CN108865994A - 自身癌抗原特异性cd8+ t细胞的分离及增殖方法 - Google Patents
自身癌抗原特异性cd8+ t细胞的分离及增殖方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108865994A CN108865994A CN201810653908.0A CN201810653908A CN108865994A CN 108865994 A CN108865994 A CN 108865994A CN 201810653908 A CN201810653908 A CN 201810653908A CN 108865994 A CN108865994 A CN 108865994A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- cancer
- itself
- antigen
- epitope
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 155
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 150
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 127
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 108
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 108
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 108
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 58
- 238000000926 separation method Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 70
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 47
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 31
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 31
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 46
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 35
- 101000655352 Homo sapiens Telomerase reverse transcriptase Proteins 0.000 claims description 26
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 23
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 17
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 15
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 5
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 abstract 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 33
- 102100022748 Wilms tumor protein Human genes 0.000 description 24
- 108700020467 WT1 Proteins 0.000 description 21
- 230000008569 process Effects 0.000 description 20
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 19
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 19
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 19
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 15
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 15
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 13
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 11
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 11
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 10
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 10
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 10
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 7
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 7
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 description 6
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 5
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 5
- 101710098119 Chaperonin GroEL 2 Proteins 0.000 description 4
- 101000938702 Homo sapiens N-acetyltransferase ESCO1 Proteins 0.000 description 4
- 102100030815 N-acetyltransferase ESCO1 Human genes 0.000 description 4
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 4
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 101000621309 Homo sapiens Wilms tumor protein Proteins 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 3
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 3
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010017842 Telomerase Proteins 0.000 description 2
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 238000011224 anti-cancer immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 229940089468 hydroxyethylpiperazine ethane sulfonic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 2
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000272 myelencephalon Anatomy 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 201000008026 nephroblastoma Diseases 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 108091035539 telomere Proteins 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 2
- 238000012549 training Methods 0.000 description 2
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 2
- PJNSIUPOXFBHDM-GUBZILKMSA-N Ala-Arg-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O PJNSIUPOXFBHDM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 description 1
