CN108552159A - 一种用于car-t临床级低温保存且可直接静脉注射回输的冻存液 - Google Patents

一种用于car-t临床级低温保存且可直接静脉注射回输的冻存液 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于CAR‑T临床级低温保存且可直接静脉注射回输的冻存液，是由如下原料组成的:二甲基亚砜、甘油果糖氯化钠注射液、转化糖电解质注射液、右旋糖酐40葡萄糖注射液、羟乙基淀粉130/0.4电解质注射液、维生素C注射液、人血白蛋白注射液、0.9％氯化钠注射液；pH值为6.8‑7.0。采用所述CAR‑T临床级低温保存且可直接回输的配方冻存CAR‑T细胞，解冻后的细胞和冻存液不需要离心、重悬、换液等过程，可以直接静脉注射进行回输，不仅有效避免了CAR‑T细胞在体外反复增殖出现污染而导致细胞品种的损失，或细胞形态功能的改变，而且还能明显简化医疗设备，减少医护人员工作量。

Description

一种用于CAR-T临床级低温保存且可直接静脉注射回输的冻 存液
技术领域
本发明属于生物技术应用和医药技术领域，特别是涉及一种用于CAR-T临床级低温保存且可直接静脉注射回输的冻存液。
技术背景
细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)是机体抗肿瘤最主要的效应性淋巴细胞，但CTL杀伤活性受到MHC-Ⅰ类蛋白复合物的限制，大大降低了CTL的治疗效果。因此，在20世纪80年代后期，Gross等科研人员提出了CAR-T细胞过继免疫治疗的概念。CAR细胞是模拟T细胞受体功能的人工受体，由抗原识别结构域SCFV和T细胞的一系列信号结构域依次连接而成，该种T细胞绕开常规细胞免疫的主要组织相容复合体(MHC)限制性，然后通过其信号结构域直接将识别信号传速至胞内，激活T细胞的杀伤活性，因此可以从而有效克服肿瘤细胞MHC表达量低造成的免疫逃逸，并可以靶向非蛋白质肿瘤抗原。人体自身T细胞联合CAR的靶向性和CTL杀伤活性，进行肿瘤靶向免疫治疗。此疗法，相对于放射和化疗，其毒副作用较弱。在血液恶性肿瘤过继细胞免疫治疗中，CAR-T表现出显著抗肿瘤的疗效，如抗CD19-CAR-T细胞被证明是非常有效治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)，急性淋巴细胞淋巴瘤原发性白血病(ALL)和慢性白血病(CLL)。
根据最佳实践，所有生物储存在-132℃以下，水的玻璃过渡温度(GTTW)，所有生物活动停止。低温保存的成本较低，可以在需要时将复苏细胞，与些同时，冻存细胞在一定程度上避免了培养过程中出现污染而导致细胞品种的损失。长期保持细胞活性冻存方法是液氮冻存，能够保持一定的细胞活率。
另外，目前市场上常用的细胞冻存液，主要由DMSO、血清以及细胞培养液组成，细胞培养液一般作为溶剂。这种即用型冻存液，需要现配现用，保持期短，批次差异大，保存效果不稳定。而且成分复杂，特别是病人自体血清可能出现各种不确定的有害物质。最重要的一点是常规冻存液，不能直接静脉注射进行回输。为此我们提出了一种CAR-T临床级低温保存且可直接回输的冻存液。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的就在于提供一种用于CAR-T临床级低温保存且可直接静脉注射回输的冻存液。
为了达到上述的目的，本发明是按照以下技术方案实施的：
一种用于CAR-T临床级低温保存且可直接静脉注射回输的冻存液，所述冻存液包含有CryoSure-DMSO二甲基亚砜(USP临床级)、甘油果糖氯化钠注射液、转化糖电解质注射液、右旋糖酐40葡萄糖注射液、羟乙基淀粉130/0.4电解质注射液、维生素C注射液、人血白蛋白注射液、0.9％氯化钠注射液。
进一步的，所述冻存液包含有以下组分:CryoSure-DMSO二甲基亚砜(USP临床级)2-10％(v/v)；甘油果糖氯化钠注射液0-20％(v/v)；转化糖电解质注射液32-43％(v/v)；右旋糖酐40葡萄糖注射液4-12％(v/v)；羟乙基淀粉130/0.4电解质注射液0-20％(v/v)；维生素C注射液0.8-3.2％(v/v)；人血白蛋白注射液20-40％(v/v)；0.9％氯化钠注射液0-40％(v/v)。
