジン－１－イル］－２－メチル－５－オキソ－ピロリジン－１－イル］－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（化合物２ｄ，２５０ｍｇ，０．５４ｍｍｏｌ）の、ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中における溶液に、ＨＣｌ（１０ｍＬ，４０ｍｍｏｌ，ＥｔＯＡｃ中４Ｍ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いで濃縮すると、褐色の残留物（２２０ｍｇ）が得られた。その残留物（１５０ｍｇ）をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、それにＤＩＰＥＡ（１２８ｍｇ，０．９５ｍｍｏｌ）およびＮ－（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバミン酸フェニル（中間体Ｉ－３，１１３ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌し、Ｈ_２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機相を合わせて乾燥させ、濃縮して、化合物２ｅ（２４９ｍｇ，粗製）を褐色固体として得た。LCMS: (M+H⁺) 535.2。

工程５：（２Ｓ）－１－［（２Ｓ）－２－メチル－１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボン酸（実施例２）の製造
メチル （２Ｓ）－１－［（２Ｓ）－２－メチル－１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボキシレート（化合物２ｅ，２４９ｍｇ）の、ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ（４ｍＬ，ｖ／ｖ ３／１）中における混合物に、ＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏ（４９ｍｇ，１．１４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応物をｐＨ＝５に酸性化し、濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例２（７７ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H⁺): 520.9, ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d₄) δ ppm 7.61 (s, 1H), 7.34 - 7.21 (m, 2H), 5.01 (d, J=16.9 Hz, 1H), 4.97 - 4.90 (m, 1H), 4.49 - 4.37 (m, 2H), 4.36 - 4.28 (m, 3H), 4.22 - 4.15 (m, 1H), 3.90 - 3.78 (m, 1H), 3.45-3.30 (m, 1H), 3.06 (dd, J=11.2, 16.1 Hz, 1H), 2.78 (dd, J=7.7, 16.1 Hz, 1H), 2.63 - 2.50 (m, 1H), 2.31 - 2.09 (m, 3H), 1.43 (d, J=6.5 Hz, 3H), 1.23 (d, J=6.8 Hz, 3H)。

実施例３
２－［メチル－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］アミノ］酢酸

実施例３を、実施例１と同様にして、２－（メチルアミノ）酢酸メチルを（２Ｓ）－ピロリジン－２－カルボン酸メチルの代わりに用いて製造した。実施例３（１０ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H⁺): 480.9, ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d₄) δ ppm 7.70-7.65 (m, 1H), 7.30-7.20 (m, 2H), 5.10 - 5.01 (m, 1H), 4.95 - 4.73 (m, 1H), 4.47 (d, J=17.1 Hz, 1H), 4.44 - 4.34 (m, 1H), 4.32 - 4.00 (m, 6H), 3.10 - 2.85 (m, 5H), 1.30 - 1.15(m, 3H)。

実施例４
（２Ｒ）－１－［（２Ｓ）－２－メチル－１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボン酸

実施例４を、実施例２と同様にして、（２Ｒ）－ピロリジン－２－カルボン酸メチルを（２Ｓ）－ピロリジン－２－カルボン酸メチルの代わりに用いて製造した。実施例４（３８ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H⁺): 520.9, ¹H NMR: (400MHz, METHANOL-d₄) δ ppm 7.62 (s, 1H), 7.35 - 7.23 (m, 2H), 5.04 (d, J=17.1 Hz, 1H), 5.00 - 4.85 (m, 1H), 4.53 - 4.40 (m, 3H), 4.38 - 4.27 (m, 2H), 4.23 - 4.15 (m, 1H), 3.80 - 3.70 (m, 1H), 3.45 -3.35 (m, 1H), 3.07 (dd, J=9.5, 16.4 Hz, 1H), 2.96 - 2.87 (m, 1H), 2.59 - 2.47 (m, 1H), 2.45 - 2.36 (m, 1H), 2.28 - 2.16 (m, 1H), 2.15 - 2.03 (m, 1H), 1.37 (d, J=6.3 Hz, 3H), 1.25 (d, J=6.9 Hz, 3H)。

実施例５
１－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－３－カルボン酸

実施例５を、実施例１と同様にして、ピロリジン－３－カルボン酸メチルを（２Ｓ）－ピロリジン－２－カルボン酸メチルの代わりに用いて製造した。実施例５（１０ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H⁺) 506.9, ¹H NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ ppm ¹H NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ = 9.19 (s, 1H), 8.30 (br s, 1H), 7.61 (s, 0.5H), 7.60 (s, 0.5H), 7.48 - 7.38 (m, 2H), 5.03 - 4.92 (m, 1H), 4.91 - 4.80 (m, 1H), 4.44 - 4.32 (m, 1H), 4.24 - 4.15 (m, 1H), 4.14 - 4.06 (m, 1H), 3.89 - 3.83 (m, 2H), 3.50- 3.40 (m, 1H), 3.22 - 3.11 (m, 1H), 2.98 - 2.86 (m, 1H), 2.86 - 2.75 (m, 1H), 2.70 - 2.50, 3H), 2.48 - 2.32 (m, 1H), 2.05 - 1.90 (m, 2H), 1.20 - 1.05 (m, 3H)。

実施例６
（２Ｓ）－１－［１－［（６Ｓ，７Ｓ）－６，７－ジメチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボン酸

実施例６を、実施例１と同様にして、ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ，７Ｓ）－３－ヨード－６，７－ジメチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（中間体Ｉ－２）をｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－ヨード－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（中間体Ｉ－１）の代わりに用いて製造した。分取ＨＰＬＣ精製により実施例６を２つの異性体、実施例６－１および実施例６－２として得た。

実施例６－１（１４ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H⁺): 521.2, ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d₄) δ ppm 7.64 (s, 1H), 7.55 - 7.40 (m, 2H), 5.21 (d, J=17.0 Hz, 1H), 4.82 (q, J=6.8 Hz, 1H), 4.52 (d, J=17.0 Hz, 1H), 4.38 (q, J=6.5 Hz, 1H), 4.31 - 4.15 (m, 2H), 4.03 (dd, J=4.5, 9.7 Hz, 1H), 3.98 - 3.80 (m, 2H), 3.20 (dt, J=6.6, 10.6 Hz, 1H), 3.14 - 3.03 (m, 1H), 2.99 - 2.89 (m, 1H), 2.58 - 2.41 (m, 1H), 2.34 - 2.22 (m, 1H), 2.15 (tdd, J=3.2, 6.6, 13.2 Hz, 1H), 2.05 - 1.94 (m, 1H), 1.43 (d, J=6.6 Hz, 3H), 1.25 (d, J=6.8 Hz, 3H)。

