CN108530535B - 结合肽聚糖识别蛋白1的抗体 - Google Patents

Abstract

本发明涉及结合肽聚糖识别蛋白1的抗体。本文所公开的是用于鉴定TREM‑1的配体和抗体或其片段的方法，其能够修饰TREM‑1的配体的功能。使用此方法可以鉴定和选择降低或阻断TREM‑1活化的抗体。结合TREM‑1的配体并降低TREM‑1活性的抗体可以适合用作药物。

Description

结合肽聚糖识别蛋白1的抗体

本申请是申请日为2012年11月30日的中国专利申请201280069905.3“结合肽聚糖识别蛋白1的抗体”的分案申请。

技术领域

本发明涉及免疫学领域。更具体地，本发明涉及用于鉴定能够刺激髓样细胞上表达的触发受体（TREM-1）的配体的方法，以及结合TREM-1的配体的抗体。这些抗体能够调节髓样细胞活化和因此调节免疫应答。

背景技术

肽聚糖识别蛋白1（另外称为PGLYRP1、PGRP-S、TNFSF3L、PGRP、TAG7和PGRPS）在嗜中性粒细胞中表达并在它们活化后释放。PGLYRP1在患病组织中高度丰富，并且已显示在通过先天免疫系统的细菌感染的清除中起重要作用。PGLYRP蛋白家族（PGLYRP1、PGLYRP2、PGLYRP3、PGLYRP4）均与细菌肽聚糖（PGN）相互作用，但在蛋白的PGN结合位点中有重要区别。PGLYRP1具有附加的沟，假定其构成未知效应物或信号传导蛋白的结合位点（J. Mol.Biol. 347:683-691 (2005)）。PGLYRP1是高度保守的、196个氨基酸长度的蛋白，由信号肽和肽聚糖结合域组成。

为了理解并由此操纵此蛋白在各种感染性和炎性疾病中的功能，鉴定由PGLYRP1介导的信号传导机制是重要的。

TREM-1在免疫调节中同样地具有充分描述的效果，但是迄今为止，尚未了解导致TREM-1介导的免疫功能的机制。TREM-1是在髓样细胞，如单核细胞、巨噬细胞和嗜中性粒细胞上表达的受体。其是由234个氨基酸组成的跨膜蛋白，包括单个细胞外免疫球蛋白结构域和短的胞质尾。TREM-1不具有明显的信号传导基序，但是，当被活化时，形成二聚体/多聚体，并通过与含ITAM的信号接头蛋白DAP12相关联介导信号传导。下游信号传导可包括Syk和Zap70的磷酸化。下游信号传导可包括NFAT、ELK、NK-κB转录因子的活化。当TREM-1被活化时，其触发促炎性细胞因子，如TNF -α（TNF-α）、IL-8和单核细胞趋化蛋白-1从髓样细胞中的释放。

TREM-1在患有败血症、类风湿关节炎（RA）和炎性肠病（IBD）的患者中上调，并且越来越多的证据支持该理论认为TREM-1有助于炎性疾病的发生和进展。TREM-1信号传导的阻断已进一步在RA和IBD的体内小鼠模型中显示具有治疗活性。

TREM-1活化的作用方式仍然很难以捉摸，因为活化TREM-1的配体不是本领域中已知的。因此，在本领域中，存在对鉴定TREM-1的配体的手段的需求。在本领域中对于鉴定能够降低、阻断、或者干扰TREM-1与其配体的相互作用分子（如抗体）的方法存在需求。在本领域中对于能够结合TREM-1的配体，并从而降低、阻断，或干扰TREM-1被其配体的刺激的分子，如抗体存在需求。在本领域中对于能够结合TREM-1的配体的分子，如抗体存在需求。在本领域中对于能够结合TREM-1的配体并从而阻断TREM-1的活化和信号传导的分子，如抗体存在需求。在本领域中对于能够结合TREM-1的配体，并从而降低或阻断从表达TREM-1的髓样细胞的细胞因子释放的分子，如抗体存在需求。

本文所公开的是用于鉴定TREM-1的配体以及能够结合TREM-1的配体的分子如抗体的方法和测定法。本文描述的是，能够影响TREM-1活化的抗体。因此，本文所公开的抗体适于用作药物。结合TREM-1的配体，并且降低或阻断TREM-1与其配体相互作用的抗体对于患有慢性炎性疾病如类风湿性关节炎、银屑病关节炎和炎症性肠疾病的个体的生活质量可以具有实质性的影响。

发明内容

本发明涉及用于鉴定TREM-1的配体和结合TREM-1的配体的分子如抗体（本文中鉴定为PGLYRP1）的方法。本发明还涉及可通过本发明的方法鉴定PGLYRP1抗体。因此，本发明涉及PGLYRP1抗体，其能够通过PGLYRP1修饰TREM-1的活化，诸如能够通过PGLYRP1降低TREM-1活性（信号传导和/或活化）的PGLYRP1抗体。降低TREM-1的活性的抗体可用于炎症治疗。

用于鉴定TREM-1的配体的方法，其包括：（a）培养表达TREM-1、TREM-1的信号传导蛋白和报道基因构建体的细胞，所述报道基因构建体被所述信号蛋白活化；（b）当它与细胞、化合物或流体，例如生物流体或组织接触时（其触发TREM-1的活化），对所述表达TREM-1的细胞的活性进行检测，优选定量；（c）使（b）的培养物与TREM-1活化组分接触；（d）分离结合TREM-1的组分以及（e）表征所分离的组分。TREM-1的配体，通过本发明鉴定为PGLYRP1，可用于修饰TREM-1的活性。

用于鉴定特异性结合PGLYRP1并且修饰TREM-1介导的细胞活性的分子的方法，其包括：（a）根据实施方案1-18中任一项培养细胞；（b）当它与PGLYRP1和任选地，多聚化试剂如PGN接触时，对表达TREM-1的所述细胞的活性进行检测，优选定量；（c）将（b）的培养物与特异性结合PGLYRP1的分子接触；并且（d）检测，优选定量表达TREM-1的所述细胞的活性小于或大于如（b）中测量的它的活性。

用于鉴定修饰TREM-1介导的细胞活性的PGLYRP1抗体的方法，其包括：（a）培养表达TREM-1、TREM-1的信号传导蛋白和由所述信号传导蛋白活化的报道基因构建体的细胞；（b）当它与PGLYRP1和任选地，组合多聚化试剂如PGN接触时，对表达TREM-1的所述细胞的活性进行检测，优选定量；（c）将（b）的培养物与结合PGLYRP1的抗体接触；并且（d）检测，优选定量表达TREM-1的所述细胞的活性小于或大于如（b）中测量的它的活性。

鉴定降低TREM-1介导的细胞活性的PGLYRP1抗体的一种方法，其包括：（a）培养细胞，例如表达TREM-1、信号传导蛋白例如DAP12和报道基因例如荧光素酶或β-半乳糖苷酶的T细胞；（b）将所述细胞与活化的嗜中性粒细胞和任选地，组合多聚化试剂例如PGN一起孵育；（c）检测，优选定量所述细胞的发光；（d）将所述细胞和活化的嗜中性粒细胞的培养物与PGLYRP1抗体接触；以及（e）检测，优选定量所述细胞的发光少于（c）中测量的活性。

附图说明

图1 显示嗜中性粒细胞活化BWZ-TREM-1报道基因细胞系。BWZ报道基因细胞系表达人TREM-1并介导NFAT-连接的β-半乳糖苷酶报道基因的活化，其可以使用来自Promega,Denmark的Beta-Glo测定系统试剂盒通过发光定量。该图显示当在含有TNF-α、IL-6、IFN-γ和GM-CSF或Toll样受体（TLR）活化“混合物(cocktails)”（TLRL和TLR2混合物，tlrl-kit2hm, Invivogen, Sigma-Aldrich, Denmark）的细胞因子混合物的存在下，以及这些活化混合物的分开的组分的存在下与嗜中性粒细胞一起培养时，报道基因细胞系的活化。

图2显示用TREM-1四聚体重组蛋白的PGN刺激的嗜中性粒细胞的流式细胞染色。对照蛋白不结合（图2A），而TREM-1四聚体（SEQ ID NO: 2）结合PGN-活化的嗜中性粒细胞的亚群（图2B），并且这可以被另一种TREM-1蛋白竞争（图2D），但不被对照蛋白竞争（图2C），证实了相互作用的特异性。

图3：用TREM-1通过免疫沉淀（IP）/质谱（MS）鉴定PGLYRP1。可溶性TREM-Fc与PGN-活化的嗜中性粒细胞一起孵育，交联，免疫沉淀，随后进行清洗，胰蛋白酶消化和质谱。TREM-1结合蛋白的免疫沉淀得到3个特异性蛋白，73个蛋白与对照蛋白重叠，并且72个被对照蛋白单独沉淀（背景）。表显示了TREM-1特异性免疫沉淀和后续质谱的结果。

图4显示可溶性TREM-1结合PGLYRP1。通过用TREM-1在表达重组PGLYRP1的HEK293转染子上流式细胞染色（图4A）和通过PGLYRP1和TREM-1四聚体（SEQ ID NO: 2）之间的相互作用的Biacore和ForteBio分析显示。在存在或不存在10 µg/ml的可溶性大肠杆菌肽聚糖（PGN）的情况下可溶性人PGLYRP1结合固定化人TREM-1（图4B）。PGN本身也结合固定化的人PGLYRP1（图4C），并且在PGLYRP1表面暴露于和被PGN结合之前和之后，可溶性人TREN-1结合固定化的PGLYRP1（图4D）。

图5显示TREM-1报道基因细胞系被重组PGLYRP1活化。TREM-1报道基因细胞系用重组PGLYRP1（目录号2590-PG-050 R&D Systems Minneapolois MN, USA）的刺激，以及内部(in-house)生成的PGLYRP1(SEQ ID NO: 1)在PGN的存在下导致剂量依赖性的应答（图5A）。此PGLYRP1诱导的应答可以被TREM-1-Fc融合蛋白特异性阻断（图5B）验证了TREM-1特异性信号。

图6显示单克隆抗-PGLYRP1抗体可以阻断在报道基因测定中用PGN-活化的嗜中性粒细胞刺激的TREM-1应答 。抗体杂交瘤克隆上清液的实例在多个板中筛选它们阻断活化信号的能力。少数抗体（那些在虚线下的抗体，例如F10、F95）能够阻断此信号。黑点表示每个板中的同种型对照（图6A）。图6B显示来自另一个融合体的测试引起2个额外的阻断PGLYRP1抗体M-hPGRPS-2F5和-2F7。商购可得的抗-PGLYRP1 mAb的测试显示它们不能阻断此信号，即使在高剂量，而多克隆的商购可得的PGLYRP1 pAb（AF2590, R&D SystemsMinneapolois MN, USA）可以。图6C显示来自Thermo Scientific的商购可得的抗PGLYRP1mAb 188C424(Thermo Scientific, Waltham MA, USA)与同种型对照(MAB002)和多克隆抗PGLYRP1 pAb (AF2590)的比较。图6D显示商购可得的抗PGLYRP1 mAb 4H230(USBiological, Salem MA, USA)与同种型对照（MAB002）和多克隆抗PGLYRP1 pAb (AF2590)的比较。图6E显示商购可得的抗PGLYRP1 mAb 9A319(US Biological, Salem MA, USA)与同种型对照（MAB002）和多克隆抗PGLYRP1 pAb (AF2590)的比较，图6F显示商购可得的抗PGLYRP1 mAb 6D653(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz CA, USA)与同种型对照（MAB002）和多克隆抗PGLYRP1 pAb (AF2590)的比较。对于SC 6D653 mAb所见的活性轻微下降似乎由于含叠氮化物的制剂，因为用1 ug/ml板结合的抗TREM-1 mAb触发TREM-1的PGLYRP1独立的信号显示相同的现象（图6G）。

图7显示在人RA滑液中存在的TREM-1配体能够刺激TREM-1。

图7显示板结合的对抗抗TREM-1 mAb（R&D MAB1278, Minneapolis, MN, USA）刺激TREM-1（星号）并且已向其中添加PGN的RA滑液（SF）样品显示hTREM-1配体活性，其可以被PGLYRP1多克隆抗体（AF2590）中和，表明TREM-1活性是PGLYRP1依赖性的。

图8显示II型 PGLYPR1构建体的总体结构。IC表示细胞内结构域，TM是跨膜结构域-其两者源自MDL-1蛋白序列，组合hPGLYRP1的EC（细胞外）结构域。

序列简述

SEQ ID NO: 1表示成熟、全长hPGLYRP1肽序列的氨基酸序列。

SEQ ID NO: 2表示包含下列元件的重组蛋白序列：人TREM-1 ECD、接头肽、人TREM-1 ECD、具有7个不同于野生型的突变(L15A、L16E、G18A、A111S、P112S、D137E、L139M)的人同种异型IgG1 Fc。

SEQ ID NO: 3表示具有5个不同于野生型的突变：L15A、L16E、G18A、A111S、P112S的人同种异型IgG1 Fc。

SEQ ID NO: 4表示从N至C末端包含下列元件的重组蛋白序列：6xHIS标签、两个拷贝的链霉抗生物素蛋白结合蛋白结构域（SBP）、GS接头、软骨寡聚蛋白C末端（COMP）、GS接头、hDCIR-ECD。

SEQ ID NO: 5表示包含下列元件的重组蛋白序列：hTREM-1-ECD、GS接头、软骨寡聚蛋白C末端（COMP）、GS接头、两个拷贝的链霉抗生物素蛋白结合蛋白结构域（SBP）、6xHIS标签。

SEQ ID NO: 6表示从N至C末端的顺序包含下列元件的重组蛋白序列：人CD83ECD、G4Sx3接头肽、人CD83 ECD、人同种异型IgG1 Fc突变体。

SEQ ID NO:7表示具有C末端GPI信号序列的全长人PGLYRP1编码cDNA序列。经由EcoR1和Xho1限制性位点将此序列克隆入pcDNA3.1zeo(+) (Invitrogen: V860-20,Carlsbad, CA, USA)。

SEQ ID NO: 8表示成熟全长hTREM-1 ECD（aa.21-200）。

SEQ ID NO:9表示被G4Sx3接头分开的CD33前导肽串联hTREM-1细胞外结构域的cDNA。合成cDNA具有5' EcoRI限制性位点、GCCACC Kozak序列CD33前导序列随后是人TREM-1的细胞外结构域（aa17-200），具有相互间隔的KpnI限制性位点和重复3次的甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-丝氨酸间隔序列（G4Sx3）随后是人TREM-1的细胞外结构域的额外拷贝（aa17-200）和Apa1位点以允许克隆。

SEQ ID NO:10表示五聚体hTREM-COMP-SBP38x2-6HIS。EcoR1位点和Kozak是ORF的5'并且BamH1位点是ORF的3'。

SEQ ID NO:11表示用EcoR1和Apa1克隆入pJSV002-hFc6mut载体的hCD83四聚体。EcoR1位点和Kozak是ORF的5'并且Apa1位点是ORF的3'。

SEQ ID NO:12表示五聚体6HIS-SBP38x2-COMP-hDCIR。EcoR1位点和Kozak是ORF的5'并且BamH1是ORF的3'。

SEQ ID NO:13表示单克隆PGLYRP1 抗体(1F36, mAb 0182)的可变重链的核酸序列。

SEQ ID NO:14表示单克隆PGLYRP1 抗体(1F36, mAb 0182)的可变轻链的核酸序列。

SEQ ID NO:15表示单克隆PGLYRP1 抗体(1F36, mAb 0182)的可变重链的氨基酸序列。

SEQ ID NO:16表示单克隆PGLYRP1 抗体(1F36, mAb 0182)的可变轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO:17表示单克隆PGLYRP1抗体(1F10)的可变重链的核酸序列。

SEQ ID NO:18表示单克隆PGLYRP1抗体(1F10)的可变轻链的核酸序列。

SEQ ID NO:19表示单克隆PGLYRP1抗体(1F10)的可变重链的氨基酸序列。

SEQ ID NO:20表示单克隆PGLYRP1抗体(1F10)的可变轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO:21表示单克隆PGLYRP1 抗体(1F105, mAb 0184)的可变重链的核酸序列。

SEQ ID NO:22表示单克隆PGLYRP1 抗体(1F105, mAb 0184)的可变轻链的核酸序列。

SEQ ID NO:23表示单克隆PGLYRP1 抗体(1F105, mAb 0184)的可变重链的氨基酸序列。

SEQ ID NO:24表示单克隆PGLYRP1 抗体(1F105, mAb 0184)的可变轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO:25表示单克隆PGLYRP1抗体(1F95)的可变重链的核酸序列。

SEQ ID NO:26表示单克隆PGLYRP1抗体(1F95)的可变轻链的核酸序列。

SEQ ID NO:27表示单克隆PGLYRP1抗体(1F95)的可变重链的氨基酸序列。

SEQ ID NO:28表示单克隆PGLYRP1抗体(1F95)的可变轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO:29表示单克隆PGLYRP1抗体(2F5)的可变重链的核酸序列。

SEQ ID NO:30表示单克隆PGLYRP1抗体(2F5)的可变轻链的核酸序列。

SEQ ID NO:31表示单克隆PGLYRP1抗体(2F5)的可变重链的氨基酸序列。

SEQ ID NO:32表示单克隆PGLYRP1抗体(2F5)的可变轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO:33表示单克隆PGLYRP1抗体(2F7)的可变重链的核酸序列。

SEQ ID NO:34表示单克隆PGLYRP1抗体(2F7)的可变轻链的核酸序列。

SEQ ID NO:35表示单克隆PGLYRP1抗体(2F7)的可变重链的氨基酸序列。

SEQ ID NO:36表示单克隆PGLYRP1抗体(2F7)的可变轻链的氨基酸序列。

SEQ ID NO:37表示II型 1.0 PGLYRP1的氨基酸序列。

SEQ ID NO:38表示II型 2.0 PGLYRP1的氨基酸序列。

SEQ ID NO:39表示表位标签的氨基酸序列。

SEQ ID NO:40表示全长人PGLYRP2的氨基酸序列。

SEQ ID NO:41表示全长人PGLYRP3的氨基酸序列。

SEQ ID NO:42表示全长人PGLYRP4的氨基酸序列。

SEQ ID NO:43表示hCD33-hTREM-1 ECD(aa17-200)-Fc6mut的核酸序列。

SEQ ID NO:44表示hCD33-hTREM-1 ECD(aa17-200)-Fc6mut的氨基酸序列。

SEQ ID NO:45表示hCD33-hTremL1 ECD(aa16-162)-Fc6mut的核酸序列。

SEQ ID NO:46表示hCD33-hTremL1 ECD(aa16-162)-Fc6mut的氨基酸序列。

SEQ ID NO:47表示hCD33-hTremL2 ECD(aa19-268)-Fc6mut的核酸序列。

SEQ ID NO:48表示hCD33-hTremL2 ECD(aa19-268)-Fc6mut的氨基酸序列。

SEQ ID NO:49表示hCD33-hTREM2-Fc6mut二聚体的核酸序列。

SEQ ID NO:50表示hCD33-hTREM2-Fc6mut二聚体的氨基酸序列。

SEQ ID NO:51表示引物的核酸序列。

SEQ ID NO:52表示引物的核酸序列。

SEQ ID NO:53表示hCD33的氨基酸序列。

描述

本发明涉及用于鉴定分子例如抗体的方法，所述分子能够特异性结合TREM-1的信号传导配偶体（本文鉴定为PGLYRP1），并影响PGLYRP1与其信号传导配偶体TREM-1的结合。PGLYRP1可以用于修饰TREM-1的活性。因此，本发明涉及影响由PGLYRP1介导的炎症应答的分子，例如抗体。已经产生并鉴定了能够结合PGLYRP1并影响TREM-1活化和信号传导的抗体。

用于鉴定TREM-1的配体和用于鉴定能够特异性结合PGLYRP1并降低或阻断TREM-1的PGLYRP1活化的分子例如抗体的方法或测定法可以如下产生：

第一细胞或第一细胞的群体用编码TREM-1或其片段、信号传导蛋白和报道基因构建体的基因转染。该细胞可以是造血来源的，诸如髓样细胞，其可以是T细胞，或者其可以是能够被转染和表达这些分子任何其它的细胞类型。信号传导蛋白可以是无论直接或间接地能够从TREM-1向报道基因构建体发送或传送信号的任何蛋白，并且可以包括DAP10、DAP12、TCRζ、FC γRIII、Fc受体，或能够从TREM-1向报道基因构建体发送或传送信号的任何其它蛋白。可选地，所述信号传导蛋白可以是TREM-1/信号传导嵌合分子。所述报道基因构建体包含转录因子和报道基因，其依次编码产生可检测的信号例如可定量的信号的报道蛋白。所述转录因子可以是NFAT或NFkB或本领域已知的任何其它合适的转录因子。报道基因可以编码β-半乳糖苷酶、荧光素酶、绿色荧光蛋白（GFP）、氯霉素转移酶或能够产生可检测的信号的任何其它报道蛋白。可以用于此生物测定的一个合适的细胞系是BWZ.36/hTREM-1:DAP12:NFAT-LacZ T-细胞（本文也鉴定为“BWZ/hTREM-1报道基因细胞”），在实施例中详细描述其产生。当被活化时，BWZ/hTREM-1报道基因细胞产生β-半乳糖苷酶，其产生可以使用本领域已知的设备或试剂盒，例如Beta Glow™ (Promega E4720, Madison,WI, USA)进行测量。

可以通过与PGLYRP1和任选地，多聚化试剂一起孵育活化第一细胞或第一细胞的群体。任选的多聚化试剂作为PGLYRP1的支架，并且可以是肽聚糖（PGN）、嗜中性粒细胞的细胞外陷阱（neutrophil extracellular traps, NETs）、透明质酸（hyaloronic acid）、蛋白聚糖结构（如多功能蛋白聚糖（versican）、聚集蛋白聚糖、核心蛋白聚糖或纤维蛋白），或能够多聚化或呈递PGLYRP1的任何其它天然存在的基质结构或分子。所述第一细胞可以通过与一种或多种在其表面或细胞内表达PGLYRP1的第二细胞一起孵育被活化。细胞内表达的实例可以是PGLYRP1在分泌颗粒中的储存。所述第二细胞可以因此是表达或转染有编码PGLYRP1的基因和在其表面表达PGLYRP1的任何细胞（或细胞群体）。该第二细胞可以是原核或真核细胞，例如哺乳动物细胞，例如CHO细胞、BHK细胞或HEK细胞。所述第二细胞还可以是活化的嗜中性粒细胞。嗜中性粒细胞可以从个体的全血或组织中获得，并大量（in bulk）或作为纯化的嗜中性粒细胞使用。模拟嗜中性粒细胞的细菌活化的任何试剂，例如来自细菌细胞壁的肽聚糖（PGN），例如PGN-SA、PGN-EB、PGN-EC、PGN-BS（InVivogen, tlrl-pgnsa,SanDiego,CA）可以用于活化嗜中性粒细胞。

然后检测并优选测量第一细胞或第一细胞的群体的活性。

第一细胞和一种或多种表达PGLYRP1的第二细胞的培养物和/或第一细胞与PGLYRP1孵育的培养物，以及任选地，多聚化试剂例如PGN，与已产生的针对PGLYRP1的抗体接触。检测并优选测量第一细胞或第一细胞的群体的活性。

以此方式，可以鉴定能够结合TREM-1的配体PGLYRP1和影响PGLYRP1与TREM-1相互作用的抗体。导致第一细胞的活性增加的PGLYRP1抗体增强PGLYRP1与TREM-1的相互作用并且在本文鉴定为“刺激性PGLYRP1抗体”。导致第一细胞的活性降低的PGLYRP1抗体降低、干扰或阻断PGLYRP1与TREM-1的相互作用并且在本文鉴定为“抑制性PGLYRP1抗体”。抑制性PGLYRP1抗体降低或阻断TREM-1活化和信号传导。