进一步的，所述冻存液包含有以下组分:CryoSure-DMSO二甲基亚砜(USP临床级)5.5％(v/v)；甘油果糖氯化钠注射液2％(v/v)；转化糖电解质注射液37％(v/v)；右旋糖酐40葡萄糖注射液6％(v/v)；羟乙基淀粉130/0.4电解质注射液10％(v/v)；维生素C注射液1.2％(v/v)；人血白蛋白注射液35％(v/v)；0.9％氯化钠注射液3.3％(v/v)。
进一步的，所述CAR-T细胞冻存液包含有以下组分：二甲基亚砜7.5％(v/v)；甘油果糖氯化钠注射液0％(v/v)；转化糖电解质注射液37％(v/v)；右旋糖酐40葡萄糖注射液6％(v/v)、羟乙基淀粉130/0.4电解质注射液10％(v/v)；维生素C注射液1.2％(v/v)；人血白蛋白注射液35％(v/v)；0.9％氯化钠注射液3.3％(v/v)。
进一步的，所述CAR-T细胞冻存液包含有以下组分：包括以下组分:二甲基亚砜7.5％(v/v)；甘油果糖氯化钠注射液0％(v/v)；转化糖电解质注射液37％(v/v)；右旋糖酐40葡萄糖注射液6％(v/v)；羟乙基淀粉130/0.4电解质注射液10％(v/v)；维生素C注射液1.4％(v/v)；人血白蛋白注射液35％(v/v)；0.9％氯化钠注射液3.1％(v/v)。
本发明还提供了上述冻存液的制备方法，将二甲基亚砜、甘油果糖氯化钠注射液、转化糖电解质注射液、右旋糖酐40葡萄糖注射液、羟乙基淀粉130/0.4电解质注射液、维生素C注射液、人血白蛋白注射液及0.9％氯化钠注射液按照比例配制，混合即可。
本发明进一步提供了上述冻存液在CAR-T细胞体外反复增殖或CAR-T细胞长时冻存中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果为:
1.本发明所述的冻存液，其解冻后不需要离心、重悬、换液等过程，可以直接静脉注射进行回输，不仅有效避免了CAR-T细胞在体外反复增殖出现污染而导致细胞品种的损失，或细胞形态功能的改变，而且还能明显简化医疗设备，减少医护人员工作量。
2..本发明所述的冻存液，其可临床级低温保存且可直接回输，原料成分均属于临床级别，安全可靠。
3.本发明所述的冻存液，其联合使用多种注射剂，不仅具有协同增加CAR-T细胞存活率高。同时对于医护人员或企业而言，操作方便，制备简单。
4.本发明所述的冻存液，其对细胞的损伤小，长时冻存时，最高可以获得80％以上的复苏存活率，能够保证细胞复苏后正常的生物学功能。
5.本发明所述的冻存液，利用购买常用的注射液，在医疗安全柜中按配方比例进行制备，省时省力，且稳定性好、质量可控、具有较长的货架期等显著优点。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步描述，在此发明的示意性实施例以及说明用来解释本发明，但并不作为对本发明的限定。
以下各材料或试剂若无特别说明，均为市售。
实施例1
一种用于CAR-T临床级低温保存且可直接静脉注射回输的冻存液，包括以下组分:CryoSure-DMSO二甲基亚砜(USP临床级)5.5％(v/v)；甘油果糖氯化钠注射液2％(v/v)；转化糖电解质注射液37％(v/v)；右旋糖酐40葡萄糖注射液6％(v/v)；羟乙基淀粉130/0.4电解质注射液10％(v/v)；维生素C注射液1.2％(v/v)；人血白蛋白注射液35％(v/v)；0.9％氯化钠注射液3.3％(v/v)。购买上述各组分，在医疗安全柜中按比例混合，按此配方冻存CAR-T细胞48h后，解冻细胞，可以获得62％以上的复苏存活率。
实施例2