- DTBPLQNKYCYUOM-JYJNAYRXSA-N Arg-Met-Phe Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 DTBPLQNKYCYUOM-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- DXHINQUXBZNUCF-MELADBBJSA-N Asn-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)O DXHINQUXBZNUCF-MELADBBJSA-N 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- UCSXXFRXHGUXCQ-SRVKXCTJSA-N Cys-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N UCSXXFRXHGUXCQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- SNHRIJBANHPWMO-XGEHTFHBSA-N Cys-Met-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)N)O SNHRIJBANHPWMO-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- KVXVVDFOZNYYKZ-DCAQKATOSA-N Gln-Gln-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KVXVVDFOZNYYKZ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- XHWLNISLUFEWNS-CIUDSAMLSA-N Glu-Gln-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O XHWLNISLUFEWNS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- MUSGDMDGNGXULI-DCAQKATOSA-N Glu-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O MUSGDMDGNGXULI-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- GJBUAAAIZSRCDC-GVXVVHGQSA-N Glu-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GJBUAAAIZSRCDC-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- BAYQNCWLXIDLHX-ONGXEEELSA-N Gly-Val-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CN BAYQNCWLXIDLHX-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- 101000971171 Homo sapiens Apoptosis regulator Bcl-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- KAFOIVJDVSZUMD-UHFFFAOYSA-N Leu-Gln-Gln Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O KAFOIVJDVSZUMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVHRPWQEQHIQJF-AVGNSLFASA-N Leu-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HVHRPWQEQHIQJF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- GFWLIJDQILOEPP-HSCHXYMDSA-N Lys-Ile-Trp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N GFWLIJDQILOEPP-HSCHXYMDSA-N 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 102000000440 Melanoma-associated antigen Human genes 0.000 description 1
- 108050008953 Melanoma-associated antigen Proteins 0.000 description 1
- YNOVBMBQSQTLFM-DCAQKATOSA-N Met-Asn-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YNOVBMBQSQTLFM-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSSXKZBDKZAHCX-UNQGMJICSA-N Phe-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MSSXKZBDKZAHCX-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- UVKNEILZSJMKSR-FXQIFTODSA-N Pro-Asn-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 UVKNEILZSJMKSR-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- KHRLUIPIMIQFGT-AVGNSLFASA-N Pro-Val-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KHRLUIPIMIQFGT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 206010070308 Refractory cancer Diseases 0.000 description 1
- DSSOYPJWSWFOLK-CIUDSAMLSA-N Ser-Cys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DSSOYPJWSWFOLK-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- UIPXCLNLUUAMJU-JBDRJPRFSA-N Ser-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UIPXCLNLUUAMJU-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- XNCUYZKGQOCOQH-YUMQZZPRSA-N Ser-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O XNCUYZKGQOCOQH-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- KCGIREHVWRXNDH-GARJFASQSA-N Ser-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N KCGIREHVWRXNDH-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- YEDSOSIKVUMIJE-DCAQKATOSA-N Ser-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YEDSOSIKVUMIJE-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- PJCYRZVSACOYSN-ZJDVBMNYSA-N Thr-Thr-Met Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O PJCYRZVSACOYSN-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- NAQBQJOGGYGCOT-QEJZJMRPSA-N Trp-Asn-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O NAQBQJOGGYGCOT-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- NZYNRRGJJVSSTJ-GUBZILKMSA-N Val-Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NZYNRRGJJVSSTJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 230000006786 activation induced cell death Effects 0.000 description 1
- 230000017488 activation-induced cell death of T cell Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 1
- 108700025316 aldesleukin Proteins 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 108700000711 bcl-X Proteins 0.000 description 1
- 102000055104 bcl-X Human genes 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 208000022013 kidney Wilms tumor Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000003866 lung sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229940087463 proleukin Drugs 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000036647 reaction Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 208000016691 refractory malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 210000003411 telomere Anatomy 0.000 description 1
- 102000055501 telomere Human genes 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464452—Transcription factors, e.g. SOX or c-MYC
- A61K39/464453—Wilms tumor 1 [WT1]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464454—Enzymes
- A61K39/464457—Telomerase or [telomerase reverse transcriptase [TERT]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464484—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
