CN109153644B - 用以增强效应t细胞功能的针对cereblon的小分子 - Google Patents

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Abstract

公开用以增强效应T细胞功能的针对cereblon的小分子。也公开制备这些分子的方法和使用它们治疗各种疾病状态的方法。

Description

用以增强效应T细胞功能的针对CEREBLON的小分子
背景技术
从开始时作为灾难性致畸剂出现，被称为免疫调节性药物(IMiD)的衍生自沙利度胺(thalidomide)的类似物，现时快速出现用于治疗癌症。IMiD疗法的一个标志是它与T淋巴细胞活化相关联(McDaniel,J.M.等,Advances in hematology 2012:513702(2012))。对这个药物类别假定的一种抗癌机理是针对内源性肿瘤相关抗原的紧急免疫应答，其使针对发育肿瘤细胞的功能性免疫监视恢复。众多屏障阻碍抗肿瘤免疫性，其复杂性已在很大程度上进化来保持自体免疫识别受到控制。使用斑马鱼模型，显示沙利度胺会抑制称为cereblon的E3泛素连接酶底物受体，所述E3泛素连接酶底物受体随后导致异常肢体发育(Ito,T.等,Science 327(5971):1345(2010))。Cereblon在所有脊椎动物物种之间是保守的。已陈述“IMiD药物类似物之间的结构差异将影响底物识别和降解的效能和选择性”(Chamberlain等)。迄今为止，cereblon的关于与免疫调控的牵连的生理作用尚未被确定。使用在与卵子启动子-Cre重组酶表达性转基因小鼠交配之后通过flp介导的对外显子3和4的切除来实现的纯合性crbn种系敲除，显示了Cereblon在T细胞信号传导和体内平衡方面的生理作用(Rajadhyaksha,A.M.等Behavioural brain research 226(2):428(2012))。敲除使在造血来源的组织中的crbn表达消除。随着年龄的增长，相较于野生型C57BL6同窝仔畜，缺陷性小鼠中的具有原初表型的外周血液和脾淋巴细胞的数目增加。为探索crbn-/- T细胞的活化的固有阈值，进行体外研究和向完全错配的同种异体宿主和经亚致死性照射的同基因小鼠中的过继性细胞转移。这些研究显示cereblon在调控IL-2、IFNg和T细胞受体活化方面的作用。使用B16黑素瘤，我们证明遗传消除cereblon导致肿瘤生长显著延迟。我们的研究为未来开发cereblon特异性靶向疗法以增强恶性疾病的情况下的免疫疗法做好准备，并且确定在T细胞中进行信号传导调控的新型模式。与crbn缺陷相关的许多特征可在IMiD疗法的情况下觉察到(McDaniel,J.M.等,同前；Luptakova,K.J.等,Cancerimmunology,immunotherapy:CII 62(1):39(2013)；Zhou,Y.等,American journal ofhematology 83(2),144(2008))。使用珠粒和定量质谱测定法(MS)，来那度胺(Lenaliomide)作为最具免疫活性的IMiD之一被确认结合CRBN-DDB1复合物(Kronke,J.等,Science 343(6168):301(2014))。
发明内容
根据所公开材料和方法的如本文所包括和广泛描述的目的，在一个方面，所公开主题涉及化合物、组合物以及制备和使用化合物和组合物的方法。
所公开化合物可具有由式I表示的结构：
Figure BDA0001866541900000021
其中，
Ar是环烷基、芳基、杂环烷基或杂芳基；
L不存在或是选自由以下组成的组的接头：-SO2、-SO2R'；SO2R’R”、-SO2NR’R”；-SO2NR’R”C(＝O)；-NR’SO2R”；-RSO2NR’R”’；-C(＝O)；-C(＝O)R’；-OC(＝O)R’；-C(＝O)NR’R”；-NRC(＝O)R”；-NR’C(＝O)R”C(＝O)；-OR’；-NR’R”；-SR’；-N3-C(＝O)OR’；-O(CR’R”)rC(＝O)R；-O(CR’R”)rNR”C(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”SO2R’；-OC(＝O)NR'R”；-NR'C(＝O)OR”；以及取代或未取代的C1-C6脂族烷基；
其中R'、R”和R”'个别地选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的烯基；取代或未取代的醚；取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺；并且r是1至6的整数；
R1、R2和R3个别地选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基及其组合或
其中R1和R2组合以形成5-7元杂环；并且其中当R1和R2组合以形成5-7元杂环时，Ar任选不稠合于所述5-7元杂环，而是所述5-7元杂环的取代基；
R4和R5个别地选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、醚、烷氧基、巯基、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、酯、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合；
R8选自由以下组成的组：氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的烷基芳基及其组合；并且
X是0、1或2。
所公开化合物可具有由式II表示的结构：
Figure BDA0001866541900000041
其中，
Ar是芳基、环烷基、杂环烷基或杂芳基；
L不存在或是选自由以下组成的组的接头：-SO2、-SO2R'；SO2R'R”、-SO2NR'R”；-SO2NR’R”C(＝O)；-NR’SO2R”；-RSO2NR’R”’；-C(＝O)；-C(＝O)R’；-OC(＝O)R’；-C(＝O)NR’R”；-NR’C(＝O)R”；-NR’C(＝O)R”C(＝O)；-OR’；-NR’R”；-SR’；-N3-C(＝O)OR’；-O(CR’R”)rC(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”C(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”SO2R’；-OC(＝O)NR'R”；-NR'C(＝O)OR”；以及取代或未取代的C1-C6脂族烷基；
其中R'、R”和R”'个别地选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的烯基；取代或未取代的醚；取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺；并且r是1至6的整数；
R1、R2和R3个别地选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合或
其中R1和R2组合以形成5-7元杂环；并且其中当R1和R2组合以形成5-7元杂环时，Ar任选不稠合于所述5-7元杂环，而是所述5-7元杂环的取代基；
R4和R5个别地选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、醚、烷氧基、巯基、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、酯、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合；
R8选自由以下组成的组：氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的烷基芳基及其组合；并且
x是0、1或2，
y是1至6；并且
其中键---存在或不存在。
所公开化合物可具有由式III表示的结构：
Figure BDA0001866541900000061
其中，
G包括C、S、N、取代或未取代的C1-C8烷基或其组合；
R3选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、取代或未取代的环烷基及其组合；
R4、R5和R8个别地选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、醚、烷氧基、巯基、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、酯、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的烷基芳基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合；并且
R6和R7个别地是＝O、氢、C1-C8烷基，或R6和R7组合以形成＝O；
x是0、1或2；并且
其中键---存在或不存在。
所公开化合物可具有由式IV表示的结构：
Figure BDA0001866541900000071
其中，
R3选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基及其组合；
R4、R5和R8个别地选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、醚、烷氧基、巯基、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、酯、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的烷基芳基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合；并且
R6和R7个别地是＝O、氢、C1-C8烷基，或R6和R7组合以形成＝O；
x是0、1或2；并且
其中键---存在或不存在。
所公开化合物可具有由式V表示的结构：
Figure BDA0001866541900000081
其中，
L不存在或是选自由以下组成的组的接头：-SO2、-SO2R'；SO2R’R”、-SO2NR’R”；-SO2NR’R”C(＝O)；-NR’SO2R”；-RSO2NR’R”’；-C(＝O)；-C(＝O)R’；-OC(＝O)R’；-C(＝O)NR’R”；-NR’C(＝O)R”；-NR’C(＝O)R”C(＝O)；-OR’；-NR’R”；-SR’；-N3-C(＝O)OR’；-O(CR’R”)rC(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”C(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”SO2R’；-OC(＝O)NR'R”；-NR'C(＝O)OR”；以及取代或未取代的C1-C6脂族烷基；
其中R'、R”和R”'个别地选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的烯基；取代或未取代的醚；或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺；并且r是1至6的整数；
R3、R4和R5个别地选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基及其组合；并且
R8选自由以下组成的组：氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的烷基芳基及其组合。
所公开化合物可具有由式VI表示的结构：
Figure BDA0001866541900000101
其中，
L不存在或是选自由以下组成的组的接头：-SO2、-SO2R'；SO2R’R”、-SO2NR’R”；-SO2NR’R”C(＝O)；-NR’SO2R”；-R’SO2NR’R”’；-C(＝O)；-C(＝O)R’；-OC(＝O)R’；-C(＝O)NR’R”；-NR’C(＝O)R”；-NR’C(＝O)R”C(＝O)；-OR’；-NR’R”；-SR’；-N3-C(＝O)OR’；-O(CR’R”)rC(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”C(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”SO2R’；-OC(＝O)NR'R”；-NR'C(＝O)OR”；以及取代或未取代的C1-C6脂族烷基；
其中R'、R”和R”'个别地选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的烯基；取代或未取代的醚；取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺；并且r是1至6的整数；并且
R1、R3、R4和R5个别地选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基及其组合；
y是0、1或2；并且
其中键---存在或不存在。
在特定方面，所公开主题涉及用于使受试者患有自体免疫疾病或病症的风险降低，预防受试者患有自体免疫疾病或病症，或治疗患有自体免疫疾病或病症的受试者的方法。在其它特定方面，所公开主题涉及用于诱导细胞中的靶标蛋白质的降解的方法。在其它特定方面，所公开主题涉及用于使患者的疾病状态或疾患的风险降低，预防或治疗所述疾病状态或疾患的方法，其中调控异常的蛋白质活性导致所述疾病状态或疾患。在其它特定方面，所公开主题涉及用于抑制cereblonE3泛素连接酶结合部分(CLM)的方法，所述方法包括施用有效量的根据前述权利要求中任一项的化合物。在其它特定方面，所公开主题涉及用于使受试者的癌症的风险降低，预防或治疗所述癌症的方法。在其它特定方面，所公开主题涉及用于治疗受试者的遗传疾病或病症的方法。
额外优势将部分地阐述于随后描述中，并且部分地将根据描述显而易见，或可通过实施下述方面来获悉。下述优势将借助于在随附权利要求中特别指出的要素和组合来实现和达到。应了解上文一般性描述与下文详细描述两者均仅是示例性和说明性的，并且不是限制性的。
附图说明
并入本说明书中且构成本说明书的一部分的附图说明下述若干方面。
图1是显示IMiD作用模式的当前模型的示意图。
图2是显示使用分子动力学模拟进行的对CRBN的结构分析和结合位点确认的图像。
图3A-图3E显示来那度胺在不存在CD28共刺激下加强人T细胞而非小鼠T细胞中的IL-2产生。在10μM来那度胺(Len)或媒介物对照(DMSO)存在下，在递增浓度的抗CD3ε抗体存在下，刺激从健康供体外周血液单核细胞(PBMC)纯化的T细胞。测量在DMSO(媒介物对照)或10μM来那度胺(Len)存在下，用递增浓度的单独CD3α抗体(图3A、图3C)或与用以提供共刺激的1μg/ml抗CD28抗体一起刺激的细胞的培养上清液中的IL-2产生。通过ELISA来测定人T细胞(图3A、图3B)和从C57BL6小鼠的脾分离的小鼠T细胞(图3C、图3D)中的细胞因子水平。对用DMSO、10μM和20μM来那度胺处理24小时的用5μg/ml CD3ε抗体+1μg/ml抗CD28抗体刺激的人T细胞和小鼠T细胞的Western印迹分析(图3E)。结果代表3次独立实验。WB显示IKZF1、CRBN和β-肌动蛋白的表达。依次通过ANOVA和邓奈特氏多重比较检验(Dunnett’s multiplecomparison test)来进行统计分析。*＝p<0.05，***＝p<0.001
图4A-图4D显示抗CD3和来那度胺的用以诱导IL-2和T细胞增殖的剂量。图4A显示在递增浓度抗CD3(0.01-10μg/mL)刺激的情况下的相对IL-2mRNA产生。图4B显示根据ELISA，在未刺激细胞的情况下以及在用抗CD3(5μg/mL)与递增浓度的来那度胺一起处理之后的IL-2分泌。图4C显示人T细胞的增殖，并且图4D显示小鼠T细胞的增殖，所述T细胞用DMSO(媒介物)或来那度胺(10μM)处理，所述增殖由S期转变来度量，所述S期转变如通过在针对CD8+表面表达被染色的细胞中并入溴脱氧尿苷(BrdU)，用流式细胞术进行检测所指示。
图5A-图5F显示IMiD抑制人多发性骨髓瘤细胞而非小鼠多发性骨髓瘤细胞的生长。图5A显示人多发性骨髓瘤细胞系U266、H929、MM1.S和OPM2中CRBN/粘着斑蛋白的相对表达。人多发性骨髓瘤细胞系(图5B-图5F)与递增浓度的来那度胺(Len)、泊马度胺(pomalidomide)(Pom)和媒介物(DMSO)一起培养4天(图5B)或7天(图5C-图5F)。5TGM1是与MM1.S同时处理的小鼠多发性骨髓瘤细胞系。示出相对细胞活力百分比。
图6A-图6B是多发性骨髓瘤细胞的western印迹分析和IMiD化合物敏感性。图6B显示若干敏感性和抗性人多发性骨髓瘤细胞系中的粘着斑蛋白(116kDa)、CRBN(50kDa)和β-肌动蛋白(42kDa)的原始western印迹。随后发现抗性而非敏感性U266细胞含有支原体污染，并且不进一步加以使用。图6B显示在H929、U266和MM1.S多发性骨髓瘤细胞的情况下，来那度胺、泊马度胺和沙利度胺的IC50(μM)±S.D.。N/A＝不可用。
图7A-图7C显示cereblon的结构在不同物种之间是保守的。图7A显示人(紫色，PDB4TZ4)、鸡(蓝色，PDB 4CI2)X射线晶体结构以及小鼠(PDB 4TZ4)cereblon的MD后结构的条带重叠图，其中显示残基His378、Trp380、Trp400、Tyr402和配体沙利度胺、来那度胺和泊马度胺以供参照。图7B显示hCRBN、hmCRBN、gCRBN的在诱导契合对接(IFD)之后的CRBN沙利度胺结合位点的MD后平衡系统的来那度胺的配体姿态的叠加，与被显示以供参照的hCRBN的MD后平衡蛋白质结构(红色)一起显示。图7C是人cereblon和小鼠cereblon的重叠图(Val380和Ile391是对于mCRBN；Glu377和Val388是对于hCRBN)，以薄管形式界定。
图8A-图8Q.图8A显示hCRBN的RMSD概况。概况使用骨架原子创建，并且使用hCRBN-DDB1复合物(底部图)、单独hCRBN(中间图)和结合位点残基N335至A421(顶部图)加以计算。所有测量单位都以埃计。图8B显示mCRBN的RMSD概况。概况使用骨架原子创建，并且使用所有hCRBN残基(底部图)、结合位点残基N335至A421(中间图)和位于离开配体
Figure BDA0001866541900000141
的残基(357、377、379-383、388-390、401、402、404)(顶部图)加以计算。所有测量单位都以埃计。图8C显示gCRBN的RMSD概况。概况使用骨架原子创建，并且使用hCRBN-DDB1复合物(底部图)、单独gCRBN(中间图)和结合位点残基N337至A423(顶部图)加以计算。所有测量单位都以埃计。图8D显示hmCRBN的RMSD概况。概况使用骨架原子创建，并且使用hmCRBN-DDB1复合物(底部图)、单独hmCRBN(中间图)和结合位点残基N335至A421(顶部图)加以计算。所有测量单位都以埃计。图8E显示hCRBN的Rg概况。概况由所有原子创建，并且使用hCRBN/DDB1复合物(底部图)和单独hCRBN(顶部图)加以计算。所有测量单位都以埃计。图8F显示mCRBN的Rg概况。概况由所有原子创建。所有测量单位都以埃计。图8G显示gCRBN的Rg概况。概况由所有原子创建，并且使用gCRBN-DDB1复合物(底部图)和单独hCRBN(顶部图)加以计算。所有测量单位都以埃计。图8H显示hmCRBN的Rg概况。概况由所有原子创建，并且使用hmCRBN-DDB1复合物(底部图)和单独hmCRBN(顶部图)加以计算。所有测量单位都以埃计。图8I显示hCRBN的RMSF概况。概况使用骨架原子创建，并且使用单独hCRBN加以计算(DDB1 RMSF在请求后可用)。结合位点残基N335至A421显示为虚线。所有测量单位都以埃计。图8J显示mCRBN的RMSF概况。概况使用mCRBN的骨架原子创建。结合位点残基N335至A421显示为虚线。所有测量单位都以埃计。图8K显示gCRBN的RMSF概况。概况使用骨架原子创建，并且使用单独gCRBN加以计算(DDB1 RMSF在请求后可用)。结合位点残基N337至A423显示为虚线。所有测量单位都以埃计。图8L显示hmCRBN的RMSF概况。概况使用骨架原子创建，并且使用单独hmCRBN加以计算(DDB1 RMSF在请求后可用)。结合位点残基N335至A421显示为虚线。所有测量单位都以埃计。图8M显示hCRBN模拟的势能概况。通过使斜率最小化来表征多重线性拟合以确定渐近特性。图8N显示mCRBN模拟的势能概况。通过使斜率最小化来表征多重线性拟合以确定渐近特性。图8O显示gCRBN模拟的势能概况。通过使斜率最小化来表征多重线性拟合以确定渐近特性。图8P显示hmCRBN模拟的势能概况。通过使斜率最小化来表征多重线性拟合以确定渐近特性。图8Q显示随时间变化的在各种部分与配体之间的距离。
图9A-图9K显示人CRBN和小鼠CRBN以类似亲和力结合IMiD。图9A显示人CRBN和人至小鼠突变物的序列比对。被引入以使人序列转变成小鼠序列的突变以红色突出显示。图9B显示疏水性结合口袋中的IMiD相互作用。图9C显示来那度胺(绿色)通过与骨架残基His378、Ser379和Trp380的氢键(黑色虚线)来与TBD位点(灰色)相互作用。与Trp380、Trp386、Trp400和Tyr402(小鼠：Trp383、Trp389、Trp403和Phe405)的侧链发生VDW相互作用(绿色虚线)。在人蛋白质与小鼠蛋白质之间不同的两个残基以青色突出显示。通过固有色氨酸荧光测定来关于来那度胺(红色)、泊马度胺(绿色)、沙利度胺(蓝色)和邻苯二甲酰亚胺(黑色)对人TBD(图9D)野生型、(图9E)E377V、(图9F)V388I和(图9G)E377V/V388I(hm-CRBN-TBD)进行滴定。基于荧光差异的量值(1-F/F0)计算KD值。图9H-图9K显示人TBD和突变体的使用来那度胺(LEN)获得的等温滴定量热法饱和曲线。
图10A-图10F显示重组TBD蛋白表达和纯化以及使用锌试剂测定进行的锌结合结构域分析。图10A显示SDS-PAGE凝胶，其显示纯化步骤：L：阶梯，A：总溶解产物，B：可溶性溶解产物，C：在第1 GST纯化之后，D：GST-裂解混合物，E：第2 GST纯化，F：第1尺寸排阻色谱法(SEC)，G：第3 GST，以及H：最终SEC。图10B显示具有Cys至Ser突变的重组TBD的表达。T是总溶解产物，并且S是可溶性蛋白质提取物。图10C显示呈绿色的人TBD(PDB4CI2)的结构，其显示锌离子(红色球体)与四个半胱氨酸残基的配位。图10D显示锌试剂测定的示意图：锌试剂染料在480nm下进行吸收，并且在与锌螯合后在620-630nm下进行吸收)。图10E显示波长扫描，其显示在递增添加锌后，在480nm下的降低以及在630nm下的相伴增加。图10F显示从图10E获得的线性回归曲线。
图11A-图11L显示根据ITC的IMiD与TBD变体的结合亲和力。泊马度胺(图11A-图11D)、沙利度胺(图11E-图11H)、邻苯二甲酰亚胺(图11I-图11L)与野生型和突变TBD构建体的ITC结合曲线。
图12显示具有N-甲基-来那度胺的结合口袋。
图13A-图13F显示来那度胺结合TBD和CRBN-DDB1蛋白质复合物。用(图13A、图13B)CRBN-DDB1复合物和(图13C、图13D)CRBN-TBD滴定的来那度胺(图13A、图13C)和N-甲基-来那度胺(图13B、图13D)的ITC结合曲线。图13E和图13F显示全长人cereblon的结合口袋中来那度胺相互作用的示意图；具有结合的来那度胺(紫红色)的人全长CRBN(橙红色)和DDB1(蓝色)(PDB 5FQD)与小鼠TBD-CRBN(青色)(PDB 4TZU)的叠加。氢键和疏水性相互作用分别以红色虚线和黑色虚线显示。
图14A-图14G显示来那度胺、JQ1和dBET1在人T细胞和小鼠T细胞中的功能活性以及JQ1、dBET1和Len与人CRBN的结合亲和力。图14A显示dBET1和N-甲基-dBET1的结构。图14B显示通过荧光测定获得的用JQ1、dBET1、m-dBET1和来那度胺(LEN)滴定的野生型人TBD的饱和结合曲线。图14C显示用JQ1、dBET和DMSO处理72小时的通过抗CD3ε/CD28活化的从PBMC纯化的人T细胞，并且细胞活力通过流式细胞术来测定(使用Zombie NIRTM染色加以计算)。图14D显示通过抗CD3ε/CD28活化，以及用JQ1(在指示剂量下)处理72小时的纯化Crbn+/+和Crbn-/-小鼠T细胞。C-Myc mRNA水平通过qRT-PCR来测定，并且相对于β2M表达(对照基因)加以标准化。图14E显示在细胞表面上表达CD98的T细胞的百分比，图14F显示细胞活力(由7-AAD阴性细胞指示)，并且图14G显示分裂细胞的百分比(使用CellTrace Violet染色加以计算)，如通过流式细胞术所测定。
图15A-图15F显示对人和小鼠T细胞和多发性骨髓瘤细胞系的药物处理。图15A显示通过抗CD3ε/CD28活化，以及用JQ1(在指示剂量下)处理72小时的纯化Crbn+/+小鼠CD8+ T细胞。C-Myc mRNA水平通过qRT-PCR来测定，并且相对于β2M表达(对照基因)加以标准化。图15B显示在细胞表面上表达CD98的T细胞的百分比，图15C显示细胞活力(由7-AAD阴性细胞指示)，并且图15D显示分裂细胞的百分比(使用CellTrace Violet染色加以计算)，如通过流式细胞术所测定。图15E显示人T细胞和小鼠T细胞用α-CD3ε/CD28活化，在活化之后12小时，细胞用递增浓度的dBET1处理12小时。BRD4、c-Myc、CRBN、β-肌动蛋白的蛋白质表达水平通过western印迹来测定。图15F MM1.S和5TGM细胞用递增浓度的dBET1处理24小时。BRD4、c-Myc、CRBN、β-肌动蛋白的蛋白质表达水平通过western印迹来测定。
具体实施方式
本文所述的材料、化合物、组合物和方法可通过参照其中包括的对所公开主题的特定方面的以下详细描述、附图和实施例而更容易理解。
在公开和描述本发明材料、化合物、组合物和方法之前，应了解下述方面不限于特定合成方法或特定试剂，因为所述方法或试剂可理所当然地变化。也应了解本文所用的术语仅出于描述特定方面的目的，并且不意图具有限制性。
此外，在整篇本说明书中，参照了各种出版物。这些出版物的公开内容据此以引用的方式整体并入本申请以更充分描述所公开主题所属领域的状况。公开的参考文献也由于它们中含有在其中依赖于参考文献的语句中讨论的材料而以引用的方式个别地和明确地并入本文。
一般性定义
在本说明书中以及在随后权利要求中，将提及将被定义为具有以下含义的许多术语：
在整篇说明书和权利要求中，用词“包含(包括)(comprise)”和所述用词的其它形式诸如“包含(包括)(comprising/comprises)”意指包括但不限于，并且不意图排除例如其它添加剂、组分、整数或步骤。
除非上下文另外明确规定，否则如描述和随附权利要求中所用，单数形式“一个(种)(a/an)”和“这个(种)(the)”包括复数个指示物。因此，举例来说，提及“一种组合物”包括两种或更多种所述组合物的混合物，提及“一种抑制剂”包括两种或更多种所述抑制剂的混合物，诸如此类。
“任选”或“任选地”意指随后描述的事件或事项可发生或可不发生，并且描述包括其中事件或事项发生的情况以及其中它不发生的情况。
尽管阐述本公开的广泛范围的数值范围和参数是近似值，但特定实例中阐述的数值尽可能精确地加以报道。然而，任何数值都固有地含有必然由见于它们的相应测试测量中的标准偏差所致的某些误差。此外，当本文阐述变化范围的数值范围时，预期可使用包括所述值的这些值的任何组合。此外，范围可在本文中表示为从“约”一个特定值和/或至“约”另一特定值。当表示这种范围时，另一方面包括从一个特定值和/或至另一特定值。类似地，当值通过使用先行词“约”而被表示为近似值时，应了解特定值形成另一方面。应进一步了解各范围的端点关于另一端点以及独立于另一端点均是有意义的。除非另外陈述，否则术语“约”意指在由术语“约”修饰的特定值的5％内(例如在2％或1％内)。
就“降低”或所述词语的其它形式诸如“降低(reducing/reduction)”来说，其意指事件或特征(例如肿瘤生长、转移)的减低。应了解这通常相对于某一标准值或预期值，换句话说，它是相对的，但并非始终必须提及标准值或相对值。举例来说，“降低肿瘤生长”意指相对于标准或对照，使肿瘤细胞的量降低。
就“预防”或所述词语的其它形式诸如“预防(preventing/prevention)”来说，其意指阻止特定事件或特征，使特定事件或特征的发展或进展稳定或延迟，或使特定事件或特征将发生的机会最小化。预防不要求与对照进行比较，因为相比于例如降低，它通常更加绝对。如本文所用，某事可被降低而非预防，但被降低的某事也可被预防。同样，某事可被预防而非降低，但被预防的某事也可被降低。应了解当使用降低或预防时，除非另外明确指示，否则也明确公开使用另一词语。
如本文所用，“治疗”是指获得有益或所需临床结果。有益或所需临床结果包括但不限于以下中的任何一者或多者：减轻一种或多种症状(诸如肿瘤生长或转移)、减小癌症程度、使癌症的状态稳定(即不恶化)、预防或延迟癌症扩散(例如转移)、预防或延迟癌症的发生或复发、延迟或减缓癌症进展、改善癌症状态，以及缓解(无论是部分缓解还是总体缓解)。
术语“患者”优选是指需要用抗癌剂治疗或出于任何目的需要治疗的人，并且更优选是需要这种治疗以治疗癌症或癌前期疾患或病变的人。然而，术语“患者”也可指需要用抗癌剂或治疗加以治疗的非人动物，优选是哺乳动物，诸如狗、猫、马、母牛、猪、绵羊和非人灵长类动物以及其它非人动物。
应了解在整篇本说明书中，标识符“第一”和“第二”仅用于辅助区分所公开主题的各种组分和步骤。标识符“第一”和“第二”不意图暗示关于由这些术语修饰的组分或步骤的任何特定顺序、量、偏好或重要性。
化学定义
如本文所用，术语“组合物”意图涵盖以指定量包含指定成分的产品，以及由以指定量使指定成分组合所直接或间接得到的任何产品。
在说明书和结论性权利要求中提及特定元素或组分在组合物中的重量份表示所述组合物或物品中针对其重量份被表示的所述元素或组分与任何其它元素或组分之间的重量关系。因此，在含有2重量份的组分X和5重量份组分Y的混合物中，X和Y以2:5的重量比存在，并且无论额外组分是否含于所述混合物中都以所述比率存在。
除非相反地明确陈述，否则组分的重量百分比(wt％)基于其中包括所述组分的制剂或组合物的总重量。
如本文所用，预期术语“取代”包括有机化合物的所有可容许取代基。在一广泛方面，可容许取代基包括有机化合物的无环和环状、分支和未分支、碳环和杂环、芳族和非芳族取代基。说明性取代基包括例如下述那些。适当有机化合物的可容许取代基可为一个或多个，并且相同或不同。出于本公开的目的，诸如氮的杂原子可具有氢取代基和/或本文所述的有机化合物的满足杂原子的化合价的任何可容许取代基。本公开不意图以任何方式受有机化合物的可容许取代基限制。此外，术语“取代”或“被……取代”包括隐含前提，即所述取代根据经取代原子和取代基的容许化合价，并且取代产生稳定化合物，例如不自发经受诸如通过重排、环化、消除等进行的转化的化合物。
如本文所用的术语“脂族”是指非芳族烃基团，并且包括分支和未分支烷基、烯基或炔基。
如本文所用的术语“烷基”是具有1至24个碳原子的分支或未分支饱和烃基团，诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、二十烷基、二十四烷基等。烷基也可被取代或未被取代。烷基可被一个或多个如下所述的包括但不限于以下的基团取代：烷基、卤化烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤代基、羟基、酮、硝基、甲硅烷基、氧代硫基、磺酰基、砜、亚砜或硫醇。
符号An在本文中仅用作以下定义中的通用取代基。
如本文所用的术语“烷氧基”是通过单一末端醚键结合的烷基；也就是说，“烷氧基”可被定义为—OA1，其中A1是如上定义的烷基。
如本文所用的术语“烯基”是具有2至24个碳原子，具有含有至少一个碳-碳双键的结构式的烃基团。诸如(A1A2)C＝C(A3A4)的不对称结构意图包括E异构体与Z异构体两者。这可在其中存在不对称烯烃的本文结构式中假定，或它可由键符号C＝C明确指示。烯基可被一个或多个如下所述的包括但不限于以下的基团取代：烷基、卤化烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤代基、羟基、酮、硝基、甲硅烷基、氧代硫基、磺酰基、砜、亚砜或硫醇。
如本文所用的术语“炔基”是具有2至24个碳原子，具有含有至少一个碳-碳三键的结构式的烃基团。炔基可被一个或多个如下所述的包括但不限于以下的基团取代：烷基、卤化烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤代基、羟基、酮、硝基、甲硅烷基、氧代硫基、磺酰基、砜、亚砜或硫醇。
如本文所用的“芳基”是指5、6和7元芳族环。环可为碳环、杂环、稠合碳环、稠合杂环、双碳环或双杂环系统，任选如上所述取代为烷基。如本文所用的广泛定义的“Ar”包括5、6和7元单环芳族基团，其可包括0至4个杂原子。实例包括但不限于苯、吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、三唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶。在环结构中具有杂原子的那些芳基也可被称为“杂芳基”、“芳基杂环”或“杂芳族化合物”。芳族环可在一个或多个环位置处被诸如以上所述的取代基取代，所述取代基例如卤素、叠氮化物、烷基、芳烷基、烯基、炔基、环烷基、羟基、烷氧基、氨基、硝基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、酯、杂环基、芳族或杂芳族部分、--CF3和--CN。术语“Ar”也包括具有两个或更多个环，其中两个或更多个碳为两个邻接环(所述环是“稠环”)所共有的多环系统，其中至少一个环是芳族，例如另一环可为环烷基、环烯基、环炔基、芳基和/或杂环，或两个环均是芳族。
如本文所用的“烷基芳基”或“芳基-烷基”是指被芳基(例如芳族或杂芳族基团)取代的烷基。
如本文所用的“杂环(Heterocycle/heterocyclic)”是指通过单环或双环的环碳或氮连接的环状基团，其含有3-10个环原子，并且优选是5-6个环原子，所述环原子含有碳以及1至4个各自选自以下的杂原子：非过氧化物氧、硫和N(Y)，其中Y不存在或是H、O、(C1-4)烷基、苯基或苯甲基，并且任选含有一个或多个双键或三键，并任选被一个或多个取代基取代。术语“杂环”也涵盖取代和未取代的杂芳基环。杂环的实例包括但不限于苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并苯硫基、苯并噁唑基、苯并噁唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、色满基、色烯基、噌啉基、十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基、吲哚啉基、吲哚嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、靛红酰基(isatinoyl)、异苯并呋喃基、异色满基、异吲唑基、异吲哚啉基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、亚甲基二氧基苯基、吗啉基、萘啶基、八氢异喹啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、啡啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、啡噁噻基、吩噁嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基(piperonyl)、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并噁唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、苯硫基和呫吨基(xanthenyl)。
如本文所用的“杂芳基”是指含有5或6个环原子的单环芳族环，所述环原子含有碳以及1、2、3或4个各自选自以下的杂原子：非过氧化物氧、硫和N(Y)，其中Y不存在或是H、O、(C1-C8)烷基、苯基或苯甲基。杂芳基的非限制性实例包括呋喃基、咪唑基、三唑基、三嗪基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、吡咯基、吡嗪基、四唑基、吡啶基(或它的N-氧化物)、噻吩基、嘧啶基(或它的N-氧化物)、吲哚基、异喹啉基(或它的N-氧化物)、喹啉基(或它的N-氧化物)等。术语“杂芳基”可包括具有约8至10个环原子的邻位稠合双环杂环的由其衍生的基团，特别是苯并衍生物或通过使亚丙基、三亚甲基或四亚甲基二价基团与其稠合所获得的基团。杂芳基的实例包括但不限于呋喃基、咪唑基、三唑基、三嗪基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、吡咯基、吡嗪基、四唑基、吡啶基(或它的N-氧化物)、噻吩基、嘧啶基(或它的N-氧化物)、吲哚基、异喹啉基(或它的N-氧化物)、喹啉基(或它的N-氧化物)等。
如本文所用的术语“环烷基”是由至少3个碳原子组成的基于非芳族碳的环。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。术语“杂环烷基”是如上定义的环烷基，其中环的至少一个碳原子被诸如但不限于氮、氧、硫或磷的杂原子取代。环烷基和杂环烷基可被取代或未被取代。环烷基和杂环烷基可被一个或多个如本文所述的包括但不限于以下的基团取代：烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤代基、羟基、酮、硝基、甲硅烷基、氧代硫基、磺酰基、砜、亚砜或硫醇。
如本文所用的术语“环烯基”是由至少3个碳原子组成，并且含有至少一个双键即C＝C的基于非芳族碳的环。环烯基的实例包括但不限于环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环戊二烯基、环己烯基、环己二烯基等。术语“杂环烯基”是如上定义的环烯基的一种类型，其中环的至少一个碳原子被诸如但不限于氮、氧、硫或磷的杂原子取代。环烯基和杂环烯基可被取代或未被取代。环烯基和杂环烯基可被一个或多个如本文所述的包括但不限于以下的基团取代：烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤代基、羟基、酮、硝基、甲硅烷基、氧代硫基、磺酰基、砜、亚砜或硫醇。
术语“环状基团”在本文中用于指代芳基、非芳基基团(即环烷基、杂环烷基、环烯基和杂环烯基)或两者。环状基团具有一个或多个可被取代或未被取代的环系统。环状基团可含有一个或多个芳基、一个或多个非芳基基团、或一个或多个芳基和一个或多个非芳基基团。
如本文所用的术语“醛”由式—C(O)H表示。在整篇本说明书中，“C(O)”是C＝O的速记符号。
如本文所用的术语“烷氧基(alkoxyl/alkoxy)”是指具有与其连接的氧基团的如上定义的烷基。代表性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基等。“醚”是两个通过氧共价连接的烃。因此，烷基的致使那个烷基成为醚的取代基是烷氧基或类似于烷氧基，诸如可由-O-烷基、-O-烯基和-O-炔基中的一者表示。芳氧基可由–O-芳基或O-杂芳基表示，其中芳基和杂芳基如下所定义。烷氧基和芳氧基可如上所述被取代为烷基。
术语“胺”和“氨基”是本领域公知的，并且是指未取代的胺与取代的胺两者，例如可由通式：-NR9R10或NR9R10R'10表示的部分，其中R9、R10和R'10各自独立地代表氢、烷基、烯基、-(CH2)m-R'8，或R9和R10连同它们连接的N原子一起完成在环结构中具有4至8个原子的杂环；R'8代表芳基、环烷基、环烯基、杂环或多环；并且m是0或在1至8的范围内的整数。在一些实施方案中，R9或R10中仅一者可为羰基，例如R9、R10和氮一起不形成酰亚胺。在一些实施方案中，术语“胺”不涵盖酰胺，例如其中R9和R10中的一者代表羰基。在一些实施方案中，R9和R10(以及任选R’10)各自独立地代表氢、烷基或环烷基、烯基或环烯基、或炔基。因此，如本文所用的术语“烷基胺”意指具有与其连接的取代(如上对于烷基所述)或未取代的烷基的如上定义的胺基团，即R9和R10中的至少一者是烷基。
术语“酰胺基”在本领域中公知为经氨基取代的羰基，并且包括可由通式-CONR9R10表示的部分，其中R9和R10如上所定义。
如本文所用的“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
如本文所用的术语“羧酸”由式—C(O)OH表示。如本文所用的“羧酸根”由式—C(O)O-表示。
如本文所用的术语“酯”由式—OC(O)A1或—C(O)OA1表示，其中A1可为以上所述的烷基、卤化烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基或杂环烯基。
如本文所用的术语“醚”由式A1OA2表示，其中A1和A2可独立地为以上所述的烷基、卤化烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基或杂环烯基。
如本文所用的术语“酮”由式A1C(O)A2表示，其中A1和A2可独立地为以上所述的烷基、卤化烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基或杂环烯基。
如本文所用的术语“卤代基”是指卤素氟、氯、溴和碘。
如本文所用的术语“羟基”由式—OH表示。
如本文所用的术语“硝基”由式—NO2表示。
如本文所用的术语“氰基”由式—CN表示
如本文所用的术语“叠氮基”由式–N3表示。
术语“磺酰基”在本文中用于指代由式--S(O)2A1表示的氧代硫基，其中A1可为以上所述的氢、烷基、卤化烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基、环烯基、杂环烷基或杂环烯基。
如本文所用的术语“磺酰基氨基”或“磺酰胺”由式--S(O)2NH2表示。
如本文所用的术语“硫醇”由式--SH表示。
如本文所用的术语“取代”是指本文所述的化合物的所有可容许取代基。在最广泛意义上，可容许取代基包括有机化合物的无环和环状、分支和未分支、碳环和杂环、芳族和非芳族取代基。说明性取代基包括但不限于卤素、羟基或呈直链、支链或环状结构形式的含有任何数目的碳原子，优选是1-14个碳原子，并且任选包括一个或多个诸如氧、硫或氮基团的杂原子的任何其它有机基团。代表性取代基包括烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、苯基、取代的苯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、卤基、羟基、烷氧基、取代的烷氧基、苯氧基、取代的苯氧基、芳基氧基、取代的芳基氧基、烷基硫基、取代的烷基硫基、苯硫基、取代的苯硫基、芳基硫基、取代的芳基硫基、氰基、异氰基、取代的异氰基、羰基、取代的羰基、羧基、取代的羧基、氨基、取代的氨基、酰胺基、取代的酰胺基、磺酰基、取代的磺酰基、磺酸、磷酰基、取代的磷酰基、膦酰基、取代的膦酰基、多聚芳基、取代的多聚芳基、C3-C20环状基团、取代的C3-C20环状基团、杂环基团、取代的杂环基团、氨基酸基团、肽基团和多肽基团。
应了解“取代(substitution/substituted)”包括隐含前提，即所述取代根据经取代原子和取代基的容许化合价，并且取代产生稳定化合物，即不自发经受诸如通过重排、环化、消除等进行的转化的化合物。
应了解本文提供的化合物可含有手性中心。所述手性中心可具有(R-)构型或(S-)构型。本文提供的化合物可为对映异构纯的，或可为非对映异构或对映异构混合物。应了解本文提供的化合物的手性中心可在体内经受差向异构作用。因此，本领域技术人员将认识到对于在体内经受差向异构作用的化合物，施用呈它的(R-)形式的化合物等效于施用呈它的(S-)形式的所述化合物。
如本文所用，大致上纯净意指足够同质以看起来不含如通过标准分析方法测定的可易于检测的杂质，所述标准分析方法诸如薄层色谱法(TLC)、核磁共振(NMR)、凝胶电泳、高效液相色谱法(HPLC)和质谱测定法(MS)、气相色谱法质谱测定法(GC-MS)以及由本领域技术人员用于评估所述纯度的类似方法，或意指足够纯净以致进一步纯化将不会可检测地改变物质的物理和化学性质，诸如酶活性和生物活性。用于使化合物纯化以产生大致上化学纯的化合物的传统方法与现代方法两者均为本领域技术人员所知。然而，大致上化学纯的化合物可为立体异构体的混合物。
除非相反陈述，否则具有仅显示为实线而非楔形或虚线的化学键的结构式涵盖各可能的异构体，例如各对映异构体、非对映异构体和内消旋化合物以及异构体的混合物，诸如外消旋或非外消旋混合物(scalemic mixture)。
“药学上可接受的”组分是适于与人和/或动物一起使用而无过度不利副作用(诸如毒性、刺激和过敏应答)，与合理益处/风险比率相称的组分。
“药学上可接受的盐”是指药学上可接受，并且具有所需药理学性质的盐。所述盐包括可在存在于化合物中的酸性质子能够与无机或有机碱反应时形成的盐。适合的无机盐包括与碱金属例如钠、钾、镁、钙和铝形成的那些。适合的有机盐包括与有机碱，诸如胺碱，例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、缓血酸胺、N-甲基还原葡糖胺等形成的那些。所述盐也包括与无机酸(例如盐酸和氢溴酸)和有机酸(例如乙酸、柠檬酸、顺丁烯二酸以及烷烃磺酸和芳烃磺酸诸如甲烷磺酸和苯磺酸)形成的酸加成盐。当存在两个酸性基团时，药学上可接受的盐可为单酸单盐或二盐；类似地，当有超过两个酸性基团存在时，一些或所有所述基团可被转化成盐。
“药学上可接受的赋形剂”是指惯常适用于制备药物组合物的通常安全、无毒以及合乎需要的赋形剂，并且包括可为兽医学使用以及人药物使用所接受的赋形剂。所述赋形剂可为固体、液体、半固体，或在气雾剂组合物的情况下可为气体。
“药学上可接受的载体”是用于向患者递送所公开化合物的载体，诸如溶剂、混悬剂或媒介物。载体可为液体或固体，并且在考虑所计划的施用方式的情况下加以选择。脂质体也是药物载体。如本文所用，“载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、媒介物、包覆剂、稀释剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等张剂和吸收延迟剂、缓冲剂、载体溶液、混悬液、胶体等。关于药物活性物质使用所述介质和试剂在本领域中是熟知的。除非任何常规介质或试剂与活性成分不相容，否则预期它用于治疗性组合物中。
如本文所用的术语“治疗有效量”意指活性化合物或药物制剂的在组织、系统、动物或人中引发由研究者、兽医、医生或其它临床医师所寻求的生物或医学响应的量。关于癌症或其它非所要细胞增殖，有效量包括足以导致肿瘤收缩和/或使肿瘤的增长速率降低(诸如抑制肿瘤生长)或预防或延迟其它非所要细胞增殖的量。在一些实施方案中，有效量是足以使发展延迟的量。在一些实施方案中，有效量是足以预防或延迟发生和/或复发的量。有效量可以一次或多次剂量施用。在癌症的情况下，有效量的药物或组合物可：(i)减少癌细胞的数目；(ii)降低肿瘤尺寸；(iii)抑制、延缓、在一定程度上减缓，并且优选终止癌细胞浸润至外周器官中；(iv)抑制(即在一定程度上减缓，并且优选终止)肿瘤转移；(v)抑制肿瘤生长；(vi)预防或延迟肿瘤的发生和/或复发；和/或(vii)在一定程度上减轻一种或多种与癌症相关的症状。
本文所述的化合物或组合物的用于治疗哺乳动物受试者的有效量可包括约0.1至约1000mg/Kg受试者体重/天，诸如约1至约100mg/Kg/天，尤其是约10至约100mg/Kg/天。剂量可为急性的或慢性的。据信广泛范围的所公开组合物剂量是安全且有效的。
现将详细提及所公开材料、化合物、组合物、物品和方法的特定方面，其实例在伴随实施例和附图中加以说明。
化合物
本文公开包含是cereblon E3泛素连接酶结合部分(“CLM”)的E3泛素连接酶结合部分(“ULM”)的化合物。本文公开的化合物可被分组成各种类别。举例来说，化合物可包括以下类别：
Figure BDA0001866541900000291
Figure BDA0001866541900000301
Figure BDA0001866541900000311
在一些方面，本文公开的化合物可由式I表示：
Figure BDA0001866541900000312
其中，
Ar是芳基、环烷基、杂环烷基或杂芳基；
L不存在或是选自由以下组成的组的接头：-SO2、-SO2R'；SO2R’R”、-SO2NR’R”；-SO2NR’R”C(＝O)；-NR’SO2R”；-R’SO2NR’R”'；-C(＝O)；-C(＝O)R’；-OC(＝O)R’；-C(＝O)NR’R”；-NR’C(＝O)R”；-NR’C(＝O)R”C(＝O)；-OR’；-NR’R”；-SR’；-N3-C(＝O)OR’；-O(CR’R”)rC(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”C(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”SO2R’；-OC(＝O)NR'R”；-NR'C(＝O)OR”；以及取代或未取代的C1-C6脂族烷基；
其中R'、R”和R”'个别地选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的烯基；取代或未取代的醚；取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺；并且r是1至6的整数；
R1、R2和R3个别地选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基及其组合，或
其中R1和R2组合以形成5-7元杂环；并且其中当R1和R2组合以形成5-7元杂环时，Ar任选不稠合于所述5-7元杂环，而是所述5-7元杂环的取代基；
R4和R5个别地选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、醚、烷氧基、巯基、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、酯、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合；
R8选自由以下组成的组：氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的烷基芳基及其组合；并且
x是0、1或2。
在式I的一些实例中，Ar可包括芳族基团，诸如苯基、吡咯基、呋喃基、苯硫基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、或嘧啶基、呋喃基、三嗪基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、吡咯基、吡嗪基、四唑基、吡啶基(或它的N-氧化物)、噻吩基、嘧啶基(或它的N-氧化物)、吲哚基、异喹啉基(或它的N-氧化物)、喹啉基(或它的N-氧化物)、异喹啉基、喹啉基、哌啶、哌嗪、嘧啶、硫杂环己烷、噻喃、吗啉、噁嗪、四氢吡喃、吡咯烷、吡咯啉、咪唑啉、吡唑啉、吲哚啉、苯并呋喃、吲哚啉、吲哚
在某些特定实例中，Ar包括苯基。
在某些特定实例中，Ar包括异喹啉基或喹啉基。
在某些特定实例中，Ar包括哌啶。
Ar基团可被取代或未被取代。举例来说，Ar上的取代基可选自氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合。在某些实施方案中，Ar上的取代基可选自H、Cl、F、Br、I、CN、NO2、NH2、CF3、CO2H、CO2NH2、CO2NHR5、CO2R5、C(O)R5、C(O)NH2、C(O)NHR5和任选被烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤代基、羟基、酮、硝基、甲硅烷基、氧代硫基、磺酰基、砜、亚砜或硫醇取代的C1-C6烷基。
在某些特定实例中，Ar被NO2、NH2、OH、烷基、芳基、卤素、酰胺、醚或其组合取代。
在所公开的式I化合物中，可存在1至5个不同取代基R3，例如1、2、3、4或5个R3取代基。取代基可相同或不同。在特定实例中，R3是SO2NH2、SO2NHR'或NHSO2R'，其中R'是任选被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羟基或卤代基取代的C1-C6烷基或C1-C6环烷基。在其它实例中，R3是NHC(O)R'，其中R'是任选被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、环烷基、环杂烷基、羟基或卤代基取代的C1-C6烷基或C1-C6环烷基。在其它实例中，R3是C1-C6烷基或C1-C6环烷基。在其它实例中，R3是C1-C6烷氧基。在其它实例中，R3是卤代基。在其它实例中，n是2，并且各R3选自由以下组成的组：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代基、SO2NH2、SO2NHR'和NHSO2R'，其中R'是任选被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羟基或卤代基取代的C1-C6烷基或C1-C6环烷基。在其它实例中，R3是氢、卤素、羟基、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的C1-C6烷基或其组合。
在式I的一些实例中，L不存在。在式I的其它实例中，L是接头。当L存在时，L可为SO2、-SO2R'；-SO2R'R”、-SO2NR'R”；-SO2NR’R”C(＝O)；-NR’SO2R”；R’SO2NR’R”’；C(＝O)；C(＝O)R’；-OC(＝O)R'；-C(＝O)NR'R”；-NR'C(＝O)R”；-NR'C(＝O)R”C(＝O)；取代或未取代的C1-C6脂族烷基，其中R'、R”和R”'个别地选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的烯基；取代或未取代的醚取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺；并且r是1至6的整数。
在式I的一些特定实例中，R'、R”和R”'可个别地选自氢；取代或未取代的C1-C8烷基；取代或未取代的C1-C8醚；或取代或未取代的胺。
在式I的一些实施方案中，R1可为氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基及其组合。举例来说，R1可选自H、Cl、F、Br、I、CN、NO2、NH2、CF3、CO2H、CO2NH2、CO2NHR5、CO2R5、C(O)R5、C(O)NH2、C(O)NHR5和任选被烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤代基、羟基、酮、硝基、甲硅烷基、氧代硫基、磺酰基、砜、亚砜或硫醇取代的C1-C6烷基。
在某些特定实例中，R1可为氢、卤素、羟基、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的C1-C6烷基及其组合。
在其它特定实例中，R1可选自由以下组成的组：氢、取代或未取代的胺、取代或未取代的C1-C6烷基及其组合。
在式I的一些实施方案中，R2可为氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基及其组合。举例来说，R2可选自H和任选被烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤代基、羟基、酮、硝基、甲硅烷基、氧代硫基、磺酰基、砜、亚砜或硫醇取代的C1-C6烷基。
在式I的一些实施方案中，R1和R2可组合以形成5-7元杂环。当R1和R2组合以形成5-7元杂环时，L可不存在或存在。
在式I的一些实施方案中，R4选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、醚、烷氧基、巯基、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、酯、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合。
在式I的一些实施方案中，R5选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、醚、烷氧基、巯基、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、酯、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合。
在式I的特定实施方案中，R4与R5两者均是氢。在式I的一些实施方案中，R4和R5中的一者是氢。
在某些特定实例中，x是0。
在某些特定实例中，x是1。
在式I的一些实施方案中，化合物可具有如由式I-A表示的结构：
Figure BDA0001866541900000371
其中，
A包括C、S；取代或未取代的C1-C8烷基或其组合；并且
R6和R7个别地是＝O、氢、C1-C8烷基，或R6和R7组合以形成＝O。
在式I-A的一些实施方案中，化合物可具有如由式I-A-1表示的结构：
Figure BDA0001866541900000372
其中，
A包括C、S；取代或未取代的C1-C8烷基或其组合；
R1、R2和R3个别地选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基及其组合；并且
R6和R7个别地是＝O、氢、C1-C8烷基，或R6和R7组合以形成＝O。
在式I-A的一些实例中，化合物可具有如以下表示的结构：
Figure BDA0001866541900000381
Figure BDA0001866541900000391
在式I的一些实施方案中，化合物可具有如由式I-B表示的结构：
Figure BDA0001866541900000392
其中，
A包括C、S、N、取代或未取代的C1-C8烷基或其组合；
D是-NR'、羰基、取代或未取代的C1-C8烷基、或取代或未取代的C1-C8醚；并且
R6和R7个别地是＝O、氢、C1-C8烷基，或R6和R7组合以形成＝O。
在式I-B的一些实例中，R1选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合。
在式I-B的一些实例中，R1是氢、亚氨基、酰胺基、羰基、羧基、氰基、取代或未取代的烷基、或取代或未取代的卤代烷。
在式I-B的一些实例中，R2选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合。
在式I-B的一些实例中，R2是氢、取代或未取代的烷基、或取代或未取代的卤代烷。
在式I-B的一些实例中，R3选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基及其组合。
在式I-B的一些实施方案中，化合物可具有如以下表示的结构：
Figure BDA0001866541900000411
在式I的一些实施方案中，化合物可具有如由式I-C表示的结构：
Figure BDA0001866541900000412
其中，
A包括C、S、N、取代或未取代的C1-C8烷基或其组合；
D是-NR'、羰基、或取代或未取代的C1-C8烷基；
R6和R7个别地是＝O、氢、C1-C8烷基，或R6和R7组合以形成＝O。
在式I-C的一些实施方案中，化合物可具有如以下表示的结构：
Figure BDA0001866541900000421
在式I的一些实施方案中，化合物可具有如由式I-D表示的结构：
Figure BDA0001866541900000422
其中，
A不存在或包括C、S、N、取代或未取代的C1-C8烷基或其组合；
R6和R7个别地是＝O、氢、C1-C8烷基，或R6和R7组合以形成＝O；并且
n和y独立地是0、1或2。
在式I的一些实施方案中，化合物可具有如由式I-E表示的结构：
Figure BDA0001866541900000431
其中，
A不存在或包括C、S、N、取代或未取代的C1-C8烷基或其组合；
R6和R7个别地是＝O、氢、C1-C8烷基，或R6和R7组合以形成＝O；并且
n是0至2。
举例来说，式I-D和I-E化合物可具有如以下表示的结构：
Figure BDA0001866541900000432
Figure BDA0001866541900000441
在式I的一些实施方案中，化合物具有如以下表示的结构：
Figure BDA0001866541900000442
Figure BDA0001866541900000451
在一些方面，本文公开的化合物可由式II表示：
Figure BDA0001866541900000452
其中，
Ar是芳基、环烷基、杂环烷基或杂芳基；
L不存在或是选自由以下组成的组的接头：-SO2、-SO2R'；SO2R’R”、-SO2NR’R”；-SO2NR’R”C(＝O)；-NR’SO2R”；-R’SO2NR’R”'；-C(＝O)；-C(＝O)R’；-OC(＝O)R’；-C(＝O)NR’R”；-NR’C(＝O)R”；-NR’C(＝O)R”C(＝O)；-OR’；-NR’R”；-SR’；-N3-C(＝O)OR’；-O(CR’R”)rC(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”C(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”SO2R’；-OC(＝O)NR'R”；-NR'C(＝O)OR”；以及取代或未取代的C1-C6脂族烷基；
其中R'、R”和R”'个别地选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的烯基；取代或未取代的醚；取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺；并且r是1至6的整数；
R1、R2和R3个别地选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合或
其中R1和R2组合以形成5-7元杂环；并且其中当R1和R2组合以形成5-7元杂环时，Ar任选不稠合于所述5-7元杂环，而是所述5-7元杂环的取代基；
R4和R5个别地选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、醚、烷氧基、巯基、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、酯、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合；
R8选自由以下组成的组：氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的烷基芳基及其组合；并且
x是0、1或2，
y是1至6；并且
其中键---存在或不存在。
在式II的一些实例中，Ar如本文所述。举例来说，Ar可包括芳基或杂芳基。
在式II的某些特定实例中，Ar包括苯基。
在式II的某些特定实例中，Ar包括异喹啉基或喹啉基。
Ar基团可如本文所述被取代或未被取代。举例来说，Ar基团可选自H、Cl、F、Br、I、CN、NO2、NH2、CF3、CO2H、CO2NH2、CO2NHR5、CO2R5、C(O)R5、C(O)NH2、C(O)NHR5和任选被烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤代基、羟基、酮、硝基、甲硅烷基、氧代硫基、磺酰基、砜、亚砜或硫醇取代的C1-C6烷基。在所公开的式II的化合物中，可存在1至5个不同取代基R3，例如1、2、3、4或5个R3取代基。
在式II的一些实例中，L不存在。在式II的其它实例中，L是接头。当L存在时，L可为SO2、-SO2R'；-SO2R'R”、-SO2NR'R”；-SO2NR’R”C(＝O)；-NR’SO2R”；R’SO2NR’R”’；C(＝O)；C(＝O)R’；-OC(＝O)R'；-C(＝O)NR'R”；-NR'C(＝O)R”；-NR'C(＝O)R”C(＝O)；取代或未取代的C1-C6脂族烷基，其中R'、R”和R”'个别地选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的烯基；取代或未取代的醚取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺；并且r是1至6的整数。
在式II的一些特定实例中，R'、R”和R”'可个别地选自氢；取代或未取代的C1-C8烷基；取代或未取代的C1-C8醚；或取代或未取代的胺。
在式II的一些实施方案中，R1可如本文所述。举例来说，R1可为氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基及其组合。举例来说，R1可选自H、Cl、F、Br、I、CN、NO2、NH2、CF3、CO2H、CO2NH2、CO2NHR5、CO2R5、C(O)R5、C(O)NH2、C(O)NHR5和任选被烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤代基、羟基、酮、硝基、甲硅烷基、氧代硫基、磺酰基、砜、亚砜或硫醇取代的C1-C6烷基。
在式II的一些实施方案中，R2可为氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基及其组合。举例来说，R2可选自H和任选被烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤代基、羟基、酮、硝基、甲硅烷基、氧代硫基、磺酰基、砜、亚砜或硫醇取代的C1-C6烷基。
在式II的一些实施方案中，R1和R2可组合以形成5-7元杂环。当R1和R2组合以形成5-7元杂环时，L可不存在或存在。
在式II的一些实施方案中，R4选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、醚、烷氧基、巯基、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、酯、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合。
在式II的一些实施方案中，R5选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、醚、烷氧基、巯基、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、酯、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合。
在式II的特定实施方案中，R4与R5两者均是氢。在式II的一些实施方案中，R4和R5中的一者是氢。
在式II的某些特定实例中，x是0。
在式II的某些特定实例中，x是1。
在式II的一些实施方案中，化合物可具有如由式II-A表示的结构：
Figure BDA0001866541900000491
其中，
A包括C、S、N、取代或未取代的C1-C8烷基或其组合；
R6和R7个别地是＝O、氢、C1-C8烷基，或R6和R7组合以形成＝O。
在式II-A的一些实施方案中，化合物可具有如由式II-A-1表示的结构：
Figure BDA0001866541900000501
其中，
A包括C、S、N、取代或未取代的C1-C8烷基或其组合；
R6和R7个别地是＝O、氢、C1-C8烷基，或R6和R7组合以形成＝O。
在式II-A的一些实施方案中，化合物可具有如以下表示的结构：
Figure BDA0001866541900000502
在式II的一些实施方案中，化合物可具有如由式II-B表示的结构：
Figure BDA0001866541900000503
其中，
A包括C、S、N、取代或未取代的C1-C8烷基或其组合；
D是-NR'、羰基、或取代或未取代的C1-C8烷基；
R6和R7个别地是＝O、氢、C1-C8烷基，或R6和R7组合以形成＝O。
在式II-B的一些实施方案中，化合物可具有如以下表示的结构：
Figure BDA0001866541900000511
在式II的一些实施方案中，化合物可具有如以下表示的结构：
Figure BDA0001866541900000512
在一些方面，本文公开的化合物可由式III表示：
Figure BDA0001866541900000521
其中，
G包括C、S、N、取代或未取代的C1-C8烷基或其组合；
R3选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基及其组合；
R4、R5和R8个别地选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、醚、烷氧基、巯基、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、酯、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的烷基芳基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合；并且
R6和R7个别地是＝O、氢、C1-C8烷基，或R6和R7组合以形成＝O；
x是0、1或2；并且
其中键---存在或不存在。
在式III的一些实例中，R3、R4和R5如本文所述。
在式III的一些实例中，R8选自由以下组成的组：氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的烷基芳基及其组合。
在式III的一些实施方案中，化合物具有如由式III-A表示的结构：
Figure BDA0001866541900000531
其中R3、R4、R5、R6、R7和R8如本文所述。
在式III的一些实施方案中，化合物具有如由式III-B表示的结构：
Figure BDA0001866541900000532
其中R3、R4、R6、R7和R8如本文所述。
在式III的一些实施方案中，化合物可具有如以下表示的结构：
Figure BDA0001866541900000541