実施例６－２（２７ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H⁺): 521.2, ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d₄) δ = 7.66 (s, 1H), 7.42 - 7.30 (m, 2H), 5.08 (d, J=16.9 Hz, 1H), 4.80 (q, J=7.2 Hz, 1H), 4.52 (d, J=16.9 Hz, 1H), 4.43 - 4.27 (m, 2H), 4.20 - 4.06 (m, 2H), 3.95 (br dd, J=4.8, 9.8 Hz, 1H), 3.74 (br t, J=7.0 Hz, 1H), 3.24 - 3.13 (m, 1H), 3.08 - 2.98 (m, 1H), 2.92 - 2.83 (m, 1H), 2.54 - 2.41 (m, 1H), 2.32 - 2.22 (m, 1H), 2.12 (tdd, J=3.5, 6.6, 9.7 Hz, 1H), 2.00 - 1.92 (m, 1H), 1.45 (d, J=6.6 Hz, 3H), 1.24 (d, J=7.0 Hz, 3H)。

実施例７
２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸

表題化合物を下記のスキームに従って製造した：

工程１：ｔｅｒｔ－ブチル－［（２－ヨードフェニル）メトキシ］－ジメチル－シラン（化合物７ｂ）の製造
（２－ヨードフェニル）メタノール（化合物７ａ，２．３４ｇ，１０．０ｍｍｏｌ）の、ＤＣＭ（１５ｍＬ）中における溶液に、イミダゾール（２．０４ｇ，３０．０ｍｍｏｌ）を添加し、続いてｔｅｒｔ－ブチルクロロジメチルシラン（１．８１ｇ，１２．０ｍｍｏｌ）の、ＤＣＭ（５ｍＬ）中における溶液を滴加した。得られた懸濁液を室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮した。残留物をＰＥ／ＥＡ（ｖ／ｖ＝５／１）に溶解し、水で洗浄した。水相をＰＥ／ＥＡ（ｖ／ｖ＝５／１）で２回抽出した。有機相を合わせて濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物７ｂ（３．３１ｇ）を得た。LCMS (M+H⁺): 349。

工程２：エチル ３－［２－［［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］フェニル］プロパ－２－エノエート（化合物７ｃ）の製造
ｔｅｒｔ－ブチル－［（２－ヨードフェニル）メトキシ］－ジメチル－シラン（化合物７ｂ，６．０ｇ，１７．２ｍｍｏｌ）、アクリル酸エチル（６．９ｇ，７．３４ｍＬ，６８．９ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（７．０ｇ，９．６ｍＬ，６８．９ｍｍｏｌ）、トリ－ｏ－トリルホスフィン（５２４ｍｇ，１．７２ｍｍｏｌの、アセトニトリル（２０ｍＬ）中における溶液に、酢酸パラジウム（３８７ｍｇ，１．７２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をアルゴンで洗い流し、次いで９０℃で一夜加熱した。反応混合物を冷却し、氷水で反応停止し、ＰＥ／ＥＡ（ｖ／ｖ＝１０／１）で２回抽出した。有機相を合わせて濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の５％ ＥｔＯＡｃで溶離）により精製して、化合物７ｃ（５．２ｇ）を得た。LCMS (M+H⁺): 321。

工程３：エチル ３－［２－［［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］フェニル］－４－ニトロ－ブタノエート（化合物７ｄ）の製造
化合物エチル ３－［２－［［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］フェニル］プロパ－２－エノエート（化合物７ｃ，３．２０ｇ，１０．０ｍｍｏｌ）の、ニトロメタン（２０ｍＬ）中における溶液に、１，１，３，３－テトラメチルグアニジン（２３０．０ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、８５℃で一夜加熱し、次いで濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の５％－１０％ ＥｔＯＡｃで溶離）により精製して、化合物７ｄ（１．８０ｇ）を得た。LCMS (M+H⁺): 382。

工程４：４－［２－［［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］フェニル］ピロリジン－２－オン（化合物７ｅ）の製造
エチル ３－［２－［［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］フェニル］－４－ニトロ－ブタノエート（化合物７ｄ，１．７２ｇ，４．５ｍｍｏｌ）の、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）およびＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中における溶液に、飽和塩化アンモニウム水溶液（１０ｍＬ）および亜鉛（２．３５ｇ，３６．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を９０℃で一夜加熱し、次いで冷却し、濾過した。濾液を濃縮した。残留物を水で処理し、２．５Ｍ ＮａＯＨ水溶液でｐＨ８．０に塩基性化し、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機相を合わせてＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、化合物７ｅ（１．３７ｇ，粗製）が得られ、それをそのまま次の工程に用いた。LCMS (M+H⁺): 306。

工程５：ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－［４－［２－［［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］フェニル］－２－オキソ－ピロリジン－１－イル］－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（化合物７ｆ）の製造
４－［２－［［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］フェニル］ピロリジン－２－オン（化合物７ｅ，１．０ｇ，３．３０ｍｍｏｌ）の、ＤＭＳＯ（１５ｍＬ）中における溶液に、ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－ヨード－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（中間体Ｉ－１，１．２ｇ，３．３０ｍｍｏｌ）、Ｋ_３ＰＯ_４（１．４ｇ，６．６０ｍｍｏｌ）、（１Ｒ，２Ｒ）－Ｎ１，Ｎ２－ジメチルシクロヘキサン－１，２－ジアミン（１８８．０ｍｇ，１．３２ｍｍｏｌ）およびＣｕＩ（１２６．０ｍｇ，６６１μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素で洗い流し、シールし、マイクロ波下において１１０℃で２時間加熱した。反応混合物を冷却し、氷水で反応停止し、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機層を合わせてＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物７ｆ（１．４ｇ）を得た。LCMS (M+H⁺): 541。

工程６：ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－［４－［２－（ヒドロキシメチル）フェニル］－２－オキソ－ピロリジン－１－イル］－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（化合物７ｇ）の製造
ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－［４－［２－［［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］フェニル］－２－オキソ－ピロリジン－１－イル］－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（化合物７ｆ，１．４１ｇ，２．６ｍｍｏｌ）およびテトラブチルアンモニウムフルオリド溶液（ＴＨＦ中１．０Ｍ，３ｍＬ）の混合物を、室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物７ｇ（１．１ｇ）を得た。LCMS (M+H⁺): 427。