因此，本发明涉及表征PGLYRP1抗体功能的方法。能够特异性结合PGLYRP1并具有对TREM-1活化和下游信号传导的任何影响的抗体在本文中称为“功能性PGLYRP1抗体”。因此，术语“功能性PGLYRP1抗体”意在涵盖刺激性PGLYRP1抗体和抑制性PGLYRP1抗体。

此外，本发明涉及能够特异性结合PGLYRP1和降低、干扰或阻断其与TREM-1的相互作用，从而降低TREM-1活化和下游信号传导的抗体。本发明的抗体可以具有免疫调节功能，降低表达TREM-1的髓样细胞的细胞因子产生。例如，本发明的抗体可以降低或阻止TNF-α、IL-1β、IL-6、IFN-γ、MIP-1β、MCP-1、IL-8和/或GM-CSF从髓样细胞例如巨噬细胞和/或嗜中性粒细胞和/或患病组织例如滑膜组织中髓样细胞的释放。本发明的抗体可以能够下调嗜中性粒细胞应答。

根据本发明的PGLYRP1抗体可以通过直接或间接影响TREM-1的一种机制或几种不同机制的组合降低或阻断TREM-1活化。本发明的抗体可以阻止PGLYRP1产生与TREM-1的功能复合物。

本发明的抗体可以通过降低或阻断TREM-1活化和下游信号传导阻断PGLYRP1功能。

本发明还涉及可通过本文公开的方法之外的其它手段鉴定的抑制性PGLYRP1抗体。

本发明的抗体可以能够结合人PGLYRP1和来自人之外的物种的PGLYRP1。如本文所用术语“PGLYRP1”从而涵盖PGLYRP1的任何天然存在形式，其可以衍生自任何合适的生物，例如无脊椎动物物种或脊椎动物物种。如本文所述使用的PGLYRP1可以是脊椎动物PGLYRP1，例如哺乳动物PGLYRP1，例如来自灵长类（例如人、黑猩猩、食蟹猴或恒河猴）的PGLYRP1；啮齿动物（例如小鼠或大鼠），兔形目动物（如兔），或偶蹄动物（如牛、绵羊、猪或骆驼）等等。优选地，PGLYRP1是人PGLYRP1 (SEQ ID NO: 1)。PGLYRP1可以是PGLYRP1的成熟形式，例如在合适的细胞内已经经历翻译后加工的PGLYRP1蛋白。这样的成熟PGLYRP1蛋白可以例如是糖基化的。PGLYRP1可以是全长PGLYRP1蛋白。PGLYRP1可以是剪接变体。

本发明的抗体还可以能够特异性结合PGLYRP1的变体，例如SEQ ID NO: 37 (II型1.0 PGLYRP1)和/或SEQ ID NO: 38 (II型 1.0 PGLYRP1)。

本发明的抗体可以能够影响，例如抑制/降低/阻断人TREM-1和来自人以外的另一物种的TREM-1的活性（信号传导和/或活化）。如本文所用术语“TREM-1”从而涵盖TREM-1的任何天然存在形式，其可以衍生自任何合适的生物。例如，如本文所述使用的TREM-1可以是脊椎动物TREM-1，例如哺乳动物TREM-1，例如来自灵长类（例如人、黑猩猩、食蟹猴或恒河猴）的TREM-1；啮齿动物（例如小鼠或大鼠），兔形目动物（如兔），或偶蹄动物（如牛、绵羊、猪或骆驼）等等。优选地，所述TREM-1是人TREM-1。TREM-1可以是TREM-1的成熟形式，例如在合适的细胞内已经经历翻译后加工的TREM-1蛋白。这样的成熟TREM-1蛋白可以例如是糖基化的。TREM-1可以是全长TREM-1蛋白。TREM-1可以是剪接变体。

本文术语“抗体”指衍生自种系免疫球蛋白序列的蛋白，其能够特异性结合PGLYRP1或其部分。所述术语包括任何同种型（即，IgA、IgE、IgG、IgM和/或IgY）的全长抗体和任何单链或其片段。特异性结合PGLYRP1或其部分的抗体，可以排他性结合PGLYRP1或其部分，或其可以结合有限数目的同源性抗原或其部分。

本发明的抗体可以是单克隆抗体，在这个意义上，它们可以直接或间接地衍生自B淋巴细胞的单一克隆。本发明的抗体可以是单克隆抗体，前提是其不是188C424（ThermoScientific)、4H230或9A319 (US Biological)或克隆6D653(Santa CruzBiotechnology)。

本发明的抗体可以是分离的。术语“分离的抗体”指已从其天然环境的另一种/其它一种或多种组分中分离和/或回收，和/或从其天然环境中组分的混合物纯化的抗体。

抗体可以在原核细胞、真核细胞或衍生自细胞提取物的无细胞系统中重组表达。所述原核细胞可以是大肠杆菌。所述真核细胞可以是酵母、昆虫或哺乳动物细胞，例如衍生自下列生物的细胞：灵长类（例如人、黑猩猩、食蟹猴或恒河猴）、啮齿动物（例如小鼠或大鼠）、兔形目动物（如兔）或偶蹄动物（如牛、绵羊、猪或骆驼）。合适的哺乳动物细胞系包括但不限于HEK293细胞、CHO细胞和HELA细胞。PGLYRP1抗体还可以通过本领域技术人员已知的其它方法产生，例如噬菌体展示或酵母展示。本发明的抗体可以在体内通过用PGLYRP1、表达PGLYRP1的细胞或两者的组合免疫合适的哺乳动物产生。

可以使用例如实施例中描述的方法产生、筛选和纯化PGLYRP1抗体。简而言之，任何合适的小鼠，包括PGLYRP1敲除（KO）小鼠或TREM-1 KO小鼠都可以用PGLYRP1、表达PGLYRP1的细胞或两者的组合进行免疫。可以使用直接ELISA或FMAT进行杂交瘤上清液的初筛并且可以使用流式细胞术来进行复筛。可以随后筛选结合例如全长PGLYRP1的阳性杂交瘤上清液以及纯化的抗体。然后可以测试阳性杂交瘤上清液或纯化的抗体其降低或阻断TREM-1携带细胞的PGLYRP1刺激的能力。本发明的方法可以用于此目的。

本发明的全长抗体可以包含至少四条多肽链：即通过二硫键相互连接的两条重（H）链和两条轻（L）链。一个具有特定药物兴趣的免疫球蛋白亚类是IgG家族，其可以细分为同种型IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。IgG分子由通过两个或更多个二硫键相互连接的两条重链和各自通过二硫键连接到重链的两条轻链构成。重链可以包含重链可变区（VH）和至多三个重链恒定（CH）区：CH1、CH2和CH3。轻链可以包含轻链可变区（VL）和轻链恒定区（CL）。VH和VL区可以进一步细分为高变区，称为互补决定区（CDR），其间散布更保守的称为框架区（FR）的区域。VH和VL区通常由三个CDR和四个FR构成，以下列顺序从氨基端向羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的高变区形成能够与抗原（PGLYRP1）相互作用的[结合]结构域，而抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白对宿主组织或因子的结合，包括但不限于免疫系统的各种细胞（效应细胞）、Fc受体和经典补体系统的第一组分（Clq）。

抗原结合片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab)₂、F(ab')₂、F(ab)S、Fv(通常为抗体的单个臂的VL和VH结构域)、单链Fv(scFv；参见例如Bird 等, Science 1988；242:42S-426；和Huston 等 PNAS 1988；85:5879-5883)、dsFv、Fd (通常为VH和CHI结构域)以及dAb(通常为VH结构域)片段；VH、VL、VhH和V-NAR结构域；包含单个VH和单个VL链的单价分子；微型抗体、双链抗体、三链抗体、四链抗体和κ抗体（kappa bodies）(参见，例如Ill 等 Protein Eng1997;10:949-57)；骆驼IgG；IgNAR；以及一个或多个分离的CDR或功能互补位，其中分离的CDR或抗原结合残基或多肽可以结合或连接在一起，以便形成功能抗体片段。抗体片段的各种类型已描述于或综述于，例如Holliger和Hudson, Nat Biotechnol 2005;2S:1126-1136；WO2005040219和公开的美国专利申请20050238646和20020161201。

在本发明的背景下抗体的某些抗原结合片段可以是合适的，因为其已经显示，可以通过全长抗体的片段实现所述抗体的抗原结合功能。术语抗体的“抗原结合片段”指抗体的一个或多个片段，其保留特异性结合如本文所述的抗原例如人PGLYRP1或来自另一物种的PGLYRP1的能力。抗原结合片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab)₂、F(ab')₂、F(ab)S、Fv(通常为抗体的单个臂的VL和VH结构域)、单链Fv(scFv；参见例如Bird 等, Science 1988；242:42S-426；和 Huston 等 PNAS 1988；85:5879-5883)、dsFv、Fd (通常为VH和CHI结构域)以及dAb(通常为VH结构域)片段；VH、VL、VhH和V-NAR结构域；包含单个VH和单个VL链的单价分子；微型抗体、双链抗体、三链抗体、四链抗体和κ抗体（kappa bodies）(参见，例如Ill 等Protein Eng 1997;10:949-57)；骆驼IgG；IgNAR；以及一个或多个分离的CDR或功能互补位，其中分离的CDR或抗原结合残基或多肽可以结合或连接在一起，以便形成功能抗体片段。抗体片段的各种类型已描述于或综述于，例如Holliger和Hudson, Nat Biotechnol2005;2S:1126-1136；WO2005040219和公开的美国专利申请20050238646和20020161201。这些抗体片段可以使用本领域技术人员已知的常规技术获得，并且可以以与完整抗体相同的方式筛选该片段的效用。

本发明的抗体可以是人抗体或人源化的抗体。如本文所用术语“人抗体”意在包括具有可变区的抗体，其中至少框架区的一部分和/或至少CDR区的一部分衍生自人种系免疫球蛋白序列。（例如，人抗体可以具有可变区，其中框架区和CDR区均衍生自人种系免疫球蛋白序列）。此外，如果抗体包含恒定区，则该恒定区也衍生自人种系免疫球蛋白序列。本发明的人抗体可以包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基（例如通过随机或位点特异性诱变体外引入的突变或通过体细胞突变体内引入的突变）。

这样的人抗体可以是人单克隆抗体。这样的人单克隆抗体可以通过杂交瘤产生，其包括融合无限增殖化细胞的从具有包含人重链转基因和轻链转基因的基因组的转基因非人动物，例如转基因小鼠获得的B细胞。

可以从建立在人种系序列的选择上，进一步用天然和合成序列多样性进行多样化的序列文库中分离人抗体。

可以通过人淋巴细胞的体外免疫随后是用EB病毒进行淋巴细胞转化来制备人抗体。

术语“人抗体衍生物”指人抗体的任何修饰形式，例如抗体和另一试剂或另一抗体的缀合物。

如本文所用术语“人源化抗体”指包含衍生自非人免疫球蛋白的一种或多种序列（CDR区）的人/非人嵌合抗体。因此，人源化抗体是人免疫球蛋白（受体抗体），其中至少来自受体高变区的残基被来自非人物种的高变区（供体抗体）的残基取代，所述非人物种例如来自小鼠、大鼠、兔或具有所期望的特异性、亲和力和能力的非人灵长类动物。在一些情况下，人免疫球蛋白的FR残基被相应的非人残基取代。这样的修饰的实例是一个或多个所谓回复突变的引入。

此外，人源化抗体可包含在受体抗体或供体抗体中未发现的残基。进行这些修饰以进一步改进抗体的性能。通常，人源化抗体将包含至少一个——通常两个——可变结构域，其中所有或基本上所有CDR区对应非人免疫球蛋白的那些，并且其中所有或基本上所有的FR残基是人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗体可以任选地还包含至少一部分免疫球蛋白恒定区（Fc），通常是人免疫球蛋白的恒定区。

术语“人源化抗体衍生物”指人源化抗体的任何修饰形式，例如抗体和另一试剂或另一抗体的缀合物。

如本文所用术语“嵌合抗体”指其轻链和重链基因已从源自不同物种的免疫球蛋白可变和恒定区基因进行构建（通常通过遗传工程化）的抗体。例如，来自小鼠单克隆抗体的基因的可变区段可以连接到人恒定区段。

抗体的可结晶区片段（“Fc区”/“Fc结构域”)是抗体的N末端区域，其包含恒定CH2和CH3结构域。Fc结构域可以与称为 Fc受体的细胞表面受体以及补体系统的一些蛋白相互作用。 Fc区使抗体能够与免疫系统相互作用。在本发明的一个方面，抗体可以被工程化以在Fc区内包括修饰，通常改变一种或多种其功能特性，例如血清半衰期、补体结合、Fc-受体结合、蛋白稳定性和/或抗原依赖性细胞毒性、或其缺乏，等等。此外，本发明的抗体可以被化学修饰（例如，一种或多种化学基团可以连接到抗体）或被修饰以改变其糖基化，仍然为了改变抗体的一种或多种功能特性。优选地，修饰的Fc结构域包含一种或多种，并且可能所有下列突变，其将分别导致对某些Fc受体的亲和力下降（L234A、L235E和G237A）和C1q介导的补体结合降低（A330S和P331S）(残基编号根据EU索引)。

本发明的抗体的同种型可以是IgG，例如IgG1，例如IgG2，例如IgG4。如果需要，抗体的种类可以被已知技术“转换”。例如，最初作为IgM分子产生的抗体可以类别转换为IgG抗体。类别转换技术也可以用于将一种IgG亚类转换为另一种，例如，从IgG1到IgG2或IgG4；从IgG2到IgG1或IgG4；或从IgG4到IgG1或IgG2。还可以通过组合来自不同IgG亚类的区域进行抗体的工程化以产生恒定区嵌合分子。

在一个实施方案中，修饰CH1的铰链区使得铰链区中半胱氨酸残基的数目被改变，例如增加或降低。此方法例如在美国专利号5,677,425中由Bodmer等进一步描述。

可以进一步修饰恒定区以稳定抗体，例如以降低二价抗体分成两个单价VH-VL片段的风险。例如，在IgG4恒定区，可以突变残基S241成脯氨酸（P）残基以允许在铰链处完全的二硫键形成（参见，例如Angal 等, MolImmunol. 199S；30:105-8）。

抗体或其片段还可以根据它们的互补决定区（CDR）进行限定。当用于本文时，术语“互补决定区”或“高变区”指涉及抗原结合的氨基酸残基位于其中的抗体区域。所述CDR通常由轻链可变结构域中氨基酸残基24-34 (L1)、50-56 (L2)和89-97 (L3)以及重链可变结构域中31-35 (H1)、50-65 (H2)和95-102 (H3)构成；(Kabat 等 (1991) Sequences ofProteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Healthand Human Services, NIH Publication No. 91-3242) 和/或来自“高变环”的那些残基(轻链可变结构域中残基26-32 (L1)、50-52 (L2)和91-96 (L3)，以及重链可变结构域中26-32 (H1)、53-55 (H2)和96-101 (H3)；Chothia和Lesk, J. Mol. Biol 1987;196:901-917)构成。通常，此区域中氨基酸残基通过上文Kabat等中所述方法进行编号。短语例如“Kabat位置”、“Kabat残基”和“根据Kabat”本文指此编号系统用于重链可变结构域或轻链可变结构域。使用Kabat编号系统，肽的实际线性氨基酸序列可包含对应可变结构域的框架（FR）或CDR的缩短或插入的更少或额外的氨基酸。例如，重链可变结构域可以包括在CDR H2的残基52后的氨基酸插入（根据Kabat，残基52a、52b和52c）和在重链FR残基82之后插入的残基（例如，根据Kabat，残基82a、82b和82c等）。对于给定的抗体，残基的Kabat编号可以通过在抗体序列的同源性区域与“标准”Kabat编号的序列的比对来确定。

如本文所定义的术语“框架区”或“FR”残基指不在CDR内的那些VH或VL氨基酸残基。

本发明的抗体可以包含来自一种或多种本文公开的特异性抗体的CDR区，例如来自SEQ ID NO: 15、16、19、20、23、24、27、28、31、32、35或36内的CDR区。

1F36抗体具有如SEQ ID NO: 15所示的重链和如SEQ ID NO: 16所示的轻链。本发明的抗体可以包含此可变重链序列和/或此可变轻链序列。所述1F36抗体具有SEQ ID NO:15的氨基酸31至35、50至66和98至108和SEQ ID NO: 16的氨基酸24至34、51至56和89至97所示的CDR序列。本发明的抗体可以包含1、2、3、4、5或所有6个这些CDR序列。

根据本发明的抗体可以包含：对应SEQ ID NO: 15的氨基酸残基31至35（SYWMN）的CDRH1序列，其中这些氨基酸残基之一可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ IDNO: 15的氨基酸50至66（MIHPSDSETRLNQKFKD）的CDRH2序列，其中这些氨基酸的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 15的氨基酸残基98至108（DYSDYDGFAY]）的CDRH3序列，其中这些氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代。

根据本发明的抗体可以包含：对应SEQ ID NO: 16的氨基酸残基24至34（RASQSISDYLH）的CDRL1序列，其中这些氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO: 16的氨基酸残基51至56（ASQSIS）的CDRL2序列，其中这些氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO: 16的氨基酸残基89至97（QNGHSFPLT）的CDRL3序列，其中这些氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代。

1F10抗体具有如SEQ ID NO:19所示的重链和如SEQ ID NO:20所示的轻链。本发明的抗体可以包含此可变重链序列和/或此可变轻链序列。所述1F10抗体具有SEQ ID NO: 19的氨基酸31至35、50至66和99至109和SEQ ID NO: 20的氨基酸24至33、49至55和88至96所示的CDR序列。本发明的抗体可以包含1、2、3、4、5或所有6个这些CDR序列。

根据本发明的抗体可以包含：对应SEQ ID NO: 19的氨基酸残基31至35（DYNMY）的CDRH1序列，其中这些氨基酸残基之一可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ IDNO: 19的氨基酸50至66（YIDPYNGDTSYNQKFKG）的CDRH2序列，其中这些氨基酸的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 19的氨基酸残基99至109（GDYGNPFYLDY）的CDRH3序列，其中这些氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代。

根据本发明的抗体可以包含对应SEQ ID NO: 20的氨基酸残基24至33（SVSSSVNYMY）的CDRL1序列，其中这些氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO: 20的氨基酸残基49至55（DTSKLPS）的CDRL2序列，其中这些氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO: 20的氨基酸残基88至96（QQWTSNPPT）的CDRL3序列，其中这些氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代。

1F105抗体具有如SEQ ID NO: 23所示的重链和如SEQ ID NO: 24所示的轻链。本发明的抗体可以包含此可变重链序列和/或此可变轻链序列。所述1F105抗体具有SEQ IDNO: 23的氨基酸31至35、50至66和99至108和SEQ ID NO: 24的氨基酸24至33、49至55和88至96所示的CDR序列。本发明的抗体可以包含1、2、3、4、5或所有6个这些CDR序列。

根据本发明的抗体可以包含：对应SEQ ID NO: 23的氨基酸残基31至35（DTYIH）的CDRH1序列，其中这些氨基酸残基之一可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ IDNO: 23的氨基酸50至66（RIDPANDDTKYDPNFQG）的CDRH2序列，其中这些氨基酸的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 23的氨基酸残基99至108（SDNSDSWFAY）的CDRH3序列，其中这些氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代。

根据本发明的抗体可以包含：对应SEQ ID NO: 24的氨基酸残基24至33（SVSSSVNFMN）的CDRL1序列，其中这些氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO: 24的氨基酸残基49至55（DTSKLAP）的CDRL2序列，其中这些氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO: 24的氨基酸残基88至96（HQWSSYSLT）的CDRL3序列，其中这些氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代。

1F95抗体具有如SEQ ID NO: 27所示的重链和如SEQ ID NO: 28所示的轻链。本发明的抗体可以包含此可变重链序列和/或此可变轻链序列。所述1F95抗体具有SEQ ID NO:27的氨基酸31至35、50至66和99至106和SEQ ID NO: 28的氨基酸24至33、49至54和87至95所示的CDR序列。本发明的抗体可以包含1、2、3、4、5或所有6个这些CDR序列。

根据本发明的抗体可以包含：对应SEQ ID NO: 27的氨基酸残基31至35（DYNMH）的CDRH1序列，其中这些氨基酸残基之一可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ IDNO: 27的氨基酸50至66（YVDPYDGGTSSNQKFKG）的CDRH2序列，其中这些氨基酸的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 27的氨基酸残基99至106（EVPYYFDY）的CDRH3序列，其中这些氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代。

根据本发明的抗体可以包含：对应SEQ ID NO: 28的氨基酸残基24至33（VASSSVTYMY）的CDRL1序列，其中这些氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO: 28的氨基酸残基49至54（THPLAS）的CDRL2序列，其中这些氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO: 28的氨基酸残基87至95（PHWNTNPPT）的CDRL3序列，其中这些氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代。

2F5抗体具有如SEQ ID NO: 31所示的重链和如SEQ ID NO: 32所示的轻链。本发明的抗体可以包含此可变重链序列和/或此可变轻链序列。所述2F5抗体具有SEQ ID NO:31的氨基酸35至31、50至66和99至109和SEQ ID NO: 32的氨基酸24至33、49至55和88至96所示的CDR序列。本发明的抗体可以包含1、2、3、4、5或所有6个这些CDR序列。

根据本发明的抗体可以包含：对应SEQ ID NO: 31的氨基酸残基31至35（DYYMY）的CDRH1序列，其中这些氨基酸残基之一可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ IDNO: 31的氨基酸50至66（AISDDSTYTYYPDSVKG）的CDRH2序列，其中这些氨基酸的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 31的氨基酸残基99至109（GGYGNLYAMDY）的CDRH3序列，其中这些氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代。

根据本发明的抗体可以包含：对应SEQ ID NO: 32的氨基酸残基24至35（TASSSVSSSYLH）的CDRL1序列，其中这些氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO: 32的氨基酸残基51至57（STSNLAS）的CDRL2序列，其中这些氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO: 32的氨基酸残基90至98（HQYHRSPFT）的CDRL3序列，其中这些氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代。

2F7抗体具有如SEQ ID NO: 35所示的重链和如SEQ ID NO: 36所示的轻链。本发明的抗体可以包含此可变重链序列和/或此可变轻链序列。所述2F5抗体具有SEQ ID NO:35的氨基酸31至35、50至66和99至109和SEQ ID NO: 36的氨基酸24至34、50至56和89至96所示的CDR序列。本发明的抗体可以包含1、2、3、4、5或所有6个这些CDR序列。

根据本发明的抗体可以包含：对应SEQ ID NO: 35的氨基酸残基31至35（NYVMH）的CDRH1序列，其中这些氨基酸残基之一可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ IDNO: 35的氨基酸50至66（WINPFNDGTNYNENFKN）的CDRH2序列，其中这些氨基酸的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 35的氨基酸残基99至109（SGFITTLIEDY）的CDRH3序列，其中这些氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代。

根据本发明的抗体可以包含：对应SEQ ID NO: 36的氨基酸残基24至34（KASESVGSFVS）的CDRL1序列，其中这些氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO: 36的氨基酸残基50至56（GASNRYT）的CDRL2序列，其中这些氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO: 36的氨基酸残基89至96（GQYYTHPT）的CDRL3序列，其中这些氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代。

术语“抗原”（Ag）指用于免疫具有免疫能力的脊椎动物以产生识别Ag的抗体（Ab）的分子实体。本文中，Ag更广泛地定义并且通常意在包括被Ab特异性识别的目标分子，从而包括在免疫方法或用于生成Ab的其它方法如噬菌体展示中使用的分子的片段或模拟物。

