CN105532646A - 肝细胞保存液及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种肝细胞保存液及其制备方法和应用，该肝细胞保存液通过将羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液、葡萄糖、谷氨酸钠、维生素C、酚红、葡醛内酯、多烯磷脂酰胆碱、细胞缓冲液及氨基酸混合液混合，从而形成了成分稳定、营养物质多元、溶液渗透体系缓冲力强的细胞保存液。该细胞保存液不仅可为肝细胞提供营养，还能很好的维持细胞活性，使得在后续的临床使用中发挥更好的效果。
Description
技术领域
本发明涉及细胞的保存液，具体涉及一种肝细胞保存液及其制备方法和应用，属于生物技术领域。
背景技术
近年来，细胞生物治疗技术逐渐代替传统药物治疗，在各大疾病领域上发挥重要的作用。细胞治疗是指利用具有某些特定功能的细胞，采用生物工程方法通过体外扩增、特殊培养等处理后，使这些细胞具有增强免疫、杀死病原体和肿瘤细胞、促进组织器官再生和机体康复等治疗功效，从而达到治疗疾病的目的。细胞治疗逐渐成为目前抗肿瘤，抗乙肝、丙肝的最新、最好的免疫治疗方法。
其中，L-02肝细胞是肝病细胞治疗中的种子细胞。经国内外学者对L-02细胞的生物学特性及功能的深入研究，发现该细胞能够分解代谢许多物质，其功能与正常肝细胞功能特别相似，并且该细胞能够不断增殖，且不具有致癌性。这一发现为肝病患者的治疗和治愈带来了光明的前景。
但是L-02细胞存活率及生物活性直接影响了其治疗效果。因此，如何维持L-02细胞的高存活率及活性成为了肝病细胞治疗的关键。在此之前，人们用生理盐水或者葡萄糖溶液作为细胞的保存液，但是由于缺乏营养、溶液等张力或等渗透力的差异等原因，导致细胞在保存及运输过程中出现活力低下、大量溶胀死亡等现象，细胞的大量死亡及活性的降低会直接影响肝病的治疗效果。
此外上述保存液的成分复杂，配置过程繁琐，且并不是针对L-02细胞的保存液，同时其保存效果也并未达到令人满意的效果。为了进一步的适应临床应用的需要，开发一种能在长时间保存和运输中，机能维持L-02细胞的存活率及活力，又能在进入到肝病手术患者体内后缓解手术后可能出现的并发症的新保存液成为了当务之急。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中L-02细胞培养存在活力低下、易大量溶胀死亡的缺陷，提供一种成分稳定、营养物质多元、溶液渗透体系缓冲力强的肝细胞保存液及其制备方法和应用。
为了实现上述目的，本发明提供的肝细胞保存液含有1～2g/L的葡萄糖、10～20g/L的谷氨酸钠、200～300mg/L的维生素C、5～10g/L的酚红、10～20mg/L的葡醛内酯、50～100mg/L的多烯磷脂酰胆碱、羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液、细胞缓冲液、氨基酸混合液；
其中，每升肝细胞保存液中含有10～20ml的羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液，含有800～900ml的细胞缓冲液与氨基酸混合液的混合溶液，所述细胞缓冲液与氨基酸混合液的体积比为1:1～2；
所述细胞缓冲液中各组分及含量为：7～10mM的KCl、2～2.6mM的CaCl2、276～290mM的NaCl、H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4、无菌水，所述细胞缓冲液的pH为7.35～7.45，渗透压为300～320mOsm/L；
所述氨基酸混合液中各组分及含量为：3.5～6.5g/L的赖氨酸、0.5～1.5g/L的色氨酸、4.3～7.4g/L的苯丙氨酸、1.8～4.6g/L的蛋氨酸、1.0～3.8g/L的苏氨酸、2.5～5.8g/L的异亮氨酸、3.6～6.3g/L的亮氨酸、2.6～5.4g/L的缬氨酸、0.2～1.3g/L的亚硫酸氢钠、9～10g/L的山梨醇。
优选地，所述肝细胞保存液含有1300～1600mg/L的葡萄糖、14～16g/L的谷氨酸钠、230～270mg/L的维生素C、6～8g/L的酚红、15～18mg/L的葡醛内酯、60～80mg/L的多烯磷脂酰胆碱。
优选地，所述每升细胞保存液中含有12～18ml的羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液，含有820～880ml的细胞缓冲液与氨基酸混合液的混合溶液，，所述细胞缓冲液与氨基酸混合液的体积比为1:1.3～1.7。