在式III的特定实例中，化合物可具有如以下表示的结构：
Figure BDA0001866541900000542
在一些方面，本文公开的化合物可具有由式IV表示的结构：
Figure BDA0001866541900000551
其中，
R3选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基及其组合；
R4、R5和R8个别地选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、醚、烷氧基、巯基、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、酯、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的烷基芳基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合；并且
R6和R7个别地是＝O、氢、C1-C8烷基，或R6和R7组合以形成＝O；
x是0、1或2；并且
其中键---存在或不存在。
在一些方面，本文公开的化合物可具有由式V表示的结构：
Figure BDA0001866541900000561
其中，
L不存在或是选自由以下组成的组的接头：-SO2、-SO2R'；SO2R’R”、-SO2NR’R”；-SO2NR’R”C(＝O)；-NR’SO2R”；-R’SO2NR’R”’；-C(＝O)；-C(＝O)R’；-OC(＝O)R’；-C(＝O)NR’R”；-NR’C(＝O)R”；-NR’C(＝O)R”C(＝O)；-OR’；-NR’R”；-SR’；-N3-C(＝O)OR’；-O(CR’R”)rC(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”C(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”SO2R’；-OC(＝O)NR'R”；-NR'C(＝O)OR”；以及取代或未取代的C1-C6脂族烷基；
其中R'、R”和R”'个别地选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的烯基；取代或未取代的醚；或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺；并且r是1至6的整数；并且
R3、R4和R5个别地选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基及其组合。在一些实例中，R8是H。
在一些方面，本文公开的化合物可具有由式VI表示的结构：
Figure BDA0001866541900000571
其中，
L不存在或是选自由以下组成的组的接头：-SO2、-SO2R'；SO2R’R”、-SO2NR’R”；-SO2NR’R”C(＝O)；-NR’SO2R”；-R’SO2NR’R”’；-C(＝O)；-C(＝O)R’；-OC(＝O)R’；-C(＝O)NR’R”；-NR’C(＝O)R”；-NR’C(＝O)R”C(＝O)；-OR’；-NR’R”；-SR’；-N3-C(＝O)OR’；-O(CR’R”)rC(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”C(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”SO2R’；-OC(＝O)NR'R”；-NR'C(＝O)OR”；以及取代或未取代的C1-C6脂族烷基；
其中R'、R”和R”'个别地选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的烯基；取代或未取代的醚；取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺；并且r是1至6的整数；并且
R1、R3、R4和R5个别地选自由以下组成的组：氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基及其组合；
y是0、1或2；并且
其中键---存在或不存在。
在一些方面，本文公开的化合物可具有由式VII表示的结构：
Figure BDA0001866541900000581
其中，
Ar选自取代或未取代的苯基、取代或未取代的吡咯基、取代或未取代的呋喃基、取代或未取代的苯硫基、取代或未取代的咪唑基、取代或未取代的噁唑基、取代或未取代的噻唑基、取代或未取代的三唑基、吡唑基、取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的吡嗪基、取代或未取代的哒嗪基、取代或未取代的吡唑基、取代或未取代的噁唑基、取代或未取代的异噁唑基、取代或未取代的嘧啶基、取代或未取代的呋喃基、取代或未取代的三嗪基、取代或未取代的噁唑基、取代或未取代的异噁唑基、取代或未取代的噻唑基、取代或未取代的异噻唑基、取代或未取代的吡唑基、取代或未取代的吡咯基、吡嗪基、四唑基、吡啶基(或它的N-氧化物)、噻吩基、取代或未取代的嘧啶基、取代或未取代的吲哚基、取代或未取代的异喹啉基、取代或未取代的喹啉基、取代或未取代的异喹啉基、取代或未取代的喹啉基、取代或未取代的哌啶、取代或未取代的哌嗪、取代或未取代的嘧啶、取代或未取代的硫杂环己烷、取代或未取代的噻喃、取代或未取代的吗啉、取代或未取代的噁嗪、取代或未取代的四氢吡喃、取代或未取代的吡咯烷、取代或未取代的吡咯啉、取代或未取代的咪唑啉、取代或未取代的吡唑啉、取代或未取代的吲哚啉、取代或未取代的苯并呋喃、取代或未取代的吲哚啉、取代或未取代的吲哚；
L不存在或是选自由以下组成的组的接头：-SO2、-SO2R'；SO2R’R”、-SO2NR’R”；-SO2NR’R”C(＝O)；-NR’SO2R”；-R’SO2NR’R”’；-C(＝O)；-C(＝O)R’；-OC(＝O)R’；-C(＝O)NR’R”；-NR’C(＝O)R”；-NR’C(＝O)R”C(＝O)；-OR’；-NR’R”；-SR’；-N3-C(＝O)OR’；-O(CR’R”)rC(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”C(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”SO2R’；-OC(＝O)NR'R”；-NR'C(＝O)OR”；以及取代或未取代的C1-C6脂族烷基；
其中R'、R”和R”'个别地选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的醚；取代或未取代的烯基；取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺；并且r是1至6的整数；并且
Cy选自取代或未取代的戊二酰亚胺、取代或未取代的丁二酰亚胺、取代或未取代的丁二酰胺、取代或未取代的乙内酰脲、取代或未取代的尿嘧啶、取代或未取代的二氢尿嘧啶。
如本文所述，Ar可包括苯基、吡咯基、呋喃基、苯硫基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、哌啶、哌嗪、异喹啉、喹诺酮或嘧啶基。Ar基团可被H、Cl、F、Br、I、CN、NO2、NH2、CF3、CO2H、CO2NH2、CO2NHR5、CO2R5、C(O)R5、C(O)NH2、C(O)NHR5和任选被烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤代基、羟基、酮、硝基、甲硅烷基、氧代硫基、磺酰基、砜、亚砜或硫醇取代的C1-C6烷基取代。
在一些特定实施方案中，本文公开的化合物可包括具有芳族/杂环尾部的戊二酰亚胺类似物。
在一些特定实施方案中，本文公开的化合物可包括尿嘧啶或二氢尿嘧啶类似物。
在一些特定实施方案中，本文公开的化合物可包括丁二酰亚胺和乙内酰脲类似物。
Figure BDA0001866541900000601
在一些特定实施方案中，本文公开的化合物可包括
Figure BDA0001866541900000611
在一些特定实施方案中，本文公开的化合物可由下式表示：
Figure BDA0001866541900000612
其中R是芳族、杂环、脂环族、双环系统和脂族基团。
本文公开的化合物的特定实例可包括
Figure BDA0001866541900000621
Figure BDA0001866541900000631
Figure BDA0001866541900000641
Figure BDA0001866541900000651
Figure BDA0001866541900000661
Figure BDA0001866541900000671
Figure BDA0001866541900000681
Figure BDA0001866541900000691
在一些方面，本文公开的化合物可由式VIII表示：
Figure BDA0001866541900000692
其中，
G包括C、S、N、取代或未取代的C1-C8烷基或其组合；
Ar是芳基、环烷基、杂环烷基或杂芳基；
L1和L2个别地不存在，或是选自由以下组成的组的接头：-SO2、-SO2R’；SO2R’R”、-SO2NR’R”；-SO2NR’R”C(＝O)；-NR’SO2R”；-R’SO2NR’R”’；-C(＝O)；-C(＝O)R’；-OC(＝O)R’；-C(＝O)NR’R”；-NR’C(＝O)R”；-NR’C(＝O)R”C(＝O)；-OR’；-NR’R”；-SR’；-N3-C(＝O)OR’；-O(CR’R”)rC(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”C(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”SO2R’；-OC(＝O)NR'R”；-NR'C(＝O)OR”；取代或未取代的C1-C8脂族烷基；取代或未取代的卤代C1-C8烷、取代或未取代的C1-C8烯基、取代或未取代的C1-C8炔基、取代或未取代的醚；
其中R'、R”和R”'个别地选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的烯基；取代或未取代的醚；取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺；并且r是1至6的整数；
R6和R7个别地是氢、C1-C8烷基、醚，或R6和R7组合以形成＝O；
R4选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的烯基；取代或未取代的醚；取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺。
在式VIII的一些实例中，Ar可包括如本文公开的芳族基团，诸如苯基、吡咯基、呋喃基、苯硫基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、或嘧啶基、呋喃基、三嗪基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、吡咯基、吡嗪基、四唑基、吡啶基(或它的N-氧化物)、噻吩基、嘧啶基(或它的N-氧化物)、吲哚基、异喹啉基(或它的N-氧化物)、喹啉基(或它的N-氧化物)、异喹啉基、喹啉基。
在某些特定实例中，Ar包括苯基。
Ar基团可被取代或未被取代。举例来说，Ar上的取代基可选自氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合。在某些实施方案中，Ar上的取代基可选自H、Cl、F、Br、I、CN、NO2、NH2、CF3、CO2H、CO2NH2、CO2NHR5、CO2R5、C(O)R5、C(O)NH2、C(O)NHR5和任选被烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤代基、羟基、酮、硝基、甲硅烷基、氧代硫基、磺酰基、砜、亚砜或硫醇取代的C1-C6烷基。
在某些特定实例中，Ar被NO2、NH2、OH、烷基、芳基、卤素、酰胺、醚或其组合取代。
在所公开的式VIII的化合物中，可存在1至5个不同取代基R3，例如1、2、3、4或5个R3取代基。取代基可相同或不同。在特定实例中，R3是SO2NH2、SO2NHR'或NHSO2R'，其中R'是任选被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羟基或卤代基取代的C1-C6烷基或C1-C6环烷基。在其它实例中，R3是NHC(O)R'，其中R'是任选被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、环烷基、环杂烷基、羟基或卤代基取代的C1-C6烷基或C1-C6环烷基。在其它实例中，R3是C1-C6烷基或C1-C6环烷基。在其它实例中，R3是C1-C6烷氧基。在其它实例中，R3是卤代基。在其它实例中，n是2，并且各R3选自由以下组成的组：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代基、SO2NH2、SO2NHR'和NHSO2R'，其中R'是任选被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羟基或卤代基取代的C1-C6烷基或C1-C6环烷基。在其它实例中，R3是氢、卤素、羟基、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的C1-C6烷基或其组合。
在式VIII的一些实例中，L1和L2包括取代或未取代的C1-C8脂族烷基、取代或未取代的C1-C8烯基；取代或未取代的C1-C8醚；取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺。
在式VIII的一些特定实例中，G包括N。
在式VIII的一些实施方案中，R4选自由以下组成的组：氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基及其组合。
在式VIII的一些实施方案中，化合物可由式VIII-A表示：
Figure BDA0001866541900000721
其中，
G包括C、S、N、取代或未取代的C1-C8烷基或其组合；
L1和L2个别地不存在，或是选自由以下组成的组的接头：-SO2、-SO2R’；SO2R’R”、-SO2NR’R”；-SO2NR’R”C(＝O)；-NR’SO2R”；-R’SO2NR’R”’；-C(＝O)；-C(＝O)R’；-OC(＝O)R’；-C(＝O)NR’R”；-NR’C(＝O)R”；-NR’C(＝O)R”C(＝O)；-OR’；-NR’R”；-SR’；-N3-C(＝O)OR’；-O(CR’R”)rC(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”C(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”SO2R’；-OC(＝O)NR'R”；-NR'C(＝O)OR”；取代或未取代的C1-C8脂族烷基；取代或未取代的卤代C1-C8烷、取代或未取代的C1-C8烯基、取代或未取代的C1-C8炔基、取代或未取代的醚；
其中R'、R”和R”'个别地选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的烯基；取代或未取代的醚；取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺；并且r是1至6的整数；
R6和R7个别地是氢、C1-C8烷基、醚，或R6和R7组合以形成＝O；
R4选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的烯基；取代或未取代的醚；取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺。
在一些方面，本文公开的化合物可由式IX表示：
Figure BDA0001866541900000731
其中，
G包括C、S、N、取代或未取代的C1-C8烷基或其组合；
Ar是芳基、环烷基、杂环烷基或杂芳基；
L1和L2个别地不存在，或是选自由以下组成的组的接头：-SO2、-SO2R’；SO2R’R”、-SO2NR’R”；-SO2NR’R”C(＝O)；-NR’SO2R”；-R’SO2NR’R”’；-C(＝O)；-C(＝O)R’；-OC(＝O)R’；-C(＝O)NR’R”；-NR’C(＝O)R”；-NR’C(＝O)R”C(＝O)；-OR’；-NR’R”；-SR’；-N3-C(＝O)OR’；-O(CR’R”)rC(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”C(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”SO2R’；-OC(＝O)NR'R”；-NR'C(＝O)OR”；取代或未取代的C1-C8脂族烷基；取代或未取代的卤代C1-C8烷、取代或未取代的C1-C8烯基、取代或未取代的C1-C8炔基、取代或未取代的醚；
其中R'、R”和R”'个别地选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的烯基；取代或未取代的醚；取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺；并且r是1至6的整数；
R6和R7个别地是氢、C1-C8烷基、醚，或R6和R7组合以形成＝O；
R4选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的烯基；取代或未取代的醚；取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺。
在式IX的一些实例中，Ar可包括如本文公开的芳族基团，诸如苯基、吡咯基、呋喃基、苯硫基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、或嘧啶基、呋喃基、三嗪基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、吡咯基、吡嗪基、四唑基、吡啶基(或它的N-氧化物)、噻吩基、嘧啶基(或它的N-氧化物)、吲哚基、异喹啉基(或它的N-氧化物)、喹啉基(或它的N-氧化物)、异喹啉基、喹啉基。
在某些特定实例中，Ar包括苯基。
Ar基团可被取代或未被取代。举例来说，Ar上的取代基可选自氢、卤素、羟基、叠氮化物、烷氧基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、氰基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、杂环基及其组合。在某些实施方案中，Ar上的取代基可选自H、Cl、F、Br、I、CN、NO2、NH2、CF3、CO2H、CO2NH2、CO2NHR5、CO2R5、C(O)R5、C(O)NH2、C(O)NHR5和任选被烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、醛、氨基、羧酸、酯、醚、卤代基、羟基、酮、硝基、甲硅烷基、氧代硫基、磺酰基、砜、亚砜或硫醇取代的C1-C6烷基。
在某些特定实例中，Ar被NO2、NH2、OH、烷基、芳基、卤素、酰胺、醚或其组合取代。
在所公开的式IX的化合物中，可存在1至5个不同取代基R3，例如1、2、3、4或5个R3取代基。取代基可相同或不同。在特定实例中，R3是SO2NH2、SO2NHR'或NHSO2R'，其中R'是任选被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羟基或卤代基取代的C1-C6烷基或C1-C6环烷基。在其它实例中，R3是NHC(O)R'，其中R'是任选被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、环烷基、环杂烷基、羟基或卤代基取代的C1-C6烷基或C1-C6环烷基。在其它实例中，R3是C1-C6烷基或C1-C6环烷基。在其它实例中，R3是C1-C6烷氧基。在其它实例中，R3是卤代基。在其它实例中，n是2，并且各R3选自由以下组成的组：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代基、SO2NH2、SO2NHR'和NHSO2R'，其中R'是任选被C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羟基或卤代基取代的C1-C6烷基或C1-C6环烷基。在其它实例中，R3是氢、卤素、羟基、取代或未取代的胺、取代或未取代的酰胺、硝基、酯、吗啉基、二氧杂环戊烷、取代或未取代的C1-C6烷基或其组合。
在式IX的一些实例中，L1和L2包括取代或未取代的C1-C8脂族烷基、取代或未取代的C1-C8烯基；取代或未取代的C1-C8醚；取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺。
在式IX的一些特定实例中，G包括N。
在式IX的一些实施方案中，R4选自由以下组成的组：氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的卤代烷、取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基及其组合。
在式IX的一些实施方案中，化合物可由式IX-A表示：
Figure BDA0001866541900000761
其中，
G包括C、S、N、取代或未取代的C1-C8烷基或其组合；
L1和L2个别地不存在，或是选自由以下组成的组的接头：-SO2、-SO2R’；SO2R’R”、-SO2NR’R”；-SO2NR’R”C(＝O)；-NR’SO2R”；-R’SO2NR’R”’；-C(＝O)；-C(＝O)R’；-OC(＝O)R’；-C(＝O)NR’R”；-NR’C(＝O)R”；-NR’C(＝O)R”C(＝O)；-OR’；-NR’R”；-SR’；-N3-C(＝O)OR’；-O(CR’R”)rC(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”C(＝O)R’；-O(CR’R”)rNR”SO2R’；-OC(＝O)NR'R”；-NR'C(＝O)OR”；取代或未取代的C1-C8脂族烷基；取代或未取代的卤代C1-C8烷、取代或未取代的C1-C8烯基、取代或未取代的C1-C8炔基、取代或未取代的醚；
其中R'、R”和R”'个别地选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的烯基；取代或未取代的醚；取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺；并且r是1至6的整数；
R6和R7个别地是氢、C1-C8烷基、醚，或R6和R7组合以形成＝O；
R4选自氢；取代或未取代的烷基；取代或未取代的烯基；取代或未取代的醚；取代或未取代的环烷基；取代或未取代的杂环基；取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的烷基杂芳基、或取代或未取代的胺。
在一些实施方案中，本文公开的组合物不包括
Figure BDA0001866541900000771
Figure BDA0001866541900000772
Figure BDA0001866541900000781
方法
本文公开用于治疗患者的疾病状态或疾患的方法，其中调控异常的蛋白质活性导致所述疾病状态或疾患。如本文所述，所公开的化合物包含是cereblon E3泛素连接酶结合部分(“CLM”)的E3泛素连接酶结合部分(“ULM”)。在T细胞活化期间，Cereblon以时间调控方式抑制IKZF1和IKZF3的较低分子量亚型的表达。在活化之后在crbn-/- T细胞中对IKZF的这个调控指示cereblon可涉及于它的调控中，并且它是CRBN/Cul4A/Rbx1 E3泛素连接酶复合物的天然底物。这个数据表明cereblon底物可具有非典型结果。本文公开的化合物在癌症诸如实体肿瘤和血液携带肿瘤；心脏病诸如充血性心脏衰竭；以及病毒性疾病、遗传疾病、炎症性疾病、过敏疾病和自体免疫疾病的情况下具有显著的治疗潜力。
本文提供了使受试者患有自体免疫疾病或病症的风险降低，预防受试者患有自体免疫疾病或病症，或治疗患有自体免疫疾病或病症的受试者的方法。在特定实例中，提供使受试者中显现移植物抗宿主疾病(GVHD)的风险降低，预防或治疗受试者的移植物抗宿主疾病(GVHD)的方法。GVHD可归因于涉及植入免疫原性组织的移植程序，所述免疫原性组织包括但不限于实体器官移植物(诸如心脏、肾和肝)、组织移植物(诸如皮肤、肠、胰腺、角膜、生殖腺、骨和软骨)和细胞移植物(诸如来自胰腺、脑以及神经组织、肌肉、皮肤、骨、软骨和肝的细胞)。在所述程序中，器官排斥是完全恢复的障碍。个体的免疫系统将植入组织上的抗原(HLA或次要H抗原)识别为外来，并且发动针对它的免疫应答，此使植入组织受到损伤和破坏。方法可包括向受试者施用有效量的如本文公开的化合物或组合物。方法可进一步包括施用第二化合物或组合物，诸如像免疫抑制剂。
自体免疫疾病可包括例如类风湿性关节炎、多发性硬化症、青少年发作型糖尿病、全身性红斑狼疮、自体免疫葡萄膜视网膜炎、自体免疫血管炎、大疱性天疱疹、重症肌无力、自体免疫甲状腺炎或桥本氏病(Hashimoto's disease)、休格连氏综合征(Sjogren'ssyndrome)、肉芽肿性睾丸炎、自体免疫卵巢炎、克罗恩氏病(Crohn's disease)、类肉瘤病、风湿性心脏炎、僵直性脊椎炎、格雷福斯氏病(Grave's disease)和自体免疫血小板减少性紫癜。
在一个实施方案中，向处于发展自体免疫疾病或病症的风险下或患有自体免疫疾病或病症，并且需要此治疗的患者施用有效量的一种或多种本文公开的化合物或组合物。患者可为处于发展自体免疫疾病或病症的风险下或患有自体免疫疾病或病症的人或其它哺乳动物，诸如灵长类动物(猴、黑猩猩、猿等)、狗、猫、母牛、猪或马，或其它动物。
本文进一步提供治疗或预防受试者的癌症的方法，其包括向所述受试者施用有效量的如本文公开的化合物或组合物。方法可进一步包括施用第二化合物或组合物，诸如像抗癌剂或消炎剂。另外，方法可进一步包括向受试者施用有效量的电离辐射。
本文也提供杀灭肿瘤细胞的方法。方法包括使肿瘤细胞与有效量的如本文公开的化合物或组合物接触。方法可进一步包括向受试者施用第二化合物或组合物(例如抗癌剂或消炎剂)或施用有效量的电离辐射。
本文也提供放射治疗肿瘤的方法，其包括使肿瘤与有效量的如本文公开的化合物或组合物接触，以及用有效量的电离辐射照射肿瘤。
也公开用于治疗患者的肿瘤病症的方法。在一个实施方案中，向患有肿瘤病症，并且需要此治疗的患者施用有效量的一种或多种本文公开的化合物或组合物。所公开方法可任选包括鉴定需要或可需要治疗肿瘤病症的患者。患者可为患有肿瘤病症的人或其它哺乳动物，诸如灵长类动物(猴、黑猩猩、猿等)、狗、猫、母牛、猪或马，或其它动物。肿瘤病症包括但不限于肛门癌和/或肿瘤、胆管癌和/或肿瘤、膀胱癌和/或肿瘤、骨癌和/或肿瘤、骨髓癌和/或肿瘤、肠(包括结肠和直肠)癌和/或肿瘤、乳腺癌和/或肿瘤、眼癌和/或肿瘤、胆囊癌和/或肿瘤、肾癌和/或肿瘤、口腔癌和/或肿瘤、喉癌和/或肿瘤、食道癌和/或肿瘤、胃癌和/或肿瘤、睾丸癌和/或肿瘤、子宫颈癌和/或肿瘤、头癌和/或肿瘤、颈癌和/或肿瘤、卵巢癌和/或肿瘤、肺癌和/或肿瘤、间皮瘤、神经内分泌癌和/或肿瘤、阴茎癌和/或肿瘤、皮肤癌和/或肿瘤、脊髓癌和/或肿瘤、甲状腺癌和/或肿瘤、阴道癌和/或肿瘤、外阴癌和/或肿瘤、子宫癌和/或肿瘤、肝癌和/或肿瘤、肌肉癌和/或肿瘤、胰腺癌和/或肿瘤、前列腺癌和/或肿瘤、血细胞(包括淋巴细胞和其它免疫系统细胞)癌和/或肿瘤、以及脑癌和/或肿瘤。被预期用于治疗的特定癌症包括癌瘤、卡波西氏肉瘤(Karposi’s sarcoma)、黑素瘤、间皮瘤、软组织肉瘤、胰腺癌、肺癌、白血病(急性淋巴母细胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病以及其它白血病)以及淋巴瘤(霍奇金氏(Hodgkin’s)和非霍奇金氏淋巴瘤)和多发性骨髓瘤。
本文进一步提供治疗受试者的遗传疾病或病症的方法，其包括向所述受试者施用有效量的如本文公开的化合物或组合物。方法可进一步包括施用第二化合物或组合物。
“遗传病症”可由一个或多个基因中的从父母中的至少一者遗传的变化引起和/或基于所述变化。实例包括尿素循环病症、地中海贫血，而且也包括基于这些变化或由这些变化引起的疾病或症状的实施方案，诸如静脉曲张病、阴道炎、抑郁或婴儿猝死综合征等。遗传病症可为表观遗传的，此定义为在表型或基因表达方面的并非由基因序列变化引起，而是由其它机理/非遗传因素引起的遗传变化。
使用本文公开的化合物治疗的遗传病症可包括以选自以下的症状或疾病显现它自身的病症：尿素循环病症、地中海贫血、囊性纤维化、类风湿性关节炎、休格连氏综合征、葡萄膜炎、静脉曲张病、多发性肌炎、以及皮肤肌炎、动脉硬化、肌萎缩性侧索硬化、社交能力缺失、情感障碍、全身性红斑狼疮。它也在于心血管和神经疾病、II型糖尿病、神经变性疾病、鲁宾斯坦-泰必综合征(Rubinstein-Taybi-Syndrome)、雷特综合征(Rett syndrome)、弗里德希氏共济失调(Friedreich's ataxia)、亨廷顿氏病(Huntingdon's disease)、多发性硬化症、抑郁。它也可包括粘膜炎、皮肤/粘膜发痒、眼退变性疾病、进食障碍和肥胖症、药物诱发的重量增加、瘙痒、酒精中毒、灰发、毛发脱落、心脏损伤、缺乏神经元生长、骨质疏松、骨和关节疾病、上皮损害、结缔组织疾病、帕金森氏病(Parkinson's disease)、骨髓发育不良综合征、纤维化肺病、肝性脑病变、人乳头状瘤病毒(HPV)感染或自体免疫疾病，或也包括阴道炎或婴儿猝死综合征。一般来说，如已在“遗传病症”的定义中陈述，就它们的病因在于遗传病症，尤其在于表观遗传病症来就，用途仅涉及这个段落中所列的疾病/症状。
一般来说，遗传病症包括22q11.2缺失综合征、安吉尔曼综合征(AngelmanSyndrome)、卡纳万病(Canavan disease)、乳糜泻、恰克-马利-杜斯病(Charcot-Marie-Tooth disease)、色盲、猫叫综合征(Cri du chat)、唐综合征(Down syndrome)、囊性纤维化、杜兴肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy)、血友病、克兰费尔特氏综合征(Klinefelter's syndrome)、神经纤维瘤病、苯丙酮酸尿症、普拉德-威利综合征(Prader-Willi syndrome)、镰状细胞病、泰-萨斯病(Tay-Sachs disease)、特纳综合征(Turnersyndrome)等。
在一些实施方案中，组合物可用于治疗选自以下，或以选自以下的症状或疾病显现它自身的遗传病症：尿素循环病症、地中海贫血、囊性纤维化、类风湿性关节炎、休格连氏综合征、葡萄膜炎、多发性肌炎、以及皮肤肌炎、动脉硬化、肌萎缩性侧索硬化、社交能力缺失、情感障碍、全身性红斑狼疮、免疫应答、静脉曲张病、阴道炎(包括慢性复发性酵母阴道炎)、抑郁或婴儿猝死综合征，优选选自抑郁、静脉曲张病或婴儿猝死综合征。
也提供诱导细胞中的靶标蛋白质的降解的方法。方法包括使细胞与有效量的如本文公开的化合物或组合物接触。
也提供抑制cereblon E3泛素连接酶结合部分(CLM)的方法。方法包括使细胞与有效量的如本文公开的化合物或组合物接触。
也提供使患者的其它疾病状态或疾患的风险降低，预防或治疗患者的其它疾病状态或疾患的方法。在本文所述的方法的一些实施方案中，疾病状态或疾患可包括哮喘、多发性硬化症、纤毛病变、腭裂、糖尿病、心脏病、高血压、炎性肠病、智力迟钝、情绪障碍、肥胖症、屈光不正、不育症、安吉尔曼综合征、卡纳万病、乳糜泻、恰克-马利-杜斯病、囊性纤维化、杜兴肌营养不良、血色病、血友病、克兰费尔特氏综合征、神经纤维瘤病、苯丙酮酸尿症、多囊性肾病、(PKD1)或4(PKD2)普拉德-威利综合征、镰状细胞病、泰-萨斯病、特纳综合征、阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease)、肌萎缩性侧索硬化(路格里克氏病(Lou Gehrig's disease))、神经性厌食症、焦虑症、动脉粥样硬化、注意力缺陷活动过度障碍、自闭症、双相障碍、慢性疲劳综合征、慢性阻塞性肺病、克罗恩氏病、冠心病、痴呆、抑郁、1型糖尿病、2型糖尿病、癫痫、格林-巴雷综合征(Guillain-Barré syndrome)、肠易激综合征、狼疮、代谢综合征、多发性硬化症、心肌梗塞、肥胖症、强迫症、惊恐症、帕金森氏病、牛皮癣、类风湿性关节炎、类肉瘤病、精神分裂症、中风、血栓闭塞性脉管炎、妥瑞综合征(Tourettesyndrome)、血管炎。
可使用分子动力学模拟来确定化合物使疾病状况的风险降低，治疗、预防或抑制疾病状况的活性。特定来说，可使用各种物种中的CRBN的已知晶体结构进行分子动力学模拟。若干文库可用于筛选抑制剂。
可使用本领域中的已知技术测定化合物。举例来说，生物测定可包括将人CRBN过度表达于CRBN-/- T细胞中以测定各独特氨基酸促进与Myc、Ikaros的蛋白质相互作用的能力，以及鉴定代谢物调控中涉及的新底物。CRBN-Cul4体外Ub测定可使用重组体加以开发。可用于评估Myc和Ikaros的表达的基于细胞的分析将出于筛选目的在经处理细胞的情况下使用。将使用如先前所述的基于荧光素酶的表达测定来观察Myc和Ikaros的表达。使用IMiD化合物和构建体来显现靶向底物的荧光素酶表达降低。使用体外泛素化测定和荧光素酶构建体，结果显示测试化学“命中物”阻断CRBN-Cul4介导的对靶标底物的泛素化的能力。
施用
所公开化合物可以单独或组合药物制剂形式依序或同时施用。当一种或多种所公开化合物与第二治疗剂组合使用时，各化合物的剂量可与单独使用化合物时的剂量相同或不同。适当剂量将易于由本领域技术人员所了解。
关于本发明化合物的术语“施用(administration)”及其变化形式(例如“施用(administering)”化合物)意指将所述化合物或所述化合物的前药引入需要治疗的动物的系统中。当本发明化合物或其前药与一种或多种其它活性剂(例如细胞毒性剂等)组合提供时，“施用”和它的变化形式各自应理解为包括并行和依序引入化合物或其前药以及其它药剂。
体内施加所公开化合物和含有它们的组合物可通过当前或将来为本领域技术人员所知的任何适合方法和技术来实现。举例来说，所公开化合物可以生理上或药学上可接受的形式配制，并且通过本领域中已知的任何适合途径来施用，所述途径包括例如口服、经鼻、经直肠、经表面和胃肠外施用途径。如本文所用，术语胃肠外包括皮下、真皮内、静脉内、肌肉内、腹膜内和胸骨内施用，诸如通过注射进行。所公开化合物或组合物的施用可为单次施用，或以连续或不同间隔施用，如可易于由本领域技术人员所确定。
也可利用脂质体技术、缓慢释放胶囊、可植入泵和生物可降解容器来施用本文公开的化合物和包含它们的组合物。这些递送方法可历经延长时期有利地提供均一剂量。化合物也可以它们的盐衍生物形式或结晶形式施用。
可根据用于制备药学上可接受的组合物的已知方法配制本文公开的化合物。制剂详细描述于为本领域技术人员所熟知以及可易于为本领域技术人员所获得的许多出处中。举例来说，由E.W.Martin所著的Remington’s Pharmaceutical Science(1995)描述可与所公开方法关联使用的制剂。一般来说，可配制本文公开的化合物以使有效量的化合物与适合载体组合以有助于有效施用化合物。所用组合物也可呈多种形式。这些形式包括例如固体、半固体和液体剂型，诸如片剂、丸剂、粉剂、液体溶液或混悬液、栓剂、可注射和可输注溶液、以及喷雾剂。优选形式取决于预定施用模式和治疗应用。组合物也优选包括为本领域技术人员所知的常规药学上可接受的载体和稀释剂。供与化合物一起使用的载体或稀释剂的实例包括乙醇、二甲亚砜、甘油、氧化铝、淀粉、盐水以及等效载体和稀释剂。为提供对所述剂量的施用以达成所需治疗性治疗，基于包括载体或稀释剂的总组合物的重量，本文公开的组合物可有利地包含约0.1重量％与99重量％，并且尤其是1重量％与15重量％之间的总体一种或多种主题化合物。
适于施用的制剂包括例如水性无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、制菌剂和致使制剂与预定接受者的血液等张的溶质；以及水性和非水性无菌混悬液，其可包括混悬剂和增稠剂。制剂可被呈现于单位剂量或多剂量容器例如密封安瓿和小瓶中，并且可以冷冻干燥(冻干)状态储存，仅需要在使用之前用无菌液体载体例如注射用水调节。即时注射溶液和混悬液可由无菌粉剂、颗粒剂、片剂等制备。应了解除以上特别提及的成分之外，考虑到所论述的制剂类型，本文公开的组合物也可包括本领域中常规的其它试剂。
可通过与细胞直接接触或通过载体手段来向所述细胞递送本文公开的化合物和包含它们的组合物。用于向细胞递送化合物和组合物的载体手段在本领域中是已知的，并且包括例如将组合物囊封在脂质体部分中。用于向细胞递送本文公开的化合物和组合物的另一手段包括使化合物连接于被靶向来向靶标细胞递送的蛋白质或核酸。美国专利号6,960,648以及美国申请公布号20030032594和20020120100公开可被偶联于另一组合物，并且使得所述组合物跨越生物膜加以易位的氨基酸序列。美国申请公布号20020035243也描述用于跨越细胞膜运送生物部分以达成细胞内递送的组合物。也可将化合物并入聚合物中，所述聚合物的实例包括用于颅内肿瘤的聚(D-L丙交酯-共-乙交酯)聚合物；以20:80摩尔比的聚[双(对羧基苯氧基)丙烷:癸二酸](如格立得(GLIADEL)中所用)；软骨素(chondroitin)；几丁质(chitin)；和壳聚糖(chitosan)。
对于治疗肿瘤病症，本文公开的化合物可与其它抗肿瘤或抗癌物质和/或与放射和/或光动力疗法和/或与用以移除肿瘤的手术治疗组合向需要治疗的患者施用。这些其它物质或治疗可与本文公开的化合物在相同时间或在不同时间给与。举例来说，本文公开的化合物可分别与有丝分裂抑制剂诸如紫杉醇(taxol)或长春花碱(vinblastine)、烷基化剂诸如环磷酰胺(cyclophosamide)或异环磷酰胺(ifosfamide)、抗代谢剂诸如5-氟尿嘧啶或羟基脲、DNA嵌入剂诸如阿霉素(adriamycin)或博莱霉素(bleomycin)、拓扑异构酶抑制剂诸如依托泊苷(etoposide)或喜树碱(camptothecin)、抗血管生成剂诸如血管抑素(angiostatin)、抗雌激素剂诸如他莫昔芬(tamoxifen)、和/或其它抗癌药物或抗体诸如像格列卫(GLEEVEC)(Novartis Pharmaceuticals Corporation)和赫赛汀(HERCEPTIN)(Genentech,Inc.)组合使用。
许多肿瘤和癌具有存在于肿瘤或癌细胞中的病毒基因组。举例来说，艾伯斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr Virus，EBV)与许多哺乳动物恶性肿瘤相关联。本文公开的化合物也可单独或与抗癌剂或抗病毒剂诸如更昔洛韦(ganciclovir)、叠氮胸苷(azidothymidine)(AZT)、拉米夫定(lamivudine)(3TC)等组合用于治疗受可导致细胞转化的病毒感染的患者，和/或治疗患有与在细胞中存在病毒基因组相关的肿瘤或癌症的患者。本文公开的化合物也可与对肿瘤疾病的基于病毒的治疗组合使用。举例来说，化合物可与突变单纯疱疹病毒一起用于治疗非小细胞肺癌(Toyoizumi等,“Combined therapy withchemotherapeutic agents and herpes simplex virus type IICP34.5 mutant(HSV-1716)in human non-small cell lung cancer,”Human Gene Therapy,1999,10(18):17)。
治疗性施加化合物和/或含有它们的组合物可通过当前或将来为本领域技术人员所知的任何适合治疗方法和技术来实现。此外，本文公开的化合物和组合物已作为起始物质或中间体用于制备其它适用的化合物和组合物。
本文公开的化合物和组合物可在一个或多个解剖部位，诸如非所要细胞生长的部位(诸如肿瘤部位或良性皮肤生长物，例如向肿瘤或皮肤生长物注射或经表面施加)处，任选与药学上可接受的载体诸如惰性稀释剂组合来局部施用。本文公开的化合物和组合物可任选与药学上可接受的载体诸如惰性稀释剂或可吸收的可食用载体(对于口服递送)组合来全身性施用，诸如静脉内或口服施用。它们可封闭在硬质或软质外壳明胶胶囊中，可压制成片剂，或可直接与患者的膳食的食物合并。对于口服治疗性施用，可使活性化合物与一种或多种赋形剂组合，并且以可摄取片剂、经颊片剂、锭剂、胶囊、酏剂、混悬液、糖浆、糯米纸囊剂、气雾喷雾剂等形式使用。
片剂、锭剂、丸剂、胶囊等也可含有以下各物：粘合剂，诸如黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，诸如磷酸二钙；崩解剂，诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸等；润滑剂，诸如硬脂酸镁；以及甜味剂，诸如蔗糖、果糖、乳糖或阿斯巴甜(aspartame)；或调味剂，诸如胡椒薄荷、冬青油，或可添加樱桃调味剂。当单位剂型是胶囊时，除以上类型的物质之外，它也可含有液体载体，诸如植物油或聚乙二醇。各种其它物质可作为包覆剂存在或可存在以另外改进固体单位剂型的实物形式。举例来说，片剂、丸剂或胶囊可用明胶、蜡、虫胶或糖等包覆。糖浆或酏剂可含有活性化合物、作为甜味剂的蔗糖或果糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、染料和调味剂，诸如樱桃或橙调味剂。当然，用于制备任何单位剂型的任何物质都应为药学上可接受的，并且在所用量下大致上无毒。此外，可将活性化合物并入持续释放制剂和装置中。
本文公开的化合物和组合物，包括其药学上可接受的盐、水合物或类似物，可通过输注或注射来在静脉内、肌肉内或腹膜内施用。可于水中制备活性剂或它的盐的溶液，任选与无毒表面活性剂混合。也可于甘油、液体聚乙二醇、三乙酸甘油酯及其混合物中以及于油中制备分散液。在一般储存和使用条件下，这些制剂可含有防腐剂以防止微生物生长。
适于注射或输注的药物剂型可包括无菌水溶液或分散液，或包含活性成分的无菌粉末，其适合于即时制备无菌可注射或可输注溶液或分散液，任选囊封在脂质体中。最终剂型在制造和储存条件下应是无菌、流动和稳定的。液体载体或媒介物可为溶剂或液体分散介质，其包括例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、无毒甘油酯及其适合的混合物。适当流动性可例如通过形成脂质体、在分散液的情况下通过维持所需粒度或通过使用表面活性剂加以维持。任选地，防止微生物作用可通过各种其它抗细菌剂和抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞(thimerosal)等来达到。在许多情况下，将优选的是包括等张剂，例如糖、缓冲剂或氯化钠。延长可注射组合物的吸收可通过包括使吸收延迟的试剂例如单硬脂酸铝和明胶来达到。
通过将本文公开的化合物和/或药剂以所需量必要时与以上列举的各种其它成分一起并入适当溶剂中，随后进行过滤灭菌来制备无菌可注射溶液。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，其产生活性成分外加存在于先前无菌过滤溶液中的任何额外所需成分的粉末。
对于经表面施用，本文公开的化合物和药剂可以液体或固体形式施加。然而，将通常合乎需要的是与皮肤学上可接受的可为固体或液体的载体组合，将它们以组合物形式经表面施用至皮肤。可将本文公开的化合物和药剂和组合物经表面施加于受试者的皮肤以降低恶性或良性生长物的尺寸(并且可包括完全移除)，或治疗感染部位。可将本文公开的化合物和药剂直接施加于生长物或感染部位。优选地，将化合物和药剂以诸如软膏剂、乳膏剂、洗剂、溶液、酊剂等的制剂形式施加于生长物或感染部位。也可使用用于向皮肤病变递送药理学物质的药物递送系统，诸如美国专利号5,167,649中所述的药物递送系统。
适用的固体载体包括精细分散固体，诸如滑石、粘土、微晶纤维素、二氧化硅、氧化铝等。适用的液体载体包括化合物可任选借助于无毒表面活性剂以有效水平溶解或分散于其中的水、醇或二醇或水-醇/二醇掺合物。可添加诸如芳香剂和额外抗微生物剂的佐剂以使用于给定用途的性质最优化。所得液体组合物可从吸收垫施加，用于浸渍绷带和其它敷料，或使用例如泵型喷雾器或气雾剂喷雾器喷雾于受影响的区域上。
诸如合成聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐和酯、脂肪醇、改性纤维素或改性矿物质的增稠剂也可与液体载体一起用于形成用于直接向使用者的皮肤施加的可涂敷糊剂、凝胶剂、软膏剂、皂剂等。可用于向皮肤递送化合物的适用的皮肤学组合物的实例公开于美国专利号4,608,392；美国专利号4,992,478；美国专利号4,559,157；和美国专利号4,820,508中。
可通过比较本文公开的化合物和药剂和药物组合物的体外活性和在动物模型中的体内活性来确定它们的适用剂量。用于将在小鼠和其它动物中的有效剂量外推至人的方法为本领域所知；例如参见美国专利号4,938,949。
也公开包含本文公开的化合物与药学上可接受的载体组合的药物组合物。包含一定量的化合物的适合于口服、经表面或胃肠外施用的药物组合物构成一优选方面。向患者，特别是人施用的剂量应足以历经合理时间范围在所述患者中实现治疗响应，而无致死性毒性，并且优选至多导致可接受的水平的副作用或发病率。本领域技术人员将认识到剂量将取决于多种因素，包括受试者的状况(健康)、受试者的体重、并行治疗的种类(如果有的话)、治疗频率、治疗比以及病理性疾患的严重性和阶段。
对于治疗肿瘤病症，本文公开的化合物和药剂和组合物可在其它抗肿瘤剂或抗癌剂或物质(例如化学治疗剂、免疫治疗剂、放射冶疗剂、细胞毒性剂等)之前、之后或与所述其它抗肿瘤剂或抗癌剂或物质和/或与放射疗法和/或与用以移除肿瘤的手术治疗组合向需要治疗的患者施用。举例来说，本文公开的化合物和药剂和组合物可用于治疗癌症的方法中，其中患者待分别用或正分别用或已分别用有丝分裂抑制剂诸如紫杉醇或长春花碱、烷基化剂诸如环磷酰胺或异环磷酰胺、抗代谢剂诸如5-氟尿嘧啶或羟基脲、DNA嵌入剂诸如阿霉素或博莱霉素、拓扑异构酶抑制剂诸如依托泊苷或喜树碱、抗血管生成剂诸如血管抑素、抗雌激素剂诸如他莫昔芬、和/或其它抗癌药物或抗体诸如像格列卫(NovartisPharmaceuticals Corporation)和赫赛汀(Genentech,Inc.)治疗。这些其它物质或放射治疗可与本文公开的化合物在相同时间或在不同时间给与。其它适合的化学治疗剂的实例包括但不限于六甲蜜胺(altretamine)、博莱霉素、硼替佐米(bortezomib)(维尔科德(VELCADE))、白消安(busulphan)、亚叶酸钙(calcium folinate)、卡培他滨(capecitabine)、卡铂(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、顺铂(cisplatin)、克拉屈滨(cladribine)、克立他酶(crisantaspase)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、阿糖胞苷(cytarabine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、更生霉素(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、多西他赛(docetaxel)、多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、依托泊苷(etoposide)、氟达拉滨(fludarabine)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、吉非替尼(gefitinib)(易瑞沙(IRESSA))、吉西他滨(gemcitabine)、羟基脲、伊达比星(idarubicin)、异环磷酰胺、伊马替尼(imatinib)(格列卫)、伊立替康(irinotecan)、脂质体多柔比星(liposomal doxorubicin)、洛莫司汀(lomustine)、美法仑(melphalan)、巯基嘌呤(mercaptopurine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、丝裂霉素(mitomycin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、奥沙利铂(oxaliplatin)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、喷司他汀(pentostatin)、丙卡巴肼(procarbazine)、雷替曲塞(raltitrexed)、链脲霉素(streptozocin)、替加氟-尿嘧啶(tegafur-uracil)、替莫唑胺(temozolomide)、噻替派(thiotepa)、硫鸟嘌呤(tioguanine/thioguanine)、拓扑替康(topotecan)、曲奥舒凡(treosulfan)、长春花碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春地辛(vindesine)、长春瑞滨(vinorelbine)。在一例示实施方案中，化学治疗剂是美法仑。适合的免疫治疗剂的实例包括但不限于阿来珠单抗(alemtuzumab)、西妥昔单抗(cetuximab)(爱必妥(ERBITUX))、吉妥单抗(gemtuzumab)、碘131托西莫单抗(iodine 131tositumomab)、利妥昔单抗(rituximab)、曲妥珠单抗(trastuzamab)(赫赛汀)。细胞毒性剂包括例如放射性同位素(例如I131、I125、Y90、P32等)，以及细菌、真菌、植物或动物来源的毒素(例如篦麻毒素(ricin)、肉毒杆菌毒素(botulinumtoxin)、炭疽毒素(anthrax toxin)、黄曲毒素(aflatoxin)、水母毒物(例如箱形水母(boxjellyfish))等)。也公开用于治疗肿瘤病症的方法，其包括在施用化学治疗剂、免疫治疗剂、放射冶疗剂或放射疗法之前、之后和/或与此组合施用有效量的本文公开的化合物和/或药剂。
试剂盒
进一步提供用于实施本发明方法的试剂盒。就“试剂盒”来说，其意指包括至少一种试剂例如表1中所述的任一化合物的任何制品(例如包装或容器)。试剂盒可以用于进行本发明方法的单元形式推销、销售或售卖。另外，试剂盒可含有描述试剂盒和它的使用方法的包装插页。任何或所有试剂盒试剂都可提供在保护它们免遭外部环境影响的容器内，诸如在密封容器或小袋中。
为提供对所述剂量的施用以达成所需治疗性治疗，在一些实施方案中，基于包括载体或稀释剂的总组合物的重量，本文公开的药物组合物可包含约0.1重量％与45重量％，并且尤其是1重量％与15重量％之间的总体一种或多种化合物。作为说明，施用的活性成分的剂量水平可为：静脉内，0.01至约20mg/kg；腹膜内，0.01至约100mg/kg；皮下，0.01至约100mg/kg；肌肉内，0.01至约100mg/kg；口服，0.01至约200mg/kg，并且优选是约1至100mg/kg；鼻内滴注，0.01至约20mg/kg；以及气雾剂，0.01至约20mg/kg动物(身体)重量。
也公开包括处于一个或多个容器中的组合物的试剂盒，所述组合物包含本文公开的化合物。所公开试剂盒可任选包括药学上可接受的载体和/或稀释剂。在一个实施方案中，试剂盒包括一种或多种如本文所述的其它组分、助剂或佐剂。在另一实施方案中，试剂盒包括一种或多种抗癌剂，诸如本文所述的那些药剂。在一个实施方案中，试剂盒包括描述如何施用所述试剂盒的化合物或组合物的说明书或包装材料。试剂盒的容器可由任何适合材料例如玻璃、塑料、金属等制成，具有任何适合尺寸、形状或构型。在一个实施方案中，本文公开的化合物和/或药剂以固体形式诸如片剂、丸剂或粉剂形式提供在试剂盒中。在另一实施方案中，本文公开的化合物和/或药剂以液体或溶液形式提供在试剂盒中。在一个实施方案中，试剂盒包括含有呈液体或溶液形式的本文公开的化合物和/或药剂的安瓿或注射器。
实施例
实施例1：分子动力学模拟
使用分子动力学建模方法，鉴定了来自第V多样性组(Diversity Set V)结构的模拟如图2中所示的IMiD与CRBN的相互作用的5种化合物。这些化合物的特征凭借TBD相互作用而保留，并且因此可代表具有充当用于合成新化学结构的先导物的潜力的新型化合物。这也提供用于进行虚拟筛选以鉴定新分子结构来建立用于物理和生物筛选的化学文库(测试包)的原理验证。实验测定这些新药与重组鼠和人CRBN相互作用的能力，以及这些化合物调节CRBN/DDB1复合蛋白与底物之间的蛋白质-蛋白质相互作用和调节在免疫活化期间的CRBN功能的潜力。
若干文库可用于筛选抑制剂。制订虚拟分析，接着进行化学测试包的理论设计和测试包的虚拟筛选。也在充分测试初始化合物之后使用DSF和FP测定完成对它们的物理结合研究。也制备代表基于虚拟化学结构从各可用化学文库鉴定的化合物的测试包。
·Lawrence ChemDiv文库 32,000种化合物
化学生物学核心文库
Figure BDA0001866541900000921
对于虚拟筛选
·NCl收集物 140,000种化合物
实验筛选
·佛罗里达转化研究计划 340,000种化合物
使用FP进行的高通量筛选允许从以上在步骤2中确定的化学文库测试直接物理相互作用。鉴定的化合物的活性可通过DSF和Biacore研究或晶体照相术来确认。这将确定一组被称为(非IMiD模拟物)的新化合物。如果结合性质可被确认，那么将需要额外研究来充分了解这些分子。
生物测定：
步骤1：将人CRBN过度表达于CRBN-/- T细胞中以测定各独特氨基酸促进与Myc、Ikaros的蛋白质相互作用的能力，以及鉴定代谢物调控中涉及的新底物。
步骤2：使用重组体开发CRBN-Cul4体外Ub测定。
步骤3：出于筛选目的在经处理细胞的情况下进行用以评估Myc和Ikaros的表达的基于细胞的分析。使用如先前所述的基于荧光素酶的表达测定来观察Myc和Ikaros的表达。使用母体IMiD化合物和构建体来显现靶向底物的荧光素酶表达降低。
步骤4：使用如步骤1-3中确定的体外泛素化测定、荧光素酶构建体测定测试化学“命中物”阻断CRBN-Cul4介导的对靶标底物的泛素化的能力。
可使用质谱测定法，在TCR刺激之后，在WT和KO T细胞的情况下以及在经IMiD处理的人T细胞的情况下进行代谢物组学研究。
结果：
显示会结合cereblon的沙利度胺结合结构域(TBD)的化合物的特定实例描述于表1中。关于相对于WT T细胞，在CRBN-/- T细胞活化之后存在的经差异性调控的转录物的数据已揭示新型靶标和由Ikaros和Myc诱导的代谢功能变化介导的潜在免疫调节机理。正常T细胞代谢涉及灵活利用代谢物以适应细胞在体内平衡和活化期间的能量需求。在原初细胞中，葡萄糖使用是较低的，但在活化之后得以显著增加以满足细胞高能量需求。CD28刺激对诱导糖酵解和刺激葡萄糖转运体至关重要。抑制CRBN可调节这个路径，从而允许在活化期间更大利用葡萄糖/谷氨酰胺。
表1：化合物的生物活性
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讨论：已显示在T细胞活化期间，cereblon以时间调控方式抑制IKZF1和IKZF3的较低分子量亚型的表达。在活化之后在crbn-/- T细胞中对IKZF的这个调控指示cereblon可涉及于它的调控中，并且它是CRBN/Cul4A/Rbx1 E3泛素连接酶复合物的天然底物。这个数据表明cereblon底物可具有非典型结果。使用遗传方法得到的这个数据与crbn抑制会导致T细胞的已长久与IMiD相关联的功能性增强的理念一致。从Fischer等人的文献改编的当前模型显示于图1中。数据带来化合物的暴露于溶剂的部分在募集IKZF1和IKZF3方面的作用的问题。这支持以下假设：基于结合基序的新抑制剂可产生关于CRBN抑制可具有差异性选择性和/或效能的新类别。为阐明这个理念，使用已知晶体结构进行分子动力学模拟。对于在这个模型中测试的所有三个物种的CRBN，观察到关于沙利度胺结合结构域(TBD)的序列类似性。使用这些结构，进行了显示在人和鼠cereblon TBD的情况下由三种IMiD采用的类似结合模式的分子动力学和诱导契合对接(图2)，并且为高通量虚拟筛选以测试将契合至CRBN的高度稳定的固定结合口袋中的新型化学物质做好准备。
实施例2：小鼠和人cereblon的保守配体结合和泛素缀合活性
在这个实施例中，基于蛋白水解靶向性嵌合体(PROTAC)技术，设计诸如dBET1的小分子以使含布罗莫结构域(bromodomain)蛋白4(BRD4)降解。这些分子含有啮合特定蛋白质，并且靶向它们以达成由蛋白体降解的双功能性头部基团。dBET1利用沙利度胺与作为DDB1/Cul4/Rbx1复合物的E3泛素连接酶受体的cereblon(CRBN)之间的相互作用。然而，在沙利度胺和包括来那度胺和泊马度胺的其它免疫调节性药物使CRBN底物降解的能力方面存在已知人相对于小鼠的特异性差异。为进一步评估CRBN的物种相关的结构差异，使用一系列重组沙利度胺结合结构域(TBD)蛋白、重组CRBN-DDB1复合物和化学探针进行互补性理论、生物物理和生物测定。此处，相较于CRBN-DDB1复合物，鉴定了来那度胺对TBD的结合亲和力较低，并且可能其它免疫调节性药物也是这样，此似乎由通过N末端残基稳定的无序环(351-353)介导。然而，CRBN与免疫调节性药物和PROTAC小分子的结合不由于小鼠CRBN中的氨基酸差异而受损，从而表明不存在将被预测会影响功能的构象变化。使用dBET1、结构相关的非活性对照化合物和CRBN遗传缺陷性(Crbn-/-)T细胞，显示小鼠CRBN成功引导对BRD4的蛋白质破坏。根据这些跨物种结构-功能分析，确认了通过小鼠CRBN达成的底物结合功能和配体诱导的泛素-蛋白酶体靶向，此为在癌症的情况下临床前开发PROTAC治疗剂铺平道路。
材料和方法
动物和细胞系：种系Crbn缺陷性小鼠Crbn-/-)由Anjali Rajadhyaksha博士(12)赠与。使用如先前所述的野生型和Crbn-KO特异性引物确认基因缺失。C57BL/6(Crbn+/+)小鼠购自Jackson Laboratory(Farmington,CT)，并且接着使其与Crbn-/-小鼠交配。来自Crbn+/-杂交的Crbn+/+和Crbn-/-同窝仔畜用于这些研究。根据由机构动物护理和使用委员会(IACUC)核准的方案，使小鼠在H.Lee Moffitt癌症中心和研究所维持和交配。包括U266、H929、MM1.S的人多发性骨髓瘤细胞和小鼠多发性骨髓瘤细胞系5TGM1由Ken Shain博士和Connor Lynch博士(Moffitt Cancer Center,Tampa,FL)赠与。所有细胞系都不含支原体，并且经序列验证。
T细胞分离、活化和药物处理：人多克隆CD3+ T细胞或CD8+ T细胞从向SouthwestFlorida Blood Services的外周血液捐献物分离。因为个人识别信息不可用，所以研究被视为非人研究。通过免疫磁性负性选择(Miltenyi Biotec,San Diego,CA)来从Crbn+/+和Crbn-/-脾细胞分离人和小鼠T细胞，并且通过流式细胞术确认>95％纯度。对于药物处理实验，将12孔平底板在37℃下用处于1L PBS中的5μg/ml CD3ε抗体(克隆号HIT3a，eBioscience，或克隆号145-2C11)涂布60分钟。将细胞以每孔2-4x106个细胞与CD28抗体(克隆号CD28.2，eBioscience，或克隆号37.51，eBioscience)一起涂铺。在活化12小时之后，将细胞用DMSO(0.1％，Sigma-Aldrich,MO)、来那度胺(10μM)(Celgene,NJ)、泊马度胺(Sigma-Aldrich)和JQ1(指示剂量)(目录号SML0974，Sigma-Aldrich)处理。N-甲基-来那度胺、dBET1和N-甲基-dBET1全都在Moffitt癌症中心合成(描述于补充材料中)，并且在指示剂量下使用。在药物处理12小时之后，收集细胞，并且通过western印迹分析来考查蛋白质水平。对于使用小鼠T细胞进行的增殖实验，将0.1-10μg/mL CD3ε抗体(克隆号145-2C11，eBioscience)与和以及未和CD28抗体一起涂铺的细胞一起使用72小时。对于细胞因子表达，在24或48小时收集上清液以进行IL-2测定。根据制造商方案，通过酶联免疫吸附测定(ELISA)，由标准曲线对细胞因子定量。试剂盒购自eBioscience(IL-2)和R&D Systems(对于其它细胞因子)。对于用JQ1处理的T细胞的功能性分析，将来自Crbn+/+脾细胞的鼠CD8+ T细胞用5-10μM CellTrace Violet(C34557，ThermoFisher)标记，并且在圆底96孔板中用5μg/mL CD3ε抗体和1μg/mL抗CD28活化72小时。将细胞用CD98-PE(克隆号RL388，Biolegend)和7-AAD(BD Pharmingen)染色，并且在BD LSRII上分析。
qRT-PCR：使从Crbn+/+和Crbn-/-小鼠分离的T细胞溶解，均质化(Qiashredder,Qiagen)，并且根据制造商方案提取总RNA(RNeasy,Qiagen)。从经分离RNA产生互补性DNA(iScript cDNA合成试剂盒，Bio-Rad)。对于针对(cDNA)c-Myc(Mm00487804_m1)和(cDNA)β2M(Mm00437762_m1)的Taqman探针(Thermo Fischer Scientific)，使用Taqman通用PCR主混合物，通过定量实时聚合酶链式反应(qRT-PCR)来分析RNA表达。在Applied Biosystems7900 HT上操作样品，并且使用序列检测系统软件。
处理多发性骨髓瘤细胞：将小鼠和人多发性骨髓瘤细胞系以每孔2-4x 106个细胞与各种浓度的来那度胺、泊马度胺和沙利度胺一起涂铺在12孔板中。为确认靶标降解，将细胞用不同浓度的dBET1(0、0.01、0.1、1和10μM)处理12-24小时。在药物处理之后，相对于用以使蛋白质表达标准化的粘着斑蛋白或β-肌动蛋白，通过western印迹分析来考查蛋白质水平。对于增殖研究，将每孔1-2x 104个细胞接种在96孔板中，并且根据制造商方案，使用细胞计数8试剂盒(CCK8)(Dojindo,Rockville,MD)进行处理。
一般性化学信息：所有试剂都购自商业供应商，并且不经进一步纯化即使用(除当另外提及时之外)。在Agilent-Varian Mercury 400MHz波谱仪上记录1H NMR波谱，以DMSO-d6作为溶剂。所有偶合常数都以赫兹(Hertz)计量，并且化学位移(δH)相对于用作内部标准物的TMS(δ0)，以百万分率引述。在Agilent 6210 LC-MS(ESI-TOF)系统上进行高分辨率质谱分析法。利用Alltech Kromasil C-18柱(150×4.6mm，5μm)和Agilent Eclipse XDB-C18柱(150×4.6mm，5μm)，使用配备有PU-2089Plus四元梯度泵和UV-2075 Plus UV-Vis检测器的JASCO HPLC系统进行HPLC分析。如通过HPLC所测量，用于生物化学和功能性研究的最终化合物的纯度是>95％。在Optimelt自动熔点系统(Stanford Research Systems)上记录熔点。使用硅胶60F254板(Fisher Scientific)进行薄层色谱法，必要时在紫外线下进行观察。无水二甲基甲酰胺按照从Sigma Aldrich购买时原样使用。Burdick and Jackson HPLC级溶剂购自VWR以进行HPLC、HPLC-MS和高分辨率质量分析。dBET1(HPLC纯度98％)如所描述(5)从JQ1制备。以下提供N-甲基-来那度胺和N-甲基-dBET1的详细理论计算和合成。
克隆、蛋白质表达和纯化：与DNA损害结合蛋白(DDB1)复合的全长hCRBN蛋白由Celgene Corporation(San Diego,CA)慷慨赠与。以下提供人TBD的蛋白质表达的细节。
锌试剂(Zincon)测定：这个测定中使用的所有化学物质都购自Sigma-Aldrich。测定从先前公开的方法(13)改编。采用含有4M NaCl以及8M尿素和40μM锌试剂(2-羧基-2'-羟基-5'-磺基苯瓒基苯)染料的50mM硼酸盐缓冲液(pH 9.0)制作锌浓度标准曲线。纯化蛋白质用300mM HCl酸化以有助于释放结合于蛋白质的锌离子。通过离心来使蛋白质多肽从水溶性层分离。接着将溶液外加以10-20μM硫酸锌。记录在400-750nm之间的吸收光谱。分别在480nm和620-630nm下测量游离锌试剂和锌试剂-Zn络合物的λmax。不同锌浓度的在630nm下的吸光度用于产生线性回归曲线。基于线性回归曲线外推含锌蛋白质的浓度。
等温滴定量热法(ITC)：用MicroCal iTC200滴定量热计(Malvern,Westborough,MA)分析CRBN-DDB1复合物以及CRBN-TBD野生型和突变变体与来那度胺、泊马度胺和沙利度胺的结合。化合物邻苯二甲酰亚胺用作阴性对照。将蛋白质再缓冲至结合缓冲液[50mMHEPES(pH 7.5，Sigma-Aldrich)、200mM NaCl、0.1mM TCEP和0.6％DMSO]中。对于蛋白质构建体的滴定，在25℃下将总计19个(等分试样(各自2.05μl)的相应化合物(约600μM)注射至200μl的蛋白质溶液(40μM)中。在1000rpm下不断搅拌ITC细胞混合物，并且在低反馈下在注射之间持续160秒加以记录。使用非线性最小二乘曲线拟合算法(Microcal Origin 7.0，OriginLab,Northampton,MA)拟合经校正热值以获得结合常数(KD)。
固有色氨酸荧光测定：使用改编的先前公开方法(14)，通过荧光光谱法来监测化合物与野生型和突变TBD的结合。除非另外陈述，否则这个测定中使用的所有化学物质都购自Sigma-Aldrich。在这个测定中，发射光谱变化由这些化合物与结合位点中的3个Trp残基(Trp380、Trp386和Trp400)的相互作用诱导(15,16)。使TBD蛋白(最终浓度，10μM)与不同最终浓度(0-750μM)的化合物一起在黑色96孔半区域板(Corning,Corning,NY)中在测定缓冲液(50mM Tris，pH7.5，200mM NaCl、0.1％普洛尼克-F127(Pluronic-F127)和1mM TCEP)中孵育以达到40μl的最终体积。0.5％最终DMSO浓度用于各孔中。在280nm下激发样品，并且使用Wallac Envision 2102多标记板读取器(Perkin Elmer,Waltham,MA)在340nm下测量荧光发射强度。所有测量都一式三份进行，并且关于待减去的内滤效应加以校正以获得配体相关的荧光，如所描述(17)。测量荧光差异的量值(1-F/F0)，其中F是在给定配体浓度下的荧光发射；F0是单独10μM TBD蛋白的固有荧光强度。通过使用GraphPad Prism软件(GraphPad Software,La Jolla,CA)，将在340nm下的固有荧光的相对变化(1-F/F0)相对于配体浓度，关于采用单位点结合双曲线的非线性回归进行拟合来计算绘图和曲线拟合以获得表观解离常数(KD)值。
分子动力学
用于理论建模的蛋白质制备：使用Schrodinger套装软件(Maestro，9.7版，
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LLC,New York,NY,2014)进行人cereblon(hCRBN，PDB 4TZ4)(1)、鼠cereblon(mCRBN，PDB 4TZC和4TZU)(1)和鸡cereblon(gCRBN，PDB 4CI1、4CI2和4CI3)(2)的蛋白质系统的制备。从蛋白质数据库(Protein Data Bank，PDB)下载蛋白质结构坐标(3,4)，并且用Maestro中的蛋白质制备向导程序(PrepWizard)(
Figure BDA0001866541900001112
Suite 2014-1 ProteinPreparation Wizard；Epik 2.7版,
Figure BDA0001866541900001113
LLC,New York,NY,2013；Impact 6.2版,
Figure BDA0001866541900001114
LLC,New York,NY,2014；Prime 3.5版,
Figure BDA0001866541900001115
LLC,New York,NY,2014)(5)进行制备。指定键序，包括二硫桥，并且在质子化和氢键优化之前去除原始氢并稍后进行替换以降低不良接触和其它晶体假象。使用Prime(3.5版)(6,7)，添加缺失侧链并加以优化。接着去除结晶中使用的辅因子(诸如硫酸根或磷酸根离子)、配体和额外蛋白质二聚体。所有水都保留以有助于确定侧链质子化状态和初始氢键优化。接着将氢原子添加至蛋白质、其余辅因子和任何添加的结构水中。程序PROPKA(8)用于预测在7.4pH下的蛋白质离子化状态，并且ProtAssign用于氢键优化。在自动氢指定之后，目视检查在适当时用于在蛋白质-蛋白质界面处翻转残基和改变质子化状态。特定关注被假设为中性的His残基的互变异构状态，并且考虑潜在金属连接和氢键合相互作用。对于各系统，保持H378的Nδ氮处于质子化。这个研究中使用的6个CRBN结晶结构中的4个似乎显示H378δ氮与配体的羰基氧配位。这断定了氢键的假设，并且H378δ氮因此必须被质子化(9,10)。在模拟之前和之后的PROPKA分析也确认这个假设。因此，所有MD系统都用如被质子化的中性H378δ氮产生。接着移除离异质(HET)基团超过
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的所有水。
分子动力学：hCRBN和gCRBN与DNA损害结合蛋白1(DDB1)共结晶，而mCRBN是截短的(相较于hCRBN和gCRBN的380个确定残基，mCRBN具有108个确定残基)，并且呈单体形式(即不与DDB1复合)。DDB1被包括在hCRBN和gCRBN的模拟中。hCRBN的沙利度胺结合结构域和mCRBN的沙利度胺结合结构域相差仅3个残基。因此，为进一步增加取样和确定对这些残基的任何结构依赖性，使平衡代表性结构的原始hCRBN序列突变成具有以下突变即C366S、E377V和V388I的mCRBN序列以形成hCRBN至mCRBN突变体(hmCRBN)。也从hCRBN代表性结构构建在H378残基上具有质子化Nε氮的另一系统(hCRBN-pNε)以进行比较和提供对H378的质子化状态的理解。在蛋白质细化之后，构建总计5个蛋白质系统(hCRBN、hCRBN-pNε、mCRBN、gCRBN和hmCRBN)以进行MD模拟。