如本文所用术语“表位”在“抗原结合多肽”例如抗体（Ab），与其相应抗原（Ag）之间的分子相互作用的背景下进行定义。通常，“表位”指Ab特异性结合到的Ag上的面积或区域，即与Ab物理接触的面积或区域。可以使用各种标准（例如，2-6 Å的距离截止值，例如3 Å，例如4 Å，例如5 Å；或溶剂可及性）对于Ab和Ag分子中的原子定义物理接触。蛋白表位可以包含Ag中结合Ab直接参与的氨基酸残基（也称为表位的免疫显性成分）和不直接参与结合的其它氨基酸残基，例如被Ab有效封闭的Ag的氨基酸残基，即在Ab的“溶剂排除表面”和/或“足迹”内的氨基酸残基。

本文术语表位包含特异性结合PGLYRP1抗体的PGLYRP1的任何特定区域中两种类型的结合区域。PGLYRP1可以包含许多不同表位，其可以包括但不限于构象表位（其由成熟PGLYRP1构象中位置彼此接近的一个或多个非邻接氨基酸组成），和翻译后表位（其整体或部分由共价连接PGLYRP1的分子结构，例如碳水化合物基团组成）。PGLYRP1还可以包含线性表位。

对于给定抗体（Ab）/抗原（Ag）对的表位可以使用多种实验性的和计算的表位作图方法在不同的细节层次上进行描述和表征。所述实验性方法包括诱变、X射线晶体学、核磁共振（NMR）光谱、氢氘交换质谱（HX-MS）和各种竞争结合的方法；这是本领域已知的方法。由于每个方法依赖于独特的原理，所以表位的描述与确定其的方法密切相关。因此，取决于所采用的表位作图的方法，对于给定的Ab/Ag对的表位可以不同地描述。

在其最详细的水平上，用于Ag和Ab之间的相互作用的表位可以通过限定Ag-Ab相互作用中存在的原子接触的空间坐标，以及关于它们对结合热力学的相对贡献的信息来描述。在更不详细的水平上，该表位可以通过限定Ag和Ab之间的原子接触的空间坐标来表征。在甚至更不详细的水平上，表位可以通过氨基酸残基表征，所述氨基酸残基包括由特定标准所定义的氨基酸残基，诸如Ab:Ag复合物中原子之间的距离或溶剂可及性。在进一步更不详细的水平上，表位可以通过功能，例如通过竞争结合其它Ab来表征。该表位也可以更一般地定义为包括这样的氨基酸残基，其被另一种氨基酸的取代将改变Ab和Ag之间的相互作用的特征。

在由Ab如Fab片段与其Ag之间的复合物的空间坐标限定的X射线衍生的晶体结构的背景下，术语表位在本文中，除非另有说明或根据上下文矛盾，明确限定为PGLYRP1残基，其特征在于距离Ab中的重原子（即，非氢原子），例如2-6 Å，例如3 Å，例如4 Å，例如5 Å内具有重原子。

根据表位的描述和定义取决于所使用的表位作图方法在不同细节水平获得的事实，可以得出，对于相同Ag上的不同Ab的表位的比较可以类似地在不同的细节水平上进行。

在氨基酸水平描述的表位，例如根据X射线结构确定，如果它们包含同一组氨基酸残基，则认为是相同的。如果至少一个氨基酸被多个表位共有，则认为表位是重叠的。如果没有氨基酸残基被多个表位共有，则认为表位是分开的（独特的）。

术语“互补位”的定义通过反转角度(reversing the perspective)衍生自“表位”的上述定义。因此，术语“互补位”指Ab上的Ag特异性结合的面积或区域，即Ab用其与Ag进行物理接触。

在由Ab如Fab片段与其Ag之间的复合物的空间坐标限定的X射线衍生的晶体结构的背景下，术语互补位在本文中，除非另有说明或根据上下文矛盾，明确限定为Ag残基，其特征在于距离PGLYRP1中的重原子（即，非氢原子）4 Å内具有重原子。

对于给定抗体（Ab）/抗原（Ag）对的表位和互补位可以通过常规方法鉴定。例如，表位的通常定位可以通过评价抗体结合不同片段或变体PGLYRP1多肽的能力来确定。PGLYRP1内与抗体接触的特定氨基酸（表位）和抗体内与PGLYRP1接触的特定氨基酸（互补位）也可以使用常规方法确定。例如，可以组合抗体和目标分子，并且可以结晶Ab：Ag复合物。可以确定复合物的晶体结构并用于鉴定抗体和其目标之间的相互作用的特异性位点。

结合相同抗原的抗体可以关于它们同时结合它们共同的抗原的能力进行表征，并且可以进行“竞争性结合”/“框并”（binning）。在本上下文中，术语“框并”指对结合相同抗原的抗体分组的方法。抗体的“框并”可以基于两种抗体对它们共同的抗原的竞争性结合，在基于标准技术例如表面等离子共振（SPR）、ELISA或流式细胞术的测定中。

抗体的“框(bin)”使用参考抗体进行限定。如果第二抗体不能与参考抗体同时结合抗原，则所述第二抗体被认为属于与参考抗体相同的“框”。在此情况下，参考抗体和第二抗体竞争性结合抗原的相同部分并且共同称为（coined）“竞争性抗体”。如果第二抗体能够与参考抗体同时结合抗原，则所述第二抗体被认为属于分开的“框”。在此情况下，参考抗体和第二抗体不竞争性结合抗原的相同部分并且共同称为“非竞争性抗体”。

抗体“框并”不提供关于表位的直接信息。竞争抗体，即属于相同“框”的抗体，可以具有相同的表位、重叠的表位或甚至分开的表位。后者是这样的情况，即结合抗原上其表位的参考抗体是否占据了第二抗体接触抗原上其表位所需的空间（“空间位阻”）。非竞争性抗体通常具有分开的表位。

根据本发明的抗体可以能够与1F10竞争结合PGLYRP1。根据本发明的抗体可以能够与1F36/mAb 0182竞争结合PGLYRP1。根据本发明的抗体可以能够与1F95竞争结合PGLYRP1。根据本发明的抗体可以能够与1F105/mAb 0184竞争结合PGLYRP1。根据本发明的抗体可以能够与2F5竞争结合PGLYRP1。根据本发明的抗体可以能够与2F7竞争结合PGLYRP1。因此，根据本发明的抗体可以属于与这些抗体的任何一种或多种相同的框。

本文术语“结合亲和力”指两个分子，例如抗体，或其片段，和抗原之间非共价相互作用的强度的测量。术语“结合亲和力”用于描述单价相互作用（内在活性）。

两个分子，例如抗体或其片段和抗原之间通过单价相互作用的结合亲和力可以通过确定平衡解离常数（K_D）来定量。接下来，K_D可以通过测量复合物形成和解离的动力学来确定，例如通过SPR法。单价复合物的结合和解离相应的速率常数分别称作结合速率常数k_a(或k_on)和解离速率常数k_d (或k_off)。K_D通过公式K_D = k_d / k_a与k_a和k_d相关。

按照上述定义，与不同分子相互作用相关的结合亲和力，例如不同抗体对于给定抗原的结合亲和力的比较，可以通过比较单个抗体/抗原复合物的K_D值进行比较。

本发明的PGLYRP1抗体对于其目标（PGLYRP1）可以具有1 x 10^-6M或更低，1 x 10^-7 M或更低，1 x 10^-8 M或更低，或1 x 10^-9 M或更低，或1 x 10^-10 M或更低，1 x 10^-11 M或更低，1 x 10^-12 M或更低或1 x 10^-13 M或更低的K_D。

根据本发明的抗体可以能够与另一分子，例如天然存在的配体或受体或另一种抗体竞争结合PGLYRP1。因此，根据本发明的抗体可以能够结合PGLYRP1，具有比也能够结合PGLYRP1的另一分子更高的亲和力。抗体与天然配体/受体竞争结合抗原的能力可以通过确定和比较目的相互作用的K_D值和非目的相互作用的K_D值来评估，所述目的相互作用例如抗体和抗原之间的特异性相互作用。

本文术语“结合特异性”指分子例如抗体或其片段与单个专属抗原，或与有限数目的高度同源性抗原（或表位）的相互作用。能够特异性结合PGLYRP1的抗体不能结合不相似的分子。根据本发明的抗体可以不能结合PGLYRP家族成员，例如PGLYRP2、PGLYRP3和PGLYRP4。根据本发明的抗体可以不能结合人PGLYRP家族成员，例如人PGLYRP2、人PGLYRP3和人PGLYRP4。

相互作用的特异性和平衡结合常数的值可以通过熟知的方法直接确定。评价配体（例如抗体）结合它们的目标的能力的标准测定法是本领域已知的，并且包括，例如ELISA、蛋白质印迹、RIA和流式细胞术分析。抗体的结合动力学和结合亲和力也可以通过本领域已知的标准测定，例如SPR来评价。

可以进行竞争性结合测定，其中抗体对目标的结合与该目标的另一配体（例如另一抗体）对目标的结合进行比较。

在另一方面，本发明提供了包含本发明的分子，例如本文所述PGLYRP1抗体、多核苷酸、载体和细胞的组合物和制剂。例如，本发明提供了与药学上可接受的载体一起配制的包含一种或多种本发明的PGLYRP1抗体的药物组合物。

因此，本发明的一个目标是提供包含这样的PGLYRP1抗体的药物制剂，所述抗体以0.25 mg/ml至250 mg/ml的浓度存在，并且其中所述制剂具有2.0至10.0的pH。所述制剂可以进一步包含一种或多种缓冲系统、防腐剂、张力剂、螯合剂、稳定剂或表面活性剂，以及它们的各种组合。防腐剂、等渗剂、螯合剂、稳定剂和表面活性剂在药物组合物中的用途是本领域技术人员熟知的。可以参考Remington: The Science and Practice of Pharmacy,19^th edition, 1995。

在一个实施方案中，所述药物制剂是含水制剂。该制剂通常是溶液或悬浮液，但是还可以包括胶体、分散液、乳状液和多相材料。术语“含水制剂”定义为包含至少50%w/w水的制剂。类似地，术语“水溶液”定义为包含至少50%w/w水的溶液，并且术语“水悬浮液”定义为包含至少50%w/w水的悬浮液。

在另一实施方案中，所述药物制剂是冻干的制剂，在使用前医师或患者向其中添加溶剂和/或稀释剂。

在进一步的方面，所述药物制剂包含这样的抗体的水溶液，和缓冲液，其中所述抗体以1mg/ml或以上的浓度存在，并且其中所述制剂具有约2.0至约10.0的pH。

本发明的PGLYRP1抗体和包括这样的抗体的药物组合物可用于炎性疾病的治疗，例如下列炎性疾病：炎性肠病（IBD）、克罗恩病（CD）、溃疡性结肠炎（UC）、肠易激综合征、类风湿关节炎（RA）、银屑病、银屑病关节炎、系统性红斑狼疮（SLE）、狼疮性肾炎、I型糖尿病、格雷夫斯氏病、多发性硬化（MS）、自身免疫性心肌炎、川崎病、冠状动脉疾病、慢性阻塞性肺疾病、间质性肺疾病、自身免疫性甲状腺炎、硬皮病、系统性硬化症、骨关节炎、特应性皮炎、白癜风、移植物抗宿主病、Sjogrens综合征、自身免疫性肾炎、Goodpasture综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、过敏症、哮喘和急性或慢性炎症导致的其它自身免疫性疾病。本发明的PGLYRP1抗体和包含这些抗体的药物组合物可以用于心血管疾病、中风、缺血再灌注损伤、肺炎、败血病和癌症的治疗。

本发明的PGLYRP1抗体适合在患有炎性肠病的个体的治疗中使用。炎性肠病（IBD）是可影响从口腔到肛门的胃肠道任何部分，引起多种症状的疾病。IBD主要引起腹痛、腹泻（可能带血）、呕吐或体重下降，但也可能引起胃肠道外的并发症如皮疹、关节炎、眼的炎症、疲劳和注意力不集中。患有IBD的患者可以分成两大类，患有溃疡性结肠炎（UC）的那些和患有克罗恩病（CD）的那些。虽然CD通常涉及回肠和结肠，其可以影响肠中的任何区域，但往往是不连续的（疾病的集中区域散布到整个肠），UC总是涉及直肠（结肠），并且更连续。在CD中，炎症是透壁的，导致脓肿、瘘和狭窄，而在UC中，炎症通常局限于粘膜。对于克罗恩病没有已知的药物或手术治疗，而一些患有UC的患者可以通过手术移除结肠治愈。治疗选择限于控制症状、维持缓解和预防复发。炎性肠病在临床的效力可以测量为对于CD的克罗恩病活动指数（CDAI）评分的降低，其是基于实验室测试和生活质量问卷的评分量表。在动物模型中，效力主要通过体重增加，并且还通过疾病活动指数（DAI）的增加来测量，所述疾病活动指数是大便稠度、体重和血便的组合。

本发明的PGLYRP1抗体适合在患有类风湿关节炎的个体的治疗中使用。类风湿关节炎（RA）是全身性疾病，其影响几乎身体的所有部分（如果不是全部），并且是关节炎的最常见形式之一。其特征在于关节的炎症应答，其导致疼痛、僵硬、发热、发红和肿胀。这种炎症是炎症细胞侵入关节的结果，并且这些炎性细胞释放的酶可以消化骨和软骨。结果是，这种炎症除其他生理效应之外还可以导致严重的骨和软骨损伤和关节退化和重度疼痛。所涉及的关节可能会失去它的形状和取向，导致疼痛和运动丧失。

本领域已知有几种动物模型用于类风湿性关节炎。例如，在胶原诱导的关节炎（CIA）模型中，小鼠发生类似于人类风湿关节炎的炎性关节炎。由于CIA与RA共有类似的免疫学和病理学特征，这使得其成为合适的模型用于筛选潜在的人抗炎化合物。此模型中的效力通过关节肿胀降低来测量。RA在临床中的效力通过降低患者中症状的能力测量，其作为关节肿胀、红细胞沉降率、C-反应蛋白水平和血清因子如抗瓜氨酸化蛋白抗体的水平的组合进行测量。

本发明的PGLYRP1抗体适合在患有银屑病的个体的治疗中使用。银屑病是可造成相当大的不适感的T细胞介导的皮肤的炎性病症。它是这样的疾病，对于其目前还没有治愈方法，并影响所有年龄的人。虽然患有轻度银屑病的个体往往可以用外用制剂控制他们的疾病，但全世界一百多万患者需要紫外线照射治疗或全身性免疫抑制治疗。不幸的是，紫外线辐射的不便和风险以及很多疗法的毒性限制了其长期使用。另外，患者通常具有银屑病复发，并在某些情况下，停止免疫抑制治疗后不久就反弹。最近开发的基于CD4+ T细胞转移的银屑病模型模拟人银屑病的很多方面，并且因此可以用于鉴定适合在银屑病的治疗中使用的化合物（Davenport等, Internat. Immunopharmacol 2: 653-672, 2002）。此模型的效力使用评分系统通过皮肤病理学的降低进行测量。同样，患者中的效力通过皮肤病理学降低进行测量。

本发明的PGLYRP1抗体适合在患有银屑病关节炎的个体的治疗中使用。银屑病关节炎（PA）是一种发生在银屑病患者的亚群中的炎性关节炎。在这些患者中，皮肤病理学/症状伴有关节肿胀，类似于类风湿性关节炎中见到的那些。其特征在于具有起鳞(scaling)的皮肤炎症的斑片状、隆起、红色区域。银屑病经常影响肘部和膝盖的顶端、头皮、肚脐和生殖器区域周围或肛门。大约10％的患有银屑病的患者也发生他们的关节相关的炎症。

如本文所用的术语“治疗”，指有需要的任何人或其它动物对象的医学治疗。所述对象预计由医生或兽医医生进行体检，其已给予暂定的或明确的诊断，其将表明，使用所述治疗有益于所述人或其它动物对象的健康。根据许多因素，如对象的健康的现状，所述治疗的时机和目的可以从一个个体到另一个进行变化。因此，所述治疗可以是预防性的、姑息性的、针对症状性的和/或治疗性的。

在本发明中，预防性的、姑息性的、针对症状性的和/或治疗性的治疗可以代表本发明的单独的方面。

本发明的抗体可被胃肠外施用，如静脉内，如肌内，如皮下。可选地，本发明的抗体可以通过非肠胃外途径施用，如口服或局部施用。本发明的抗体可被预防性施用。本发明的抗体可以治疗性施用（按需）。

示例性实施方案

1. 细胞，其表达TREM-1、TREM-1的信号传导蛋白和被所述信号传导蛋白活化的报道基因构建体。

2. 根据实施方案1的细胞，其中所述细胞是造血来源的。

3. 根据实施方案2的细胞，其中所述细胞是髓样细胞。

4. 根据实施方案2的细胞，其中所述细胞是T细胞。

5. 根据实施方案1-4任一项的细胞，其中所述信号传导蛋白是DAP10。

6. 根据实施方案1-4任一项的细胞，其中所述信号传导蛋白是DAP12。

7. 根据实施方案1-4任一项的细胞，其中所述信号传导蛋白是TCRζ。

8. 根据实施方案1-4任一项的细胞，其中所述信号传导蛋白是Fc γRIII。

9. 根据实施方案1-4任一项的细胞，其中所述信号传导蛋白是Fc受体。

10. 根据实施方案1-9任一项的细胞，其中所述报道基因构建体包含转录因子和报道基因。

11. 根据实施方案10的细胞，其中所述转录因子是NFAT。

12. 根据实施方案11的细胞，其中所述转录因子是NFkB。

13. 根据实施方案10-12任一项的细胞，其中所述报道基因编码β-半乳糖苷酶。

14. 根据实施方案10-12任一项的细胞，其中所述报道基因编码荧光素酶。

15. 根据实施方案10-12任一项的细胞，其中所述报道基因编码绿色荧光蛋白（GFP）。

16. 根据实施方案10-12任一项的细胞，其中所述报道基因编码氯霉素转移酶。

17. 根据实施方案1-4、6、10-11和13任一项的细胞，其是BWZ.36/hTREM-1:DAP12:NFAT-LacZ T-细胞。

18. 刺激根据实施方案1-17任一项的细胞的方法，其包括使所述细胞与PGLYRP1接触。

19. 刺激根据实施方案1-17任一项的细胞的方法，其包括使所述细胞与PGLYRP1和PGN接触。

20. 根据实施方案18-19任一项的方法，其中所述PGLYRP1由细胞表达。

21. 根据实施方案20的方法，其中表达PGLYRP1的细胞是原核细胞。

22. 根据实施方案20的方法，其中表达PGLYRP1的细胞是真核细胞。

23. 根据实施方案22的方法，其中表达PGLYRP1的细胞是哺乳动物细胞。

24. 根据实施方案23的方法，其中表达PGLYRP1的细胞是活化的嗜中性粒细胞。

25. 根据实施方案23的方法，其中表达PGLYRP1的细胞是HEK细胞。

26. 鉴定TREM-1配体的方法，其包括：（a）培养根据实施方案1-18任一项的细胞；（b）当它与细胞、流体例如生物流体或组织接触时（其触发TREM-1的活化），对所述表达TREM-1的细胞的活性进行检测，优选定量；（c）使（b）的培养物与TREM-1蛋白接触；（d）分离结合TREM-1的组分以及（e）表征所分离的组分。

27. 鉴定特异性结合PGLYRP1并且修饰TREM-1介导的细胞活性的分子的方法，其包括：（a）根据实施方案1-18中任一项培养细胞；（b）当它与PGLYRP1和任选地，多聚化试剂如PGN接触时，对表达TREM-1的所述细胞的活性进行检测，优选定量；（c）将（b）的培养物与特异性结合PGLYRP1的分子接触；和（d）检测，优选定量表达TREM-1的所述细胞的活性小于或大于如（b）中测量的它的活性。

28. 鉴定修饰TREM-1介导的细胞活性的PGLYRP1抗体或其片段的方法，其包括：（a）根据实施方案1-18中任一项培养细胞；（b）当它与PGLYRP1和任选地，多聚化试剂如PGN接触时，对表达TREM-1的所述细胞的活性进行检测，优选定量；（c）将（b）的培养物与结合PGLYRP1的抗体接触；和（d）检测，优选定量表达TREM-1的所述细胞的活性小于或大于如（b）中测量的它的活性。

29. 根据实施方案27的方法，其中所述PGLYRP1抗体或其片段降低TREM-1介导的细胞活性，并且其中所述第一细胞在（d）中测量时的活性低于其在（b）中测量时的活性。

30. 根据实施方案27的方法，其中所述PGLYRP1抗体或其片段增加TREM-1介导的细胞活性，并且其中所述第一细胞在（d）中测量时的活性多于其在（b）中测量时的活性。

31. PGLYRP1抗体或其片段，其通过根据实施方案28-30任一项的方法鉴定。

32. PGLYRP1抗体或其片段，其能够特异性结合PGLYRP1并降低PGLYRP1介导的TREM-1活性。

33. 根据实施方案31-32任一项的抗体或其片段，其能够降低从表达TREM-1的细胞中一种或多种细胞因子的释放。

34. 根据实施方案31-33任一项的抗体或其片段，其是单克隆抗体。

35. 根据实施方案31-34任一项的抗体或其片段，其是人源化抗体。

36. 根据实施方案31-34任一项的抗体或其片段，其是人抗体。

37. 根据实施方案31-34任一项的抗体或其片段，其是嵌合抗体。

38. 根据实施方案31-37任一项的抗体，其中所述抗体的同种型是IgG。

39. 根据实施方案38的抗体，其中所述同种型是IgG1、IgG2或IgG4。

40. 根据实施方案37的抗体，其中所述抗体的同种型是IgG1。

41. 根据实施方案37的抗体，其中所述抗体的同种型是IgG4。

42. 根据实施方案31-41任一项的抗体或其片段，其能够与抗体1F10竞争结合PGLYRP1。

43. 根据实施方案31-41任一项的抗体或其片段，其能够与抗体1F36/mAb 0182竞争结合PGLYRP1。

44. 根据实施方案31-41任一项的抗体或其片段，其能够与抗体1F95竞争结合PGLYRP1。

45. 根据实施方案31-41任一项的抗体，其能够与抗体1F105/mAb 0184竞争结合PGLYRP1。

46. 根据实施方案31-41任一项的抗体，其能够与抗体2F5竞争结合PGLYRP1。

47. 根据实施方案31-41任一项的抗体，其能够与抗体2F7竞争结合PGLYRP1。

48. 根据实施方案31-47任一项的抗体或其片段，其能够特异性结合SEQ ID NO:37 (II型 1.0 PGLYRP1)和/或SEQ ID NO: 38 (II型 2.0 PGLYRP1)。

49. 根据实施方案31-48任一项的抗体或其片段，当使用表面等离子共振测量时，其对于其目标具有1 x 10^-6M或更低，1 x 10^-7 M或更低，1 x 10^-8 M或更低，或1 x 10^-9 M或更低，或1 x 10^-10 M或更低，1 x 10^-11 M或更低，1 x 10^-12 M或更低或1 x 10^-13 M或更低的K_D。

50. 根据实施方案31-49任一项的抗体，其重链包含：对应SEQ ID NO: 15的氨基酸残基31至35（SYWMN）的CDRH1序列，其中所述氨基酸残基之一可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 15的氨基酸50至66（MIHPSDSETRLNQKFKD）的CDRH2序列，其中所述氨基酸的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 15的氨基酸残基98至108（DYSDYDGFAY]）的CDRH3序列，其中所述氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代。