工程７：２－［１－［（６Ｓ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸（化合物７ｈ）の製造
ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－［４－［２－（ヒドロキシメチル）フェニル］－２－オキソ－ピロリジン－１－イル］－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（化合物７ｇ，７００．０ｍｇ，１．６４ｍｍｏｌ）の、アセトニトリル（５ｍＬ）および水（１０ｍＬ）中における溶液に、２，２，６，６－テトラメチルピペリジン－Ｎ－オキシド（２５．６ｍｇ，１６４μｍｏｌ）および臭化カリウム（１９．５ｍｇ，１６４μｍｏｌ）を添加した。１０分後、次亜塩素酸ナトリウム（１４．５％，２．４５ｍｏｌ／Ｌ，３．３５ｍＬ，８．２０ｍｍｏｌ）を滴加した。次いで２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨ＝８～１０に調整した。反応混合物を室温で２時間、次いで５０℃で３時間、撹拌した。さらに１バッチのＮａＣｌＯ（１４．５％，３．３５ｍＬ）を添加し、混合物を５０℃でさらに３時間撹拌し、次いでエタノールで反応停止し、濃縮し、ｐＨ＝４～５に酸性化し、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機相を乾燥させ、濃縮して、粗製化合物７ｈ（７２３．０ｍｇ，粗製）を得た。LCMS (M+H⁺): 441。

工程８：２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸（実施例７）の製造
２－［１－［（６Ｓ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸（化合物７ｈ，７２３．０ｍｇ，１．６４ｍｍｏｌ）、２，２，２－トリフルオロ酢酸（５．０ｍＬ）およびＤＣＭ（２．５ｍＬ）の混合物を、室温で３０分間撹拌した。反応混合物を濃縮し、次いで共沸蒸留のためにトルエンを添加した。残留物をＤＣＥ（１０ｍＬ）で溶解し、それにＤＩＰＥＡ（２．０ｍＬ）およびＮ－（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバミン酸フェニル（中間体Ｉ－３，６５８．０ｍｇ，２．４６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０℃で３時間加熱し、次いで濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー、次いで分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例７（４６０ｍｇ）を得た。LCMS (M+H⁺): 514.2, ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d₄) δ ppm 7.96 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.68 - 7.55 (m, 3H), 7.43 - 7.36 (m, 1H), 7.34 - 7.24 (m, 2H), 5.14 - 5.04 (m, 1H), 5.00 - 4.93 (m, 1H), 4.70 - 4.58 (m, 1H), 4.58 - 4.50 (m, 1H), 4.34 - 4.20 (m, 2H), 4.20 - 4.13 (m, 1H), 3.96 - 3.87 (m, 1H), 3.02 (dd, J=9.2, 17.2 Hz, 1H), 2.77 (dd, J=7.5, 17.2 Hz, 1H), 1.29 (d, J=7.0 Hz, 3H)。

実施例７は、ＳＦＣ（キラルカラム，ｃｈｉｒａｌｃｅｌ（登録商標） ＯＤ－Ｈ，５μｍ，２０×２５０ｍｍ；移動相，８０％ ＣＯ_２および２０％ ＭｅＯＨ（ＭｅＯＨ＋０．５％ ＮＨ_３Ｈ_２Ｏ）；流速６５ｍＬ／分，背圧１００バール）により、２つの異性体、実施例７－１（ピーク１）および実施例７－２（ピーク２）に分離することができた；
実施例７－１, LCMS (M+H⁺): 514.4, ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d4) δ ppm 7.85 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.60 - 7.51 (m, 2H), 7.39 - 7.34 (m, 1H), 7.34 - 7.25 (m, 2H), 5.08 (d, J=17.0 Hz, 1H), 5.03 - 4.95 (m, 1H), 4.65 - 4.50 (m, 1H), 4.56 (d, J=16.9 Hz, 1H), 4.30 (dd, J=4.4, 12.8 Hz, 1H), 4.26 - 4.19 (m, 1H), 4.16 (dd, J=1.0, 12.7 Hz, 1H), 3.93 (dd, J=6.7, 9.6 Hz, 1H), 3.01 (dd, J=9.2, 17.2 Hz, 1H), 2.79 (dd, J=7.7, 17.1 Hz, 1H), 1.28 (d, J=6.8 Hz, 3H)；
実施例７－２, LCMS (M+H⁺): 514.4, ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d4) δ = 7.91 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.61 - 7.53 (m, 2H), 7.41 - 7.35 (m, 1H), 7.34 - 7.25 (m, 2H), 5.09 (d, J=16.9 Hz, 1H), 5.00 - 4.94 (m, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.54 (d, J=17.0 Hz, 1H), 4.36 - 4.23 (m, 2H), 4.19 - 4.13 (m, 1H), 3.90 (dd, J=6.4, 9.6 Hz, 1H), 3.02 (dd, J=9.2, 17.1 Hz, 1H), 2.79 (dd, J=7.5, 17.1 Hz, 1H), 1.28 (d, J=6.8 Hz, 3H)。

実施例８
３－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸

表題化合物を下記のスキームに従って製造した：

ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－［４－（３－メトキシカルボニルフェニル）－２－オキソ－ピロリジン－１－イル］－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（化合物８ｅ）の製造
化合物８ｅを、化合物７ｆと同様にして、３－ヨード安息香酸メチル（化合物８ａ）をｔｅｒｔ－ブチル－［（２－ヨードフェニル）メトキシ］－ジメチル－シラン（化合物７ｂ）の代わりに用いて製造した。化合物８ｅを固体（２６３ｍｇ）として得た。LCMS (M+H+): 455。

メチル ３－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ベンゾエート（化合物８ｆ）の製造
ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－［４－（３－メトキシカルボニルフェニル）－２－オキソ－ピロリジン－１－イル］－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（化合物８ｅ，２６０．０ｍｇ，５７２μｍｏｌ）、２，２，２－トリフルオロ酢酸（２ｍＬ）およびＤＣＭ（１ｍＬ）の混合物を、室温で３０分間撹拌した。反応混合物を濃縮し、次いで共沸蒸留のためにトルエンを添加した。残留物をＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解し、次いでそれにＤＩＰＥＡ（１．０ｍＬ）およびＮ－（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバミン酸フェニル（中間体Ｉ－３，２２９ｍｇ，８５８μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０℃で３時間加熱し、次いで濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の５０％－６０％ ＥｔＯＡｃ（１０％のＭｅＯＨを含有）で溶離）により精製して、化合物８ｆ（２８７ｍｇ）を得た。LCMS (M+H⁺): 528。