用Desmond MD程序(Desmond Molecular Dynamics System,3版)(11,12)进行MD模拟。对从蛋白质延伸至少
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的立方模拟框施加周期边界条件。模拟框接着用通过引入钠离子来加以电中和的TIP3P水(13)溶合，并且将OPLS-2005全原子力场(14,15)施加于所有原子(16)，用于约束系统中的所有键，并且采用积分时间步长是2fs的参照系统传播算子算法(RESPA)(17)。使用粒子网格埃瓦尔德(Particle Mesh Ewald，PME)算法(18)，在
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的真实空间截断值下计算长程静电学。
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的截断值用于范德华(van der Waals)相互作用。使用马蒂纳-塔克曼-托拜厄斯-克莱因(Martyna-Tuckerman-Tobias-Klein，MTTK))恒压器(19,20)，在1atm的恒定压力和310K的温度下，利用洛斯-胡佛(Nose-Hoover)温度耦合流程(21)，在NPT系综中模拟系统。
所有系统都在平衡和最终模拟之前依次用截断牛顿共轭梯度(TNCG)方法(22)和多重约束极小化以使系统随机化来达成能量最小化。对于用贝伦德森(Berendsen)恒温器(23)在10K下进行的初始12psNVT系综模拟，在加热期间，使蛋白质的重原子保持固定。这继之以在1atm下在NPT系综中在10K下模拟12ps，以及在310K下模拟24ps。接着在310K和1atm下进行无约束平衡MD 24ps。最后，持续100ns对hCRBN和mCRBN系统进行无约束产生MD。归因于在hCRBN的情况下观察到的稳定性、它与gCRBN的密切类似性，以及因为hCRBN-pNε系统源于平衡hCRBN系统，所以仅对gCRBN和hCRBN-pNε系统操作50ns。每2ps记录能量，并且每5ps记录轨迹帧。
最终系统平衡通过观察势能的渐近特性、均方根偏差(RMSD)和回转半径(Rg)概况以及目视检查由均方根波动(RMSF)概况引导的轨迹来确定。
诱导契合对接：在确定平衡之后，基于RMSD的分层平均联接聚类方法用于确定各平衡系统的平均代表性结构。接着对平衡结构再次执行程序PROPKA以测试在7.4pH下侧链质子化状态的一致性。这些代表性结构接着用于在
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套装软件(24,25)中用诱导契合对接(IFD)方法对接。IFD方法并有用以考虑配体柔性的对接程序Glide(26,27)与Prime程序中的用以考虑受体柔性的Refinement模块两者。
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IFD方案试图由归因于配体结合的结合位点构象改变来对诱导契合效应建模以使结合亲和力估计和可能结合模式预测的准确性增加。
作为对用于对接研究中的格点的放置以及对结合腔的进一步分析的检查，采用
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的SiteMap程序(28,29)(SiteMap,3.0版,
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LLC,New York,NY,2014)。SiteMap搜索蛋白质结构的可能结合位点，并且突出显示结合位点内的适于由疏水性基团、氢键供体、接受体或配体的金属结合官能基占据的区域。
使用程序LigPrep(LigPrep,2.9版,
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LLC,New York,NY,2014)制备配体沙利度胺、泊马度胺和来那度胺，并且将OPLS-2005全原子力场施加于所有配体原子。立方对接格点的位置集中于原始共结晶配体质心，并且给与
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的尺寸。用
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的RMSD截断值对受体进行约束极小化。接着用标准精度(SP)模式对配体组执行初始软化潜在Glide对接，并且将0.5的范德华标度因子施加于受体和配体的非极性原子。配体的所得前20名姿态用于通过构象搜索和使在所得所有复合物的任何配体姿态的
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内的结合口袋残基极少化来对蛋白质塑性取样。接着使用与最佳评分结构相差在30kcal/mol内的复合物再进行新受体构象对接。将这个步骤的Glide对接参数重置成默认硬势函数，使用1.0的范德华标度和SP模式。
各复合物的估计结合亲和力以GlideScore报道，并且用于比较各配体之间的差异，而Emodel评分用于对配体的姿态进行相互比较。Emodel更加注重加权力场分量(静电和范德华能量)，从而与比较化学不同的物质相对比，使得它更好用于比较构象异构体。
理论计算
确定MD系统的平衡：通过观察势能的渐近特性、RMSD和Rg概况以及目视检查由RMSF概况引导的轨迹来确定最终系统平衡。
hCRBN模型系统的平衡：与DDB1复合的hCRBN的RMSD概况似乎显示在约25ns之后平衡，平衡区域的平均RMSD(图8A)是
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相较于
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的结晶结构分辨率，系统RMSD略微在报道的PDB X射线衍射分辨率的误差外部。然而，与已知结合位点相关的hCRBN残基(即残基N335至A421以及排除DDB1)的RMSD概况显示显著刚性，尽管整个hCRBN链的RMSD图描绘了最小渐近特性。使用RMSF概况(图8I)进行的进一步探究发现许多位移可归因于暴露于溶剂的N末端尾部区域以及来自DDB1链。在无尾部区域下的RMSD概况确实显示渐近特性，并且结合位点结构据信对于模拟的长度是有效的。以类似趋势，Rg概况(图8E)似乎不显示hCRBN/DDB1复合物的平衡特性，但确实显示单独hCRBN的在约17ns之后的明确渐近特性。势能图(图8M)也显示在约30ns之后的渐近特性。根据这个数据，使用最后70ns的模拟对hCRBN进行所有构造、分析和统计，并且出于这个研究的目的，hCRBN的蛋白质模型的稳定性和准确性被视为与原始晶体结构(PDB 4TZ4)相当。
mCRBN模型系统的平衡：mCRBN系统似乎不能够达到平衡。约
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的平均RMSD(图8B)完全在报道的
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的结晶结构分辨率的外部。mCRBN模拟的Rg概况(图8F)和势能图(图8N)不显示渐近特性。RMSF概况(图8J)和目视检查揭示在蛋白质的截短区域附近的残基的展开事件，其是对平均RMSD的主要影响因素。然而，在38ns之后，离开配体
Figure BDA0001866541900001153
的邻近残基似乎是稳定的，并且可能够用于受限定性分析。然而，鉴于提供的证据，这个模型不适用于进一步建模，并且分析应以怀疑方式考虑。使用最后62ns的模拟对mCRBN进行所有构造、分析和统计。
gCRBN模型系统的平衡：与DDB1复合的gCRBN的RMSD概况似乎显示在约32ns之后平衡，平衡区域的平均RMSD(图8C)是
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相较于
Figure BDA0001866541900001155
的结晶结构分辨率，系统RMSD在报道的PDBX射线衍射分辨率的误差外部。然而，以与hCRBN类似的趋势，与已知结合位点相关的gCRBN残基(即残基N335至A421以及排除DDB1)的RMSD概况显示显著刚性，尽管整个gCRBN链的RMSD图描绘了最小渐近特性。使用RMSF概况(图8K)进行的进一步探究发现，再次与hCRBN类似，许多位移可归因于暴露于溶剂的N末端尾部区域以及来自DDB1链。在无尾部区域下的RMSD概况确实显示渐近特性，并且结合位点结构据信对于模拟的长度是有效的。Rg概况(图8G)似乎不显示gCRBN/DDB1复合物的平衡特性，但确实显示单独gCRBN的在约22ns之后的明确渐近特性。尽管势能图(图8O)显示一定连续倾斜，但最小拟合斜率的误差确实涵盖在7ns之后的零梯度。根据这个数据，使用最后27ns的模拟对gCRBN进行所有构造、分析和统计，并且出于这个研究的目的，蛋白质模型的就与gCRBN的已知结合位点相关的残基来说的稳定性和准确性被视为与原始晶体结构(PDB 4CI2)相当。
hmCRBN模型系统的平衡：根据与DDB1复合的hmCRBN的RMSD概况，可安全地假定在40ns之后平衡，平衡区域的平均RMSD(图8D)是
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相较于
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的结晶结构分辨率，并且对祖先hCRBN系统计算的平均RMSD是
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hmCRBN平均系统RMSD完全在误差内。此外，与已知结合位点相关的hmCRBN残基(即残基N335至A421以及排除DDB1)的RMSD概况也显示显著刚性，这与原始hCRBN系统相汇合。对RMSF概况(图8L)的进一步探究发现，再次类似于hCRBN系统，许多位移可归因于暴露于溶剂的N末端尾部区域以及来自DDB1链。Rg概况(图8H)似乎不提出对抗平衡的任何证据，并且表明完全类似于hCRBN系统的波动。势能图(图8P)也显示在约30ns之后的渐近特性。根据这个数据，使用最后60ns的模拟对hCRBN进行所有构造、分析和统计，并且出于这个研究的目的，hCRBN的蛋白质模型的稳定性和准确性被视为与原始晶体结构(PDB 4CI2)相当。
H378质子化状态的确定：确定蛋白质侧链的质子化状态是固有困难的过程。结晶分辨率很少足以解析个别氢原子，并且用于测定NMR偶合常数的当前方法不适用于大型蛋白质(9)。这导致需要间接证据来统计表征某些侧链的离子化状态。氢键合分析是推断质子化状态的惯例(30)。然而，氢键的确定不是主要败于最佳实践的明确确定参数。对于这个研究，我们使用供体-接受体距离小于3.5A和3点角大于90度的量度来定量氢键(31)。对于这个研究，由于残基H378涉及于所怀疑的IMiD结合基序中，所以必须对它进行仔细关注。这个研究中使用的6个CRBN结晶结构中的4个似乎显示H378δ氮与配体的羰基氧配位。这断定了氢键的假设，并且H378δ氮因此必须被质子化。不幸的是，研究已显示报道的结构未必描绘最稳定异构体或统计加权互变异构状态(30,32)。为进一步获得对这个问题的理解，对使用来自平衡hCRBN系统的代表性结构的单独系统进行操作以质询这个特定残基的替代性质子化状态。在模拟之前和之后的PROPKA分析也确认质子化H378δ氮的假设。因此，所有MD系统都用如被质子化的中性H378δ氮产生。
详细化学方法
合成(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1)：
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在密封管中在THF(1mL)中混合来那度胺(259mg，1mmol)和Boc2O(218mg，1.1mmol)，并且在60℃下搅拌过夜。次日，添加Boc2O(110mg，0.5当量)、THF(1mL)和DMF(0.5mL)，并且将溶液在120℃下再搅拌过夜。添加水(20mL)，并且对混合物进行声波处理。过滤沉淀，用水(10mL)洗涤，并且干燥。所得固体使用EtOH/EtOAc/己烷湿磨，并且过滤以产生呈灰白色固体状的所需产物(258mg，72％)。Mp:196–198℃。HPLC–MS(ESI+):m/z 741.3[(100％,2M+Na)+],719.4[(40％,2M+H)+],360.2[(90％,M+H)+]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.00(s,1H),9.21(s,1H),7.74(dd,J＝6.8,1.7Hz,1H),7.49–7.39(m,2H),5.10(dd,J＝13.3,4.7Hz,1H),4.41(d,J＝17.6Hz,1H),4.32(d,J＝17.6Hz,1H),2.95–2.83(m,1H),2.64–2.54(m,1H),2.40–2.26(m,1H),2.05–1.95(m,1H),1.46(s,9H)。先前报道了化合物1[1]。
(2-(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基甲酸叔丁酯(2)：在室温下在氩气下向1(100mg，0.278mmol)和K2CO3(38mg，0.278mmol)于DMF(0.8mL)中的混合物中逐滴添加碘代甲烷(0.017mL，0.278mmol)。将混合物搅拌过夜。添加水(10mL)，并且用EtOAc(2×20mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，过滤，并且在减压下浓缩。所得黄色油状物通过快速色谱法(SiO2)纯化，用含己烷的EtOAc(80％至100％)洗脱以提供呈白色固体状的标题化合物(40.37mg，39％)。Mp:192℃(摄氏度)。HPLC–MS(ESI+):m/z 741.3[(100％,2M+Na)+],719.4[(40％,2M+H)+],360.2[(90％,M+H)+]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.20(s,1H),7.73(dd,J＝6.5,2.3Hz,1H),7.49–7.41(m,2H),5.16(dd,J＝13.4,5.1Hz,1H),4.42(d,J＝17.6Hz,1H),4.30(d,J＝17.6Hz,1H),3.02–2.90(m,1H),2.99(s,3H),2.80–2.71(m,1H),2.40–2.27(m,1H),2.07–1.97(m,1H),1.46(s,9H)。
3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-1-甲基哌啶-2,6-二酮(3或N1-甲基-来那度胺)：在室温下在含4M HCl的二噁烷(0.5mL)中搅拌2(35mg，0.093mmol)3.5小时。在减压下浓缩白色混悬液，并且所得固体在DCM/己烷中湿磨，用EtOAc和己烷(各自10mL)洗涤，并且干燥以提供呈淡黄色薄片状的标题化合物(21.81mg，75％)。Mp:207℃(摄氏度)。HPLC:99％[tR＝11.6分钟,10％MeOH,90％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.29(t,J＝7.5Hz,1H),7.11(d,J＝7.5Hz,1H),6.99(d,J＝7.5Hz,1H),5.17(dd,J＝13.4,4.7Hz,1H),5.20–4.80(br s,2H,在D2O振荡的情况下消失),4.28(d,J＝17.0Hz,1H),4.17(d,J＝17.0Hz,1H),3.05–2.91(m,1H),2.99(s,3H),2.80–2.70(m,1H),2.39–2.25(m,1H),2.08–1.97(m,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 569.2[(30％,2M+Na)+],274.2[(100％,M+H)+]。LC–MS(ESI+):569.2[40％,(2M+Na)+],296.1[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C14H15N3O3的计算值：(M+H)+274.1186，实测值：274.1176。
WT和突变CRBN的详细蛋白质产生：由
Figure BDA0001866541900001191
Gene Synt hesis合成编码人TBD(aa 317-425)的基因，并且亚克隆至pGEX-6P-1载体的BamHI-NotI限制位点中。对基因进行工程改造以具有利用偏好的大肠杆菌(E.coli)密码子的沉默突变。使用聚合酶链式反应进行TBD E377V、V388I、H378A和W380A突变。所用引物分别是5'-CCAGTCTGTGTTGTAAACAGAGCCAAGAAACC-3'(SEQ ID NO.:1)和5'-GGTTTCTTGGCTCTGTTTACAACACAGACTGG-3'(SEQ ID NO.:2)；5'-GGTTATGCATGGACCATCGCACAGTGTAAAATTTGTGC-3'(SEQ ID NO.:3)和5'-GCACAAATTTTACACTGTGCGATGGTCCATGCATAAC-3'(SEQ ID NO.:4)，5'-CGTCCGAGCACCGAAGCAAGCTGGTTTCCGGGTTATGC-3'(SEQ ID NO.:5)和5'-GCATAACCCGGAAACCAGCTTGCTTCGGTGCTCGGACG-3'(SEQID NO.:6)；以及5'-CGAGCACCGAACATAGCGCGTTTCCGGGTTATGCATGG-3'(SEQ ID NO.:7)和5'-CCATGCATAACCCGGAAACGCGCTATGTTCGGTGCTCG-3'(SEQ ID NO.:8)。通过测序来确认突变。将重组DNA质粒转化至大肠杆菌RosettaTM 2(DE3)pLysS感受态细胞(EMD Millipore,Billerica,MA)中以进行后续蛋白质表达。如下表达和纯化连接有PreScission蛋白酶蛋白水解位点的GST标记的TBD蛋白：在37℃下在5mL含有100μg/mL氨苄青霉素(Sigma-Aldrich)的鲁里亚-贝塔尼(Luria-Bertani，LB；Thermo Fisher Scientific)培养基中培养经新鲜转化细胞的单一菌落16小时。1mL培养物接着用于在37℃下接种25mL具有100μg/mL氨苄青霉素的极品肉汤-磷酸盐培养基(Terrific Broth，TB；Thermo Fisher Scientific)16小时。接着将培养物转移至1.5L补充有50μM ZnCl2(Sigma-Aldrich)的TB培养基中。在250rpm下在连续振荡下孵育所得培养物直至0.70的OD600，接着用异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG；0.5mM最终浓度；Thermo Fisher Scientific)诱导。在16℃下培养细胞20小时，并且通过在6000rpm下离心30分钟来收集。通过在50mM Tris(pH 8.0；Sigma-Aldrich)、500mMNaCl(Thermo Fisher Scientific)、1mM TCEP(Sigma-Aldrich)、0.1％曲通X-100(TritonX-100)(Sigma-Aldrich)、10μM ZnCl2(Acros Organics,Thermo Fisher Scientific)和蛋白酶抑制剂混合物(Roche)中进行声波处理来使细胞溶解。接着通过在AKTA Explorer或AKTA Purifier(GE Healthcare Life Sciences)上使用谷胱甘肽-琼脂糖基质(GEHealthcare Life Sciences,Pittsburgh,PA)进行亲和色谱法来纯化蛋白质，用50mM Tris(pH 8.0)、500mM NaCl、1mM TCEP和10μM ZnCl2预平衡，并且用添加有10mM还原谷胱甘肽(Sigma-Aldrich)的相同缓冲液洗脱。通过SDS-PAGE来测定不同级分中的蛋白质的纯度，并且将最佳级分汇合。通过在4℃下用PreScission蛋白酶消化4小时来从汇合GST-TBD级分裂解GST。通过第二轮GST亲和色谱法来从所得消化物移除GST。蛋白质进一步通过尺寸排阻色谱法在Superdex 75柱(GE Healthcare Life Sciences)中纯化。将纯度>90％的级分汇合，通过超滤(10K Amicon管，EMD Millipore)来浓缩，并且在-80℃下储存。
结果
小鼠细胞对免疫调节性化合物的功能性抗性。免疫调节性药物诱导的经泛素介导的对IKZF1和IKZF3的降解(11)似乎足以在不存在CD28抗体共刺激下(19-24)加强T细胞活性以使IL-2产生增加(18)。相对于DMSO(媒介物)处理的细胞，在来那度胺处理的用抗CD3ε抗体刺激以交联T细胞受体(TCR)和诱导细胞内信号转导的人T细胞中，IL2 mRNA(图4A)和蛋白质(图4B)的水平(24,25)显著增加。比较用媒介物或10μM来那度胺预处理的纯化人T细胞(图3A、图3B)和小鼠T细胞(图3C、图3D)，当使用在0.01–10μM的范围内的剂量的CD3ε抗体，用或不用抗CD28抗体刺激时，仅人T细胞显示预期来那度胺诱导的IL-2增加(图3C-图3D和图4C-图4D)。此外，如根据在多发性骨髓瘤细胞系的情况下进行的先前结构和功能性研究所预测，相较于在人细胞中几乎完全消减，在小鼠T细胞中，在用来那度胺处理之后，IKZF1未受影响(图3E)(10,11)。
基于CRBN表达水平，沙利度胺、来那度胺和泊马度胺的抗增殖作用据报道有差异(26-28)。人多发性骨髓瘤细胞系U266、H929、MM1.S和OPM2在它们的CRBN水平方面不同(图5A)，但全都显示对免疫调节性化合物的时间依赖性敏感性，其中泊马度胺和来那度胺的IC50剂量分别是0.05至0.61μM和7.00至16.04μM(图5B-图5E、图6)。相比之下，尽管CRBN在与人MM1.S骨髓瘤类似的水平下表达，但小鼠多发性骨髓瘤细胞系5TGM1对免疫调节性化合物的抑制作用具有高度抗性(图5F)(也参见图14)。在用这4种细胞系进行的生长抑制测定中，沙利度胺不具有抑制作用，即使在多达200μM的剂量下(图5E、图5F，并且数据未显示)。
CRBN的沙利度胺结合结构域具有保守免疫调节性化合物结合基序。基于晶体结构，免疫调节性化合物结合沙利度胺结合结构域(TBD)内的位于CRBN的C末端的保守口袋(图7A)(15,16)。这些相互作用受氢键合、芳族四极和范德华(VDW)相互作用支配。对分别与沙利度胺、来那度胺和泊马度胺复合的CRBN[人(hCRBN)、小鼠(mCRBN)和鸡(gCRBN)]的X射线晶体结构(图7A)的分析显示抑制剂姿态之间的均方根偏差(RMSD)的可忽略变化。因此，进行对与CRBN复合的免疫调节性化合物的分子结合机制的深入理论探究以探索小鼠CRBN与人CRBN之间的由诱导契合、蛋白质柔性或晶体假象引起的可能的药物相互作用差异。
对于分子动力学(MD)，使用与DNA损害结合蛋白1(DDB1)复合的hCRBN(PDB 4TZ4)(15)和gCRBN(PDB 4TZC和4TZU)(15)的晶体结构的模拟。mCRBN的晶体结构(PDB 4CI1、4CI2和4CI3)(16)呈单体形式，并且是截短的以仅含有TBD(相较于hCRBN和gCRBN的380个确定残基，具有108个确定残基)，并且不适于计算建模。小鼠CRBN中的物种特异性氨基酸差异包括C366S、E377V和V388I。因此，为进一步增加取样和确定对这些残基的任何结构依赖性，使平衡代表性结构的原始hCRBN序列突变成小鼠序列。mCRBN类似物和从hCRBN系统产生的hmCRBN杂合物能够以最小构象偏差重现mCRBN(PDB 4TZC和4TZU)的晶体配体姿态(图7C)，并且用于建模目的。在模型和化合物之间，结合模式似乎不具有差异，因为在X射线晶体结合姿态(表2)和MD后平衡模型(图7B和图7C)之间，在RMSD计算结果方面不存在显著差异。诱导契合对接(IFD)也预测在模型和化合物之间在结合亲和力方面无可观察差异(表2)。所有姿态都在
Figure BDA0001866541900001222
RMSD内，此是对IFD方案预期的阈值(29)。
hCRBN的Val388在免疫调节性化合物结合后募集CK1α(10)。然而，
Figure BDA0001866541900001223
并且因此不可能改变对药物的结合亲和力。第二独特氨基酸是Glu377，其在小鼠中是Val379，并且可与来那度胺的氨基建立微弱氢键。然而，对MD模拟的氢键分析(图8)表明在这个残基与结合的免疫调节性药物之间存在最小相互作用，主要归因于倾向于迫使带电荷羧基部分离开结合位点的骨架二面角应变。
表2：
Figure BDA0001866541900001221
a使用PDB 4CI1计算的姿态RMSD以用于比较。
b使用PDB 4TZC计算的姿态RMSD以用于比较。
c使用PDB 4TZ4计算的姿态RMSD以用于比较。
d使用PDB 4CI2计算的姿态RMSD以用于比较。
e使用PDB 4CI3计算的姿态RMSD以用于比较。
f使用PDB 4TZU计算的姿态RMSD以用于比较。
免疫调节性化合物在小鼠CRBN和人CRBN中的结合在功能上是保守的。小鼠CRBN-TBD中在Val380(相当于Glu377)和Ile391(相当于Val388)处的物种特异性氨基酸差异(图9A)似乎在结构或相应免疫调节性药物结合相互作用方面不具有相关性(图9B、图9C)。为测试这两个非保守氨基酸对结合亲和力的影响，表达重组人TBD并使其突变成小鼠变体，并且通过两种不同测定即固有色氨酸荧光测定(IF)和等温滴定量热法(ITC)来分析免疫调节性药物结合。未在结合测定中研究C366S氨基酸突变，因为它离开免疫调节性药物结合口袋超过
Figure BDA0001866541900001231
在大肠杆菌中表达TBD基序(残基319-425)(图9A、图10A)。TBD在结构上由与位于离药物相互作用位点约
Figure BDA0001866541900001232
的单一锌离子配位(15,16)的四个半胱氨酸残基(Cys323、Cys326、Cys391和Cys394)稳定。为获得对锌的作用的理解，也产生TBD的CXXC结构域中的突变。使任何半胱氨酸残基突变都产生在包涵体中聚集的不溶性蛋白质(图10)。这指示归因于丧失Zn2+离子配位作用的错误折叠。为消除不当折叠或去稳定化，对所有表达的重组CRBN-TBD蛋白的纯化蛋白质进行锌试剂测定(13)。这些分析揭示Zn2+结合于TBD重组蛋白具有1:1化学计量比(图10C-图10F)。此外，使用圆二色性，与适当折叠一致的蛋白质二级结构也是明显的(数据未显示)。值得注意的是，IF(图9D-图9G)分析与ITC(图9H-图9K、图13)分析两者均显示测试的各化合物在结合野生型CRBN-TBD、E377V-CRBN-TBD、V388I-CRBN-TBD和E377V/V388I(hm)-CRBN-TBD方面在平衡状态下的类似KD值(表1)。
为评估结合口袋残基的影响，产生两个残基的Ala突变(图9B、图9C)(7,26,27)。Trp380A突变完全消除配体相互作用。与Trp380的H键形成和疏水性相互作用对免疫调节性药物结合至关重要。相比之下，H378A对免疫调节性化合物的结合亲和力类似于野生型蛋白质(表1)，从而证明单独这个突变不影响蛋白质-配体相互作用。尽管His378与戊二酰亚胺环形成两个H键(图9C)，但使这个残基突变成Ala不影响结合。这可表明Ala的骨架羰基能够与戊二酰亚胺环的–NH基团形成H键。为进一步探测His378侧链在免疫调节性药物结合中的作用，我们进行pH依赖性研究以通过ITC来测量来那度胺与CRBN-TBD的结合亲和力。在pH4.5、5.5、6.5和7.5下测量的KD值分别是21.4±3、23.7±8、23.8±7和11.3±2μM。因此，His378咪唑基的质子化和去质子化对免疫调节性药物结合TBD不具有影响。为获得对免疫调节性化合物结合CRBN-TBD的更多理解，我们合成了N-甲基-来那度胺作为阴性对照，其中预测戊二酰亚胺环中的甲基会在结合口袋中产生空间位阻(图12)。如所预期，使用两种方法，N-甲基-来那度胺均显示不结合CRBN-TBD。
最后，使用ITC比较CRBN-TBD和与DDB1复合的全长CRBN与来那度胺的结合亲和力以评估在TBD外部的残基的影响。全长CRBN-DDB1复合物显示0.64μM±0.24μM(pH 7.0)的KD值(图13A)。这个亲和力类似于使用基于荧光偏振(FP)的测定获得的公开数据(32)。此外，这些结果与蛋白质复合物内的单一结合位点一致。支持这个见解的是，N-甲基-来那度胺破坏CRBN-DDB1复合物相互作用(图13B)，从而指示复合物-药物相互作用仅由TBD的疏水性结合口袋介导。引起关注的是，相比于全长CRBN-DDB1复合物，来那度胺与CRBN-TBD的结合亲和力是约30倍低。此外，全长CRBN和CRBN-TBD分别具有放热反应和吸热反应。因此，全长蛋白质中的残基似乎使结合口袋中的蛋白质-配体相互作用加强。
小鼠细胞中的获得性泛素邻近连接确定小鼠CRBN和人CRBN的保守功能。dBET1和N-甲基-dBET1(基于N-甲基-Len的结果而用作阴性对照)的结构提供在图14A中，并且显示cereblon和BET靶向性基团。使用IF(图14B)，显示dBET1对CRBN-TBD的结合亲和力类似于来那度胺的结合亲和力，而如所预期，单独JQ1不结合CRBN-TBD。在戊二酰亚胺环中对dBET1的甲基化确认这个类似物的结合由TBD疏水性结合相互作用介导，此对于经典免疫调节性化合物是类似的。接着测试用JQ1处理原代小鼠T细胞，并且验证得知具有功能(图15A-图15D)。抑制c-Myc mRNA(图15A)、降低重要c-Myc靶标分子CD98的表面表达(图15B)、损害活力(图15C)和增殖(图15D)确认BRD4是这些细胞中的适合靶标。为确定dBET1在活化的人T细胞中的功能，将结果显示于图14C中。相较于DMSO与JQ1两者，在用dBET1处理之后，相对活力被降低。因此，生长抑制作用由异双功能性缀合物增强。如所预期，来那度胺和泊马度胺对活力不具有影响，但它们使增殖增加(图14C、图4，并且数据未显示)。使用用CD3抗体+CD28抗体活化的纯化Crbn+/+和Crbn-/-小鼠T细胞，我们显示dBET1抑制活力，并且使表达c-Myc靶标CD98的细胞的百分比降低(分别是图14D和图14E)。在Crbn+/+ T细胞与Crbn-/- T细胞之间明确观察到对dBET1处理的差异性应答，从而指示在较低剂量下的应答具有CRBN依赖性。接着在人T细胞、Crbn+/+和Crbn-/-T细胞(图14F、图14G)中以及在用dBET1处理的人MM1.S和小鼠5TGM1多发性骨髓瘤细胞(图15E)中确认小鼠CRBN和人CRBN的邻近相关的泛素缀合功能。在所有细胞类型中，BRD4蛋白和c-Myc表达都由dBET1处理显著抑制(图15)。此外，在活化的小鼠T细胞中，BRD4蛋白水平降低响应于dBET1具有CRBN依赖性，但在不依赖于CRBN的JQ1之后，蛋白质表达存在略微降低(图14F)。值得注意的是，对dBET1的功能性应答通过与M-dBET1一起孵育而逆转，从而显示人T细胞也通过由CRBN-TBD的疏水性口袋介导的相互作用来起应答。因此，小鼠和人BRD4通过CRBN依赖性过程而被成功靶向以达成降解。
讨论
趋异性药物代谢(30)和CRBN的沙利度胺结合结构域(TBD)的微小一级序列相关差异(10)已被提出来解释免疫调节性化合物的物种特异性药理学活性。使用分子动力学(MD)，在小鼠CRBN晶体结构和平衡MD结构相对于人CRBN晶体结构和平衡MD结构的情况下观察到最小构象偏差或波动，因此，对晶体结构与MD平衡结构两者的刚性诱导契合和量子偏振虚拟对接显示在理论结合能方面或在沙利度胺、泊马度胺或来那度胺的姿态位置方面无定量差异。
使用ITC和基于荧光的经验结合测定，我们确定沙利度胺和其它免疫调节性化合物与小鼠CRBN的解离常数类似于与人CRBN的解离常数，此与对与来那度胺复合的人CRBN-DDB1的晶体结构(pdb代码：4CI2、4TZ4)的分析(15,16)一致。与人TBD(aa 317-425)复合的免疫调节性化合物的KD值在μM范围内，此类似于秀丽隐杆线虫(C.elegans)和格瑞菲斯瓦尔德磁螺菌(Magnetospirillum gryphiswaldense)的KD值(14)。W380A疏水性结合口袋突变体完全消除结合，从而确认如先前所表明(15)，这是结合口袋的一个关键残基。这个结果也表明Trp380在疏水性笼中为与其它残基(Trp386、Trp400和Phe402)协同起作用以达成配体相互作用所必需。
值得注意的是，根据ITC，在CRBN-DDB1复合物与CRBN-TBD蛋白之间，在与来那度胺的结合亲和力方面存在显著差异。全长CRBN-DDB1的构象变化可在来那度胺结合后发生，如由它们的ΔH和ΔS值的差异所示(图13)。尽管TBD结合口袋具有刚性，但似乎CRBN的在TBD构建体中缺失的N末端结构域在配体结合中起重要作用。实际上，X射线晶体结构揭示在TBD外部存在影响CRBN对免疫调节性药物的亲和力的残基(图13F)。对与来那度胺复合的全长CRBN的晶体结构的更密切检查说明TBD中的由残基Asn351、Pro352和His353组成的无序环进一步使来那度胺的相互作用稳定。Asn351与来那度胺形成氢键，并且Pro352与His353两者均与免疫调节性药物的芳族系统形成疏水性相互作用(图13E)。重要的是，在人CRBN和小鼠CRBN中，这个环中的残基是相同的(图9A)，但它不存在于小鼠TBD的晶体结构中。可能所述环处于高度无结构化和动态区域中，因此导致小鼠结构中的不良电子密度。总之，结果表明N末端残基使这个区域稳定，并且加强与来那度胺和其它免疫调节性药物的结合亲和力。或者，在TBD外部的其它残基可已使这个环稳定。此外，位于CRBN的LON结构域中的Gln100的侧链与His378的ε2NH基团形成微弱氢键相互作用。这转而使His378的δ1NH定位成来那度胺的氢供体。这可解释免疫调节性药物与全长CRBN蛋白具有较高结合亲和力，并且解释使用TBD构建体获得的H378A突变结果。基于这些结构域在结合存在于dBET1和所有免疫调节性药物中的保守戊二酰亚胺环方面的重要性，我们合成了适用于评估这个配体相互作用在体内的功能性影响的N-甲基衍生物。
尽管沙利度胺和免疫调节性化合物具有致畸性质(31)，但它们被核准治疗多发性骨髓瘤(32)、与染色体5中的体细胞获得性缺失相关的骨髓发育不良综合征(MDS)(del5qMDS)(33)和B细胞恶性肿瘤(9,34,35)。作为抗癌剂，免疫调节性化合物似乎通过对肿瘤细胞存活的内在影响(36,37)以及通过对T细胞和天然杀伤(NK)细胞的抗肿瘤免疫增强作用的外在影响(34,38)来起作用，涉及使所选蛋白质底物降解(7,8,39-41)。这些药物在人、鸡和斑马鱼中诱导肢体畸形以及在人中而非小鼠中诱导抗赘生活性所采用的机理似乎依赖于CRBN。
在结合于免疫调节性药物时，CRBN诱导对若干底物的破坏，所述底物包括转录因子IKZF1和IKZF3(7)和/或酪蛋白激酶1α(CK1α)(11)。在T细胞中，IKZF家族转录因子阻遏IL2转录，以致泛素介导的IKZF蛋白破坏会诱导T细胞活化，这与图3中显示的数据一致(11,42)。基于X射线晶体照相术和生物化学分析，小鼠CRBN中的单一非保守氨基酸Ile391(相当于人CRBN中的Val388)阻断CRBN的残基317-442、来那度胺的暴露于溶剂的表面和CK1α之间的界面(10,11)。此外，使用固有地对免疫调节性化合物具有抗性的BaF3小鼠淋巴瘤细胞系，强迫表达人CRBN足以恢复IKZF1降解与CK1α降解两者，并且诱导药物诱导的骨髓抑制(10)。然而，重要的是应注意，来自鸡的CRBN与小鼠具有相同氨基酸残基Ile391，但显示对沙利度胺的药物敏感性(43)。首先在轻度常染色体隐性非综合征性智力残疾(ID)的情况下鉴定(12)的CRBN具有未充分确定的生理性底物。仍然可能的是经典免疫调节性药物可置换与CRBN配合的内源性底物，并且促成生物作用。
在这个研究中，我们的数据指示人CRBN和小鼠CRBN可能共有相同的结合亲和力和机理。我们推断dBET1进入小鼠细胞中并在小鼠细胞中是稳定的，结合小鼠CRBN，并且激起以CRBN依赖性方式对指定蛋白质靶标的降解。此外，人CRBN和小鼠CRBN的TBD对于免疫调节性化合物具有类似亲和力和结合模式。基于我们的用Crbn-/- T细胞获得的数据，dBET1相关的BRD4降解完全依赖于CRBN。因此，含有CRBN的DDB1-CUL4A泛素连接酶复合物的内源性E3泛素连接酶活性和装配在包括小鼠的脊椎动物谱系之间基本上是保守的，从而表明Ile391仅影响一些靶标，并且可能仅与经典免疫调节性分子关联(10,11)。这个观察结果连同CRBN的高度保守一起指示选择压力已维持CRBN中的总体结构和功能超过4亿年。此外，可能的是由PROTAC分子靶向的其它底物可采用易经受CRBN引导的cullin-RING E3连接酶介导的聚泛素化的活性构象。关于PROTAC敏感性的底物限制或构象约束未经探索。然而，cullin-E3连接酶的重定向以异常降解宿主蛋白质已在病毒性感染的情况下充分研究(44)，包括DDB1在调控乙型肝炎病毒DNA复制(45)和人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)感染性(46)方面的作用。引起关注的是，BRD4控制乳头状瘤病毒E2泛素调控，从而表明它能够通过啮合蛋白体来调控蛋白质(45)。许多底物需要翻译后修饰来触发敏感性，并且细胞质蛋白质与核蛋白质两者均可被靶向以达成降解(44)。在人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)Vif蛋白的情况下，锌结合区操纵对cullin家族成员的选择性(47)。因此，CRBN中的锌离子配位络合物可在CRBN中起结构作用，并且参与一些蛋白质的底物募集。重要的是，我们的研究确定小鼠平台可实际上用于临床前开发基于PROTAC的化学降解剂的衍生物和被设计来将CRBN的连接酶活性重新导向指定内源性蛋白质的其它药物类别(1,2,5,48-50)。所述药剂在啮齿动物和小鼠肿瘤模型中的毒理学和功能性测试可产生重要的临床前信息。
实施例3：合成化合物
Figure BDA0001866541900001291
3-溴哌啶-2,6-二酮(MA6-019)：使用文献程序1来制备这种化合物。在密封反应容器中，在氩气氛围下将戊二酰亚胺(2g，17.68mmol)溶解于无水氯仿中，并且在室温下通过注射器来添加Br2(908.54uL，1当量)。在110℃(油浴)下加热反应混合物1小时，将盖子移除并在室温下再搅拌30分钟。蒸发粗产物，并且使用SiO2柱色谱法(EtOAc-己烷，0％-100％梯度洗脱)纯化棕色固体。获得呈白色结晶固体状的产物(0.93g，55％)。HPLC–MS(ESI):m/z192.0[100％,(M+H)+]。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.92(s,1H),4.63(app t,J＝3.5Hz,1H),3.00-2.91(m,1H),2.72-2.70(m,1H),2.68–2.66(m,1H),2.36–2.28(m,1H)。
流程1
Figure BDA0001866541900001292
方法1：将MA6-019(1当量)和相应胺或胺盐酸盐(1当量)的混合物溶解于无水DMF或THF中，随后添加二异丙基乙胺(DIPEA)或三甲胺(TEA)(2.1当量，除非另外提及)。在指示温度下搅拌反应混合物直至如由TLC和/或HPLCMS所示的完成。粗混合物用NaHCO3水溶液(约5mL)稀释，并且用EtOAc(约10mL×2)萃取。干燥(Na2SO4)有机层并在减压下浓缩。标题产物通过湿磨、SiO2色谱法或反相HPLC纯化。
Figure BDA0001866541900001301
3-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(MA6-136)：这种化合物使用一般性程序方法1(流程1)(反应温度72℃，溶剂THF(0.5mL)，DIPEA(272μL)，反应时间1.5小时)，从MA6-019(150mg，1当量)和1,2,3,4-四氢异喹啉(99.1uL，1当量)以米色固体形式获得(126mg，66％)。使用SiO2柱色谱法(洗脱剂：MeOH-DCM，直至10％MeOH)进行纯化。Mp:178℃(摄氏度)。HPLC:98％[tR＝8.3分钟,梯度5-95％MeOH-水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.68(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.11–7.08(m,3H),7.05–7.00(m,1H),3.92(d,J＝14.9Hz,1H),3.79(d,J＝14.9Hz,1H),3.63(dd,J＝11.2,4.4Hz,1H),2.99(dt,J＝11.5,5.8Hz,1H),2.88(dt,J＝11.4,5.4Hz,1H),2.77(q,J＝5.8Hz,2H),2.65–2.53(m,2H),2.21–2.09(m,1H),1.97–1.87(m,1H)。HPLC–MS(ESI):m/z 245.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):245.1[100％,(M+Na)+],267.1[40％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C14H16N2O2的计算值：(M+H)+245.1284，实测值：245.1285。
流程2
Figure BDA0001866541900001302
3-(7-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮,(MA7-098)。首先，通过使用PtO2(28.27mg，0.01mmol)，在乙酸(5.0mL)中使起始物质异喹啉醇(100mg，0.68mmol)氢化48小时(流程2)来合成MA7-073。蒸发溶剂，并且用EtOAc和NaHCO3水溶液来分配黑色胶状产物。干燥(Na2SO4)有机层，蒸发，并且粗产物用EtOAc/己烷湿磨以获得呈米色固体状的MA7-073(63mg，61％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.02(s,1H),6.82(d,J＝8.4Hz,1H),6.50(dd,J＝8.4,2.8Hz,1H),6.38(d,J＝2.4Hz,1H),4.10(brs,1H),3.72(s,2H),2.88(t,J＝6.0Hz,2H),2.54(t,J＝5.6Hz,2H)。MA7-098使用一般性方法1(流程1)(反应在室温下进行，溶剂DMF(1.5mL)，DIPEA(116μL)，反应时间15小时)，从MA6-019(64.3mg，1当量)和MA7-073(50mg，1当量)以白色固体形式获得(16mg，18％)。使用SiO2柱色谱法(洗脱剂：MeOH:DCM，直至12％MeOH)进行纯化。HPLC:93％[tR＝7.34分钟,梯度5-95％MeOH-水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.6(brs,1H),9.12(brs,1H),6.86(d,J＝8.0Hz,1H),6.52(dd,J＝8.4,2.8Hz,1H),6.40(d,J＝2.8Hz,1H),3.80(d,J＝14.8Hz,1H),3.68(d,J＝14.8Hz,1H),3.58(dd,J＝10.8,4.4Hz,1H),2.96-2.90(m,1H),2.85-2.79(m,1H),2.65-2.52(m,4H),2.18-2.08(m,1H),1.92-1.88(m,1H)；HPLC–MS(ESI):m/z 261(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001311
4-苯基-[1,3'-联哌啶]-2',6'-二酮(MA7-081-2)。这种化合物使用一般性方法1(流程1)(反应在室温下进行，溶剂DMF(0.5mL)，DIPEA(181.4μL)，反应时间约16小时)，从MA6-019(100mg，0.52mmol)和3-苯基哌啶(83.9mg，0.52mmol)获得。在用DCM:MeOH(梯度洗脱，直至15％MeOH)进行SiO2色谱法之后，以米色固体形式获得纯净MA7-081(59mg，39％)。HPLC-MS显示2种非对映异构体(峰保留时间，tR＝6.86和7.04分钟)。两个峰均显示HPLC–MS(ESI):m/z 273(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.44(brs,1H),10.14(brs,1H),7.37-7.28(m,5H),4.57(4.57,1H),3.25-3.16(br m,2H),3.09-3.02(brm,2H),2.71-2.65(br m,2H),2.38-2.14(m,3H),.92-1.83(m,2H),1.77-1.65(m,1H)。
Figure BDA0001866541900001321
4-苯基-1,3'-联哌啶-2',6'-二酮,(MA7-080)。这种化合物使用一般性方法1(流程1)(反应在室温下进行，溶剂DMF(0.5mL)，DIPEA(181.4μL)，反应时间约16小时)，从MA6-019(100mg，0.52mmol)和4-苯基哌啶(83.9mg，0.52mmol)获得。在使用EtOAc/己烷湿磨粗产物之后，以米色固体形式获得纯净MA7-080(65mg，46％)。HPLC:98％[tR＝9.8分钟,MeOH:水20:80(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.62(s,1H),7.30-7.15(m,5H),3.45(dd,J＝11.2,4.4Hz,1H),2.90-2.72(m,3H),2.60-2.56(m,3H),2.52(m,与DMSO峰重叠,1H)2.10-2.00(m,1H),1.91-1.85(m,1H),1.75-1.65(m,2H),1.62-1.56(m,2H)；HPLC–MS(ESI):m/z 273[100％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900001322
3-(苯甲基氨基)哌啶-2,6-二酮(MA7-090)。这种化合物使用一般性方法1(流程1)(反应在室温下进行，溶剂DMF(0.5mL)，DIPEA(181μL)，反应时间约18小时)，从MA6-019(100mg，0.52mmol)和苯甲基胺(56.89μL，0.52mmol)获得。在使用MeOH/DCM梯度洗脱(产物用7％MeOH洗脱)进行SiO2色谱法之后，以油状物形式获得纯净MA7-090(31mg，30％)。HPLC:97％[tR＝9.8分钟,MeOH:水10:80(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.73(brs,1H),7.35-7.21(m,5H),3.80(s,2H),3.30-3.29(m,与H2O峰重叠,2H),2.74(brs,1H),2.07-2.01(m,2H),1.78-1.68(m,1H)；HPLC–MS(ESI):m/z 219(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001331
3-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-2,6-二酮,(MA7-144-2)。这种化合物使用一般性方法1(流程1)(反应在室温下进行，反应时间约2小时)，从MA6-019(50mg，0.26mmol)和N-甲基哌嗪(434.7μL，3.91mmol)获得。将NaHCO3水溶液(5mL)添加至反应混合物中，并且过滤所得固体。在用EtOAc/己烷湿磨之后，以灰色固体形式获得纯净MA7-144-2(45mg，82％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.62(brs,1H),3.31(dd,与水峰重叠,1H),2.66-2.53(m,5H),2.4-2.45(m,1H,与DMSO重叠),2.27(br s,4H),2.13(s,3H),2.06-1.96(m,1H),1.87-1.79(m,1H)；HPLC–MS(ESI):m/z 212(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001332
3-[苯甲基(甲基)氨基]哌啶-2,6-二酮(MA6-132)：这使用一般性方法1(流程1)(反应温度72℃，溶剂THF，反应时间约16小时)，从MA6-019(150mg，1当量)和N-甲基-1-苯基甲胺(94.7mg，1当量)以米色固体形式获得(126mg，66％)。标题化合物通过使用EtOAc/己烷对粗产物进行湿磨来纯化。HPLC:89％[tR＝8.0分钟,梯度5-95％MeOH-水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.64(s,1H),7.38–7.29(m,4H),7.27–7.18(m,1H),3.76(s,2H),3.60(dd,J＝12.1,4.7Hz,1H),2.61(ddd,J＝17.5,12.4,5.4Hz,1H),2.57–2.53(m,1H),2.24(s,3H),2.09(qd,J＝12.5,4.7Hz,1H),1.97–1.88(m,1H)。HPLC–MS(ESI):m/z233.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):255.1[100％,(M+Na)+],267.1[40％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H16N2O2的计算值：(M+H)+233.12845，实测值：233.12835。
Figure BDA0001866541900001341
3-[(呋喃-2-基甲基)氨基]哌啶-2,6-二酮(MA6-122-1)：使用一般性方法1(流程1)，通过使用DMF(1.0mL)和DIPEA(1当量)，在62℃下加热MA6-019(150mg，0.78mmol)和糠基胺(104.4uL，1当量)(反应时间18小时)，以绿色油状物形式获得MA6-122-1(71mg，44％)。使用SiO2色谱法(洗脱剂：MeOH-DCM，0至12％MeOH)进行纯化。HPLC:99％[tR＝11.0分钟,MeOH:水80:20,含0.1％TFA,20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.72(s,1H),7.55(dd,J＝1.8,0.8Hz,1H),6.37(dd,J＝3.1,1.8Hz,1H),6.31–6.17(m,1H),3.78(d,J＝5.9Hz,2H),3.29(s,1H),2.66(brs,1H),2.53–2.49(m,2H),2.03(dq,J＝13.2,4.9Hz,1H),1.80–1.56(m,1H)。HPLC–MS(ESI):m/z 209.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):231.0[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C10H12N2O3的计算值：(M+H)+209.09207，实测值：209.09190。
Figure BDA0001866541900001342
3-[(吡啶-2-基甲基)氨基]哌啶-2,6-二酮(MA6-122-2)：使用一般性方法1(流程1)，通过使用DMF(1.0mL)和DIPEA(1当量)，在62℃下加热MA6-019(150mg，0.78mmol)和吡啶-2-基甲胺(79.56uL，1当量)(反应时间18小时)，以绿色油状物形式获得MA6-122-1(35mg，20％)。使用SiO2色谱法(洗脱剂：MeOH-DCM，0至12％MeOH)进行纯化。HPLC:98％[tR＝12.7分钟,含0.1％TFA的水,20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.76(s,1H),8.51(d,J＝4.1Hz,1H),7.75(t,J＝6.9Hz,1H),7.42(d,J＝7.8Hz,1H),7.25(t,J＝5.4,1H),3.91(brs,2H),3.39(dd,J＝10.7,4.9Hz,1H),2.58–2.53(m,1H),2.44(t,J＝8.8,1H),2.10(dd,J＝12.8,4.9Hz,1H),1.87–1.68(m,1H)。HPLC–MS(ESI):m/z 220.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):m/z 242.1[100％,(M+Na)+],220.1[55％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C11H13N3O2的计算值：(M+H)+220.1080，实测值：220.1082。
Figure BDA0001866541900001351
3-(6-氨基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(MA7-096)：首先，从6-氨基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯制备1,2,3,4-四氢异喹啉-6-胺双盐酸盐。在室温下搅拌6-氨基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-甲酸叔丁酯(200mg，0.81mmol)于HCl(2mL，4M，于二噁烷中，8mmol)中的混悬液15小时。浓缩混合物，并且通过与乙酸乙酯(2×4mL)共蒸发来移除残余HCl以提供呈浅黄色固体状的1,2,3,4-四氢异喹啉-6-胺双盐酸盐(176mg，99％)，并且不经进一步纯化即使用。使用一般性方法1(流程1)，以黄色固体形式获得MA7-096(21mg，22％)。首先，在70℃下，在DMF(0.5ml)中，将1,2,3,4-四氢异喹啉-6-胺双盐酸盐(79.9mg，0.36mmol)与DIPEA(123.2μL，0.72mmol)一起加热10分钟。使混合物冷却并添加MA6-019(70mg，0.36mmol)，并且在室温下搅拌18小时。通过SiO2柱色谱法和用DCM/己烷湿磨进行的纯化产生MA7-096。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.66(s,1H),6.64(d,J＝8.1Hz,1H),6.31(dd,J＝8.1,2.4Hz,1H),6.25(d,J＝2.4Hz,1H),4.76(s,2H),3.68(d,J＝13.8Hz,1H),3.58(d,J＝13.8Hz,1H),3.51(dd,J＝10.7,4.3Hz,1H),2.90–2.71(m,2H),2.73–2.54(m,3H),2.15–2.04(m,1H),1.89(dq,J＝13.8,4.9Hz,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 260.2[100％,(M+H)+]。m/z，C14H17N3O2的计算值：(M+H)+260.1394，实测值：260.1397。
Figure BDA0001866541900001361
[1,3'-联哌啶]-2',6'-二酮(MA7-144-1)。这种化合物使用一般性方法1(流程1)(反应在室温下进行，反应时间约2小时)，从MA6-019(50mg，0.26mmol)和哌啶(485.8μL，3.91mmol)获得。将NaHCO3水溶液(5mL)添加至反应混合物中，并且过滤所得固体。在用EtOAc/己烷湿磨之后，以灰色固体形式获得纯净MA7-144-1(41mg，80％)。HPLC:99％[tR＝3.2分钟,MeCN(5％)和水(95％,含0.1％TFA,20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.56(s,1H),3.37–3.28(m,1H),2.66–2.39(m,5H),2.03–1.92(m,1H),1.83–1.77(m,1H),1.50–1.32(m,6H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 197.2[100％,(M+H)+]。m/z，C10H16N2O2的计算值：(M+H)+260.1285，实测值：197.1288。
Figure BDA0001866541900001362
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-[(3-硝基苯基)磺酰胺基]丙酰胺(MA7-050)：这使用一般性方法1(流程1)(反应在室温下进行，反应时间约2小时)，从MA6-019(50mg，0.26mmol)和6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉盐酸盐(102.9mg)获得。将NaHCO3水溶液(5mL)添加至反应混合物中，并且过滤所得固体。通过用水洗涤和从乙酸乙酯/己烷湿磨进行的纯化产生呈浅绿色米色固体状的MA7-050(79mg，55％)。HPLC:>98％[tR＝7.7分钟,5-95％梯度MeOH,水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.64(s,1H),6.93(d,J＝8.0,1H),6.68(dd,J＝8.0,J＝4.0,1H),6.66(m,1H),3.78(m,2H),3.70(s,3H),3.59(dd J＝8.0,J＝4.0,1H),2.90–2.98(m,1H),2.81–2.88(m,1H),2.70–2.79(m,2H),2.65–2.50(m,2H),2.20–2.08(m,1H),1.95–1.85(m,1H)。HRMS(ESI+):m/z，C15H18N2O3的计算值：(M+H)+275.13902，实测值：275.1389,m/z，C15H18N2O3Na的计算值：(M+Na)+297.1209，实测值：297.1204。HPLC-MS:HPLC–MS(ESI+):m/z 275.2[100％,(M+H)+],571.3[10％,(2M+Na)+]。
Figure BDA0001866541900001371
3-(6,7-二甲氧基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(MA7-051)。这使用一般性方法1(流程1)(反应在室温下进行，反应时间约18小时)，从6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氢异喹啉(100.6mg)和MA6-019(100mg)获得。将NaHCO3水溶液(5mL)添加至反应混合物中，并且用EtOAc(2x 5mL)萃取，干燥(Na2SO4)，蒸发以获得粗产物，其用EtOAc/己烷湿磨以提供呈灰白色固体状的纯化合物MA7-051(107mg，75％)。
HPLC:>96％[tR＝7.7分钟,5-95％梯度MeOH,水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.64(s,1H),6.65(s,1H),6.60(s,1H),3.83–3.72(m,2H),3.69(s,3H),3.68(s,3H),3.58(d,J＝8.0,1H),2.95–2.89(m,1H),2.86–2.80(m,1H),2.65–2.75(m,2H),2.65–2.52(m,2H),2.20–2.08(m,1H),1.95–1.85(m,1H)。HRMS(ESI+):m/z，C16H21N2O4的计算值：(M+H)+305.1495，实测值：305.1489,m/z，C16H20N2O4Na的计算值：(M+Na)+327.1315，实测值：327.1315。HPLC-MS:HPLC–MS(ESI+):m/z 305.2[100％,(M+H)+],631.3[10％,(2M+Na)+]。
Figure BDA0001866541900001381
3-(6-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(MA7-052)：将MA7-050(45mg，0.16mmol)溶解于DCM(1mL)中，并且放置在冰浴中。缓慢添加三溴化硼(656.4μL)。将混合物搅拌过夜，并且用水淬灭。通过用水(3mL)、10％NH3水溶液(3mL)洗涤和从乙酸乙酯湿磨进行的纯化产生呈奶油色固体状的MA7-052(32mg，82％)。HPLC:约92％[tR＝2.5分钟,2％MeOH,98％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.66(s,1H),9.07(s,1H),6.79(d,J＝8.0,1H),6.51(dd,J＝8.0,4.0,1H),6.46(m,1H),3.76(dd,J＝12.0,4.0,2H),3.56(dd,J＝8.0,4.0,1H),2.95–2.85(m,1H),2.83–2.77(m,1H),2.65–2.75(m,2H),2.65–2.52(m,2H),2.20–2.08(m,1H),1.95–1.85(m,1H)。HRMS(ESI+):m/z，C14H17N2O3的计算值：(M+H)+261.1233，实测值：261.1240,m/z，C14H16N2O3Na的计算值：(M+Na)+283.1053，实测值：283.1048。HPLC-MS:HPLC–MS(ESI+):m/z 261.2[60％,(M+H)+],259.1[50％,(M-H)-]。
Figure BDA0001866541900001382
3-(7-氯-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(MA7-074)：将7-氯-1,2,3,4-四氢异喹啉(75.0mg)溶解于DMF(0.7mL)中。将MA6-019(86.0mg)和DIPEA(a56.8μL)添加至混合物中，并且搅拌16小时。通过用NaHCO3水溶液(5mL)洗涤和从乙酸乙酯/己烷湿磨进行的纯化产生呈米色固体状的MA7-074(77mg，62％)。HPLC:>99％[tR＝11.6分钟,15％MeOH,85水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.71(s,1H),7.17–7.11(m,3H),3.94(d,J＝16Hz,1H),3.79(d,J＝16Hz,1H),3.65(dd J＝8.0,J＝4.0,1H),2.90–2.95(m,1H),2.90–2.81(m,1H),2.70–2.80(m,2H),2.65–2.50(m,2H),2.20–2.08(m,1H),1.95–1.85(m,1H)。HRMS(ESI+):m/z，C14H16ClN2O2的计算值：(M+H)+279.0894，实测值：279.0894,m/z，C14H15ClN2O2Na的计算值：(M+Na)+301.0714，实测值：301.0711。HPLC-MS:HPLC–MS(ESI+):m/z 279.2[40％,(M+H)+],277.1[100％,(M-H)-]。
Figure BDA0001866541900001391
3-(7-硝基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-2,6-二酮(MA7-075)：这使用7-硝基-1,2,3,4-四氢异喹啉(200mg)和MA6-019(215mg)，与(MA7-074)以相同方式制备。通过用水洗涤和从丙酮/己烷湿磨进行的纯化产生呈米色固体状的MA7-075(189mg，58％)。HPLC:>99％[tR＝3.9分钟,15％MeOH,85％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.71(s,1H),7.98–7.95(m,2H),7.36–7.39(m,1H),4.07(d,J＝16.0Hz,1H),3.91(d,J＝16.0Hz,1H)3.69(dd,J＝8.0Hz,4.0Hz,1H),2.99–3.08(m,1H),2.87–2.93(m,3H),2.53–2.66(m,2H),2.19–2.09(m,1H),1.93–1.87(m,1H)。HRMS(ESI+):m/z，C14H16N3O4的计算值：(M+H)+290.1135，实测值：290.1134,m/z，C14H15N3O4Na的计算值：(M+Na)+312.0954，实测值：312.0959。HPLC-MS:HPLC–MS(ESI+):m/z 290.2[100％,(M+H)+],288.2[100％,(M-H)-]。
Figure BDA0001866541900001401
3-[(4-吗啉代苯甲基)氨基]哌啶-2,6-二酮(MA6-122-3)：使用一般性方法1(流程1)，这通过使用作为溶剂的DMF和作为碱的DIPEA，在62℃下加热MA6-019(150mg，0.78mmol)和(4-吗啉代苯基)甲胺(150.2mg，1当量)(反应时间18小时)来以灰色固体形式获得(121mg，50％)。使用SiO2柱色谱法(洗脱剂：MeOH-DCM，0至12％MeOH)进行纯化。HPLC:83％[tR＝9.52分钟,梯度5-95％MeOH-水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.32(s,1H),9.25(s,1H),7.37(d,J＝8.4Hz,2H),7.00(d,J＝8.5Hz,2H),4.17(s,1H),4.13(brd,J＝4.0Hz,2H),3.74(t,J＝5.0Hz,4H),3.14(d,J＝5.07Hz,4H),2.68–2.64(m,2H),2.41–2.25(m,1H),2.11–2.00(m,1H)。LC–MS(ESI+):326.2[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C16H21N3O3的计算值：(M+H)+304.16557，实测值：305.16475。
Figure BDA0001866541900001402
3-{(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)氨基}哌啶-2,6-二酮(MA6-122-5)：使用一般性方法1(流程1)，这通过使用作为溶剂的DMF和作为碱的DIPEA，在62℃下加热MA6-019(150mg，0.78mmol)和苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基甲胺(118.1mg，1当量)(反应时间18小时)来以绿色油状物形式获得(19mg，9％)。使用SiO2柱色谱法(洗脱剂：MeOH-DCM，0至12％MeOH)进行纯化。HPLC:91％[tR＝9.8分钟,梯度5-95％MeOH-水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.70(s,1H),6.92(s,1H),6.83(d,J＝7.9Hz,1H),6.78(d,J＝7.9Hz,1H),5.97(brs,2H),3.70(brs,2H),3.27(dd,J＝10.1,4.8Hz,1H),2.75–2.65(m,1H),2.55–2.51(m,1H),2.03(dd,J＝13.2,4.9Hz,1H),1.76–1.61(m,1H)。HPLC–MS(ESI):m/z 263.2[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H14N2O4的计算值：(M+H)+263.10263，实测值：263.1027。
Figure BDA0001866541900001411
3-{[(5-甲基吡嗪-2-基)甲基]氨基}哌啶-2,6-二酮(MA6-122-6)：使用一般性方法1(流程1)，这通过使用作为溶剂的DMF和作为碱的DIPEA，在62℃下加热MA6-019(150mg，0.78mmol)和(5-甲基吡嗪-2-基)甲胺(96.2mg，1当量)(反应时间18小时)来以暗绿色固体形式获得(91mg，50％)。使用SiO2柱色谱法(洗脱剂：MeOH-DCM，0至12％MeOH)进行纯化。HPLC:99％[tR＝5.7分钟,梯度5-95％MeOH-水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.75(s,1H),8.55(d,J＝1.4Hz,1H),8.47(d,J＝1.4Hz,1H),3.93(s,2H),3.39(dd,J＝10.7,4.9Hz,1H),3.09(brs,1H),2.56–2.51(m,2H),2.47(s,3H),2.08(dq,J＝14.5,4.9Hz,1H),1.74(dq,J＝14.2,6.8Hz,1H)。HPLC–MS(ESI):m/z 235.2[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H14N2O4的计算值：(M+H)+263.10263，实测值：263.1027。LC–MS(ESI+):257.0[100％,(M+Na)+],235.1[40％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C11H14N4O2的计算值：(M+H)+235.11895，实测值：235.11955。
Figure BDA0001866541900001412