51. 根据实施方案31-49任一项的抗体，其重链包含：对应SEQ ID NO: 19的氨基酸残基31至35（DYNMY）的CDRH1序列，其中所述氨基酸残基之一可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 19的氨基酸50至66（YIDPYNGDTSYNQKFKG）的CDRH2序列，其中所述氨基酸的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 19的氨基酸残基99至109（GDYGNPFYLDY）的CDRH3序列，其中所述氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代。

52. 根据实施方案31-49任一项的抗体，其重链包含：对应SEQ ID NO: 23的氨基酸残基31至35（DTYIH）的CDRH1序列，其中所述氨基酸残基之一可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 23的氨基酸50至66（RIDPANDDTKYDPNFQG）的CDRH2序列，其中所述氨基酸的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 23的氨基酸残基99至108（SDNSDSWFAY）的CDRH3序列，其中所述氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代。

53. 根据实施方案31-49任一项的抗体，其重链包含：对应SEQ ID NO: 27的氨基酸残基31至35（DYNMH）的CDRH1序列，其中所述氨基酸残基之一可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 27的氨基酸50至66（YVDPYDGGTSSNQKFKG）的CDRH2序列，其中所述氨基酸的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 27的氨基酸残基99至106（EVPYYFDY）的CDRH3序列，其中所述氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代。

54. 根据实施方案31-49任一项的抗体，其重链包含：对应SEQ ID NO: 31的氨基酸残基31至35（DYYMY）的CDRH1序列，其中这些氨基酸残基之一可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 31的氨基酸50至66（AISDDSTYTYYPDSVKG）的CDRH2序列，其中这些氨基酸的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 31的氨基酸残基99至109（GGYGNLYAMDY）的CDRH3序列，其中这些氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代。

55. 根据实施方案31-49任一项的抗体，其重链包含：对应SEQ ID NO: 35的氨基酸残基31至35（NYVMH）的CDRH1序列，其中这些氨基酸残基之一可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 35的氨基酸50至66（WINPFNDGTNYNENFKN）的CDRH2序列，其中这些氨基酸的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 35的氨基酸残基99至109（SGFITTLIEDY）的CDRH3序列，其中这些氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代。

56. 根据实施方案50-55任一项的抗体，其轻链包含：对应SEQ ID NO: 16的氨基酸残基24至34（RASQSISDYLH）的CDRL1序列，其中所述氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO: 16的氨基酸残基51至56（ASQSIS）的CDRL2序列，其中所述氨基酸的一个或两个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO: 16的氨基酸残基89至97（QNGHSFPLT）的CDRL3序列，其中所述氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代。

57. 根据实施方案50-55任一项的抗体，其轻链包含：对应SEQ ID NO: 20的氨基酸残基24至33（SVSSSVNYMY）的CDRL1序列，其中所述氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO: 20的氨基酸残基49至55（DTSKLPS）的CDRL2序列，其中所述氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO:20的氨基酸残基88至96（QQWTSNPPT）的CDRL3序列，其中所述氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代。

58. 根据实施方案50-55任一项的抗体，其轻链包含：对应SEQ ID NO: 24的氨基酸残基24至33（SVSSSVNFMN）的CDRL1序列，其中所述氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO: 24的氨基酸残基49至55（DTSKLAP）的CDRL2序列，其中所述氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO:24的氨基酸残基88至96（HQWSSYSLT）的CDRL3序列，其中所述氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代。

59. 根据实施方案50-55任一项的抗体，其轻链包含：对应SEQ ID NO: 28的氨基酸残基24至33（VASSSVTYMY）的CDRL1序列，其中所述氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸残基取代；和/或对应SEQ ID NO: 28的氨基酸残基49至54（THPLAS）的CDRL2序列，其中所述氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO:28的氨基酸残基87至95（PHWNTNPPT）的CDRL3序列，其中所述氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代。

60. 根据实施方案50-55任一项的抗体，其轻链包含：对应SEQ ID NO: 32的氨基酸残基24至35（TASSSVSSSYLH）的CDRL1序列，其中这些氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO: 32的氨基酸残基51至57（STSNLAS）的CDRL2序列，其中这些氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO:32的氨基酸残基90至98（HQYHRSPFT）的CDRL3序列，其中这些氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代。

61. 根据实施方案50-55任一项的抗体，其轻链包含：对应SEQ ID NO: 36的氨基酸残基24至34（KASESVGSFVS）的CDRL1序列，其中这些氨基酸残基的一个、两个或三个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO: 36的氨基酸残基50至56（GASNRYT）的CDRL2序列，其中这些氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代；和/或对应SEQ ID NO:36的氨基酸残基89至96（GQYYTHPT）的CDRL3序列，其中这些氨基酸残基的一个或两个可以被不同的氨基酸取代。

62. 根据实施方案31-61任一项的抗体，其用作药物。

63. 根据实施方案31-62任一项的抗体，其用于治疗炎性疾病。

64. 抗体，其能够特异性结合PGLYRP1并降低PGLYRP1介导的TREM-1活性，所述抗体用作药物。

65. 抗体，其能够特异性结合PGLYRP1并降低PGLYRP1介导的TREM-1活性，所述抗体用于治疗炎性疾病。

66. 根据实施方案62-65任一项的用途，其中所述炎性疾病是自身免疫性疾病。

67. 根据实施方案66的用途，其中所述自身免疫性疾病是类风湿关节炎（RA）。

68. 根据实施方案66的用途，其中所述自身免疫性疾病是炎性肠病（IBD）和/或溃疡性结肠炎。

69. 根据实施方案66的用途，其中所述自身免疫性疾病是银屑病关节炎（PA）。

70. 实施方案62或64在心血管疾病、中风、缺血再灌注损伤、败血症和/或癌症治疗中的用途。

本发明进一步通过下列实施例阐明，其不应理解为进一步的限制。本申请中引用的所有附图和所有参考文献、专利和公开的专利申请的内容明确地通过引用并入本文。

具体实施方式

实施例

实施例1：BWZ.36 人TREM-1:DAP12稳定细胞系的生成

BWZ.36/hTREM-1:DAP12:NFAT-LacZ 细胞系(本文也称为“BWZ/hTREM-1 报道基因细胞”)衍生自BW5147 T细胞(小家鼠（Mus musculus）胸腺淋巴瘤细胞系，ATCC TIB-47,LGC Standards, Middelsex, UK)并包含由NFAT启动子元件的四个拷贝调控的LacZ报道基因构建体（参见Karttunen, J. & Shastri, N. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA88, 3972-3976 和Fiering, S., Northrop, J. P., Nolan, G. P., Matilla, P.,Crabtree, G. R. & Herzenberg, L. A. (1990) Genes Dev. 4, 1823-1834）。将使用TREM-1 cDNA (Gene Bank 参考ID: NM_018643.2, Sino Biological Inc., Beijing,China)）作为模板和寡聚物

作为引物，克隆入pIREShyg载体GenBank登录号U89672 (目录号 6061-1, Clontech Laboratories, CA,USA)的 TREM/DAP12/pMX-IRES载体（从SmaI位点至BamHI位点编码786 bp的TREM-1），转染入PLAT-E包装细胞系(由华盛顿大学的W. Yokoyama提供；或者目录号 RV-101, CellBiolabs Inc, Bio-Mediator KY, Vantaa, Finland），其使用Superfect转染试剂（目录号301305, Qiagen Nordic, Denmark）。包含TREM/DAP12/pMX-IRES病毒颗粒的PLAT-E上清液用于如下感染BWZ.36细胞：2x10⁵个BWZ.36细胞在6孔板中培养，并且培养基用1.5ml包含病毒颗粒 + 8 mg/ml聚凝胺的上清液替换。6-8小时后，将1.5 ml正常培养基添加到板中并且将细胞孵育额外24小时。稳定表达TREM-1的BWZ.36细胞系用抗TREM-1单克隆抗体（克隆21C7; Bouchon 等, 2000, J. Immunol vol. 164 第4991-4995页）染色，并通过细胞分选分离。

实施例2：用于鉴定表达TREM-1的配体的细胞的生物测定的建立

如实施例1所述，通过用hTREM-1和DAP12转染NFAT-lacZ携带细胞系BWZ.36(Sanderson S, Int. Immun. 1994)生成TREM-1报道基因细胞系。此BWZ.36/hTREM-1:DAP12:NFAT-LacZ细胞系（本文也称为BWZ/hTREM-1报道基因细胞）对TREM-1的抗体介导的交联是高度敏感的，当用1-10 μg/ml板结合的可商购的抗TREM-1抗体刺激时，相比同种型对照，给出NFAT-驱动的LacZ产生的约40倍的诱导。在报道基因细胞中NFAT-驱动的LacZ产生可以使用基于发光的试剂盒Beta Glow™ (Promega E4720, Madison,WI)进行测定。板用同种型对照或aTREM-1 MAB1278 （在PBS中浓度3 ug/ml，100 ul/孔） （R&D Systems,Minneapolis, USA）在4℃包被16小时或在37℃，5 % CO₂包被2小时，并且通过添加10ml 维尔烯(Versene)（目录号 #15040, Gibco, Carlsbad CA, USA）使BWZ/hTREM-1报道基因细胞脱离，以400g离心5分钟，并在PBS和培养基（RPMI-1640 w/o酚红；目录号11835, Gibco,Carlsbad CA, USA）中清洗，然后添加到包被的板中（1 x 10⁶细胞/ml，4x10⁴细胞/孔）到总体积100 ul并在37℃，5 % CO₂孵育过夜（16-20小时）。

这些TREM-1反应性细胞用于鉴定表达TREM-1配体的细胞。一种这样的细胞被证明是来自全血的嗜中性粒细胞。通过Ficoll和葡聚糖沉降纯化健康供体的嗜中性粒细胞，并用PGN（InVivogen, tlrl-pgnsa, SanDiego, CA, USA）刺激过夜。简而言之，以1：3的报道基因细胞：嗜中性粒细胞的比例将BWZ/hTREM-1报道基因细胞添加到活化的嗜中性粒细胞培养物中。在聚-D-赖氨酸包被的Black细胞培养板（# 356640，来自BD Biosciences, SanJose, CA, USA）中运行此测定。TREM-1活化在培养24小时后使用BetaGlo试剂（E4720，来自Promega, Madison, WI, USA）读出并且使用来自Perkin Elmer的TopCount发光计数器测量发光。

体外刺激的嗜中性粒细胞具有能够诱导TREM-1信号传导的配体，并且来自健康供体的全血的嗜中性粒细胞通过葡聚糖沉降纯化，并用多种试剂刺激过夜。能刺激来自嗜中性粒细胞的TREM-1应答信号的唯一试剂是PGN-SA（Invivogen, tlrl-pgnsa, SanDiego,CA, USA），其模拟细胞的细菌活化。这些活化的嗜中性粒细胞然后通过共培养细胞用来刺激BWZ/hTREM-1报道基因细胞系。简而言之，以1：3的报道基因细胞：嗜中性粒细胞的比例将BWZ/hTREM-1报道基因细胞添加到活化的嗜中性粒细胞培养物中。在聚-D-赖氨酸包被的黑细胞培养板（目录号356640 BD Biosciences, San Jose, CA, USA）中运行此测定。TREM-1活化在培养24小时后使用BetaGlo试剂（目录号E4720，Promega, Madison, WI, USA）读出并且使用（来自Perkin Elmer, Waltham MA, USA）的TopCount发光计数器测量发光。如图1所示，在与PGN刺激的嗜中性粒细胞共培养的BWZ/hTREM-1细胞中观察到报道基因活性的显著诱导。此诱导高度依赖嗜中性粒细胞活化。对于静息嗜中性粒细胞没有看到应答（柱2嗜中性粒细胞）。类似地，当在不存在嗜中性粒细胞的情况下用TLRL混合物中PGN-SA刺激BWZ/hTREM-1报道基因细胞时（柱1-TLRL）没有看到应答，证明应答不仅仅是PGN对BWZ/hTREM-1细胞的直接作用。用细胞因子混合物活化嗜中性粒细胞（柱3+4嗜中性粒细胞+细胞因子）也不提供正确的TREM-1活化信号。

实施例3：可溶性TREM-1对PGN活化的嗜中性粒细胞的结合

PGN-刺激的嗜中性粒细胞能够诱导TREM-1活化，表明在PGN刺激的嗜中性粒细胞培养物中存在TREM-1刺激因子。为了证实嗜中性粒细胞上TREM-1相互作用蛋白的存在，将PGN-刺激的嗜中性粒细胞用重组TREM-1四聚体蛋白染色并通过流式细胞术分析。简而言之，从获自Astarte Biologics (Redmond, WA, USA)的人全血中经由Ficoll-葡聚糖沉降法分离粒细胞。在50ml管中用3份Ficoll和4份血液的比例，使血液在FicollPaque (17-0840-03, GE Healthcare, Piscataway, NJ, USA)梯度上分层，然后在400xg在22℃不间断（without brake）离心30分钟。中间的PBMC带轻轻吸去。吸取浓缩的RBC上分层的粒细胞，并转移到50ml聚丙烯管。粒细胞和污染的RBC用1xPBS稀释到40ml并随后添加10ml PBS溶液中的4% DEXTRAN 500 (Sigma, 31392, St Louis, MO, USA)。通过轻轻颠倒混合后，管在22℃放置20-30分钟。然后将富含粒细胞的上清液转移到新管并在250xg在22℃离心5分钟；吸取上清液并丢弃。用渗透压裂解去除污染的RBC，简而言之，将细胞沉淀重悬在7.5ml的0.2% NaCl中；轻轻混合55-60秒，并且添加17.5ml的1.2% NaCl溶液。然后用PBS使体积达到50ml，并在250xg离心5分钟，将沉淀重悬在7.5ml的0.2% NaCl中以第二次重复裂解。最终的粒细胞沉淀重悬在RPMI/10% FBS中。

分离的粒细胞以3.8 E6/ml的密度在RPMI/10%FBS + 10 μg/ml PGN-SA(Invivogentlrl-pgnsa, San Diego, CA, USA)中培养7天。通过离心沉淀细胞并重悬在PBS/2% FBS用于染色。然后在存在或不存在2 μg/ml探针，具有或不具有100 μg/ml (50X)的特异性的或不相关的竞争蛋白的情况下，以100,000/孔的密度将重悬的粒细胞铺板在96孔板（圆底）中。在50μl/孔体积中将细胞在4℃与探针/竞争蛋白孵育1小时。在孵育结束时，添加150 μl/孔PBS/2%FBS并沉淀细胞。沉淀的细胞重悬在50 μl/孔的山羊抗hFc F(ab’)2/PE缀合物(Jackson ImmunoResearch 109-116-098, West Grove, PA, USA)中并在4℃孵育30分钟。添加150 μl/孔PBS/2%FBS并沉淀细胞。沉淀的细胞进一步在200μl/孔PBS/2%FBS中洗涤并沉淀。然后将洗涤的细胞重悬在100 μl/孔固定剂（1:1 PBS: Cytofix. 554655,BD Biosciences, San Jose, CA, USA）中并在室温孵育5分钟。向固定的细胞添加100 μl/孔PBS/2%FBS，并然后沉淀细胞。染色/固定的细胞然后重悬在100 μl/孔PBS/2%FBS用于在LSR II流式细胞仪上进行流式细胞术分析。(BD Biosciences, San Jose, CA, USA)。

从流式细胞数据创建直方图。来自山羊抗hFc/PE缀合物的背景荧光在每个直方图中显示为背景并指定为“PE”。在每个直方图上绘制相同的标志物以指定结合第二山羊抗hFc/PE缀合抗体的细胞的百分比。阴性对照Fcmut蛋白显示2%阳性结合细胞，其与单独用山羊抗hFc/PE缀合物看到的背景荧光相同（图2A）。当细胞用2 μg/ml hTREM-1/四聚体染色时，它们为39%阳性（图2B）。当在100 μg/ml DCIR COMP蛋白的背景下完成TREM-1四聚体结合时，细胞为41%阳性，证实DCIR COMP不竞争结合TREM-1四聚体（图2C）。当在100 μg/mlTREM-1 COMP蛋白存在的情况下完成TREM-1四聚体结合时，细胞为10%阳性，显示TREM-1COMP蛋白的确与TREM-1四聚体竞争结合细胞（图2D）。

实施例4：作为嗜中性粒细胞表达的TREM-1配体的PGLYRP1的鉴定

通过使用免疫沉淀偶联质谱（IP-MS）将PGLYRP1鉴定为TREM-1配体。可溶性TREM-1四聚体用作亲和“诱饵”分子以鉴定配体。简而言之，TREM-1-四聚体-Fc (SEQ ID NO:2)和分开的CD83-Fc (SEQ ID NO:5)各自以100 μg/ml的终浓度与270百万个通过如上述的葡聚糖沉降纯化的人嗜中性粒细胞在1 mL PBS中在4℃一起孵育90分钟并温和摇动。沉淀后，细胞重悬在1mL PBS缓冲液中，其包含交联剂3,3'-二硫代双[磺酸琥珀酰亚氨丙酸酯]（DTSSP）（Thermo Scientific：21578，Rockford，IL，USA），以2 mM的浓度并在室温孵育30分钟。细胞用1mL PBS洗涤3X，随后在1 mL RIPA缓冲液(Thermo Scientific, 89901,Rockford, IL, USA)中裂解。裂解物以15,000 X g在4℃离心10分钟以去除不溶的材料。使用蛋白A Mag Sepharose™ 珠 (GE Healthcare Life Sciences, 28-9670-56,Piscataway, NJ, USA)从上清液中将交联到偶联探针的Fc的嗜中性粒细胞蛋白免疫沉淀。简而言之，50 μL珠首先用200 μL PBS洗涤，然后重悬在1mL 细胞裂解物中，在4℃孵育60分钟，磁力捕获并随后用200 μL RIPA缓冲液洗涤2次，然后用200 μL PBS洗涤3次。从最终的磁力捕获物去除PBS后，使用200 μL包含8M尿素、100 mM Tris（pH8.0）和15mM TCEP（ThermoScientific, 77720, Rockford, IL, USA）的缓冲液从磁性珠上洗脱蛋白，并在室温孵育30分钟，捕获珠并将上清液转移到Microcon Ultracel YM-30 滤器(Millipore, 42410,Billerica, MA, USA)。样品在14, 000 x g, 20℃离心30-60分钟，直至滤膜顶部上没有液体保留。然后用100 μL 8M尿素中的50mM IAA（碘乙酰胺）在室温下黑暗中将保留的蛋白烷基化30分钟。滤器用100 μL 50mM NH₄HCO₃洗涤2次并然后转移到新的收集管中。添加在60 μL 50 mM NH₄HCO₃中的1 μg 胰蛋白酶(目录号 V5111, Promega, Madison WI, USA)然后在37℃孵育过夜。通过在14,000 xg离心30分钟收集胰蛋白酶消化物，随后用50 μL 50 mMNH₄HCO₃洗涤滤器。通过LC/MS/MS使用LTQ-Orbitrap-XL质谱仪(Thermo Scientific,Waltham, MA, USA)分析10 μL消化物。针对IPI人数据库（v3.81）使用SEQUEST-Sorcerer引擎(4.0.4 样式(build)) (SageN, Milpitas, CA, USA)搜索数据，并且然后用Scaffold 3(Proteome Software, Portland, OR, USA)后处理以用1%的错误发现率过滤蛋白ID。阴性对照扣除后，发现PGLYRP1是与hTREM-1四聚体特异性结合的高可信度蛋白。在嗜中性粒细胞中的免疫沉淀显示在148个鉴定的蛋白中，72个蛋白通过对照构建体（CD83）单独免疫沉淀，73个蛋白对于TREM-1和CD83是相同的，而只有三个是TREM-1特异性的（图3）。该实验后来使用来自不同的供体的嗜中性粒细胞进行了重复并且PGLYRP1再次被鉴定为特异性与hTREM-1相互作用。

实施例5：从HEK293 6E表达的人PGLYRP1的纯化

通过将人CD33 信号肽序列(SEQ ID NO: 53)与人成熟PGLYRP1编码序列(SEQ IDNO: 1)融合构建重组蛋白序列。所获得的开放阅读框克隆入 pcDNA3.1/Zeo(+)载体(LifeTechnologies, Carlsbad CA, USA) CMV启动子后。然后用293fectinTM (LifeTechnologies, Carlsbad CA, USA)按照供货商的方案将所述pcDNA3.1-hPGLYRP1构建体转染入HEK293 6E细胞。转染后5天，包含分泌的人PGLYRP1的培养上清液通过离心（15,000rpmX 20 min, 4℃）收获，并且然后通过用0.22 μm硝酸纤维素膜过滤澄清。然后将澄清的上清液首先稀释10倍到20mM柠檬酸钠pH5.0中，并且然后应用到Hitrap SP HP 5 ml柱（17-1151-01 GE Healthcare, Uppsala, Sweden），然后用5倍柱体积的20 mM 柠檬酸钠 pH5.0洗涤。然后用20 mM 柠檬酸钠 pH 5.0、1 M NaCl的0-100%线性梯度以30倍柱体积洗脱结合的人PGLYRP1。分开合并包含人PGLYRP1的二聚体和单体形式的级分并通过Amicon ultra15 离心单元(UFC800324 3,000 kDa MWCO, Millipore, Hellerup, Denmark)浓缩到少于4ml。二聚体和单体合并物进一步精加工并且通过Hiload 26/60 Superdex 75 318ml 柱(17-1070-01 GE Healthcare, Uppsala, Sweden)缓冲液交换到磷酸盐缓冲盐水（PBS）。离心后，通过用NANODROP UV分光光度计测量280nm吸光度来确定最终蛋白浓度。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS–PAGE)评价蛋白纯度。

实施例6：大肠杆菌表达的人PGLYRP1的重折叠和纯化

人PGLYRP1作为包含体在大肠杆菌BL21（DE3）细胞中表达。通过离心收获细菌，重悬在50mM Tris-HCl pH8.0，500 mM NaCl，5 mM EDTA，0.5% Triton X-100中并通过离心破碎。不溶沉淀用50 mM Tris，pH 8.0，1% TritonX-100，2 M 尿素洗涤三次并用50mM TrispH8.0洗涤一次，然后溶解在50 mM Tris-HCl，6M 盐酸胍，pH7.4，1 mM DTT中（终蛋白浓度20mg/ml）。对于体外折叠，溶解的人PGLYRP1包涵体稀释在50 mM Tris，pH 8.0，2mM EDTA，5mM 半胱胺，0.5 mM 胱胺，0.4 M 精氨酸中（终蛋白浓度1mg/ml）。在4℃过夜后，通过离心/过滤使折叠混合物澄清，并且然后稀释12倍到10mM MES pH3.5中以降低电导率和pH（最终pH约5.8，电导率约6mS/cm）。然后将稀释的折叠混合物应用到Hitrap SP HP 5ml柱（17-1151-01 GE Healthcare, Uppsala, Sweden），然后用5倍柱体积的50 mM MES pH5.8洗涤。然后用50 mM MES pH 5.8, 1 M NaCl的0-60%线性梯度以20倍柱体积洗脱结合的人PGLYRP1。合并包含重折叠的人PGLYRP1的级分并通过Amicon ultra 15 离心单元(UFC800324 3,000 kDa MWCO, Millipore, Hellerup, Denmark)浓缩到少于4ml。然后使用Hiload 26/60 Superdex 75 318ml 柱((17-1070-01 GE Healthcare, Uppsala,Sweden)精加工并将蛋白缓冲液交换到磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。大部分重折叠的人PGLYRP1蛋白以单体形式。离心后，通过用NANODROP UV分光光度计测量280nm吸光度来确定最终蛋白浓度。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS–PAGE)评价蛋白纯度。