３－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸（実施例８）の製造
メチル ３－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ベンゾエート（化合物８ｆ，２６０ｍｇ，４９３μｍｏｌ）の、ＴＨＦ（１．３ｍＬ）中における溶液に、水酸化リチウム水溶液（２Ｍ，１．３ｍＬ，２．６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、ｐＨ＝４～５に酸性化し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例８（１２０ｍｇ）を得た。LCMS (M+H⁺): 514. ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d₄) δ = 8.11 - 8.04 (m, 1H), 8.00 - 7.94 (m, 1H), 7.72 - 7.63 (m, 2H), 7.55 - 7.49 (m, 1H), 7.33 - 7.25 (m, 2H), 5.16 - 5.06 (m, 1H), 5.03 - 4.94 (m, 1H), 4.63 - 4.52 (m, 1H), 4.35 - 4.15 (m, 3H), 3.99 - 3.89 (m, 2H), 3.08 - 2.98 (m, 1H), 2.82 - 2.71 (m, 1H), 1.33 - 1.24 (m, 3H)。

実施例９
（２Ｒ）－１－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボン酸

実施例９を、実施例１と同様にして、（２Ｒ）－ピロリジン－２－カルボン酸メチルを（２Ｓ）－ピロリジン－２－カルボン酸メチルの代わりに用いて製造した。実施例９（５４ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H+) 507.3, ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d4) δ ppm 7.71 - 7.62 (m, 1H), 7.39 - 7.25 (m, 2H), 5.13 - 5.02 (m, 1H), 5.00 - 4.85 (m, 1H), 4.53 - 3.98 (m, 7H), 3.88 - 3.76 (m, 1H), 3.39 - 3.34 (m, 1H), 3.14 - 3.05 (m, 1H), 2.98 - 2.85 (m, 1H), 2.65 - 2.49 (m, 1H), 2.40 - 2.27 (m, 1H), 2.26 - 2.15 (m, 1H), 2.11 - 1.93 (m, 1H), 1.30 - 1.20 (m, 3H)。

実施例１０
３－フルオロ－２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸

実施例１０を、実施例７と同様にして、（２－ブロモ－３－フルオロ－フェニル）メタノールを（２－ヨードフェニル）メタノールの代わりに用いて製造した。最終生成物をＳＦＣにより分離して、実施例１０を２つの異性体、実施例１０－１および実施例１０－２として得た。ＳＦＣ条件：キラルカラム，ｃｈｉｒａｌｃｅｌ（登録商標） ＯＺ－Ｈ，５μｍ，２０×２５０ｍｍ；移動相，８０％ ＣＯ_２および２０％ ＭｅＯＨ（ＭｅＯＨ＋０．５％ ＮＨ_３Ｈ_２Ｏ）；流速，６５ｍＬ／分，背圧１００バール；
実施例１０－１（１２ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H)⁺: 532.2, ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d₄) δ ppm 7.55 (s, 1H), 7.39 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.29 - 7.06 (m, 4H), 4.97 (d, J=16.9 Hz, 1H), 4.93 - 4.84 (m, 1H), 4.49-4.42 (m, 2H), 4.24 - 4.14 (m, 1H), 4.10 - 4.00 (m, 2H), 3.97 - 3.86 (m, 1H), 2.88 - 2.72 (m, 2H), 1.17 (d, J=6.8 Hz, 3H)；
実施例１０－２（８ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H)⁺: 532.2, ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d₄) δ ppm 7.67 (s, 1H), 7.57 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.45 - 7.20 (m, 4H), 5.14 (d, J=17.1 Hz, 1H), 5.03 - 4.95 (m, 1H), 4.64 (br d, J=8.2 Hz, 1H), 4.55 (d, J=17.0 Hz, 1H), 4.31 (dd, J=4.5, 12.5 Hz, 1H), 4.25 - 4.13 (m, 2H), 4.03 - 3.96 (m, 1H), 3.01 - 2.85 (m, 2H), 1.29 (d, J=7.0 Hz, 3H)。

実施例１１
２－フルオロ－６－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸

実施例１１を、実施例７と同様にして、（２－ブロモ－６－フルオロ－フェニル）メタノールを（２－ヨードフェニル）メタノールの代わりに用いて製造した。最終生成物をＳＦＣにより分離して、実施例１１を２つの異性体、実施例１１－１および実施例１１－２として得た。ＳＦＣ条件：キラルカラム，ｃｈｉｒａｌｃｅｌ（登録商標） ＯＺ－Ｈ，５μｍ，２０×２５０ｍｍ；移動相，８０％ ＣＯ_２および２０％ ＭｅＯＨ（ＭｅＯＨ＋０．５％ ＮＨ_３Ｈ_２Ｏ）；流速，６５ｍＬ／分，背圧１００バール；
実施例１１－１（２２ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H)⁺: 532.2, ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d₄) δ ppm 7.55 (s, 1H), 7.39 - 7.29 (m, 1H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 6.97 (t, J=8.7 Hz, 1H), 4.95 (d, J=16.9 Hz, 1H), 4.91 - 4.83 (m, 1H), 4.46 (d, J=16.9 Hz, 1H), 4.26 - 4.14 (m, 1H), 4.12 - 4.01 (m, 2H), 3.99 - 3.81 (m, 2H), 2.93 - 2.80 (m, 1H), 2.76 - 2.65 (m, 1H), 1.16 (d, J=6.8 Hz, 3H)；
実施例１１－２（２２ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H)⁺: 532.2, ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d₄) δ ppm 7.66 (s, 1H), 7.47 - 7.26 (m, 4H), 7.08 (t, J=8.4 Hz, 1H), 5.16 (d, J=16.9 Hz, 1H), 5.05 - 4.96 (m, 1H), 4.53 (d, J=16.9 Hz, 1H), 4.34 - 4.12 (m, 3H), 4.11 - 3.90 (m, 2H), 3.04 - 2.93 (m, 1H), 2.93 - 2.81 (m, 1H), 1.28 (d, J=6.8 Hz, 3H)。

実施例１２
２－［［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］アミノ］安息香酸

表題化合物を下記のスキームに従って製造した：

工程１：メチル ２－［（５－オキソピロリジン－３－イル）アミノ］ベンゾエート（化合物１２ａ）の製造
ピロリジン－２，４－ジオン（３００ｍｇ，３．０３ｍｍｏｌ）および２－アミノ安息香酸メチル（０．４３ｍＬ，３．３３ｍｍｏｌ）、ＡｃＯＨ（１８２ｍｇ，３．０３ｍｍｏｌ）の、ＤＣＥ（１０ｍＬ）中における混合物を、５０℃で１６時間撹拌した。反応混合物を濃縮すると、黄色固体が得られた。その固体をメタノール（１０ｍＬ）に溶解し、それにＰｄ／Ｃ（６９ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物をＨ_２（５０ｐｓｉ）下において室温で１６時間撹拌し、次いで濾過した。濾液を濃縮し、残留物を分取ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：１）により精製して、化合物１２ａ（１７０ｍｇ）を無色の油として得た。LCMS (M+H⁺) 235.0。