3-{[2-(吡啶-3-基)乙基]氨基}哌啶-2,6-二酮(MA6-122-7)：使用一般性方法1(流程1)，这通过使用作为溶剂的DMF和作为碱的DIPEA，在62℃下加热MA6-019(150mg，0.78mmol)和2-(吡啶-3-基)乙-1-胺(95.4mg，1当量)(反应时间18小时)来以稠密绿色油状物形式获得(19mg，10％)。HPLC:97％[tR＝2.4分钟,等度1％MeOH,99％水(含0.1％TFA),20分钟]。使用SiO2柱色谱法(洗脱剂：MeOH-DCM，0至12％MeOH)进行纯化。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.70(s,1H),8.45(d,J＝2.1Hz,1H),8.40(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),7.65(dt,J＝7.8,2.0Hz,1H),7.30(dd,J＝7.7,4.8Hz,1H),3.38(dd,J＝10.8,4.6Hz,1H),2.91–2.79(m,3H),2.74(t,J＝7.0Hz,2H),2.04(dq,J＝13.2,5.0Hz,1H),1.76–1.61(m,1H)。HPLC–MS(ESI):m/z 234.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):234.1[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C12H15N3O2的计算值：(M+H)+234.12370，实测值：234.12299。
Figure BDA0001866541900001421
3-{[3-(1H-咪唑-1-基)丙基)氨基]}哌啶-2,6-二酮(MA6-122-8)：使用一般性方法1(流程1)，这通过使用作为溶剂的DMF和作为碱的DIPEA，在62℃下加热MA6-019(150mg，0.78mmol)和3-(1H-咪唑-1-基)丙-1-胺(97.8mg，1当量)(反应时间18小时)来以浅蓝色油状物形式获得(20mg，11％)。使用SiO2柱色谱法(洗脱剂：MeOH-DCM，0至12％MeOH)进行纯化。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.71(s,1H),7.61(s,1H),7.16(s,1H),6.88(s,1H),4.01(t,J＝7.0Hz,2H),2.59(dt,J＝12.6,6.6Hz,1H),2.54(dd,J＝5.7,2.9Hz,2H),2.48–2.44(m,1H),1.99(dd,J＝13.1,5.1Hz,1H),1.84(p,J＝6.5,6.0Hz,2H),1.77–1.65(m,1H)。HPLC–MS(ESI):m/z 237.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):237.1[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C11H16N4O2的计算值：(M+H)+237.13460，实测值：237.13501。
Figure BDA0001866541900001431
3-((2-(吡啶-2-基)乙基)氨基)哌啶-2,6-二酮(MA6-122-9)：使用一般性方法1(流程1)，这通过使用作为溶剂的DMF和作为碱的DIPEA，在62℃下加热MA6-019(150mg，0.78mmol)和2-(吡啶-2-基)乙-1-胺(95.4mg，1当量)(反应时间18小时)来以油状物形式获得(20mg，11％)。使用SiO2柱色谱法(洗脱剂：MeOH-DCM，0至12％MeOH)进行纯化。HPLC:99％[tR＝2.1分钟,等度30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,1H),8.55–8.45(m,1H),7.69(dd,J＝7.7,1.9Hz,1H),7.28(d,J＝7.8Hz,1H),7.20(ddd,J＝7.5,4.9,0.9Hz,1H),3.47–3.40(m,1H),2.98(dd,J＝10.7,4.9Hz,2H),2.90(s,1H),2.89(s,2H),2.57–2.51(m,2H),2.07(ddd,J＝13.0,9.3,4.4Hz,1H),1.78–1.63(m,1H)。HPLC–MS(ESI):m/z 234.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):234.1[100％,(M+H)+],256.1[50％,M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C12H15N3O2的计算值：(M+H)+234.12370，实测值：234.12396。
Figure BDA0001866541900001432
3-{[(5-甲基呋喃-2-基)甲基]氨基}哌啶-2,6-二酮(MA6-122-10)：使用一般性方法1(流程1)，这通过使用作为溶剂的DMF和作为碱的DIPEA，在62℃下加热MA6-019(150mg，0.78mmol)和(5-甲基呋喃-2-基)甲胺(86.8mg，1当量)(反应时间18小时)来以暗绿色固体形式获得(126mg，73％)。使用SiO2柱色谱法(洗脱剂：MeOH-DCM，0至12％MeOH)进行纯化。HPLC:87％[tR＝7.9分钟,梯度5-95％MeOH-水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.75(s,1H),6.12(d,J＝2.7Hz,1H),5.97(d,J＝2.9Hz,1H),3.74(s,2H),3.37(d,J＝7.9Hz,2H),2.52(d,J＝6.9Hz,2H),2.22(s,3H),2.05(dq,J＝13.9,4.6Hz,1H),1.78–1.62(m,1H)。HPLC–MS(ESI):):m/z 245.2[100％,(M+Na)+],467.3[20％,(2M+N Na)+]。LC–MS(ESI+):245.1[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C11H14N2O3的计算值：(M+Na)+245.08966，实测值：245.08942。
流程3
Figure BDA0001866541900001441
N-(3-氨基丙基)苯甲酰胺(MA6-094)。根据(BOMCL,2013,6799-6804)中报道的程序(流程3)来制备这种化合物。通过使用DCM(2.0mL)和TFA(200μL)，将Boc保护的胺前体脱保护来制备MA6-094。蒸发混合物以获得棕色油状物(179mg，100％)，并且不经进一步纯化即用于下一步骤中。HPLC–MS(ESI)m/z 165(M+H)+。
N-(2-氨基乙基)苯甲酰胺(MA6-095)。首先，在氩气下搅拌含苯甲酰氯(140mg，1mmol)和2-氨基乙基氨基甲酸叔丁酯(160mg，1mmol)的无水DCM。在2小时之后，TLC显示反应完成。反应混合物用DCM(20mL)稀释，并且用NaHCO3(20mL)洗涤。蒸发有机层，并且所得产物用EtOH(0.5mL)和己烷(3mL)湿磨以产生呈灰白色固体状的2-苯甲酰胺基乙基氨基甲酸叔丁酯MA6-093(205mg，78％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.44(t,J＝5.2Hz,1H),7.83-7.82(m,2H),7.53-7.42(m,3H),6.91(t,J＝5.6Hz,1H),3.27(q,J＝6.4Hz,2H),3.092(q,J＝6.0Hz,2H),1.36(s,9H)。在室温下搅拌含MA6-093(195mg，0.74mmol)的DCM:TFA(20:80，2mL)2小时，并且通过TLC来监测。在室温下蒸发TFA/DCM混合物，并且用MeOH(1mL)和水(3mL)洗涤。所得产物在冻干器中干燥以获得淡棕色固体为MA5-095。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.64(t,J＝5.6Hz,1H),7.87(m 4H),7.56-7.46(m,3H),3.514(q,J＝6.0Hz,2H),3.00(q,J＝65.6Hz,2H)。
N-{3-[(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基]丙基}苯甲酰胺(MA6-098)：使用一般性方法1(流程1)，这通过使用DMF(1.0mL)和DIPEA(1当量)，在60℃下加热MA6-019(53.9mg，0.78mmol)和MA6-094(50mg，1当量)(反应时间6小时)来以紫色固体形式获得(11mg，14％)。使用SiO2柱色谱法(洗脱剂：MeOH-DCM，0至20％MeOH)进行纯化。HPLC:87％[tR＝10.7分钟,梯度5-95％MeOH-水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.72(s,1H),8.49(t,J＝5.5Hz,1H),7.88–7.79(m,2H),7.55–7.48(m,1H),7.48–7.39(m,2H),3.41–3.36(m,1H),3.32–3.28(m,1H),2.74–2.58(m,2H),2.56–2.52(m,2H),2.05(dt,J＝13.2,4.9Hz,1H),1.75–1.68(m,3H)。HPLC–MS(ESI):):m/z 290.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):312.1[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C19H15N3O3的计算值：(MH)+289.14426，实测值：289.14431。
Figure BDA0001866541900001451
N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基氨基)乙基)苯甲酰胺(MA6-105)。使用一般性方法1(流程1)，这通过使用DMF(0.5mL)和DIPEA(159μL，0.9mmol)，在60℃下加热MA6-019(58.5mg，0.30mmol)和MA6-095(50mg，0.3mmol，参见流程3)(反应时间16小时)来以灰白色固体形式获得(20mg)。粗混合物通过使用MeOH-水(5-95％，含0.1TFA)梯度洗脱进行制备型HPLC来纯化以获得MA6-105.TFA盐。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.39(s,1H),9.22(brs,1H),9.11(brs,1H),8.70(t,J＝5.6Hz,1H),7.89-7.85(m,2H),7.58-7.54(m,1H),7.52-7.47(m,2H),4.35(宽d,1H),3.68-3.56(m,2H),3.21(brs,2H),2.69-2.65(s,2H),2.33-2.26(m,1H),2.08-1.97(m,1H)；HPLC–MS(ESI):):m/z 276[100％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900001461
3-(吲哚啉-1-基)哌啶-2,6-二酮(MA6-180-3)：这使用一般性方法1(流程1)(反应温度70℃，溶剂THF，反应时间16小时)，从MA6-019(150mg，1当量)和吲哚啉(62.0mg，1当量)以米色固体形式获得(62mg，53％)。使用SiO2柱色谱法(洗脱剂：MeOH-DCM，直至15％MeOH)进行纯化。HPLC:99％[tR＝13.6分钟,梯度5-95％MeOH-水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.81(s,1H),7.01(J＝7.2,0.8Hz,1H),6.93(td,J＝7.8,0.8Hz,1H),6.53(td,J＝7.4,0.9Hz,1H),6.48(d,J＝7.8Hz,1H),4.63(dd,J＝13.1,4.9Hz,1H),3.41(ddd,J＝9.6,8.4,5.9Hz,1H),3.27(q,J＝9.3Hz,1H),2.99–2.87(m,2H),2.79(ddd,J＝17.4,13.5,5.4Hz,1H),2.62–2.58(m,1H),2.20(qd,J＝13.1,4.4Hz,1H),2.01–1.92(m,1H)。HPLC–MS(ESI):):m/z 231.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):231.1[100％,(M+H]。HRMS(ESI+):m/z，C13H14N2O2的计算值：(M)+230.1055，实测值：230.1056。
流程4
Figure BDA0001866541900001462
方法2：使用微波小瓶，将邻苯二甲酸酐(110.1mg，1当量)和适当胺(1当量)的混合物溶解于乙酸(1mL)中，并且在微波中在120℃下加热反应20分钟。在反应完成(通过HPLC-MS来监测)之后，在减压下移除挥发物，并且用EtOAc和水来分配粗产物。干燥(Na2SO4)有机层，并且蒸发以得到纯净产物。
Figure BDA0001866541900001471
2-(2-羟基吡啶-4-基)异吲哚啉-1,3-二酮(MA6-090)：使用一般性方法2(流程4)，从邻苯二甲酸酐(110.12mg)和4-氨基吡啶-2-醇(148.12mg)以白色固体形式获得这种化合物(143mg，59％)。Mp:288℃(摄氏度)。HPLC:97％[tR＝13.3分钟,梯度5-95％MeOH-水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.76(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.99–7.96(m,2H),7.94–7.91(m,2H),7.51(d,J＝7.0Hz,1H),6.48(d,J＝2.0Hz,1H),6.40(dd,J＝7.0,2.0Hz,1H)。HPLC–MS(ESI):m/z 241.1[100％,(M+H)+],503.1.6[30％,(2M+Na)+],481.2[25％,(2M+H)+]。LC–MS(ESI+):241.1[100％,(M+H)+],263.0[15％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H8N2O3的计算值：(M)+240.0535，实测值：240.0538。
Figure BDA0001866541900001472
2-(2-羟基吡啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(MA6-100)：使用一般性方法2(流程4)，从邻苯二甲酸酐(110.12mg)和3-氨基吡啶-2-醇(148.12mg)以米色固体形式获得这种化合物(173mg，72％)。Mp:295℃(摄氏度)。HPLC:97％[tR＝12.1分钟,梯度5-95％MeOH-水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.20(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.98–7.95(m,2H),7.94–7.91(m,2H),7.68(dd,J＝6.8,2.1Hz,1H),7.56(d,J＝6.0Hz,1H),6.35(t,J＝6.8Hz,1H)。HPLC–MS(ESI):m/z 241.1[100％,(M+H)+],503.1[50％,(2M+Na)+],481.2[45％,(2M+H)+]。LC–MS(ESI+):241.1[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H8N2O3的计算值：(M+H)+241.0608，实测值：241.0617。
Figure BDA0001866541900001481
2-(6-羟基吡啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(MA6-104)：使用一般性方法2(流程4)，从邻苯二甲酸酐(110.12mg)和5-氨基吡啶-2-醇(148.12mg)以黄色固体形式获得这种化合物(121mg，50％)。Mp:284℃(摄氏度)。HPLC:95％[tR＝12.8分钟,梯度5-95％MeOH-水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):11.85(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.95–7.92(m,2H),7.90–7.87(m,2H),7.58(d,J＝2.7Hz,1H),7.49(dd,J＝9.7,2.8Hz,1H),6.42(d,J＝9.6Hz,1H)。HPLC–MS(ESI):m/z 241.1[100％,(M+H)+],503.1[60％,(2M+Na)+],481.2[40％,(2M+H)+]。LC–MS(ESI+):273.1[100％,(M+Na)+],241.1[95％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H8N2O3的计算值：(M+H)+241.0608，实测值：241.0615。
流程5
Figure BDA0001866541900001482
6-(3,4-二甲氧基苯基)-4,5-二氢哒嗪-3(2H)-酮(MA6-064)：将可商购获得的4-(3,4-二甲氧基苯基)-4-氧代丁酸(119.1mg，1当量)溶解于无水EtOH(0.5mL)中，并且添加单水合肼(48.7μL，2当量)(流程5)。将反应容器浸渍至预加热油中(外部温度90℃)，并且搅拌4小时。在反应完成(通过TLC来监测)之后，在减压下蒸发挥发物，并且使用SiO2柱色谱法(洗脱剂EtOAc-己烷，0–100％)纯化粗物质。以淡黄色固体形式获得标题化合物(103mg，87％)。Mp:164–166℃(报道值:165–167℃,170–173)。2,3HPLC:97％[tR＝13.3分钟,梯度5-95％MeOH-水(含0.1％TFA),30分钟]。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.55(s,1H,在D2O振荡的情况下降低85％),7.41(d,J＝2.0Hz,1H),7.18(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),6.87(d,J＝8.4Hz,1H),3.93(s,3H),3.92(s,3H),3.02–2.94(m,2H),2.64–2.57(m,2H)。HPLC–MS(ESI):m/z235.2[100％,(M+H)+],491.2[80％,(2M+Na)+],257.2[20％,(M+Na)+]。LC–MS(ESI+):m/z257.1[(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C12H14N2O3的计算值：(M)+234.1004，实测值：234.1004。
Figure BDA0001866541900001491
3-(异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(MA7-002)。使用一般性方法1(流程1)(反应温度72℃，溶剂THF(1.0mL)，反应时间14小时)，从MA6-019(100mg，1当量)和1,2,3,4-四氢异喹啉(62.0mg，1当量)以暗灰色固体形式获得这种化合物(79mg，66％)。使用SiO2柱色谱法(洗脱剂：MeOH-DCM，直至12％MeOH)进行纯化。HPLC:95％[tR＝9.4分钟,梯度5-95％IPA-水,20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.72(s,1H),7.25-7.18(m,4H),4.10(d,J＝10.8,2H),4.04(d,J＝10.8,2H),3.61(dd,J＝8.8,4.8Hz,1H),2.57(t,J＝6.4Hz,2H),2.107-2.011(m,2H)；HPLC–MS(ESI):m/z 231(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001492
3-(苯甲基(乙基)氨基)哌啶-2,6-二酮(MA7-004)。使用一般性方法1(流程1)(反应温度85℃，溶剂THF(1.0mL)，反应时间16小时)，从MA6-019(100mg，1当量)和N-苯甲基乙胺(70.4mg)以暗灰色固体形式获得这种化合物(29mg，22％)。使用SiO2柱色谱法(洗脱剂：MeOH-DCM，直至15％MeOH)进行纯化。HPLC:98％[tR＝9.4分钟,20:80MeOH-水,0.1％TFA,20分钟]。HPLC–MS(ESI):m/z 247(M+H)+；HRMS(ESI+):m/z，C14H18N2O2的计算值：(M+H)+247.1445，实测值：247.1372。
流程6
Figure BDA0001866541900001501
3-((苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)(甲基)氨基)哌啶-2,6-二酮(MA7-088)。向圆底烧瓶中的起始物质苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基甲胺(2.0g，13.23mmol)(流程6)中添加无水DCM和Boc酸酐(3.18g，14.55mmol)。将反应搅拌过夜，并且使用HPLC-MS加以监测。蒸发溶剂以获得黄色油状物，产物在室温下静置后结晶。将粗混合物溶解于EtOAc(150mL)中，并且用NaHCO3(50mL)和盐水(100mL)洗涤。干燥(Na2SO4)有机层，并且蒸发以获得呈油性黄色固体状的Boc-中间体(2.77g，83％)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.32(t,J＝6.0Hz,1H),6.83(d,J＝8.0Hz,1H),6.77(d,J＝1.6Hz,1H),6.69(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),5.97(s,2H),4.01(d,J＝6.0Hz,2H),1.38(s,9H)。在微波小瓶中，在惰性条件下将NaH(79.6mg，1.99mmol)添加至无水THF(1mL)和DMF(1mL)中。使混合物冷却至0℃，并且添加来自先前步骤的Boc-中间体(250mg，0.99mmol)，随后添加碘代甲烷(68.13μL，1.09mmol)，并且搅拌16小时。通过tlc来监测反应。产物用EtOAc(2x 30mL)萃取并蒸发。粗产物用EtOAc/己烷湿磨以获得甲基化Boc中间体(243mg，92％)，并且不经进一步纯化即用于下一步骤中。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ6.87(d,J＝8.0Hz,1H),6.79(s,1H),6.70(d,J＝8.0Hz,1H),5.98(s,2H),4.25(s,2H),2.71(s,3H),1.4(s,9H)。将来自先前反应的甲基化Boc-中间体(200mg，0.75mmol)溶解于THF(2.0mL)中，添加HCl(4M，940μL)，并且搅拌过夜。混合物用EtOAc(2x 20mL)萃取，干燥(Na2SO4)，蒸发，并且产物用EtOAc/己烷湿磨以获得呈黄色油状的MA7-086(118mg，78％)并不经进一步纯化即用于下一步骤中；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.12(appt,J＝0.8Hz,1H),6.97(m,2H),6.95(d,J＝1.2Hz,1H),6.05(s,2H),4.01(s,2H),2.48(s,3H)。使用一般性方法1(流程1)(在室温下搅拌反应，溶剂DMF，反应时间15小时)，从MA6-019(81.4mg，1当量)和MA7-086(970mg，1当量)以灰白色固体形式获得MA7-088(31mg，26％)。使用SiO2色谱法(洗脱剂：MeOH-DCM，直至10％MeOH)进行纯化。HPLC:100％[tR＝4.53分钟,5-20:80MeOH-含0.1％TFA的水,20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.636(brs,1H),6.89(d,J＝1.2Hz,1H),6.82(d,J＝8.0Hz,1H),6.76(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),5.97(appt,J＝0.8Hz 2H),3.65(d,J＝5.2Hz,2H),3.57(dd,J＝12,4.8Hz,1H),2.63-2.55(m,1H),2.52-2.47(m,1H),2.22(s,3H),2.11-2.00(m,1H),1.93-1.88(m,1H)；HPLC–MS(ESI):m/z 277(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001511
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺(MA6-116)。首先，在℃下用CO2Cl2(86.86μL，1mmol)处理含1-甲基-1H-咪唑-5-甲酸(128.1mg，1mmol)的THF(1.0mL)，将1滴DMF添加至混合物中，并且搅拌2小时。蒸发混合物并通过1H NMR来确认酰氯的形成，并且将产物用于下一步骤中。在0℃下将含3-氨基哌啶-2,6-二酮(128.1mg，1mmol)的THF(1.0mL)添加至酰氯混合物中。在室温下搅拌反应2小时，用EtOAc(5mL)稀释，用盐水洗涤。水层用EtOAc(2x 5mL)萃取，并且干燥(Na2SO4)合并的有机层并浓缩。使用用MeOH:DCM进行的SiO2色谱法(梯度洗脱，产物用10％MeOH洗脱)纯化粗产物以获得纯净MA6-116(25mg，11％)。HPLC:98.9％[tR＝6.02分钟,梯度MeOH:水,5-95％,含0.1％TFA,20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.86(s,1H),8.54(d,J＝8.4Hz,1H),7.77(s,1H),7.61(s,1H),4.73-4.66(m,1H),3.81(s,3H),2.81-2.73(m,1H),2.55(m,1H),2.10-2.04(m,1H),1.95(m,1H)；HPLC–MS(ESI):m/z 237(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001521
3-溴吡咯烷-2,5-二酮(MA7-020)。向丁二酰亚胺(5.0g，50.46mmol)于无水氯仿(10.0mL)中的溶液中添加溴(8.06g，50.46mmol)，并且在110℃下加热(密封管)。在1.5小时之后，使混合物冷却并蒸发(添加更多CHCl3)。粗物质NMR和TLC显示3种化合物(起始物质、单溴化产物和双溴化产物)的混合物，并且使用SiO2色谱法(EtOAc:己烷梯度洗脱)纯化混合物以获得呈无色油状的单溴化产物(1.79g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.66(s,1H),4.93(dd,J＝8.4,3.6Hz,1H),3.40(dd,J＝18.8,8.4Hz,1H),2.90(dd,J＝18.8,3.6Hz,1H)。HPLC–MS(ESI):m/z 176(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001522
3-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡咯烷-2,5-二酮(MA7-026)。将MA7-020(112mg，0.62mmol)和1,2,3,4-四氢异喹啉(83.8mg，0.62mmol)溶解于无水DMF(0.5mL)中，并且搅拌3小时。蒸发溶剂，并且添加水(5mL)。将水倾析，并且使黄色沉淀(94mg，65％)冷冻干燥。HPLC:98％[tR＝9.4分钟,10:90MeOH-水,0.1％TFA,20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.27(brs,1H),7.15-7.02(m,4H),4.06(dd,J＝8.8,6.0Hz,1H),3.96(d,J＝14.8Hz,1H),3.60(d,J＝14.8Hz,1H),2.99-2.93(m,1H),2.82-2.66(m,5H)；HPLC–MS(ESI):m/z 176(M+H)+；HPLC–MS(ESI):m/z 231(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001531
N-(2-氨基乙基)-2-(甲基氨基)苯甲酰胺(MA7-044)。如文献(WO2013/21363A1，第55页)中报道来制备这种化合物，并且使用TFA脱保护并以棕色油状物形式获得MA7-044(90％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.23(t,J＝5.6Hz,1H),7.59(appq,J＝5.2,1H),7.50(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),7.27(t,J＝8.4Hz,1H),6.61(d,J＝8.4Hz,1H),6.54(t,J＝8.0Hz,1H),3.30-3.26(m,1H),2.87-2.80(m,2H),2.75(d,J＝5.2Hz,3H),2.69-2.67(m,2H)
Figure BDA0001866541900001532
N-(2-((2,5-二氧代吡咯烷-3-基)氨基)乙基)-2-(甲基氨基)苯甲酰胺(MA7-046)。在2mL微波小瓶中，将MA7-044(108mg，0.56mmol)溶解于DMF(0.5mL)中，添加DIPEA(97.9μL)，并且搅拌混合物以使胶状胺MA7-044溶解。在室温下搅拌5分钟之后，添加MA7-020(100mg，0.56mmol)，并且在室温下搅拌混合物3-4小时。使用V-10蒸发混合物，并且分配于EtOAc(15mL)与NaHCO3水溶液(10mL)之间。干燥(Na2SO4)有机层以获得粗产物。使用制备型HPLC(MeOH:水，20:80，0.1％TFA)纯化产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.123(brs,1H),8.23(t,J＝5.2Hz,1H),7.59(q,J＝4.8Hz,1H),7.51(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),7.27(t,J＝8.4Hz,1H),6.6.1(dd,J＝8.4,0.8Hz,1H),6.54(t,J＝7.2Hz,1H),3.71-3.68(m,1H),3.31-3.24(m,2H),2.86-2.80(m,2H),2.75(d,J＝4.8Hz,3H),2.71-2.65(m,1H),2.34(dd,J＝18.0,5.2Hz,1H)；HPLC–MS(ESI):m/z 291(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001541
3-(异吲哚啉-2-基)吡咯烷-2,5-二酮(MA7-032)。在微波小瓶中，将异吲哚啉(66.95mg，0.56mmol)溶解于DMF(0.5mL)中，添加DIPEA(195.7μL)，并且在室温下搅拌5分钟。添加MA7-020(100mg，0.56mmol)，封盖小瓶并搅拌4小时，并且通过tlc来监测反应。添加NaHCO3(3mL)，用EtOAc(2x 5mL)萃取。干燥(Na2SO4)有机层以获得粗产物，其使用利用DCM/MeOH进行的SiO2色谱法(梯度洗脱)纯化，并且产物用约12％MeOH洗脱为淡黄色固体(77mg，63％)。HPLC:84％[tR＝4.54分钟,梯度MeOH-水5-95％,0.1％TFA,20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.28(br s,1H),7.25-7.18(m,4H),4.19(d,J＝12.8Hz,2H),4.01(dd,J＝8.4,5.2Hz,1H),3.95(d,J＝12.8Hz,2H),2.84(dd,J＝18.0,8.8Hz,1H),2.71(dd,J＝,17.6,1.6Hz,1H),HPLC–MS(ESI):m/z 217(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001542
3-(苯甲基(甲基)氨基)吡咯烷-2,5-二酮(MA7-038)：使用对于MA7-032所述的程序合成这种化合物，例外之处是使用甲基苯甲胺(51mg，0.42mmol)。使用DCM:MeOH梯度洗脱纯化粗化合物，并且产物用15％MeOH洗脱为灰白色固体(71mg，77％)。HPLC:100％[tR＝8.48分钟,MeOH:水,10:90,0.1％TFA,20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.28(br s,1H),7.33-7.23(m,5H),3.94(dd,J＝8.8,5.2Hz,1H),3.66(s,2H),2.72(dd,J＝18,8.8Hz,1H),2.61(dd,J＝18,5.2Hz,1H),2.14(s,3H)；HPLC–MS(ESI):m/z 219(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001551
2-(2,5-二氧代咪唑烷-4-基)-N-(4-吗啉代苯甲基)乙酰胺(MA6-148-4)。在0℃下向含乙内酰脲乙酸(100mg，mg，0.63mmol)的无水DMF(1.00-2.00mL)中添加EDC(122.7mg，0.79mmol)、DIPEA(1当量)、HOBT(85.4mg，0.63mmol)，并且搅拌反应15分钟。在氩气下添加(4-吗啉代苯基)甲胺(121.60mg，0.63mmol)，在0℃下搅拌反应30分钟，并且在室温下搅拌反应16小时。混合物用EtOAc(30mL)稀释，用水(20mL)洗涤。干燥(Na2SO4)有机层，蒸发，并且所得产物通过使用MeOH:DCM梯度洗脱进行的SiO2色谱法(产物用12％MeOH洗脱)纯化以产生灰白色固体(28mg，13％产率)。HPLC:96％[tR＝3.06分钟,MeOH:水,20:80,0.1％TFA,20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.45(t,J＝5.6Hz,1H),7.27(brs,1H),7.13(d,J＝8.4Hz,1H),6.88(d,J＝8.4Hz,1H),4.16(d,J＝5.6Hz,2H),4.05(t,J＝5.6Hz,1H),3.72(t,J＝4.4Hz,4H),3.05(t,J＝4.8Hz,4H),2.56-2.52(dd,与DMSO峰重叠,2H),2.32(dd,J＝15.2,7.6Hz,2H)；HPLC–MS(ESI):m/z 333(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001552
2-(2,5-二氧代咪唑烷-4-基)-N-((5-甲基吡嗪-2-基)甲基)乙酰胺(MA6-130)。使用对于MA6-148-4所述的程序合成这种化合物，例外之处是使用(5-甲基吡嗪-2-基)甲胺(123.2mg，1mmol)和乙内酰脲乙酸(158.1mg，1mmol)、DIPEA(348.4μmL)和DMF(2mL)。通过添加水(5.0mL)来使第一批产物沉淀，并且过滤以获得41mg。进一步蒸发滤液，并且用水(5mL)湿磨。以白色固体形式获得MA6-130(120mg，46％)。HPLC:98％[tR＝7.16分钟,梯度MeOH:水,5-95％,0.1％TFA,20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.56(s,1H),8.60(t,J＝6.0Hz,1H),8.45和8.46(2x s,2H),7.86(s,1H),4.36(d,J＝5.2Hz,2H),4.23(t,J＝5.2Hz,1H),2.64(dd,J＝15.6,4.4Hz,1H),2.47(dd,与残余DMSO峰部分地重叠,1H),2.46(s,3H)；HPLC–MS(ESI):m/z 264(M+H)+。
流程7
Figure BDA0001866541900001561
(3-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-3-氧代丙基)氨基甲酸叔丁酯(MA6-164)：将3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙酸(2.31g，12.23mmol)、EDC(1.90g，12.23mmol)和HOBt(247.8mg，1.83mmol)添加至无水DMF(60mL)中，并且在室温下搅拌10分钟。向这个混合物中添加3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(2.00g，12.23mmol)和DIPEA(6.39mL，36.68mmol)。接着在室温下搅拌混合物8小时，从而已变澄清和蓝色。添加乙酸乙酯(400mL)和NaHCO3(200mL，饱和水溶液)，并且分离各层。水层用乙酸乙酯(200mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机层并在真空下浓缩。用乙酸乙酯/己烷湿磨所得固体产生呈略微蓝白色固体状的产物(1.78g，49％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.80(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.23(d,J＝10.4Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),6.74(t,J＝7.0Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),4.52(q,J＝8.5Hz,1H,在D2O振荡的情况下变为三重峰),3.13(q,J＝7.0Hz,1H,在D2O振荡的情况下变为三重峰),2.78–2.65(m,1H),2.50–2.45(m,1H,与残余DMSO信号重叠),2.29(t,J＝7.2Hz,2H),1.95–1.87(m,2H),1.37(s,9H)。
Figure BDA0001866541900001571
3-氨基-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)丙酰胺盐酸盐(MA6-166)：在室温下向含MA6-164(1.76g，5.88mmol)的无水DCM(4mL)中添加HCl(4.41ml，4N于二噁烷中)。在室温下搅拌混合物2小时。以间歇方式在清洁浴中对混合物进行声波处理以使胶状物质再溶解。在真空下移除溶剂。用乙醇和己烷湿磨所得固体产生呈白色高度吸湿性固体状的产物(1.178g，100％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.84(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.54(d,J＝8.3Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.05–9.95(宽s,J＝7.0Hz,3H,在D2O振荡的情况下消失),3.13(q,J＝7.0Hz,1H,在D2O振荡的情况下变为三重峰),2.98(六重峰,3H,J 6.7Hz,2H,在D2O振荡的情况下变为三重峰),2.78–2.69(m,1H),2.61–2.54(m,2H),1.98–1.88(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 399.2[20％,(2M+H)+],200.2[100％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900001572
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-(苯基磺酰胺基)丙酰胺(MA6-168)：将三乙胺(104.9μL，0.75mmol)添加至含MA6-166(50mg，0.25mmol)的DCM(0.5mL)和DMF(0.2mL)中，并且使溶液冷却至0℃。将苯磺酰氯(32μL，0.25mmol)添加至混合物中，接着在0℃下搅拌混合物1小时，并且在室温下搅拌混合物1小时。浓缩混合物，随后添加乙酸乙酯(10mL)，并且用NaHCO3(5mL，饱和水溶液)和水(5mL)洗涤。干燥(Na2SO4)有机层并蒸发。残余物通过色谱法纯化以提供呈黄色固体状的产物(47mg，56％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.80–8.80(宽s,1H),8.31(d,J＝8.0Hz,1H),7.79(d,J＝8.0Hz,2H),7.65–7.55(m,3H),4.61–4.41(m,1H),2.93(t,J＝7.4Hz,2H),2.74–2.65(m,1H),2.50–2.45(m,1H,与残余DMSO信号重叠),2.31(t,J＝7.4Hz,2H),1.95–1.80(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 701.2[40％,(2M+Na)+],340.1[100％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900001581
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-[(3-硝基苯基)磺酰胺基]丙酰胺(MA6-174-1)：这使用3-硝基苯基磺酰氯(47.22mg)，与MA6-168以相同方式制备。通过从丙酮/己烷湿磨进行的纯化产生呈白色固体状的MA6-174-1(36mg，44％)。HPLC:96％[tR＝11.8分钟,梯度5-95％MeOH:水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.82(s,1H),8.53(t,J＝1.9Hz,1H),8.49(ddd,J＝8.2,2.3,1.0Hz,1H),8.28(d,J＝8.3Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.22(ddd,J＝7.8,1.8,1.0Hz,1H),8.07(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.91(t,J＝8.1Hz,1H),4.54–4.47(m,1H),3.01(t,J＝7.3Hz,2H),2.75–2.64(m,1H),2.50–2.45(m,1H,与残余DMSO信号重叠),2.32(t,J＝7.3Hz,2H),1.91–1.83(m,1H)。HPLC–MS(ESI-):m/z767.3[10％,(2M-H)-],383.1[20％,(M-H)-]。HRMS(ESI+):m/z，C14H16N4O7S的计算值：(M+Na)+407.0632，实测值：407.0625。
Figure BDA0001866541900001591
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-[(4-甲基苯基)磺酰胺基]丙酰胺(MA6-174-2)：这使用4-甲基苯基磺酰氯(40.62mg)，与MA6-168以相同方式制备以产生呈白色固体状的MA6-174-2(39mg，51％)。HPLC:>99％[tR＝4.4分钟,40％MeOH,60％水(含0.1％TFA),20分钟]。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.82(s,1H),8.28(d,J＝8.2Hz,1H),7.68(d,J＝8.3Hz,2H),7.56(t,J＝7.2Hz,1H),7.40(d,J＝8.3Hz,2H),4.52(q,J＝8.5Hz,1H),2.96–2.87(m,2H),2.76–2.64(m,1H),2.50–2.45(m,1H,与残余DMSO信号重叠),2.39(s,3H),2.30(t,J＝7.3Hz,2H),1.91–1.83(m,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 729.3[40％,(2M+Na)+],354.1[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C15H19N3O5S的计算值：(M+Na)+376.0938，实测值：407.0941。
Figure BDA0001866541900001592
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-[(2,6-二氟苯基)磺酰胺基]丙酰胺(MA6-174-4)：这使用2,6-二氟苯基磺酰氯(45.3mg)，与MA6-168以相同方式制备。通过硅胶色谱法进行的纯化产生呈白色固体状的MA6-174-4(39mg，49％)。HPLC:>99％[tR＝4.2分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.81(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.30(d,J＝8.2Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.24(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.77–7.67(m,1H),7.30(t,J＝9.3Hz,2H),4.50(q,J＝8.3Hz,1H),3.14(t,J＝7.6Hz,2H),2.76–2.63(m,2H),2.50–2.45(m,1H,与残余DMSO信号重叠),2.37(t,J＝7.5Hz,2H),1.95–1.82(m,2H)。LC–MS(ESI+):773.1[40％,(2M+Na)],398.0[100％,(M+Na)+]。HPLC–MS(ESI+):m/z 773.2[40％,(2M+Na)+],376.1[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C14H15F2N3O5S的计算值：(M+Na)+376.0593，实测值：398.0580。
Figure BDA0001866541900001601
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-((4-(三氟甲氧基)苯基)磺酰胺基)丙酰胺(MA6-174-5)：这使用4-(三氟甲氧基)苯基磺酰氯(55.5mg)，与MA6-168以相同方式制备。通过硅胶色谱法进行的纯化产生呈白色固体状的MA6-174-5(42mg，47％)。HPLC:>99％[tR＝5.4分钟,50％MeOH,50％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.82(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.29(d,J＝8.2Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.24(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.92(d,J＝8.8Hz,2H),7.83(s,1H),7.61(d,J＝8.8Hz,2H),4.52(q,J＝8.5Hz,1H),2.97(t,J＝7.3Hz,2H),2.74–2.63(m,2H),2.50–2.45(m,1H,与残余DMSO信号重叠),2.33(t,J＝7.3Hz,2H),1.93–1.84(m,2H)。LC–MS(ESI+):869.2[60％,(2M+Na)],446.1[100％,(M+Na)+],424.1[90％,(M+H)+]。HPLC–MS(ESI+):m/z 869.2[40％,(2M+Na)+],424.1[100％,(M+H)+]。m/z，C15H16F3N3O6S的计算值：(M+H)+424.0785，实测值：424.0775。
Figure BDA0001866541900001602
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-(噻吩-2-磺酰胺基)丙酰胺(MA6-174-7)：这使用噻吩-2-磺酰氯(38.9mg)，与MA6-168以相同方式制备。通过硅胶色谱法进行的纯化产生呈白色固体状的MA6-174-7(27mg，37％)。HPLC:96％[tR＝10.2分钟,梯度MeOH(5-95％)and水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.82(s,1H),8.31(d,J＝8.3Hz),7.94(dd,J＝4.9,1.3Hz,1H),7.85(s,1H),7.59(dd,J＝3.9,1.3Hz,1H),7.23–7.17(m,1H),4.53(q,J＝8.5Hz,1H),3.03(t,J＝7.5Hz,2H),2.78–2.64(m,2H),2.50–2.45(m,1H,与残余DMSO信号重叠),2.35(t,J＝7.5Hz,2H),1.92–1.85(m,2H)。LC–MS(ESI+):m/z 713.2[30％,(2M+Na)+],368.0[100％,(M+Na)+],346.1[40％,(M+H)+]。HPLC–MS(ESI+):m/z 713.2[40％,(2M+Na)+],346.1[40％,(M+H)+]。m/z，C12H15N3O5S的计算值：(M+Na)+368.0345，实测值：368.0342。
Figure BDA0001866541900001611
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-[(2-硝基苯基)磺酰胺基]丙酰胺(MA6-174-7)：这使用2-硝基苯基磺酰氯(47.22mg)，与MA6-168以相同方式制备。通过色谱法和从丙酮/己烷湿磨进行的纯化产生呈白色固体状的MA6-174-7(36mg，44％)。HPLC:96％[tR＝10.6分钟,梯度5-95％MeOH:水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.82(s,1H),8.31(d,J＝8.3Hz,1H),8.09(s,1H),8.04–7.95(m,2H),7.92–7.84(m,2H),7.91(t,J＝8.1Hz,1H),4.56–4.47(m,1H),3.11(t,J＝7.3Hz,2H),2.78–2.65(m,1H),2.50–2.45(m,1H,与残余DMSO信号重叠),2.37(t,J＝7.3Hz,2H),1.91–1.83(m,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 791.1[30％,(2M+Na)+],385.1[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):m/z 385.1[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C14H16N4O7S的计算值：(M+Na)+407.0632，实测值：407.0630。
流程8
Figure BDA0001866541900001621
(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯：在密封20mL微波小瓶中在50℃下加热3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(500mg，3.04mmol)和三乙胺(931μL，6.68mmol)于DCM(3mL)中的混合物30分钟。使混合物冷却至0℃并通过注射器来添加含二碳酸二叔丁酯(663mg，3.04mmol)的DCM(1mL)，并且在0℃下再继续搅拌30分钟。在真空下浓缩混合物，并且添加乙酸乙酯(200mL)。所得混合物用NaHCO3(100mL，饱和水溶液)、盐水(50mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并在真空下浓缩。用乙酸乙酯/己烷湿磨残余物产生呈黄色固体状的纯净产物(601mg，87％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,1H),7.12(d,J＝8.7Hz,1H),4.20(ddd,J＝11.5,8.7,6.2Hz,1H),2.69(ddd,J＝17.2,12.3,6.5Hz,1H),2.49–2.40(m,1H,与残余DMSO信号重叠),1.99–1.81(m,2H),1.38(s,9H)。
Figure BDA0001866541900001622
(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯：在0℃下将MA7-126(580mg，2.54mmol)添加至含氢化钠(111.8mg的于油中的60％混悬液，2.80mmol)的无水DMF(5mL)中。通过注射器来添加碘代甲烷(189.9μL，3.05mmol)。在0℃下搅拌混合物30分钟，并且在室温下搅拌混合物1小时。在使混合物冷却至0℃之后，小心地添加水(0.5mL)，随后添加NaHCO3(50mL，饱和水溶液)和乙酸乙酯(50mL)。分离有机层，并且水层再用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机层用盐水(25mL)洗涤并干燥(Na2SO4)，并且在真空下蒸发。通过柱色谱法进行的纯化产生呈黄色固体状的产物(436mg，71％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.19(d,J＝8.8Hz,1H),4.28(ddd,J＝11.8,8.7,6.1Hz,1H),2.95(s,3H),2.78(ddd,J＝15.8,12.1,6.5Hz,1H),2.67–2.56(m,1H),2.00–1.82(m,2H),1.38(s,9H)。
Figure BDA0001866541900001631
3-氨基-1-甲基哌啶-2,6-二酮(TFA盐)(MA7-130)：将MA7-129(410mg，1.69mmol)添加至三氟乙酸(4mL)和DCM(4mL)的混合物中，并且在室温下搅拌2小时。在真空下浓缩混合物，并且使残余TFA与乙酸乙酯(2×5mL)和DCM(2×5mL)一起共沸。使残余物冷冻干燥以产生呈灰白色胶状固体状的MA7-130(404mg，93％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.50(s,3H),4.24(宽d,J＝12.7Hz,1H),2.96(s,3H),2.84–2.67(m,2H),2.16–2.08(m,1H),2.05–1.92(m,1H)。
Figure BDA0001866541900001632
2-(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(MA7-166)：(Goosen L.,Plessis F.Pharm.Res.,2002,19,13-19.)使用油浴，在密封5mL微波小瓶中在122℃(外部油温度)下加热含MA7-130(195mg，0.81mmol)、邻苯二甲酸酐(120.8mg，0.81mmol)和乙酸钠(100.3mg，1.22mmol)的乙酸(1ml)16小时。使混合物冷却，并且通过过滤来分离固体。固体用乙酸(0.5mL)和乙醚(2×5mL)洗涤。用DCM/己烷湿磨残余物产生呈白色固体状的纯净MA7-166(183mg，82％)。HPLC:>99％[tR＝6.4分钟,30％MeCN,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.98–7.87(m,4H),5.24(dd,J＝13.1,5.4Hz,1H),3.03(s,3H),3.01–2.88(m,1H),2.78(ddd,J＝17.2,4.6,2.5Hz,1H),2.57(dq,J＝10.4,3.6Hz,1H),2.09(dtd,J＝13.2,5.5,2.5Hz,1H)。13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ171.7,169.6,167.1,134.9,131.2,123.4,49.6,31.1,26.6,21.2.HPLC–MS(ESI+):m/z 567.2[100％,(2M+Na)+],295.1[80％,(M+Na)+],273.1[80％,(M+H)+]。
流程9
Figure BDA0001866541900001641
2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙酰氯(SY1-182)：在0℃下向邻苯二甲酰甘氨酸(0.300g，1.46mmol)于CH2Cl2中的溶液中添加草酰氯(1.480g，11.66mmol)和DMF(0.010g，0.137mmol)。在0℃下搅拌混合物30分钟，接着升温至室温，并且搅拌3小时。在减压下移除溶剂。将固体残余物溶解于CH2Cl2中，并且在减压下蒸发(将这个程序重复三次)。在真空下干燥粗产物以提供黄色固体(0.310g，95％)。这种化合物不经进一步纯化即用于下一反应。1HNMR(500MHz,CDCl3).δ7.91(dd,J＝5.5,3.2Hz,2H),7.79(dd,J＝5.5,3.1Hz,2H),4.82(s,2H)。
Figure BDA0001866541900001651
2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-乙基乙酰胺(SY1-184)：向SY1-182(0.090g，0.40mmol)于3mL CH3CN中的溶液中添加乙胺(2M于THF中，2mL，0.80mmol)。在室温下搅拌混合物16小时。在减压下移除溶剂，并且固体残余物用CH2Cl2和己烷湿磨。产物依次用H2O和己烷洗涤，并且在真空下干燥以提供呈白色固体状的产物(0.068g，74％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.20(app t,J＝5.5Hz,1H),7.92-7.89(m,2H),7.88-7.86(m,2H),4.15(s,2H)。3.08(qd,J＝7.2,5.5Hz,2H),1.01(t,J＝7.2Hz,3H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ167.55,165.58,134.53,131.78,123.17,40.14,33.61,14.60。HPLC–MS(ESI+):m/z 487.2[100％,(2M+Na)+],255.2[90％,(M+Na)+],233.2[50％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900001652
2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙酰胺(SY2-009)：在0℃下向SY1-182(0.300g，1.34mmol)于CH2Cl2(5mL)中的溶液中添加氨溶液(7N于MeOH中，0.57mL，4.02mmol)。使混合物升温至室温，并且搅拌2小时。混合物用己烷稀释并过滤。收集在玻璃料上的固体产物依次用水(20mL)和己烷(30mL)洗涤，并且在真空下干燥以产生呈白色固体状的产物(0.200g，74％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.91–7.90(m,2H),7.87–7.85(m,2H)7.69(s,1H),7.25(s,1H),4.15(s,2H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ167.92,167.56,134.53,131.75,123.17,39.95。HPLC–MS(ESI+):m/z 431.1[100％,(2M+Na)+],227.2[60％,(M+Na)+],205.2[80％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900001661
N-乙酰基-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙酰胺(SY2-013)：向SY2-009(0.200g，0.937mmol)于乙酸酐(3mL)中的混悬液中添加H2SO4(5μL，0.094mmol)。在90℃下搅拌混合物3小时。使混合物冷却至室温，并且用饱和NaHCO3(30mL)淬灭。混合物用EtOAc萃取三次。合并的有机层经Na2SO4干燥并过滤。在减压下浓缩滤液，并且粗产物通过SiO2色谱法(0–50梯度洗脱，EtOAc/己烷)纯化以提供呈白色固体状的产物(0.160g，67％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.16(s,1H),7.94–7.93(m,2H),7.90-7.88(m,2H),4.60(s,2H),2.15(s,3H)。13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ171.24,168.12,167.36,134.79,131.51,123.37,41.96,24.47。HPLC-MS(ESI+):m/z 515.2(2M+Na)+,269.1(M+Na)+,247.2(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001662
N-乙酰基-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-甲基乙酰胺(SY2-028)：在0℃下向SY2-013(0.060g，0.244mmol)于无水DMF(1mL)中的溶液中添加NaH(60％矿物油分散液，0.012g，0.316mmol)。在0℃下搅拌混合物15分钟，接着添加MeI(20μL，0.317mmol)。使混合物达到室温并搅拌2小时，并且用水淬灭并用EtOAc萃取三次。合并的有机层经Na2SO4干燥并过滤。在减压下浓缩滤液，并且粗产物通过SiO2色谱法(0-50梯度洗脱，EtOAc/己烷)纯化以提供呈白色固体状的产物(0.052g，83％)。HPLC:99％[tR＝7.01分钟,45％MeOH,55％水(含0.1％TFA),20分钟,254nm]1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.94–7.90(m,2H),7.90–7.88(m,2H),4.80(s,2H),3.19(s,3H),2.36(s,3H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ171.93,169.36,167.42,134.78,131.52,123.35,43.61,31.51,25.60。HPLC-MS(ESI+):m/z 543.2(2M+Na)+,283.1(M+Na)+,261.1(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001671
2-(4-硝基-1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙酸(SY2-005)：使含3-硝基邻苯二甲酸酐(0.500g，2.589mmol)和甘氨酸(0.194g，2.589mmol)的AcOH(20mL)回流过夜。
在减压下浓缩溶液，并且将热的1,4-二噁烷(5mL)添加至固体残余物中。过滤未溶解物质，并且用1mL热的1,4-二噁烷洗涤两次。滤液用水(10mL)稀释。过滤形成的白色固体产物，并且用水(5mL)洗涤三次，随后用己烷(20mL)洗涤。在真空下干燥产物以提供呈白色固体状的SY2-005(0.520g，80％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.39(br s,1H),8.35(d,J＝8.1Hz,1H),8.25(d,J＝7.5Hz,1H),8.12(t,J＝7.8Hz,1H),4.34(s,2H)。HPLC-MS(ESI+):m/z 523.1(2M+Na)+,273.1(M+Na)+,251.1(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001672
2-(4-硝基-1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙酰氯(SY2-007)：向SY2-005(0.400g，1.599mmol)于SOCl2(5mL)中的混悬液中添加DMF(0.012g，0.164mmol)，并且在75℃下搅拌混合物3小时。在减压下移除SOCl2，并且使残余物与CH2Cl2(5mL)共蒸发三次。在真空下干燥固体残余物以提供呈黄色固体状的产物(0.430g，100.2％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.23(dd,J＝8.0,1.0Hz,1H),8.21(dd,J＝7.0,1.0Hz,1H),8.00(dd,J＝8.0,7.5Hz,1H),4.86(s,3H)。
Figure BDA0001866541900001681
N-乙基-2-(4-硝基-1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙酰胺(SY2-008)：这种化合物使用对于SY1-184所述相同的程序来合成，例外之处是使用SY2-007(0.100g，0.372mmol)和乙胺(2M于THF中，0.372mL，0.744mmol)，以提供灰白色固体(0.065g，63％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.34(dd,J＝8.1,0.9Hz,1H),8.23(dd,J＝7.5,0.9Hz,1H),8.22(与芳族信号部分地重叠,1H),8.10(t,J＝8.1Hz,1H),4.17(s,2H),3.09(qd,J＝7.2,5.5Hz,2H),1.01(t,J＝7.2Hz,3H)。HPLC-MS(ESI+):m/z 577.1(2M+Na)+,300(M+Na)+,278.1(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001682
2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸(SY2-021)：这种化合物使用对于SY2-005所述相同的程序来合成，例外之处是使用邻苯二甲酸酐(1.00g，6.752mmol)和DL-丙氨酸(0.602，6.752mmol)，以提供呈灰白色固体状的标题化合物(1.301g，88％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.11(br s,1H),7.92–7.89(m,2H),7.88–7.86(m,2H),4.88(q,J＝7.3Hz,1H),1.55(d,J＝7.3Hz,3H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ171.03,167.15,134.76,131.30,123.30,46.95,14.83.HPLC-MS(ESI+):m/z 461.1(2M+Na)+,242.1(M+Na)+,220.1(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001683
2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酰氯(SY2-041)：这种化合物使用对于SY2-007所述相同的程序来合成，例外之处是使用SY2-021(1.300g，5.93mmol)和DMF(0.043g，0.593mmol)，以提供呈黄色固体状的标题化合物(1.340g，95％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.91(dd,J＝5.5,3.1Hz,2H),7.79(dd,J＝5.5,3.0Hz,2H),5.17(q,J＝7.2Hz,1H),1.79(d,J＝7.2Hz,3H)。
Figure BDA0001866541900001691
2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-乙基丙酰胺(SY2-047)：在0℃下向SY2-041(0.200g，0.842mmol)于CH2Cl2(3mL)中的溶液中添加乙胺(2M于THF中，0.85mL，1.700mmol)。在0℃下搅拌混合物2小时。在减压下移除溶剂，并且固体残余物通过SiO2色谱法(0–40梯度洗脱，EtOAc/己烷)纯化以提供呈白色固体状的产物(0.176g，85％)。HPLC:99％[tR＝5.78分钟,45％MeOH,55％水(含0.1％TFA),20分钟,254nm]1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.02(app t,J＝5.6Hz,1H),7.89–7.84(m,4H),4.68(q,J＝7.3Hz,1H),3.06(qd,J＝7.2,5.6Hz,2H),1.53(d,J＝7.3Hz,3H),0.97(t,J＝7.2Hz,3H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ168.17,167.43,134.34,131.88,123.01,48.11,33.81,14.95,14.66。HPLC–MS(ESI+):m/z 515.2(2M+Na)+,247.2(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001692