- A61K39/464486—MAGE
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464484—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
- A61K39/464488—NY-ESO
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0647—Haematopoietic stem cells; Uncommitted or multipotent progenitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2302—Interleukin-2 (IL-2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
- C12N2501/52—CD40, CD40-ligand (CD154)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/998—Proteins not provided for elsewhere
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离及增殖方法,详细地涉及如下方法及利用其的CD8+T细胞的大量增殖方法,在上述方法中,从存在于癌症患者每个人的血液内的自身癌抗原筛选由CD8+T细胞识别的表位,并利用已筛选的表位的肽来分离对自身癌抗原特异性的CD8+T细胞。根据本发明,利用作为非外来抗原的存在于癌症患者的每个人的血液的自身癌抗原CD8+T细胞表位的肽来可分离对自身癌抗原特异性的CD8+T细胞。因此,若利用识别自身癌抗原的T细胞,则可有效地选择来源于癌症患者本人的细胞的癌细胞来去除,因而可无副作用地应用于癌症的治疗及改善。
Description
本申请是2015年3月11日申请的申请号为20158001522.6,发明名称为“自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离及增殖方法”的分案申请。
技术领域
本发明涉及自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离及增殖方法,详细地涉及如下方法及利用其的CD8+T细胞的大量增殖方法,在上述方法中,从存在于癌症患者每个人的血液内的自身癌抗原筛选由CD8+T细胞识别的表位,并利用已筛选的表位的肽来分离对自身癌抗原特异性的CD8+T细胞。
背景技术
CD8+T细胞与树突细胞、CD4+T、自然杀伤细胞(NK细胞)之类的其他细胞相比,具有比较单纯的功能,因而当进行抗癌免疫治疗时,产生未期待的副作用的可能性小。通常,利用主要组织相容性复合体-I类/肽多聚体(MHC class I/peptide multimer)来分离抗原特异性CD8+T细胞,但在这种方法的情况下,存在细胞分离之后由细胞自杀导致的死亡率高,从而为了生产充分量的抗原特异性CD8+T细胞,有需要长时间进行培养的缺点。因而代替刺激T细胞受体(TCR,T cell receptor)的主要组织相容性复合体多聚体(MHC multimer),需要可分离抗原特异性CD8+T细胞的替代标记(surrogate marker),对此本发明人很长时间进行了与作为免疫调节蛋白的4-1BB(CD137)相关的研究。
众所周知,4-1BB在由诱导性共刺激分子活性化的T细胞中表达,尤其,不仅增进CD8+T细胞的活性,而且增加Bcl-2、Bcl-XL、Bfl-1等之类的抗-细胞死亡分子(anti-apoptotic molecules)的表达,来呈现抑制活化诱导的细胞死亡(AICD,activation-induced cell death)的功能。这种4-1BB刺激的多个特性是适合于癌症治疗的多个特性,基于此,利用动物模型对利用抗-4-1BB mAb的癌症治疗效果进行验证。对此,本发明人利用在以前研究中,以抗原特异性活性化的CD8+T细胞的4-1BB的表达来确立了利用抗-4-1BB抗体的抗原特异性CD8+T细胞的分离及增殖方法(韩国登录特许第10-0882445号),但在抗体的情况下,体外(in vitro)及体内(in vivo)半衰期长,并且通过Fc受体的信号传递结果和通过抗体识别的靶蛋白质的信号传递的效果被合并,从而呈现整体结果。并且,对相同的抗原存在多种抗体的情况多,并且这些呈现相互稍不同的效果。为了克服这种局限点,利用作为五聚合体的COMP-4-1BBL蛋白质来成功开发过分离及增殖抗原特异性CD8+T细胞的方法(韩国登录特许第10-1103603号)。
这两种专利作为外来抗原的病毒抗原(EBV/LMP2A,CMV/pp65)特异性CD8+T细胞分离/大量培养的技术,在体内这些细胞的比率高,从而可比较容易体现。但大部分癌细胞由构成我们身体的细胞形成,因而虽然是构成我们身体的蛋白质,但在正常细胞中以低的比率存在,并且在癌细胞中需要将识别过表达的自身癌抗原(self tumor Ag)的CD8+T细胞选择性分离及大量培养。
发明内容
技术问题
因此,本发明的目的在于,提供自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离及增殖方法,上述自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离及增殖方法可在31天内选择性地分离并大量培养在体内以极低的比率存在的自身癌抗原特异性CD8+T细胞。
解决问题的手段
为了达成上述目的,本发明提供自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离方法,上述自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离方法包括:步骤a),筛选存在于癌症患者血液内的自身癌抗原CD8+T细胞表位;步骤b),与上述自身癌抗原CD8+T细胞表位的肽及白细胞介素-2(IL-2)一同在培养基中培养从癌症患者的血液中分离的外周血单个核细胞(PBMC,peripheralblood mononuclear cell);步骤c),在培养的上述外周血单个核细胞中添加与步骤b)相同的肽来诱导4-1BB表达;以及步骤d),在涂敷有抗-4-1BB抗体的培养板中培养诱导了4-1BB表达的细胞之后,去除未附着的细胞。
在本发明的自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离方法中,上述步骤a)的自身癌抗原可选自由人端粒酶逆转录酶(hTERT)、WT1、NY-ESO1及黑素瘤抗原-A3(MAGE-A3)组成的组中。
在本发明的自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离方法中,在上述步骤b)中,自身癌抗原CD8+T细胞表位可以为包含选自由序列1至序列15组成的组中的氨基酸序列的肽。
在本发明的自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离方法中的特征在于,上述步骤c)中,表达诱导培养12至36小时。
在本发明的自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离方法中,上述步骤d)中,可培养1至20分钟。
并且,本发明提供自身癌抗原特异性CD8+T细胞的大量培养方法,上述自身癌抗原特异性CD8+T细胞的大量培养方法包括如下步骤:利用包含白细胞介素-2、抗-CD3抗体及自体血浆的培养基,来使通过上述方法分离的自身癌抗原特异性CD8+T细胞和放射线照射的同种异体(allogeneic)外周血单个核细胞悬浮之后,注入于培养用袋,追加注入上述培养基来进行培养。
在本发明的自身癌抗原特异性CD8+T细胞的大量培养方法中,上述外周血单个核细胞可从正常供体分离。
在本发明的自身癌抗原特异性CD8+T细胞的大量培养方法中,上述培养可执行4至15天。
发明的效果
根据本发明,利用作为非外来抗原的存在于癌症患者的每个人的血液中的自身癌抗原CD8+T细胞表位的肽来可分离对自身癌抗原特异性的CD8+T细胞。因此,若利用以本发明的方法分离的用于识别在正常人中以极低的比率存在的自身癌抗原的T细胞,则可有效地选择来源于癌症患者自身的癌细胞来去除。
附图说明
图1为说明本发明的自身癌抗原特异性CD8+T细胞的选择性分离及大量培养过程的图。
图2为表示本发明的表位筛选过程的工序流程图的图。
图3为示出利用从正常人(healthy doner)取得的外周血单个核细胞的人端粒酶逆转录酶表位筛选结果的图。
图4为示出利用从正常人取得的外周血单个核细胞的WT1表位筛选结果的图。
图5至图7为示出利用分别从胃癌(gastric cancer)、肺癌(lung cancer)及胰腺癌(pancreatic cancer)患者取得的外周血单个核细胞的人端粒酶逆转录酶表位筛选结果的图。
图8及图9为示出利用分别从脑肿瘤(glioblastoma)、肺癌患者取得的外周血单个核细胞的WT1表位筛选结果的图。
图10及图11为示出利用分别从卵巢癌(ovarian cancer)及肉瘤(sarcoma)患者取得的外周血单个核细胞的NY-ESO1表位筛选结果的图。
图12及图13为示出利用分别从肉瘤及肺癌患者取得的外周血单个核细胞的黑素瘤抗原-A3(MAGE-A表位筛选结果的图。
图14为用于说明人端粒酶逆转录酶T细胞治疗剂的试生产过程的图。
图15为用于说明WT1T细胞治疗剂的试生产过程的图。
图16为用于说明NY-ES01T细胞治疗剂的试生产过程的图。
图17为用于说明黑素瘤抗原-A3T细胞治疗剂的试生产过程的图。
具体实施方式
癌细胞来源于构成我们身体的细胞,因而为了选择性地去除癌细胞,需要从癌细胞中过表达的自身癌抗原(self tumor Ag)特异性CD8+T细胞的选择性分离及大量培养。但是,用于识别自身癌抗原的T细胞在正常人的情况下,不仅以比率极低的方式存在,而且以因免疫耐受(immune tolerance)而抑制活性的状态存在。因此,尚未开发从癌症患者的血液中选择性地分离自身癌抗原特异性CD8+T细胞来大量培养的规格化的工序。对此,本发明人开发了如下规格化的工序技术,即,利用抗4-1BB抗体来在31天内可选择性地分离并大量培养在体内以极低的比率存在的人端粒酶逆转录酶、WT1、NY-ESO1及黑素瘤抗原-A3之类的自身癌抗原特异性的CD8+T细胞。