工程２：ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－［４－（２－メトキシカルボニルアニリノ）－２－オキソ－ピロリジン－１－イル］－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（化合物１２ｂ）の製造
メチル ２－［（５－オキソピロリジン－３－イル）アミノ］ベンゾエート（化合物１２ａ，１７０ｍｇ，０．７３ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－ヨード－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（中間体Ｉ－１，２９０ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）、（１Ｒ，２Ｒ）－Ｎ１，Ｎ２－ジメチルシクロヘキサン－１，２－ジアミン（２１ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（２８ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）およびＫ_３ＰＯ_４（３０８ｍｇ）の、１，４－ジオキサン（１５ｍＬ）中における混合物を、１１０℃でＮ_２下において３２時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ，ｖ／ｖ＝１／３）により精製して、化合物１２ｂ（３０ｍｇ）を黄色の油として得た。LCMS (M+H⁺) 470.2。

工程３：２－［［１－［（６Ｓ）－６－メチル－４，５，６，７－テトラヒドロピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］アミノ］安息香酸（化合物１２ｃ）の製造
ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－［４－（２－メトキシカルボニルアニリノ）－２－オキソ－ピロリジン－１－イル］－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（化合物１２ｂ，３０ｍｇ）の、ＴＨＦ（２ｍＬ）、メタノール（２ｍＬ）および水（２ｍＬ）中における溶液に、ＬｉＯＨ（６ｍｇ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いで濃縮した。得られた残留物をＥｔＯＡｃ（２ｍＬ）に溶解し、それにＥｔＯＡｃ中のＨＣｌ溶液（４Ｍ，０．０８ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、濃縮して、粗製化合物１２ｃ（２１ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H⁺) 356.1。

工程４：２－［［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］アミノ］安息香酸（実施例１２）の製造
２－［［１－［（６Ｓ）－６－メチル－４，５，６，７－テトラヒドロピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］アミノ］安息香酸（化合物１２ｃ，２１ｍｇ）およびＮ－（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバミン酸フェニル（１８ｍｇ）およびトリエチルアミン（０．０２ｍＬ）の、ＤＣＭ（３ｍＬ）中における混合物を、室温で３時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例１２を黄色の油として得た。LCMS (M+H⁺) 529.1, ¹H NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ ppm 7.90 - 7.80 (m, 1H), 7.80 - 7.65 (m, 1H), 7.60 - 7.50 (m, 1H), 7.35 - 7.20 (m, 1H), 6.80 - 6.70 (m, 1H), 6.65 - 6.52 (m, 1H), 5.25 - 5.00 (m, 1H), 4.95 - 4.85 (m, 1H), 4.49 - 4.29 (m, 2H), 4.28 - 4.01 (m, 3H), 3.70 - 3.50 (m, 1H), 3.07 - 2.87 (m, 1H), 2.39- 2.23 (m, 1H), 1.20 - 1.10 (m, 3H)。

実施例１３
２－［７－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－６－オキソ－３－オキサ－７，９－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－９－イル］酢酸

表題化合物を下記のスキームに従って製造した：

Ｏ９－ベンジル Ｏ７－ｔｅｒｔ－ブチル ６－オキソ－３－オキサ－７，９－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－７，９－ジカルボキシレート（化合物１３ａ）の製造
ｔｅｒｔ－ブチル ３－オキサ－７，９－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－７－カルボキシレート（４００ｍｇ，１．７５ｍｍｏｌ）およびＥｔ_３Ｎ（０．４９ｍＬ，３．５ｍｍｏｌ）の、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中における溶液に、ＣｂｚＣｌ（４４８ｍｇ，２．６３ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いで水（１０．０ｍＬ）を添加し、混合物をＥｔＯＡｃ（それぞれ３０ｍＬ）で３回抽出した。有機相を合わせてＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ，１０：１から２：１まで）により精製して、白色固体（３００ｍｇ）を得た。その固体をＡＣＮ（８ｍＬ）および水（２ｍＬ）に溶解し、それにＲｕＣｌ_３（３５ｍｇ，０．１７０ｍｍｏｌ）およびＮａＩＯ_４（５３２ｍｇ，２．４８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３６時間撹拌し、水（１０ｍＬ）を添加し、混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で３回抽出した。有機相を合わせてＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮した。残留物をカラム（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ，１０：１から１：１まで）により精製して、目的生成物１３ａを黄色の油（１５０ｍｇ）として得た。LCMS (M-100+H⁺) 277.1。

ベンジル ７－［（６Ｓ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－６－オキソ－３－オキサ－７，９－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－９－カルボキシレート（化合物１３ｂ）の製造

Ｏ９－ベンジル Ｏ７－ｔｅｒｔ－ブチル ６－オキソ－３－オキサ－７，９－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－７，９－ジカルボキシレート（化合物１３ａ，１５０ｍｇ，０．４００ｍｍｏｌ）の、ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中における溶液に、ＥｔＯＡｃ中のＨＣｌ溶液（４Ｍ，１０ｍＬ）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、濃縮した。粗製物質を１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）に溶解し、それにｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－ヨード－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（中間体Ｉ－１，１５８ｍｇ，０．４３０ｍｍｏｌ）およびＫ_３ＰＯ_４（１５４ｍｇ，０．７２０ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（１４ｍｇ，０．０７０ｍｍｏｌ）、（１Ｒ，２Ｒ）－Ｎ１，Ｎ２－ジメチルシクロヘキサン－１，２－ジアミン（１１ｍｇ，０．０７０ｍｍｏｌ）を、Ｎ_２下で添加した。得られた混合物を室温で１４時間撹拌した。冷却した後、反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ １０：１から１：１まで）により精製して、化合物１３ｂ（８０ｍｇ）を黄色の油として得た。LCMS (M+H⁺) 512.2。

ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－［９－（２－エトキシ－２－オキソ－エチル）－６－オキソ－３－オキサ－７，９－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－７－イル］－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（化合物１３ｃ）の製造
ベンジル ７－［（６Ｓ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－６－オキソ－３－オキサ－７，９－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－９－カルボキシレート（化合物１３ｂ，４０ｍｇ，０．０８０ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（２ｍｇ，０．０２０ｍｍｏｌ）の、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中における混合物を、Ｈ_２下において室温で１４時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－６－メチル－３－（６－オキソ－３－オキサ－７，９－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－７－イル）－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレートを無色の油（１８ｍｇ）として得た。この化合物をＡＣＮ（１０ｍＬ）に溶解し、それにＫ_２ＣＯ_３（１４ｍｇ，０．１０ｍｍｏｌ）および２－ブロモ酢酸エチル（０．０１ｍＬ，０．０７０ｍｍｏｌ，１．５ｅｑ）を添加した。反応混合物を室温で１４時間撹拌し、次いで濃縮して、粗製化合物１３ｃを黄色の油（１８ｍｇ）として得た。LCMS (M+H⁺) 464.1。

２－［７－［（６Ｓ）－６－メチル－４，５，６，７－テトラヒドロピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－６－オキソ－３－オキサ－７，９－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－９－イル］酢酸（化合物１３ｄ）の製造
ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－［９－（２－エトキシ－２－オキソ－エチル）－６－オキソ－３－オキサ－７，９－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－７－イル］－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（化合物１３ｃ，１８ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ）の、水（１ｍＬ）、メタノール（１ｍＬ）およびＴＨＦ（１ｍＬ）中における混合物に、ＬｉＯＨ（４ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いで濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、２－［７－［（６Ｓ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－６－オキソ－３－オキサ－７，９－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－９－イル］酢酸を黄色の油（１２ｍｇ）として得た。この酸をＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）に溶解し、それにＥｔＯＡｃ中のＨＣｌ溶液（１０ｍＬ，０．０３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、濃縮して、粗製化合物１３ｄ（１１ｍｇ）を黄色の油として得た。

２－［７－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－６－オキソ－３－オキサ－７，９－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－９－イル］酢酸（実施例１３）の製造
２－［７－［（６Ｓ）－６－メチル－４，５，６，７－テトラヒドロピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－６－オキソ－３－オキサ－７，９－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－９－イル］酢酸（化合物１３ｄ，１１ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０１ｍＬ，０．０７０ｍｍｏｌ）の、ＤＭＦ（２ｍＬ）中における混合物に、Ｎ－（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバミン酸フェニル（中間体Ｉ－３，１１ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次いで濃縮した。残留物をＨＰＬＣにより精製して、実施例１３（３．５ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H⁺) 509.1; ¹H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.30 - 9.20 (m, 1H), 7.66 (s, 0.5H), 7.65 (s, 0.5H), 7.50 - 7.38 (m, 1H), 4.91 - 4.73 (m, 2H), 4.43 (s, 1H), 4.32 (m, 1H), 4.27 - 4.12 (m, 3H), 4.07 - 3.85 (m, 3H), 3.78 - 3.62 (m, 5H), 1.20 - 1.10 (m, 3H)。

実施例１４
４－フルオロ－２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸

表題化合物を下記のスキームに従って製造した：

工程１：メチル ４－フルオロ－２－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ベンゾエート（化合物１４ｂ）の製造
２－ブロモ－４－フルオロ安息香酸メチル（化合物１４ａ，１ｇ，４．２９ｍｍｏｌ）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’－オクタメチル－２，２’－ビ（１，３，２－ジオキサボロラン）（１．６３ｇ，６．４４ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ_２（ＤＰＰＦ）（３５０ｍｇ，４２９μｍｏｌ）および酢酸カリウム（６３２ｍｇ，６．４４ｍｍｏｌ）の、ジオキサン（３０ｍＬ）中における混合物を、９０℃に加熱し、窒素下で２時間撹拌した。粗製反応混合物を真空中で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル，４０ｇ，石油エーテル中の０％－１０％ ＥｔＯＡｃ）により精製して、化合物１４ｂを無色の油（１ｇ）として得た。LCMS (M+H⁺): 281。

工程２：メチル ４－フルオロ－２－（５－オキソ－１，２－ジヒドロピロール－３－イル）ベンゾエート（化合物１４ｃ）の製造
メチル ４－フルオロ－２－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ベンゾエート（化合物１４ｂ，９５１ｍｇ，３．４ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル ２－オキソ－４－（トシルオキシ）－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－カルボキシレート（０．８ｇ，２．２６ｍｍｏｌ，それの合成については、J. Org. Chem. 2002,67,4702を参照）、ＰｄＣｌ_２（ＤＰＰＦ）（１６２ｍｇ，２２６μｍｏｌ）およびＫ_２ＣＯ_３（６２６ｍｇ，４．５３ｍｍｏｌ）の、ジオキサン／Ｈ_２Ｏ（１０：１）（２０ｍＬ）中における混合物を、９０℃に加熱し、窒素下で２時間撹拌した。反応混合物をセライトにより濾過した。濾液を真空中で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル，４０ｇ，石油エーテル中の０％－１００％ ＥｔＯＡｃ，ＥｔＯＡｃは１０％のＭｅＯＨを含有）により精製して、化合物１４ｃ（１５０ｍｇ）を淡黄色の油として得た。LCMS (M+H⁺): 236。

工程３：メチル ４－フルオロ－２－（５－オキソピロリジン－３－イル）ベンゾエート（化合物１４ｄ）の製造
メチル ４－フルオロ－２－（５－オキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－３－イル）ベンゾエート（化合物１４ｃ，１００ｍｇ，４２５μｍｏｌ）およびＰｄ－Ｃ（５０ｍｇ）の、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中における混合物を、５５℃に加熱し、水素バルーン下で２０時間撹拌した。反応混合物をセライトにより濾過し、濾液を濃縮して、化合物１４ｄを白色固体（４０ｍｇ）として得た。LCMS (M+H⁺): 238。

工程４：ｔｅｒｔ－ブチル （６Ｓ）－３－［４－（５－フルオロ－２－メトキシカルボニル－フェニル）－２－オキソ－ピロリジン－１－イル］－６－メチル－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（化合物１４ｅ）の製造
１０ｍＬのマイクロ波バイアルに、ＤＭＳＯ（５ｍＬ）中の（Ｓ）－ｔｅｒｔ－ブチル ３－ヨード－６－メチル－６，７－ジヒドロピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５（４Ｈ）－カルボキシレート（中間体Ｉ－１，１００ｍｇ，２７５μｍｏｌ）、（１Ｒ，２Ｒ）－Ｎ１，Ｎ２－ジメチルシクロヘキサン－１，２－ジアミン（１５．７ｍｇ，１１０μｍｏｌ）、メチル ４－フルオロ－２－（５－オキソピロリジン－３－イル）ベンゾエート（化合物１４ｄ，４０ｍｇ，１６９μｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（１０．５ｍｇ，５５．１μｍｏｌ）およびリン酸カリウム（１１７ｍｇ，５５１μｍｏｌ）を添加した。バイアルに蓋をし、反応混合物を１２０℃でマイクロ波加熱し、４時間撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物を２０ｍＬのＥｔＯＡｃに注入し、Ｈ_２Ｏ（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空中で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル，１２ｇ，石油エーテル中の０％－１００％ ＥｔＯＡｃ，ＥｔＯＡｃは１０％のＭｅＯＨを含有）により精製して、化合物１４ｅを淡黄色の油（４０ｍｇ）として得た。LCMS (M+H⁺): 473。