优选地，所述细胞缓冲液中各组分及含量为：7.6～9.2mM的KCl、2.3～2.5mM的CaCl2、280～285mM的NaCl、H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4、无菌水，所述细胞缓冲液的pH为7.35～7.45，渗透压为300～320mOsm/L。
优选地，所述氨基酸混合液中各组分含量为：4～5.7g/L的赖氨酸、0.7～1.2g/L的色氨酸、5.3～6.5g/L的苯丙氨酸、2.5～3.2g/L的蛋氨酸、1.5～2.7g/L的苏氨酸、3.5～4.3g/L的异亮氨酸、4.6～5.7g/L的亮氨酸、3.1～5.0g/L的缬氨酸、0.4～1.0g/L的亚硫酸氢钠、9～10g/L的山梨醇。
本发明还提供了一种制备上述的肝细胞保存液的方法，包括如下步骤：(1)配制细胞缓冲液：取KCl、CaCl2、NaCl和灭菌水混合，利用缓冲对H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4将pH调至7.35～7.45，搅拌混匀，灭菌即为细胞缓冲液；(2)配制氨基酸混合液：取赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、亚硫酸氢钠溶于含山梨醇的无菌水溶液，搅拌混匀即为氨基酸混合液；(3)配制肝细胞保存液：将细胞缓冲液和氨基酸混合液混合，搅拌混匀得混合溶液，将羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液、葡萄糖、谷氨酸钠、维生素C、酚红、葡醛内酯、多烯磷脂酰胆碱，加入混合溶液，搅拌混匀测定其渗透压为300～320mOsm/L后，过滤除菌即得肝细胞保存液。
本发明还提供了一种利用上述的肝细胞保存液保存肝细胞的方法，该方法为在无菌条件下将肝细胞与所述肝细胞保存液混合，每100ml肝细胞保存液中保存的肝细胞少于或等于1×1010，储存在细胞培养反应器中，置于0～4℃环境中保存。
本发明的有益效果：利用本发明肝细胞保存液配方及其制备方法所生产出的肝细胞及其保存液可运用于临床辅助治疗肝细胞功能不足的特定患者，改善患者血液环境，使得患者自身肝组织的功能得以恢复。该肝细胞保存液通过将羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液、葡萄糖、谷氨酸钠、维生素C、酚红、葡醛内酯、多烯磷脂酰胆碱、氨基酸混合液及细胞缓冲液混合，从而形成了成分稳定、营养物质多元、溶液渗透体系缓冲力强的肝细胞保存液。利用本发明保存肝细胞时，保存液不仅可以为肝细胞提供营养，可肉眼大致观察pH值，还能很好的维持细胞活性。此外，该肝细胞保存液较人体血液的渗透压高一些，使得肝细胞在运输及储存过程中处于低收缩状态，在用于肝病患者手术后的治疗中，可以缓解可能出现的并发症，观察治疗过程中的肾脏排泄功能，同时，待患者病程好转过程中也不会引起机体离子体系的失衡，降低了保存液对机体的副作用，使其在后续的临床使用中发挥更好的效果。此外，本发明的肝细胞保存液成本低廉，成分稳定，安全，无毒副作用，本制备过程简便，能在段时间内大量配置，可规模化生产。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步的详细描述。
以下实施例中公开的肝细胞保存液的制备方法如下：
(1)配制细胞缓冲液：取KCl、CaCl2、NaCl和灭菌水混合，利用缓冲对H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4将pH调至7.35～7.45，搅拌混匀，灭菌即为细胞缓冲液；
(2)配制氨基酸混合液：取赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、亚硫酸氢钠溶于含山梨醇的无菌水溶液，搅拌混匀即为氨基酸混合液；
(3)配制肝细胞保存液：将细胞缓冲液和氨基酸混合液混合，搅拌混匀得混合溶液，将羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液、葡萄糖、谷氨酸钠、维生素C、酚红、葡醛内酯、多烯磷脂酰胆碱，加入混合溶液，搅拌混匀测定其渗透压为300～320mOsm/L后，过滤除菌即得肝细胞保存液。
利用本发明的肝细胞保存液保存肝细胞的方法为：在无菌条件下将肝细胞与所述肝细胞保存液混合，每100ml肝细胞保存液中保存的肝细胞少于或等于1×1010，储存在细胞培养反应器中，置于0～4℃环境中保存。
实施例1
