CN1273016C

CN1273016C - 一种肾脏保存液

Info

Publication number: CN1273016C
Application number: CN 200410089196
Authority: CN
Inventors: 朱有华; 张纯
Original assignee: Second Military Medical University SMMU
Current assignee: Second Military Medical University SMMU
Priority date: 2004-12-07
Filing date: 2004-12-07
Publication date: 2006-09-06
Anticipated expiration: 2024-12-07
Also published as: CN1633848A

Abstract

本发明涉及人体或动物器官、组织或细胞的保存液，特别是一种肾脏保存液。其由枸橼酸钾、枸橼酸钠、硫酸镁、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、腺嘌呤核苷、左旋精氨酸、川芎嗪及甘露醇等成分组成，具有高渗、酸碱度稳定、能有效防止缺血再灌注损伤等优点，能够有效保存肾脏达72小时。

Description

一种肾脏保存液

技术领域

本发明涉及医疗器械技术领域，是人体或动物的器官、组织或细胞的保存液，特别是一种肾脏的保存液。

背景技术

我国肾移植工作的大规模开展始于上世纪70年代末80年代初，其中十分重要的一个推动力就是高渗枸橼酸腺嘌呤(HCA)肾保存液的研制成功。该保存液可有效保存肾脏57小时。20多年来，该保存液在全国开展器官移植的医疗单位得到广泛应用，在国内肾移植领域发挥了重要作用。(参考《肾脏保存实验研究及临床应用》中华泌尿外科杂志1982；3(1)：17。)

HCA液组成及主要技术参数(1000ml)如下：

K⁺ 80mmol

Na⁺ 80mmol

MgSO4 41mmol

枸橼酸盐 55mmol

甘露醇 30.2g

腺嘌呤磷酸盐 0.38mmol

pH 7.14

渗透压 380mOsm/Kg

HCA肾保存液的主要特点有：1、渗透压高，防止细胞水肿的作用较强；2、含有腺嘌呤，为细胞提供一定的能量底物；3、含有硫酸镁，有助于稳定细胞膜；4、价格低廉，公众认同感较高。

但是该保存液也有其固有的不足：1、硫酸镁浓度较高，低温下易析出，沉淀于保存液及肾血管中造成组织伤害；2、不含有效缓冲对，pH值不稳定，在长时间(24h以上)保存肾脏时不足以防止细胞酸化；3、含有较多生化制剂，纯度达不到药用标准。因此，在临床实际应用中HCA液保存肾脏达24小时以上时，移植术后肾衰的发生率显著升高。

美国威斯康星大学Belzer教授领导的科研小组于1987年研制成功的UW(University of Wisconsin)器官保存液是器官保存史上的一个突破，它大大提高了单纯低温灌洗法器官保存的效果，可保存胰或肾72小时，保存肝脏可达24小时。但是UW液的配方也并非无懈可击，它粘滞度偏高，因而降温速度慢，钾离子含量过高，使用不当会引起术中心跳骤停，更为重要的是它价格非常昂贵，不适合我国国情。