2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酰胺(SY2-043)：这种化合物使用对于SY2-009所述相同的程序来合成，例外之处是使用SY2-041(0.600g，2.525mmol)和NH3(7N于MeOH中，0.800mL，5.600mmol)，以提供呈灰白色固体状的标题化合物(0.473g，86％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.88–7.84(m,4H),7.55(s,1H),7.17(s,1H),4.68(q,J＝7.3Hz,1H),1.54(d,J＝7.3Hz,3H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ170.63,167.46,134.34,131.82,123.00,48.05,14.91。HPLC–MS(ESI+):m/z 459.2(2M+Na)+,219.1(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001701
N-乙酰基-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酰胺(SY2-048)：这种化合物使用对于SY2-013所述相同的程序来合成，例外之处是使用SY2-043(0.400g，1.833mmol)和H2SO4(0.018g，0.184mmol)。粗产物通过SiO2色谱法(0–40梯度洗脱，EtOAc/己烷)纯化以提供呈白色固体状的标题化合物(0.378g，78％)。HPLC:99％[tR＝5.99分钟,45％MeOH,55％水(含0.1％TFA),20分钟,254nm]。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.88(s,1H),7.90-7.85(m,4H),4.97(q,J＝7.2Hz,1H),2.21(s,3H),1.52(d,J＝7.2Hz,3H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ171.62,169.70,167.19,134.51,131.70,123.13,49.13,25.21,14.70。HPLC–MS(ESI+):m/z543.2(2M+Na)+,283.1(M+Na)+,261.2(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001702
N-乙酰基-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-甲基丙酰胺(SY2-052)：这种化合物使用对于SY2-028所述相同的程序来合成，例外之处是使用SY2-048(0.201g，0.772mmol)、NaH(60％矿物油分散液，0.040g，1.00mmol)和MeI(0.143g，1.01mmol)，以提供呈无色油状的标题化合物(0.082g，54％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.85(dd,J＝5.4,3.0Hz,2H),7.74(dd,J＝5.5,3.0Hz).5.55(q,J＝7.1Hz,1H),3.15(s,3H),2.35(s,3H),1.67(d,J＝7.0,3H)。13C NMR(125MHz,CDCl3)δ173.61,173.07,167.58,134.42,131.82,123.73,50.75,32.31,25.68,15.61。HPLC–MS(ESI+):m/z 571.3(2M+Na)+,297.1(M+Na)+,275.1(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001711
2-(4-硝基-1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸(SY2-023)：这种化合物使用对于SY2-005所述相同的程序来合成，例外之处是使用3-硝基邻苯二甲酸酐(1.500g，7.768mmol)和DL-丙氨酸(0.692，7.767mmol)，以提供呈灰白色固体状的标题化合物(1.723g，84％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.22(br s,1H),8.34(dd,J＝8.1,0.9Hz,1H),8.22(dd,J＝7.5,0.9Hz,1H),8.10(t,J＝7.8Hz,1H),4.94(q,J＝7.3Hz,1H),1.55(d,J＝7.3Hz,3H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ170.65,165.16,162.54,144.41,136.64,133.09,128.71,127.15,122.59,47.48,14.54。HPLC–MS(ESI+):m/z 551(2M+Na)+,265.1(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001712
2-(4-硝基-1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酰氯(SY2-042)：这种化合物使用对于SY2-007所述相同的程序来合成，例外之处是使用SY2-023(1.500g，5.678mmol)和DMF(0.042g，0.568mmol)，以提供呈棕色油状的标题化合物(1.864g，110％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.21–8.18(m,2H),8.00(t,J＝7.8Hz,1H),5.19(q,J＝7.2Hz,1H),1.82(d,J＝7.2Hz,3H)。
Figure BDA0001866541900001721
N-乙基-2-(4-硝基-1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酰胺(SY2-046)：这种化合物使用对于SY2-047所述相同的程序来合成，例外之处是使用SY2-042(0.300g，1.061mmol)和乙胺(2M于THF中，1.1mL，2.2mmol)，以提供呈浅黄色固体状的标题化合物(0.223g，72％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.31(dd,J＝8.1,0.9Hz,1H),8.19(dd,J＝7.5,0.9Hz,1H),8.07(dd,J＝8.1,7.5Hz,1H),8.04(app t,J＝5.6Hz,1H),4.69(q,J＝7.2Hz,1H),3.07(qd,d,J＝7.2,5.6Hz,2H),1.52(d,J＝7.2Hz,3H),0.97(t,J＝7.2Hz,3H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ167.77,165.44,162.87,144.26,136.17,133.69,128.14,126.72,123.08,48.05,33.81,14.65,14.64。HPLC–MS(ESI+):m/z 605.2(2M+Na)+,314.2(M+Na)+,292.2(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001722
2-(4-硝基-1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酰胺(SY2-045)：这种化合物使用对于SY2-009所述相同的程序来合成，例外之处是使用SY2-042(1.00g，3.538mmol)和NH3(7N于MeOH中，1.1mL 7.700mmol)，以提供呈灰白色固体状的标题化合物(0.602g，65％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.30(d,J＝8.0Hz,1H),8.18(d,J＝7.4Hz,1H),8.07(t,J＝7.8Hz,1H),7.59(s,1H),7.21(s,1H),4.68(q,J＝7.3Hz,1H),1.52(d,J＝7.3Hz,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 549.1(2M+Na)+,264.1(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001731
N-乙酰基-2-(4-硝基-1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酰胺(SY2-049)：这种化合物使用对于SY2-013所述相同的程序来合成，例外之处是使用SY2-045(0.600g，2.280mmol)和H2SO4(0.022g，0.022mmol)。粗产物通过SiO2色谱法(0-60梯度洗脱，EtOAc/己烷)纯化以提供呈浅黄色固体状的标题化合物(0.453g，65％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.87(s,1H),8.31(dd,J＝8.1,0.9Hz,1H),8.19(dd,J＝7.5,0.9Hz,1H),8.08(t,J＝7.8Hz,1H),4.98(q,J＝7.1Hz,1H),2.22(s,3H),1.50(d,J＝7.1Hz,3H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ171.78,169.22,165.21,162.61,144.28,136.31,133.53,128.33,126.87,123.04,49.37,25.32,14.40。HPLC–MS(ESI+):m/z 633.1(2M+Na)+,328.2(M+Na)+,306.2(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001732
N-乙酰基-2-(4-氨基-1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酰胺(SY2-053)：将圆底烧瓶装以Pd/C(10％于活性炭上，0.030mg)，并且添加EtOAc(3mL)。将SY2-049(0.150g，0.419mmol)于MeOH(3mL)中的溶液缓慢添加至烧瓶中，并且连接氢气气球。在室温下搅拌混合物6小时。混合物经硅藻土垫过滤，并且在减压下浓缩滤液。残余物用MeOH和己烷湿磨以提供呈黄色固体状的标题化合物(0.112g，83％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.87(s,1H),7.44(dd,J＝8.4,7.0Hz,1H),6.99–6.96(m,2H),6.47(br s,2H),4.87(q,J＝7.1Hz,1H),2.20(s,3H),1.49(d,J＝7.1Hz,3H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ171.56,170.02,168.69,167.39,146.52,135.17,132.46,121.34,110.68,109.14,48.74,25.20,14.82。HPLC–MS(ESI+):m/z 573.3(2M+Na)+,298.2(M+Na)+,276.2(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001741
N-乙酰基-N-甲基-2-(4-硝基-1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酰胺(SY2-054)：这种化合物使用对于SY2-028所述相同的程序来合成，例外之处是使用SY2-053(0.150g，0.491mmol)、NaH(60％矿物油分散液，0.026g，0.639mmol)和MeI(0.091g，0.641mmol)，以提供呈黄色油状的标题化合物(0.081g，54％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.32(dd,J＝8.1,0.9Hz,H),8.20(dd,J＝7.5,0.9Hz,1H),8.09(t,J＝8.0Hz,1H),5.63(q,J＝7.0Hz,1H),3.08(s,3H),2.28(s,3H),1.54(d,J＝7.0Hz,3H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ173.06,172.82,165.27,162.60,144.40,136.52,133.07,128.68,127.14,122.61,50.84,31.94,25.30,14.63。HPLC–MS(ESI+):m/z 661.2(2M+Na)+,342.1(M+Na)+,320.2(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001742
N-乙酰基-2-(4-氨基-1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-甲基丙酰胺(SY2-056)：这种化合物使用对于SY2-053所述相同的程序来合成，例外之处是使用SY2-054(0.060g，0.188mmol)和Pd/C(10％于活性炭上，0.012mg)，以提供呈黄色固体状的标题化合物(0.049g，91％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.44(dd,J＝8.4,6.9Hz,1H),6.99–6.65(m,2H),6.50(br s,2H),5.48(q,J＝7.0Hz,1H),3.02(s,3H),2.28(s,3H),1.47(d,J＝7.0Hz,3H),13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ173.70,171.84,168.55,167.28,146.69,135.40,131.87,121.67,110.94,108.39,49.44,31.67,25.23,15.12。HPLC–MS(ESI+):m/z 601.3(2M+Na)+,312.1(M+Na)+,290.2(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001751
2-(4-氨基-1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-乙基丙酰胺(SY2-055)：这种化合物使用对于SY2-053所述相同的程序来合成，例外之处是使用SY2-046(0.100g，0.343mmol)和Pd/C(10％于活性炭上，0.020mg)，以提供呈黄色固体状的标题化合物(0.082g，91％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.97(app t,J＝5.7Hz,1H),7.43(dd,J＝8.4,7.0Hz,1H),7.04–6.80(m,2H),6.44(br s,2H),4.59(q,J＝7.3Hz,1H),3.09–3.03(m,2H),1.49(d,J＝7.3Hz,3H),0.98(t,J＝7.2Hz,3H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ168.99,168.47,167.62,146.42,135.00,132.63,121.17,110.58,109.46,47.65,33.81,15.07,14.67。HPLC–MS(ESI+):m/z545.2(2M+Na)+,261.2(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001752
(2S,3S)-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-3-甲基戊酰氯(SY2-019)：这种化合物使用对于SY2-007所述相同的程序来合成，例外之处是使用邻苯二甲酰基-L-异亮氨酸(1.00g，3.827mmol)和DMF(0.028g，0.380mmol)，以提供呈棕色油状的标题化合物(1.864g，110％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.93(dd,J＝5.4,3.1,2H),7.80(dd,J＝5.5,3.1,2H),4.82(d,J＝8.6Hz,1H),2.52–2.50(m,1H),1.49–1.43(m,1H),1.14(d,J＝6.6Hz,3H),1.12–1.04(m,1H),0.87(t,J＝7.4Hz,3H)。
Figure BDA0001866541900001761
(2S,3S)-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-3-甲基戊酰胺(SY2-031)：这种化合物使用对于SY2-009所述相同的程序来合成，例外之处是使用SY2-019(0.600g，2.145mmol)和NH3(7N于MeOH中，0.9mL，6.300mmol)，以提供呈灰白色固体状的标题化合物(0.460g，82％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.90–7.85(m,4H),7.50(s,1H),7.13(s,1H),4.35(d,J＝9.0Hz,1H),2.54–2.48(m,1H),1.40–1.35(m,1H),0.99(d,J＝6.7Hz,3H),0.96–0.84(m,1H),0.78(t,J＝7.4Hz,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 543.3(2M+Na)+,283.2(M+Na)+,261.2(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001762
(2S,3S)-N-乙酰基-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-3-甲基戊酰胺(SY2-033)：这种化合物使用对于SY2-013所述相同的程序来合成，例外之处是使用SY2-031(0.46g，1.767mmol)和H2SO4(0.017g，0.177mmol)。粗产物通过SiO2色谱法(0-40％梯度洗脱，EtOAc/己烷)纯化以提供呈白色固体状的标题化合物(0.402g，75％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.84(s,1H),7.91–7.86(m,4H),4.67(d,J＝7.4Hz,1H),2.46–2.40(m,1H),2.20(s,3H),1.48–1.42(m,1H),0.99–0.93(m,1H),0.95(d,J＝6.8Hz,3H),0.81(t,J＝7.3Hz,3H)。13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ171.69,168.48,167.57,134.66,131.34,123.17,58.09,34.09,25.36,24.97,16.29,11.17。HPLC–MS(ESI+):m/z 627.4(2M+Na)+,303.2(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001771
2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-3-甲基丁酰氯(SY2-016)：这种化合物使用对于SY2-007所述相同的程序来合成，例外之处是使用邻苯二甲酰基-DL-缬氨酸(0.50g，2.022mmol)和DMF(0.015g，0.0205mmol)，以提供呈黄色油状的标题化合物(0.548g，102％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.93(dd,J＝5.5,3.1Hz,2H),7.81(J＝5.5,3.1Hz,2H),4.74(d,J＝8.4Hz,1H),2.75(m,1H),1.16(d,J＝6.6Hz,3H),0.92(d,J＝6.9Hz,3H)。
Figure BDA0001866541900001772
2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-3-甲基丁酰胺(SY2-029)：这种化合物使用对于SY2-009所述相同的程序来合成，例外之处是使用SY2-016(0.400g，1.506mmol)和NH3(7N于MeOH中，0.65mL，4.550mmol)，以提供呈灰白色固体状的标题化合物(0.261g，70％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.91–7.85(m,4H),7.49(s,1H),7.11(s,1H),4.27(d,J＝8.6Hz,1H),2.70–2.63(m,1H),1.02(d,J＝6.7Hz,1H),0.77(d,J＝6.7Hz,1H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ169.49,167.69,134.53,131.37,123.16,58.43,21.17,20.98,19.31。HPLC–MS(ESI+):m/z 515.3(2M+Na)+,269.1(M+Na)+,247.1(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001773
(S)-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-4-甲基戊酰氯(SY2-017)：这种化合物使用对于SY2-007所述相同的程序来合成，例外之处是使用邻苯二甲酰基-L-亮氨酸(1.00g，3.827mmol)和DMF(0.028g，0.380mmol)，以提供呈黄色油状的标题化合物(1.20g，108％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.92(dd,J＝5.5,3.1Hz,2H),7.79(dd,J＝5.5,3.0Hz,2H),5.13(dd,J＝11.1,4.4Hz,1H),2.37(ddd,J＝14.2,11.1,4.2Hz,1H)。2.04(ddd,J＝14.3,10.1,4.3Hz,1H),11.54–1.50(m,1H),0.97(d,J＝6.6Hz,3H),0.94(d,J＝6.6Hz,3H)
Figure BDA0001866541900001781
(S)-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-4-甲基戊酰胺(SY2-030)：这种化合物使用对于SY2-009所述相同的程序来合成，例外之处是使用SY2-017(0.500g，1.788mmol)和NH3(7N于MeOH中，0.760mL，5.250mmol)，以提供呈灰白色固体状的标题化合物(0.363g，78％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.90–7.85(m,4H),7.57(s,1H),7.19(s,1H),4.64(dd,J＝11.9,4.2Hz,1H),2.17(ddd,J＝13.9,11.9,3.9Hz,1H),1.86(ddd,J＝14.2,10.4,4.2Hz,1H),1.35–1.31(m,1H),0.85(d,J＝6.6Hz,3H),0.83(d,J＝6.6Hz,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z543.2(2M+Na)+,283.2(M+Na)+,261.2(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001782
S)-2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-乙基-4-甲基戊酰胺(SY2-036)：这种化合物使用对于SY2-047所述相同的程序来合成，例外之处是使用SY2-030(0.130g，0.465mmol)和乙胺(2M于THF中，0.470mL，0.940mmol)，以提供呈白色固体状的标题化合物(0.099g，74％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.05(app t,J＝5.6Hz,1H),7.91–7.85(m,4H),4.65(dd,J＝11.8,4.3Hz,1H),3.06(五重峰,J＝7.0Hz,2H),2.15(ddd,J＝13.9,11.8,3.8Hz,1H),1.87(ddd,J＝14.3,10.3,4.3Hz,1H)),1.37–1.29(m,1H),0.97(t,J＝7.2Hz,3H),0.85(d,J＝6.5Hz,3H),0.84(d,J＝6.5Hz,3H)。13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ167.93,167.75,134.52,131.56,123.15,51.41,36.6,33.82,24.72,23.23,20.75,14.63。HPLC–MS(ESI+):m/z599.3(2M+Na)+,311.2(M+Na)+,289.2(M+H)+。
流程10
Figure BDA0001866541900001791
一般性程序：将SG5-114(0.200g，0.660mmol)溶解于无水DMF(2mL)中，并且在室温下添加NaH(0.237mg，0.99mmol，1.5当量)。搅拌反应混合物30分钟，并且添加卤代烷RX(1.2当量)。在室温下搅拌混合物18小时。反应混合物用水(1mL)淬灭，并且使用BiotageV-10蒸发器移除溶剂。使用SiO2，利用EtOAc和己烷来纯化残余物。
Figure BDA0001866541900001792
2-(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮(MA7-148-1)：使用对于流程10所述的一般性程序，采用MeI(0.112g，0.790mmol)来制备这种化合物以提供呈灰白色固体状的标题化合物(0.098g，47％)。HPLC:99.8％[tR＝5.2分钟,35％CH3CN,65％水(含0.1％TFA),20分钟,254nm]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.36(dd,J＝8.1,0.7Hz,1H),8.25(dd,J＝7.5,0.7Hz,1H),8.13(t,J＝7.5Hz,1H),5.27(dd,J＝13.1,5.4Hz,1H),3.04(s,3H),2.95(ddd,J＝17.4,13.9,5.4Hz,1H),2.78(ddd,J＝17.4,4.3,3.5Hz,1H),2.57–2.48(m,1H),2.11–2.06(m,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 657.1(2M+Na)+,340.1(M+Na)+,318.1(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001801
2-(1-乙基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮(MA7-148-2)：使用对于流程10所述的一般性程序，采用EtI(0.123g，0.790mmo)来制备这种化合物以提供呈灰白色固体状的标题化合物(0.096g，44％)。HPLC:99.8％[tR＝5.97分钟,35％CH3CN,65％水(含0.1％TFA),20分钟,254nm]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.36(d,J＝8.0Hz,1H),8.25(d,J＝7.4Hz,1H),8.13(t,J＝7.8Hz,1H),5.28(dd,J＝13.0 5.4Hz,1H),3.69(q,J＝7.1Hz,2H),2.97(ddd,J＝17.1,13.9,5.4Hz,1H),2.80–2.67(m,1H),2.55–2.44(m,1H),2.11–2.06(m,1H),1.02(t,J＝7.0Hz,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 685.2(2M+Na)+,354.1(M+Na)+,332.1(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001802
2-(2,6-二氧代-1-丙基哌啶-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮(MA7-148-3)：使用对于流程10所述的一般性程序，采用n-PrI(0.135g，0.790mmol)来制备这种化合物以提供呈米色固体状的标题化合物(0.117g，51％)。HPLC:99.8％[tR＝5.97分钟,35％CH3CN,65％水(含0.1％TFA),20分钟,254nm]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.36(d,J＝8.0Hz,1H),8.24(d,J＝7.5Hz,1H),8.12(t,J＝7.8Hz,1H),5.29(dd,J＝13.0,5.4Hz,1H),3.62(m,2H),2.98(ddd,J＝17.1,14.4,5.4Hz,1H),2.75–2.73(m,1H),2.54–2.44(m,1H),2.11–2.06(m,1H),1.45(六重峰,J＝7.4Hz,2H),0.82(t,J＝7.4Hz,3H)。HPLC-MS(ESI+):m/z 713.2(2M+Na)+,368.1(M+Na)+,346.2(M+H)+。HRMS(ESI+):m/z，C16H15N3O6的计算值：(M+Na)+368.0856，实测值：368.0849。
Figure BDA0001866541900001811
2-(1-异丙基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮(MA7-184-4)：使用对于流程10所述的一般性程序，采用i-PrI(0.135g，0.790mmo)来制备这种化合物以提供呈黄色固体状的标题化合物(0.082g，36％)。HPLC:98％[tR＝20.6分钟,5–95梯度洗脱,CN3CN/H2O(含0.1％TFA),30分钟,254nm]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.36(d,J＝8.1Hz,1H),8.24(d,J＝7.5Hz,1H),8.13(t,J＝7.8Hz,1H),5.22(dd,J＝13.0,5.4Hz,1H),4.81(七重峰,J＝6.8Hz,1H),2.94(ddd,J＝17.1,13.9,5.4Hz,1H),2.73(dt,J＝14.6 2.8Hz,1H),2.57–2.43(m,1H),2.08–2.03(m,1H),2.29(d,J＝6.8Hz,6H)。HPLC-MS.(ESI+):m/z 713.2(2M+Na)+,346.2(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001812
2-(1-异丁基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮(MA7-148-5)：使用对于流程10所述的一般性程序，采用1-溴-2-甲基丙烷(0.108g，0.790mmo)来制备这种化合物以提供呈白色固体状的标题化合物(0.123g，54％)。HPLC:99.4％[tR＝12.7分钟,50％CH3CN,50％水(含0.1％TFA),20分钟,254nm]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.36(d,J＝8.0Hz,1H),8.25(d,J＝7.4Hz,1H),8.13(t,J＝7.8Hz,1H),5.29(dd,J＝13.0,5.4Hz,1H),3.60–3.40(m,2H),3.00(ddd,J＝18.6,14.2,5.4Hz,1H),2.84–2.74(m,1H),2.60–2.43(m,1H),2.15–2.05(m,1H),1.92–1.81(m,1H),0.83(d,J＝6.6Hz,6H)。HPLC-MS(ESI+):m/z741.2(2M+Na)+,382.2(M+Na)+,360.2(M+H)+。
流程11
Figure BDA0001866541900001821
一般性程序：将MA7-148-X溶解于无水乙醇中，接着在室温下添加新鲜制备的3MNH4Cl溶液，随后添加Fe粉(2当量)。在60℃下加热混合物1小时。添加额外Fe粉(2当量)，并且在80℃下加热混合物2小时。使混合物冷却至室温，并且添加水(5mL)。混合物用EtOAc(10mL×4)萃取。合并的EtOAc层经Na2SO4干燥并过滤。在减压下移除溶剂以产生所需产物。
Figure BDA0001866541900001822
4-氨基-2-(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(MA7-152)：使用对于流程11所述的一般性程序，采用MA7-148-1(0.040g，0.126mmol)、Fe(0.028g，0.500mmol)和3M NH4Cl(336μL)来制备这种化合物以提供呈黄色固体状的标题化合物(0.026g，72％)。HPLC:98.5％[tR＝13.8分钟,20％CH3CN,80％H2O(含0.1％TFA),20分钟,254nm]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.47(dd,J＝8.4,7.0Hz,1H),7.04–6.96(m,2H),6.53(brs,2H),5.11(dd,J＝13.0,5.4Hz,1H),3.01(s,3H),2.94(ddd,J＝17.2,13.9,5.4,1H),2.75(ddd,J＝17.1,4.5,2.6,Hz,1H),2.58–2.52(m,1H),2.06–2.02(m,1H),HPLC-MS(ESI+):m/z597.2(2M+Na)+,310.1(M+Na)+,288.2(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001823
4-氨基-2-(1-乙基-2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(MA7-164-1)：使用对于流程11所述的一般性程序，采用MA7-148-2(0.050g，0.15mmol)、Fe(0.0337g，0.60mmol)和3M NH4Cl(402.5μL)来制备这种化合物以提供呈绿色固体状的标题化合物(0.041g，90％)。HPLC:98％[tR＝14.1分钟,5–95梯度洗脱,CN3CN/H2O(含0.1％TFA),20分钟,254nm]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.47(dd,J＝7.6,6.4Hz,1H),7.02(d,J＝7.6Hz,1H),7.01(d,J＝6.4,1H),6.53(br s,2H),5.12(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),3.75(q,J＝7.0Hz,2H),2.96(ddd,J＝17.0,14.0,5.4Hz,1H),2.73(ddd,J＝17.2,4.4,2.6Hz,1H),2.57–2.49(m,1H),2.08–1.95(m,1H),1.02(t,J＝7.0Hz,3H)。HPLC-MS(ESI+):m/z 625.2(2M+Na)+,324.1(M+Na)+,302.1(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001831
4-氨基-2-(1-异丁基-2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(MA7-164-2)：使用对于流程11所述的一般性程序，采用MA7-148-5(0.050g，0.14mmol)、Fe(0.0311g，0.56mmol)和3M NH4Cl(371μL)来制备这种化合物以提供呈绿色固体状的标题化合物(0.044g，96％)。HPLC:97.7％[tR＝6.7分钟,40％CH3CN,60％H2O(含0.1％TFA),20分钟,254nm]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.47(dd,J＝8.4,6.8Hz,1H),7.03(d,J＝8.4Hz,1H),7.00(d,J＝6.8Hz,1H),6.52(br s,2H),5.15(dd,J＝13.0,5.4Hz,1H),3.53–3.46(m,2H),2.99(ddd,J＝17.1,14.1,5.3Hz,1H),2.82–2.67(m,1H),2.58–2.45(m,1H),2.11–1.94(m,1H),1.91–1.81(m,1H),0.82(d,J＝6.7Hz,6H)。HPLC-MS(ESI+):m/z 681.3(2M+Na)+,352.1(M+Na)+,330.2(M+H)+。HRMS(ESI+):m/z，C17H120N3O4的计算值：(M+H)+330.1454，实测值：330.1453。
Figure BDA0001866541900001841
4-氨基-2-(2,6-二氧代-1-丙基哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(MA7-164-3)：使用对于流程11所述的一般性程序，采用MA7-148-3(0.050g，0.14mmol)、Fe(0.0323g，0.58mmol)和3M NH4Cl(386μL)来制备这种化合物以提供呈绿色固体状的标题化合物(0.032g，70％)。HPLC:95.6％[tR＝6.3分钟,40％CH3CN,60％H2O(含0.1％TFA),20分钟,254nm]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.47(t,J＝7.6Hz,1H),7.02(d,J＝7.6Hz,1H),7.01(d,J＝7.6Hz,1H),6.52(br s,2H),5.13(dd,J＝13.0,5.4,1H),3.64–3.59(m,2H),2.97(ddd,J＝16.9,14.0,5.3Hz,1H),2.74(dt,J＝16.7,3.5Hz,1H),2.56–2.45(m,1H),2.05–1.98(m,1H),1.45(六重峰,J＝7.4Hz,2H),0.83(t,J＝7.4Hz,3H)。HPLC-MS(ESI+):m/z 653.3(2M+Na)+,338.1(M+Na)+,316.2(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001842
4-氨基-2-(1-异丙基-2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(MA7-164-4)使用对于流程11所述的一般性程序，采用MA7-148-5(0.050g，0.14mmol)、Fe(0.0323g，0.57mmol)和3M NH4Cl(386μL)来制备这种化合物以提供呈绿色固体状的标题化合物(0.042g，92％)。HPLC:99.4％[tR＝6.3分钟,40％CH3CN,60％H2O(含0.1％TFA),20分钟,254nm]。HPLC-MS(ESI+):m/z 653.2(2M+Na)+,338.1(M+Na)+,316.2(M+H)+。HRMS(ESI+):m/z，C16H17N3O4的计算值：(M+H)+316.1297，实测值：316.1294。
Figure BDA0001866541900001851
1-甲基-3-(2-甲基-5-硝基-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮(MA7-156)：使用对于流程10所述的一般性程序来制备这种化合物，例外之处是使用3-(2-甲基-5-硝基-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)哌啶-2,6-二酮MA7-164(0.050g，0.158mmol)、MeI(0.0269g，0.189mmol)和NaH(5.69mg，0.23mmol)，以提供呈白色固体状的标题化合物(0.098g，47％)。HPLC:91.4％[tR＝5.4分钟,30％CH3CN,70％H2O(含0.1％TFA),20分钟,254nm]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.98(t,J＝8.0Hz,1H),7.87(d,J＝8.2Hz,1H),7.82(d,J＝7.65Hz,1H),5.42(dd,J＝12.0,5.7Hz,1H),3.03(s,3H),2.92–3.86(m,1H),2.80–2.73(m,1H),2.69(s,3H),2.61–2.55(m,1H),2.22–2.16(m,1H)。HPLC-MS(ESI+):m/z 683.3(2M+Na)+,353.1(M+Na)+,331.1(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001852
3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代喹唑啉-3(4H)-基)-1-甲基哌啶-2,6-二酮(MA7-157)：使用对于流程11所述的一般性程序，采用MA7-156(0.010g，0.03mmol)、Fe(6.76mg，0.12mmol)和3M NH4Cl(80.7μL)来制备这种化合物。在室温下搅拌混合物24小时。产物通过使用对于流程9所述的一般性程序来纯化以提供呈黄色固体状的标题化合物(6.4mg，70％)。HPLC:93.3％[tR＝9.5分钟,5–95梯度洗脱,CN3CN/H2O(含0.1％TFA),20分钟,254nm]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.36(t,J＝8.0Hz,1H),6.99(br s,2H),6.60(d,J＝7.6Hz,1H),6.57(d,J＝8.0Hz,1H),5.23(dd,J＝11.8,5.7Hz,1H),3.04(s,3H),2.95–2.86(m,1H),2.76–2.96(m,2H),2.54(s,3H),2.17–2.13(m,1H)。HPLC-MS(ESI+):m/z 301.2(M+H)+。
Figure BDA0001866541900001861
(2-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基甲酰基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(SR1-066)：向Boc-2-氨基苯甲酸(0.500g，2.107mmol)于乙腈(20mL)中的混合物中添加DIPEA(1.10mL，6.321mmol)和HATU(0.961g，2.528mmol)。在搅拌5分钟之后，添加3-氨基哌啶-2,6-二酮，并且在室温下搅拌混合物20小时。在减压下蒸发溶剂，并且将EtOAc(30mL)添加至残余物中。有机层依次用HCl(1N，2×20mL)和饱和NaHCO3水溶液(2×20mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩。所得残余物通过快速柱色谱法，使用EtOAc/己烷(35-70％)作为洗脱剂来纯化以提供呈白色泡沫状的SR1-066(0.654g，89％)。HPLC:>99％[tR＝5.5分钟,60％MeOH,40％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.04(s,1H),8.39(dd,J＝8.6,1.2Hz,1H),8.07(s,1H),7.61–7.45(m,2H),7.10–6.86(m,2H),4.73(dt,J＝12.5,5.0Hz,1H),2.93–2.76(m,2H),2.76–2.65(m,1H),1.99–1.85(m,1H),1.51(s,9H)。HRMS(ESI+):m/z，C17H21N3O5Na的计算值：(M+Na)+370.1373，实测值：370.1378。HPLC-MS:HPLC–MS(ESI+):m/z 370.2[80％,(M+Na)+],348.2[90％,(M+H)+]717.3[100％,(2M+Na)+]。
Figure BDA0001866541900001862
2-氨基-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)苯甲酰胺盐酸盐(SR1-067-1)：在室温下搅拌含SR1-066(0.594g，1.710mmol)的HCl(4N于二噁烷中，5mL)4小时，接着在减压下浓缩。反应残余物用EtOAc(35mL)湿磨，并且离心所得白色固体混悬液。移除上清液，并且使固体与EtOAc(35mL)混合。离心混合物，并且将液体倾析。再重复这个洗涤过程两次，并且以白色固体形式分离SR1-067-1(485mg，定量)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.89(s,1H),8.74(d,J＝8.3Hz,1H),7.64(dd,J＝8.1,1.6Hz,1H),7.36–7.28(m,1H),6.97(d,J＝8.2Hz,1H),6.91–6.80(m,1H),5.75(bs,2H),4.76(ddd,J＝12.9,8.2,5.3Hz,1H),2.80(ddd,J＝17.2,13.3,5.5Hz,1H),2.56(m,1H),2.13(ddd,J＝13.0,4.5Hz,4.0Hz,1H),2.01–1.91(m,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 248.2[100％,(M+H)+]517.2[10％,(2M+Na]+。
Figure BDA0001866541900001871
2-(2-氯乙酰胺基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)苯甲酰胺(SR1-067-2)：将苯胺盐酸盐衍生物SR1-067-1(0.403g，1.427mmol)溶解于THF:水(6mL 1:1混合物)中，并且使混合物冷却至0℃。在0℃下向这个混合物中添加NaHCO3(0.296g，3.518mmol)和氯乙酰氯(0.280mL，1.466mmol)。在0℃下搅拌混合物5小时(随着反应进行，通过添加几滴饱和NaHCO3水溶液来将pH调整至7-8)。在减压下移除溶剂，接着将乙酸乙酯(40mL)和HCl(30mL，1N水溶液)添加至混合物中，并且分离各层。水层用EtOAc(25mL)萃取。合并有机层，并且干燥(Na2SO4)。在减压下浓缩有机层提供呈白色固体状的纯净SR1-067-2(0.463g，97％)。HPLC:>99％[tR＝6.0分钟,10％MeOH,90％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.73(s,1H),10.92(s,1H),9.02(d,J＝8.5Hz,1H),8.41(dd,J＝8.5,1.2Hz,1H),7.78(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),7.59–7.50(m,1H),7.23(td,J＝7.6,1.2Hz,1H),4.85(ddd,J＝12.5,8.4,5.4Hz,1H),4.39(s,2H),2.81(ddd,J＝17.3,13.3,5.6Hz,1H),2.58–2.50(m,1H),2.18–2.03(m,1H),2.02–1.93(m,1H)。HRMS(ESI+):m/z，C14H14ClN3O4Na的计算值：(M+Na)+346.0565，实测值：346.0564。HPLC–MS(ESI+):m/z 346.1[100％,(M+Na)+],324.1[50％,(M+H)+]。HPLC–MS(ESI-):m/z 322.1[100％,M-H-]。
Figure BDA0001866541900001881
4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-2,5-二酮(SR1-059)：向在压力烧瓶中的含氯乙酰胺SR1-067-2(0.039g，0.120mmol)的无水DMF(5mL)中添加NaH(0.024g，0.602mmol)。在80℃下加热反应(当心)16小时，并且冷却至室温，随后用水(1mL)淬灭。在减压下移除溶剂。通过快速柱色谱法，使用MeOH/DCM(3-10％)作为洗脱剂进行的纯化提供呈白色泡沫状的SR1-059(18.0mg，52％)。HPLC:>95％[tR＝11.7分钟,20％MeOH,80％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.94(s,1H),10.50(s,1H),7.77(dd,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.54(ddd,J＝8.1,7.3,1.6Hz,1H),7.35–7.17(m,1H),7.12(dd,J＝8.2,1.1Hz,1H),5.26(bs,1H),3.91(d,J＝15.3Hz,1H),3.74(d,J＝15.6Hz,1H),2.91–2.76(m,1H),2.63–2.52(m,1H),2.42(m,1H,与DMSO-d6峰重叠),1.96–1.80(m,1H)。HRMS(ESI+):m/z，C14H14N3O4的计算值：(M+H)+288.0978，实测值：288.0977；m/z，C14H13N3O4Na的计算值：(M+Na)+310.0796，实测值：310.0793。HPLC–MS(ESI+):m/z 597.3[60％,(2M+Na)+],288.1[100％,(M+H)+]。HPLC–MS(ESI-):m/z 286.0[30％,M-H-]。
用于合成焦谷氨酸衍生物的一般性程序：
在室温下搅拌焦谷氨酸(0.250g，1.936mmol，1.0当量)、DIPEA(1.012mL，5.808mmol，2当量)、EDC(0.445g，2.324mmol，1.2当量)和相应胺衍生物(2.324mmol，1.2当量)于乙腈(5mL)中的混合物18-20小时，并且在减压下浓缩。将所得残余物分配于DCM与10％盐水之间，并且接着分离有机层，干燥(Na2SO4)并在减压下浓缩。通过快速柱色谱法，使用MeOH/DCM(2-10％)作为洗脱剂来纯化粗产物提供相应产物。
Figure BDA0001866541900001891
(S)-N-苯甲基-5-氧代吡咯烷-2-甲酰胺(SR1-043)：通过使用苯甲基胺(0.254mL，2.324mmol)来遵循一般性程序。以白色蓬松固体形式获得SR1-043(0.319g，76％)。HPLC:>99％[tR＝11.7分钟,20％MeOH,80％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(s,1H),7.59(dd,J＝8.7,1.3Hz,2H),7.47(s,1H),7.31(dd,J＝8.5,7.4Hz,2H),7.13(t,J＝7.4Hz,1H),4.37(dd,J＝8.6,4.7Hz,1H),2.59–2.44(m,2H),2.44–2.27(m,2H)。HRMS(ESI+):m/z，C12H15N2O2的计算值：(M+H)+219.1128，实测值：219.1135；m/z，C12H14N2O2Na的计算值：(M+Na)+241.0947，实测值：241.0953。HPLC–MS(ESI+):m/z 241.2[40％,(M+Na)+],219.2[80％,(M+H)+],459.3[100％,(2M+Na)+]。HPLC–MS(ESI-):m/z 217.2[40％,M-H-]。
Figure BDA0001866541900001892
[(S)-5-氧代吡咯烷-2-羰基]-L-丙氨酸甲酯(SR1-045)：使用(L)-Ala-OMe.HCl(0.324g，2.324mmol)，遵循一般性程序。以白色泡沫形式获得SR1-045(0.208g，50％)。HPLC:>99％[tR＝5.3分钟,10％MeOH,90％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.64(dd,J＝26.2,5.0Hz,2H),4.55(t,J＝7.3Hz,1H),4.24(dd,J＝8.7,4.9Hz,1H),3.70(s,3H),2.54–2.39(m,2H),2.38–2.25(m,1H),2.25–2.11(m,1H),1.64(d,J＝7.3Hz,0.25H),1.40(d,J＝7.3Hz,2.75H)。HRMS(ESI+):m/z，C9H15N2O4的计算值：(M+H)+215.1026，实测值：215.1027；m/z，C9H14N2O4Na的计算值：(M+Na)+237.0845，实测值：237.0853。HPLC–MS(ESI+):m/z 429.2[95％,(2M+1)+],215.2[80％,(M+H)+],451.2[20％,(2M+Na)+]。
Figure BDA0001866541900001901
(S)-5-氧代-N-苯基吡咯烷-2-甲酰胺(SR1-046)：使用苯胺(0.212mL，2.324mmol)，遵循一般性程序。以白色泡沫形式获得SR1-046(0.078g，20％)。HPLC:>99％[tR＝12.0分钟,20％MeOH,80％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(s,1H),7.59(dd,J＝8.7,1.3Hz,2H),7.47(s,1H),7.31(dd,J＝8.5,7.4Hz,2H),7.13(t,J＝7.4Hz,1H),4.37(dd,J＝8.6,4.7Hz,1H),2.59–2.44(m,2H),2.44–2.27(m,2H)。HRMS(ESI+):m/z，C11H13N2O2的计算值：(M+H)+205.0971，实测值：205.0979,m/z，C11H12N2O2Na的计算值：(M+Na)+227.0791，实测值：227.0796。HPLC–MS(ESI+):m/z 227.1[70％,(M+Na)+],205.2[95％,(M+H)+],431.2[100％,(2M+Na)+]。HPLC–MS(ESI-):m/z 203.1[100％,M-H-]。
Figure BDA0001866541900001902
(S)-5-氧代-N-(((R)-四氢呋喃-2-基)甲基)吡咯烷-2-甲酰胺(SR1-047)：使用(R)-(-)-四氢糠基胺(0.237mL，2.324mmol)以及催化量的HOBt.H2O(0.074g，0.490mmol，0.25当量)，遵循一般性程序。以白色泡沫形式获得SR1-047(分离0.081g，20％，注意：产物是水溶性的，并且不良产率反映在处理期间大量损失至水相中)。HPLC:>95％[tR＝7.6分钟,10％MeOH,90％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.36(s,1H),7.05(s,1H),4.17(dd,J＝8.9,5.0Hz,1H),3.97(qd,J＝7.2,3.2Hz,1H),3.81(dt,J＝8.3,6.7Hz,1H),3.71(dt,J＝8.3,6.7Hz,1H),3.59(ddd,J＝13.8,6.6,3.2Hz,1H),3.08(ddd,J＝13.7,8.1,4.6Hz,1H),2.55–2.43(m,1H),2.40(dd,J＝9.6,6.8Hz,1H),2.36–2.25(m,1H),2.24–2.12(m,1H),2.05–1.92(m,1H),1.92–1.83(m,2H),1.58–1.44(m,1H)。HRMS(ESI+):m/z，C10H17N2O3的计算值：(M+H)+213.1233，实测值：213.1240；m/z，C10H17N2O3Na的计算值：(M+Na)+235.1053，实测值：235.1059。HPLC–MS(ESI+):m/z 213.2[50％,(M+H)+],425.3[100％,(2M+H)+]。
用于固相合成二肽衍生物SR1-060、SR1-061和SR1-062的一般性方案：在Rink酰胺树脂(0.46mmol/g装载量，100-200目)上进行固相合成。凯撒(Kaiser)测试用于确认Fmoc脱保护和序列中的相应氨基酸偶联。HATU(5.0当量，2.3mL，0.5M于DMF中)连同DIPEA(10.0当量，2.3mL，1M于DMF中)一起用于氨基酸的偶联。20％哌啶于DMF中溶液用于移除Fmoc保护基。树脂洗涤步骤由依序用DMF、DCM和DMF(两次，5mL各溶剂)洗涤组成。在裂解之前，树脂用DCM洗涤额外3次，随后用MeOH洗涤3次，并且在高真空下干燥。裂解混合物由95:5TFA:H2O溶液组成。在室温下将树脂于混合物中搅拌2小时，经棉花垫过滤。在减压下浓缩滤液，并且所得残余物用乙醚湿磨以提供相应产物。
Figure BDA0001866541900001911
(S)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-氧代吡咯烷-2-甲酰胺(SR1-060)：使用Rink酰胺树脂(597mg，0.275mmol)，遵循一般性方案产生呈白色蓬松固体状的SR1-060(57mg，76％)。HPLC:>99％[tR＝10.5分钟,20％MeOH,80％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.04(d,J＝8.5Hz,1H),7.70(s,1H),7.46(d,J＝2.0Hz,1H),7.29–7.07(m,5H),4.42(dt,J＝9.2,4.7Hz,1H),3.93(dd,J＝9.0,4.1Hz,1H),3.01(dd,J＝13.7,4.7Hz,1H),2.79(dd,J＝13.6,9.8Hz,1H),2.23–2.09(m,1H),2.06–1.94(m,2H),1.69–1.55(m,1H)。HRMS(ESI+):m/z，C14H18N3O3的计算值：(M+H)+276.1342，实测值：276.1341；m/z，C14H17N3O3Na的计算值：(M+Na)+298.1162，实测值：298.1157。HPLC-MS(ESI+):m/z 276.2[85％,(M+H)+],551.2[30％,(2M+H)+],573.2[45％,(M+Na)+]。
Figure BDA0001866541900001921
(S)-N-((S)-1-氨基-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-5-氧代吡咯烷-2-甲酰胺(SR1-061)：
使用Rink酰胺树脂(500mg，0.23mmol)，遵循一般性方案产生呈白色蓬松固体状的SR1-061(51mg，92％)。HPLC:>99％[tR＝5.5分钟,20％MeOH,80％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.99(d,J＝8.4Hz,1H),7.77(s,1H),7.36(s,1H),6.98(s,1H),4.21(td,J＝8.9,5.7Hz,1H),4.06–3.97(m,1H),2.28–2.18(m,1H),2.18–1.99(m,2H),1.91–1.78(m,1H),1.63–1.50(m,1H),1.50–1.35(m,2H),0.86(d,J＝6.6Hz,3H),0.82(d,J＝6.5Hz,3H)。HRMS(ESI+):m/z，C11H20N3O3的计算值：(M+H)+242.1499，实测值：242.1499；m/z，C11H19N3O3Na的计算值：(M+Na)+264.1318，实测值：264.1319。HPLC–MS(ESI+):m/z 242.2[40％,(M+H)+],483.4[100％,(2M+H)+],505.3[40％,2M+Na)+]。
Figure BDA0001866541900001922
(S)-N-((S)-1-氨基-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-5-氧代吡咯烷-2-甲酰胺(SR1-062)：
使用Rink酰胺树脂(500mg，0.23mmol)，遵循一般性方案产生呈白色蓬松固体状的SR1-062(49mg，94％)。HPLC:>98％[tR＝4.8分钟,10％MeOH,90％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.88–7.75(m,1H),7.43(s,1H),7.04(s,1H),4.10(m,2H),2.28–2.18(m,1H),2.17–1.98(m,2H),1.98–1.90(m,1H),1.89–1.79(m,1H),0.84(d,J＝6.8Hz,3H),0.81(d,J＝6.7Hz,3H)。HRMS(ESI+):m/z，C10H18N3O3的计算值：(M+H)+2278.1342，实测值：227.1337；m/z，C10H17N3O3Na的计算值：(M+Na)+250.1162，实测值：250.1159。HPLC–MS(ESI+):m/z 228.22[60％,(M+H)+],455.3[100％,(2M+H)+],477.3[40％,2M+Na)+]。
Figure BDA0001866541900001931
2-乙酰胺基-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)苯甲酰胺(SR1-068)：将吡啶(0.018mL，0.211mmol)和乙酸酐(0.020mL，0.211mmol)添加至苯胺盐酸盐SR1-067-1(0.030g，0.105mmol)于无水DCM(2mL)中的混合物中。在室温下搅拌1.5小时之后，在真空下浓缩混合物。所得残余物用氯仿(25mL)稀释，并且用HCl(1N，15mL)洗涤。分离有机层，干燥(Na2SO4)，接着在真空下浓缩以提供呈白色半固体状的SR1-068(27mg，88％)。HPLC:>99％[tR＝9.4分钟,20％MeOH,80％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.95(s,1H),10.86(s,1H),8.98(d,J＝8.3Hz,1H),8.34(d,J＝8.4Hz,1H),7.71(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),7.50(ddd,J＝8.7,7.3,1.6Hz,1H),7.17(td,J＝7.6,1.2Hz,1H),4.81(ddd,J＝12.5,8.3,5.4Hz,1H),2.81(ddd,J＝17.3,13.3,5.6Hz,1H),2.61–2.52(m,1H),2.20–2.10(m,1H),2.08(s,2H),2.05–1.96(m,1H)。HRMS(ESI+):m/z，C14H15N3O4Na的计算值：(M+Na)+312.0954，实测值：312.0963。HPLC–MS(ESI+):m/z 290.2[50％,(M+H)+],312.2[100％,(M+Na)+],601.2[60％,(2M+Na)+]。
Figure BDA0001866541900001941
(S)-2-(2,5-二氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)乙酸甲酯(SR1-074)：在120-125℃下加热靛红酸酐(0.600g，3.678mmol)和H-Asp(OMe)-(OMe).HCl(0.727g，3.678mmol)于吡啶(7.5mL)中的混合物20小时。使混合物冷却，接着在真空下浓缩，并且用EtOAc(50mL)稀释。有机层用HCl(1N，35mL)洗涤并蒸发。所得棕色固体用水(40mL)和乙醚(3×50mL)洗涤以提供呈棕色固体状的SR1-074(0.420g，46％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.49(s,1H),8.58(d,J＝5.5Hz,1H),7.73(dd,J＝7.8,1.7Hz,1H),7.52(ddd,J＝8.1,7.3,1.7Hz,1H),7.28–7.19(m,1H),7.10(dd,J＝8.2,1.1Hz,1H),4.02(dt,J＝8.5,5.7Hz,1H),3.56(s,3H),2.86(dd,J＝17.0,8.5Hz,1H),2.72(dd,J＝17.0,5.9Hz,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 249.2[60％,(M+H)+],281.2[50％,(M+Na)+],519.2[55％,(2M+Na)+]。
Figure BDA0001866541900001942
2-((S)-2,5-二氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-3-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)乙酰胺(SR1-076)：将二氮杂卓甲酯SR1-074(0.100g，0.403mmol)溶解于THF:水(3:2比率，5mL)中。向混合物中添加LiOH.H2O(0.034g，0.806mmol)，并且在室温下搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，并且用HCl(1N，几滴直至pH约3-4)酸化，用乙醚(20mL)洗涤以提供羧酸中间体SR2-075。(注意：产物溶解于水中，因此不可用有机溶剂有效萃取)。HPLC-MS(ESI-):m/z 233.2[80％,(M-H)-],467.1[10％,(2M-H)-],(ESI+):m/z 235.1[60％,(M+H)+],469.2[40％,(2M+H)+],491.2[80％,(2M+Na)+]。将HATU(0.168g，0.442mmol)和DIPEA(0.210mL，1.206mmol)、3-氨基戊二酰亚胺盐酸盐(0.073g，0.442mmol)添加至羧酸衍生物SR2-075于CH3CN:DMF(2:1比率，6mL)中的溶液中。在室温下搅拌23小时之后，在真空下浓缩反应混合物。反应残余物用EtOAc(30mL)稀释，并且用HCl(1N，20mL)和饱和NaHCO3水溶液(20mL)洗涤。注意：产物出现在水性洗涤液中。因此，合并HCl和NaHCO3，浓缩，并且残余物通过制备型HPLC，通过使用在20分钟内于水(含0.1％TFA)中5-95％MeOH梯度来纯化。在HPLC纯化期间，戊二酰亚胺部分与甲醇部分地反应以提供产物和甲酯副产物的混合物。以白色固体形式分离SR1-076的级分。HPLC:>99％[tR＝5.1分钟,20％MeOH,80％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.78(d,J＝5.4Hz,1H),10.39(d,J＝2.1Hz,1H),8.59(dd,J＝25.9,5.6Hz,1H),8.39(dd,J＝8.0,3.5Hz,1H),7.72(ddd,J＝7.9,4.3,1.6Hz,1H),7.58–7.44(m,1H),7.22(dddd,J＝8.7,7.5,2.3,1.3Hz,1H),7.09(d,J＝8.1Hz,1H),4.65–4.32(m,1H),4.16–3.93(m,1H),2.95–2.75(m,1H),2.69–2.59(m,2H),2.31(dd,J＝3.8,2.0Hz,1H),1.97–1.78(m,2H)。HRMS(ESI+):m/z，C16H17N4O5的计算值：345.1193，实测值：345.1180,m/z，C16H16N4O5Na的计算值：(M+Na)+367.1012，实测值：367.1008。HPLC–MS(ESI+):345.1[60％,(M+H)+],367.2[30％,(M+Na)+],(ESI-):m/z 344.1[60％,(M-H)-],687.1[20％,(2M-H)-]。
Figure BDA0001866541900001951
(S)-2-(4-(苯甲基氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)苯甲酸甲酯(SR1-078)：在室温下搅拌Boc-Asp(OBzl)OH(0.200g，0.619mmol)、HATU(0.282g，0.742mmol)和DIPEA(0.323mL，1.857mmol)于DMF(5mL)中的混合物3分钟。向混合物中添加邻氨基苯甲酸甲酯(0.096mL，0.742mmol)，并且搅拌混合物15小时。在真空下蒸发溶剂，并且添加EtOAc(40mL)。有机层用HCl(1N，25mL)和饱和NaHCO3水溶液(20mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，并且浓缩以产生呈白色泡沫状的SR1-078，其用于后续脱苯甲基反应中。HPLC–MS(ESI+):m/z 478.4[80％,(M+Na)+],935.3[100％,2M+Na)+]。
