CN108523029A - 一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物及其应用 - Google Patents

一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物及其应用 Download PDF

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杨坤
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Abstract

本发明公开了一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物及其应用。本发明的组合物为叶瓜参提取物与昆仑雪菊提取物的复配物，而叶瓜参提取物与昆仑雪菊提取物分别以干制叶瓜参和干燥昆仑雪菊为原料，分别通过温和酶法及乙醇回流提取法，针对性地提取海参中的多肽类、多糖类以及雪菊中的黄酮类物质，使组合物富含生物活性肽及植物黄酮，且抗氧化活性强，具有延衰作用；同时，本发明的组合物兼具风味良好，安全可靠，原料易得的优点，可应用于制备延缓衰老的保健食品中。

Description

一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物及其 应用
技术领域
本发明涉及海参提取物应用技术领域，具体涉及一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物及其应用。
背景技术
随着人口老龄化日趋明显，我国已经成为全球老年相关慢性疾病人数最多的国家。蛋白质是人类食物中最重要的营养组分之一，且蛋白质所蕴含特殊生理活性的片段对于老年人群某些慢性疾病具有良好的预防作用。
海洋是功能食品和保健药品的宝库。海洋中的生物种类繁多，资源极其丰富。海参位列海味八珍之首，胆固醇含量极低，不仅是佐膳佳肴，更是滋补佳品，非常适宜于老年人、儿童以及体质虚弱的人食用。海参中含有多种活性成分，如多糖，蛋白，皂苷等。蛋白质是海参最主要成分。海参体内含有18种氨基酸，有8种是人体自身不能合成的必需氨基酸。海参多糖主要存在于海参体壁中，少量存在于内脏及性腺中，是海参的重要组成部分，具有治疗动脉血栓、降血脂、防治动脉粥样硬化疾病、调节机体免疫力、保护肠黏膜、抗胃溃疡作用。叶瓜参主要分布于北极地区，加拿大、俄罗斯、英国、挪威等国也有分布，在我国海参市场有相当大的占有率，其体壁厚、质地硬，蛋白质、多糖及皂苷等活性成分含量很高，产量高，价格低廉，相对于价格昂贵的刺参，开发前景更为广阔。因此，有必要对叶瓜参进行精深加工，对海参蛋白进行可控酶解，制备具有抗氧化活性及延缓衰老作用的海参提取物，对于低值食用海参的精深加工利用具有重大意义。
蔬菜、水果以及中草药中常见的黄酮类类化合物具有极强的抗氧化活性，是国内外研究的热点。昆仑雪菊首次发现于美国西北部，在我国新疆也有大规模种植，截至2014年仅和田地区的种植面积就超过13000亩，年产量达到3000吨，资源量极为丰富。独特的高寒生长属性使得昆仑雪菊含有多种特殊功能活性，包括抗氧化、抗炎、扩张冠状动脉、抑菌和抗癌作用。昆仑雪菊中存在大量的黄酮类物质，能有效的清除人体过量自由基，具有延缓衰老作用。因此，有必要提取其中黄酮类化合物，制备具有抗氧化活性及延缓衰老作用的雪菊提取物，可为雪菊的高值化利用具有重要的社会与经济意义。
通过将动物蛋白水解物与植物提取物复配，制备得到富含生物活性肽及植物黄酮，且抗氧化活性强，具有延衰作用的组合物，为开发具有延缓衰老活性的保健食品开辟新的思路。
发明内容