因此,本发明提供自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离方法。具体地,本发明的自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离方法包括:步骤a),筛选存在于癌症患者血液内的自身癌抗原CD8+T细胞表位;步骤b),与上述自身癌抗原CD8+T细胞表位的肽及白细胞介素-2一同在培养基中培养从癌症患者的血液中分离的外周血单个核细胞(PBMC,peripheral bloodmononuclear cell);步骤c),在培养的上述外周血单个核细胞中添加与步骤b)相同的肽来诱导4-1BB表达;以及步骤d),在涂敷有抗-4-1BB抗体的培养板中培养诱导了4-1BB表达的细胞之后,去除未附着的细胞。
在本发明的自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离方法中,上述步骤a)中,自身癌抗原可以为存在于癌症患者自身的体内的一种癌抗原,根据癌瘤可选择适合的自身癌抗原来使用。优选地,作为利用于抗癌免疫治疗的代表性自身癌抗原可使用人端粒酶逆转录酶(基因库:BAC11010.1)、WT1(基因库:AAO61088.1)、NY-ESO1(基因库:CAA05908.1)及黑素瘤抗原-A3(NCBI参考序列:NP_005353.1)等。众所周知,上述人端粒酶逆转录酶作为在染色体末端合成端粒脱氧核糖核酸(telomeric DNA)的酶,癌细胞使该酶过度活性化来可回避端粒依存性细胞死亡来起到作用,并且是包括肺癌、胃癌及胰腺癌的多种实体癌的靶抗原(KimNW,et al.Science.1994;266:2011-2015),众所周知,上述WT1作为与肾母细胞瘤(Wilmstumor)相关的基因,是对锌指(zinc finger)转录因子加密来参与细胞的增殖和分化、死亡及器官的产生的蛋白质,是脑脊髓癌、肺癌等的靶抗原(Call KM,et al.,Cell.1990.60:509-520;Nakahara Y,et al.,Brain Tumor Pathol.2004.21:113-6)。并且,众所周知,上述NY-ESO1作为属于癌睾丸抗原(CTA,cancer testis antigen)的蛋白质之一,主要表达于包含生殖细胞(germ cell)、肉瘤(sarcoma)及乳腺癌的多种癌细胞,但未知在这些细胞中起到什么功能(Gnjatic S,et al.,Adv Cancer Res.2006;95:1-30)。上述黑素瘤抗原-A3作为属于黑色素瘤相关抗原家族(melanoma-associated antigen family)的蛋白质,未公开在正常细胞中执行什么功能,但是,众所周知,在包括肺癌、肉瘤及黑色素瘤的多种癌细胞中过表达,从而评价为适合癌症的免疫治疗的靶抗原(Decoster L,et al.,AnnOncol.2012Jun;23(6):1387-93)。
本发明的自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离方法的特征在于,在上述步骤b)中,表位为包含选自由序列1至序列15组成的组中的氨基酸序列的肽。
本发明的自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离方法的特征在于,上述步骤b)中,培养基为包含自体血浆的培养基,并且,上述步骤b)中,培养12至16天。
本发明的自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离方法的特征在于,上述步骤c)中,表达诱导培养12至36小时,上述步骤d)中,培养1至20分钟。
并且,本发明提供自身癌抗原特异性CD8+T细胞的大量培养方法,上述自身癌抗原特异性CD8+T细胞的大量培养方法包括如下步骤:利用包含白细胞介素-2、抗-CD3抗体及自体血浆的培养基,来使通过上述分离方法分离的自身癌抗原特异性CD8+T细胞和放射线照射的同种异体(allogeneic)外周血单个核细胞悬浮之后,注入于培养用袋,追加注入上述培养基来进行培养。
在本发明的自身癌抗原特异性CD8+T细胞的大量培养方法的特征在于,上述外周血单个核细胞从正常供体分离,上述培养执行4至15天。尤其,在执行上述培养期间,在培养第4天、第7天、第9天、第11天及第14天追加可注入培养基。
以下,按步骤说明本发明的自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离及增殖方法。
(1)表位筛选(Epitope screening)(预先筛选检查)
本发明利用肽来选择性增殖及分离自我衍生的癌抗原特异性CD8+T细胞。通过CD8+T细胞识别的自身癌抗原的多个表位(epitope)根据每个患者的人类白细胞抗原(HLA)-A型及状态各不相同,因而通过表位筛选来筛选存在于癌症患者每个人的血液内的自身癌抗原CD8+T细胞表位,从而筛选3-4种类的T细胞治疗剂制备用肽。
(2)自身癌抗原特异性CD8+T细胞的增殖
自身癌抗原特异性CD8+T细胞在血液内以0.1%以下的方式存在,因而向从血液中分离的外周血单个核细胞添加3-4种制备用肽及白细胞介素-2来培养14天,从而诱导对来源于自身癌抗原的肽特异性的CD8+T细胞的增殖。在培养第14天收集全部细胞来由相同的多个肽再活性化24小时,来使多个肽-特异性CD8+T细胞同时表达4-1BB。
(3)自身癌抗原特异性CD8+T细胞的选择性分离
向涂敷有抗4-1BB抗体的培养板接种由肽再活性化的细胞来培养10分钟,从而附着表达4-1BB的多个CD8+T,并且未附着的多个细胞全部通过清洗而去除。之后添加包含白细胞介素-2的培养基来培养两天,从而使分离的多个T细胞与增殖一同向培养板滴落。
(4)自身癌抗原特异性CD8+T细胞的大量培养
混合分离于1L培养用袋(culture bag)的CD8+T细胞5×105细胞、照射放射线(irradiated allogeneic)的多个外周血单个核细胞1×108细胞、1000U/ml的白细胞介素-2、40ng的抗-CD3mAb,来定期添加培养基14天,从而以~109细胞/L水平大量培养细胞来以可向癌症患者给药的水平增殖。
以下,通过实施例对本发明进行详细说明。但是,这些实施例用于更详细地说明本发明,本发明的范围并不限制于这些实施例。
实验例.表位筛选工序
通过算法筛选了自身癌抗原的多个CD8+T细胞表位(epitope)。为了确认存在于癌症患者的血液内的多个T细胞与哪种CD8+T细胞的表位发生反应,从癌症患者的血液分离外周血单个核细胞(PBMC,peripheral blood mononuclear cell)来清洗之后,以1×106细胞/ml悬浮于细胞毒性T淋巴细胞(CTL)培养基(RPMI1640培养基+4mM L-谷氨酰胺+12.5mM的4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)+50μM的2-巯基乙醇+3%的自体血浆),并以每次1ml的方式向14ml的管(round tube)接种。向各个管以1μg/ml的浓度添加通过算法进行分析来筛选的各个表位的多个肽(peptides),来在CO2培养箱中开始培养。培养第二天,将包含50U/ml的白细胞介素-2的细胞毒性T淋巴细胞培养基以每次1ml的方式向各个管接种。培养第7天、第9天、第11天及第13天去除1ml的培养基之后,添加了包含50U/ml的白细胞介素-2的细胞毒性T淋巴细胞培养基。培养第14天,向各个管添加RPMI1640培养基,来在1400rpm条件下离心分离5分钟,从而将细胞清洗3次。向清洗的细胞悬浮1ml的细胞毒性T淋巴细胞培养基之后,以5μg/ml的浓度添加相同的肽来进行培养。24小时之后,收集各管的细胞来利用抗-CD8-PE-Cy5及抗-4-1BB-PE抗体进行染色,从而进行流式细胞分析,并且分析表达4-1BB的CD8+T细胞的比率,从而分析了与哪种肽发生反应来将CD8+T细胞活性化。图2为示出本发明的表位筛选过程的工序流程图的图。
从圣地亚哥联科生物公司(eBioscience,San Diego,CA)购买了使用于实验的抗-CD8-PE-Cy5及抗-4-1BB-PE。从圣地亚哥英杰生命科技有限公司(Invitrogen,San Diego,CA)购买了RPMI1640、L-谷氨酰胺、4-羟乙基哌嗪乙磺酸及2-巯基乙醇。
实施例1.自身癌抗原筛选及CD8+T细胞表位筛选
基于按各个不同癌瘤评价哪种癌抗原对癌症的免疫治疗适合的多个论文(Scanlan MJ,et al.,Immunol Rev.2002Oct.188:22-32;Ramakrishnan S,et al.,Cancerresearch.1998.58:622-625;Nakahara Y,et al.,Brain Tumor Pathol.2004.21(3):113-6),筛选了适合韩国人的好发癌及难治性癌(胃癌、肺癌、胰腺癌等)的免疫治疗的自身癌抗原。人端粒酶逆转录酶(基因库:BAC11010.1)、WT1(基因库:AAO61088.1)、NY-ESO1(基因库:CAA05908.1)及黑素瘤抗原-A3(NCBI参考序列:NP_005353.1)作为以多种方式利用于抗癌免疫治疗的代表性的自身癌抗原,筛选可适用这些四种癌抗原的癌瘤来在下列表1中进行了整理。
表1
通过算法分析筛选的自身癌抗原的氨基酸序列,来确定推定为CD8+T细胞表位的氨基酸序列(CTLPred:http://www.imtech.re s.in/raghava/ctlpred/,NetCTL:http://www.cbs.dtu.dk/services/NetC TL/,SYFPEITHI:http://www.syfpeithi.de/),并将筛选的表位作为对象来将肽进行化学合成(Peptron Inc;www.peptron.com),从而使用于表位筛选(epitope screening)。从各个自身癌抗原筛选的CD8+T细胞表位如下列表2至表5。
表2
表3
表4
表5
实施例2.将临床癌症患者作为对象的表位筛选
为了验证在实施例1中筛选的人端粒酶逆转录酶、WT1、NY-ESO1及黑素瘤抗原-A3自身癌抗原的多个CD8+T细胞表位能否诱导存在于临床癌症患者的血液内的CD8+T细胞增殖,执行了示意于图2的表位筛选。人端粒酶逆转录酶的表位筛选将胃癌、肺癌及胰腺癌作为主要对象来执行,并且WT1表位筛选将脑脊髓癌及肺癌作为主要对象来执行,NY-ESO1表位筛选将卵巢癌及肉瘤作为主要对象来执行,黑素瘤抗原-A3表位筛选将肉瘤及肺癌作为主要对象来执行。
图3为示出利用从正常人(healthy doner)取得的外周血单个核细胞的人端粒酶逆转录酶表位筛选结果的图。
图4为示出利用从正常人取得的外周血单个核细胞的WT1表位筛选结果的图。
由图3及图4可知,人端粒酶逆转录酶及WT1的多个CD8+T细胞表位由从正常人的血液分离的外周血单个核细胞未诱导T细胞反应。因此,确认为本发明的筛选的多个表位无法由正常人的T细胞识别。
图5至图7为示出利用分别从胃癌(gastric cancer)、肺癌(lung cancer)及胰腺癌(pancreatic)患者取得的外周血单个核细胞的人端粒酶逆转录酶表位筛选结果的图。
图8及图9为示出利用分别从脑肿瘤(glioblastoma)及肺癌患者取得的外周血单个核细胞的WT1表位筛选结果的图。