Figure BDA0001866541900001961
(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-((2-(甲氧基羰基)苯基)氨基)-4-氧代丁酸(SR1-079)：在室温下将钯/活性碳(10％(潮湿)，0.062g，0.100g/mmol)缓慢添加至苯甲酯SR2-078(0.282g，0.619mmol)于MeOH(3mL)中的溶液中。用H2(气球)净化混合物，并且搅拌3小时。固体经硅藻土过滤，并且用MeOH冲洗。在真空下蒸发滤液，并且通过快速柱色谱法，使用EtOAc:己烷(10-100％)作为洗脱剂来纯化以提供呈白色固体状的SR1-079(0.156g，69％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.84(s,1H),8.67(d,J＝8.4Hz,1H),8.00(dd,J＝8.0,1.7Hz,1H),7.51(t,J＝7.9Hz,1H),7.08(t,J＝7.6Hz,1H),5.80(d,J＝9.6Hz,1H),4.73(s,2H),3.28(d,J＝18.2Hz,1H),2.80(d,J＝18.2Hz,1H),1.51(s,9H)。HPLC–MS(ESI+):m/z755.3[100％,2M+Na)+],HPLC-MS(ESI-):m/z 365.2[100％,(M-1)-]。
Figure BDA0001866541900001971
2-((2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)-苯甲酸甲酯(SR1-080)：将3-氨基戊二酰亚胺(0.080g，0.485mmol)添加至羧酸衍生物SR1-079(0.148g，0.403mmol)、DIPEA(0.154mL，0.887mmol)和HATU(0.184g，0.485mmol)于DMF(4mL)中的混合物中。搅拌反应4小时，并且在真空下浓缩。通过快速色谱法，使用MeOH:DCM(3-15％)作为洗脱剂来纯化反应残余物提供呈白色固体状的SR1-080(0.123g，64％)。HPLC:约98％[tR＝6.0分钟,20％MeOH,80％水(含0.1％TFA),20分钟]。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ11.90(s,1H),8.66(d,J＝8.4Hz,1H),8.38(bs,1H),8.01(dt,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.51(t,J＝7.4Hz,1H),7.09(t,J＝7.7Hz,1H),6.92(bs,0.5H),6.75(bs,0.5H),6.21(s,1H),4.72(m,1H),4.65–4.42(m,1H),3.97–3.78(s,3H),3.21(m,1H),2.88–2.54(m,3H),2.42(m,1H),1.97–1.73(m,1H),1.51(s,9H)。HRMS(ESI+):m/z，C22H29N4O8的计算值：(M+H)+477.1979，实测值：477.1984,m/z，C22H28N4O8Na的计算值：(M+Na)+499.1799，实测值：499.1801。HPLC–MS(ESI+):m/z 477.2[100％,(M+H)+],499.2[20％,(M+Na)+],975.4[100％,(2M+Na)+]。
方法A1：在室温下搅拌羧酸(1.2-1.5当量)、HATU(2.0当量)、DIPEA(4.0当量)于DMF(0.3-1M)中的混合物30分钟。将胺(1.0当量)添加至混合酸中，并且将整个溶液在室温下搅拌过夜。在减压下浓缩混合物。添加水(10mL)，并且用DCM(2×10mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，并且在减压下浓缩。所得残余物通过快速色谱法(SiO2)纯化，用含DCM的MeOH(0-8％)洗脱以提供标题化合物。
方法B1：使胺(SG5-046)(1当量)和Et3N(3.0当量)于THF(0.5mL)中的混合物冷却至0℃。添加相应氯化物(1.5当量)。使混合物达到室温，并且搅拌直至反应完成。添加水(10mL)，并且用EtOAc(2×10mL)萃取。在减压下浓缩合并的有机层。所得残余物通过快速色谱法(SiO2)纯化，用含DCM的MeOH(0-10％)洗脱以提供标题化合物。
方法C1：在室温下在氩气下向SG5-078或SM2-002(1当量)和K2CO3或Cs2CO3(1.1-2.0当量)于DMF中的混合物中逐滴添加卤代烷(2.0当量)。将混合物在室温下搅拌过夜。添加水(5mL)，并且用EtOAc(2×10mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，过滤，并且在减压下浓缩。所得残余物通过快速色谱法(SiO2)纯化，用含己烷的EtOAc(0-50％)洗脱以提供标题化合物。
流程12
Figure BDA0001866541900001981
4-[(3-甲氧基丙基)氨基]-4-氧代丁酸(SM1-131)：(流程12)向含丁二酸酐(2.47g，24.68mmol)的二噁烷(10mL)中缓慢添加含3-甲氧基丙-1-胺(2.29mL，22.44mmol)的二噁烷(10mL)。使溶液升温至80℃，并且搅拌30分钟，接着冷却至室温。将白色晶体滤除，干燥，并且从二噁烷重结晶以产生呈白色固体状的标题化合物(2.13g，50％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.05(s,1H),7.82(t,J＝5.7Hz,1H),3.31(t,J＝6.4Hz,2H),3.21(s,3H),3.04–3.08(m,2H),2.41(t,J＝7.1Hz,2H),2.29(t,J＝6.9Hz,2H),1.58–1.63(m,2H)。
Figure BDA0001866541900001991
N1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)-N4-(3-甲氧基丙基)丁二酰胺(SM1-133)：使用方法A1，从来那度胺(100mg，0.385mmol)、SM1-131(87.6mg，0.463mmol)、HATU(293.3mg，0.771mmol)、DIPEA(0.269mL，1.54mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈白色固体状的标题化合物(123mg，74％)。HPLC:99％[tR＝6.9分钟,梯度MeOH 5-95％水(含0.1％TFA),流速:1.0mL/分钟,20分钟]。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.03(s,1H),9.86(s,1H),8.03–7.75(m,2H),7.61–7.31(m,2H),5.15(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.35(q,J＝17.5Hz,2H),3.30(t,J＝6.4Hz,2H),3.23–3.16(m,3H),3.07(q,J＝6.7Hz,2H),2.92(ddd,J＝17.2,13.6,5.4Hz,1H),2.66–2.54(m,3H),2.46–2.23(m,3H),2.10–1.98(m,1H),1.60(p,J＝6.7Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 861.4[20％,(2M+H)+],431.2[40％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H14N2O3的计算值：(M+Na)+453.1745，实测值：453.1762。
Figure BDA0001866541900001992
N1-(3-甲氧基丙基)-N4-(2-(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)丁二酰胺(SM1-136)：使用方法A1，从SG5-046(50mg，0.161mmol)、SM1-131(45.8mg，0.242mmol)、HATU(122.8mg，0.323mmol)、DIPEA(0.112mL，0.646mmol)和DMF(0.5mL)制备这种化合物以产生呈白色固体状的标题化合物(60mg，84％)。HPLC:98％[tR＝6.9分钟,梯度MeOH 5-95％水(含0.1％TFA),流速:1.0mL/分钟,20分钟]。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.86(s,1H),7.87(t,J＝5.4Hz,1H),7.81(d,J＝7.2Hz,1H),7.49(q,J＝7.5Hz,2H),5.22(dd,J＝13.4,5.0Hz,1H),4.42–4.27(m,2H),3.30(t,J＝6.4Hz,2H),3.18(d,J＝11.1Hz,3H),3.06(dt,J＝12.7,6.2Hz,2H),3.03–2.95(m,3H),2.77(d,J＝18.7Hz,1H),2.65–2.56(m,2H),2.46–2.23(m,4H),2.08–2.00(m,1H),1.60(p,J＝6.6Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z911.4[35％,(2M+Na)+],467.1[50％,(M+Na)+],445.2[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H14N2O3的计算值：(M+Na)+467.1901，实测值：467.1919。
流程13：
Figure BDA0001866541900002001
N-(2-(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)丙酰胺(SM1-146-1)：(流程13)使用方法B1，从SG5-046(40mg，0.129mmol)、丙酰氯(0.017mL，0.194mmol)、Et3N(0.054mL，0.387mmol)和DMF(0.5mL)制备这种化合物以产生呈白色固体状的标题化合物(29mg，70％)。HPLC:99％[tR＝11.5分钟,梯度MeOH 5-95％水(含0.1％甲酸),流速:1.0mL/分钟,20分钟]。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.76(s,1H),7.81(dd,J＝7.3,1.6Hz,1H),7.55–7.46(m,2H),5.22(dd,J＝13.5,5.1Hz,1H),4.44–4.29(m,2H),3.02(s,4H),2.77(m,1H),2.42–2.32(m,3H),2.04(m,1H),1.10(t,J＝7.5Hz,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 681.3[100％,(2M+Na)+],330.2[70％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900002011
N-(2-(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)乙酰胺(SM1-146-2)：使用方法B1，从SG5-046(40mg，0.129mmol)、乙酰氯(0.014mL，0.194mmol)、Et3N(0.054mL，0.387mmol)和DMF(0.5mL)制备这种化合物以产生呈白色固体状的标题化合物(30mg，72％)。HPLC:98％[tR＝10.5分钟,梯度MeOH 5-95％水(含0.1％甲酸),流速:1.0mL/分钟,20分钟]。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.84(s,1H),7.84–7.76(m,1H),7.56–7.43(m,2H),5.22(dd,J＝13.5,5.1Hz,1H),4.43–4.28(m,2H),3.07–2.89(m,4H),2.76(m,1H),2.36(qd,J＝13.4,4.5Hz,1H),2.13–1.94(m,4H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 653.3[100％,(2M+Na)+],316.2[70％,(M+H)+]。
流程14：
Figure BDA0001866541900002021
2-(1-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮(SM1-152)：(流程14)使用方法C1，从SG5-078(50mg，0.173mmol)、K2CO3(47.8mg，0.346mmol)、碘代甲烷(0.022mL，0.346mmol)和DMF(0.4mL)制备这种化合物以产生呈白色固体状的标题化合物(28mg，53％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.35(dd,J＝8.1,0.9Hz,1H),8.25–8.20(m,1H),8.11(t,J＝7.8Hz,1H),5.32(dd,J＝9.5,4.9Hz,1H),3.09(dd,J＝18.1,9.6Hz,1H),2.98–2.89(m,4H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 629.3[50％,(2M+Na)+],326.1[100％,(M+Na)+],304.1[40％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900002022
2-(1-乙基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮(SM1-153)：使用方法C1，从SG5-078(50mg，0.173mmol)、Cs2CO3(62.0mg，0.190mmol)、碘代乙烷(0.028mL，0.346mmol)和DMF(0.4mL)制备这种化合物以产生呈白色固体状的标题化合物(39mg，62％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.36(dd,J＝8.1,0.8Hz,1H),8.23(d,J＝7.5Hz,1H),8.12(t,J＝7.8Hz,1H),5.33(dd,J＝9.5,4.9Hz,1H),3.51(q,J＝7.2Hz,2H),3.08(dd,J＝18.2,9.6Hz,1H),2.93(dd,J＝18.1,4.9Hz,1H),1.99(s,1H),1.12(t,J＝7.2Hz,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 657.2[100％,(2M+Na)+],340.1[100％,(M+Na)+],318.2[40％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900002031
4-氨基-2-(1-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(SM1-185-1)：在氩气下向Pd/C(10％w/w，5mg)于EtOH(1.5mL，用氩气脱氧)中的混合物中添加SM1-152(20mg，0.066mmol)。将烧瓶抽空，并且用氩气回填(三次)。将氩气抽空，并且使氢气气球连接于系统。在室温下搅拌反应混合物12小时，使用短硅藻土塞过滤，用DCM和MeOH洗涤，并且在减压下浓缩。所得残余物通过制备型HPLC(tR＝9.0分钟，梯度MeOH 30-95％水(含0.1％甲酸)，流速：20.0mL/分钟，20分钟)纯化以提供呈黄色固体状的标题化合物(12mg，43％)。HPLC:100％[tR＝9.0分钟,梯度MeOH 30-95％水(含0.1％甲酸),流速:1.0mL/分钟,20分钟]。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.47(dd,J＝8.4,7.0Hz,1H),7.01(t,J＝8.1Hz,2H),6.56(s,2H),5.21(dd,J＝9.5,5.0Hz,1H),3.07(dd,J＝17.9,9.6Hz,1H),2.96–2.86(m,4H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 569.2[100％,(2M+Na)+],296.2[55％,(M+Na)+],274.1[55％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900002032
4-氨基-2-(1-乙基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(SM1-185-2)：在氩气下向Pd/C(10％w/w，5mg)于EtOH(1.5mL，用氩气脱氧)中的混合物中添加SM1-153(30mg，0.095mmol)。将烧瓶抽空，并且用氩气回填(三次)。将氩气抽空，并且使氢气气球连接于系统。在室温下搅拌反应混合物12小时，使用短硅藻土塞过滤，用DCM和MeOH洗涤，并且在减压下浓缩以提供呈黄色固体状的标题化合物(23mg，85％)。HPLC:96％[tR＝7.1分钟,梯度85％MeOH,15％水(含0.1％TFA),流速:1.0mL/分钟,20分钟]。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.47(dd,J＝8.5,7.0Hz,1H),7.01(t,J＝7.9Hz,2H),6.56(s,2H),5.21(dd,J＝9.5,5.0Hz,1H),3.49(q,J＝7.2Hz,2H),3.06(dd,J＝18.0,9.6Hz,1H),2.88(dd,J＝18.0,5.0Hz,1H),1.11(t,J＝7.2Hz,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 597.2[100％,(2M+Na)+],310.1[80％,(M+Na)+],288.1[50％,(M+H)+]。
流程15
Figure BDA0001866541900002041
(S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮(SM2-002)：(流程15)在150℃下在5mL微波小瓶中加热3-硝基邻苯二甲酸酐(160mg，0.829mmol)、SG5-088(125mg，0.829mmol)和乙酸(0.8mL)的混合物20分钟。在冷却之后，将混合物添加至水(10mL)中并过滤沉淀，用水(2×20mL)洗涤，并且在真空下干燥。产物使用EtOH/己烷湿磨以产生呈灰白色固体状的标题化合物(116mg，52％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.72(s,1H),8.36(dd,J＝8.1,0.8Hz,1H),8.26–8.21(m,1H),8.12(t,J＝7.8Hz,1H),5.32(dd,J＝9.6,5.5Hz,1H),3.01(dd,J＝18.1,9.6Hz,1H),2.89(dd,J＝18.1,5.5Hz,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 601.1[76％,(2M+Na)+],312.0[100％,(M+Na)+],290.1[46％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900002051
(S)-2-(1-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮(SM2-005)：使用方法C1，从SM2-002(70mg，0.242mmol)、K2CO3(67mg，0.484mmol)、碘代甲烷(0.030mL，0.484mmol)和DMF(0.5mL)制备这种化合物以产生呈白色固体状的标题化合物(46mg，64％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.42(dd,J＝8.1,0.8Hz,1H),8.29(d,J＝7.6Hz,1H),8.18(t,J＝7.8Hz,1H),5.38(dd,J＝9.5,4.9Hz,1H),3.15(dd,J＝18.1,9.6Hz,1H),3.05–2.95(m,4H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 629.2[50％,(2M+Na)+],326.0[60％,(M+Na)+],304.1[64％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900002052
(S)-4-氨基-2-(2,5-二氧代吡咯烷-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(SM2-011-1)：在氩气下向Pd/C(10％w/w，10mg)于THF(1.5mL，用氩气脱氧)中的混合物中添加SM2-002B2(80mg，0.277mmol)。将烧瓶抽空，并且用氩气回填(三次)。将氩气抽空，并且使氢气气球连接于系统。在室温下搅拌反应混合物12小时，使用短硅藻土塞过滤，用THF洗涤，并且在减压下浓缩以提供呈黄色固体状的标题化合物(68mg，95％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.58(s,1H),7.46(dd,J＝8.5,7.0Hz,1H),7.00(t,J＝7.7Hz,2H),6.54(s,2H),5.19(dd,J＝9.7,5.5Hz,1H),2.98(dd,J＝17.9,9.7Hz,1H),2.84(dd,J＝17.9,5.5Hz,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 541.1[60％,(2M+Na)+],282.2[100％,(M+Na)+],260.1[70％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900002061
(S)-4-氨基-2-(1-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(SM2-011-2)：在氩气下向Pd/C(10％w/w，5mg)于EtOH(2.0mL，用氩气脱氧)中的混合物中添加SM2-005(30mg，0.099mmol)。将烧瓶抽空，并且用氩气回填(三次)。将氩气抽空，并且使氢气气球连接于系统。在室温下搅拌反应混合物14小时，使用短硅藻土塞过滤，用DCM和EtOH洗涤，并且在减压下浓缩以提供呈黄色固体状的标题化合物(25mg，93％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.47(dd,J＝8.5,7.0Hz,1H),7.00(t,J＝8.3Hz,2H),6.55(s,2H),5.21(dd,J＝9.6,5.0Hz,1H),3.06(dd,J＝18.0,9.6Hz,1H),2.92(s,3H),2.91–2.85(m,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z569.2[90％,(2M+Na)+],296.1[80％,(M+Na)+],274.1[100％,(M+H)+]。
方法A：在室温下搅拌胺(3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐、SG4-178或SG5-085)(1当量)和DIPEA(2.5–4当量)于DMF或DCM(1M)中的混合物30分钟，接着在0℃下添加相应酰氯/磺酰氯(1–1.5当量)。搅拌所得混合物，并且升温至室温。添加水(10mL)，并且用EtOAc(2×10mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，并且在减压下浓缩。除非另外提及，否则所有产物都通过使用EtOAc/己烷或DCM/己烷进行湿磨以及必要时进行最终Et2O洗涤来收集。
方法B：在室温下搅拌胺(SG4-178或SG5-085)(1当量)和Et3N(1.2当量)于1,4-二噁烷(约0.5–1M)中的混合物30分钟，接着在室温下添加相应靛红酸酐(1当量)。添加水(20mL)，并且用EtOAc(2×20mL)和DCM(1×20mL)萃取。在减压下浓缩合并的有机层。除非另外提及，否则所有产物都通过使用EtOAc/己烷、EtOH/己烷或DCM/己烷进行湿磨来收集。
方法C：在150℃下在5mL微波小瓶中照射邻苯二甲酸酐(1当量)、胺(1当量)和乙酸(约1M)的混合物20分钟。添加水(10mL)并过滤沉淀，用水(2×20mL)洗涤，并且干燥。除非另外提及，否则所有产物都通过使用EtOH/己烷进行湿磨来收集。
方法D：向尿嘧啶(2–3当量)、K2CO3(2–3当量)和NaI(1当量)于DMSO(0.5–1M)中的混合物中添加溴代烷(1当量)。搅拌混合物并在90℃下加热，接着冷却至室温。添加水(20mL)，并且使用4M HCl将混合物酸化至pH 2。除非另外提及，否则所有产物都通过在过滤后使用EtOAc/己烷和/或EtOH/己烷进行湿磨来收集。
方法E：在室温下搅拌氨基酸(1当量)和HBTU(1.1当量)于DMF(1.5mL)中的混合物30分钟。在单独反应容器中，在室温下搅拌含胺(1.05当量)和DIPEA(3当量)的DMF(0.5mL)30分钟。将胺混合物添加至氨基酸混合物中，并且在室温下搅拌整个溶液。添加水(10mL)，并且用EtOAc(2×10mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，并且在减压下浓缩。使所得残余物与水混合并进行声波处理。过滤沉淀，干燥，并且使用EtOH/己烷湿磨以提供所需产物。
方法F：在60℃(油浴)下在密封管中搅拌氨基酸(1当量)、EDCI(1.1当量)、N-羟基丁二酰亚胺(1.1当量)于DMF(约2.5M)中的混合物20小时。使溶液冷却至室温，接着添加水(50mL)，并且用EtOAc(2×50mL)萃取。合并的有机层用水和盐水(各自25mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，并且在减压下浓缩。所得残余物使用EtOH/己烷(2×)湿磨以提供所需产物。
方法G：在室温下在含4M HCl的二噁烷中搅拌Boc保护的物质2小时。除非另外提及，否则所有产物都在所得混悬液在减压下浓缩之后收集。
方法H：在室温下在氩气下向SG5-040(1当量)和K2CO3或Cs2CO3(1–1.1当量)于DMF或NMP中的混合物中逐滴添加卤代烷(1–3当量)。在80℃下搅拌混合物。添加水(5mL)，并且用EtOAc(2×5mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，过滤，并且在减压下浓缩。所得残余油状物通过快速色谱法(SiO2)纯化，用含己烷的EtOAc(20–100％)洗脱以提供标题化合物。
Figure BDA0001866541900002081
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)己酰胺(SG4-125)：使用方法A(反应时间16小时)，从3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(164mg，1mmol)、己酰氯(0.201mL，1.5mmol)、DIPEA(0.522mL，3mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(91.18mg，40％)。Mp:142–147℃。HPLC:98％[tR＝7.2分钟,35％MeOH,65％水(含0.1％TFA),20分钟,220nm]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.78(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.13(d,J＝8.2Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),4.51(dt,J＝10.3,8.2Hz,1H),2.77–2.62(m,1H),2.50–2.43(m,1H,与残余DMSO信号重叠),2.09(t,J＝7.2Hz,2H),1.95–1.83(m,2H),1.49(p,J＝7.2Hz,2H),1.30–1.17(m,4H),0.84(t,J＝7.2Hz,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 475.3[90％,(2M+Na)+],249.2[60％,(M+Na)+],227.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):249.2[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C11H18N2O3的计算值：(M+H)+249.1209，实测值：249.1225。
Figure BDA0001866541900002091
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-硝基苯磺酰胺(SG4-131)：使用方法A(反应时间过夜)，从3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(164mg，1mmol)、2-硝基苯磺酰氯(221mg，1mmol)、DIPEA(0.435mL，2.5mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰色胶状的标题化合物(283mg，90％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.81(s,1H),8.40(d,J＝8.7Hz,1H),8.11–8.06(m,1H),8.01–7.95(m,1H),7.87–7.80(m,2H),4.38–4.28(m,1H),2.74–2.61(m,1H),2.50–2.40(m,1H,与残余DMSO信号重叠),2.03–1.85(m,2H)。
Figure BDA0001866541900002092
2-氨基-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)苯磺酰胺(SG4-135-01)：在氩气下向SG4-131(50mg，0.160mmol)于MeOH(1.5mL，用氩气脱氧)中的混合物中添加PtO2(1mg)。将烧瓶抽空，并且用氩气回填(两次)。将氩气抽空，并且使氢气气球连接于系统。在室温下搅拌反应混合物4小时，使用短硅藻土塞过滤，并且在减压下浓缩。粗混合物通过使用DCM/MeOH 5％进行制备型TLC来纯化，并且提供呈白色泡沫状的标题产物(19.96mg，44％)。Mp:146℃(摄氏度)。HPLC:97％[tR＝10.3分钟,20％MeOH,80％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.78(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.95(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.51(dd,J＝8.2,1.6Hz,1H),7.23(ddd,J＝8.2,7.1,1.6Hz,1H),6.77(dd,J＝8.2,1.0Hz,1H),6.57(ddd,J＝8.2,7.1,1.0Hz,1H),5.92(s,2H,在D2O振荡的情况下消失),4.10(dd,J＝10.8,6.4Hz,1H),2.57(ddd,J＝17.5,10.8,6.4Hz,1H),2.41(dt,J＝17.5,4.2Hz,1H),1.82–1.68(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 589.1[20％,(2M+Na)+],284.1[40％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):306.0[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C11H13N3O4S的计算值：(M+H)+306.0519，实测值：306.0512。
Figure BDA0001866541900002101
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)十一-10-烯酰胺(SG4-136)：使用方法A(反应时间过夜)，从3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(164mg，1mmol)、10-十一烯酰氯(0.322mL，1.5mmol)、DIPEA(0.522mL，3mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈白色固体状的标题化合物(180.65mg，61％)。Mp:138–139℃。HPLC:>99％[tR＝9.0分钟,65％MeOH,35％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.77(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.12(d,J＝8.0Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),5.77(dd,J＝17.2,10.3Hz,1H),4.97(d,J＝17.2Hz,1H),4.91(d,J＝10.3Hz,1H),4.51(q,J＝8.3Hz,1H),2.77–2.63(m,1H),2.50–2.43(m,1H,与残余DMSO信号重叠),2.14–2.05(m,2H),2.03–1.94(m,2H),1.87(brs,2H),1.48(brs,2H),1.38–1.16(m,10H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 611.4[40％,(2M+Na)+],317.3[100％,(M+Na)+],295.2[60％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):317.2[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C16H26N2O3的计算值：(M+Na)+317.1835，实测值：317.1852。
Figure BDA0001866541900002111
N-((2S)-1-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)苯甲酰胺(SG4-139)：使用方法E(反应时间14小时)，从苯甲酰基-L-苯丙氨酸(200mg，0.742mmol)、HBTU(310mg，0.817mmol)、3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(128mg，0.780mmol)、DIPEA(0.388mL，2.230mmol)和DMF(1.5mL)制备这种化合物来以非对映异构体的混合物形式产生呈灰白色固体状的标题化合物(188.82mg，67％)。Mp:209–210℃。HPLC:63％[tR＝17.8分钟,40％MeOH,60％水(含0.1％TFA),20分钟]和37％[tR＝18.8分钟,40％MeOH,60％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)(报告为非对映异构体的混合物)δ10.84(s,1H,40:60,在D2O振荡的情况下消失),8.60(t,J＝9.2Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.47(d,J＝8.3Hz,1H,40:60,在D2O振荡的情况下降低65％),7.82–7.74(m,2H),7.52–7.46(m,1H),7.42(td,J＝7.4,1.7Hz,2H),7.34(t,J＝6.9Hz,2H),7.23(td,J＝7.5,2.3Hz,2H),7.13(t,J＝7.3Hz,1H),4.81–4.68(m,1H),4.66–4.49(m,1H),3.14(dd,J＝13.6,4.0Hz,1H,40:60),3.06–2.94(m,1H),2.81–2.63(m,1H),2.56–2.47(m,1H,与残余DMSO信号重叠),2.04–1.82(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 781.3[50％,(2M+Na)+],402.2[40％,(M+Na)+],380.2[40％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):781.3[50％,(2M+Na)+],402.2[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C21H21N3O4的计算值：(M+Na)+402.1424，实测值：402.1407。
Figure BDA0001866541900002112
N-((2R)-1-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)苯甲酰胺(SG4-140)：使用方法E(反应时间1小时)，从苯甲酰基-D-苯丙氨酸(200mg，0.742mmol)、HBTU(310mg，0.817mmol)、3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(128mg，0.780mmol)、DIPEA(0.388mL，2.230mmol)和DMF(1.5mL)制备这种化合物来以非对映异构体的混合物形式产生呈灰白色固体状的标题化合物(192.37mg，68％)。Mp:206–210℃。HPLC:60％[tR＝10.5分钟,45％MeOH,55％水(含0.1％TFA),20分钟]和40％[tR＝11.0分钟,45％MeOH,55％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)(报告为非对映异构体的混合物)δ10.84(s,1H,40:60,在D2O振荡的情况下消失),8.61(t,J＝9.2Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.47(d,J＝8.3Hz,1H,40:60,在D2O振荡的情况下消失),7.78(t,J＝8.1Hz,2H),7.49(t,J＝7.2Hz,1H),7.45–7.39(m,2H),7.34(t,J＝7.2Hz,2H),7.27–7.19(m,2H),7.13(t,J＝7.2Hz,1H),4.81–4.68(m,1H),4.67–4.49(m,1H),3.14(dd,J＝13.6,4.0Hz,1H,40:60),3.05–2.94(m,1H),2.81–2.62(m,1H),2.56–2.47(m,1H,与残余DMSO信号重叠),2.05–1.81(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 781.3[100％,(2M+Na)+],402.2[40％,(M+Na)+],380.2[70％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):781.3[50％,(2M+Na)+],402.1[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C21H21N3O4的计算值：(M+Na)+402.1424，实测值：402.1414。
Figure BDA0001866541900002121
N-((2S)-1-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)苯甲酰胺(SG4-141)：使用方法E(反应时间1小时)，从苯甲酰基-L-缬氨酸(221mg，1mmol)、HBTU(417mg，1.1mmol)、3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(173mg，1.05mmol)、DIPEA(0.522mL，3mmol)和DMF(2mL)制备这种化合物来以非对映异构体的混合物形式产生呈灰白色固体状的标题化合物(258.47mg，78％)。Mp:206–210℃.Mp:221–226℃。HPLC:62％[tR＝10.8分钟,35％MeOH,65％水(含0.1％TFA),20分钟]和38％[tR＝11.2分钟,35％MeOH,65％水(含0.1％TFA),20分钟]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)(报告为非对映异构体的混合物)δ10.81(s,1H,40:60,在D2O振荡的情况下消失),8.47(d,J＝8.2Hz,1H,在D2O振荡的情况下降低40％),8.36(d,J＝8.2Hz,1H,在D2O振荡的情况下降低60％),8.26(dd,J＝8.8,2.7Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.90–7.84(m,2H),7.55–7.49(m,1H),7.48–7.41(m,2H),4.64–4.49(m,1H),4.39–4.29(m,1H),2.77–2.63(m,1H),2.20–2.05(m,1H),2.01–1.85(m,2H),1.00–0.90(m,6H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 685.3[60％,(2M+Na)+],332.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):685.3[80％,(2M+Na)+],354.1[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C17H21N3O4的计算值：(M+Na)+354.1424，实测值：354.1424。
Figure BDA0001866541900002131
(2R)-2-乙酰胺基-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-甲基戊酰胺(SG4-142)：使用方法E(反应时间1小时)，从乙酰基D-亮氨酸(173mg，1mmol)、HBTU(417mg，1.1mmol)、3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(173mg，1.05mmol)、DIPEA(0.522mL，3mmol)和DMF(2mL)制备这种化合物来以非对映异构体的混合物形式产生呈灰白色固体状的标题化合物(142.03mg，50％)。Mp:251℃(摄氏度)。HPLC:89％[tR＝5.9分钟,35％MeOH,65％水(含0.1％TFA),20分钟]和11％[tR＝6.9分钟,35％MeOH,65％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)(报告为非对映异构体的混合物)δ10.78(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.22(d,J＝8.3Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.00(d,J＝8.4Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),4.58–4.44(m,1H),4.35–4.26(m,1H),2.76–2.61(m,1H),2.56–2.47(m,1H,与残余DMSO信号重叠),2.00–1.76(m,2H),1.82(s,3H),1.67–1.54(m,1H),1.51–1.37(m,1H),0.86(d,J＝5.7Hz,6H,50％),0.82(d,J＝5.7Hz,6H,50％)。HPLC–MS(ESI–):m/z 565.4[30％,(2M–H)-],282.1[40％,(M–H)-]。LC–MS(ESI+):589.3[30％,(2M+Na)+],306.1[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H21N3O4的计算值：(M+Na)+306.1424，实测值：306.1411。
Figure BDA0001866541900002141
(2R)-2-乙酰胺基-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-甲基戊酰胺(SG4-143)：使用方法E(反应时间1小时)，从乙酰基-D-亮氨酸(159mg，1mmol)、HBTU(417mg，1.1mmol)、3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(173mg，1.05mmol)、DIPEA(0.522mL，3mmol)和DMF(2mL)制备这种化合物来以非对映异构体的混合物形式产生呈灰白色固体状的标题化合物(55.41mg，20％)。Mp:267℃(摄氏度)。HPLC:94％[tR＝8.4分钟,35％MeOH,65％水(含0.1％TFA),20分钟]和6％[tR＝10.9分钟,35％MeOH,65％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)(报告为非对映异构体的混合物)δ10.77(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.27(d,J＝8.2Hz,1H,在D2O振荡的情况下降低15％),7.90(d,J＝8.9Hz,1H,在D2O振荡的情况下降低55％),4.59–4.48(m,1H),4.21–4.11(m,1H),2.77–2.63(m,1H),2.56–2.47(m,1H,与残余DMSO信号重叠),2.01–1.76(m,3H),1.84(s,3H),0.88(d,J＝6.8Hz,6H,50％),0.84(d,J＝6.8Hz,6H,50％)。HPLC–MS(ESI+):m/z 561.3[20％,(2M+Na)+],270.2[20％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):292.1[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C12H19N3O4的计算值：(M+Na)+292.1268，实测值：292.1263。
Figure BDA0001866541900002151
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1H-吲唑-3-甲酰胺(SG4-144)：使用方法E(反应时间过夜)，从1H-吲唑-3-甲酸(162mg，1mmol)、HBTU(417mg，1.1mmol)、3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(173mg，1.05mmol)、DIPEA(0.522mL，3mmol)和DMF(2mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(158.82mg，58％)。Mp:275℃(摄氏度)。HPLC:98％[tR＝4.5分钟,40％MeOH,60％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.65(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),10.85(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.65(d,J＝8.5Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.15(d,J＝8.3Hz,1H),7.61(d,J＝8.3Hz,1H),7.41(ddd,J＝8.3,7.2,1.0Hz,1H),7.24(t,J＝7.2Hz,1H),4.80(ddd,J＝12.9,8.5,5.4Hz,1H),2.79(ddd,J＝19.0,13.8,5.4Hz,1H),2.56–2.47(m,1H,与残余DMSO信号重叠),2.21(qd,J＝12.9,4.2Hz,1H),2.04–1.93(m,1H)。HPLC–MS(ESI+):567.2[100％,(2M+Na)+],273.2[60％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):295.1[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H12N4O3的计算值：(M+Na)+295.0802，实测值：295.0807。
Figure BDA0001866541900002152
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-硝基苯甲酰胺(SG4-146)：使用方法A(反应时间17小时)，从3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(164mg，1mmol)、2-硝基苯甲酰氯(0.198mL，1.5mmol)、DIPEA(0.522mL，3mmol)和DCM(1mL)制备这种化合物以产生呈淡黄色固体状的标题化合物(134mg，48％)。Mp:211–213℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.89(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),9.04(d,J＝8.3Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.04(dd,J＝8.1,1.3Hz,1H),7.81(td,J＝7.6,1.3Hz,1H),7.70(ddd,J＝8.1,7.6,1.3Hz,1H),7.63(dd,J＝7.6,1.3Hz,1H),4.78–4.67(m,1H),2.77(ddd,J＝18.2,11.9,6.6Hz,1H),2.58–2.49(m,1H),2.06–1.91(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 577.2[60％,(2M+Na)+],300.1[40％,(M+Na)+],278.1[100％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900002161
2-氨基-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)苯甲酰胺(SG4-147)：在氩气下向SG4-146(50mg，0.180mmol)于MeCN(1mL，用氩气脱氧)中的混合物中添加PtO2(1mg)。将烧瓶抽空，并且用氩气回填(两次)。将氩气抽空，并且使氢气气球连接于系统。在室温下搅拌反应混合物18小时，使用短硅藻土塞过滤，并且在减压下浓缩。所得残余物通过色谱法(SiO2)纯化，用DCM(含0-10％MeOH)洗脱以提供呈白色固体状的标题化合物(10.58mg，24％)。Mp:224–229℃。HPLC:98％[tR＝6.0分钟,10％MeOH,90％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.84(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.46(d,J＝8.4Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.49(dd,J＝8.2,1.3Hz,1H),7.14(ddd,J＝8.2,7.1,1.3Hz,1H),6.68(dd,J＝8.2,1.3Hz,1H),6.50(ddd,J＝8.2,7.1,1.3Hz,1H),6.42(s,2H,在D2O振荡的情况下消失),4.76–4.66(m,1H),2.82–2.71(m,1H),2.56–2.47(m,1H,与残余DMSO信号重叠),2.09(qd,J＝13.0,4.5Hz,1H),1.96–1.87(m,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 517.2[10％,(2M+Na)+],248.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):270.1[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C12H13N3O3的计算值：(M+Na)+270.0849，实测值：270.0841。
Figure BDA0001866541900002171
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-硝基苯磺酰胺(SG4-159)：使用方法A(反应时间过夜)，从3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(164mg，1mmol)、3-硝基苯磺酰氯(221mg，1mmol)、DIPEA(0.435mL，2.5mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈暗灰色固体状的标题化合物(234.21g，75％)。Mp:224℃(摄氏度)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.77(s,1H),8.59(brs,1H),8.57(t,J＝2.0Hz,1H),8.44(ddd,J＝8.0,2.0,1.0Hz,1H),8.22(ddd,J＝8.0,2.0,1.0Hz,1H),7.86(t,J＝8.0Hz,1H),4.34(s,1H),2.70–2.60(m,1H),2.46–2.39(m,1H),1.93–1.80(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 649.1[50％,(2M+Na)+],336.1[100％,(M+Na)+],314.0[30％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900002172
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-硝基苯磺酰胺(SG4-154B2)：使用方法A(反应时间过夜)，从3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(822.95mg，5mmol)、4-硝基苯磺酰氯(1.11g，5mmol)、DIPEA(2.15mL，12.5mmol)和DMF(5mL)制备这种化合物以产生呈暗绿色固体状的标题化合物(1.021g，65％)。Mp:235℃(摄氏度)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.77(s,1H),8.59(brs,1H),8.57(t,J＝2.0Hz,1H),8.44(ddd,J＝8.0,2.0,1.0Hz,1H),8.22(ddd,J＝8.0,2.0,1.0Hz,1H),7.86(t,J＝8.0Hz,1H),4.34(s,1H),2.70–2.60(m,1H),2.46–2.39(m,1H),1.93–1.80(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 649.1[50％,(2M+Na)+],336.1[100％,(M+Na)+],314.0[30％,(M+H)+]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.79(s,1H),8.60(d,J＝8.7Hz,1H),8.38(d,J＝9.0Hz,2H),8.05(d,J＝9.0Hz,2H),4.38–4.29(m,1H),2.72–2.60(m,1H),2.46–2.39(m,1H),1.92–1.77(m,2H)。
Figure BDA0001866541900002181
3-氨基-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)苯磺酰胺(SG4-163-01)：在氩气下向SG4-159(100mg，0.319mmol)于MeCN(2mL，用氩气脱氧)中的混合物中添加Pd/C(10％w/w，34mg)。将烧瓶抽空，并且用氩气回填(两次)。将氩气抽空，并且使氢气气球连接于系统。在室温下搅拌反应混合物2天，使用短硅藻土塞过滤，并且在减压下浓缩。所得残余物通过色谱法(SiO2)纯化，用DCM(含0-10％MeOH)洗脱以提供呈灰白色固体状的标题化合物(32.73mg，36％)。Mp:191℃(摄氏度)。HPLC:98％[tR＝6.0分钟,10％MeOH,90％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.76(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.85(d,J＝8.3Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.14(t,J＝7.9Hz,1H),6.99(t,J＝1.9Hz,1H),6.92(ddd,J＝7.9,1.9,0.8Hz,1H),6.71(ddd,J＝7.9,1.9,0.8Hz,1H),5.50(s,2H,在D2O振荡的情况下消失),4.15–4.05(m,1H),2.66–2.55(m,1H),2.41(dt,J＝17.4,4.2Hz,1H),1.81–1.70(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 567.2[60％,(2M+H)+],284.1[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):589.1[20％,(2M+Na)+],306.0[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C11H13N3O4S的计算值：(M+Na)+306.0519，实测值：306.0510。
Figure BDA0001866541900002182
4-氨基-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)苯磺酰胺(SG4-167)：在氩气下向SG4-154B2(100mg，0.319mmol)于MeCN(1mL，用氩气脱氧)中的混合物中添加Pd/C(10％w/w，90mg)。将烧瓶抽空，并且用氩气回填(两次)。将氩气抽空，并且使氢气气球连接于系统。在室温下搅拌反应混合物2天，使用短硅藻土塞过滤，并且在减压下浓缩。所得残余物通过色谱法(SiO2)纯化，用DCM(含0-10％MeOH)洗脱以提供呈淡蓝色固体状的标题化合物(32.83mg，36％)。Mp:195℃(摄氏度)。HPLC:99％[tR＝5.6分钟,10％MeOH,90％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.76(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.53(d,J＝8.1Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.43(d,J＝8.7Hz,2H),6.55(d,J＝8.7Hz,2H),5.91(s,2H,在D2O振荡的情况下消失),4.06–3.97(m,1H),2.64–2.52(m,1H),2.39(dt,J＝17.4,4.1Hz,1H),1.77–1.64(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 589.2[20％,(2M+Na)+],284.2[30％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):588.6[20％,(2M+Na)+],305.8[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C11H13N3O4S的计算值：(M+Na)+306.0519，实测值：306.0511。
Figure BDA0001866541900002191
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-苯基乙酰胺(SG4-168)：使用方法A(反应时间15小时)，从3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(164mg，1mmol)、2-苯基乙酰氯(0.198mL，1.5mmol)、DIPEA(0.522mL，3mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(122.44mg，50％)。Mp:199–200℃。HPLC:99％[tR＝5.6分钟,10％MeOH,90％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.81(s,1H),8.44(d,J＝8.2Hz,1H),7.34–7.15(m,5H),4.58–4.48(m,1H),3.46(s,2H),2.76–2.63(m,1H),2.49–2.41(m,1H,与残余DMSO信号重叠),2.44(d,J＝3.4Hz,1H),1.98–1.83(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 515.3[100％,(2M+Na)+],269.1[90％,(M+Na)+],247.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):268.8[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H14N2O3的计算值：(M+Na)+269.0897，实测值：269.0892。
Figure BDA0001866541900002201
1-(3-苯基丙基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(SG4-170)：[J Med Chem 1968,682]使用方法D(反应时间3.5小时)，从尿嘧啶(398mg，6mmol)、K2CO3(829mg，6mmol)、以及NaI(299mg，2mmol)、1-溴-3-苯基丙烷(0.303mL，2mmol)和DMSO(2mL)制备这种化合物以产生呈白色固体状的标题化合物(240.57mg，52％)。Mp:114–116℃。HPLC:>99％[tR＝15.8分钟,40％MeOH,60％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.17(s,1H),7.61(d,J＝7.8Hz,1H),7.30–7.12(m,5H),5.51(dd,J＝7.8,1.9Hz,1H),3.67(t,J＝7.5Hz,2H),2.60–2.52(m,2H),1.86(p,J＝7.5Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 483.3[10％,(2M+Na)+],253.1[20％,(M+Na)+],231.2[30％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):230.9[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H14N2O2的计算值：(M+H)+231.1128，实测值：231.1118。
Figure BDA0001866541900002202
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)苯磺酰胺(SG4-172)：使用方法A(反应时间过夜)，从3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(164mg，1mmol)、苯磺酰氯(0.127mL，1mmol)、DIPEA(0.435mL，2.5mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈淡棕色固体状的标题化合物(140.42mg，52％)。Mp:224℃(摄氏度)。HPLC:>99％[tR＝10.7分钟,20％MeOH,80％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.81(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.19(d,J＝8.4Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.90–7.81(m,2H),7.67–7.55(m,3H),4.26(q,J＝8.5Hz,1H),2.74–2.61(m,1H),2.49–2.39(m,1H),1.85–1.76(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z559.2[50％,(2M+Na)+],286.1[40％,(M+NH4)+],269.1[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C11H12N2O4S的计算值：268.0519，实测值：291.0412(M+Na)+。
Figure BDA0001866541900002211
1-苯乙基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(SG4-173)：使用方法D(反应时间3.5小时)，从尿嘧啶(672mg，6mmol)、K2CO3(829mg，6mmol)、NaI(299mg，2mmol)、溴代2-苯基乙烷(0.273mL，2mmol)和DMSO(3mL)制备这种化合物。在酸化后，添加水(20mL)，并且混合物用EtOAc(2×25mL)和DCM(1×25mL)萃取。合并的有机层用水(20mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，并且在减压下浓缩以产生呈灰白色固体状的标题化合物(109.72mg，25％)。Mp:247℃(摄氏度)。HPLC:>99％[tR＝8.8分钟,40％MeOH,60％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.20(s,1H),7.45(d,J＝7.8Hz,1H),7.33–7.15(m,6H),5.44(dd,J＝7.8,2.2Hz,1H),3.87(t,J＝7.3Hz,2H),2.87(t,J＝7.3Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 455.2[80％,(2M+Na)+],433.2[40％,(2M+H)+],239.2[60％,(M+Na)+],217.1[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C12H12N2O2的计算值：216.0909，实测值：239.0803(M+Na)+。
Figure BDA0001866541900002212
1-苯甲基嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(SG4-174)：使用方法D(反应时间3.5小时)，从尿嘧啶(672mg，6mmol)、K2CO3(829mg，6mmol)、NaI(299mg，2mmol)、溴代苯甲烷(0.237mL，2mmol)和DMSO(3mL)制备这种化合物。在酸化后，过滤所得固体，用水(3×10mL)洗涤，干燥，使用EtOH/己烷湿磨，并且最后用己烷(2×10mL)和水(3×10mL)洗涤以产生呈灰白色固体状的标题化合物(178.50mg，44％)。Mp:170–172℃。HPLC:>99％[tR＝8.1分钟,35％MeOH,65％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.30(s,1H),7.74(d,J＝7.8Hz,1H),7.41–7.22(m,6H),5.58(dd,J＝7.8,2.1Hz,1H),4.86(s,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z427.2[90％,(2M+Na)+],405.2[40％,(2M+H)+],225.1[50％,(M+Na)+],203.1[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C11H10N2O2的计算值：202.0748，实测值：203.0820(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002221