实施例7：小鼠免疫和mAb的鉴定

使用纯化的人PGLYRP1免疫小鼠以产生抗体。简而言之，小鼠免疫3次，每次免疫用20 μg重组PGLYRP1。第一次免疫使用完全福氏佐剂（目录号3018, Statens SerumInstitut, Copenhagen, Denmark）皮下进行。随后的两次免疫使用不完全福氏佐剂（目录号3016, Statens Serum Institut, Copenhagen, Denmark）腹膜内进行。最后一次免疫后10天，脸颊抽血并在直接ELISA中针对PGLYRP1测试血清。

实施例8：可溶性TREM-1与PGLYRP1的结合

验证新的蛋白-蛋白相互作用的一个常规方法是通过使用重组试剂重建相互作用。为此，表达具有信号传导糖基磷脂酰肌醇（GPI）结构的翻译后添加的C末端表位的重组人PGLYRP1。包含末端GPI结构的蛋白靶向在质膜上展示。此通常应用的技术允许其它可溶性蛋白被展示并通过流式细胞技术测试结合。在图4a中，HEK-2936E细胞用pCDNA 3.1/zeo(+) hPGLYRP1-GPI (SEQ ID NO: 7)转染，3 μg DNA稀释入100 μl的Optimem (目录号31985062, Life Technologies, Carlsbad, CA, USA)。将4μl的293fectin (目录号 51-0031, Life Technologies, Carlsbad, CA, USA)添加到100μl的Optimem (目录号31985062, Life Technologies,Carlsbad, CA, USA)并在22℃孵育5分钟。合并DNA/Optimem混合物和293fectin/Optimem混合物并在室温下孵育额外20分钟。HEK-2936E细胞在Freestyle培养基(目录号 12338, Life Technologies, Carlsbad, CA, USA)中以1e6/ml稀释到3 ml并铺板在6孔皿中(目录号 35-3046, Biosciences San Jose, CA, USA)并且然后将DNA/293fectin混合物逐滴添加到细胞。细胞在37℃摇动孵育48小时。1μg/ml的人TREM-1-G4Sx3-TREM-1/Fc6mut (SEQ ID NO: 2)稀释到PBS/2%FBS中并且将50μl探针添加到圆底96孔板(目录号 3799, Costar, Lowell, MA, USA)中的80,000个转染的HEK293-6E细胞中。细胞在4℃孵育1小时，随后用200 μl PBS/2%FBS洗涤2次。添加50 μl 1 μg/ml PE山羊抗人Fc (目录号 109-116-098, Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA, USA)，并孵育额外1小时随后用PBS/2%FBS洗涤2次。细胞在1:1 PBS稀释的BDCytofix (目录号554655, BD Biosciences, San Jose,CA, USA)中固定5分钟，并且孵育5分钟随后用200μlPBS/2%FBS洗涤。细胞重悬在100μl PBS/2%FBS中然后在FACS LSRII (BD Biosciences,San Jose, CA)上分析。此实验的结果显示在图4a中，其中未染色的细胞通过黑实线显示（G03）。模拟转染细胞的TREM-1-G4Sx3-TREM-1/Fc6mut染色显示为虚线，并且显示相对未染色的细胞无结合。最终，用人PGLYRP1-GPI转染的细胞强力结合TREM-1-G4Sx3-TREM-1/Fc6mut，其用点线显示。结合的定量表示为平均荧光强度，MFI。

除了流式细胞术，通常还通过测量表面等离子共振（SPR）评价蛋白-蛋白相互作用。使用BiacoreT200 (GE Healthcare, Piscataway, NJ, USA)设备分析人TREM-1和人PGLYRP1之间并且还有人PGLYRP1和超声的可溶性大肠杆菌肽聚糖(目录号 tlrl-ksspgn,Invivogen, San Diego, CA, USA)之间的相互作用。所有测定以20-30 μL/分钟的流速在1X HBS-P运行缓冲液(目录号 BR-1006-71, GE Healthcare, Piscataway, NJ, USA)中在25℃进行。

在图4B中，按照制造商推荐的方法将4641.1 RU的人TREM-1四聚体(SEQ ID NO:2)胺偶联到Biacore CM5芯片(目录号 BR-1005-30, BR-1000-50, GE Healthcare,Piscataway, NJ, USA)。在存在或不存在10 μg/mL可溶性大肠杆菌肽聚糖(目录号 tlrl-ksspgn, Invivogen, San Diego, CA, USA)的情况下，将PGLYRP1 (目录号 2590-PG, R&DSystems, Minneapolis, USA)在1X HBS-P运行缓冲液(目录号 BR-1006-71, GEHealthcare, Piscataway, NJ, USA)中稀释到150 nM，并注射经过TREM-1表面。数据相对活化的和封闭的（用乙醇胺）参考表面进行参考扣除。尽管在存在和不存在PGN的情况下，PGLYRP1均结合TREM-1，但当PGLYRP1被PGN交联时，似乎存在显著的亲合力效应。

在图4C中，将274.8 RU的PGLYRP1 二聚体(SEQ ID NO: 1)胺偶联到Biacore CM5芯片(目录号 BR-1005-30, BR-1000-50, GE Healthcare, Piscataway, NJ)。可溶性大肠杆菌肽聚糖(目录号 tlrl-ksspgn, Invivogen, San Diego, CA, USA)在1X HBS-P运行缓冲液中(目录号 BR-1006-71, GE Healthcare, Piscataway, NJ, USA)稀释到10 μg/mL，并注射经过PGLYRP1表面。数据相对活化的和封闭的（用乙醇胺）参考表面进行参考扣除。

在图4D中，使用与图4C相同的芯片(274.8 RU 的PGLYRP1二聚体，(SEQ ID NO:1)。将TREM-1 二聚体 (SEQ ID NO: 8）在1X HBS-P运行缓冲液中(BR-1006-71, GEHealthcare, Piscataway, NJ, USA)稀释到150nM，并且在重复注射肽聚糖（图4B中描述）之前和之后注射。数据相对活化的和封闭的（用乙醇胺）参考表面进行参考扣除，并且也扣除缓冲液空白注射的信号。TREM-1显示清楚地结合固定化的 PGLYRP1。可溶性TREM-1二聚体类似地结合单独的固定化的PGLYRP1或结合已加载PGN的PGLYRP1。表面固定化的TREM-1受体被可溶性PGLYRP1和PGN的总体结合由对被来自高度交联的PGLYRP1的亲和力效应增强的PGLYRP1:TREM-1复合物的适度亲和力组成。

实施例9：TREM-1-应答被重组PGLYRP1的活化

为了测试是否重组PGLYRP1可以活化TREM-1应答，将BWZ/ hTREM-1报道基因细胞系接种到黑 96孔板并在存在或不存在的10µg/mlPGN的情况下用重组人PGLYRP1（目录号2590-PG-050, R&D Systems: Minneapolis, MN）刺激。TREM-1活化在培养24小时后使用BetaGlo试剂（目录号E4720，Promega, Madison, WI, USA）读出并且使用来自PerkinElmer的TopCount发光计数器测量发光。如图5a所示，TREM-1报道基因细胞系用PGLYRP1刺激在存在PGN的情况下诱导剂量依赖性的TREM-1的活化。测试了几种不同的PGN，包括PGN-EC (来自大肠杆菌)、PGN-SA (来自金黄色葡萄球菌（S. aureus）)和PGN-BS (来自枯草芽孢杆菌（B. subtilis）)(Invivogen, San Diego, CA, USA)，并且均能够促进PGLYRP1诱导的TREM-1应答。

重组PGLYRP1诱导的应答可以通过添加重组TREM-1-Fc-融合蛋白(SEQ ID NO: 2)抑制(图5b)，或通过添加多克隆抗PGLYRP1抗体(目录号 AF-2590, R&D Systems:Minneapolis, MN, USA)抑制，证实PGLYRP1是TREM-1配体并且可溶性TREM-1和抗PGLYRP1潜在地可用作TREM-1拮抗剂。

实施例10：来自PGLYRP1刺激的M1巨噬细胞的TNF-α释放

单核细胞分化成M1巨噬细胞并用PGLYRP1复合物刺激，导致在两个不同的供体中的TNF-α释放。

本领域技术人员将认识到建立冷冻库收集来自多个供体的原代细胞从而提供方便的实验重复的价值。如下从外周血单核细胞产生体外衍生的巨噬细胞。使用Rosette Sep试剂盒(目录号 15068 Stem Cell Technologies, Vancouver BC, Canada)按照制造商的指导从获自Research Blood Components (Brighton, MA, USA)的外周血“leukopak”分离负富集的单核细胞。分离的单核细胞悬浮在50e6 细胞/ml的10% DMSO/FBS等分试样中并逐渐冷却到-80℃。为了产生巨噬细胞，在37℃水浴中快速融化一瓶或多瓶冻存小瓶的单核细胞，用具有10% FBS(目录号 03-600-511, Themo Fisher, Waltham MA, USA)的生长培养基RPMI 1640 (目录号 72400-047, Life Technologies, Carlsbad CA, USA)稀释到10ml并在250g离心5分钟。细胞在补充50 ng/ml人MCSF（目录号 PHC9501, Life Technologies,Carlsbad CA, USA）的生长培养基中悬浮至2e6个细胞/ml，置入组织培养物处理的佩特里式(petri style)组织培养板并放入加湿的培养箱，设置维持5% CO₂，2%O₂的“低氧”气氛。在培养的第三天，将细胞饲喂添加等体积的补充有50 ng/ml人MCSF生长培养基。培养6天后，所述单核细胞已分化成M0巨噬细胞。通过将培养基换成补充有50 ng/ml人IFNg (目录号,PHC4031, Life Technologies, Carlsbad CA, USA)（对于M1巨噬细胞）或40 ng/ml人IL-4(目录号 PHC0045, Life Technologies, Carlsbad CA, USA) （对于M2巨噬细胞）的生长培养基并放回培养箱额外22小时，使M0细胞进一步分化。在第7天，巨噬细胞合适地分化用于生物测定中。简而言之，通过用1x PBS随后是PBS中的5mM EDTA洗涤，将巨噬细胞从培养板回收。然后将板放回37℃30分钟，并且将细胞使用10ml注射器和22G针头从板上“强力洗下(power washed)”。然后将细胞稀释到生长培养基中，在250g离心5分钟，之后将细胞沉淀悬浮到1e6/ml的终浓度。

如上制备的巨噬细胞用在生物测定中，其中通过ELISA在条件培养基中测量应答于用TREM-1配体刺激细胞产生的细胞因子例如TNF-α。进一步利用这样的生物测定来测量通过TREM-1特异性抗体的TREM-1配体刺激的阻断。在生长培养基中以4X浓度制备TREM配体或阴性对照，并且将50微升/孔添加到96孔微量滴定板中。TREM-1配体的终浓度由7.5ng/ml重组人PGLYRP1（如实施例5所述生成）和3µg/ml PGN-BS (目录号,tlrl-pgnbs,Invivogen, SanDiego CA, USA)组成。如上述在加湿低氧条件下培养细胞22小时，之后收集条件培养基并且按照制造商的指导（目录号 DY210, R&D Systems, Minneapolis MN,USA）通过ELISA测量TNF-α水平。

此实施例表明TREM-1配体PGLYRP1能够进一步增加从来自两个不同供体的巨噬细胞中的TNF-α释放。

实施例11：在用PGLYRP1刺激后从RA患者滑膜组织细胞的细胞因子释放。

在全膝盖替换过程中从RA患者获得滑膜组织样品。经由4mg/ml 胶原酶(目录号11088793001, Roche, Mannheim, Germany)和0.1mg/ml DNase (目录号 11284932001,Roche, Mannheim, Germany)通过在37℃消化1小时分离滑膜组织细胞的单悬浮液(Singlesuspension)。

以1x10^5/孔在培养基RPMI (目录号 R0883, Sigma Aldrich,St Louis, MO,USA) +10% FCS (目录号 S0115, BioChrom AG, Grand Island, NY 14072, USA)中的滑膜组织细胞用4ug/ml PGLYRP1和1ug/ml PGN-ECNDi (目录号 tlrl-kipgn, Invivogen,San Diego, CA 92121, USA)刺激。孵育24小时后，收获细胞上清液，并且通过ELISA (TNF-α (目录号 DY210, R&D Systems, Minneapolis, MN55413 USA)、IL-1b (目录号 88-7010-88, eBioscience, San Diego CA USA)、GM-CSF (目录号 88-7339-88,eBioscience, San Diego CA USA)或Flowcytomix (TNF-α、IL-1b、MIP-1b、MCP-1、IL-6和IL-8 (目录号 BMS, eBioscience, San Diego CA USA)测量细胞因子。用TREM-1配体刺激后，从滑膜组织分泌细胞因子。

此实施例显示来自类风湿关节炎患者的滑膜组织的细胞将通过分泌很多细胞因子对通过TREM-1配体PGLYRP1的刺激应答。

实施例12：抑制TREM-1活化的抗PGLYRP1 mAb的鉴定

为了鉴定可以阻断TREM-1应答的单克隆抗PGLYRP1 mAb，用重组人PGLYRP1免疫wtbalb/c小鼠。通过PGLYRP1蛋白上的直接ELISA进行初级筛选，并且随后在BWZ/hTREM-1报道基因细胞测定中测试所有PGLYRP1特异性杂交瘤上清液，以鉴定能够抑制如实施例1下所述的由PGN刺激的嗜中性粒细胞诱导的TREM-1活化的单克隆抗PGLYRP1抗体。如下运行生物测定：在存在75 ng/ml PGLYRP1 (SEQ ID NO: 1)与 2.5 μg/ml PGN-ECndi (目录号tlrl-kipgn, Invivogen San Diego, CA, USA)的情况下，40,000 hTREM-1/BWZ.36细胞/孔铺板在透明底的黑 96 孔板，以提供次最大(sub-maximal)阳性信号，或可替代地在存在次最大水平(1 μg/ml)的塑料吸附的抗TREM-1单克隆抗体(目录号 MAB1278 R&D Systems,Minneapolis, MN, USA)的情况下，以提供阳性信号。将测试抗体滴定入从10 μg/ml开始，5个连续的2倍稀释的测定。所述测定在37℃孵育过夜，并根据Beta Glo方案，用Beta Glo(目录号 E4740,Promega Madison, WI, USA)显色，并记录发光。数据绘图显示Beta Glo相对发光单位相对测试抗体浓度。在各个测试板上运行非中和性阴性对照 mIgG1 (目录号MAB002, R&D Systems Minneapolis, MN, USA)和中和性阳性对照多克隆山羊抗hPGLYRP1抗体(目录号 AF2590, R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)。如图6a中所示，F10、F14、F29、F36、F38、F77、F95和F105鉴定为能够阻断TREM-1对PGLYRP1的应答。图6B显示其它PGLYRP1抗体杂交瘤上清液能够阻断TREM-1依赖性信号。M-hPGRPS-2F5 (SEQ ID NOs: 31-32和-2F7 (SEQ ID NOs: 35-36)是非常有效的阻断剂。相反，在相同的测定方案中可商购获得的单克隆抗PGLYRP1抗体和抗PGLYRP1山羊多克隆阳性对照(目录号 AF2590, R&DSystems Minneapolis, MN, USA)的测试显示这些都不能阻断TREM-1活化（图6C）。所测试的抗PGLYRP1抗体包括：来自Thermo Scientific的188C424(6D)、来自US Biological的4H230和9A319 Mabs (图 6D、6E)；所有均不能阻断TREM-1生物测定的PGLYRP1刺激。发现来自Santa Cruz Biotechnology 的克隆6D653(图6F和6G)非特异性地阻断测定，基于如下观察，Mab阻断PGLYRP1 (6F)和抗TREM-1刺激(6G)，而阳性对照抗PGLYRP1多克隆Ab仅阻断PGLYRP1介导的活化。此非特异性阻断可能由于叠氮化物对生物测定的毒性。

总之，已经鉴定PGLYRP1单克隆抗体不仅结合PGLYRP1也中和其TREM-1信号传导活性。相对用于鉴定PGLYRP1抗体的常规方法，用于鉴定这些分子的方法提供了独特的优势，这通过商购抗体不能中和PGLYRP1来证实。

实施例13：PGLYRP1抗体阻断TREM-1特异性信号

对PGLYRP1杂交瘤克隆进行测序并且重组表达为hIgG抗体。这些的两个mAb 0182(来自1F36) (SEQ ID 15和16)和mAb 0184 (来自1F105) (SEQ ID 23和24)在如实施例13所述的BWZ/hTREM-1报道基因细胞测定中重新测试。这些抗PGLYRP1抗体以剂量依赖性方式阻断BWZ/hTREM-1报道基因细胞测定中的TREM-1应答。

此实施例显示，与图6C-G中所示的可商购获得的针对PGLYRP1的抗体相反，本文公开的PGLYRP1抗体在BWZ/hTREM-1报道基因细胞测定中能够阻断TREM-1特异性信号。

实施例14：来自PGLYRP1刺激的M2巨噬细胞的TNF-α释放

单核细胞分化成M2巨噬细胞并用PGLYRP1复合物刺激。针对PGLYRP1的抗体(10 µg/ml) mAb -0182 和 -0184能够降低TNF-α释放。M2巨噬细胞如实施例10中所述分化。在生长培养基中以4X浓度制备待测试的抗体，并添加50微升/孔。开始生物测定的最终步骤是添加100微升/孔的如上述制备的M2巨噬细胞。测试PGLYRP1单克隆抗体(mAb 0182和mAb0184)对M2巨噬细胞的中和活性。在下列条件下测试重复（除非另有说明）测试孔：无添加的刺激，仅7.5 ng/ml PGLYRP1，仅3 µg/ml PGN-BS (目录号 tlrl-pgnbs, Invivogen SanDiego, CA, USA)(重复六次)，PGLYRP1与PGN-BS (重复六次)和在存在PGLYRP1抗体或hIgG4同种型对照抗体的情况下的PGLYRP1与PGN-BS，所述PGLYRP1抗体或hIgG4同种型对照抗体在40 µg/ml和0.31 µg/ml之间的浓度以2倍稀释滴定。

此实施例表明TREM-1配体PGLYRP1能够进一步增加从来自两个不同供体的M2巨噬细胞的TNF-α释放，并且本文公开的抗体能够降低该TNF-α释放。因此，这些PGLYRP1抗体潜在地可用作TREM-1拮抗剂。

实施例15：TREM-1和PGLYRP1相关分子之间的结合相互作用的调查证实特异性。

已鉴定了在存在PGN的情况下，TREM-1能够结合PGLYRP1并活化TREM-1，我们开始确定TREM-1是否可以结合其它PGLYRP家族成员。通过在N末端添加衍生自II型受体MDL-1的细胞内（IC）和跨膜结构域（TM）将PGLYRP1人工锚定在细胞膜中。后一个构建体称为II型PGLYRP1。在II型 1.0（SEQ ID NO: 37）中，天然MDL-1受体TM的带电荷的氨基酸被保留，并且此蛋白的有效表达取决于DAP12的共表达。在II型 2.0 PGLYRP1构建体(SEQ ID NO: 38)中，带电荷的TM残基已用中性氨基酸取代(赖氨酸到亮氨酸)，使蛋白能够独立于例如DAP12表达，并且添加DYKDDDDK (SEQ ID NO: 39)表位标签。全长hPGLYRP2 (SEQ ID NO: 40)、hPGLYRP3 (SEQ ID NO: 41)和hPGLYRP4 (SEQ ID NO: 42])，cDNAs合成为膜锚定的蛋白，使用如上文用于PGLYRP1的II型 2.0 MDL1 N末端的N末端融合。cDNA亚克隆到修饰的pTT5表达质粒载体中(Zhang J 等 Protein Expression and Purification, Vol. 65, Issue1, May 2009, pp 77-8)，并且如实施例8中所述与空载体阴性对照（模拟物）一起转染入HEK293-6E细胞。对于下列探针的表面和细胞内结合，通过流式细胞术分析细胞：山羊抗-人PGLYRP1 (PGRPS) (目录号AF2590, R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)；Mab 抗-人PGLYRP2 (PGRP-L) (目录号MAB0755, Abnova, Walnut, CA, USA)；Mab 抗-人PGLYRP3(PGRP-1a) (目录号MAB0068, Abnova, Walnut, CA, USA)；Mab 抗-人PGLYRP3 (PGRP-1a)(目录号ab13901, Abcam, Cambridge MA, USA)；兔抗-人PGLYRP3 (PGRP-1a) (目录号18082-1-AP, Protein Tech, Chicago IL, USA)；山羊抗-人PGLYRP4-生物素 (PGRP-1b)(目录号BAF3018, R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)；山羊抗-小鼠PGLYRP1 (PGRPS)(目录号AF2696, R&D Systems,Minneapolis, MN, USA)；huTREM-1.Fc 二聚体(C0099)；huTREML1.Fc 二聚体(C0246)；huTREML2.Fc 二聚体(C0247)；huTREM2.Fc 二聚体(C0248)。结合方案如下进行，使用cytofix/perm 缓冲液(目录号51.2090KZ, BD Biosciences,SanJose CA, USA)用于细胞内染色或2% FBS/PBS用于表面染色：在22℃将细胞沉淀用200 μlcytofix/perm 缓冲液重悬在96孔圆底板(开始于：160,000个细胞/孔) 15分钟，用200μl1x PermWash缓冲液(在DiH20中稀释10x)洗涤两次，用50μl在1x PermWash缓冲液中稀释到5μg/mL的探针染色，在4℃孵育1小时，然后用200μl 1x PermWash缓冲液洗涤细胞，添加在50μl 1x PermWash缓冲液中的第二探针，细胞在4℃孵育30分钟，用200 μl 1x PermWash缓冲液洗涤两次，沉淀重悬在50μl 1:1 PBS 稀释的 CytoFix (BD:554655, San Jose,CA)中，在22℃孵育5分钟，添加150μl PBS/2%FBS，在300g离心5分钟，用200μl PBS/2%FBS洗涤一次并重悬在100μl PBS/2%FBS中。使用FACS在LSRII (BD, San Jose CA, USA)上分析结合。

如下表总结，TREM-1探针排他性结合hPGLYRP1并且没有检测到结合PGLYRP2、PGLYRP3或PGLYRP4的hTREM家族成员。

人膜锚定的PGLYRP1、PGLYRP2、PGLYRP3和PGLYRP4在HEK293中瞬时表达并用内部和商购可溶性受体两者以及抗体探测，以鉴定家族成员之间新的相互作用。结合评分表示为“n/d”、“-“、“+”或“++++”。评分是探针染色相对阴性对照染色的平均荧光强度（MFI）的比例；“-”等于<1的比例，“++++”表示>30的评分并且“++”表示约10-15，“+”表示2-5，具有统计学显著性差异（p< 0.05）。本领域技术人员可以将这些评分分别表征为阴性、明亮(bright)或暗淡(dim)。

TRME-1仅结合PGLYRP1，并且不结合其它 PGLYRP成员，反之亦然：PGLYRP1仅与TREM-1相互作用，并且不与其它TREM成员相互作用。

实施例16：TREM-1配体存在于RA滑液样品中。

类风湿关节炎特征在于掌指（MCP）关节炎症，其中活化的粒细胞发挥显著作用。通过ELISA测定并在BWZ/hTREM-1报道基因细胞测定中测试从9名RA患者的MCP关节中抽取的滑液中的PGYLRP1。按照制造商的指导(Promega, Madison WI, USA)，将商购来源的滑液(Asterand, Detroit MI, USA)解冻，旋涡振荡并系列稀释在ELISA缓冲液中，并在PGLYRP1测定运行。9名患者中的4名显示升高的PGLYRP1水平：

随后在如实施例2中所述的BWZ报道基因测定中测定RA滑液样品的TREM配体活性。简而言之，将滑液解冻，旋涡振荡并系列稀释，在添加多克隆PGLYRP1抗体(目录号 AF2590,Promega, Madison WI, USA)或阴性对照多克隆的+/- 10μg/ml PGNECndi (Invivogen,SanDiego, CA, USA)中重复测定。塑料粘附的单克隆TREM-1和同种型抗体(R&D Systems,Minneaopolis MN, USA)分别充当阳性和阴性对照。图8显示来自类风湿关节炎患者的滑液如何能够以PGLYRP1依赖性方式触发BWZ/hTREM-1报道基因测定的实例。