图10及图11为示出利用分别从卵巢癌(ovarian cancer)及肉瘤(sarcoma)患者取得的外周血单个核细胞的NY-ESO1表位筛选结果的图。
图12及图13为示出利用分别从肉瘤及肺癌患者取得的外周血单个核细胞的黑素瘤抗原-A3表位筛选结果的图。
由图5至图13可知,将由临床癌症患者的血液分离的外周血单个核细胞作为对象执行表位筛选来调查对人端粒酶逆转录酶、WT1、NY-ESO1及黑素瘤抗原-A3的CD8+T细胞反应性,最终确认与正常人不同,呈现高的对选择的多个自身癌抗原的T细胞反应。因此,将胃癌、肺癌、胰腺癌、肉瘤、卵巢癌等作为对象反复执行表位筛选来确认了对各个自身癌抗原的反应性。
并且,为了客观分析上述自身癌抗原CD8+T细胞表位筛选结果,如下列表6所示地制作了评分系统(scoring system)。
表6
根据上述表6的基准,分析表位筛选结果,其结果在下列表7至表15中示出。
下列表7为利用从胃癌患者取得的外周血单个核细胞的人端粒酶逆转录酶表位筛选的分析结果。表7
下列表8为利用从肺癌患者取得的外周血单个核细胞的人端粒酶逆转录酶表位筛选的分析结果。
表8
下列表9为利用从胰腺癌患者取得的外周血单个核细胞的人端粒酶逆转录酶表位筛选的分析结果。
表9
下列表10为利用从脑肿瘤患者取得的外周血单个核细胞的WT1表位筛选的分析结果。
表10
下列表11为利用从肺癌患者取得的外周血单个核细胞的WT1表位筛选的分析结果。
表11
下列表12为利用从卵巢癌患者取得的外周血单个核细胞的NY-E SO1表位筛选的分析结果。
表12
下列表13为利用从肉瘤患者取得的外周血单个核细胞的WT1表位筛选的分析结果。
表13
下列表14为利用从肉瘤患者取得的外周血单个核细胞的黑素瘤抗原-A3表位筛选的分析结果。
表14
下列表15为利用从肺癌患者取得的外周血单个核细胞的黑素瘤抗原-A3表位筛选的分析结果。
表15
如上述表7至表13,以3分以上,CD8+T细胞因肽的刺激而表达4-1BB的情况下,利用抗4-1BB抗体来可有效地分离这些细胞。在各癌瘤中以3分以上,T细胞与自身癌抗原发生反应的比率为40-50%水平,因而判断为利用筛选的自身癌抗原的多个表位可制备T细胞治疗剂。被筛选的多个肽如下:人端粒酶逆转录酶肽为CLKELVARV(序列1)、PLFLELL(序列2)及AAVTPAA(序列3);WT1肽为SLGEQQVSV(序列4)、RMFPNAPVL(序列5)、CMTWNQMNL(序列6)及VLDFAPPGA(序列7);NY-ESO1肽为SISSCLQQL(序列8)、RLLEFYLAM(序列9)、GVLLKEFTV(序列10)及ILTIRLTAA(序列11);以及黑素瘤抗原-A3肽为LLIIVLAII(序列12)、KIWEELSVL(序列13)、LVFGIELMEV(序列14)及SLPTTMNYPL(序列15)。
实施例3.自身癌抗原特异性T细胞治疗剂的试验制备
通过表位筛选来筛选适合制备T细胞治疗剂的对各个自身癌抗原的3-4种的表位的肽之后,利用这些肽来执行了人端粒酶逆转录酶、WT1、NY-ESO1及黑素瘤抗原-A3特异性T细胞治疗剂的试生产。T细胞治疗剂的生产由自我衍生抗癌T细胞的第一次增殖、分离及大量培养这三个步骤构成。
(1)自身癌抗原特异性CD8+T细胞的增殖
通过表位筛选,从确认存在一个以上的3分以上的表位的癌症患者中分离了50ml的血液。
1)从患者的血液分离外周血单个核细胞:向填满了7ml的聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-hypaque)的15ml的管(cornical tube)慢慢流出7ml的血液,来覆盖(overlay)于聚蔗糖溶液的上层。在常温且2000rpm的条件下,将管离心分离20分钟,并且只收集位于聚蔗糖和血浆之间的白色的细胞层来清洗之后使用为外周血单个核细胞。
2)以1×106细胞/ml将分离的外周血单个核细胞悬浮于细胞毒性T淋巴细胞(CTL)培养基(RPMI1640培养基+4mM L-谷氨酰胺+12.5mM的4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)+50μM的2-巯基乙醇+3%的自体血浆)中,并且以使通过表位筛选来在本发明中筛选的3-4种的多个肽的浓度分别成为1μg/ml的方式添加。以每次1ml的方式将这些细胞悬浮液接种于14ml的管(round tube)来在CO2培养箱中培养。
3)培养第二天,以每次1ml的方式将包含50U/ml的白细胞介素-2(诺华公司阿地白介素(Proleukin,Novatis))的细胞毒性T淋巴细胞培养基添加于各个管中。
4)培养第7天、第9天、第11天及第13天,去除1ml的上层培养基之后,添加了包含50U/ml的白细胞介素-2的细胞毒性T淋巴细胞培养基。
5)培养第14天,向50ml的圆锥管(cornical tube)收集各个管的细胞之后,添加RPMI1640培养基,从而在1400rpm条件下离心分离5分钟来清洗细胞。还将上述过程反复两次。
6)以2×106细胞/ml的浓度,利用细胞毒性T淋巴细胞培养基悬浮清洗的细胞之后,分别以5μg/ml的浓度添加3-4种的相同的肽来培养。
(2)自身癌抗原特异性CD8+T细胞的筛选
1)培养第24小时,收集再活性化一天的外周血单个核细胞来利用RPMI1640培养基清洗两次之后,以5×106细胞/ml的浓度悬浮细胞毒性T淋巴细胞培养基,并添加了50U/ml的白细胞介素-2。
2)以每次1ml的方式向以50μg/ml的浓度涂敷一天的6孔板或12孔板(cultureplate)添加这些细胞,在CO2培养箱中,将抗4-1BB抗体培养10分钟。
3)培养10分钟后,全部清洗未附着于板的细胞来去除,之后,向各个孔添加了2-4ml的包含1000U/ml的白细胞介素-2的细胞毒性T淋巴细胞培养基,来在CO2培养箱中培养两天。
(3)自身癌抗原特异性CD8+T细胞的大量培养
1)全部收集利用抗4-1BB抗体分离来培养两天的细胞,从而利用RPMI1640培养基清洗两次来进行计数。
2)从正常供体分离外周血单个核细胞来以1×108细胞/ml悬浮之后,以3000rad放射线照射来诱导细胞的死亡之后,使用为可对T细胞的增殖诱导提供需要的共同刺激(costimulation)的培养添加物。
3)向50ml的圆锥管添加分离的CD8+T细胞5×105细胞和照射的同种异体(irradiated allogeneic)多个外周血单个核细胞1×108细胞之后,将包含1000U/ml的白细胞介素-2、40ng/ml的抗-CD3mAb(BD Bioscience)及3%的自体血浆(autoplasma)的ALyS505N培养基(株式会社细胞科学研究所(CELLSCIENCE&TECHNOLOGY INST.,INC.(CSTI)))添加至50ml。
4)向1L的培养用袋(culture bag)注入50ml的细胞悬浮液之后,在CO2培养箱中培养。
5)培养第4天,向1L的培养用袋追加注入了50ml的包含1000U/ml的白细胞介素-2及3%的自体血浆的ALyS505N培养基。
6)培养第7天,向1L的培养用袋追加注入了100ml的包含1000U/ml的白细胞介素-2及3%的自体血浆的ALyS505N培养基。
7)培养第9天,向1L的培养用袋追加注入了300ml的包含1000U/ml的白细胞介素-2及3%的自体血浆的ALyS505N培养基。
8)培养第11天,向1L的培养用袋追加注入了500ml的包含1000U/ml的白细胞介素-2及3%的自体血浆的ALyS505N培养基。
9)培养第14天,收集1L的培养用袋的所有细胞,来用注射用生理食盐水清洗三次,并且在包含5%的白蛋白的注射用生理食盐水中悬浮细胞来充电完成品T细胞治疗剂。
如上所述,通过本发明的表位筛选从临床癌症患者筛选可诱导T细胞反应的3-4种的3分以上的肽之后,利用50cc的血液来执行人端粒酶逆转录酶、WT、NY-ESO1、黑素瘤抗原-A3T细胞治疗剂的试生产,其结果在表6至表9中进行整理。
图14为用于说明人端粒酶逆转录酶T细胞治疗剂的试生产过程的图。
图14为从50cc的具有人类白细胞抗原-A*24等位基因(allele)的胃癌患者的血液中分离外周血单个核细胞,来分别以1μg/ml的浓度添加三种人端粒酶逆转录酶肽(peptide)[CLKELVARV(序列1)、PLFLELL(序列2)及AAVTPAA(序列3)]之后,根据在上述实施例3的“(1)自身癌抗原特异性CD8+T细胞的增殖”中记述的过程进行了培养。培养第14天,收集全部细胞来根据“(2)自身癌抗原特异性CD8+T细胞的筛选”过程,与人端粒酶逆转录酶肽发生反应,从而分离/增殖了已增殖的T细胞。通过“(3)自身癌抗原特异性CD8+T细胞的大量培养”过程,分离的T细胞以可给药到癌症患者的水平进行大量培养,并且根据流式细胞分析,最终培养的细胞为具有低的老化度和作用功能的特定TCRVb型的T细胞。
图15为用于说明WT1T细胞治疗剂的试生产过程的图。
图15为从50cc的具有人类白细胞抗原-A*24等位基因的恶性神经胶质瘤患者的血液中分离外周血单个核细胞,来分别以1μg/ml的浓度添加四种WT1肽(WT1peptide)[SLGEQQVSV(序列4)、RMFPNAPVL(序列5)、CMTWNQMNL(序列6)、VLDFAPPGA(序列7)]之后,根据在上述实施例3的“(1)自身癌抗原特异性CD8+T细胞的增殖”中记述的过程进行培养。培养第14天,收集全部细胞,来根据“(2)自身癌抗原特异性CD8+T细胞的筛选”过程,与WT1肽发生反应,从而分离/增殖了已增殖的T细胞。通过“(3)自身癌抗原特异性CD8+T细胞的大量培养”过程,分离的T细胞以可给药到癌症患者的水平进行大量培养,并且根据流式细胞分析,最终培养的细胞为具有低的老化度和作用功能的特定TCRVb型的T细胞。
图16为用于说明NY-ES01T细胞治疗剂的试生产过程的图。
图16为从50cc的具有人类白细胞抗原-A*24等位基因的卵巢癌患者的血液中分离外周血单个核细胞,来分别以1μg/ml的浓度添加四种NY-ES01肽(NY-ES01peptide)[SISSCLQQL(序列8)、RLLEFYLAM(序列9)、GVLLKEFTV(序列10)、ILTIRLTAA(序列11)]之后,根据在上述实施例3的“(1)自身癌抗原特异性CD8+T细胞的增殖”中记述的过程进行培养。培养第14天,收集全部细胞,来根据“(2)自身癌抗原特异性CD8+T细胞的筛选”过程,与NY-ES01肽发生反应,从而分离/增殖了已增殖的T细胞。通过“(3)自身癌抗原特异性CD8+T细胞的大量培养”过程,分离的T细胞以可给药到癌症患者的水平进行大量培养,并且根据流式细胞分析,最终培养的细胞为具有低的老化度和作用功能的特定TCRVb型的T细胞。
图17为用于说明黑素瘤抗原-A3T细胞治疗剂的试生产过程的图。