N-(2-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)-2-(甲基氨基)苯甲酰胺(MANT-尿嘧啶)(SG4-181)：[J Med Chem 1968,11(4),777-787]在室温下搅拌SG4-178(100mg，0.522mmol)和Et3N(0.087mL，0.626mmol)于1,4-二噁烷(0.5mL)中的混合物15分钟。接着，添加N-甲基靛红酸酐(92mg，0.522mmol)并将混合物在室温下搅拌过夜，并且在100℃下加热6小时。添加Et3N(0.044mL，0.313mmol)，并且在100℃下再搅拌混合物1小时。添加水(10mL)，并且用EtOAc(2×20mL)和DCM(1×20mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，过滤，并且在减压下浓缩。所得残余物使用EtOAc/己烷湿磨以产生呈白色固体状的标题化合物(83.46mg，55％)。Mp:261–262℃。HPLC:99％[tR＝5.5分钟,20％MeOH,80％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.19(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.37(t,J＝5.8Hz,1H,在D2O振荡的情况下降低50％),7.45(brs,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.44(d,J＝7.8Hz,1H),7.40(dd,J＝7.8,1.4Hz,1H),7.26(ddd,J＝8.6,7.2,1.6Hz,1H),6.59(d,J＝7.9Hz,1H),6.56–6.47(m,1H),5.44(dd,J＝7.8,2.1Hz,1H),3.80–3.75(m,2H),3.44(dd,J＝11.0,5.8Hz,2H),2.73(d,J＝5.5Hz,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 599.3[10％,(2M+Na)+],289.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):311.1[40％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C14H16N4O3的计算值：(M+Na)+311.1115，实测值：311.1108。
Figure BDA0001866541900002231
N-(2-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)苯甲酰胺(SG5-001)：使用方法A(反应时间17小时)，从SG4-178(100mg，0.522mmol)、苯甲酰氯(0.091mL，0.783mmol)、DIPEA(0.363mL，2.09mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(81.12mg，60％)。Mp:255–256℃。HPLC:>99％[tR＝5.5分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.20(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.57(t,J＝5.8Hz,1H,在D2O振荡的情况下降低50％),7.78–7.73(m,2H),7.54–7.48(m,1H),7.48–7.41(m,3H),5.43(dd,J＝7.8,2.2Hz,1H),3.84–3.75(m,2H),3.48(dd,J＝11.1,5.8Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 541.3[70％,(2M+Na)+],282.1[30％,(M+Na)+],260.1[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):282.1[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H13N3O3的计算值：(M+Na)+282.0849，实测值：282.0844。
Figure BDA0001866541900002232
N-(2-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)苯磺酰胺(SG5-002)：使用方法A(反应时间17小时)，从SG4-178(100mg，0.522mmol)、苯磺酰氯(0.100mL，0.783mmol)、DIPEA(0.363mL，2.09mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(89.99mg，58％)。Mp:196℃(摄氏度)。HPLC:98％[tR＝5.3分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.17(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.81(t,J＝6.2Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.76–7.72(m,2H),7.65–7.60(m,1H),7.60–7.54(m,2H),7.45(d,J＝7.8Hz,1H),5.49(dd,J＝7.8,2.3Hz,1H),3.67(t,J＝6.0Hz,2H),2.98(q,J＝6.0Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 613.2[30％,(2M+Na)+],296.2[30％,(M+H)+]。HPLC–MS(ESI–):m/z 589.2[30％,(2M–H)-],294.1[100％,(M–H)-]。LC–MS(ESI+):318.0[65％,(M+Na)+],296.1[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C12H13N3O4S的计算值：(M+H)+296.0699，实测值：296.0694。
Figure BDA0001866541900002241
1-(4-苯基丁基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(SG5-003)：使用方法D(反应时间：在90℃下17小时，以及在120℃下30分钟)，从尿嘧啶(448mg，4mmol)、K2CO3(552mg，4mmol)、NaI(299mg，2mmol)、1-溴-4-苯基丁烷(0.351mL，2mmol)和DMSO(4mL)制备这种化合物。在酸化后，添加水(20mL)，并且混合物用EtOAc(2×20mL)和DCM(1×20mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，在减压下浓缩，并且所得油状物使用EtOH/己烷湿磨以产生呈淡黄色固体状的标题化合物(370.62mg，76％)。Mp:116–117℃。HPLC:>99％[tR＝12.6分钟,50％MeOH,50％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.19(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.62(d,J＝7.8Hz,1H),7.30–7.21(m,2H),7.21–7.11(m,3H),5.51(dd,J＝7.8,2.2Hz,1H),3.65(t,J＝7.0Hz,2H),2.57(t,J＝7.0Hz,2H),1.62–1.45(m,4H)。HPLC–MS(ESI+):m/z511.3[30％,(2M+Na)+],489.3[30％,(2M+H)+],267.2[100％,(M+Na)+],245.2[90％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C14H16N2O2的计算值：244.1220，实测值：245.1295(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002251
1-(3-(4-氯苯基)丙基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(SG5-004)：使用方法D(反应时间：在90℃下17小时，以及在120℃下4小时)，从尿嘧啶(224mg，2mmol)、K2CO3(276mg，2mmol)、NaI(150mg，1mmol)、1-(3-溴丙基)-4-氯苯(233mg，1mmol)和DMSO(2mL)制备这种化合物以产生呈黄色固体状的标题化合物(110.42mg，42％)。Mp:139–142℃。HPLC:99％[tR＝9.7分钟,55％MeOH,45％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.19(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.61(d,J＝7.8Hz,1H),7.31(d,J＝8.4Hz,2H),7.23(d,J＝8.4Hz,2H),5.51(dd,J＝7.8,2.1Hz,1H),3.65(t,J＝7.5Hz,2H),2.56(t,J＝7.5Hz,2H),1.85(p,J＝7.5Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 553.2[40％,(2M37Cl+Na)+],551.1[100％,(2M35Cl+Na)+],289.1[30％,(M37Cl+Na)+],287.2[70％,(M35Cl+Na)+],267.2[30％,(M37Cl+H)+],265.1[90％,(M35Cl+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H13ClN2O2的计算值：264.0671，实测值：265.0746(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002252
3-甲基-1-(3-苯基丙基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(SG5-005)：在室温下向SG4-170(50mg，0.217mmol)和K2CO3(60mg，0.434mmol)于DMF(0.6mL)中的混合物中添加碘代甲烷(0.027mL，0.434mmol)。在室温下搅拌混合物16小时。添加水(20mL)，并且混合物用DCM(1×20mL)和EtOAc(2×20mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，并且在减压下浓缩以产生呈黄色油状的标题化合物(49.72mg，94％)。HPLC:>99％[tR＝12.7分钟,50％MeOH,50％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.66(d,J＝7.8Hz,1H),7.29–7.11(m,5H),5.65(d,J＝7.8Hz,1H),3.74(t,J＝7.5Hz,2H),3.11(s,3H),2.56(t,J＝7.5Hz,2H),1.89(p,J＝7.5Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 511.3[30％,(2M+Na)+],267.2[100％,(M+Na)+],245.2[80％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):267.1[40％,(M+Na)+],245.1[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C14H16N2O2的计算值：(M+H)+245.1284，实测值：245.1292。
Figure BDA0001866541900002261
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-[1,1'-联苯]-4-磺酰胺(SG5-006)：使用方法A(反应时间过夜)，从3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(164mg，1mmol)、[1,1'-联苯]-4-磺酰氯(252mg，1mmol)、DIPEA(0.435mL，2.5mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(290.15mg，84％)。Mp:215℃(摄氏度)。HPLC:99％[tR＝8.6分钟,55％MeOH,45％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.78(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.20(d,J＝8.4Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.90(d,J＝8.5Hz,2H),7.85(d,J＝8.5Hz,2H),7.73(d,J＝7.3Hz,2H),7.49(t,J＝7.3Hz,2H),7.42(t,J＝7.3Hz,1H),4.31–4.22(m,1H),2.72–2.60(m,1H),2.47–2.38(m,1H),1.88–1.74(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 711.2[100％,(2M+Na)+],367.2[40％,(M+Na)+],345.2[40％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):367.0[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C17H16N2O4S的计算值：(M+2H)2+173.0488，实测值：173.0419。
Figure BDA0001866541900002271
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-苯氧基苯磺酰胺(SG5-007)：使用方法A(反应时间过夜)，从3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(164mg，1mmol)、4-苯氧基苯磺酰氯(268mg，1mmol)、DIPEA(0.435mL，2.5mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈淡紫色固体状的标题化合物(220.29mg，61％)。Mp:229℃(摄氏度)。HPLC:>99％[tR＝9.4分钟,55％MeOH,45％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.77(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.09(d,J＝8.4Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.81(d,J＝8.9Hz,2H),7.45(tt,J＝7.5,2.2Hz,2H),7.23(tt,J＝7.5,1.1Hz,1H),7.11(dq,J＝7.5,1.1Hz,2H),7.07(d,J＝8.9Hz,2H),4.19(ddd,J＝11.3,8.4,6.2Hz,1H),2.64(ddd,J＝17.5,11.3,6.2Hz,1H),2.43(dt,J＝17.5,4.1Hz,1H),1.88–1.71(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 743.2[100％,(2M+Na)+],383.1[70％,(M+Na)+],361.1[40％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):383.0[85％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C17H16N2O5S的计算值：(M+Na)+383.0672，实测值：383.0677。
Figure BDA0001866541900002272
2-氨基-N-(2-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)-5-硝基苯甲酰胺(SG5-012)：使用方法B(反应时间17小时)，从SG4-178(100mg，0.522mmol)、5-硝基靛红酸酐(108mg，0.522mmol)、Et3N(0.124mL，0.887mmol)和1,4-二噁烷(0.5mL)制备这种化合物以产生呈黄色固体状的标题化合物(80.04mg，48％)。Mp:291℃(摄氏度)。HPLC:97％[tR＝5.4分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.20(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.79(t,J＝5.7Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.42(d,J＝2.6Hz,1H),8.00(dd,J＝9.2,2.6Hz,1H),7.70(s,2H,在D2O振荡的情况下消失),7.49(d,J＝7.8Hz,1H),6.77(d,J＝9.2Hz,1H),5.45(d,J＝7.8Hz,1H),3.80(t,J＝5.7Hz,2H),3.46(q,J＝5.7Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 661.2[100％,(2M+Na)+],639.3[40％,(2M+H)+],342.3[30％,(M+Na)+],320.1[60％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):342.1[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H13N5O5的计算值：(M+Na)+342.0809，实测值：342.0810。
Figure BDA0001866541900002281
N-(2-(5-氟-2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)-2-(甲基氨基)苯甲酰胺(SG5-016)：在室温下搅拌SG5-014(100mg，0.477mmol)和Et3N(0.113mL，0.811mmol)于1,4-二噁烷(0.5mL)中的混合物30分钟。接着，添加N-甲基靛红酸酐(84mg，0.477mmol)并将混合物在室温下搅拌过夜，并且在100℃下加热1小时。添加水(10mL)，并且用EtOAc(2×20mL)和DCM(1×20mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，过滤，并且在减压下浓缩。所得残余物使用EtOH/己烷湿磨以产生呈白色固体状的标题化合物(24.81mg，17％)。Mp:248–252℃。HPLC:>99％[tR＝8.8分钟,20％MeOH,80％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.71(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.35(t,J＝5.8Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.94(d,J＝6.7Hz,1H),7.41(dd,J＝7.8,1H),7.39(q,J＝5.1Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.26(t,J＝7.8Hz,1H),6.59(d,J＝7.8Hz,1H),6.52(t,J＝7.8Hz,1H),3.74(t,J＝5.8Hz,2H),3.45(q,J＝5.8Hz,2H),2.72(d,J＝5.1Hz,3H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-170.81(d,J＝6.7Hz)。HPLC–MS(ESI+):m/z 307.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):329.1[70％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C14H15FN4O3的计算值：(M+Na)+329.1020，实测值：329.1026。
Figure BDA0001866541900002291
2-氨基-N-(2-(5-氟-2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)苯甲酰胺(SG5-017)：在室温下搅拌SG5-014(100mg，0.477mmol)和Et3N(0.113mL，0.811mmol)于1,4-二噁烷(0.5mL)中的混合物30分钟。接着，添加靛红酸酐(78mg，0.477mmol)并将混合物在室温下搅拌过夜，并且在100℃下加热1小时。添加水(10mL)，并且用EtOAc(2×20mL)和DCM(1×20mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，过滤，并且在减压下浓缩。所得残余物通过色谱法(SiO2)纯化，用DCM(含0-10％MeOH)洗脱以提供呈灰白色固体状的标题化合物(21.88mg，16％)。Mp:192–194℃。HPLC:>99％[tR＝6.3分钟,15％MeOH,85％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.71(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.27(t,J＝5.8Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.94(d,J＝6.7Hz,1H),7.36(dd,J＝7.9,1.2Hz,1H),7.10(t,J＝7.9,1H),6.65(dd,J＝7.9,1.2Hz,1H),6.48(t,J＝7.9,1H),6.29(s,2H,在D2O振荡的情况下消失),3.74(t,J＝5.8Hz,2H),3.45(q,J＝5.8Hz,2H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-170.79(d,J＝6.7Hz)。HPLC–MS(ESI+):m/z 293.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):315.1[50％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H13FN4O3的计算值：(M+Na)+315.0864，实测值：315.0872。
Figure BDA0001866541900002292
2-(2,4-二氧代咪唑烷-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(SG5-020)：使用方法C，从邻苯二甲酸酐(296mg，2mmol)、1-氨基乙内酰脲盐酸盐(303mg，2mmol)和AcOH(2mL)制备这种化合物以产生呈白色固体状的标题化合物(313.98mg，64％)。Mp:279–281℃。HPLC:99％[tR＝6.1分钟,25％MeOH,75％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.76(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.03–7.90(m,4H),4.29(d,J＝1.7Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z513.1[50％,(2M+Na)+],268.1[70％,(M+Na)+],246.1[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):268.0[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C11H7N3O4的计算值：(M+Na)+268.0329，实测值：268.0333。
Figure BDA0001866541900002301
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)萘-2-磺酰胺(SG5-029)：使用方法A(反应时间过夜)，从3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(164mg，1mmol)、萘-2-磺酰氯(227mg，1mmol)、DIPEA(0.435mL，2.5mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(241.28mg，76％)。Mp:227℃(摄氏度)。HPLC:98％[tR＝6.1分钟,45％MeOH,55％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.74(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.44(s,1H),8.25(d,J＝8.1Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.10(t,J＝8.4Hz,2H),8.02(d,J＝7.8Hz,1H),7.85(dd,J＝8.6,1.6Hz,1H),7.71–7.60(m,2H),4.27(q,J＝8.2Hz,1H),2.68–2.57(m,1H),2.40(dt,J＝17.6,3.5Hz,1H),1.85–1.74(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z659.2[100％,(2M+Na)+],341.1[60％,(M+Na)+],336.1[50％,(M+NH4)+],319.1[80％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):659.1[30％,(2M+Na)+],341.0[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C15H14N2O4S的计算值：(M+Na)+341.0566，实测值：341.0555。
Figure BDA0001866541900002311
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]二氧杂环庚二烯-7-磺酰胺(SG5-030)：使用方法A(反应时间过夜)，从3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(82mg，0.5mmol)、3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]二氧杂环庚二烯-7-磺酰氯(124mg，0.5mmol)、DIPEA(0.218mL，1.25mmol)和DMF(0.5mL)制备这种化合物以产生呈白色固体状的标题化合物(98.20mg，57％)。Mp:158–159℃。HPLC:99％[tR＝6.4分钟,35％MeOH,65％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.77(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.05(d,J＝7.6Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.41–7.35(m,2H),7.10–7.05(m,1H),4.24–4.14(m,5H),2.64(ddd,J＝17.7,11.5,6.6Hz,1H),2.42(dt,J＝17.7,4.0Hz,1H),2.13(p,J＝5.6Hz,2H),1.86–1.71(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 703.2[100％,(2M+Na)+],363.1[20％,(M+Na)+],358.2[100％,(M+NH4)+],341.1[90％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):703.1[70％,(2M+Na)+],363.1[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C14H16N2O6S的计算值：(M+Na)+363.0621，实测值：363.0612。
Figure BDA0001866541900002312
5-氯-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-磺酰胺(SG5-031)：使用方法A(反应时间过夜)，从3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(164mg，1mmol)、5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-磺酰氯(281mg，1mmol)、DIPEA(0.435mL，2.5mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(269.75mg，72％)。Mp:240℃(摄氏度)。HPLC:99％[tR＝16.4分钟,50％MeOH,50％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.75(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.70(d,J＝8.7Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.06(d,J＝8.7Hz,1H),8.03(s,1H),7.54(d,J＝8.7Hz,1H),4.26(q,J＝9.0Hz,1H),2.73–2.61(m,1H),2.60(s,3H),2.45–2.37(m,1H),1.91–1.77(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 769.1[10％,(2M37Cl+Na)+],767.2[25％,(2M35Cl+Na)+],397.1[50％,(M37Cl+Na)+],395.1[100％,(M35Cl+Na)+],373.1[40％,(M35Cl+H)+]。LC–MS(ESI+):395.0[100％,(M35Cl+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C14H13ClN2O4S2的计算值：(M+Na)+394.9897，实测值：394.9890。
Figure BDA0001866541900002321
2-氨基-4-氯-N-(2-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)苯甲酰胺(SG5-034)：使用方法B(反应时间17小时)，从SG4-178(50mg，0.261mmol)、4-氯靛红酸酐(52mg，0.261mmol)、Et3N(0.062mL，0.443mmol)和1,4-二噁烷(0.26mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(37.26mg，46％)。Mp:229℃(摄氏度)。HPLC:99％[tR＝8.2分钟,45％MeOH,55％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.19(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.37(t,J＝5.8Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.45(d,J＝7.8Hz),7.38(d,J＝8.5Hz,1H),6.71(d,J＝2.2Hz,1H),6.59(s,2H,在D2O振荡的情况下消失),6.50(dd,J＝8.5,2.2Hz,1H),5.44(dd,J＝7.8,2.3Hz,1H),3.86(t,J＝5.8Hz,2H),3.43(q,J＝5.8Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 639.1[10％,(2M35Cl+Na)+],311.2[40％,(M37Cl+H)+],309.1[100％,(M35Cl+H)+]。LC–MS(ESI+):331.0[100％,(M35Cl+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H13ClN4O3的计算值：(M+Na)+331.0568，实测值：331.0564。
Figure BDA0001866541900002331
2-氨基-5-氯-N-(2-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)苯甲酰胺(SG5-035)：使用方法B(反应时间17小时)，从SG4-178(50mg，0.261mmol)、5-氯靛红酸酐(52mg，0.261mmol)、Et3N(0.062mL，0.443mmol)和1,4-二噁烷(0.26mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(31.56mg，39％)。Mp:216℃(摄氏度)。HPLC:99％[tR＝6.4分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.20(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.42(t,J＝5.8Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.47(d,J＝7.8Hz,1H),7.43(d,J＝2.5Hz,1H),7.13(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.68(d,J＝8.8Hz,1H),6.46(s,2H,在D2O振荡的情况下消失),5.45(dd,J＝7.8,2.3Hz,1H),3.77(t,J＝5.8Hz,2H),3.43(q,J＝5.8Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 639.0[10％,(2M35Cl+Na)+],311.2[40％,(M37Cl+H)+],309.1[90％,(M35Cl+H)+]。LC–MS(ESI+):331.0[100％,(M35Cl+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H13ClN4O3的计算值：(M+Na)+331.0568，实测值：331.0561。
Figure BDA0001866541900002332
2-氨基-N-(2-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)-5-甲基苯甲酰胺(SG5-036)：使用方法B(反应时间17小时)，从SG4-178(50mg，0.261mmol)、5-甲基靛红酸酐(46mg，0.261mmol)、Et3N(0.062mL，0.443mmol)和1,4-二噁烷(0.26mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(32.48mg，43％)。Mp:242℃(摄氏度)。HPLC:99％[tR＝13.4分钟,10％MeOH,90％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.19(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.25(t,J＝5.8Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.44(d,J＝7.8Hz,1H),7.19(d,J＝1.5Hz,1H),6.94(dd,J＝8.3,1.5Hz,1H),6.57(d,J＝8.3Hz,1H),6.08(s,2H,在D2O振荡的情况下消失),5.44(dd,J＝7.8,2.1Hz,1H),3.77(t,J＝5.8Hz,2H),3.42(q,J＝5.8Hz,2H),2.13(s,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 599.2[10％,(2M+Na)+],289.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):311.1[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C14H16N4O3的计算值：(M+Na)+311.1115，实测值：311.1106。
Figure BDA0001866541900002341
2-氨基-N-(2-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)-6-氟苯甲酰胺(SG5-037)：使用方法B(反应时间17小时)，从SG4-178(50mg，0.261mmol)、6-氟靛红酸酐(47mg，0.261mmol)、Et3N(0.062mL，0.443mmol)和1,4-二噁烷(0.26mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(32.27mg，42％)。Mp:161–165℃。HPLC:99％[tR＝9.2分钟,10％MeOH,90％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.20(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.36(t,J＝5.8Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.47(d,J＝7.8Hz,1H),7.22(dd,J＝10.1,3.0Hz,1H),7.02(ddd,J＝9.0,8.4,3.0Hz,1H),6.67(dd,J＝9.0,5.0Hz,1H),6.20(s,2H,在D2O振荡的情况下消失),5.45(dd,J＝7.8,2.3Hz,1H),3.77(t,J＝5.8Hz,2H),3.43(q,J＝5.8Hz,2H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-130.09(ddd,J＝10.1,8.4,5.0Hz)。HPLC–MS(ESI+):m/z 607.3[10％,(2M+Na)2+],293.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):315.1[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H13FN4O3的计算值：(M+Na)+315.0864，实测值：315.0859。
Figure BDA0001866541900002351
2-氨基-N-(2-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)苯甲酰胺(SG5-038)：使用方法B(反应时间17小时)，从SG4-178(50mg，0.261mmol)、靛红酸酐(42mg，0.261mmol)、Et3N(0.062mL，0.443mmol)和1,4-二噁烷(0.26mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(32.00mg，45％)。Mp:200–203℃。HPLC:99％[tR＝6.6分钟,10％MeOH,90％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.19(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.29(t,J＝5.8Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.45(d,J＝7.8Hz,1H),7.37(dd,J＝8.2,1.3Hz,1H),7.10(ddd,J＝8.2,7.2,1.3Hz,1H),7.96–7.90(m,2H),6.47(ddd,J＝8.2,7.2,1.3Hz,1H),6.31(s,2H,在D2O振荡的情况下消失),5.44(dd,J＝7.8,2.2Hz,1H),3.77(t,J＝5.8Hz,2H),3.43(q,J＝5.8Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 571.3[10％,(2M+Na)+],275.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):297.1[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H14N4O3的计算值：(M+Na)+297.0958，实测值：297.0955。
Figure BDA0001866541900002352
N-(2-(5-氯-2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)-2-(甲基氨基)苯甲酰胺(SG5-039)：在室温下在TFA/DCM(1:1，1mL)中搅拌SG5-033(65mg，0.224mmol)2小时。在减压下浓缩混合物，并且所得油状物在稀释以及与己烷/EtOAc一起蒸发之后固化以提供单TFA盐(64.90mg，95％)。在1,4-二噁烷(2mL)中混合所得盐和Et3N(0.093mL，0.673mmol)，并且在室温下搅拌30分钟。接着，添加N-甲基靛红酸酐(40mg，0.224mmol)，并且在室温下搅拌混合物18小时。添加水(10mL)，并且过滤所得固体并用水(2×5mL)洗涤。在干燥后，固体使用EtOH/己烷湿磨以产生呈白色固体状的标题化合物(18.82mg，26％)。Mp:242℃(摄氏度)。HPLC:>99％[tR＝6.2分钟,25％MeOH,75％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.67(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.35(t,J＝5.8Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.97(s,1H),7.39(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),7.33(q,J＝5.0Hz,1H),7.28–7.23(m,1H),6.59(d,J＝7.8Hz,1H),6.52(t,J＝7.8Hz,1H),3.80(t,J＝5.8Hz,2H),3.45(q,J＝5.8Hz,2H),2.72(d,J＝5.0Hz,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 325.1[40％,(M37Cl+H)+],323.2[100％,(M35Cl+H)+]。LC–MS(ESI+):345.1[35％,(M35Cl+Na)+],323.1[100％,(M35Cl+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C14H15ClN4O3的计算值：(M+H)+323.0905，实测值：323.0911。
Figure BDA0001866541900002361
3-甲基-1-(4-苯基丁基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(SG5-042)：在室温下向SG5-003(50mg，0.204mmol)和K2CO3(58mg，0.490mmol)于DMF(0.5mL)中的混合物中添加碘代甲烷(0.025mL，0.409mmol)。在室温下搅拌混合物16小时。添加水(20mL)，并且混合物用DCM(1×20mL)和EtOAc(2×20mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，并且在减压下浓缩以产生呈黄色油状的标题化合物(50.04mg，95％)。HPLC:95％[tR＝12.3分钟,50％MeOH,50％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.67(d,J＝7.8Hz,1H),7.28–7.21(m,2H),7.19–7.12(m,3H),5.65(d,J＝7.8Hz,1H),3.71(t,J＝7.0Hz,2H),3.12(s,3H),2.57(t,J＝7.0Hz,2H),1.64–1.47(m,4H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 517.3[20％,(2M+Na)+],281.2[80％,(M+Na)+],259.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):281.2[45％,(M+Na)+],259.2[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C15H18N2O2的计算值：(M+H)+259.1441，实测值：259.1441。
Figure BDA0001866541900002371
1-(3-苯基丙基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(SG5-045)：[Pharm Chem J 1983, 17,727-730]将3-苯基丙-1-胺(0.525mL，3.7mmol)、丙烯酸乙酯(0.403mL，3.7mmol)和MeOH(2.5mL)的混合物在室温下搅拌过夜。移除MeOH，并且所得油状物通过色谱法(SiO2)纯化，用己烷(含0-100％EtOAc)洗脱以提供甲酯/乙酯的混合物，其用于后续步骤中。在回流下加热甲酯/乙酯(350mg，1.49mmol)、脲(447mg，7.44mmol)和冰乙酸(0.8mL)的混合物3小时。添加硫酸(0.5mL)，并且在回流下再加热混合物3小时。添加水(10mL)并过滤沉淀，并且使用EtOH/己烷湿磨以产生呈白色固体状的标题化合物(173.68mg，20％，两步)。Mp:99–101℃。HPLC:99％[tR＝7.5分钟,45％MeOH,55％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.30–7.12(m,5H),3.42(dt,J＝10.5,7.1Hz,4H),2.65(t,J＝7.3Hz,2H),2.54(t,J＝7.3Hz,2H),1.91(p,J＝7.3Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 465.3[20％,(2M+H)+],255.2[100％,(M+Na)+],233.2[80％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):255.1[50％,(M+Na)+],233.1[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H16N2O2的计算值：(M+H)+233.1284，实测值：233.1288。
Figure BDA0001866541900002372
2-(2,4-二氧代咪唑烷-1-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮(SG5-058)：使用方法C，从3-硝基邻苯二甲酸酐(386mg，2mmol)、1-氨基乙内酰脲盐酸盐(303mg，2mmol)和AcOH(2mL)制备这种化合物以产生呈白色固体状的标题化合物(339.77mg，59％)。Mp:288℃(摄氏度)。HPLC:99％[tR＝6.4分钟,20％MeOH,80％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.81(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.41(dd,J＝8.1,0.9Hz,1H),8.30(dd,J＝7.6,0.9Hz,1H),8.16(dd,J＝8.1,7.6Hz,1H),4.26(s,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 603.1[60％,(2M+Na)+],313.1[60％,(M+Na)+],291.1[50％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):313.0[50％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C11H6N4O6的计算值：(M+Na)+313.0179，实测值：313.0161。
Figure BDA0001866541900002381
4-氨基-2-(2,4-二氧代咪唑烷-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(SG5-059)：在氩气下向SG5-058(100mg，0.319mmol)于EtOH(5mL，用氩气脱氧)中的混合物中添加Pd/C(10％w/w，50mg)。将烧瓶抽空，并且用氩气回填(两次)。将氩气抽空，并且使氢气气球连接于系统。在室温下搅拌反应混合物20小时，使用短硅藻土塞过滤，用大量DCM、EtOH、EtOAc、丙酮和THF洗涤，并且在减压下浓缩。所得残余物使用EtOH/己烷湿磨以提供呈黄色固体状的标题化合物(213.08mg，79％)。Mp:285℃(摄氏度)。HPLC:97％[tR＝8.4分钟,20％MeOH,80％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.68(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.51(dd,J＝8.5,7.0Hz,1H),7.06(d,J＝8.5Hz,1H),7.04(d,J＝7.0Hz,1H),6.65(s,2H,在D2O振荡的情况下消失),4.25(s,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 543.1[40％,(2M+Na)+],283.1[60％,(M+Na)+],261.2[50％,(M+H)+]。HPLC–MS(ESI–):m/z 259.0[100％,(M–H)-]。HRMS(ESI+):m/z，C11H8N4O4的计算值：(M+H)+261.0618，实测值：261.0615。
Figure BDA0001866541900002391
N-(2-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)-1-苯基甲烷磺酰胺(SG5-068)：使用方法A(反应时间过夜)，从SG4-178(50mg，0.258mmol)、苯基甲烷磺酰氯(75mg，0.391mmol)、DIPEA(0.182mL，1.040mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(25.92mg，32％)。Mp:220–226℃。HPLC:98％[tR＝5.3分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.21(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.44(d,J＝7.9Hz,1H),7.38–7.31(m,5H),7.26(t,J＝5.9Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),5.51(d,J＝7.9Hz,1H),4.31(s,2H),3.65(t,J＝5.9Hz,2H),3.10(q,J＝5.9Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 641.2[100％,(2M+Na)+],619.2[40％,(2M+H)+],332.2[50％,(M+Na)+],310.1[80％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):332.1[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H15N3O4S的计算值：(M+Na)+332.0675，实测值：332.0674。
Figure BDA0001866541900002392
N-(2-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)-2-硝基苯磺酰胺(SG5-069)：使用方法A(反应时间过夜)，从SG4-178(100mg，0.522mmol)、2-硝基苯磺酰氯(173mg，0.783mmol)、DIPEA(0.363mL，2.090mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈淡黄色固体状的标题化合物(36.73mg，21％)。Mp:296℃(摄氏度)。HPLC:>99％[tR＝4.0分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.17(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.21(brt,J＝5.9Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.96–7.90(m,2H),7.85–7.80(m,2H),7.42(d,J＝7.8Hz,1H),5.44(dd,J＝7.8,2.3Hz,1H),3.71(t,J＝5.9Hz,2H),3.18(br q,J＝5.9Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 703.2[100％,(2M+Na)+],681.1[80％,(2M+H)+],363.1[30％,(M+Na)+],341.1[80％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):363.0[75％,(M+Na)+],341.0[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C12H12N4O6S的计算值：(M+H)+341.0550，实测值：341.0540。
Figure BDA0001866541900002401
(2,5-二氧代吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(SG5-075)：这使用方法F从Boc-天冬酰胺(2.32g，10mmol)、EDCI(2.11g，11mmol)、N-羟基丁二酰亚胺(1.27g，11mmol)、DMF(4mL)制备以产生呈白色固体状的标题化合物(475mg，22％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.17(s,1H),7.42(d,J＝8.2Hz,1H),4.32–4.22(m,1H),2.83(dd,J＝17.5,9.3Hz,1H),2.42(dd,J＝17.5,5.7Hz,1H),1.36(s,9H)。
Figure BDA0001866541900002402
3-氨基吡咯烷-2,5-二酮盐酸盐(SG5-076)：[Heterocycles,2015,91,764-781]使用方法G，从SG5-075(475mg，2.22mmol)和含4M HCl的二噁烷(2mL)制备这种化合物。将EtOAc(10mL)添加至混悬液中并进行声波处理，过滤，用EtOAc(2×10mL)洗涤，并且干燥以产生呈白色固体状的标题化合物(318mg，95％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ4.38(dd,J＝9.3,6.0Hz,1H),3.13(dd,J＝17.9,9.3Hz,1H),2.69(dd,J＝17.9,6.0Hz,1H)。
Figure BDA0001866541900002411
2-(2,5-二氧代吡咯烷-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮(SG5-078)：这使用方法C从3-硝基邻苯二甲酸酐(100mg，0.517mmol)、SG5-076(78mg，0.517mmol)和AcOH(0.5mL)制备以产生呈白色固体状的标题化合物(106.61mg，71％)。Mp:272℃(摄氏度)。HPLC:99％[tR＝7.5分钟,25％MeOH,75％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.71(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.34(d,J＝7.6Hz,1H),8.21(d,J＝7.6Hz,1H),8.09(t,J＝7.6Hz,1H),5.29(dd,J＝9.5,5.4Hz,1H),2.99(dd,J＝18.0,9.5Hz,1H),2.86(dd,J＝18.0,5.4Hz,1H)。HPLC–MS(ESI–):m/z 288.1[100％,(M–H)-]。LC–MS(ESI–):288.0[100％,(M–H)-]。HRMS(ESI–):m/z，C12H7N3O6的计算值：(M–H)-288.0262，实测值：288.0247。
Figure BDA0001866541900002412
4-氨基-2-(2,5-二氧代吡咯烷-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(SG5-081)：在氩气下向SG5-078(20mg，0.069mmol)于THF(2mL，用氩气脱氧)中的混合物中添加Pd/C(10％w/w，5mg)。将烧瓶抽空，并且用氩气回填(两次)。将氩气抽空，并且使氢气气球连接于系统。在室温下搅拌反应混合物5.5小时，使用短硅藻土塞过滤，用THF(5mL)洗涤，并且在减压下浓缩以提供呈亮黄色固体状的标题化合物(15.30mg，85％)。Mp:286℃(摄氏度)。HPLC:99％[tR＝4.9分钟,25％MeOH,75％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.60(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.45(dd,J＝8.4,7.0Hz,1H),6.99(d,J＝8.4Hz,1H),6.98(d,J＝7.0Hz,1H),6.53(s,2H,在D2O振荡的情况下消失),5.18(dd,J＝9.6,5.6Hz,1H),2.96(dd,J＝18.0,9.6Hz,1H),2.82(dd,J＝18.0,5.6Hz,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 541.2[100％,(2M+Na)+],282.1[75％,(M+Na)+],260.1[80％,(M+H)+]。LC–MS(ESI–):258.0[100％,(M–H)-]。HRMS(ESI–):m/z，C12H9N3O4的计算值：(M–H)-258.0520，实测值：258.0501。
Figure BDA0001866541900002421
N-(2-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)-2-(甲基氨基)苯甲酰胺(SG5-091)：在室温下搅拌SG5-085(50mg，0.258mmol)、N-甲基靛红酸酐(46mg，0.258mmol)和Et3N(0.043mL，0.310mmol)于1,4-二噁烷(0.5mL)中的混合物18小时，并且在80℃下再加热2小时。添加水(5mL)并过滤沉淀，用水(5mL)洗涤，并且干燥。所得固体使用EtOH/己烷湿磨以产生呈白色固体状的标题化合物(41.98mg，56％)。Mp:221–224℃。HPLC:>99％[tR＝4.6分钟,20％MeOH,80％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.35(t,J＝5.6Hz,1H,在D2O振荡的情况下降低60％),7.52(q,J＝5.0Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.44(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),7.25(t,J＝7.8Hz,1H),6.59(d,J＝7.8Hz,1H),6.52(t,J＝7.8Hz,1H),3.46–3.32(m,6H),2.73(d,J＝5.0Hz,3H),2.50(t,J＝6.8Hz,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 603.3[10％,(2M+Na)+],291.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):313.1[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C14H18N4O3的计算值：(M+Na)+313.1271，实测值：313.1269。
Figure BDA0001866541900002431
(S)-(2,5-二氧代吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(SG5-084)：使用方法F，从Boc-L-天冬酰胺(2.32g，10mmol)、EDCI(2.11g，11mmol)、N-羟基丁二酰亚胺(1.27g，11mmol)、DMF(4mL)制备这种化合物以产生呈白色固体状的标题化合物(543.58mg，25％)。Mp:161–163℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.16(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.42(d,J＝8.2Hz,1H,在D2O振荡的情况下降低50％),4.31–4.22(m,1H),2.83(dd,J＝17.5,9.4Hz,1H),2.42(dd,J＝17.5,5.8Hz,1H),1.35(s,9H)。
Figure BDA0001866541900002432
(S)-3-氨基吡咯烷-2,5-二酮盐酸盐(SG5-088)：这使用方法G从SG5-084(474.44mg，2.22mmol)和含4M HCl的二噁烷(10mL)制备以产生呈灰白色固体状的标题化合物(341.38mg，定量产率)。Mp:210℃(摄氏度)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.69(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.69(s,3H,在D2O振荡的情况下消失),4.28(dd,J＝9.2,5.6Hz,1H),2.91(dd,J＝17.7,9.2Hz,1H),2.65(dd,J＝17.7,5.6Hz,1H)。
Figure BDA0001866541900002433
(R)-(2,5-二氧代吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(SG5-083)：使用方法F，从Boc-D-天冬酰胺(2.32g，10mmol)、EDCI(2.11g，11mmol)、N-羟基丁二酰亚胺(1.27g，11mmol)、DMF(4mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(555.17mg，26％)。Mp:151–154℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.19(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.42(d,J＝8.2Hz,1H,在D2O振荡的情况下降低50％),4.31–4.22(m,1H),2.83(dd,J＝17.5,9.4Hz,1H),2.42(dd,J＝17.5,5.8Hz,1H),1.35(s,9H)。
Figure BDA0001866541900002441
(R)-3-氨基吡咯烷-2,5-二酮盐酸盐(SG5-089)：使用方法G，从SG5-083(540mg，2.52mmol)和含4M HCl的二噁烷(10mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(384.12mg，定量产率)。Mp:207℃(摄氏度)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.67(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.69(s,3H,在D2O振荡的情况下消失),4.27(dd,J＝9.2,5.6Hz,1H),2.91(dd,J＝17.7,9.2Hz,1H),2.67(dd,J＝17.7,5.6Hz,1H)。
Figure BDA0001866541900002442
(S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(SG5-092)：这使用方法C从邻苯二甲酸酐(50mg，0.337mmol)、SG5-088(51mg，0.337mmol)和AcOH(0.5mL)制备以产生呈灰白色固体状的标题化合物(40.41mg，49％)。Mp:214–216℃。HPLC:99％[tR＝6.6分钟,25％MeOH,75％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.66(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.95–7.83(m,4H),5.27(dd,J＝9.6,5.7Hz,1H),2.98(dd,J＝18.0,9.6Hz,1H),2.87(dd,J＝18.0,5.7Hz,1H)。HPLC–MS(ESI–):m/z 510.2[10％,(2M–Na)-],243.1[30％,(M–H)-]。
Figure BDA0001866541900002451
2-(2,5-二氧代吡咯烷-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(SG5-086)：使用方法C，从邻苯二甲酸酐(50mg，0.337mmol)、SG5-076(51mg，0.337mmol)和AcOH(0.5mL)制备这种化合物以产生呈白色固体状的标题化合物(42.07mg，51％)。HPLC:99％[tR＝6.0分钟,25％MeOH,75％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.66(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.95–7.84(m,4H),5.26(dd,J＝9.5,5.7Hz,1H),2.98(dd,J＝18.0,9.5Hz,1H),2.87(dd,J＝18.0,5.7Hz,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 267.0[30％,(M+Na)+]。HPLC–MS(ESI–):m/z242.9[50％,(M–H)-]。HRMS(ESI+):m/z，C12H8N2O4的计算值：(M+Na)+267.0376，实测值：267.0338。
Figure BDA0001866541900002452
2-(溴甲基)-3-硝基苯甲酸甲酯(SG5-096)：[Pharm.Chem.J.2013,46,676-678]
在回流下加热2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯(1.95g，10mmol)、N-溴丁二酰亚胺(2.14g，12mmol)和AIBN(164.21mg，1mmol)于CCl4(25mL)中的混合物14小时。添加N-溴丁二酰亚胺(0.877g，5mmol)和AIBN(164.21mg，1mmol)，并且在回流下再加热混合物4小时。过滤混合物，用CCl4(10mL)洗涤，并且在减压下浓缩。在室温下静置后固化的所得油状物使用EtOAc/己烷湿磨，并且用己烷洗涤以产生呈黄色固体状的标题化合物(2.09mg，76％)。Mp:63–63℃.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.10(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.95(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.54(t,J＝8.0Hz,1H),5.15(s,2H),3.99(s,3H)。
Figure BDA0001866541900002461