一种用于CAR-T临床级低温保存且可直接静脉注射回输的冻存液，包括以下组分:CryoSure-DMSO二甲基亚砜(USP临床级)7.5％(v/v)；甘油果糖氯化钠注射液0％(v/v)；转化糖电解质注射液37％(v/v)；右旋糖酐40葡萄糖注射液6％(v/v)、羟乙基淀粉130/0.4电解质注射液10％(v/v)；维生素C注射液1.2％(v/v)；人血白蛋白注射液35％(v/v)；0.9％氯化钠注射液3.3％(v/v)。购买上述各组分，在医疗安全柜中按比例混合，按此配方冻存CAR-T细胞48h后，解冻细胞，可以获得80％以上的复苏存活率。
实施例3
一种用于CAR-T临床级低温保存且可直接静脉注射回输的冻存液，包括以下组分:CryoSure-DMSO二甲基亚砜(USP临床级)7.5％(v/v)；甘油果糖氯化钠注射液0％(v/v)；转化糖电解质注射液37％(v/v)；右旋糖酐40葡萄糖注射液6％(v/v)；羟乙基淀粉130/0.4电解质注射液10％(v/v)；维生素C注射液1.4％(v/v)；人血白蛋白注射液35％(v/v)；0.9％氯化钠注射液3.1％(v/v)。购买上述各组分，在医疗安全柜中按比例混合，按此配方冻存CAR-T细胞48h后，解冻细胞，可以获得71％以上的复苏存活率。
本发明的技术方案不限于上述具体实施例的限制，凡是根据本发明的技术方案做出的技术变形，均落入本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种用于CAR-T临床级低温保存且可直接静脉注射回输的冻存液，其特征在于，所述CAR-T细胞冻存液含有二甲基亚砜、甘油果糖氯化钠注射液、转化糖电解质注射液、右旋糖酐40葡萄糖注射液、羟乙基淀粉130/0.4电解质注射液、维生素C注射液、人血白蛋白注射液、0.9％氯化钠注射液。
2.如权利要求1所述的冻存液，其特征在于，所述CAR-T细胞冻存液包含有以下组分：二甲基亚砜2-10％(v/v)；甘油果糖氯化钠注射液0-20％(v/v)；转化糖电解质注射液32-43％(v/v)；右旋糖酐40葡萄糖注射液4-12％(v/v)；羟乙基淀粉130/0.4电解质注射液0-20％(v/v)；维生素C注射液0.8-3.2％(v/v)；人血白蛋白注射液0-40％(v/v)；0.9％氯化钠注射液0-40％(v/v)。
3.如权利要求2所述的冻存液，其特征在于，所述CAR-T细胞冻存液包含有以下组分：二甲基亚砜5.5％(v/v)；甘油果糖氯化钠注射液2％(v/v)；转化糖电解质注射液37％(v/v)；右旋糖酐40葡萄糖注射液6％(v/v)；羟乙基淀粉130/0.4电解质注射液10％(v/v)；维生素C注射液1.2％(v/v)；人血白蛋白注射液35％(v/v)；0.9％氯化钠注射液3.3％(v/v)。
4.如权利要求2所述的冻存液，其特征在于，所述CAR-T细胞冻存液包含有以下组分：二甲基亚砜7.5％(v/v)；甘油果糖氯化钠注射液0％(v/v)；转化糖电解质注射液37％(v/v)；右旋糖酐40葡萄糖注射液6％(v/v)、羟乙基淀粉130/0.4电解质注射液10％(v/v)；维生素C注射液1.2％(v/v)；人血白蛋白注射液35％(v/v)；0.9％氯化钠注射液3.3％(v/v)。
5.如权利要求2所述的冻存液，其特征在于，所述CAR-T细胞冻存液包含有以下组分：包括以下组分:二甲基亚砜7.5％(v/v)；甘油果糖氯化钠注射液0％(v/v)；转化糖电解质注射液37％(v/v)；右旋糖酐40葡萄糖注射液6％(v/v)；羟乙基淀粉130/0.4电解质注射液10％(v/v)；维生素C注射液1.4％(v/v)；人血白蛋白注射液35％(v/v)；0.9％氯化钠注射液3.1％(v/v)。
6.如权利要求1-5任一项所述的冻存液，其特征在于，所述二甲基亚砜为USP临床级。
7.一种权利要求6所述的冻存液的制备方法，其特征在于，将二甲基亚砜、甘油果糖氯化钠注射液、转化糖电解质注射液、右旋糖酐40葡萄糖注射液、羟乙基淀粉130/0.4电解质注射液、维生素C注射液、人血白蛋白注射液及0.9％氯化钠注射液按照比例配制，混合即可。
8.一种权利要求6所述的冻存液在CAR-T细胞体外反复增殖或CAR-T细胞长时冻存中的应用。
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