图17为从50cc的具有人类白细胞抗原-A*24等位基因的肉瘤患者的血液中分离外周血单个核细胞,来分别以1μg/ml的浓度添加四种黑素瘤抗原-A3肽(MAGE-A3peptide)[LLIIVLAII(序列12)、KIWEELSVL(序列13)、LVFGIELMEV(序列14)、SLPTTMNYPL(序列15)]之后,根据在上述实施例3的“(1)自身癌抗原特异性CD8+T细胞的增殖”中记述的过程进行培养。培养第14天,收集全部细胞,来根据“(2)自身癌抗原特异性CD8+T细胞的筛选”过程,与黑素瘤抗原-A3肽发生反应,从而分离/增殖了已增殖的T细胞。通过“(3)自身癌抗原特异性CD8+T细胞的大量培养”过程,分离的T细胞以可给药到癌症患者的水平进行大量培养,并且根据流式细胞分析,最终培养的细胞为具有低的老化度和作用功能的特定TCRVb型的T细胞。
以上,以优选的多个实施例为中心对本发明进行了观察。本发明所属技术领域的普通技术人员可以理解在不脱离本发明的本质特性的范围内能够以变形的形态来实现本发明。因而所公开的实施例不应从限定的观点考虑,而应从说明的观点考虑。本发明的范围未示于上述说明中,而示于发明要求保护范围中,在与其等同的范围内的所有差异应解释为包含于本发明中。
<110>国立癌中心
<120>自身癌抗原特异性CD8+ T细胞的分离及增殖方法
<130>PCT_5034514
<150>KR 2014-0029198
<151>2014-03-12
<160>15
<170>KopatentIn 2.0
<210> 1
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人端粒酶逆转录酶的表位
<400>1
Cys Leu Lys Glu Leu Val Ala Arg Val
1 5
<210>2
<211>7
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人端粒酶逆转录酶的表位
<400>2
Pro Leu Phe Leu Glu Leu Leu
1 5
<210>3
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人端粒酶逆转录酶的表位
<400>3
Ala Ala Val Thr Pro Ala Ala
1 5
<210>4
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223> WT1的表位
<400>4
Ser Leu Gly Glu Gln Gln Val Ser Val
1 5
<210> 5
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223> WT1的表位
<400>5
Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Val Leu
1 5
<210>6
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223> WT1的表位
<400>6
Cys Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu
1 5
<210>7
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223> WT1的表位
<400> 7
Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala
1 5
<210>8
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223> NY ESO1的表位
<400>8
Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu
1 5
<210> 9
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>NY ESO1的表位
<400>9
Arg Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met
1 5
<210>10
<211> 9
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223> NY ESO1的表位
<400>10
Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr Val
1 5
<210> 11
<211> 9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223> NY ESO1的表位
<400>11
Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr Ala Ala
1 5
<210> 12
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>黑素瘤抗原-A3的表位
<400>12
Leu Leu Ile Ile Val Leu Ala Ile Ile
1 5
<210>13
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>黑素瘤抗原-A3的表位
<400>13
Lys Ile Trp Glu Glu Leu Ser Val Leu
1 5
<210>14
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>黑素瘤抗原-A3的表位
<400>14
Leu Val Phe Gly Ile Glu Leu Met Glu Val
1 5 10
<210>15
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>黑素瘤抗原-A3的表位
<400>15
Ser Leu Pro Thr Thr Met Asn Tyr Pro Leu
1 5 10
Claims (10)
1.一种自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离方法,其特征在于,包括:
步骤a),筛选存在于癌症患者血液内的自身癌抗原CD8+T细胞表位;
步骤b),与上述表位的肽及白细胞介素-2一同在培养基中培养从癌症患者的血液中分离的外周血单个核细胞;
步骤c),在培养的上述外周血单个核细胞中添加与步骤b)相同的肽来诱导4-1BB表达;以及
步骤d),在涂敷有抗-4-1BB抗体的培养板中培养诱导了4-1BB表达的细胞之后,去除未附着的细胞。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,上述步骤a)的自身癌抗原选自由人端粒酶逆转录酶(基因库:BAC11010.1)、WT1(基因库:AAO61088.1)、NY-ESO1(基因库:CAA05908.1)及黑素瘤抗原-A3(NCBI参考序列:NP_005353.1)组成的组中。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在上述步骤b)中,表位为包含选自由序列1至序列15组成的组中的氨基酸序列的肽。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,上述步骤b)中,培养基为包含自体血浆的培养基。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,上述步骤b)中,培养12至16天。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,上述步骤c)中,表达诱导培养12至36小时。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,上述步骤d)中,培养1至20分钟。
8.一种自身癌抗原特异性CD8+T细胞的大量培养方法,其特征在于,包括如下步骤:利用包含白细胞介素-2、抗-CD3抗体及自体血浆的培养基,来使通过权利要求1所述的方法分离的自身癌抗原特异性CD8+T细胞和放射线照射的同种异体外周血单个核细胞悬浮之后,注入于培养用袋,追加注入上述培养基来进行培养。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,上述外周血单个核细胞从正常供体分离。
10.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,上述培养执行4至15天。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR20140029198A KR101503341B1 (ko) | 2014-03-12 | 2014-03-12 | 자가암항원 특이적 cd8+ t 세포의 분리 및 증식방법 |
KR10-2014-0029198 | 2014-03-12 | ||
CN201580001522.6A CN105473731B (zh) | 2014-03-12 | 2015-03-11 | 自身癌抗原特异性cd8+ t细胞的分离及增殖方法 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201580001522.6A Division CN105473731B (zh) | 2014-03-12 | 2015-03-11 | 自身癌抗原特异性cd8+ t细胞的分离及增殖方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN108865994A true CN108865994A (zh) | 2018-11-23 |
Family
ID=53027809
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201810653908.0A Pending CN108865994A (zh) | 2014-03-12 | 2015-03-11 | 自身癌抗原特异性cd8+ t细胞的分离及增殖方法 |
CN201580001522.6A Active CN105473731B (zh) | 2014-03-12 | 2015-03-11 | 自身癌抗原特异性cd8+ t细胞的分离及增殖方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201580001522.6A Active CN105473731B (zh) | 2014-03-12 | 2015-03-11 | 自身癌抗原特异性cd8+ t细胞的分离及增殖方法 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20150259646A1 (zh) |
EP (1) | EP3118322A4 (zh) |
JP (3) | JP6522671B2 (zh) |