本发明的目的在于提供一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物。该组合物为动物蛋白水解物与植物提取物的复配物，富含生物活性肽及植物黄酮，具有极强的抗氧化活性和延长果蝇寿命的作用，兼具风味良好，安全可靠，原料易得的优点，可应用于延缓衰老的保健食品中。
本发明的目的还在于提供所述的一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物的应用。
本发明的目的通过如下技术方案实现。
一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物，由质量比为3-4∶1-2的叶瓜参提取物与昆仑雪菊提取物复配组成。
进一步地，组合物中，蛋白质含量＞42％，多糖含量＞10％，盐含量＜4％，水分含量＜4％，黄酮含量＞5％，ORAC值＞1100μmol Trolox equiv/g。
进一步地，所述叶瓜参提取物中，蛋白质含量＞70％，多糖含量＞18％，盐含量＜4％，水分含量＜4％，ORAC值＞500μmol Trolox equiv/g。
进一步地，所述昆仑雪菊提取物中，黄酮含量＞25％，水分含量＜4％，ORAC值＞3500μmol Trolox equiv/g。
进一步地，所述叶瓜参提取物通过采用干参复水溶胀与控制酶解联合处理得到，具体包括如下步骤：
(1)在干叶瓜参中加入干叶瓜参重量20-30倍的去离子水，采用梯度升温法进行泡发使海参充分吸水溶胀后，采用湿海参重量20-30倍的去离子水清洗海参2-3次；
(2)将湿海参绞成海参肉糜，加入重量为海参肉糜重量4-6倍的去离子水，室温下以200-400r/min转速搅拌30-40min，得到均匀的混悬液，调节混悬液的pH值至7.0-8.0，加热混悬液至50-60℃，以200-400r/min转速搅拌2-3小时；
(3)加入海参肉糜重量0.6-0.8％的蛋白酶，在55℃下酶解4-6小时后，90-100℃加热2-3小时，冷却至50-55℃，4000-6000g离心20-30min，得上清液；
(4)将上清液减压浓缩至固形物浓度为20-25％，加入固形物质量10％的麦芽糊精，得到叶瓜参提取物。
更进一步地，步骤(1)中，所述梯度升温法进行泡发为：30-40℃，泡发4-6小时；45-55℃，泡发8-10小时；90-100℃，泡发30-50min；70-80℃，泡发2-4小时。
更进一步地，步骤(3)中，所述蛋白酶包括胰酶和碱性蛋白酶，其中，胰酶的加入量占总酶量的20-40％，碱性蛋白酶的加入量占总酶量的60-80％。
更进一步地，步骤(4)中，所述减压浓缩的温度优选为55℃。
进一步地，所述昆仑雪菊提取物采用乙醇回流提取法得到，具体包括如下步骤：
(1)将干昆仑雪菊粉碎后过60目筛，加入重量为干昆仑雪菊质量20-30倍的乙醇浓度为30-50％(v/v)的乙醇溶液，室温下200-400r/min转速搅拌4-6小时，得到混悬液；
(2)控制混悬液热回流提取温度为80-85℃提取2-4小时，冷却至混悬液温度为50-55℃，4000-6000g离心20-30min，得上清液，减压浓缩至固形物浓度为30-35％，喷雾干燥，得到昆仑雪菊提取物。
更进一步地，所述减压浓缩的温度优选为55℃。
上述任一项所述的一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物应用于制备延缓衰老的保健食品中。
与现有技术相比，本发明具有如下优点和有益效果：
本发明的组合物为叶瓜参提取物与昆仑雪菊提取物的复配物，而叶瓜参提取物与昆仑雪菊提取物分别以干制叶瓜参和干燥昆仑雪菊为原料，分别通过温和酶法及乙醇回流提取法，针对性地提取海参中的多肽类、多糖类以及雪菊中的黄酮类物质，使组合物富含生物活性肽及植物黄酮，且抗氧化活性强，具有延衰作用；同时，本发明的组合物兼具风味良好，安全可靠，原料易得的优点，可应用于制备延缓衰老的保健食品中。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明技术方案作进一步详细描述，但本发明的保护范围并不限于下列实施例。