肝细胞保存液1，含有体积比为10ml/L羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液、2g/L葡萄糖、10g/L谷氨酸钠、200mg/L维生素C、5g/L酚红、10mg/L葡醛内酯、50mg/L多烯磷脂酰胆碱、细胞缓冲液和氨基酸混合液；
细胞缓冲液与氨基酸混合液的体积比为1:1，两者的混合溶液在肝细胞保存液中含量为800ml/L；
细胞缓冲液中各组分含量为：10mM的KCl、2mM的CaCl2、290mM的NaCl、H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4、无菌水，细胞缓冲液的pH为7.35；
氨基酸混合液中各组分含量为：3.5g/L赖氨酸、1.5g/L色氨酸、4.3g/L苯丙氨酸、4.6g/L蛋氨酸、1.0g/L苏氨酸、5.8g/L异亮氨酸、3.6g/L亮氨酸、5.4g/L缬氨酸、0.2g/L亚硫酸氢钠、9g/L的山梨醇。
实施例2
肝细胞保存液2，含有体积比为12ml/L羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液、1g/L葡萄糖、12g/L谷氨酸钠、220mg/L维生素C、6g/L酚红、12mg/L葡醛内酯、60mg/L多烯磷脂酰胆碱、细胞缓冲液、氨基酸混合液；
细胞缓冲液与氨基酸混合液的体积比为1:2，两者的混合溶液在肝细胞保存液中含量为850ml/L；
细胞缓冲液中各组分含量为：7mM的KCl、2.6mM的CaCl2、276mM的NaCl、H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4、无菌水，细胞缓冲液的pH为7.4，渗透压含量为304mOsm/L；
氨基酸混合液中各组分含量为：6.5g/L赖氨酸、0.5g/L色氨酸、7.4g/L苯丙氨酸、1.8g/L蛋氨酸、3.8g/L苏氨酸、2.5g/L异亮氨酸、6.3g/L亮氨酸、2.6g/L缬氨酸、1.3g/L亚硫酸氢钠、9g/L的山梨醇。
实施例3
肝细胞保存液3，含有体积比为14ml/L羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液、1.6g/L葡萄糖、14g/L谷氨酸钠、240mg/L维生素C、7g/L酚红、14mg/L葡醛内酯、70mg/L多烯磷脂酰胆碱、细胞缓冲液、氨基酸混合液；
细胞缓冲液与氨基酸混合液的体积比为1:1.3，两者的混合溶液在肝细胞保存液中含量为840ml/L；
细胞缓冲液中各组分含量为：9.2mM的KCl、2.3mM的CaCl2、285mM的NaCl、H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4、无菌水，细胞缓冲液的pH为7.45，渗透压为308mOsm/L；
氨基酸混合液中各组分含量为：4g/L赖氨酸、1.2g/L色氨酸、5.3g/L苯丙氨酸、3.2g/L蛋氨酸、2.7g/L苏氨酸、3.5g/L异亮氨酸、5.7g/L亮氨酸、5.0g/L缬氨酸、0.4g/L亚硫酸氢钠、10g/L的山梨醇。
实施例4
肝细胞保存液4，含有体积比为16ml/L羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液、1.3g/L葡萄糖、16g/L谷氨酸钠、260mg/L维生素C、8g/L酚红、16mg/L葡醛内酯、80mg/L多烯磷脂酰胆碱、细胞缓冲液、氨基酸混合液；
细胞缓冲液与氨基酸混合液的体积比为1:1.7，两者的混合溶液在肝细胞保存液中含量为820ml/L；
细胞缓冲液中各组分含量为：7.6mM的KCl、2.5mM的CaCl2、280mM的NaCl、H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4、无菌水，细胞缓冲液的pH为7.38，渗透压为312mOsm/L；
氨基酸混合液中各组分含量为：5.7g/L赖氨酸、0.7g/L色氨酸、6.5g/L苯丙氨酸、2.5g/L蛋氨酸、1.5g/L苏氨酸、4.3g/L异亮氨酸、4.6g/L亮氨酸、3.1g/L缬氨酸、1.0g/L亚硫酸氢钠、10g/L的山梨醇。
实施例5
肝细胞保存液5，含有体积比为18ml/L羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液、1750mg/L葡萄糖、18g/L谷氨酸钠、280mg/L维生素C、9g/L酚红、18mg/L葡醛内酯多烯磷脂酰胆碱、细胞缓冲液、氨基酸混合液；
细胞缓冲液与氨基酸混合液的体积比为1:1.3，两者的混合溶液在肝细胞保存液中含量为880ml/L；