发明内容

本发明提供一种酸碱度稳定、高渗、价廉、含有丰富能量底物、能防止缺血再灌注损伤并能有效保存肾脏达72小时的肾脏保存液。

本发明肾脏保存液的组分及主要技术参数如下：

枸橼酸钾(C₆H₅K₃O₇·H₂O) 20～30mmol/L

枸橼酸钠(C₆H₅Na₃O₇·2H₂O) 20～30mmol/L

硫酸镁(MgSO₄·7H₂O) 5～40mmol/L

磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O) 10～20mmol/L

磷酸二氢钠(NaH₂PO₄·2H₂O) 1～3mmol/L

腺嘌呤核苷(C₁₀H₁₃N₅O₄) 1～10mmol/L

左旋精氨酸(C₆H₁₄N₄O₂) 2～10mmol/L

甘露醇(C₆H₁₄O₆) 150～200mmol/L

川芎嗪(C₈H₁₂N₂·HCl·2H₂O) 0～0.1mmol/L

所配保存液的pH为7.3～8

渗透压为360±20mOsm/Kg

本发明在配方组成上具有以下特点：1、在溶液中添加磷酸盐缓冲对，使溶液pH值稳定在7.3～8之间，有利于防止细胞乏氧代谢下迅速酸化导致的细胞损伤；2、添加腺苷作为能量底物，为缺氧条件下的细胞提供足够的能量；3、添加左旋精氨酸，精氨酸是体内NO的生成底物，在NO合成酶(NOS)及其辅助因子作用下，精氨酸N端胍基脱氨氧化成NO，该通路称为“L-精氨酸：NO通路”。NO是一种脂溶性很强的小分子活性氮自由基，能自由通过细胞膜并减轻缺血再灌注损伤，并有效阻止细胞凋亡；4、维持溶液的高渗特性，溶液渗透压340～380mOsm/Kg，有助于减轻细胞水肿；5、降低了MgSO₄的浓度，减少其低温下析出。6、原料全部为国产的符合国家药典规范的药用成分。7、配方中还可以加入中药川芎嗪，川芎嗪具有抗脂质过氧化，提高SOD活性，抗自由基，抑制血小板聚集和活化以及维持TXA2/PGI2的平衡等作用，因此具有突出的抗缺血再灌注损伤的作用。

本发明组分间无配伍禁忌，所形成的肾保存液为无色透明的液体，性质稳定，可以高温高压消毒，可在-20℃～50℃条件下贮存，制备、运输及使用均十分简单方便。动物(犬)实验表明本发明保存液可有效保存肾脏达72小时，试验证明本发明保存液保存的肾脏质量显著优于HCA液，并与UW液相当。