本发明具体实施例中，氧自由基吸收能力(Oyxgen Radical AbsorbanceCapacity，ORAC)测定方法如下：
在96孔荧光板各微孔中分别加入20μL待测样品(将样品用75mmol/L磷酸盐缓冲液做适当稀释，每个样品待测液浓度为0.05mg/mL)，然后添加60μL 70nmol/L荧光素，在37℃下预置15min后，用多道移液器迅速在各孔中加入120μL 40mmol/L AAPH(2，2′-azobis(2-methylpropionamidine)dihydrochloride)启动反应，并将微孔板置于酶标仪中在37℃下以激发波长485nm，发射波长538nm进行连续测定，每1min测定1次各孔荧光强度，测定时间设定在荧光衰减呈基线后为止，样品的ORAC值越高则其抗氧化能力越强。
本发明具体实施例中，以果蝇作为模式生物，评价延缓衰老活性的实验方法如下：
收集雄性果蝇，随机分组：样品组(加入占培养基质量4％的样品)与正常组(正常培养基)，每组200只，每组分装10支培养管，放入25-26℃、相对湿度为65％-75％的恒温恒湿智能培养箱中培养，每2d更换一次相应的新鲜培养基，并每24h定时记录各组果蝇存活只数直至果蝇全部死亡，绘制寿命曲线，计算果蝇半数死亡时间，平均寿命及最高寿命。每组中半数果蝇死亡天数的算术平均数为该组的半数死亡时间，每组最后10只死亡果蝇的生存天数均值为最高寿命，每组全部果蝇存活天数的均数为平均寿命。
实施例1
一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物，由叶瓜参提取物与昆仑雪菊提取物按质量比例3∶2复配组成，记为组合物1。
用于复配组合物1的叶瓜参提取物采用干参复水溶胀与控制酶解联合处理得到，具体包括如下步骤：
(1)在干叶瓜参中加入干叶瓜参重量20倍的去离子水，采用梯度升温法进行泡发，即：30℃泡发4小时；45℃泡发8小时；90℃泡发30min；70℃泡发2小时；海参充分吸水溶胀后，采用湿海参重量20倍的去离子水清洗海参2次；
(2)将湿海参绞成海参肉糜，加入重量为海参肉糜重量4倍的去离子水，室温下以200r/min转速搅拌30min，得到均匀的混悬液，调节混悬液的pH值至7.0，加热混悬液至50℃，以200r/min转速搅拌2小时；
(3)加入海参肉糜重量0.6％的蛋白酶，其中，胰酶(南宁庞博生物)的加入量占总酶量的20％，碱性蛋白酶(NS 37071，诺维信)的加入量占总酶量的80％，在55℃下酶解4小时后，90℃加热2小时，冷却至50℃，4000g离心20min，得上清液；
(4)将上清液在55℃减压浓缩至固形物浓度为20％，加入固形物质量10％的麦芽糊精，得到叶瓜参提取物。
得到的叶瓜参提取物中，蛋白质含量为75％，多糖含量为18.5％，盐含量为3％，水分含量为3％，ORAC值为516μmol Trolox equiv/g。
用于复配组合物1的昆仑雪菊提取物采用乙醇回流提取法得到，具体包括如下步骤：
(1)干昆仑雪菊粉碎后过60目筛，加入重量为干昆仑雪菊质量20倍的乙醇浓度为30％(v/v)的乙醇溶液，室温下200r/min转速搅拌4小时，得到混悬液；
(2)控制混悬液热回流提取温度为80℃提取2小时，冷却至混悬液温度为50℃，4000g离心20min，得上清液，55℃减压浓缩至固形物浓度为30％，喷雾干燥，得到昆仑雪菊提取物。
得到的昆仑雪菊提取物中，黄酮含量为25.5％，水分含量为3％，ORAC值为3600μmol Trolox equiv/g。
组合物1中，蛋白质含量为45％，多糖含量为11.1％，盐含量为2％，水分含量为3％，黄酮含量为10.2％，ORAC值为1750μmol Trolox equiv/g。