细胞缓冲液包括：7.3mM的KCl、2.53mM的CaCl2、285mM的NaCl、H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4、无菌水，细胞缓冲液的pH为7.42，渗透压为316mOsm/L；
氨基酸混合液中各组分含量为：6.3g/L赖氨酸、1.2g/L色氨酸、6.9g/L苯丙氨酸、2.0g/L蛋氨酸、2.7g/L苏氨酸、5.5g/L异亮氨酸、4.0g/L亮氨酸、5.0g/L缬氨酸、0.4g/L亚硫酸氢钠、9g/L的山梨醇。
实施例6
肝细胞保存液6，含有体积比为20ml/L羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液、1230mg/L葡萄糖、20g/L谷氨酸钠、300mg/L维生素C、10g/L酚红、20mg/L葡醛内酯、100mg/L多烯磷脂酰胆碱、细胞缓冲液、氨基酸混合液；
细胞缓冲液与氨基酸混合液的体积比为1:1.85，两者的混合溶液在肝细胞保存液中含量为900ml/L；
细胞缓冲液包括：9.8mM的KCl、2.1mM的CaCl2、276mM的NaCl、H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4、无菌水，细胞缓冲液的pH为7.35，渗透压为320mOsm/L；
氨基酸混合液中各组分含量为：3.7g/L赖氨酸、0.63g/L色氨酸、4.9g/L苯丙氨酸、3.5g/L蛋氨酸、1.3g/L苏氨酸、3.0g/L异亮氨酸、5.2g/L亮氨酸、2.9g/L缬氨酸、1.2g/L亚硫酸氢钠、10g/L的山梨醇。
对照例
对照例1
对照保存液1，含有体积比为16ml/L羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液、1.3g/L葡萄糖、16g/L谷氨酸钠、260mg/L维生素C、8g/L酚红、细胞缓冲液、氨基酸混合液；
细胞缓冲液与氨基酸混合液的体积比为1:1.7，两者的混合溶液在肝细胞保存液中含量为820ml/L；
细胞缓冲液中各组分含量为：7.6mM的KCl、2.5mM的CaCl2、280mM的NaCl、H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4、无菌水，细胞缓冲液的pH为7.38，渗透压为312mOsm/L；
氨基酸混合液中各组分含量为：5.7g/L赖氨酸、0.7g/L色氨酸、6.5g/L苯丙氨酸、2.5g/L蛋氨酸、1.5g/L苏氨酸、4.3g/L异亮氨酸、4.6g/L亮氨酸、3.1g/L缬氨酸、1.0g/L亚硫酸氢钠、10g/L的山梨醇。
对照例2
对照保存液2，含有体积比为16ml/L羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液、1.3g/L葡萄糖、16g/L谷氨酸钠、260mg/L维生素C、8g/L酚红、16mg/L葡醛内酯、80mg/L多烯磷脂酰胆碱、细胞缓冲液、氨基酸混合液；
细胞缓冲液与氨基酸混合液的体积比为1:1.7，两者的混合溶液在肝细胞保存液中含量为850ml/L；
细胞缓冲液中各组分含量为：7.6mM的KCl、2.5mM的CaCl2、280mM的NaCl、H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4、无菌水，细胞缓冲液的pH为7.38，渗透压为312mOsm/L；
氨基酸混合液中各组分含量为：5.7g/L赖氨酸、0.7g/L色氨酸、6.5g/L苯丙氨酸、2.5g/L蛋氨酸、1.5g/L苏氨酸、4.3g/L异亮氨酸、4.6g/L亮氨酸、3.1g/L缬氨酸、1.0g/L亚硫酸氢钠、1.5g/L谷氨酸、2.8g/L天门冬氨酸、2.3g/L精氨酸、3.9g/L瓜氨酸、10g/L的山梨醇。
对照例3
对照保存液3，含有体积比为16ml/L羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液、1.3g/L葡萄糖、16g/L谷氨酸钠、260mg/L维生素C、8g/L酚红、细胞缓冲液、氨基酸混合液；
细胞缓冲液与氨基酸混合液的体积比为1:1.7，两者的混合溶液在肝细胞保存液中含量为840ml/L；
细胞缓冲液中各组分含量为：7.6mM的KCl、2.5mM的CaCl2、280mM的NaCl、H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4、无菌水，细胞缓冲液的pH为7.38，渗透压为312mOsm/L；