KR (1) | KR101503341B1 (zh) |
CN (2) | CN108865994A (zh) |
AU (3) | AU2015230611B2 (zh) |
CA (1) | CA2942557C (zh) |
HK (1) | HK1224340A1 (zh) |
WO (1) | WO2015137724A1 (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115960253A (zh) * | 2022-08-30 | 2023-04-14 | 暨南大学 | 一种肿瘤T细胞抗原表位肽、pMHC及其制备和应用 |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101503341B1 (ko) | 2014-03-12 | 2015-03-18 | 국립암센터 | 자가암항원 특이적 cd8+ t 세포의 분리 및 증식방법 |
JP2018042481A (ja) * | 2016-09-13 | 2018-03-22 | テラ株式会社 | 抗原特異的t細胞含有組成物及びその製造方法 |
CN106589133A (zh) * | 2016-10-21 | 2017-04-26 | 闾军 | 一种新的增强型抗原联合多肽诱导肝癌特异性ctl细胞的制备及应用 |
CN110392696B (zh) | 2017-01-06 | 2020-09-11 | 优特力克斯有限公司 | 抗-人4-1bb抗体及其应用 |
CN111315390A (zh) * | 2017-09-05 | 2020-06-19 | 磨石肿瘤生物技术公司 | 用于t细胞疗法的新抗原鉴别 |
EP3714275A4 (en) | 2017-11-22 | 2021-10-27 | Gritstone bio, Inc. | REDUCTION OF JUNCTION EPITOPIC PRESENTATION FOR NEOANTIGENS |
KR20190120987A (ko) | 2018-04-17 | 2019-10-25 | 국립암센터 | 고갈성 항 cd4 단일클론항체를 포함하는 항암 t 세포치료제 보조용 조성물 및 이의 용도 |
KR20210043622A (ko) | 2018-08-10 | 2021-04-21 | 주식회사 유틸렉스 | 암항원 특이적 세포독성 t세포 |
JP2021533759A (ja) | 2018-08-10 | 2021-12-09 | ユーティレックス カンパニー リミテッド | 癌抗原特異的cd8+t細胞を調製および凍結保存するための方法 |
CA3132238A1 (en) * | 2019-03-04 | 2020-09-10 | University Health Network | T cell receptors and methods of use thereof |
KR102352715B1 (ko) * | 2019-04-12 | 2022-01-19 | 국립암센터 | Il-21을 이용한 항원 특이적 cd8+ t 세포의 증식 촉진 또는 대량 배양 방법 |
US20230048719A1 (en) | 2019-12-31 | 2023-02-16 | Kahr Medical Ltd. | Methods of culturing t cells with a 4-1bbl fusion polypeptide and uses of same |
US20230048361A1 (en) | 2019-12-31 | 2023-02-16 | Kahr Medical Ltd. | Methods of culturing t cells and uses of same |
KR20210098637A (ko) | 2020-02-03 | 2021-08-11 | 삼다바이오텍 주식회사 | Cd71을 이용한 자가암항원 반응성 cd8 t 세포 분리방법 및 이의 응용 |
Family Cites Families (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6303121B1 (en) | 1992-07-30 | 2001-10-16 | Advanced Research And Technology | Method of using human receptor protein 4-1BB |
US5827642A (en) * | 1994-08-31 | 1998-10-27 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Rapid expansion method ("REM") for in vitro propagation of T lymphocytes |
US7030211B1 (en) | 1998-07-08 | 2006-04-18 | Gemvax As | Antigenic peptides derived from telomerase |
KR20000034847A (ko) | 1998-11-17 | 2000-06-26 | 성재갑 | 인간 4-1비비 분자에 대한 인간화 항체 및 이를 포함하는 약학조성물 |
ATE445643T1 (de) | 1999-11-18 | 2009-10-15 | Pharmexa Inc | Heteroklitische analoga von klasse-i epitopen |
AU2086501A (en) | 1999-12-10 | 2001-06-18 | Epimmune, Inc. | Inducing cellular immune responses to carcinoembryonic antigen using peptide andnucleic acid compositions |
PL215187B1 (pl) | 2000-08-21 | 2013-11-29 | Apitope Technology Bristol Ltd | Peptyd tolerogenny, kompozycja farmaceutyczna zawierajaca ten peptyd, peptyd lub kompozycja farmaceutyczna do podawania i zastosowanie peptydu tolerogennego |
KR100468321B1 (ko) | 2001-02-08 | 2005-01-27 | 학교법인 울산공업학원 | 종양 및 에이즈치료용 폴리펩타이드 |
EP2149381A3 (en) | 2001-03-09 | 2010-05-05 | Baylor Research Institute | Method of treating malignancies through induction of blood immune responses |
ATE435655T1 (de) * | 2001-10-09 | 2009-07-15 | Mayo Foundation | Verwendung von agonistischen 4-1bb antikörpern zur erhöhung der immunantwort |
US20040081653A1 (en) | 2002-08-16 | 2004-04-29 | Raitano Arthur B. | Nucleic acids and corresponding proteins entitled 251P5G2 useful in treatment and detection of cancer |
KR100500283B1 (ko) | 2003-03-25 | 2005-07-11 | 이뮤노믹스 주식회사 | 인간 4-1비비 분자에 대한 인간화 모노클로날 폴리펩티드 및 이를 포함하는 약학 조성물 |
AU2003300359A1 (en) | 2003-05-08 | 2004-12-13 | Xcyte Therapies, Inc. | Generation and isolation of antigen-specific t cells |
US7288638B2 (en) | 2003-10-10 | 2007-10-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Fully human antibodies against human 4-1BB |
AR046094A1 (es) | 2003-10-10 | 2005-11-23 | Bristol Myers Squibb Co | Anticuerpos completamente humanos contra 4-1bb humano |
KR100694508B1 (ko) | 2005-05-24 | 2007-03-13 | 울산대학교 산학협력단 | Hbbk4항체를 포함하는 암 질환 치료용 약학조성물및 이를 이용한 암의 면역치료 방법 |
DK2420833T3 (en) | 2006-05-05 | 2015-12-07 | Opexa Therapeutics | T-cell vaccine |
KR100882445B1 (ko) | 2007-03-16 | 2009-02-09 | 울산대학교 산학협력단 | 항―4-1bb 항체를 이용한 항원 특이적 자가유래cd8+t 세포의 분리 및 증식 방법 |
KR101103603B1 (ko) * | 2008-07-25 | 2012-01-09 | 국립암센터 | 4-1bbl 펜타머 단백질을 이용한 항원 특이적 cd8+t 세포의 분리 및 증식 방법 |
SI2172211T1 (sl) | 2008-10-01 | 2015-03-31 | Immatics Biotechnologies Gmbh | Sestavek s tumorjem povezanih peptidov in zadevnih cepiv proti raku za zdravljenje glioblastoma (GBM) in drugih vrst raka |
KR100882455B1 (ko) * | 2008-10-15 | 2009-02-06 | 방봉문 | 황토 기저 위에 무늬목을 마감재로 부착하는 바닥재 시공 방법 |
KR20100043130A (ko) * | 2008-10-18 | 2010-04-28 | 울산대학교 산학협력단 | 세포 활성 조성물 |
NZ729044A (en) | 2010-09-09 | 2020-07-31 | Pfizer | 4-1bb binding molecules |