实施例2
一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物，由叶瓜参提取物与昆仑雪菊提取物按质量比例7∶3复配组成，记为组合物2。
用于复配组合物2的叶瓜参提取物采用干参复水溶胀与控制酶解联合处理得到，具体包括如下步骤：
(1)在干叶瓜参中加入干叶瓜参重量25倍的去离子水，采用梯度升温法进行泡发，即：35℃泡发5小时；50℃泡发9小时；95℃泡发40min；75℃泡发3小时；海参充分吸水溶胀后，采用湿海参重量25倍的去离子水清洗海参2次；
(2)将湿海参绞成海参肉糜，加入重量为海参肉糜重量5倍的去离子水，室温下以300r/min转速搅拌35min，得到均匀的混悬液，调节混悬液的pH值至7.5，加热混悬液至55℃，以300r/min转速搅拌2.5小时；
(3)加入海参肉糜重量0.7％的蛋白酶，其中，胰酶(南宁庞博生物)的加入量占总酶量的30％，碱性蛋白酶(NS 37071，诺维信)的加入量占总酶量的70％，在55℃下酶解5小时后，95℃加热2.5小时，冷却至53℃，5000g离心25min，得上清液；
(4)将上清液在55℃减压浓缩至固形物浓度为23％，加入固形物质量10％的麦芽糊精，得到叶瓜参提取物。
得到的叶瓜参提取物中，蛋白质含量为71.4％，多糖含量为18.6％，盐含量为3.1％，水分含量为3％，ORAC值为535μmol Trolox equiv/g。
用于复配组合物2的昆仑雪菊提取物采用乙醇回流提取法得到，具体包括如下步骤：
(1)干昆仑雪菊粉碎后过60目筛，加入重量为干昆仑雪菊质量25倍的乙醇浓度为40％(v/v)的乙醇溶液，室温下300r/min转速搅拌5小时，得到混悬液；
(2)控制混悬液热回流提取温度为83℃提取3小时，冷却至混悬液温度为53℃，5000g离心25min，得上清液，55℃减压浓缩至固形物浓度为33％，喷雾干燥，得到昆仑雪菊提取物。
得到的昆仑雪菊提取物中，黄酮含量为26％，水分含量为3％，ORAC值为3750μmolTrolox equiv/g。
组合物2中，蛋白质含量为50％，多糖含量为13％，盐含量为2.2％，水分含量为3％，黄酮含量为7.8％，ORAC值为1500μmol Trolox equiv/g。
实施例3
一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物，由叶瓜参提取物与昆仑雪菊提取物按质量比例4∶1复配组成，记为组合物3。
用于复配组合物3的叶瓜参提取物采用干参复水溶胀与控制酶解联合处理得到，具体包括如下步骤：
(1)在干叶瓜参中加入干叶瓜参重量30倍的去离子水，采用梯度升温法进行泡发，即：40℃泡发6小时；55℃泡发10小时；100℃泡发50min；80℃泡发4小时；海参充分吸水溶胀后，采用湿海参重量30倍的去离子水清洗海参3次；
(2)将湿海参绞成海参肉糜，加入重量为海参肉糜重量6倍的去离子水，室温下以400r/min转速搅拌40min，得到均匀的混悬液，调节混悬液的pH值至8.0，加热混悬液至60℃，以400r/min转速搅拌3小时；
(3)加入海参肉糜重量0.8％的蛋白酶，其中，胰酶(南宁庞博生物)的加入量占总酶量的40％，碱性蛋白酶(NS 37071，诺维信)的加入量占总酶量的60％，在55℃下酶解6小时后，100℃加热3小时，冷却至55℃，6000g离心30min，得上清液；
(4)将上清液在55℃减压浓缩至固形物浓度为25％，加入固形物质量10％的麦芽糊精，得到叶瓜参提取物。
得到的叶瓜参提取物中，蛋白质含量为72.5％，多糖含量为18.8％，盐含量为3.3％，水分含量为3％，ORAC值为525μmol Trolox equiv/g。
用于复配组合物3的昆仑雪菊提取物采用乙醇回流提取法得到，具体包括如下步骤：