工程５：メチル ４－フルオロ－２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ベンゾエート（化合物１４ｆ）の製造
（６Ｓ）－ｔｅｒｔ－ブチル ３－（４－（５－フルオロ－２－（メトキシカルボニル）フェニル）－２－オキソピロリジン－１－イル）－６－メチル－６，７－ジヒドロピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－５（４Ｈ）－カルボキシレート（化合物１４ｅ，４０ｍｇ，８４．７μｍｏｌ）の、ＤＣＭ／ＴＦＡ（１：１，４ｍＬ）中における混合物を、２０℃で１時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、次いでＮ－エチル－Ｎ－イソプロピルプロパン－２－アミン（１０９ｍｇ，８４７μｍｏｌ）および（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバミン酸フェニル（中間体Ｉ－３，３３．９ｍｇ，１２７μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を７０℃で１時間撹拌し、次いで反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水およびブラインで洗浄した。有機層を濃縮して、化合物１４ｆを淡黄色の油（４０ｍｇ）として得た。LCMS (M+H⁺): 546。

工程６：４－フルオロ－２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸（実施例１４）の製造
メチル ４－フルオロ－２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ベンゾエート（化合物１４ｆ，３０ｍｇ，５５μｍｏｌ）およびＮａＯＨ（５５０μｌ，１Ｍ）の、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中における混合物を、２０℃で１時間撹拌し、次いで混合物をｐＨ＝６に調整し、次いでその溶液を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例１４（４ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H⁺): 532.2, ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d₄) δ ppm 7.86 - 7.82 (m, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.29 - 7.10 (m, 3H), 7.02 - 6.99 (m, 1H), 4.97 (dd, J=7.0, 16.9 Hz, 1H), 4.91 - 4.83 (m, 1H), 4.65 - 4.48 (m, 1H), 4.43 (dd, J=5.9, 16.9 Hz, 1H), 4.27 - 3.95 (m, 3H), 3.82 - 3.78 (m, 1H), 2.92 - 2.85 (m, 1H), 2.70 - 2.63 (m, 1H), 1.17 (d, J=6.8 Hz, 1.5H), 1.15 (d, J=6.8 Hz, 1.5H)。

実施例１５
５－フルオロ－２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸

実施例１５を、実施例１４と同様にして、２－ブロモ－５－フルオロ安息香酸メチルを２－ブロモ－４－フルオロ安息香酸メチル（化合物１４ａ）の代わりに用いて製造した。実施例１５（７ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H⁺): 532.2. ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d₄) δ ppm 7.53 (d, J=0.9 Hz, 1H), 7.51 - 7.41 (m, 2H), 7.26 - 7.09 (m, 3H), 4.96 (dd, J=7.4, 16.9 Hz, 1H), 4.89 - 4.81 (m, 1H), 4.54 - 4.37 (m, 2H), 4.23 - 3.99 (m, 3H), 3.82 - 3.74 (m, 1H), 2.91 - 2.85 (m, 1H), 2.68 - 2.64 (m, 1H), 1.17 (d, J=6.8 Hz, 1.5H), 1.15 (d, J=6.8 Hz, 1.5H)。

実施例１６
４－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸

実施例１６を、実施例８と同様にして、４－ヨード安息香酸メチルを３－ヨード安息香酸メチル（化合物８ａ）の代わりに用いて製造した。実施例１６（１２０ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H⁺): 514.4, ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d₄) δ ppm 8.07 - 8.03 (m, 2H), 7.68 (s, 1H), 7.55 - 7.50 (m, 2H), 7.33 - 7.25 (m, 2H), 5.14 - 5.03 (m, 1H), 5.01 - 4.91 (m, 1H), 4.61 - 4.49 (m, 1H), 4.34 - 4.15 (m, 3H), 4.00 - 3.91 (m, 2H), 3.06 - 2.97 (m, 1H), 2.84 - 2.75 (m, 1H), 1.29 (t, J=7.3 Hz, 3H)。

実施例１７
６－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピリジン－２－カルボン酸

実施例１７を、実施例８と同様にして、６－ブロモピリジン－２－カルボン酸エチルを３－ヨード安息香酸メチル（化合物８ａ）の代わりに用いて製造した。実施例１７（１００ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H⁺): 515.2, ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d₄) δ ppm 8.09 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.99 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.65 (d, J=7.4 Hz, 1H), 7.34 - 7.26 (m, 2H), 5.16 - 5.04 (m, 1H), 5.03 - 4.94 (m, 1H), 4.59 (t, J=16.4 Hz, 1H), 4.34 - 4.27 (m, 1H), 4.26 - 4.06 (m, 4H), 3.07 - 2.95 (m, 2H), 1.28 (d, J=7.0 Hz, 3H)。

実施例１８
２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピリジン－３－カルボン酸

実施例１８を、実施例８と同様にして、２－ブロモピリジン－３－カルボン酸 ｔｅｒｔ－ブチルを３－ヨード安息香酸メチル（化合物８ａ）の代わりに用いて製造した。実施例１８（１１ｍｇ）を白色固体として得た。LCMS (M+H⁺): 515.5, ¹H NMR (400MHz, METHANOL-d₄) δ ppm 8.78 - 8.73 (m, 1H), 8.36 - 8.32 (m, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.45 - 7.39 (m, 1H), 7.34 - 7.25 (m, 2H), 5.15 - 5.03 (m, 1H), 5.01 - 4.93 (m, 1H), 4.86 - 4.81 (m, 1H), 4.53 (d, J=16.9 Hz, 1H), 4.34 - 4.23 (m, 2H), 4.20 - 4.13 (m, 1H), 4.10 - 3.99 (m, 1H), 3.04 - 2.96 (m, 2H), 1.32 - 1.24 (m, 3H)。