(S)-3-(4-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)吡咯烷-2,5-二酮(SG5-097)：[Pharm.Chem.J.2013,46,676-678]在80℃下搅拌SG5-096(100mg，0.365mmol)、SG5-088(54.94mg，0.365mmol)和三乙胺(0.061mL，0.438mmol)于DMF(0.5mL)中的混合物15小时。添加水(5mL)，并且用EtOAc(2×8mL)萃取。合并的有机层用水(5mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，并且在减压下浓缩以产生呈灰白色固体状的标题化合物(49.87mg，49％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.56(s,1H),8.46(dd,J＝7.6,0.8Hz,1H),8.15(d,J＝7.6Hz,1H),7.82(t,J＝7.6Hz,1H),5.29(dd,J＝8.6,6.9Hz,1H),5.07(d,J＝19.3Hz,1H),4.80(d,J＝19.3Hz,1H),2.97(d,J＝8.6Hz,1H),2.96(d,J＝6.9Hz,1H)。HPLC–MS(ESI–):m/z 274.1[100％,(M–H)-]。
Figure BDA0001866541900002462
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(SG5-093)：使用方法C，从邻苯二甲酸酐(50mg，0.337mmol)、SG5-089(51mg，0.337mmol)和AcOH(0.5mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(40.83mg，50％)。Mp:209–214℃。HPLC:98％[tR＝5.2分钟,25％MeOH,75％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.66(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.96–7.81(m,4H),5.27(dd,J＝9.6,5.7Hz,1H),2.98(dd,J＝18.0,9.6Hz,1H),2.87(dd,J＝18.0,5.7Hz,1H)。HPLC–MS(ESI–):m/z 243.1[30％,(M–H)-]。HRMS(ESI+):m/z，C12H8N2O4的计算值：244.0491，实测值：245.0564(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002471
(S)-3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)吡咯烷-2,5-二酮(SG5-102)：在氩气下向SG5-097(45mg，0.162mmol)于THF(4mL，用氩气脱氧)中的混合物中添加Pd/C(10％w/w，10mg)。将烧瓶抽空，并且用氩气回填(两次)。将氩气抽空，并且使氢气气球连接于系统。在室温下搅拌反应混合物20小时，使用短硅藻土塞过滤，用THF洗涤，并且在减压下浓缩。所得残余物通过色谱法(SiO2)纯化，用DCM(含0-10％MeOH)洗脱以提供呈灰白色固体状的标题化合物(17.26mg，43％)。Mp:196–200℃。HPLC:>99％[tR＝4.8分钟,10％MeOH,90％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.54(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.16(t,J＝7.7Hz,1H),6.86(d,J＝7.4Hz,1H),6.77(d,J＝7.9Hz,1H),5.44(s,2H,在D2O振荡的情况下消失),5.20(dd,J＝9.3,5.9Hz,1H),4.32(d,J＝17.0Hz,1H),4.10(d,J＝17.0Hz,1H),2.97(dd,J＝18.0,9.3Hz,1H),2.87(dd,J＝18.0,5.9Hz,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 513.2[30％,(2M+Na)+],246.2[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C12H11N3O3的计算值：245.0806，实测值：246.0880(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002472
2-氨基-4-氯-N-(2-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)苯甲酰胺(SG5-125)：Mp:258℃(摄氏度)。这使用方法B(反应时间：在室温下17小时，在80℃下6小时，以及在60℃下过夜)从SG5-085(50mg，0.258mmol)、4-氯靛红酸酐(51mg，0.258mmol)、Et3N(0.043mL，0.310mmol)和1,4-二噁烷(0.5mL)制备以产生呈灰白色固体状的标题化合物(41.70mg，52％)。HPLC:99％[tR＝8.6分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.35(t,J＝5.3Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.40(d,J＝8.5Hz,1H),6.72(d,J＝2.1Hz,1H),6.61(s,2H,在D2O振荡的情况下消失),6.49(dd,J＝8.5,2.1Hz,1H),3.46–3.33(m,6H),2.50(d,J＝7.0Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 643.2[20％,(M35Cl+Na)+],313.1[40％,(M37Cl+H)+],311.1[100％,(M35Cl+H)+]。LC–MS(ESI+):333.1[100％,(M35Cl+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H15ClN4O3的计算值：(M+Na)+333.0725，实测值：333.0729。
Figure BDA0001866541900002481
2-氨基-5-氯-N-(2-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)苯甲酰胺(SG5-127)：Mp:259℃(摄氏度)。使用方法B(反应时间17小时)，从SG5-085(50mg，0.258mmol)、5-氯靛红酸酐(51mg，0.258mmol)、Et3N(0.043mL，0.310mmol)和1,4-二噁烷(0.5mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(24.10mg，30％)。HPLC:99％[tR＝5.4分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.41(t,J＝5.6Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.45(d,J＝2.5Hz,1H),7.13(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.68(d,J＝8.8Hz,1H),6.48(s,2H,在D2O振荡的情况下消失),3.46–3.33(m,6H),2.51(d,J＝6.8Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 643.1[15％,(M35Cl+Na)+],313.2[40％,(M37Cl+H)+],311.2[100％,(M35Cl+H)+]。LC–MS(ESI+):333.1[100％,(M35Cl+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H15ClN4O3的计算值：(M+Na)+333.0725，实测值：333.0730。
Figure BDA0001866541900002491
N-(2-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)苯甲酰胺(SG5-129)：使用方法A(反应时间过夜)，从SG5-085(50mg，0.258mmol)、苯甲酰氯(0.045mL，0.387mmol)、DIPEA(0.180mL，1.030mmol)和DMF(0.5mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(25.05mg，37％)。Mp:183–185℃(摄氏度)。HPLC:97％[tR＝6.9分钟,20％MeOH,80％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.55(t,J＝5.3Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.81–7.75(m,2H),7.54–7.47(m,1H),7.47–7.41(m,2H),3.50–3.36(m,6H),2.51(d,J＝6.8Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 545.3[100％,(2M+Na)+],284.1[80％,(M+Na)+],262.2[100％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):284.1[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H15N3O3的计算值：(M+Na)+284.1005，实测值：284.0992。
Figure BDA0001866541900002492
N-(2-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)苯磺酰胺(SG5-130)：使用方法A(反应时间过夜)，从SG5-085(50mg，0.258mmol)、苯磺酰氯(0.050mL，0.387mmol)、DIPEA(0.180mL，1.030mmol)和DMF(0.5mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(42.77mg，56％)。Mp:287℃(摄氏度)。HPLC:99％[tR＝6.1分钟,25％MeOH,75％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.81–7.73(m,3H；1H在D2O振荡的情况下消失),7.66–7.55(m,3H),3.34–3.28(m,4H,与残余水信号重叠),2.88(q,J＝6.3Hz,2H),2.49–2.44(m,2H,与残余DMSO信号重叠)。HPLC–MS(ESI+):m/z 617.2[100％,(2M+Na)+],320.2[70％,(M+Na)+],298.1[60％,(M+H)+]。LC–MS(ESI+):320.1[95％,(M+Na)+],298.1[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C12H15N3O4S的计算值：(M+H)+298.0856，实测值：298.0835。
Figure BDA0001866541900002501
N-(2-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)-1-(对甲苯基)甲烷磺酰胺(SG5-150-1)：使用方法A(反应时间过夜)，从SG4-178B2(50mg，0.261mmol)、对甲苯基甲烷磺酰氯(80mg，0.391mmol)、DIPEA(0.182mL，1.040mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(47.28mg，56％)。Mp:217–218℃。HPLC:99％[tR＝9.3分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.21(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.44(d,J＝7.8Hz,1H),7.24–7.18(m,3H；1H在D2O振荡的情况下消失),7.16(d,J＝8.0Hz,2H),5.51(dd,J＝7.8,2.3Hz,1H),4.26(s,2H),3.65(t,J＝5.9Hz,2H),3.09(q,J＝5.9Hz,2H),2.28(s,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 346.1[30％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C14H17N3O4S的计算值：323.0946，实测值：324.1020(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002511
1-(4-氯苯基)-N-(2-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)甲烷磺酰胺(SG5-150-2)：使用方法A(反应时间过夜)，从SG4-178B2(50mg，0.261mmol)、(4-氯苯基)甲烷磺酰氯(88mg，0.391mmol)、DIPEA(0.182mL，1.040mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(46.35mg，52％)。Mp:233–234℃。HPLC:99％[tR＝10.1分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.22(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.45(d,J＝7.8Hz,1H),7.43(d,J＝8.5Hz,1H),7.36(d,J＝8.5Hz,1H),7.29(t,J＝5.9Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),5.51(dd,J＝7.8,2.3Hz,1H),4.35(s,2H),3.66(t,J＝5.9Hz,2H),3.12(q,J＝5.9Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 709.2[25％,(2M35Cl+Na)+],366.1[35％,(M35Cl+Na)+],346.1[5％,(M37Cl+H)+],344.0[30％,(M35Cl+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H14ClN3O4S的计算值：343.0399，实测值：344.0470(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002512
1-(2-氯苯基)-N-(2-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)甲烷磺酰胺(SG5-150-3)：使用方法A(反应时间过夜)，从SG4-178B2(50mg，0.261mmol)、(2-氯苯基)甲烷磺酰氯(88mg，0.391mmol)、DIPEA(0.182mL，1.040mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(34.98mg，39％)。Mp:193–195℃。HPLC:99％[tR＝7.5分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.22(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.53–7.43(m,4H；1H在D2O振荡的情况下消失),7.40–7.32(m,2H),5.51(dd,J＝7.8,2.3Hz,1H),4.47(s,2H),3.68(t,J＝5.8Hz,2H),3.17(q,J＝5.8Hz,2H)。HPLC–MS(ESI–):m/z 685.2[15％,(M35Cl–H)-],344.1[40％,(M37Cl–H)-],342.1[100％,(M35Cl–H)-]。HRMS(ESI+):m/z，C13H14ClN3O4S的计算值：343.0399，实测值：344.0471(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002521
N-(2-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)-1-(3-硝基苯基)甲烷磺酰胺(SG5-150-4)：使用方法A(反应时间过夜)，从SG4-178B2(50mg，0.261mmol)、(3-硝基苯基)甲烷磺酰氯(92mg，0.391mmol)、DIPEA(0.182mL，1.040mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈淡黄色固体状的标题化合物(28.77mg，31％)。Mp:212–214℃。HPLC:99％[tR＝4.2分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.22(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.25(t,J＝2.1Hz,1H),8.22(ddd,J＝7.9,2.1,1.2Hz,1H),7.80(dt,J＝7.9,1.2Hz,1H),7.68(t,J＝7.9Hz,1H),7.46(d,J＝7.8Hz,1H),7.38(t,J＝6.0Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),5.51(dd,J＝7.8,2.3Hz,1H),4.57(s,2H),3.68(t,J＝6.0Hz,2H),3.17(q,J＝6.0Hz,2H)。HPLC–MS(ESI–):m/z 353.1[80％,(M–H)-]。HRMS(ESI+):m/z，C13H14N4O6S的计算值：354.0635，实测值：355.0714(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002522
N-(2-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)-1-(4-氟苯基)甲烷磺酰胺(SG5-150-5)：使用方法A(反应时间过夜)，从SG4-178B2(50mg，0.261mmol)、(4-氟苯基)甲烷磺酰氯(82mg，0.391mmol)、DIPEA(0.182mL，1.040mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(30.92mg，36％)。Mp:211–213℃。HPLC:95％[tR＝6.1分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.22(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.45(d,J＝7.8Hz,1H),7.37(ddd,J＝8.8,5.4,2.6Hz,2H),7.26(t,J＝6.0Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.19(td,J＝8.8,2.6Hz,2H),5.51(dd,J＝7.8,2.2Hz,1H),4.33(s,2H),3.66(t,J＝6.0Hz,2H),3.11(q,J＝6.0Hz,2H)。19F NMR(376MHz,DMSO-d6)δ-114.26(tt,J＝8.8,5.4Hz)。HPLC–MS(ESI+):m/z 677.2[100％,(2M+Na)+],655.2[100％,(2M+H)+],350.1[60％,(M+Na)+],328.2[60％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H14FN3O4S的计算值：327.0700，实测值：328.0773(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002531
N-(2-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)-2-甲氧基苯磺酰胺(SG5-163-1)：Mp:168–170℃。使用方法A(反应时间过夜)，从SG5-085(25mg，0.129mmol)、2-甲氧基苯磺酰氯(40mg，0.194mmol)、DIPEA(0.092mL，0.516mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(12.49mg，30％)。HPLC:>99％[tR＝5.2分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.70(dd,J＝7.6,1.8Hz,1H),7.59(ddd,J＝8.4,7.6,1.8Hz,1H),7.35(t,J＝6.0Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.20(dd,J＝8.4,0.9Hz,1H),7.05(td,J＝7.6,0.9Hz,1H),3.88(s,3H),3.34–3.28(m,4H,与残余水信号重叠),2.90(q,J＝6.0Hz,2H),2.49–2.45(m,2H,与残余DMSO信号重叠)。HPLC–MS(ESI+):m/z 677.2[100％,(2M+Na)+],350.1[60％,(M+Na)+],328.1[70％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H17N3O5S的计算值：327.0898，实测值：328.0975(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002541
N-(2-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)-3-甲氧基苯磺酰胺(SG5-163-2)：使用方法A(反应时间过夜)，从SG5-085(25mg，0.129mmol)、3-甲氧基苯磺酰氯(0.027mL，0.194mmol)、DIPEA(0.092mL，0.516mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(26.98mg，64％)。Mp:171–172℃。HPLC:>99％[tR＝7.3分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.75(t,J＝6.1Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.50(t,J＝8.0Hz,1H),7.34(dd,J＝8.0,0.9Hz,1H),7.28(t,J＝2.3Hz,1H),7.19(ddd,J＝8.0,2.3,0.9Hz,1H),3.81(s,3H),3.34–3.28(m,4H,与残余水信号重叠),2.88(q,J＝6.1Hz,2H),2.49–2.45(m,2H,与残余DMSO信号重叠)。HPLC–MS(ESI+):m/z 677.2[100％,(2M+Na)+],655.2[60％,(2M+H)+],328.2[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H17N3O5S的计算值：327.0898，实测值：328.0969(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002542
N-(2-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)-4-甲氧基苯磺酰胺(SG5-163-3)：使用方法A(反应时间过夜)，从SG5-085(25mg，0.129mmol)、4-甲氧基苯磺酰氯(40mg，0.194mmol)、DIPEA(0.092mL，0.516mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(22.90mg，54％)。Mp:147–149℃。HPLC:99％[tR＝6.4分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.70(d,J＝8.9Hz,2H),7.58(t,J＝6.3Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.09(d,J＝8.9Hz,2H),3.81(s,3H),3.33–3.27(m,4H,与残余水信号重叠),2.84(q,J＝6.3Hz,2H),2.49–2.45(m,2H,与残余DMSO信号重叠)。HPLC–MS(ESI+):m/z 677.2[100％,(2M+Na)+],350.1[90％,(M+Na)+],328.1[80％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C13H17N3O5S的计算值：327.0898，实测值：328.0972(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002551
N-(2-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)-2-甲氧基苯甲酰胺(SG5-163-4)：使用方法A(反应时间过夜)，从SG5-085(25mg，0.129mmol)、2-甲氧基苯甲酰氯(0.029mL，0.194mmol)、DIPEA(0.092mL，0.516mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(9.22mg，25％)。Mp:156–157℃。HPLC:99％[tR＝6.4分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.28(t,J＝5.2Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.67(dd,J＝7.5,1.8Hz,1H),7.43(ddd,J＝8.4,7.5,1.8Hz,1H),7.09(dd,J＝8.4,1.0Hz,1H),6.99(td,J＝7.5,1.0Hz,1H),3.83(s,3H),3.49–3.44(m,2H),3.44–3.37(m,4H),2.52(t,J＝6.8Hz,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 605.3[100％,(2M+Na)+],314.2[100％,(M+Na)+],292.1[80％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C14H17N3O4的计算值：291.1229，实测值：292.1302(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002561
N-(2-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)-3-甲氧基苯甲酰胺(SG5-163-5)：使用方法A(反应时间过夜)，从SG5-085(25mg，0.129mmol)、3-甲氧基苯甲酰氯(0.027mL，0.194mmol)、DIPEA(0.092mL，0.516mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(13.94mg，37％)。Mp:161–162℃。HPLC:>99％[tR＝7.3分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.54(t,J＝5.5Hz,1H),7.38–7.31(m,3H),7.08–7.04(m,1H),3.77(s,3H),3.47–3.36(m,6H),2.51(t,J＝6.8Hz,2H,与残余DMSO信号重叠)。HPLC–MS(ESI+):m/z 605.3[100％,(2M+Na)+],314.1[80％,(M+Na)+],292.1[60％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C14H17N3O4的计算值：291.1231，实测值：292.1302(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002562
N-(2-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙基)-4-甲氧基苯甲酰胺(SG5-163-6)：使用方法A(反应时间过夜)，从SG5-085(25mg，0.129mmol)、4-甲氧基苯甲酰氯(0.026mL，0.194mmol)、DIPEA(0.092mL，0.516mmol)和DMF(1mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(9.15mg，24％)。Mp:169–178℃。HPLC:99％[tR＝5.7分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),8.41(t,J＝5.5Hz,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.77(d,J＝8.9Hz,2H),6.97(d,J＝8.9Hz,2H),3.78(s,3H),3.47–3.35(m,6H),2.52–2.48(m,2H,与残余DMSO信号重叠)。HPLC–MS(ESI+):m/z 605.2[100％,(2M+Na)+],314.2[60％,(M+Na)+],292.2[80％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C14H17N3O4的计算值：291.1228，实测值：292.1301(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002571
(2-(1-乙基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基甲酸叔丁酯(SG5-175)：使用方法H(反应时间过夜)，从SG5-040(50mg，0.139mmol)、K2CO3(19mg，0.139mmol)、碘代乙烷(0.033mL，0.417mmol)和DMF(0.3mL)制备这种化合物以产生呈白色泡沫状的标题化合物(26.85mg，50％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.16(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.74(dd,J＝6.9,2.2Hz,1H),7.47–7.35(m,2H),5.14(dd,J＝13.4,5.3Hz,1H),4.40(d,J＝17.6Hz,1H),4.29(d,J＝17.6Hz,1H),3.73–3.54(m,2H),2.96(ddd,J＝18.4,13.4,5.3Hz,1H),2.75–2.68(m,1H),2.29(qd,J＝13.4,4.4Hz,1H),2.04–1.96(m,1H),1.44(s,9H),0.99(t,J＝7.0Hz,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 797.4[100％,(2M+Na)+],410.2[90％,(M+Na)+],388.2[40％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900002572
(2-(1-丙基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基甲酸叔丁酯(SG5-183)：使用方法H(反应时间过夜)，从SG5-040(100mg，0.278mmol)、Cs2CO3(100mg，0.306mmol)、碘代丙烷(0.054mL，0.556mmol)和NMP(0.5mL)制备这种化合物以产生呈白色泡沫状的标题化合物(60.99mg，55％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.19(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.74(dd,J＝6.9,2.1Hz,1H),7.47–7.38(m,2H),5.16(dd,J＝13.4,5.1Hz,1H),4.41(d,J＝17.6Hz,1H),4.29(d,J＝17.6Hz,1H),3.65–3.48(m,2H),2.99(ddd,J＝18.1,13.4,5.3Hz,1H),2.74(brd,J＝18.1Hz,1H),2.30(qd,J＝13.4,4.4Hz,1H),2.06–1.96(m,1H),1.45(s,9H),1.43–1.38(m,2H),0.80(t,J＝7.4Hz,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z825.4[100％,(2M+Na)+],402.2[40％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900002581
(2-(1-丁基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基甲酸叔丁酯(SG6-003-1)：使用方法H(反应时间16小时)，从SG5-040(100mg，0.278mmol)、Cs2CO3(100mg，0.306mmol)、碘代丁烷(0.095mL，0.835mmol)和NMP(0.5mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(44.35mg，38％)。Mp＝188℃(摄氏度)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.19(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.74(d,J＝6.7Hz,1H),7.48–7.38(m,2H),5.16(dd,J＝13.4,5.2Hz,1H),4.41(d,J＝17.5Hz,1H),4.29(d,J＝17.5Hz,1H),3.60(hept,J＝7.2,2H),2.98(ddd,J＝18.1,13.4,5.2Hz,1H),2.78–2.69(m,1H),2.29(qd,J＝13.4,4.6Hz,1H),2.05–1.95(m,1H),1.45(s,9H),1.39(q,J＝7.2Hz,2H),1.22(h,J＝7.2Hz,2H),0.85(t,J＝7.2Hz,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 853.4[100％,(2M+Na)+],831.4[40％,(2M+Na)+],438.2[30％,(M+Na)+],416.2[60％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900002591
(2-(1-戊基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基甲酸叔丁酯(SG6-003-2)：使用方法H(反应时间16小时)，从SG5-040(100mg，0.278mmol)、Cs2CO3(100mg，0.306mmol)、碘代戊烷(0.102mL，0.835mmol)和NMP(0.5mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(90.21mg，75％)。Mp＝144–148℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.18(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.73(dd,J＝6.7,2.3Hz,1H),7.47–7.38(m,2H),5.16(dd,J＝13.4,5.3Hz,1H),4.41(d,J＝17.5Hz,1H),4.28(d,J＝17.5Hz,1H),3.67–3.50(m,2H),2.98(ddd,J＝18.3,13.4,5.3Hz,1H),2.78–2.67(m,1H),2.29(qd,J＝13.4,4.5Hz,1H),2.06–1.94(m,1H),1.45(s,9H),1.41(dd,J＝9.2,5.4Hz,2H),1.31–1.15(m,4H),0.83(t,J＝7.1Hz,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 881.5[100％,(2M+Na)+],436.2[40％,(M+Na)+]。
Figure BDA0001866541900002592
(2-(1-异丁基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基甲酸叔丁酯(SG6-003-3)：使用方法H(反应时间16小时)，从SG5-040(100mg，0.278mmol)、Cs2CO3(100mg，0.306mmol)、碘代丁烷(0.095mL，0.835mmol)和NMP(0.5mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(44.35mg，38％)。Mp＝175–178℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.20(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.73(dd,J＝6.7,2.3Hz,1H),7.47–7.37(m,2H),5.18(dd,J＝13.4,5.2Hz,1H),4.41(d,J＝17.5Hz,1H),4.29(d,J＝17.5Hz,1H),3.53–3.41(m,2H),3.01(ddd,J＝18.3,13.4,5.2Hz,1H),2.82–2.69(m,1H),2.30(tt,J＝13.4,6.6Hz,1H),2.06–1.97(m,1H),1.85(hept,J＝6.8Hz,1H),1.45(s,9H),0.80(d,J＝6.8Hz,6H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 853.4[100％,(2M+Na)+],438.2[100％,(M+Na)+],416.2[20％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900002601
(2-(1-环丙基甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基甲酸叔丁酯(SG6-003-4)：使用方法H(反应时间16小时)，从SG5-040(100mg，0.278mmol)、Cs2CO3(100mg，0.306mmol)、溴代甲基环丙烷(0.081mL，0.835mmol)和NMP(0.5mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(71.07mg，62％)。Mp＝173–176℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.19(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.74(dd,J＝6.7,2.3Hz,1H),7.48–7.38(m,2H),5.18(dd,J＝13.4,5.3Hz,1H),4.42(d,J＝17.5Hz,1H),4.29(d,J＝17.5Hz,1H),3.51(d,J＝7.0Hz,2H),3.02(ddd,J＝18.3,13.4,5.3Hz,1H),2.81–2.71(m,1H),2.30(qd,J＝13.4,4.5Hz,1H),2.07–1.99(m,1H),1.45(s,9H),1.06–0.94(m,1H),0.42–0.34(m,2H),0.26–0.17(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 849.4[100％,(2M+Na)+],452.2[20％,(M+Na)+],430.2[20％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900002611
(2-(1-苯甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基甲酸叔丁酯(SG6-003-6)：使用方法H(反应时间16小时)，从SG5-040(100mg，0.278mmol)、Cs2CO3(100mg，0.306mmol)、溴代苯甲烷(0.099mL，0.835mmol)和NMP(0.5mL)制备这种化合物以产生呈灰白色固体状的标题化合物(47.87mg，38％)。Mp＝185–187℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.20(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.73(dd,J＝6.6,2.4Hz,1H),7.47–7.39(m,2H),7.32–7.17(m,5H),5.27(dd,J＝13.4,5.2Hz,1H),4.85(d,J＝14.8Hz,1H),4.78(d,J＝14.8Hz,1H),4.43(d,J＝17.5Hz,1H),4.30(d,J＝17.5Hz,1H),3.09(ddd,J＝18.1,13.4,5.2Hz,1H),2.85–2.74(m,1H),2.37(td,J＝13.4,4.4Hz,1H),2.11–1.99(m,1H),1.45(s,9H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 921.4[100％,(2M+Na)+],472.2[20％,(M+Na)+],450.2[25％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900002612
(2-(1-异丙基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基甲酸叔丁酯(SG6-009)：使用方法H(反应时间16小时)，从SG5-040(100mg，0.278mmol)、Cs2CO3(100mg，0.306mmol)、溴代异丙烷(0.078mL，0.835mmol)和NMP(0.5mL)制备这种化合物以产生呈白色固体状的标题化合物(59.89mg，54％)。Mp＝198–199℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.18(s,1H,在D2O振荡的情况下消失),7.76(d,J＝6.2Hz,1H),7.47–7.38(m,2H),5.09(dd,J＝13.4,5.3Hz,1H),4.77(hept,J＝6.5Hz,1H),4.40(d,J＝17.5Hz,1H),4.28(d,J＝17.5Hz,1H),2.94(ddd,J＝18.2,13.4,5.3Hz,1H),2.76–2.66(m,1H),2.27(qd,J＝13.4,4.6Hz,1H),2.02–1.95(m,1H),1.45(s,9H),1.27(t,J＝6.5Hz,6H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 825.4[100％,(2M+Na)+],424.2[100％,(M+Na)+],402.3[30％,(M+H)+]。
Figure BDA0001866541900002621
3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-1-乙基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(SG5-182)：使用方法G，从SG5-175(19.50mg，0.053mmol)和含4MHCl的二噁烷(0.4mL)制备这种化合物以产生呈白色固体状的标题化合物(13.77mg，85％)。Mp:189℃(摄氏度)。HPLC:99％[tR＝12.2分钟,15％MeOH,85％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.23(t,J＝7.6Hz,1H),7.01(d,J＝7.6Hz,1H),6.90(d,J＝7.6Hz,1H),5.13(dd,J＝13.4,5.3Hz,1H),4.23(d,J＝17.0Hz,1H),4.11(d,J＝17.0Hz,1H),3.64(hept,J＝6.8Hz,2H),2.97(ddd,J＝17.2,13.4,5.3Hz,1H),2.77–2.68(m,1H),2.26(qd,J＝13.4,4.6Hz,1H),2.03–1.96(m,1H),0.99(t,J＝6.8Hz,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 597.2[50％,(2M+Na)+],288.2[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C15H17N3O3的计算值：287.1274，实测值：288.1348(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002622
3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-1-丙基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(SG6-001)：使用方法G，从SG5-183(45mg，0.112mmol)和含4M HCl的二噁烷(0.5mL)制备这种化合物。所得残余物使用EtOAc/己烷湿磨以产生呈灰白色固体状的标题化合物(38.57mg，100％)。Mp:167℃(摄氏度)。HPLC:99％[tR＝10.7分钟,25％MeOH,75％水(含0.1％TFA),20分钟]。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.29(t,J＝7.7Hz,1H),7.11(d,J＝7.7Hz,1H),6.99(d,J＝7.7Hz,1H),5.17(dd,J＝13.4,5.3Hz,1H),4.29(d,J＝17.1Hz,1H),4.16(d,J＝17.1Hz,1H),3.66–3.52(m,2H),3.00(ddd,J＝17.2,13.4,5.3Hz,1H),2.75(ddd,J＝17.2,4.4,2.5Hz,1H),2.29(qd,J＝13.4,4.4Hz,1H),2.04(ddq,J＝10.4,5.3,2.5Hz,1H),1.44(q,J＝7.4Hz,2H),0.81(t,J＝7.4Hz,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 625.3[40％,(2M+Na)+],302.2[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C16H19N3O3的计算值：301.1429，实测值：324.1322(M+Na)+。
Figure BDA0001866541900002631
3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-1-丁基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(SG6-007-1)：使用方法G，从SG5-003-1(29.44mg，0.071mmol)和含4M HCl的二噁烷(0.5mL)制备这种化合物。所得残余物使用EtOAc/己烷湿磨以产生呈灰白色固体状的标题化合物(24.20mg，97％)。Mp:132–134℃。HPLC:99％[tR＝16.9分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.28(t,J＝7.7Hz,1H),7.11(d,J＝7.7Hz,1H),7.00(d,J＝7.7Hz,1H),5.15(dd,J＝13.4,5.3Hz,1H),4.28(d,J＝17.1Hz,1H),4.15(d,J＝17.1Hz,1H),3.68–3.54(m,2H),2.99(ddd,J＝18.5,13.4,5.3Hz,1H),2.79–2.68(m,1H),2.27(qd,J＝13.4,4.4Hz,1H),2.07–1.98(m,1H),1.39(p,J＝7.3Hz,2H),1.22(h,J＝7.3Hz,2H),0.84(t,J＝7.3Hz,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 653.3[60％,(2M+Na)+],338.3[40％,(M+Na)+],316.2[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C17H21N3O3的计算值：315.1594，实测值：316.1669(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002641
3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-1-戊基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(SG6-007-2)：使用方法G，从SG5-003-2(73mg，0.170mmol)和含4M HCl的二噁烷(0.5mL)制备这种化合物。所得残余物使用EtOAc/己烷湿磨以产生呈灰白色固体状的标题化合物(61.87mg，99％)。Mp:133–135℃。HPLC:99％[tR＝6.5分钟,50％MeOH,50％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.29(t,J＝7.7Hz,1H),7.12(d,J＝7.7Hz,1H),7.01(d,J＝7.7Hz,1H),5.16(dd,J＝13.4,5.3Hz,1H),4.29(d,J＝17.1Hz,1H),4.16(d,J＝17.1Hz,1H),3.66–3.55(m,2H),2.99(ddd,J＝18.6,13.4,5.3Hz,1H),2.74(ddd,J＝17.1,4.4,2.3Hz,1H),2.28(qd,J＝13.4,4.4Hz,1H),2.07–1.96(m,1H),1.41(p,J＝7.3Hz,2H),1.30–1.13(m,4H),0.83(t,J＝7.3Hz,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 681.3[80％,(2M+Na)+],352.2[40％,(2M+Na)+],330.2[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C18H23N3O3的计算值：329.1747，实测值：330.1822(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002651
3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-1-异丁基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(SG6-007-3)：使用方法G，从SG5-003-3(51mg，0.122mmol)和含4M HCl的二噁烷(0.5mL)制备这种化合物。所得残余物使用EtOAc/己烷湿磨以产生呈灰白色固体状的标题化合物(42.68mg，99％)。Mp:142–145℃。HPLC:99％[tR＝3.7分钟,50％MeOH,50％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.32(t,J＝7.6Hz,1H),7.18(d,J＝7.6Hz,1H),7.07(d,J＝7.6Hz,1H),5.18(dd,J＝13.5,5.3Hz,1H),4.33(d,J＝17.1Hz,1H),4.18(d,J＝17.1Hz,1H),3.54–3.40(m,2H),3.01(ddd,J＝18.3,13.5,5.3Hz,1H),2.76(ddd,J＝17.4,4.4,2.4Hz,1H),2.30(qd,J＝13.5,4.5Hz,1H),2.09–1.98(m,1H),1.84(hept,J＝6.8Hz,1H),0.80(d,J＝6.8Hz,6H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 653.4[50％,(2M+Na)+],316.2[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C17H21N3O3的计算值：315.1592，实测值：316.1666(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002652
3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-1-(环丙基甲基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐(SG6-007-4)：使用方法G，从SG5-003-4(55mg，0.133mmol)和含4M HCl的二噁烷(0.5mL)制备这种化合物。所得残余物使用EtOAc/己烷湿磨以产生呈灰白色固体状的标题化合物(46.37mg，99％)。Mp:142–149℃。HPLC:94％[tR＝3.1分钟,50％MeOH,50％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.28(t,J＝7.6Hz,1H),7.11(d,J＝7.6Hz,1H),6.99(d,J＝7.6Hz,1H),5.18(dd,J＝13.5,5.3Hz,1H),4.30(d,J＝17.0Hz,1H),4.15(d,J＝17.0Hz,1H),3.53–3.49(m,2H),3.03(ddd,J＝18.4,13.5,5.3Hz,1H),2.77(ddd,J＝17.4,4.5,2.3Hz,1H),2.28(qd,J＝13.5,4.5Hz,1H),2.09–2.00(m,1H),1.05–0.95(m,1H),0.43–0.32(m,2H),0.25–0.16(m,2H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 649.3[50％,(2M+Na)+],314.2[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C17H19N3O3的计算值：313.1434，实测值：314.1510(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002661
3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-1-苯甲基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(SG6-007-6)：使用方法G，从SG5-003-6(38mg，0.084mmol)和含4M HCl的二噁烷(0.5mL)制备这种化合物。所得残余物使用EtOAc/己烷湿磨以产生呈灰白色固体状的标题化合物(32.09mg，98％)。Mp:150–155℃。HPLC:99％[tR＝4.3分钟,50％MeOH,50％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.32–7.18(m,6H),7.10(d,J＝7.6Hz,1H),6.99(d,J＝7.6Hz,1H),5.27(dd,J＝13.4,5.0Hz,1H),4.85(d,J＝14.8Hz,1H),4.79(d,J＝14.8Hz,1H),4.30(d,J＝17.0Hz,1H),4.16(d,J＝17.0Hz,1H),3.10(ddd,J＝18.3,13.4,5.3Hz,1H),2.81(ddd,J＝17.4,4.6,2.4Hz,1H),2.34(td,J＝13.4,4.6Hz,1H),2.12–2.02(m,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 721.4[60％,(2M+Na)+],350.2[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C20H19N3O3的计算值：349.1436，实测值：350.1512(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002671
3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-1-异丙基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(SG6-010)：使用方法G，从SG5-009(48mg，0.119mmol)和含4M HCl的二噁烷(0.5mL)制备这种化合物。所得残余物使用EtOAc/己烷湿磨以产生呈灰白色固体状的标题化合物(40.01mg，99％)。Mp:186℃(摄氏度)。HPLC:99％[tR＝7.4分钟,30％MeOH,70％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.29(t,J＝7.6Hz,1H),7.13(d,J＝7.6Hz,1H),7.02(d,J＝7.6Hz,1H),5.09(dd,J＝13.4,5.0Hz,1H),4.77(hept,J＝6.6Hz,1H),4.29(d,J＝16.6Hz,1H),4.16(d,J＝16.6Hz,1H),2.94(ddd,J＝18.4,13.4,5.4Hz,1H),2.70(ddd,J＝17.3,4.4,2.3Hz,1H),2.24(qd,J＝13.4,4.4Hz,1H),2.01–1.94(m,1H),1.25(d,J＝6.6Hz,3H),1.23(d,J＝6.6Hz,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 625.3[30％,(2M+Na)+],302.2[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C16H19N3O3的计算值：301.1437，实测值：302.1510(M+H)+。
Figure BDA0001866541900002672
1-异丙基-3-(4-(异丙基氨基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(SG6-003-5)：使用方法H(反应时间16小时)，从SG5-040(100mg，0.278mmol)、Cs2CO3(100mg，0.306mmol)、碘代异丙烷(0.166mL，1.670mmol)和NMP(0.5mL)制备这种化合物以产生呈黄色固体状的标题化合物(28.14mg，29％)。Mp:101–105℃。HPLC:95％[tR＝7.5分钟,50％MeOH,50％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.26(t,J＝7.7Hz,1H),6.89(d,J＝7.7Hz,1H),6.75(d,J＝7.7Hz,1H),5.26(brs,1H),5.10(dd,J＝13.5,5.3Hz,1H),4.78(hept,J＝6.9Hz,1H),4.19(d,J＝17.0Hz,1H),4.06(d,J＝17.0Hz,1H),3.72–3.59(m,1H),2.97(ddd,J＝18.7,13.5,5.3Hz,1H),2.72(ddd,J＝17.4,4.6,2.4Hz,1H),2.27–2.14(m,1H),2.03–1.93(m,1H),1.27(dd,J＝6.9,3H),1.26(dd,J＝6.9,3H),1.16(dd,J＝6.3,3H),1.15(dd,J＝6.3,3H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 709.4[60％,(2M+Na)+],344.2[100％,(M+H)+]。HRMS(ESI+):m/z，C19H25N3O3的计算值：343.1906，实测值：344.1981(M+H)+。
流程16
Figure BDA0001866541900002681
(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1)：在密封管中在THF(1mL)中混合来那度胺(259mg，1mmol)和Boc2O(218mg，1.1mmol)，并且在60℃下搅拌过夜。次日，添加Boc2O(110mg，0.5当量)、THF(1mL)和DMF(0.5mL)，并且将溶液在120℃下再搅拌过夜。添加水(20mL)，并且对混合物进行声波处理。过滤沉淀，用水(10mL)洗涤，并且干燥。所得固体使用EtOH/EtOAc/己烷湿磨，并且过滤以产生呈灰白色固体状的所需产物(258mg，72％)。Mp:196–198℃。HPLC–MS(ESI+):m/z 741.3[(100％,2M+Na)+],719.4[(40％,2M+H)+],360.2[(90％,M+H)+]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.00(s,1H),9.21(s,1H),7.74(dd,J＝6.8,1.7Hz,1H),7.49–7.39(m,2H),5.10(dd,J＝13.3,4.7Hz,1H),4.41(d,J＝17.6Hz,1H),4.32(d,J＝17.6Hz,1H),2.95–2.83(m,1H),2.64–2.54(m,1H),2.40–2.26(m,1H),2.05–1.95(m,1H),1.46(s,9H)。报道了化合物1[4]。
Figure BDA0001866541900002691
(2-(1-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基甲酸叔丁酯(2)：在室温下在氩气下向1(100mg，0.278mmol)和K2CO3(38mg，0.278mmol)于DMF(0.8mL)中的混合物中逐滴添加碘代甲烷(0.017mL，0.278mmol)。将混合物搅拌过夜。添加水(10mL)，并且用EtOAc(2×20mL)萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，过滤，并且在减压下浓缩。所得黄色油状物通过快速色谱法(SiO2)纯化，用含己烷的EtOAc(80％至100％)洗脱以提供呈白色固体状的标题化合物(40.37mg，39％)。Mp:192℃(摄氏度)。HPLC–MS(ESI+):m/z 741.3[(100％,2M+Na)+],719.4[(40％,2M+H)+],360.2[(90％,M+H)+]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.20(s,1H),7.73(dd,J＝6.5,2.3Hz,1H),7.49–7.41(m,2H),5.16(dd,J＝13.4,5.1Hz,1H),4.42(d,J＝17.6Hz,1H),4.30(d,J＝17.6Hz,1H),3.02–2.90(m,1H),2.99(s,3H),2.80–2.71(m,1H),2.40–2.27(m,1H),2.07–1.97(m,1H),1.46(s,9H)。
Figure BDA0001866541900002692
3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-1-甲基哌啶-2,6-二酮(3,SG5-046)：在室温下在含4M HCl的二噁烷(0.5mL)中搅拌2(35mg，0.093mmol)3.5小时。在减压下浓缩白色混悬液，并且所得固体于DCM/己烷中湿磨，用EtOAc和己烷(各自10mL)洗涤，并且干燥以提供呈淡黄色薄片状的标题化合物(21.81mg，75％)。Mp:207℃(摄氏度)。HPLC:99％[tR＝11.6分钟,10％MeOH,90％水(含0.1％TFA),20分钟]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.29(t,J＝7.5Hz,1H),7.11(d,J＝7.5Hz,1H),6.99(d,J＝7.5Hz,1H),5.17(dd,J＝13.4,4.7Hz,1H),5.20–4.80(br s,2H,在D2O振荡的情况下消失),4.28(d,J＝17.0Hz,1H),4.17(d,J＝17.0Hz,1H),3.05–2.91(m,1H),2.99(s,3H),2.80–2.70(m,1H),2.39–2.25(m,1H),2.08–1.97(m,1H)。HPLC–MS(ESI+):m/z 569.2[(30％,2M+Na)+],274.2[(100％,M+H)+]。LC–MS(ESI+):569.2[40％,(2M+Na)+],296.1[100％,(M+Na)+]。HRMS(ESI+):m/z，C14H15N3O3的计算值：(M+H)+274.1186，实测值：274.1176。
流程17
Figure BDA0001866541900002701
1-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-(3-甲氧基苯基)脲(MA5-170)：在室温下在氩气下向α-氨基戊二酰亚胺盐酸盐(0.081g，0.492mmol)于DMF(0.5mL)中的溶液中添加DIPEA(164μL，0.949mmol)。搅拌混合物5分钟，并且在0℃下添加异氰酸3-甲氧基苯酯(0.07g，0.469mmol)。在0℃下搅拌混合物5分钟，并且使其升温至室温。再搅拌混合物18小时。使用Biotage V-10蒸发器移除溶剂，并且残余物通过SiO2柱，使用含10％MeOH的CH2Cl2纯化以提供呈白色固体状的标题化合物(0.133g，87％)。HPLC:96.9％[tR＝12.6分钟,5–95梯度洗脱,MeOH/H2O(含0.1％TFA),20分钟,254nm]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.87(s,1H),8.80(s,1H),7.17–7.06(m,2H),6.87(d,J＝8.0Hz,1H),6.55–6.42(m,2H),4.45(dt,J＝12.3,6.1Hz,1H),2.74(m,1H),2.55–2.45(m,1H),2.13–2.04(m,1H),1.96(qd,J＝12.9,4.8,1H)。HPLC-MS(ESI+):m/z 577.3(2M+Na)+,278.2(M+H)+。
流程18
Figure BDA0001866541900002711
N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)呋喃-2-甲酰胺(MA5-178)：在室温下在氩气下向α-氨基戊二酰亚胺盐酸盐(0.082g，0.50mmol)于DMF(1mL)中的溶液中添加DIPEA(174μL，1.0mmol)。使混合物冷却至0℃，并且添加2-呋喃甲酰氯(74.2μL，0.75mmol)。在0℃下搅拌混合物30分钟，并且使其升温至室温。将混合物搅拌过夜，并且用H2O(2mL)淬灭。使用Biotage V-10蒸发器移除溶剂。残余物通过SiO2色谱法(0-20梯度洗脱，MeOH/DCM)纯化以提供呈白色固体状的产物(0.058g，52％)。HPLC:98.2％[tR＝5.6分钟,15％MeOH,85％水(含0.1％TFA),20分钟,254nm]。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.87(s,1H),8.64(d,J＝8.5Hz,1H),7.88(dd,J＝1.7,0.8Hz,1H),7.14(dd,J＝3.5,0.7Hz,1H),6.55(dd,J＝3.5,1.7Hz,1H),4.74(m,1H),2.79(ddd,J＝18.9,13.5,5.5,1H),2.56–2.48(m,1H),2.12(qd,J＝12.9,4.3Hz,1H),1.99–1.86(m,1H)。HPLC-MS(ESI+):m/z 467.2(2M+Na)+,223.1(M+H)+。
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Claims (8)

1.一种组合物，其包含具有如以下表示的结构的化合物：
Figure FDF0000018337230000011
2.如权利要求1所述的组合物在制备用于降低自体免疫疾病或病症的风险，预防自体免疫疾病或病症，或治疗自体免疫疾病或病症的药物中的用途。
3.如权利要求1所述的组合物在制备用于使患者的疾病状态或疾患的风险降低，预防或治疗所述疾病状态或疾患的药物中的用途，其中调控异常的蛋白质活性导致所述疾病状态或疾患。
4.如权利要求3所述的用途，其中所述疾病状态或疾患是哮喘、多发性硬化症、癌症、糖尿病、心脏病、高血压、炎性肠病、阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、类风湿性关节炎或其组合。
5.如权利要求3所述的用途，其中所述疾病状态或疾患是癌症。
6.如权利要求1所述的组合物在制备用于抑制cereblon E3泛素连接酶结合部分(CLM)的药物中的用途。
7.如权利要求1所述的组合物在制备用于使受试者的癌症的风险降低，预防或治疗所述癌症的药物中的用途。
8.如权利要求7所述的用途，其中所述癌症是多发性骨髓瘤、骨髓发育不良综合征或淋巴瘤。
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