氨基酸混合液中各组分含量为：5.7g/L赖氨酸、0.7g/L色氨酸、6.5g/L苯丙氨酸、1.5g/L苏氨酸、4.3g/L异亮氨酸、3.1g/L缬氨酸、1.0g/L亚硫酸氢钠、10g/L的山梨醇。
试验例
利用上述实施例1～6的肝细胞保存液及对照例1～3的对照保存液对相同的L-02细胞进行保存试验，试验过程如下：取同样体积的配制好的各个肝细胞保存液及对照保存液，分别置于不同容器中，标记清晰，按照每100ml加入的1×1010数量的肝细胞给每个保存液添加等量的肝细胞，放置于0～4℃无菌环境后，分别在24h，48h，72h取样，测定其保存液中L-02细胞的存活率，并记录进行比较，其试验结果见下表。
L-02细胞保存试验结果对比表
从上述表格中可以看到，本发明所提供的肝细胞保存液首先在存活率方面明显优于已有的细胞保存液，并且其中的各种成分均为人体可利用，或者是临床上使用的成分，所以可以在治疗过程中进入人体，同时，该保存液的酚红除了可以作为观察细胞质量指标之一，同时可以在治疗过程中实时监测肾脏排泄功能是否正常。而保存液中的高渗环境，可以在一定程度上辅助缓解可能出现的肝性脑病，同时谷氨酸钠可以辅助降低因肝功能不足而出现的血氨升高现象。该细胞保存液是特别针对L-02细胞所设计的保存液，保存液中的成分可以在维持细胞存活率的情况下，更好的发挥该细胞的功能。
Claims (7)
1.一种肝细胞保存液，其特征在于：所述肝细胞保存液含有1～2g/L的葡萄糖、10～20g/L的谷氨酸钠、200～300mg/L的维生素C、5～10g/L的酚红、10～20mg/L的葡醛内酯、50～100mg/L的多烯磷脂酰胆碱、羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液、细胞缓冲液、氨基酸混合液；
其中，每升肝细胞保存液中含有10～20ml的羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液，含有800～900ml的细胞缓冲液与氨基酸混合液的混合溶液，所述细胞缓冲液与氨基酸混合液的体积比为1:1～2；
所述细胞缓冲液中各组分及含量为：7～10mM的KCl、2～2.6mM的CaCl2、276～290mM的NaCl、H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4、无菌水，所述细胞缓冲液的pH为7.35～7.45，渗透压为300～320mOsm/L；
所述氨基酸混合液中各组分及含量为：3.5～6.5g/L的赖氨酸、0.5～1.5g/L的色氨酸、4.3～7.4g/L的苯丙氨酸、1.8～4.6g/L的蛋氨酸、1.0～3.8g/L的苏氨酸、2.5～5.8g/L的异亮氨酸、3.6～6.3g/L的亮氨酸、2.6～5.4g/L的缬氨酸、0.2～1.3g/L的亚硫酸氢钠、9～10g/L的山梨醇。
2.根据权利要求1所述的肝细胞保存液，其特征在于：所述肝细胞保存液含有1300～1600mg/L的葡萄糖、14～16g/L的谷氨酸钠、230～270mg/L的维生素C、6～8g/L的酚红、15～18mg/L的葡醛内酯、60～80mg/L的多烯磷脂酰胆碱。
3.根据权利要求2所述的肝细胞保存液，其特征在于：所述每升细胞保存液中含有12～18ml的羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液，含有820～880ml的细胞缓冲液与氨基酸混合液的混合溶液，，所述细胞缓冲液与氨基酸混合液的体积比为1:1.3～1.7。
4.根据权利要求3所述的肝细胞保存液，其特征在于：所述细胞缓冲液中各组分及含量为：7.6～9.2mM的KCl、2.3～2.5mM的CaCl2、280～285mM的NaCl、H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4、无菌水，所述细胞缓冲液的pH为7.35～7.45，渗透压为300～320mOsm/L。
5.根据权利要求4所述的肝细胞保存液，其特征在于：所述氨基酸混合液中各组分含量为：4～5.7g/L的赖氨酸、0.7～1.2g/L的色氨酸、5.3～6.5g/L的苯丙氨酸、2.5～3.2g/L的蛋氨酸、1.5～2.7g/L的苏氨酸、3.5～4.3g/L的异亮氨酸、4.6～5.7g/L的亮氨酸、3.1～5.0g/L的缬氨酸、0.4～1.0g/L的亚硫酸氢钠、9～10g/L的山梨醇。