(1)干昆仑雪菊粉碎后过60目筛，加入重量为干昆仑雪菊质量30倍的乙醇浓度为50％(v/v)的乙醇溶液，室温下400r/min转速搅拌6小时，得到混悬液；
(2)控制混悬液热回流提取温度为85℃提取4小时，冷却至混悬液温度为55℃，6000g离心30min，得上清液，55℃减压浓缩至固形物浓度为35％，喷雾干燥，得到昆仑雪菊提取物。
得到的昆仑雪菊提取物中，黄酮含量为30％，水分含量为3％，ORAC值为4100μmolTrolox equiv/g。
组合物3中蛋白质含量为58％，多糖含量为15％，盐含量为2.6％，水分含量为3％，黄酮含量为6％，ORAC值为1240μmol Trolox equiv/g。
对比例1
一种叶瓜参提取物，记为叶瓜参提取物1，采用干参复水溶胀与控制酶解联合处理得到，具体包括如下步骤：
(1)在干叶瓜参中加入干叶瓜参重量30倍的去离子水，采用梯度升温法进行泡发，即：40℃泡发6小时；55℃泡发10小时；100℃泡发50min；80℃泡发4小时；海参充分吸水溶胀后，采用湿海参重量30倍的去离子水清洗海参3次；
(2)将湿海参绞成海参肉糜，加入重量为海参肉糜重量6倍的去离子水，室温下以400r/min转速搅拌40min，得到均匀的混悬液，调节混悬液的pH值至8.0，加热混悬液至60℃，以400r/min转速搅拌3小时；
(3)加入海参肉糜重量0.8％的蛋白酶，其中，胰酶(南宁庞博生物)的加入量占总酶量的40％，碱性蛋白酶(NS 37071，诺维信)的加入量占总酶量的60％，在55℃下酶解6小时后，100℃加热3小时，冷却至55℃，6000g离心30min，得上清液；
(4)将上清液在55℃减压浓缩至固形物浓度为25％，加入固形物质量10％的麦芽糊精，得到叶瓜参提取物。
得到的叶瓜参提取物1中，蛋白质含量为72.5％，多糖含量为18.8％，盐含量为3.3％，水分含量为3％，ORAC值为525μmol Trolox equiv/g。
实施例1-3的组合物1-3以及对比例1得到的叶瓜参提取物1的氧自由基吸收能力以及延缓衰老活性的测试结果分别如表1和表2所示。
表1组合物1-3与叶瓜参提取物1的氧自由基吸收能力(Oyxgen RadicalAbsorbance Capacity，ORAC)
注：不同字母a、b、c、d表示数据之间具有显著性差异(p＜0.05)
由表1可以看出，采用实施例1-3的组合物1-3的ORAC值显著高于叶瓜参提取物，这主要是因为组合物中，除含有生物活性肽外，还含有雪菊黄酮类物质，雪菊中黄酮类物质可显著提高组合物的抗氧化活性，此外，肽与黄酮类物质的协同增效作用也会大大提升组合物的抗氧化活性。
表2组合物1-3与叶瓜参提取物1对正常果蝇寿命的影响
注：同列中不同字母a、b、c、d表示数据之间具有显著性差异(p＜0.05)，相同字母表示数据之间无显著性差异(p＜0.05)。
卫生部颁布的《保健食品功能学评价程序和检验方法》中，将果蝇生存试验作为判断保健食品是否具有延缓衰老作用的试验方法之一。根据衰老的自由基学说，随着年龄的增长，机体内自由基平衡遭到破坏，产生大量的自由基。这些自由基攻击蛋白质以及核酸等生物大分子，使得细胞功能严重受损直至最终衰老、死亡。由表2可以看出，采用实施例1-3的组合物1-3可显著延长正常果蝇半数死亡时间，摄食组合物1-3的实验组半数死亡时间显著长于摄食叶瓜参提取物的实验组。此外，采用实施例1-3的组合物1-3可显著延长正常果蝇的平均寿命，摄食组合物1-3的实验组的平均寿命显著高于摄食叶瓜参提取物的实验组。采用实施例1-3的组合物1-3可显著延长正常果蝇的最高寿命，摄食组合物1-3的实验组的最高寿命显著高于摄食叶瓜参提取物的实验组。这是因为实施例1-3的组合物1-3具有很强的抗氧化活性，对氧化应激损伤可以起到有效保护作用，因此可有效延长果蝇寿命。

Claims (9)