ES2783026T3 (es) | 2014-02-04 | 2020-09-16 | Pfizer | Combinación de un antagonista de PD-1 y un agonista de 4-1BB para el tratamiento de cáncer |
KR101503341B1 (ko) | 2014-03-12 | 2015-03-18 | 국립암센터 | 자가암항원 특이적 cd8+ t 세포의 분리 및 증식방법 |
AU2015264528A1 (en) | 2014-05-21 | 2016-11-03 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Combination of an anti-CCR4 antibody and a 4-1BB agonist for treating cancer |
WO2016029073A2 (en) | 2014-08-22 | 2016-02-25 | Bristol-Myers Squibb Company | Treatment of cancer using a combination of an anti-pd-1 antibody and an anti-cd137 antibody |
DE102015000928B3 (de) | 2015-01-28 | 2016-07-21 | Thyssenkrupp Ag | Vorrichtung zur Einbringung eines Hilfsdrehmoments in eine Lenkwelle einer elektromechanischen Hilfskraftlenkung |
MX2017010793A (es) | 2015-02-22 | 2018-07-06 | Sorrento Therapeutics Inc | Terapeuticos de anticuerpo que ligan cd137. |
JP6876629B2 (ja) | 2015-06-16 | 2021-05-26 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングMerck Patent Gesellschaft mit beschraenkter Haftung | Pd−l1アンタゴニスト併用療法 |
US10875921B2 (en) | 2016-05-27 | 2020-12-29 | Abbvie Biotherapeutics Inc. | Anti-4-1BB antibodies and their uses |
CN110392696B (zh) | 2017-01-06 | 2020-09-11 | 优特力克斯有限公司 | 抗-人4-1bb抗体及其应用 |
-
2014
- 2014-03-12 KR KR20140029198A patent/KR101503341B1/ko active IP Right Grant
-
2015
- 2015-03-11 CA CA2942557A patent/CA2942557C/en active Active
- 2015-03-11 JP JP2016575276A patent/JP6522671B2/ja active Active
- 2015-03-11 EP EP15761276.3A patent/EP3118322A4/en active Pending
- 2015-03-11 WO PCT/KR2015/002356 patent/WO2015137724A1/ko active Application Filing
- 2015-03-11 CN CN201810653908.0A patent/CN108865994A/zh active Pending
- 2015-03-11 AU AU2015230611A patent/AU2015230611B2/en active Active
- 2015-03-11 CN CN201580001522.6A patent/CN105473731B/zh active Active
- 2015-03-12 US US14/656,355 patent/US20150259646A1/en not_active Abandoned
-
2016
- 2016-08-12 HK HK16109673.7A patent/HK1224340A1/zh unknown
-
2017
- 2017-08-30 US US15/691,179 patent/US10801011B2/en active Active
-
2018
- 2018-03-26 US US15/936,209 patent/US10570371B2/en active Active
- 2018-07-06 AU AU2018204924A patent/AU2018204924B2/en active Active
- 2018-11-30 JP JP2018225159A patent/JP2019050826A/ja active Pending
-
2020
- 2020-04-28 JP JP2020079674A patent/JP7122336B2/ja active Active
- 2020-04-29 AU AU2020202832A patent/AU2020202832B2/en active Active
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115960253A (zh) * | 2022-08-30 | 2023-04-14 | 暨南大学 | 一种肿瘤T细胞抗原表位肽、pMHC及其制备和应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6522671B2 (ja) | 2019-05-29 |
HK1224340A1 (zh) | 2017-08-18 |
JP2019050826A (ja) | 2019-04-04 |
EP3118322A4 (en) | 2017-08-16 |
CN105473731B (zh) | 2018-07-20 |
KR101503341B1 (ko) | 2015-03-18 |
AU2015230611B2 (en) | 2018-04-19 |
JP2020124214A (ja) | 2020-08-20 |
WO2015137724A1 (ko) | 2015-09-17 |
AU2020202832B2 (en) | 2023-02-02 |
AU2015230611A1 (en) | 2016-09-29 |
JP2017508480A (ja) | 2017-03-30 |
US20180216066A1 (en) | 2018-08-02 |
AU2020202832A1 (en) | 2020-05-21 |
US10570371B2 (en) | 2020-02-25 |
US10801011B2 (en) | 2020-10-13 |
CA2942557C (en) | 2023-04-04 |
AU2018204924A1 (en) | 2018-07-26 |
AU2018204924B2 (en) | 2020-01-30 |
JP7122336B2 (ja) | 2022-08-19 |
US20180057793A1 (en) | 2018-03-01 |
EP3118322A1 (en) | 2017-01-18 |
US20150259646A1 (en) | 2015-09-17 |
CN105473731A (zh) | 2016-04-06 |
CA2942557A1 (en) | 2015-09-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105473731B (zh) | 自身癌抗原特异性cd8+ t细胞的分离及增殖方法 | |
EP2951202B1 (en) | High avidity binding molecules recognizing mage-a1 | |
JP6899333B2 (ja) | 汎用キラーt細胞 | |
JP5292550B2 (ja) | T細胞レセプターβ鎖遺伝子及びα鎖遺伝子 | |
CN110330567A (zh) | 双特异性嵌合抗原受体t细胞,其制备方法和应用 | |
CN109715788A (zh) | 用于免疫疗法的t细胞组合物 | |
CN110062768A (zh) | 表达抗原结合受体和嵌合共刺激受体的免疫细胞 | |
CN110857319B (zh) | 一种分离的t细胞受体、其修饰的细胞、编码核酸及其应用 | |
CN109777784A (zh) | 一种增强向肿瘤部位迁移的嵌合抗原受体载体构建方法与应用 | |
JP2022526372A (ja) | HvG疾患の処置における使用のためのCAR | |
WO2018233589A1 (zh) | 一种微环dna转染t细胞制备临床级car-t细胞制剂的方法 | |
CN109776671A (zh) | 分离的t细胞受体、其修饰的细胞、编码核酸、表达载体、制备方法、药物组合物和应用 | |
CN106279392B (zh) | 肿瘤相关抗原XAGE-1b短肽及其应用 | |
CN107002036A (zh) | 用于建立具有编码抗原特异性t细胞受体的基因的多能性干细胞的方法 | |
CN111234004A (zh) | 识别wt1抗原短肽的t细胞受体及其应用 | |
CN111683971A (zh) | 医药重组受体组成物及方法 | |
Ibanez et al. | GRP78-CAR T cell effector function against solid and brain tumors is controlled by GRP78 expression on T cells | |
JP5616782B2 (ja) | 免疫増強機能を有する抗体 | |
RU2795454C2 (ru) | Способы и композиции для получения генно-инженерных клеток | |
CA3213301A1 (en) | Cancer therapy involving car-engineered t-cells and parvovirus h-1 | |
van Loo et al. | Adoptive T cell therapy in solid tumors |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 1261749 Country of ref document: HK |