实施例17：在PGLYRP1：TREM 1 相互作用的鉴定和表征中可用的哺乳动物表达载体的组装

A.) pJSV002 hTREM-1-G4Sx3-hTREM-1/Fc6mut (SEQ ID NO: 9)的构建

通过消除包含可变和恒定1（CH1）结构域的人IgG1的前215个氨基酸并在铰链、恒定2和恒定3结构域中进行下列氨基酸取代来建立人IgG1的Fc受体结合缺陷版本(version)：(E216G、C220S、L234A、L235E、G237A、A330S、P331S)。该构建体被命名为Fc6mut，因为进行了6个突变以调节对Fc受体的结合，而掺入第7个突变（E216G）以创建ApaⅠ限制克隆位点。将这些突变置入pJSV002（修改的pTT5，Zhang J 等 Protein Expression andPurification, Vol. 65, Issue 1, May 2009, pp 77-8）允许将Fc6mut的5'的受体胞外结构域作为EcoRI/ApaⅠ片段克隆。合成cDNA，其具有5' EcoRI限制性位点、GCCACC Kozak序列CD33前导序列随后是人TREM-1的细胞外结构域（aa17-200），具有相互间隔的KpnI限制性位点和重复3次的甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-丝氨酸间隔序列（G4Sx3）随后是人TREM-1的细胞外结构域的额外拷贝（aa17-200）和Apa1位点以允许克隆Fc6mut的上游。用EcoRI和ApaI切割此合成的DNA并连接入也已经用EcoRI/ApaI消化制备的pJSV002 Fc6mut。将此连接物电穿孔入DH10B大肠杆菌并涂布到氨苄青霉素琼脂板上。单个克隆在2ml LB+氨苄青霉素培养物中生长过夜，并且微量制备，随后用EcoRI/ApaI限制筛选以发现具有适当的1219碱基对插入片段的克隆。对正确的克隆测序，并且选择正确的克隆之一（#519）用于通过大量制备(big prep)制备额外的DNA。

B.) hTREM-1-COMP-SBP38x2-6His (SEQ ID NO: 10)的构建

为了产生五聚体TREM ECD分子，在pJSV002表达载体中创建了C末端表位标签。编码软骨寡聚蛋白（COMP）的3'端的合成cDNA融合到两个拷贝的链霉抗生物素蛋白结合蛋白结构域（SBP）随后是C末端6xHis结构域，置入pJSV002使得受体的细胞外结构域可以作为EcoRI/KpnI片段被克隆作为此片段的5'。随后合成hTREMcDNA，其包含EcoRI限制位点，随后是GCCACC Kozak序列和具有C末端KpnI位点的人TREM-1的细胞外结构域。将此EcoRI/KpnI片段连接入上述pJSV002 COMP-SBP38x2-6His载体。将此连接物电穿孔入DH10B大肠杆菌(Life Technolohies, Carlsbad CA, USA)并涂布到氨苄青霉素琼脂板上。单个克隆在2mlLB+氨苄青霉素培养物中生长过夜，并且微量制备，随后用EcoRI/KpnI限制筛选以发现具有适当的616bp插入片段的克隆。对正确的克隆测序，并且选择正确的克隆之一#525用于通过大量制备来制备额外的DNA。所述全长cDNA列举为SEQ ID NO: 10。

C.) pJSV002 hCD83-G4Sx3-hCD83/Fc6mut (SEQ ID NO: 11)的构建

当针对广泛的细胞系进行测试时，hCD83四聚体先前已通过FACS分析证明具有具有低结合，并且因此成为实施例3中列举的IPMS实验的优良的阴性对照。为了产生此分子，合成cDNA，其具有5' EcoRI限制性位点、GCCACC Kozak序列、CD33前导序列随后是人CD83的细胞外结构域，具有相互间隔的KpnI限制性位点和重复3次的甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-丝氨酸间隔序列（G4Sx3）随后是人CD83的细胞外结构域的额外拷贝。然后将此cDNA克隆到先前所述的pJSV002表达载体中hFc6mut的上游。所获得的成熟蛋白列举为SEQ ID NO: 6，并且EcoR1和Apa1之间串联CD83细胞外结构域cDNA序列显示为SEQ ID NO: 11。

D.) pJSV002 NCOMP-hDCIR(SEQ ID NO: 12)的构建

作为实施例5中使用的hTREM-1-COMP五聚体的阴性对照，使用hDCIR-COMP。用下列元件产生基于pJSV002的表达质粒：6xHIS标签随后是融合到软骨寡聚蛋白（COMP）的3’端的链霉抗生物素蛋白结合蛋白结构域（SBP）的两个拷贝，使得2型受体的细胞外结构域可以克隆此片段的3’为BglII/BamHI片段，并且表达为五聚体可溶性受体。从合成的cDNA模板扩增PCR片段，以生成分别在5'和3'端具有BgIII和BamHI端的DNA片段。用BgIII和BamHI限制酶切割此片段，然后进行条带纯化。所获得的片段连接入先前已用BgIII和BamHI切割的pJSV002 NCOMP。将此连接物电穿孔入DH10B大肠杆菌并涂布到氨苄青霉素选择琼脂上。挑取克隆，微量制备并用EcoRI和BamHI筛选并且对具有适当的1.137kB插入片段的克隆进行测序。编码包括NCOMP-SBP和DCIR序列的全长开放阅读框的cDNA指定为SEQ ID NO: 12，并且编码先前提及的成熟肽序列的cDNA指定为SEQ ID NO: 4。

E.) pNNC649-hTREM-1-hFc6mut二聚体的构建

实施例14中使用TREM-1-Fc二聚体以证实对PGLYRP1的结合并测试对其它PGLYRP家族成员的结合。利用基于pTT5的质粒(Zhang J 等, Protein Expression andPurification, Vol. 65, Issue 1, May 2009, pp. 77-8) pNNC649以允许受体胞外结构域框架内和Fc6mut的5'的克隆。为了表达hTREM-1-Fc6mut，合成cDNA，其具有5’ EcoRI限制性位点、GCCACC Kozak序列和hCD33前导序列，随后是人TREM-1的细胞外结构域（aa17-200），随后是Kpn1位点。使用本领域技术人员熟悉的限制酶和DNA连接酶技术将此cDNA克隆入pNNC549。编码包括CD33前导肽、hTREM-1 ECD和Fc6mut序列的全长开放阅读框的cDNA指定为SEQ ID NO: 43，并且编码成熟肽序列的cDNA指定为SEQ ID NO: 44。

F.) pNNC649-hTREML1-Fc6mut二聚体的构建

产生合成cDNA，其具有5’EcoRI限制位点、GCCACC Kozak序列和hCD33前导序列，随后是人TREML1的细胞外结构域（aa16-162），随后是Kpn1位点。使用本领域技术人员熟悉的限制酶和DNA连接酶技术将此cDNA克隆入先前所述的pNNC549载体。编码包括CD33前导肽、hTREML1 ECD和Fc6mut序列的全长开放阅读框的cDNA指定为SEQ ID NO: 45，并且编码成熟肽序列的cDNA指定为SEQ ID NO: 46。

G.) pNNC649-hTREML2-Fc6mut二聚体的构建

产生具有5’EcoRI限制位点、GCCACC Kozak序列和hCD33前导序列，随后是人TREML2的细胞外结构域（aa19-268），随后是Kpn1位点的合成cDNA。使用本领域技术人员熟悉的限制酶和DNA连接酶技术将此cDNA克隆入先前所述的pNNC549的载体。编码包括CD33前导肽、hTREML2 ECD和Fc6mut序列的全长开放阅读框的cDNA指定为SEQ ID NO: 47，并且编码成熟肽序列的cDNA指定为SEQ ID NO: 48。

H.) pNNC649-hTREM2-Fc6mut二聚体的构建

产生具有5’EcoRI限制位点、GCCACC Kozak序列和hCD33前导序列，随后是人TREM2的细胞外结构域（aa19-174），随后是Kpn1位点的合成cDNA。使用本领域技术人员熟悉的限制酶和DNA连接酶技术将此cDNA克隆入先前所述的pNNC549的载体。编码包括CD33前导肽，hTREM2 ECD和Fc6mut序列的全长开放阅读框的cDNA指定为SEQ ID NO: 49，并且编码成熟肽序列的cDNA指定为SEQ ID NO: 50。

实施例18:多聚化的PGLYRP1活化TREM-1

通过结合分析和IP/MS蛋白质组学鉴定TREM-1的反结构(counter-structure)或配体。随后通过特异性阻断验证配体PGLYRP1 (或PGRP-S)的身份。

有意思的是，尽管可以证明可溶性PGLYRP1结合TREM-1，但是TREM-1被PGLYRP1的活化需要支架试剂例如嗜中性粒细胞细胞外陷阱（NETs）或PGN的同时存在。

为了测试是否PGLYRP1的这种可替代的和多聚化形式可以结合和/或活化TREM-1，设计并表达了细胞相关联的PGLYRP1蛋白。测试了两种概念上不同PGLYRP1构建体。在一个中，将GPI锚定序列基序添加到PGLYRP1的C末端。在另一个中，通过在N末端添加衍生自II型受体MDL-1的细胞内（IC）和跨膜结构域（TM）将PGLYRP1人工锚定在细胞膜中。后一个构建体称为II型PGLYRP1。在II型 1.0（SEQ ID NO: 37）中，天然MDL-1受体TM的带电荷的氨基酸被保留，并且此蛋白的有效表达取决于DAP12的共表达。在II型 2.0 PGLYRP1构建体(SEQ IDNO: 38)中，带电荷的TM残基已用中性氨基酸取代(赖氨酸到亮氨酸)，使蛋白能够独立于例如DAP12表达。在HEK293 6E细胞中瞬时表达编码这些构建体的cDNA，在转染后第二天收获细胞并分析它们刺激报道基因细胞系BWZ/hTREM1的能力。II型PGLYRP1转染子与BWZ/hTREM1报道基因细胞在不存在PGN的情况下共孵育。18小时后使用BetaGlo 试剂(目录号E4720, Promega, Madison WI, USA)读出TREM-1活化。表达II型PGLYRP1的转染子在不存在PGN的情况下诱导TREM-1的活化，达到比用空表达载体转染的对照细胞看到的高24倍的水平。相反，经由PGLYRP1的C末端固定化的GPI锚定的PGLYRP1不介导任何TREM-1活化。膜结合和固定化的PGLYRP1蛋白在细胞表面的表达通过流式细胞术使用多克隆抗PGLYRP1抗体（AF2590）确定。两个蛋白II型PGLYRP1和GPI-PGLYRP1均证明的确是细胞表面表达的。

上表显示经由C末端GPI锚结合到细胞膜表面的PGLYRP1在诱导TREM-1活性中不如经由N末端部分结合细胞膜的II型PGLYRP1蛋白有效。这表明能够刺激TREM-1的游离C末端PGLYRP1部分的重要性。

进一步证明II型PGLYRP1活化被抗PGLYRP1抗体特异性抑制。因此添加高浓度(1 µg/100 µl测定体积)的多克隆(目录号 AF2590, R&D Systems, Minneapolis MN, USA)PGLYRP1抗体能够完全抑制此PGLYRP1诱导的活性。

恰好在PGLYRP1的C末端结构域的序列似乎对于活化TREM-1受体的能力是关键的。作为共同特征共有在PGLYRP1的最远C末端的修饰的几个构建体因此已被发现不介导TREM-1/BWZ报道基因活性的活化，而相反在N末端已修饰的相应的构建体的确展示活性。

这表明能够刺激TREM-1的游离C末端PGLYRP1部分的重要性。

解释及生物学观点

在存在PGN的情况下使用天然PGLYRP1配体或可替代地使用新的PGLYRP1变体（已证明其克服了对PGN的需要）活化TREM-1受体的能力，清楚地证明PGN不是TREM-1活化的绝对的辅因子需要。各种分子PGLYRP1形式（其证明赋予PGN非依赖性的TREM-1活化）的共同特征似乎是高密度的形式，导致假说即当充当天然配体的辅因子时，PGN的主要作用是提供支架用于多聚化。在体内，这样的支架可以通过嗜中性粒细胞细胞外陷阱（NETs）提供(Blood2005, 106: 2551-58)或其它天然存在的基质结构，例如透明质酸(hyaloronic acid)、蛋白聚糖结构（如多功能蛋白聚糖、聚集蛋白聚糖、核心蛋白聚糖或纤维蛋白）提供，所有这些都可能多聚化或以其它方式呈现PGLYRP1。

这些发现表明PGLYRP1的C末端部分的修饰降低TREM-1活化，其从而表明用试剂，例如针对PGLYRP1的C末端部分的抗体封闭PGLYRP1的C末端部分，将降低TREM-1相互作用并从而降低TREM-1刺激。

实施例19：II型PGLYRP1能够诱导来自类风湿关节炎患者的滑膜组织细胞中TNF-α释放。

在全膝盖替换过程中从RA患者获得滑膜组织样品。经由4mg/ml 胶原酶(目录号11088793001, Roche, Mannheim, Germany)和0.1mg/ml DNase (目录号 11284932001,Roche, Mannheim, Germany)通过在37℃消化1小时分离滑膜组织细胞的单悬浮液。滑膜组织细胞(1x10^5/孔在培养基RPMI (目录号 22400105, Life Technologies, CarlsbadCA, USA) +10 % FCS (目录号 S0115, BioChrom AG, Berlin, Germany)中)与多个剂量的用II型PGLYRP1瞬时转染的HEK细胞在低氧条件下共培养。孵育24小时后，收获细胞上清液，并且通过TNF-α ELISA (目录号 DY210, R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)测量细胞因子。

此实施例显示TREM-1配体可以以剂量依赖性的方式诱导来自类风湿关节炎患者的滑膜组织细胞的TNF-α。

实施例20：PGLYRP1抗体阻断嗜中性粒细胞中TREM-1介导的信号并降低IL-8释放

已经证明嗜中性粒细胞可以释放PGLYRP1并且嗜中性粒细胞还表达TREM-1受体，我们测试了是否嗜中性粒细胞衍生的 PGLYRP1可以以自分泌的方式刺激嗜中性粒细胞。用PGN-SA (目录号 tlrl-pgnsa, Invivogen, SanDiego CA, USA)刺激分离的嗜中性粒细胞，并且测量释放进入培养基的IL-8。PGLYRP1抗体mAb 0184能够降低PGN-SA-诱导的IL-8释放。如实施例3所述从人健康供体全血分离嗜中性粒细胞并重悬在RPMI/10% FBS中。以1.5x10E6个细胞/ml铺细胞，并且在下列条件下测试三次重复的测试孔：无添加的刺激，仅10μg/ml PGN-SA，或10 μg/ml PGN-SA（在存在4 μg/ml的PGLYRP1抗体或hIgG4同种型对照抗体的情况下）。样品在37℃，5% CO₂培养箱中培养24小时。然后收获上清液并使用BioplexPro Human Cytokine IL-8套装(目录号 171-B5008M, BioRad, Hercules CA, USA)分析IL-8。

此实施例表明从通过用细菌衍生的PGN-SA刺激诱导的嗜中性粒细胞的IL-8释放可以被抗-PGLYRP1抗体减少。TREM-1配体PGLYRP1因此是嗜中性粒细胞的自分泌刺激物，并且本文所公开的PGLYRP1抗体潜在地可用于下调嗜中性粒细胞应答。

尽管本文已阐释并描述了本发明的某些特征，但是很多修饰、替换、变化和等价形式将对于本领域普通技术人员是显而易见的。因此，应当理解，所附的实施方案意在涵盖所有这些修饰和变化，落入本发明的真实精神内。

序列表

<110> Novo Nordisk A/S

<120> 结合肽聚糖识别蛋白1的抗体

<130> 8498

<160> 53

<170> PatentIn 版本 3.5

<210> 1

<211> 175

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 1

Gln Glu Thr Glu Asp Pro Ala Cys Cys Ser Pro Ile Val Pro Arg Asn

1 5 10 15

Glu Trp Lys Ala Leu Ala Ser Glu Cys Ala Gln His Leu Ser Leu Pro

20 25 30

Leu Arg Tyr Val Val Val Ser His Thr Ala Gly Ser Ser Cys Asn Thr

35 40 45

Pro Ala Ser Cys Gln Gln Gln Ala Arg Asn Val Gln His Tyr His Met

50 55 60

Lys Thr Leu Gly Trp Cys Asp Val Gly Tyr Asn Phe Leu Ile Gly Glu

65 70 75 80

Asp Gly Leu Val Tyr Glu Gly Arg Gly Trp Asn Phe Thr Gly Ala His

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Ser Gly His Leu Trp Asn Pro Met Ser Ile Gly Ile Ser Phe Met Gly

100 105 110

Asn Tyr Met Asp Arg Val Pro Thr Pro Gln Ala Ile Arg Ala Ala Gln

115 120 125

Gly Leu Leu Ala Cys Gly Val Ala Gln Gly Ala Leu Arg Ser Asn Tyr

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Val Leu Lys Gly His Arg Asp Val Gln Arg Thr Leu Ser Pro Gly Asn

145 150 155 160

Gln Leu Tyr His Leu Ile Gln Asn Trp Pro His Tyr Arg Ser Pro

165 170 175

<210> 2

<211> 617

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> TREM ECD+Fc6mut

<400> 2

Glu Leu Arg Ala Ala Thr Lys Leu Thr Glu Glu Lys Tyr Glu Leu Lys

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Glu Gly Gln Thr Leu Asp Val Lys Cys Asp Tyr Thr Leu Glu Lys Phe

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Ala Ser Ser Gln Lys Ala Trp Gln Ile Ile Arg Asp Gly Glu Met Pro

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145 150 155 160

Pro Lys Ser Thr Ala Asp Val Ser Thr Pro Asp Ser Glu Ile Asn Leu

165 170 175

Thr Asn Val Thr Asp Ile Ile Arg Gly Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly

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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Leu Arg Ala Ala Thr Lys

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Glu Asp Tyr His Asp His Gly Leu Leu Arg Val Arg Met Val Asn Leu

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Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

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Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610 615

<210> 3

<211> 228

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> Fc5mut

<400> 3

Ala Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu

1 5 10 15

Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

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Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

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50 55 60

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225

<210> 4

<211> 358

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 用于五聚体的hDCIR ECD COMP

<400> 4

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<210> 5

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<212> PRT

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<220>

<223> 用于五聚体的hTREM-1 ECD COMP

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<212> PRT

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<220>

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115 120 125

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165 170 175

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325 330 335

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340 345 350

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355 360 365

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

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Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

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Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

405 410 415

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

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Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

435 440 445

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

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Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

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485 490 495

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<210> 7

<211> 684

<212> DNA

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<220>

<223> hPGYRP1-GPI

<400> 7

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cgactcggag cggctcagga gacagaagac ccggcctgct gcagccccat agtgccccgg 120

aacgagtgga aggccctggc atcagagtgc gcccagcacc tgagcctgcc cttacgctat 180

gtggtggtat cgcacacggc gggcagcagc tgcaacaccc ccgcctcgtg ccagcagcag 240

gcccggaatg tgcagcacta ccacatgaag acactgggct ggtgcgacgt gggctacaac 300

ttcctgattg gagaagacgg gctcgtatac gagggccgtg gctggaactt cacgggtgcc 360

cactcaggtc acttatggaa ccccatgtcc attggcatca gcttcatggg caactacatg 420

gatcgggtgc ccacacccca ggccatccgg gcagcccagg gtctactggc ctgcggtgtg 480

gctcagggag ccctgaggtc caactatgtg ctcaaaggac accgggatgt gcagcgtaca 540

ctctctccag gcaaccagct ctaccacctc atccagaatt ggccacacta ccgctccccc 600

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<210> 8

<211> 180

<212> PRT

<213> 智人

<400> 8

Ala Thr Lys Leu Thr Glu Glu Lys Tyr Glu Leu Lys Glu Gly Gln Thr

1 5 10 15

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100 105 110

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<211> 1221

<212> DNA

<213> 人工的

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<223> hTREM ECD x2

<400> 9

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agccacccag tgcaggtcgg ccgaatcatt ctggaggact accacgatca tgggctgctg 300

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ggcagcggcg ggggatctgg ggacctggcc cctcagatgc tgagggagct gcaggaaacc 720

aacgccgctc tgcaggatgt gcgggagctg ctgagacagc aggtgaagga aatcacattt 780

ctgaaaaata ctgtgatgga gtgcgacgct tgtggaatgc agccagctag gacacctgga 840

ctgagcgtgg gaggaggaag tggaggagga tcaggaggag gaagcatgga tgagaagacc 900

acaggatgga gaggaggaca cgtggtggaa ggactggctg gagagctgga acagctgagg 960

gctagactgg agcaccatcc acagggacag agggagccag ggtccggaat ggacgaaaaa 1020

actaccggat ggaggggagg acacgtggtg gagggcctgg ccggcgaact ggagcagctg 1080

agagctcgcc tggaacacca tcctcagggc cagagagagc cagaggacct gtacttccag 1140

tctcaccatc accatcacca ttaaggatcc 1170

<210> 11

<211> 867

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 用于四聚体的hCD83

<400> 11

gaattcgcca ccatgcctct gctgctgctg ctgccactgc tgtgggctgg cgctctggct 60

accccagagg tgaaggtggc ttgctccgaa gacgtggatc tgccttgtac agccccctgg 120

gaccctcagg tgccatacac cgtgagctgg gtgaaactgc tggagggcgg ggaggaacgg 180

atggagacac cacaggaaga ccacctgaga gggcagcact atcatcagaa ggggcagaac 240

ggatctttcg atgctcccaa tgaacggcct tacagtctga aaatcagaaa caccacaagc 300

tgcaattccg gcacatatag gtgtactctg caggaccctg atggacagcg caacctgagc 360

ggcaaagtga tcctgcgggt gacaggctgc ccagctcaga gaaaggagga aacttttaag 420

aagtaccggg ccgagggtac cggaggcggg ggatccggag gaggaggaag cggaggagga 480

ggatccactc ctgaagtgaa ggtggcttgc agtgaagacg tggatctgcc ctgtaccgcc 540

ccctgggatc ctcaggtgcc atacacagtg tcttgggtga agctgctgga gggaggcgag 600

gaacggatgg agacccctca ggaagaccat ctgagaggcc agcattacca tcagaagggc 660

cagaacgggt cattcgatgc cccaaatgaa aggccctaca gcctgaaaat ccgcaacact 720

acctcttgca atagtggaac ctataggtgt acactgcagg accccgatgg gcagcgcaat 780

ctgtccggca aagtgatcct gagggtgact ggctgtcctg ctcagcgcaa agaggaaacc 840

tttaagaaat atagggccga ggggccc 867

<210> 12

<211> 1143

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> hDCIR COMP

<400> 12

gaattcgcca ccatgccact gctgctgctg ctgccactgc tgtgggctgg agctctggct 60

caccatcacc atcaccatga ggacctgtac ttccagtcca tggatgaaaa gaccacagga 120

tggaggggag gacacgtggt ggagggactg gctggagagc tggaacagct gagggctaga 180

ctggaacacc atcctcaggg ccagagggag ccagggtctg gaatggacga aaaaactacc 240

ggctggagag gcggccatgt cgtcgaaggc ctggccggcg aactggagca gctgagagct 300

aggctggagc accatccaca gggacagagg gaacctggag gaggcagcgg aggaggctcc 360

ggaggaggct ctggcgacct ggccccacag atgctgagag agctgcagga aaccaacgcc 420

gctctgcagg atgtgcggga gctgctgaga cagcaggtga aggaaatcac attcctgaaa 480

aatactgtga tggagtgcga tgcttgtgga atgcagccag ctaggacacc tggactgagc 540

gtgggaggag gcagtggagg aggctcagga ggaggcagcc tggaggtgct gtttcagggc 600

cccagatcta ttgcttttgt cattttcttt caaaaatatt ctcagcttct tgaaaaaaag 660

actacaaaag agctggttca tacaacattg gagtgtgtga aaaaaaatat gcccgtggaa 720

gagacagcct ggagctgttg cccaaagaat tggaagtcat ttagttccaa ctgctacttt 780

atttctactg aatcagcatc ttggcaagac agtgagaagg actgtgctag aatggaggct 840

cacctgctgg tgataaacac tcaagaagag caggatttca tcttccagaa tctgcaagaa 900

gaatctgctt attttgtggg gctctcagat ccagaaggtc agcgacattg gcaatgggtt 960

gatcagacac catacaatga aagttccaca ttctggcatc cacgtgagcc cagtgatccc 1020

aatgagcgct gcgttgtgct aaattttcgt aaatcaccca aaagatgggg ctggaatgat 1080

gttaattgtc ttggtcctca aaggtcagtt tgtgagatga tgaagatcca cttatgagga 1140

tcc 1143

<210> 13

<211> 426

<212> DNA

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 13

aagcttgccg ccaccatgcc tctgctgctg ctgctgcctc tgctgtgggc cggggctctg 60

gctcaggtcc agctgcagca gcctggggcc gaactggtcc gaccaggggc atctgtgaaa 120

ctgagttgca aggcctctgg atacagtttc acctcatatt ggatgaactg ggtcaaacag 180

cgaccaggac agggactgga gtggatcggc atgattcacc ctagcgactc cgaaacaaga 240

ctgaatcaga agtttaaaga caaggctacc ctgacagtgg ataagagctc ctctacagca 300

tacatgcagc tgagttcacc cactagcgag gactccgccg tctactattg tgctagggat 360

tactctgact atgatgggtt cgcctattgg ggacagggca ctctggtgac cgtcagcgct 420

gctagc 426

<210> 14

<211> 390

<212> DNA

<213> 小家鼠

<400> 14

aagcttgccg ccaccatgcc tctgctgctg ctgctgcctc tgctgtgggc tggggctctg 60

gctgatattg tgatgactca gtcacccgct accctgtccg tgacaccagg ggaccgggtg 120

agcctgtcct gcagagcctc tcagagtatc tcagattacc tgcactggta tcagcagaag 180

tctcatgaga gtcccaggct gctgatcaag tacgccagcc agtccatctc tggcattcct 240

tcccggttca gtggctcagg gagcggatcc gactttactc tgtctatcaa cagcgtcgag 300

ccagaagatg tgggagtcta ctattgtcag aatggccaca gcttccccct gacctttggc 360

accgggacaa agctggaact gaaacgtacg 390

<210> 15

<211> 446

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 15

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Met Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Tyr Ser Asp Tyr Asp Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 16