1.一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物，其特征在于，由质量比为3-4∶1-2的叶瓜参提取物与昆仑雪菊提取物复配组成。
2.根据权利要求1所述的一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物，其特征在于，组合物中，蛋白质含量＞42％，多糖含量＞10％，盐含量＜4％，水分含量＜4％，黄酮含量＞5％，ORAC值＞1100μmol Trolox equiv/g。
3.根据权利要求1所述的一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物，其特征在于，所述叶瓜参提取物中，蛋白质含量＞70％，多糖含量＞18％，盐含量＜4％，水分含量＜4％，ORAC值＞500μmol Trolox equiv/g。
4.根据权利要求1所述的一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物，其特征在于，所述昆仑雪菊提取物中，黄酮含量＞25％，水分含量＜4％，ORAC值＞3500μmolTrolox equiv/g。
5.根据权利要求1所述的一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物，其特征在于，所述叶瓜参提取物采用干参复水溶胀与控制酶解联合处理得到，具体包括如下步骤：
(1)在干叶瓜参中加入干叶瓜参重量20-30倍的去离子水，采用梯度升温法进行泡发后，采用湿海参重量20-30倍的去离子水清洗海参2-3次；
(2)将湿海参绞成海参肉糜，加入重量为海参肉糜重量4-6倍的去离子水，室温下以200-400r/min转速搅拌30-40min，得到均匀的混悬液，调节混悬液的pH值至7.0-8.0，加热混悬液至50-60℃，以200-400r/min转速搅拌2-3小时；
(3)加入海参肉糜重量0.6-0.8％的蛋白酶，在55℃下酶解4-6小时后，90-100℃加热2-3小时，冷却至50-55℃，4000-6000g离心20-30min，得上清液；
(4)将上清液减压浓缩至固形物浓度为20-25％，加入固形物质量10％的麦芽糊精，得到叶瓜参提取物。
6.根据权利要求5所述的一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物，其特征在于，步骤(1)中，所述梯度升温法进行泡发为：30-40℃，泡发4-6小时；45-55℃，泡发8-10小时；90-100℃，泡发30-50min；70-80℃，泡发2-4小时。
7.根据权利要求5所述的一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物，其特征在于，步骤(3)中，所述蛋白酶包括胰酶和碱性蛋白酶，其中，胰酶的加入量占总酶量的20-40％，碱性蛋白酶的加入量占总酶量的60-80％。
8.根据权利要求1所述的一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物，其特征在于，所述昆仑雪菊提取物采用乙醇回流提取法得到，具体包括如下步骤：
(1)将干昆仑雪菊粉碎后过60目筛，加入重量为干昆仑雪菊质量20-30倍的乙醇浓度为30-50％(v/v)的乙醇溶液，室温下200-400r/min转速搅拌4-6小时，得到混悬液；
(2)控制混悬液热回流提取温度为80-85℃提取2-4小时，冷却至混悬液温度为50-55℃，4000-6000g离心20-30min，得上清液，减压浓缩至固形物浓度为30-35％，喷雾干燥，得到昆仑雪菊提取物。
9.权利要求1～8任一项所述的一种含有叶瓜参提取物的具有延缓衰老功能的组合物应用于制备延缓衰老的保健食品中。
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