原料及其来源：

1、枸橼酸钾(potassium citrate)：广东台山市新宁制药厂产品。分子式：C₆H₅K₃O₇·H₂O。分子量：324.41。

2、枸橼酸钠(sodium citrate)：陕西西安市第四制药厂产品。分子式：C₆H₅Na₃O₇·2H₂O。分子量：294.10。

3、硫酸镁(magnesium sulfate)：上海宝达化工有限公司产品。分子式：MgSO₄·7H₂O。分子量：246.48。

4、磷酸氢二钠(disodium phosphate)：上海精化科技研究所产品。分子式：Na₂HPO₄·12H₂O。分子量：358.14。

5、磷酸二氢钠(sodium biphosphate)：上海精化科技研究所产品。分子式：NaH₂PO₄·2H₂O。分子量：156.01。

6、腺嘌呤核苷(adenosine)：广东肇庆市星湖公司产品。分子式：C₁₀H₁₃N₅O₄。分子量：267.25。

7、左旋精氨酸(L-Arginine)：上海菲雅科技发展公司产品。分子式：C₆H₁₄N₄O₂。分子量：174。

8、川芎嗪(tertram ethylpyrazine)：大同市惠达药业有限责任公司产品。分子式：C₈H₁₂N₂·HCl·2H₂O。分子量：208.69。

9、甘露醇(mannitol)：山东结晶集团有限公司产品。分子式：C₆H₈(OH)₆。分子量：182.17。

具体实施方式

现结合实施例，对本发明肾脏保存液的制备方法作详细描述。

实施例1：配制保存液I(1000ml)。

1、向1000ml容器内加入800ml双蒸水；

2、加入6488mg枸橼酸钾，搅拌使其溶解；

3、加入6764mg枸橼酸钠，搅拌使其溶解；

4、加入2465mg硫酸镁，搅拌使其溶解；

5、加入5372mg磷酸氢二钠，搅拌使其溶解；

6、加入270mg磷酸二氢钠，搅拌使其溶解；

7、加入535mg腺嘌呤核苷，搅拌使其溶解；

8、加入350mg L-精氨酸，搅拌使其溶解；

9、加入30g甘露醇，搅拌直至完全溶解；

10、容量调整：加入双蒸水直至溶液总体积为1000ml，搅拌使溶液呈均匀、无色、澄明的液体；

11、活性炭过滤后将滤液封装，高温高压(109℃，45分钟)消毒即可。

实施例2：配制保存液II(1000ml)。

1、向1000ml容器内加入800ml双蒸水；

2、加入2578mg枸橼酸钾，搅拌使其溶解；

3、加入10284mg枸橼酸钠，搅拌使其溶解；

4、加入5679mg硫酸镁，搅拌使其溶解；

5、加入5372mg磷酸氢二钠，搅拌使其溶解；

6、加入270mg磷酸二氢钠，搅拌使其溶解；

7、加入1070mg腺嘌呤核苷，搅拌使其溶解；

8、加入350mg L-精氨酸，搅拌使其溶解；

9、加入川芎嗪4mg，搅拌使其溶解；

10、加入30g甘露醇，搅拌直至完全溶解；

11、容量调整：加入双蒸水直至溶液总体积为1000ml，搅拌使溶液呈均匀、无色、澄明的液体；

12、活性炭过滤后将滤液封装，高温高压(109℃，45分钟)消毒即可。

实施例3：配制保存液III(1000ml)。

1、向1000ml容器内加入800ml双蒸水；

2、加入6488mg枸橼酸钾，搅拌使其溶解；

3、加入6764mg枸橼酸钠，搅拌使其溶解；

4、加入14790mg硫酸镁，搅拌使其溶解；

5、加入5372mg磷酸氢二钠，搅拌使其溶解；

6、加入270mg磷酸二氢钠，搅拌使其溶解；

7、加入1605mg腺嘌吟核苷，搅拌使其溶解；

8、加入700mg L-精氨酸，搅拌使其溶解；

9、加入30g甘露醇，搅拌直至完全溶解；

动物实验：

为研究本发明保存液的肾脏保存效果，以实施例1配制的保存液I为例，采用单纯灌洗冷却犬肾自体移植模型，以生理盐水、HCA液以及UW液为对照，每组5只动物，进行72小时肾脏保存后自体移植实验。

动物模型制作：选取13～17kg雌性杂种犬，术前12h禁食，以戊巴比妥30mg/kg腹腔内注射麻醉。麻醉成功后，取腹正中切口，自剑突向下长约12cm，切开进腹。游离左肾及肾动静脉、输尿管，切断输尿管，长约8cm，在肾静脉和肾动脉根部分别切断之，立即取出肾脏置于各组指定的保存液(0℃)中，并以该保存液(0℃)200ml经肾动脉灌注肾脏，直至肾脏呈苍白色，将肾脏连同500ml指定保存液置于肾袋中，在0～4℃条件下储存。分别结扎实验动物肾动静脉及输尿管残端，关腹。术后立即给予头孢曲松钠1g静脉滴注。72h后，同一实验犬按同样方法麻醉，按原切口打开腹腔，并向下延长至耻骨上方，游离右侧髂外动静脉，取出肾脏，肾静脉与髂外静脉以7-0prolene血管吻合线端侧吻合，肾动脉与髂外动脉端端吻合，开放血流后彻底止血。切开膀胱，留置导尿管。输尿管内置F4.5之双J管，以5-0羊肠线与膀胱吻合。随后切除实验犬右肾，关腹，手术结束。术后予补液(每日10％葡萄糖500ml、平衡液500ml)及抗生素(头孢曲松钠1g)直至实验动物开始自行进食。术后第3日抽静脉血测定肌酐。术后观察期为60天，达到60天的动物视为长期存活。

实验结果如下：

表1自体肾移植术后犬存活时间(天)

本发明保存液I	生理盐水	HCA液	UW液
本发明保存液I	生理盐水	HCA液	UW液	1512606060	35334	8781114	1260606060

表2自体肾移植术后3天实验犬血清肌酐值(μmol/L)

本发明保存液I	生理盐水	HCA液	UW液
本发明保存液I	生理盐水	HCA液	UW液	498345455673412	15891021132316451456	88910561121789654	879545343453512

注：S-N-K方差分析显示实验组与UW液组实验犬血清肌酐数

值无统计学差异，其余各组之间数值均有统计学差异。

上述结果表明本发明肾保存液的肾脏保存效果与UW液相当，明显优于HCA液及生理盐水。

保存液II和III也做了相应的实验，结果与上述实验相近。

Claims

1、一种肾脏保存液，其特征在于组分如下：

枸橼酸钾(C₆H₅K₃O₇·H₂O) 20～30mmol/L

枸橼酸钠(C₆H₅Na₃O₇·2H₂O) 20～30mmol/L

硫酸镁(MgSO₄·7H₂O) 5～40mmol/L

磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O) 10～20mmol/L

磷酸二氢钠(NaH₂PO₄·2H₂O) 1～3mmol/L

腺嘌呤核苷(C₁₀H₁₃N₅O₄) 1～10mmol/L

左旋精氨酸(C₆H₁₄N₄O₂) 2～10mmol/L

甘露醇(C₆H₁₄O₆) 150～200mmol/L

川芎嗪(C₈H₁₂N₂·HC₁·2H₂O) 0～0.1mmol/L

用双蒸水配制

pH 7.3～8

渗透压 360±20mOsm/Kg。

2、按权利要求1所述肾脏保存液，其特征在于组分如下：

每1000ml液体中含有：

枸橼酸钾：6488mg；

枸橼酸钠：6764mg；

硫酸镁：2465mg；

磷酸氢二钠：5372mg；

磷酸二氢钠：270mg；

腺嘌呤核苷：535mg；

左旋精氨酸：350mg；

甘露醇：30g甘露醇。

3、按权利要求2所述肾脏保存液，其特征在于还含有川芎嗪，含量为0.1mmol/L。