6.一种制备权利要求1所述肝细胞保存液的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)配制细胞缓冲液：取KCl、CaCl2、NaCl和灭菌水混合，利用缓冲对H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4将pH调至7.35～7.45，搅拌混匀，灭菌即为细胞缓冲液；(2)配制氨基酸混合液：取赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、亚硫酸氢钠溶于含山梨醇的无菌水溶液，搅拌混匀即为氨基酸混合液；(3)配制肝细胞保存液：将细胞缓冲液和氨基酸混合液混合，搅拌混匀得混合溶液，将羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液、葡萄糖、谷氨酸钠、维生素C、酚红、葡醛内酯、多烯磷脂酰胆碱，加入混合溶液，搅拌混匀测定其渗透压为300～320mOsm/L后，过滤除菌即得肝细胞保存液。
7.一种利用权利要求1所述肝细胞保存液保存肝细胞的方法，其特征在于：该方法为在无菌条件下将肝细胞与所述肝细胞保存液混合，每100ml肝细胞保存液中保存的肝细胞少于或等于1×1010，储存在细胞培养反应器中，置于0～4℃环境中保存。
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|---|---|
| CN (1) | CN105532646B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109856089A (zh) * | 2018-11-09 | 2019-06-07 | 合肥诺森医学检验有限公司 | 一种细胞保存液的质量检测方法 |
| CN111972399A (zh) * | 2020-08-06 | 2020-11-24 | 温州医科大学 | 维持肝细胞活性的保存液 |
| CN113383768A (zh) * | 2021-05-22 | 2021-09-14 | 武汉仝干医疗科技股份有限公司 | 一种肝细胞冻存液及其制备方法和应用 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000030442A1 (en) * | 1998-11-25 | 2000-06-02 | Abbott Laboratories | Organ preservation solution containing pyruvate |
| CN101491238A (zh) * | 2009-03-06 | 2009-07-29 | 李立 | 一种器官保存液 |
| CN101919381A (zh) * | 2010-09-06 | 2010-12-22 | 南方医科大学珠江医院 | 一种生物人工肝用肝细胞的保存液及其制备方法 |
| WO2013047666A1 (ja) * | 2011-09-29 | 2013-04-04 | 石原産業株式会社 | 生物材料の低温保存用の保存剤及び低温での生物材料の保存方法 |
| CN103952370A (zh) * | 2014-04-29 | 2014-07-30 | 周平 | 生物人工肝用细胞源的培养液 |
| CN104996396A (zh) * | 2015-07-27 | 2015-10-28 | 中山大学附属第一医院 | 一种离体肝脏灌注保存液 |
-
2016
- 2016-01-27 CN CN201610054463.5A patent/CN105532646B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000030442A1 (en) * | 1998-11-25 | 2000-06-02 | Abbott Laboratories | Organ preservation solution containing pyruvate |
| CN101491238A (zh) * | 2009-03-06 | 2009-07-29 | 李立 | 一种器官保存液 |
| CN101919381A (zh) * | 2010-09-06 | 2010-12-22 | 南方医科大学珠江医院 | 一种生物人工肝用肝细胞的保存液及其制备方法 |
| WO2013047666A1 (ja) * | 2011-09-29 | 2013-04-04 | 石原産業株式会社 | 生物材料の低温保存用の保存剤及び低温での生物材料の保存方法 |
| CN103952370A (zh) * | 2014-04-29 | 2014-07-30 | 周平 | 生物人工肝用细胞源的培养液 |