実施例１９：ＨＢＶ阻害アッセイ
細胞株および培養条件：
ＨｅｐＧ２．２．１５は、ＨＢＶゲノムを含む安定トランスフェクションした細胞株である。それは肝芽細胞腫細胞株Ｈｅｐ Ｇ２（American Type Culture Collection，ＡＴＣＣ（登録商標） ＨＢ－８０６５（商標））から、下記の参考文献に記載の公開された方法により誘導される： MA Selles et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1987, 84, 1005-1009。この細胞株を、下記を補足したダルベッコの改変イーグル培地および栄養素混合物Ｆ－１２（ＤＭＥＭ／Ｆ－１２，Ｇｉｂｃｏ，Ｃａｔ．＃：１１３２０－０３３）中に維持した：１０％のウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ，Ｃａｔ．＃：１００９９－１４１）、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ，Ｃａｔ．＃：１５１４０－１２２）、および０．３ｍｇ／ｍＬのＧ４１８ Ｓｕｌｆａｔｅ（Ｇｉｂｃｏ，Ｃａｔ．＃：１０１３１－０２７）。

インビトロ抗ＨＢＶ活性：
ＨｅｐＧ２．２．１５細胞を９６ウェルプレートにウェル当たり３×１０^４個の密度で、２．５％のウシ胎仔血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを補足した１００μＬのＤＭＥＭ／Ｆ－１２培地中に播種し、３７℃で一夜培養した。被験化合物をＤＭＳＯ中に半対数系列希釈し、次いで培地中に１００倍希釈した。希釈した化合物を含有する１００μＬの培地を、各ウェルにおいて０．５％の最終ＤＭＳＯ濃度に達するようにプレートに添加した。化合物処理の５日後に培養上清をさらなる分析のために採集した。

細胞外ＨＢＶ ＤＮＡの定量ＰＣＲ検出のために、培養上清を５０℃で１時間、５００μｇ／ｍＬのプロテイナーゼＫ（Ｓｉｇｍａ，Ｃａｔ．＃：Ｐ２３０８）消化により処理した。酵素を９５℃で１５分間、熱不活性化した後、試料においてｑＰＣＲによるＨＢＶ ＤＮＡ定量を実施した。ＨＢＶ複製が５０％阻害される有効化合物濃度（ＥＣ_５０）を決定した。

本発明の実施例を本明細書に記載するアッセイにおいて試験し、下記の表１に示すようにＨｅｐＧ２．２．１５アッセイにおいてＥＣ_５０＜０．５μＭをもつことが分かった。

Claims (10)

1. 式（Ｉ）の化合物
   

   

   ［式中：
   Ｒ^１は、カルボキシＣ_１－６アルキルにより置換されたオキソオキサジアザビシクロ［３．３．１］ノナニルであるか；またはオキソピロリジニルであり、該オキソピロリジニルは、カルボキシＣ_１－６アルキル（Ｃ_１－６アルキル）アミノ、カルボキシフェニル、カルボキシピリジニル、カルボキシフェニルアミノ、ハロカルボキシフェニルもしくはカルボキシピロリジニルにより１回置換されているか、またはカルボキシピロリジニルおよびＣ_１－６アルキルにより２回置換されており；
   Ｒ^２は、ＨまたはＣ_１－６アルキルであり；
   Ｒ^３は、Ｃ_１－６アルキルであり；
   Ｒ^４は、フェニルであり、該フェニルはハロゲンにより３回置換されている］
   またはその医薬的に許容できる塩、鏡像異性体もしくはジアステレオマー。
2. Ｒ^１は、カルボキシメチル（メチル）アミノオキソピロリジニル、カルボキシピロリジニルオキソピロリジニル、カルボキシピロリジニル（メチル）オキソピロリジニル、カルボキシフェニルオキソピロリジニル、カルボキシピリジニルオキソピロリジニル、カルボキシフェニルアミノオキソピロリジニル、フルオロカルボキシフェニルオキソピロリジニルまたはカルボキシメチルオキソオキサジアザビシクロ［３．３．１］ノナニルであり；
   Ｒ^２は、Ｈまたはメチルであり；
   Ｒ^３は、メチルであり；
   Ｒ^４は、トリフルオロフェニルである；
   請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容できる塩、鏡像異性体もしくはジアステレオマー。
3. 下記から選択される化合物：
   （２Ｓ）－１－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボン酸；
   （２Ｓ）－１－［（２Ｓ）－２－メチル－１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボン酸；
   ２－［メチル－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］アミノ］酢酸；
   （２Ｒ）－１－［（２Ｓ）－２－メチル－１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボン酸；
   １－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－３－カルボン酸；
   （２Ｓ）－１－［１－［（６Ｓ，７Ｓ）－６，７－ジメチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボン酸；
   ２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸；
   ３－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸；
   （２Ｒ）－１－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピロリジン－２－カルボン酸；
   ３－フルオロ－２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸；
   ２－フルオロ－６－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン
   －３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸；
   ２－［［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］アミノ］安息香酸；
   ２－［７－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－６－オキソ－３－オキサ－７，９－ジアザビシクロ［３．３．１］ノナン－９－イル］酢酸；
   ４－フルオロ－２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸；
   ５－フルオロ－２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸；
   ４－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］安息香酸；
   ６－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピリジン－２－カルボン酸；および
   ２－［１－［（６Ｓ）－６－メチル－５－［（３，４，５－トリフルオロフェニル）カルバモイル］－６，７－ジヒドロ－４Ｈ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジン－３－イル］－５－オキソ－ピロリジン－３－イル］ピリジン－３－カルボン酸。
4. 下記の工程：
   （ａ）式（Ｖ）の化合物
   

   

   を酸と反応させ、続いてトリホスゲンおよびカルボニルジイミダゾールから選択されるホスゲン等価体の存在下においてアミンＲ^４ＮＨ_２でウレア形成する［式中のＲ^１およびＲ^４は請求項１～３のいずれか１項で定めたものである］を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物を製造するための方法。
5. 治療活性物質として使用するための、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物、または医薬的に許容できる塩、鏡像異性体もしくはジアステレオマー。
6. 請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物および治療上不活性なキャリヤーを含む、医薬組成物。
7. Ｂ型肝炎ウイルス感染症の治療または予防のための、請求項６に記載の医薬組成物。
8. Ｂ型肝炎ウイルス感染症の治療または予防のための医薬を調製するための、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
9. Ｂ型肝炎ウイルス感染症の治療または予防のための、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物、または医薬的に許容できる塩、鏡像異性体もしくはジアステレオマー。
10. 人を除く哺乳動物のＢ型肝炎ウイルス感染症の治療または予防のための方法であって、治療有効量の請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物を投与することを含む、前記方法。