<211> 214

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 16

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 17

<211> 429

<212> DNA

<213> 小家鼠

<400> 17

aagcttgccg ccaccatgcc tctgctgctg ctgctgcctc tgctgtgggc cggagccctg 60

gccgaaatcc agctgcagca gtcaggacct gaactggtga aacccggggc ctcagtgaaa 120

gtcagctgca tggcttcagt gtacagcttc accgactaca acatgtattg ggtcaaacag 180

tcccggggga agtctctgga gtggatcgga tacattgacc cttataacgg cgatacatcc 240

tataatcaga agttcaaagg caaggcaact ctgaccgtgg acaagagctc caacacagcc 300

tttatgcacc tgaattccct gacttctgaa gatagtgctg tctactattg tatcagagga 360

gactacggca atccctttta cctggattat tggggccagg ggaccacact gaccgtgtct 420

agtgctagc 429

<210> 18

<211> 387

<212> DNA

<213> 小家鼠

<400> 18

aagcttgccg ccaccatgcc cctgctgctg ctgctgcctc tgctgtgggc cggcgcactg 60

gctcagattg tcctgattca gtctcccgcc atcgtgtccg cttcccctgg ggagaaggtg 120

accatgacat gcagcgtgag ctcctctgtc aactacatgt attggtacca gcagaagagc 180

ggaacatccc ccaaacggtg gatctatgac acttctaaac tgccaagtgg agtcccagca 240

agattcagcg gatccggatc tggaactagt tactcactga ccattagttc aatggaggcc 300

gaagatgccg ctacatacta ttgtcagcag tggacatcta acccccctac ttttggcagc 360

gggaccaatc tggaaatcaa gcgtacg 387

<210> 19

<211> 447

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 19

Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Met Ala Ser Val Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met Tyr Trp Val Lys Gln Ser Arg Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Phe

65 70 75 80

Met His Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ile Arg Gly Asp Tyr Gly Asn Pro Phe Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 20

<211> 213

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 20

Gln Ile Val Leu Ile Gln Ser Pro Ala Ile Val Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Val Asn Tyr Met

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Pro Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Ser Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 21

<211> 426

<212> DNA

<213> 小家鼠

<400> 21

aagcttgccg ccaccatgcc cctgctgctg ctgctgcctc tgctgtgggc cggagccctg 60

gccgaagtcc agctgcagca gtctggcgct gagtttgtga agccaggggc aagcgtgaag 120

ctgtcctgca ccgcctctgg attcaacatc aaagacacat acattcactg ggtcaatcag 180

cggcccgagc agggactgga atggatcggc agaattgacc ccgccaacga cgatactaag 240

tacgatccta attttcaggg caaagctacc atcacatccg acactagctc caacaccgca 300

tatgtgcagc tgtctagtct gacaagcgag gatactgccg tctactattg tgcttcaagc 360

gacaattccg attcttggtt cgcctattgg ggccagggga cactggtgag tgtctcagct 420

gctagc 426

<210> 22

<211> 387

<212> DNA

<213> 小家鼠

<400> 22

aagcttgccg ccaccatgcc cctgctgctg ctgctgcctc tgctgtgggc tggagccctg 60

gcccagattg tcctgactca gtcccccgct attatgtccg cttcaccagg ggagaaggtg 120

accatcacat gcagtgtgag ctcctctgtc aacttcatga attggtacca gcagaagctg 180

ggaagttcac ccaaactgtg gatctacgac accagcaaac tggcaccagg agtccctgca 240

cggttttcag gaagcggatc cggaacttct tacagtctga ccatcagctc catggagaca 300

gaagatgccg cttcctactt ctgtcaccag tggtctagtt attctctgac atttggcgct 360

gggactaagc tggaactgaa acgtacg 387

<210> 23

<211> 446

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 23

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Phe Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Asn Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asp Pro Asn Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ser Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Val Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Ser Asp Asn Ser Asp Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Ser Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 24

<211> 213

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 24

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Val Asn Phe Met

20 25 30

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Ser Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Thr Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Ser Tyr Ser Leu Thr

85 90 95

Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 25

<211> 420

<212> DNA

<213> 小家鼠

<400> 25

aagcttgccg ccaccatgcc tctgctgctg ctgctgcctc tgctgtgggc cggggctctg 60

gccgagattc agctgcagca gtctggacct gacctggtga aacccggcac ctctgtgaaa 120

gtcagttgca aggcttctgg gtacagtttc acagactata acatgcactg ggtgaaacag 180

tctcatggga agagcctgga gtggatcgga tacgtcgacc cttatgatgg cgggactagc 240

tccaatcaga agttcaaagg caaggcaact ctgaccgtgg ataaatctag ttcaacagcc 300

tttatgcacc tgaagtcact gactagcgag gactccgccg tgtactattg tgctcgggaa 360

gtcccctact attttgatta ctggggacag ggcaccacac tgacagtgag ctccgctagc 420

<210> 26

<211> 384

<212> DNA

<213> 小家鼠

<400> 26

aagcttgccg ccaccatgcc cctgctgctg ctgctgcccc tgctgtgggc cggagctctg 60

gctcagattg tgctgactca gtcccctagt attatgtccg cctcccctgg cgagaaggtg 120

accatgacat gcgtcgccag ctcctctgtg acatacatgt attggtacca gcagaaaagc 180

ggaacctccc cacaggacgg cttcatgaca cacccactgg caagcggagt cccagcacgg 240

tttatcggag gaggatctgg cacaagttat tcactgacta ttagtaacat ggaggccgaa 300

gatgccgcta cttactattg tccccattgg aacactaatc cccctacctt cggctctggg 360

accaagctgg aaatcaatcg tacg 384

<210> 27

<211> 444

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 27

Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Val Asp Pro Tyr Asp Gly Gly Thr Ser Ser Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Phe

65 70 75 80

Met His Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Val Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

225 230 235 240

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

245 250 255

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe

260 265 270

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

275 280 285

Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

290 295 300

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

305 310 315 320

Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

325 330 335

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln

340 345 350

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

355 360 365

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

370 375 380

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

385 390 395 400

Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

405 410 415

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

420 425 430

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440

<210> 28

<211> 212

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 28

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Val Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Gln Asp Gly Phe Met

35 40 45

Thr His Pro Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ile Gly Gly Gly

50 55 60

Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Met Glu Ala Glu Asp

65 70 75 80

Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Pro His Trp Asn Thr Asn Pro Pro Thr Phe

85 90 95

Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser

100 105 110

Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala

115 120 125

Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val

130 135 140

Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser

145 150 155 160

Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr

165 170 175

Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys

180 185 190

Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn

195 200 205

Arg Gly Glu Cys

210

<210> 29

<211> 360

<212> DNA

<213> 小家鼠

<400> 29

gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60

tcctgtgcag cctctggatt ctctttcagt gactattaca tgtattgggt tcgccagact 120

ccggaaaaga ggctggagtg ggtcgcagcc attagtgatg atagtactta cacctactat 180

ccagacagtg tgaaggggcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caacctgtac 240

ctgcaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgc aagagggggg 300

tatggtaacc tctatgctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 360

<210> 30

<211> 327

<212> DNA

<213> 小家鼠

<400> 30

caaattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctctagggga acgggtcacc 60

atgacctgca ctgccagctc aagtgtaagt tccagttact tgcactggta ccagcagaag 120

ccaggatcct cccccaaact ctggatttat agcacatcca acctggcttc tggagtccca 180

gctcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagcatggag 240

gctgaagatg ctgccactta ttactgccac cagtatcatc gttccccatt cacgttcggc 300

tcggggacaa agttggaaat aaaacgg 327

<210> 31

<211> 120

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 31

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ala Ile Ser Asp Asp Ser Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Gly Asn Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 32

<211> 109

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 32

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Trp

35 40 45

Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu

65 70 75 80

Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro

85 90 95

Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 33

<211> 360

<212> DNA

<213> 小家鼠

<400> 33

gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag gtggtaaagc ctgggacttc agtgaagatg 60

tcctgcaagg cttctggata cacattcact aactatgtta tgcactgggt gaggcagaag 120

cctgggcagg gccttgaatg ggttggatgg attaatccct tcaatgatgg tacaaattat 180

aatgagaact tcaaaaacaa ggccacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240

atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagatccggt 300

tttattacta cacttataga agactactgg ggccaaggca ccactctcac agtctcctca 360

<210> 34

<211> 321

<212> DNA

<213> 小家鼠

<400> 34

aacattgtga tgacccaatc tcccaaatac atgtccatgt cagtaggaga gagggtcacc 60

ttgacctgca aggccagtga gagtgtggga agttttgtat cctggtatca acagaaagca 120

gaccagtctc ctaacctact gatatacggg gcatccaacc ggtacactgg ggtccccgat 180

cgcttcacag gcagtggatc tgcaagagat ttcactctga ccatcagtag tgtgcaggct 240

aaagaccttg cagaatatta ctgtggacag tattacaccc atcccacgtt cggtgctggg 300

accaagctgg agctgaaacg g 321

<210> 35

<211> 120

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 35

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Val Met His Trp Val Arg Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val

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Gly Trp Ile Asn Pro Phe Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Asn Phe

50 55 60

Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Phe Ile Thr Thr Leu Ile Glu Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 36

<211> 107

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 36

Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Tyr Met Ser Met Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Arg Val Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Gly Ser Phe

20 25 30

Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Asp Gln Ser Pro Asn Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Ala Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65 70 75 80

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85 90 95

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100 105

<210> 37

<211> 200

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> II型 1.0 PGLYRP1

<400> 37

Met Asn Trp His Met Ile Ile Ser Gly Leu Ile Val Val Val Leu Lys

1 5 10 15

Val Val Gly Met Thr Leu Phe Leu Leu Gln Glu Thr Glu Asp Pro Ala

20 25 30

Cys Cys Ser Pro Ile Val Pro Arg Asn Glu Trp Lys Ala Leu Ala Ser

35 40 45

Glu Cys Ala Gln His Leu Ser Leu Pro Leu Arg Tyr Val Val Val Ser

50 55 60

His Thr Ala Gly Ser Ser Cys Asn Thr Pro Ala Ser Cys Gln Gln Gln

65 70 75 80

Ala Arg Asn Val Gln His Tyr His Met Lys Thr Leu Gly Trp Cys Asp

85 90 95

Val Gly Tyr Asn Phe Leu Ile Gly Glu Asp Gly Leu Val Tyr Glu Gly

100 105 110

Arg Gly Trp Asn Phe Thr Gly Ala His Ser Gly His Leu Trp Asn Pro

115 120 125

Met Ser Ile Gly Ile Ser Phe Met Gly Asn Tyr Met Asp Arg Val Pro

130 135 140

Thr Pro Gln Ala Ile Arg Ala Ala Gln Gly Leu Leu Ala Cys Gly Val

145 150 155 160

Ala Gln Gly Ala Leu Arg Ser Asn Tyr Val Leu Lys Gly His Arg Asp

165 170 175

Val Gln Arg Thr Leu Ser Pro Gly Asn Gln Leu Tyr His Leu Ile Gln

180 185 190

Asn Trp Pro His Tyr Arg Ser Pro

195 200

<210> 38

<211> 210

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> II型 2.0 PGLYRP1

<400> 38

Met Asn Trp His Met Ile Ile Ser Gly Leu Ile Val Val Val Leu Leu

1 5 10 15

Val Val Gly Met Thr Leu Phe Leu Leu Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp

20 25 30

Lys Gly Ser Gln Glu Thr Glu Asp Pro Ala Cys Cys Ser Pro Ile Val

35 40 45

Pro Arg Asn Glu Trp Lys Ala Leu Ala Ser Glu Cys Ala Gln His Leu

50 55 60

Ser Leu Pro Leu Arg Tyr Val Val Val Ser His Thr Ala Gly Ser Ser

65 70 75 80

Cys Asn Thr Pro Ala Ser Cys Gln Gln Gln Ala Arg Asn Val Gln His

85 90 95

Tyr His Met Lys Thr Leu Gly Trp Cys Asp Val Gly Tyr Asn Phe Leu

100 105 110

Ile Gly Glu Asp Gly Leu Val Tyr Glu Gly Arg Gly Trp Asn Phe Thr

115 120 125

Gly Ala His Ser Gly His Leu Trp Asn Pro Met Ser Ile Gly Ile Ser

130 135 140

Phe Met Gly Asn Tyr Met Asp Arg Val Pro Thr Pro Gln Ala Ile Arg

145 150 155 160

Ala Ala Gln Gly Leu Leu Ala Cys Gly Val Ala Gln Gly Ala Leu Arg

165 170 175

Ser Asn Tyr Val Leu Lys Gly His Arg Asp Val Gln Arg Thr Leu Ser

180 185 190

Pro Gly Asn Gln Leu Tyr His Leu Ile Gln Asn Trp Pro His Tyr Arg

195 200 205

Ser Pro

210

<210> 39

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 表位标签

<400> 39

Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys

1 5

<210> 40

<211> 589

<212> PRT

<213> 智人

<400> 40

Met Asn Trp His Met Ile Ile Ser Gly Leu Ile Val Val Val Leu Leu

1 5 10 15

Val Val Gly Met Thr Leu Phe Leu Leu Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp

20 25 30

Asp Lys Ser Leu Pro Leu Leu Met Asp Ser Val Ile Gln Ala Leu Ala

35 40 45

Glu Leu Glu Gln Lys Val Pro Ala Ala Lys Thr Arg His Thr Ala Ser

50 55 60

Ala Trp Leu Met Ser Ala Pro Asn Ser Gly Pro His Asn Arg Leu Tyr

65 70 75 80

His Phe Leu Leu Gly Ala Trp Ser Leu Asn Ala Thr Glu Leu Asp Pro

85 90 95

Cys Pro Leu Ser Pro Glu Leu Leu Gly Leu Thr Lys Glu Val Ala Arg

100 105 110

His Asp Val Arg Glu Gly Lys Glu Tyr Gly Val Val Leu Ala Pro Asp

115 120 125

Gly Ser Thr Val Ala Val Glu Pro Leu Leu Ala Gly Leu Glu Ala Gly

130 135 140

Leu Gln Gly Arg Arg Val Ile Asn Leu Pro Leu Asp Ser Met Ala Ala

145 150 155 160

Pro Trp Glu Thr Gly Asp Thr Phe Pro Asp Val Val Ala Ile Ala Pro

165 170 175

Asp Val Arg Ala Thr Ser Ser Pro Gly Leu Arg Asp Gly Ser Pro Asp

180 185 190

Val Thr Thr Ala Asp Ile Gly Ala Asn Thr Pro Asp Ala Thr Lys Gly

195 200 205

Cys Pro Asp Val Gln Ala Ser Leu Pro Asp Ala Lys Ala Lys Ser Pro

210 215 220

Pro Thr Met Val Asp Ser Leu Leu Ala Val Thr Leu Ala Gly Asn Leu

225 230 235 240

Gly Leu Thr Phe Leu Arg Gly Ser Gln Thr Gln Ser His Pro Asp Leu

245 250 255

Gly Thr Glu Gly Cys Trp Asp Gln Leu Ser Ala Pro Arg Thr Phe Thr

260 265 270

Leu Leu Asp Pro Lys Ala Ser Leu Leu Thr Met Ala Phe Leu Asn Gly

275 280 285

Ala Leu Asp Gly Val Ile Leu Gly Asp Tyr Leu Ser Arg Thr Pro Glu

290 295 300

Pro Arg Pro Ser Leu Ser His Leu Leu Ser Gln Tyr Tyr Gly Ala Gly

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Val Ala Arg Asp Pro Gly Phe Arg Ser Asn Phe Arg Arg Gln Asn Gly

325 330 335

Ala Ala Leu Thr Ser Ala Ser Ile Leu Ala Gln Gln Val Trp Gly Thr

340 345 350

Leu Val Leu Leu Gln Arg Leu Glu Pro Val His Leu Gln Leu Gln Cys

355 360 365

Met Ser Gln Glu Gln Leu Ala Gln Val Ala Ala Asn Ala Thr Lys Glu

370 375 380

Phe Thr Glu Ala Phe Leu Gly Cys Pro Ala Ile His Pro Arg Cys Arg

385 390 395 400

Trp Gly Ala Ala Pro Tyr Arg Gly Arg Pro Lys Leu Leu Gln Leu Pro

405 410 415

Leu Gly Phe Leu Tyr Val His His Thr Tyr Val Pro Ala Pro Pro Cys

420 425 430

Thr Asp Phe Thr Arg Cys Ala Ala Asn Met Arg Ser Met Gln Arg Tyr

435 440 445

His Gln Asp Thr Gln Gly Trp Gly Asp Ile Gly Tyr Ser Phe Val Val

450 455 460

Gly Ser Asp Gly Tyr Val Tyr Glu Gly Arg Gly Trp His Trp Val Gly

465 470 475 480

Ala His Thr Leu Gly His Asn Ser Arg Gly Phe Gly Val Ala Ile Val

485 490 495

Gly Asn Tyr Thr Ala Ala Leu Pro Thr Glu Ala Ala Leu Arg Thr Val

500 505 510

Arg Asp Thr Leu Pro Ser Cys Ala Val Arg Ala Gly Leu Leu Arg Pro

515 520 525

Asp Tyr Ala Leu Leu Gly His Arg Gln Leu Val Arg Thr Asp Cys Pro

530 535 540

Gly Asp Ala Leu Phe Asp Leu Leu Arg Thr Trp Pro His Phe Thr Ala

545 550 555 560

Thr Val Lys Pro Arg Pro Ala Arg Ser Val Ser Lys Arg Ser Arg Arg

565 570 575

Glu Pro Pro Pro Arg Thr Leu Pro Ala Thr Asp Leu Gln

580 585

<210> 41

<211> 355

<212> PRT

<213> 智人

<400> 41

Met Asn Trp His Met Ile Ile Ser Gly Leu Ile Val Val Val Leu Leu

1 5 10 15

Val Val Gly Met Thr Leu Phe Leu Leu Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp

20 25 30

Asp Lys Trp Asp Thr Pro Thr Ile Val Ser Arg Lys Glu Trp Gly Ala

35 40 45

Arg Pro Leu Ala Cys Arg Ala Leu Leu Thr Leu Pro Val Ala Tyr Ile

50 55 60

Ile Thr Gln Leu Pro Gly Met Gln Cys Gln Gln Gln Ser Val Cys Ser

65 70 75 80

Gln Met Leu Arg Gly Leu Gln Ser His Ser Val Tyr Thr Ile Gly Trp

85 90 95

Cys Asp Val Ala Tyr Asn Phe Leu Val Gly Asp Asp Gly Arg Val Tyr

100 105 110

Glu Gly Val Gly Trp Asn Ile Gln Gly Leu His Thr Gln Gly Tyr Asn

115 120 125

Asn Ile Ser Leu Gly Ile Ala Phe Phe Gly Asn Lys Ile Gly Ser Ser

130 135 140

Pro Ser Pro Ala Ala Leu Ser Ala Ala Glu Gly Leu Ile Ser Tyr Ala

145 150 155 160

Ile Gln Lys Gly His Leu Ser Pro Arg Tyr Ile Gln Pro Leu Leu Leu

165 170 175

Lys Glu Glu Thr Cys Leu Asp Pro Gln His Pro Val Met Pro Arg Lys

180 185 190

Val Cys Pro Asn Ile Ile Lys Arg Ser Ala Trp Glu Ala Arg Glu Thr

195 200 205

His Cys Pro Lys Met Asn Leu Pro Ala Lys Tyr Val Ile Ile Ile His

210 215 220

Thr Ala Gly Thr Ser Cys Thr Val Ser Thr Asp Cys Gln Thr Val Val

225 230 235 240

Arg Asn Ile Gln Ser Phe His Met Asp Thr Arg Asn Phe Cys Asp Ile

245 250 255

Gly Tyr His Phe Leu Val Gly Gln Asp Gly Val Tyr Glu Gly Val Gly

260 265 270

Trp His Ile Gln Gly Ser His Thr Tyr Gly Phe Asn Asp Ile Ala Leu

275 280 285

Gly Ile Ala Phe Ile Gly Tyr Phe Val Glu Lys Pro Pro Asn Ala Ala

290 295 300

Ala Leu Glu Ala Ala Gln Asp Leu Ile Gln Cys Ala Val Val Glu Gly

305 310 315 320

Tyr Leu Thr Pro Asn Tyr Leu Leu Met Gly His Ser Asp Val Asn Ile

325 330 335

Leu Ser Pro Gly Gln Ala Leu Tyr Asn Ile Ile Ser Thr Trp Pro His

340 345 350

Phe Lys His

355

<210> 42

<211> 390

<212> PRT

<213> 智人

<400> 42

Met Asn Trp His Met Ile Ile Ser Gly Leu Ile Val Val Val Leu Leu

1 5 10 15

Val Val Gly Met Thr Leu Phe Leu Leu Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp

20 25 30

Asp Lys Asp Ser Ser Trp Asn Lys Thr Gln Ala Lys Gln Val Ser Glu

35 40 45

Gly Leu Gln Tyr Leu Phe Glu Asn Ile Ser Gln Leu Thr Glu Lys Gly

50 55 60

Leu Pro Thr Asp Val Ser Thr Thr Val Ser Arg Lys Ala Trp Gly Ala

65 70 75 80

Glu Ala Val Gly Cys Ser Ile Gln Leu Thr Thr Pro Val Asn Val Leu

85 90 95

Val Ile His His Val Pro Gly Leu Glu Cys His Asp Gln Thr Val Cys

100 105 110

Ser Gln Arg Leu Arg Glu Leu Gln Ala His His Val His Asn Asn Ser

115 120 125

Gly Cys Asp Val Ala Tyr Asn Phe Leu Val Gly Asp Asp Gly Arg Val

130 135 140

Tyr Glu Gly Val Gly Trp Asn Ile Gln Gly Val His Thr Gln Gly Tyr

145 150 155 160

Asn Asn Ile Ser Leu Gly Phe Ala Phe Phe Gly Thr Lys Lys Gly His

165 170 175

Ser Pro Ser Pro Ala Ala Leu Ser Ala Met Glu Asn Leu Ile Thr Tyr

180 185 190

Ala Val Gln Lys Gly His Leu Ser Ser Ser Tyr Val Gln Pro Leu Leu

195 200 205

Gly Lys Gly Glu Asn Cys Leu Ala Pro Arg Gln Lys Thr Ser Leu Lys

210 215 220

Lys Ala Cys Pro Gly Val Val Pro Arg Ser Val Trp Gly Ala Arg Glu

225 230 235 240

Thr His Cys Pro Arg Met Thr Leu Pro Ala Lys Tyr Gly Ile Ile Ile

245 250 255

His Thr Ala Gly Arg Thr Cys Asn Ile Ser Asp Glu Cys Arg Leu Leu

260 265 270

Val Arg Asp Ile Gln Ser Phe Tyr Ile Asp Arg Leu Lys Ser Cys Asp

275 280 285

Ile Gly Tyr Asn Phe Leu Val Gly Gln Asp Gly Ala Ile Tyr Glu Gly

290 295 300

Val Gly Trp Asn Val Gln Gly Ser Ser Thr Pro Gly Tyr Asp Asp Ile

305 310 315 320

Ala Leu Gly Ile Thr Phe Met Gly Thr Phe Thr Gly Ile Pro Pro Asn

325 330 335

Ala Ala Ala Leu Glu Ala Ala Gln Asp Leu Ile Gln Cys Ala Met Val

340 345 350

Lys Gly Tyr Leu Thr Pro Asn Tyr Leu Leu Val Gly His Ser Asp Val

355 360 365

Ala Arg Thr Leu Ser Pro Gly Gln Ala Leu Tyr Asn Ile Ile Ser Thr

370 375 380

Trp Pro His Phe Lys His

385 390

<210> 43

<211> 1317

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> huCD33-huTrem1 ECD(aa17-200)-Fc6mut

<400> 43

gaattcgcaa ctatgcctct gctgctgctg ctgcctctgc tgtgggctgg cgcactggct 60

gaactgaggg ccgctaccaa actgaccgaa gaaaagtacg agctgaaaga agggcagacc 120

ctggacgtga agtgcgatta tacactggaa aagttcgcaa gctcccagaa agcctggcag 180

atcattagag acggagagat gcccaagact ctggcttgta ccgaacgccc ttcaaaaaac 240

agccacccag tgcaggtcgg ccgaatcatt ctggaggact accacgatca tgggctgctg 300

cgggtgagaa tggtcaatct gcaggtggag gactccggcc tgtaccagtg cgtcatctat 360

cagcccccta aggaaccaca tatgctgttc gataggattc gcctggtggt cactaaaggc 420

ttttctggga cccccggaag taacgagaac agcacccaga acgtgtacaa gatcccaccc 480

accacaacta aggccctgtg ccccctgtat acatctcctc gaaccgtgac acaggcccct 540

ccaaagagta ccgctgacgt gagcacaccc gattccgaga ttaacctgac aaatgtgact 600

gacatcatta ggggtaccga gcccaaatct tctgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 660

ccagcacctg aagccgaggg ggcaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 720

accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 780

gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 840

aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 900

caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 960

tcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1020

accctgcccc catcccggga ggagatgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1080

aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1140

aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctatagcaag 1200

ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1260

gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtccccggg taaatga 1317

<210> 44

<211> 434

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> huCD33-huTrem1 ECD(aa17-200)-Fc6mut

<400> 44

Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala

1 5 10 15

Glu Leu Arg Ala Ala Thr Lys Leu Thr Glu Glu Lys Tyr Glu Leu Lys

20 25 30

Glu Gly Gln Thr Leu Asp Val Lys Cys Asp Tyr Thr Leu Glu Lys Phe

35 40 45

Ala Ser Ser Gln Lys Ala Trp Gln Ile Ile Arg Asp Gly Glu Met Pro

50 55 60

Lys Thr Leu Ala Cys Thr Glu Arg Pro Ser Lys Asn Ser His Pro Val

65 70 75 80

Gln Val Gly Arg Ile Ile Leu Glu Asp Tyr His Asp His Gly Leu Leu

85 90 95

Arg Val Arg Met Val Asn Leu Gln Val Glu Asp Ser Gly Leu Tyr Gln

100 105 110

Cys Val Ile Tyr Gln Pro Pro Lys Glu Pro His Met Leu Phe Asp Arg

115 120 125

Ile Arg Leu Val Val Thr Lys Gly Phe Ser Gly Thr Pro Gly Ser Asn

130 135 140

Glu Asn Ser Thr Gln Asn Val Tyr Lys Ile Pro Pro Thr Thr Thr Lys

145 150 155 160

Ala Leu Cys Pro Leu Tyr Thr Ser Pro Arg Thr Val Thr Gln Ala Pro

165 170 175

Pro Lys Ser Thr Ala Asp Val Ser Thr Pro Asp Ser Glu Ile Asn Leu

180 185 190

Thr Asn Val Thr Asp Ile Ile Arg Gly Thr Glu Pro Lys Ser Ser Asp

195 200 205

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala

210 215 220

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

225 230 235 240

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

245 250 255

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

260 265 270

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

275 280 285

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

290 295 300

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu

305 310 315 320

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

325 330 335

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

340 345 350

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

355 360 365

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

370 375 380

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

385 390 395 400

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

405 410 415

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

420 425 430

Gly Lys

<210> 45

<211> 1206

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> huCD33-huTremL1 ECD(aa16-162)-Fc6mut

<400> 45

gaattcgcca ccatgcctct gctgctgctg ctgcctctgc tgtgggctgg cgcactggct 60

cagggcatag ttggcagcct ccctgaggtg ctgcaggcac ccgtgggaag ctccattctg 120

gtgcagtgcc actacaggct ccaggatgtc aaagctcaga aggtgtggtg ccggttcttg 180

ccggaggggt gccagcccct ggtgtcctca gctgtggatc gcagagctcc agcgggcagg 240

cgtacgtttc tcacagacct gggtgggggc ctgctgcagg tggaaatggt taccctgcag 300

gaagaggatg ctggcgagta tggctgcatg gtggatgggg ccagggggcc ccagattttg 360

cacagagtct ctctgaacat actgccccca gaggaagaag aagagaccca taagattggc 420

agtctggctg agaacgcatt ctcagaccct gcaggcagtg ccaacccttt ggaacccagc 480

caggatgaga agagcatccc cggtaccgag cccaaatctt ctgacaaaac tcacacatgc 540

ccaccgtgcc cagcacctga agccgagggg gcaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 600

cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 660

agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 720

gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 780

accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 840

gccctcccat cctccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 900

caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 960

tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1020

ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1080

tatagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1140

gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtccccgggt 1200

aaatga 1206

<210> 46

<211> 397

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> huCD33-huTremL1 ECD(aa16-162)-Fc6mut

<400> 46

Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala

1 5 10 15

Gln Gly Ile Val Gly Ser Leu Pro Glu Val Leu Gln Ala Pro Val Gly

20 25 30

Ser Ser Ile Leu Val Gln Cys His Tyr Arg Leu Gln Asp Val Lys Ala

35 40 45

Gln Lys Val Trp Cys Arg Phe Leu Pro Glu Gly Cys Gln Pro Leu Val

50 55 60

Ser Ser Ala Val Asp Arg Arg Ala Pro Ala Gly Arg Arg Thr Phe Leu

65 70 75 80

Thr Asp Leu Gly Gly Gly Leu Leu Gln Val Glu Met Val Thr Leu Gln

85 90 95

Glu Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Gly Cys Met Val Asp Gly Ala Arg Gly

100 105 110

Pro Gln Ile Leu His Arg Val Ser Leu Asn Ile Leu Pro Pro Glu Glu

115 120 125

Glu Glu Glu Thr His Lys Ile Gly Ser Leu Ala Glu Asn Ala Phe Ser

130 135 140

Asp Pro Ala Gly Ser Ala Asn Pro Leu Glu Pro Ser Gln Asp Glu Lys

145 150 155 160

Ser Ile Pro Gly Thr Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys

165 170 175

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu

180 185 190

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

195 200 205

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

210 215 220

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

225 230 235 240

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

245 250 255

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

260 265 270

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

275 280 285

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

290 295 300

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

305 310 315 320

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

325 330 335

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

340 345 350

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

355 360 365

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

370 375 380

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

385 390 395

<210> 47

<211> 1515

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> huCD33-huTremL2 ECD(aa19-268)-Fc6mut

<400> 47

gaattcgcca ccatgcctct gctgctgctg ctgcctctgc tgtgggctgg cgcactggct 60

ggcccctctg ctgacagtgt atacacaaaa gtgaggctcc ttgaagggga gactctgtct 120

gtgcagtgct cctataaggg ctacaaaaac cgcgtggagg gcaaggtttg gtgcaaaatc 180

aggaagaaga agtgtgagcc tggctttgcc cgagtctggg tgaaagggcc ccgctacttg 240

ctgcaggacg atgcccaggc caaggtggtc aacatcacca tggtggccct caagctccag 300

gactcaggcc gatactggtg catgcgcaac acctctggga tcctgtaccc cttgatgggc 360

ttccagctgg atgtgtctcc agctccccaa actgagagga acattccttt cacacatctg 420

gacaacatcc tcaagagtgg aactgtcaca actggccaag cccctacctc aggccctgat 480

gcccctttta ccactggtgt gatggtgttc accccaggac tcatcacctt gcctaggctc 540

ttagcctcca ccagacctgc ctccaagaca ggctacagct tcactgctac cagcaccacc 600

agccagggac ccaggaggac catggggtcc cagacagtga ccgcgtctcc cagcaatgcc 660

agggactcct ctgctggccc agaatccatc tccactaagt ctggggacct cagcaccaga 720

tcgcccacca cagggctctg cctcaccagc agatctctcc tcaacagact accctccatg 780

ccctccatca ggcaccagga tgtttactcc ggtaccgagc ccaaatcttc tgacaaaact 840

cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa gccgaggggg caccgtcagt cttcctcttc 900

cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg 960

gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 1020

gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc 1080

agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc 1140

tccaacaaag ccctcccatc ctccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1200

cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1260

agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1320

aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc 1380

ttcttcctct atagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 1440

tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1500

tccccgggta aatga 1515

<210> 48

<211> 500

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> huCD33-huTremL2 ECD(aa19-268)-Fc6mut

<400> 48

Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala

1 5 10 15

Gly Pro Ser Ala Asp Ser Val Tyr Thr Lys Val Arg Leu Leu Glu Gly

20 25 30

Glu Thr Leu Ser Val Gln Cys Ser Tyr Lys Gly Tyr Lys Asn Arg Val

35 40 45

Glu Gly Lys Val Trp Cys Lys Ile Arg Lys Lys Lys Cys Glu Pro Gly

50 55 60

Phe Ala Arg Val Trp Val Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Leu Gln Asp Asp

65 70 75 80

Ala Gln Ala Lys Val Val Asn Ile Thr Met Val Ala Leu Lys Leu Gln

85 90 95

Asp Ser Gly Arg Tyr Trp Cys Met Arg Asn Thr Ser Gly Ile Leu Tyr

100 105 110

Pro Leu Met Gly Phe Gln Leu Asp Val Ser Pro Ala Pro Gln Thr Glu

115 120 125

Arg Asn Ile Pro Phe Thr His Leu Asp Asn Ile Leu Lys Ser Gly Thr

130 135 140

Val Thr Thr Gly Gln Ala Pro Thr Ser Gly Pro Asp Ala Pro Phe Thr

145 150 155 160

Thr Gly Val Met Val Phe Thr Pro Gly Leu Ile Thr Leu Pro Arg Leu

165 170 175

Leu Ala Ser Thr Arg Pro Ala Ser Lys Thr Gly Tyr Ser Phe Thr Ala

180 185 190

Thr Ser Thr Thr Ser Gln Gly Pro Arg Arg Thr Met Gly Ser Gln Thr

195 200 205

Val Thr Ala Ser Pro Ser Asn Ala Arg Asp Ser Ser Ala Gly Pro Glu

210 215 220

Ser Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Leu Ser Thr Arg Ser Pro Thr Thr

225 230 235 240

Gly Leu Cys Leu Thr Ser Arg Ser Leu Leu Asn Arg Leu Pro Ser Met

245 250 255

Pro Ser Ile Arg His Gln Asp Val Tyr Ser Gly Thr Glu Pro Lys Ser

260 265 270

Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu

275 280 285

Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

290 295 300

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

305 310 315 320

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

325 330 335

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

340 345 350

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

355 360 365

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser

370 375 380

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

385 390 395 400

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

405 410 415

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

420 425 430

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

435 440 445

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

450 455 460

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

465 470 475 480

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

485 490 495

Ser Pro Gly Lys

500

<210> 49

<211> 1233

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> huCD33-huTrem2 ECD(aa19-174)-Fc6mut

<400> 49

gaattcgcca ccatgcctct gctgctgctg ctgcctctgc tgtgggctgg cgcactggct 60

cacaacacca cagtgttcca gggcgtggcg ggccagtccc tgcaggtgtc ttgcccctat 120

gactccatga agcactgggg gaggcgcaag gcctggtgcc gccagctggg agagaagggc 180

ccatgccagc gtgtggtcag cacgcacaac ttgtggctgc tgtccttcct gaggaggtgg 240

aatgggagca cagccatcac agacgatacc ctgggtggca ctctcaccat tacgctgcgg 300

aatctacaac cccatgatgc gggtctctac cagtgccaga gcctccatgg cagtgaggct 360

gacaccctca ggaaggtcct ggtggaggtg ctggcagacc ccctggatca ccgggatgct 420

ggagatctct ggttccccgg ggagtctgag agcttcgagg atgcccatgt ggagcacagc 480

atctccagga gcctcttgga aggagaaatc cccttcccac ccacttccgg taccgagccc 540

aaatcttctg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgagggggca 600

ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 660

gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 720

tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 780

agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 840

gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccatcct ccatcgagaa aaccatctcc 900

aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 960

atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1020

gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1080

ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1140

cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1200

cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa tga 1233

<210> 50

<211> 406

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> huCD33-huTrem2 ECD(aa19-174)-Fc6mut

<400> 50

Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala

1 5 10 15

His Asn Thr Thr Val Phe Gln Gly Val Ala Gly Gln Ser Leu Gln Val

20 25 30

Ser Cys Pro Tyr Asp Ser Met Lys His Trp Gly Arg Arg Lys Ala Trp

35 40 45

Cys Arg Gln Leu Gly Glu Lys Gly Pro Cys Gln Arg Val Val Ser Thr

50 55 60

His Asn Leu Trp Leu Leu Ser Phe Leu Arg Arg Trp Asn Gly Ser Thr

65 70 75 80

Ala Ile Thr Asp Asp Thr Leu Gly Gly Thr Leu Thr Ile Thr Leu Arg

85 90 95

Asn Leu Gln Pro His Asp Ala Gly Leu Tyr Gln Cys Gln Ser Leu His

100 105 110

Gly Ser Glu Ala Asp Thr Leu Arg Lys Val Leu Val Glu Val Leu Ala

115 120 125

Asp Pro Leu Asp His Arg Asp Ala Gly Asp Leu Trp Phe Pro Gly Glu

130 135 140

Ser Glu Ser Phe Glu Asp Ala His Val Glu His Ser Ile Ser Arg Ser

145 150 155 160

Leu Leu Glu Gly Glu Ile Pro Phe Pro Pro Thr Ser Gly Thr Glu Pro

165 170 175

Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

180 185 190

Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

195 200 205

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

210 215 220

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

225 230 235 240

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

245 250 255

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

260 265 270

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

275 280 285

Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

290 295 300

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

305 310 315 320

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

325 330 335

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

340 345 350

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

355 360 365

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

370 375 380

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

385 390 395 400

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

405

<210> 51

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物

<400> 51

tagtagggat ccgctggtgc acaggaagg 29

<210> 52

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物

<400> 52

tagtaggcgg ccgcttcgtg ggcctagggt ac 32

<210> 53

<211> 16

<212> PRT

<213> 智人

<400> 53

Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala

1 5 10 15

Claims (8)

1.单克隆抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗急性或慢性炎症导致的炎性疾病或自身免疫性疾病的药物中的用途，所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够特异性结合PGLYRP1并降低PGLYRP1介导的TREM-1活性，其中所述抗体或其片段包含：

（i）对应SEQ ID NO: 15的氨基酸残基31至35 (SYWMN)的CDRH1序列；

（ii）对应SEQ ID NO: 15的氨基酸50至66 (MIHPSDSETRLNQKFKD)的CDRH2序列；

（iii）对应SEQ ID NO: 15的氨基酸残基98至108 (DYSDYDGFAY)的CDRH3序列；

（iv）对应SEQ ID NO: 16的氨基酸残基24至34 (RASQSISDYLH)的CDRL1序列；

（v）对应SEQ ID NO: 16的氨基酸残基51至56 (ASQSIS)的CDRL2序列；和

（vi）对应SEQ ID NO: 16的氨基酸残基89至97 (QNGHSFPLT)的CDRL3序列。

2.单克隆抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗急性或慢性炎症导致的炎性疾病或自身免疫性疾病的药物中的用途，所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够特异性结合PGLYRP1并降低PGLYRP1介导的TREM-1活性，其中所述抗体或其片段包含：

（i）对应SEQ ID NO: 19的氨基酸残基31至35 (DYNMY)的CDRH1序列；

（ii）对应SEQ ID NO: 19的氨基酸50至66 (YIDPYNGDTSYNQKFKG)的CDRH2序列；

（iii）对应SEQ ID NO: 19的氨基酸残基99至109 (GDYGNPFYLDY)的CDRH3序列；

（iv）对应SEQ ID NO: 20的氨基酸残基24至33 (SVSSSVNYMY)的CDRL1序列；

（v）对应SEQ ID NO: 20的氨基酸残基49至55 (DTSKLPS)的CDRL2序列；和

（vi）对应SEQ ID NO: 20的氨基酸残基88至96 (QQWTSNPPT)的CDRL3序列。

3.单克隆抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗急性或慢性炎症导致的炎性疾病或自身免疫性疾病的药物中的用途，所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够特异性结合PGLYRP1并降低PGLYRP1介导的TREM-1活性，其中所述抗体或其片段包含：

（i）对应SEQ ID NO: 23的氨基酸残基31至35 (DTYIH)的CDRH1序列；

（ii）SEQ ID NO: 23的氨基酸50至66 (RIDPANDDTKYDPNFQG)的CDRH2序列；

（iii）SEQ ID NO: 23的氨基酸残基99至108 (SDNSDSWFAY)的CDRH3序列；

（iv）对应SEQ ID NO: 24的氨基酸残基24至33 (SVSSSVNFMN)的CDRL1序列；

（v）对应SEQ ID NO: 24的氨基酸残基49至55 (DTSKLAP)的CDRL2序列；和

（vi）对应SEQ ID NO: 24的氨基酸残基88至96 (HQWSSYSLT)的CDRL3序列。

4.单克隆抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗急性或慢性炎症导致的炎性疾病或自身免疫性疾病的药物中的用途，所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够特异性结合PGLYRP1并降低PGLYRP1介导的TREM-1活性，其中所述抗体或其片段包含：

（i）对应SEQ ID NO: 27的氨基酸残基31至35 (DYNMH)的CDRH1序列；

（ii）对应SEQ ID NO: 27的氨基酸50至66 (YVDPYDGGTSSNQKFKG)的CDRH2序列；

（iii）对应SEQ ID NO: 27的氨基酸残基99至106 (EVPYYFDY)的CDRH3序列；

（iv）对应SEQ ID NO: 28的氨基酸残基24至33 (VASSSVTYMY)的CDRL1序列；

（v）对应SEQ ID NO: 28的氨基酸残基49至54 (THPLAS)的CDRL2序列；和

（vi）对应SEQ ID NO: 28的氨基酸残基87至95 (PHWNTNPPT)的CDRL3序列。

5.单克隆抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗急性或慢性炎症导致的炎性疾病或自身免疫性疾病的药物中的用途，所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够特异性结合PGLYRP1并降低PGLYRP1介导的TREM-1活性，其中所述抗体或其片段包含：

（i）对应SEQ ID NO: 31的氨基酸残基31至35 (DYYMY)的CDRH1序列；

（ii）对应SEQ ID NO: 31的氨基酸50至66 (AISDDSTYTYYPDSVKG)的CDRH2序列；

（iii）对应SEQ ID NO: 31的氨基酸残基99至109 (GGYGNLYAMDY)的CDRH3序列；

（iv）对应SEQ ID NO: 32的氨基酸残基24至35 (TASSSVSSSYLH)的CDRL1序列；

（v）对应SEQ ID NO: 32的氨基酸残基51至57 (STSNLAS)的CDRL2序列；和

（vi）对应SEQ ID NO: 32的氨基酸残基90至98 (HQYHRSPFT)的CDRL3序列。

6.单克隆抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗急性或慢性炎症导致的炎性疾病或自身免疫性疾病的药物中的用途，所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够特异性结合PGLYRP1并降低PGLYRP1介导的TREM-1活性，其中所述抗体或其片段包含：

（i）对应SEQ ID NO: 35的氨基酸残基31至35 (NYVMH)的CDRH1序列；

（ii）对应SEQ ID NO: 35的氨基酸50至66 (WINPFNDGTNYNENFKN)的CDRH2序列；

（iii）对应SEQ ID NO: 35的氨基酸残基99至109 (SGFITTLIEDY)的CDRH3序列；

（iv）对应SEQ ID NO: 36的氨基酸残基24至34 (KASESVGSFVS)的CDRL1序列；

（v）对应SEQ ID NO: 36的氨基酸残基50至56 (GASNRYT)的CDRL2序列；和

（vi）对应SEQ ID NO: 36的氨基酸残基89至96 (GQYYTHPT)的CDRL3序列。

7.根据权利要求1-6中任一项的用途，其中所述炎性疾病或自身免疫性疾病选自：炎性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、类风湿关节炎、银屑病、银屑病关节炎、系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎、I型糖尿病、格雷夫斯氏病、多发性硬化、自身免疫性心肌炎、川崎病、冠状动脉疾病、慢性阻塞性肺疾病、间质性肺疾病、自身免疫性甲状腺炎、硬皮病、系统性硬化症、骨关节炎、特应性皮炎、白癜风、移植物抗宿主病、Sjogrens综合征、自身免疫性肾炎、Goodpasture综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、过敏症和哮喘。

8.根据权利要求1-6中任一项的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段通过在原核或真核细胞中重组表达所述抗体或其片段来产生。

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