| CN104996396A (zh) * | 2015-07-27 | 2015-10-28 | 中山大学附属第一医院 | 一种离体肝脏灌注保存液 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 刘鸿凌 等: "原代乳猪肝细胞低温保存的初步探索", 《肝脏》 * |
| 苏志良 等: "供移植肝脏保存液及肝细胞保护剂研究进展", 《临床肝胆病杂志》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109856089A (zh) * | 2018-11-09 | 2019-06-07 | 合肥诺森医学检验有限公司 | 一种细胞保存液的质量检测方法 |
| CN111972399A (zh) * | 2020-08-06 | 2020-11-24 | 温州医科大学 | 维持肝细胞活性的保存液 |
| CN113383768A (zh) * | 2021-05-22 | 2021-09-14 | 武汉仝干医疗科技股份有限公司 | 一种肝细胞冻存液及其制备方法和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
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| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 430206 East Lake high tech Development Zone, Hubei Province, high and new avenue, No. 818, No. Applicant after: WUHAN TOGO MEDITECH Co.,Ltd. Address before: 430206 East Lake high tech Development Zone, Hubei Province, high and new avenue, No. 818, No. Applicant before: WUHAN TOGO BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. |
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| COR | Change of bibliographic data | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Hepatocyte preservation solution and its preparation method and Application Effective date of registration: 20220629 Granted publication date: 20171013 Pledgee: Pudong Shanghai Development Bank Limited by Share Ltd. Wuhan branch Pledgor: WUHAN TOGO MEDITECH Co.,Ltd. Registration number: Y2022420000204 |
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| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 4th floor, podium building, Gongtou Building, No. 433-505 Chunhui Road, Lingxi Town, Cangnan County, Wenzhou City, Zhejiang Province, 325000 Patentee after: Zhejiang Tonggan Medical Technology Co.,Ltd. Country or region after: China Address before: No. 818, Gaoxin Avenue, Donghu high tech Development Zone, Wuhan, Hubei 430206 Patentee before: WUHAN TOGO MEDITECH Co.,Ltd. Country or region before: China |
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| CP03 | Change of name, title or address |