CN116035962B - 抗衰、修复、美白的虫草复方植物提取物组合物及其应用 - Google Patents
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- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Abstract
本申请提供了含有冬虫夏草提取物、桑白皮提取物、高山火绒草提取物、油橄榄叶提取物、黄芩提取物的复方植物提取物组合物,其中的冬虫夏草提取物采用酶辅助提取和改性的方法制备,可以有效提取冬虫夏草中的蛋白/肽、多糖、腺苷、黄酮等成分并改善其效果。本申请的复方植物提取物组合物具有优异的抗衰老、修复和美白效果,可用于制备多种化妆品。
Description
技术领域:
本申请属于化妆品领域和天然提取物制备技术领域,具体地,本申请提供了含有冬虫夏草提取物、桑白皮提取物、高山火绒草提取物、油橄榄叶提取物、黄芩提取物的复方植物提取物组合物及其在制备抗衰老、修复和美白化妆品中的应用。
背景技术
冬虫夏草、桑白皮、高山火绒草、油橄榄叶和黄芩的提取物具有抗衰老、修复皮肤、美白、抗菌消炎等功效,在中药、保健品和化妆品领域中有广泛的应用。其中的冬虫夏草更是一种中国特有的珍稀药材,大量研究表明其中的蛋白/多肽、多糖、黄酮、虫草素等成分具有调节免疫力、抗氧化、抗肿瘤等效果,提取冬虫夏草中的有效成分是充分利用这一珍贵药材的必要手段。
目前可用于冬虫夏草中肽、多糖等有效成分的提取方法包括热水提取、醇提取、微波辅助提取、酶辅助提取等;使用酶可用于虫草多糖改性的方法包括磷酸化、磷酸化、乙酰化等化学改性方法,辐射和微波等物理改性方法以及微生物和酶改性的生物改性方法。其中酶提取和改性的方法温和,对蛋白/肽、多糖等有效成分的破坏较少,是制备医药用和食用多糖的优选方法,但冬虫夏草提取物的此方面研究还叫少见。
发明内容
针对上述问题,申请人研究了多种酶对于冬虫夏草提取效果的影响。提出了使用纤维素酶、木瓜蛋白酶、果胶酶以及阿拉伯呋喃糖苷酶或者α淀粉酶的组合来对冬虫夏草进行提取,该组合处理冬虫夏草不仅可以有效提取和增加提取物中的蛋白/肽成分,还可以有效提高虫草多糖和虫草素提取效果,并且可以通过改性虫草多糖的三螺旋结构改进其抗氧化活性,进而提供更好的抗衰老、修复和美白效果。
一方面,本申请提供了一种含有冬虫夏草提取物的复方植物物提取组合物,所述组合物包含冬虫夏草提取物、桑白皮提取物、高山火绒草提取物、油橄榄叶提取物、黄芩提取物。
进一步地,所述组合物中包含冬虫夏草提取物8-11份、桑白皮提取物3-5份、高山火绒草提取物3-5份、油橄榄叶提取物3-5份、黄芩提取物1-3份。
进一步地,所述提取物中还包含动物油脂、乳化剂、防腐剂和水。
进一步地,所述冬虫夏草提取物按照以下方法制备:
(1)粉碎冬虫夏草获得冬虫夏草粉;
(2)将冬虫夏草粉按照1:20-40g/mL的固液比加入含有纤维素酶、木瓜蛋白酶、果胶酶的蒸馏水中组成酶处理体系;
(3)酶处理一定时间,得酶处理液;
(4)将酶处理液放入热水提取得提取液;
(5)将提取液冷却后旋转蒸发浓缩,冻干得提取物粉末;
所述冬虫夏草提取物中包含蛋白、肽、多糖、虫草素、黄酮成分。
进一步地,步骤(2)为将冬虫夏草粉按照1:20-30g/mL的固液比加入含有纤维素酶200-500U/mL、木瓜蛋白酶100-300U/mL、果胶酶300-600U/mL以及阿拉伯呋喃糖苷酶100-300U/mL或者α淀粉酶100-300U/mL的蒸馏水中组成酶处理体系。
进一步地,步骤(2)为将冬虫夏草粉按照1:25g/mL的固液比加入含有纤维素酶300U/mL、木瓜蛋白酶200U/mL、果胶酶500U/mL、阿拉伯呋喃糖苷酶200U/mL的蒸馏水中组成酶处理体系。
进一步地,步骤(3)为调pH至7.0,酶处理2h,得酶处理液;步骤(4)为将酶处理液放入90℃的水浴中,热水提取2h得提取液
另一方面,本申请提供了上述组合物在制备具有抗衰老、修复和美白作用的化妆品中的用途。
另一方面,本申请提供了包含上述组合物的化妆品。
进一步地,所述化妆品为面霜、面膜、眼霜、颈霜、护手霜、身体乳、保湿液或精华液。
此外,本申请还包括上述冬虫夏草提取物的制备方法。
本申请中所述的冬虫夏草包括天然或人工培养的冬虫夏草(Cordycepssinensis),不局限产地。冬虫夏草可以为完整冬虫夏草、虫体、子实体。本申请中所述的桑白皮、高山火绒草、油橄榄叶、黄芩也不限定产地和具体品种。
本申请中所述的提取物包括市售或自制的提取物,自制时可以使用已知的提取方法如水提、醇提等植被提取物,提取物中的成分包括但不限于蛋白/肽、多糖、黄酮、多酚、腺苷等。
提取物的形式可以为不同浓度的液体或者固体,本领域技术人员可以根据终产品的需求选用不同的提取物形式。
附图说明
图1A显示了酶处理对虫草素和虫草多糖提取效果的影响;图1B显示了酶处理对虫草肽/蛋白提取效果的影响;其中A:纤维素酶500U/mL、B:半纤维素酶500U/mL、C:碱性蛋白酶1000U/mL、D:木瓜蛋白酶500U/mL、E:果胶酶800U/mL、F:不使用酶处理直接提取的对照;
图2A显示了酶组合处理对虫草素和虫草多糖提取效果的影响;图2B显示了酶组合处理对虫草肽/蛋白提取效果的影响;其中A:纤维素酶300U/mL+木瓜蛋白酶200U/mL+果胶酶500U/mL、B:半纤维素酶300U/mL+木瓜蛋白酶200U/mL+果胶酶500U/mL、C:纤维素酶300U/mL+碱性蛋白酶500U/mL+果胶酶500U/mL、D:半纤维素酶300U/mL+碱性蛋白酶500U/mL+果胶酶500U/mL;
图3A显示了改性酶后对虫草素和虫草多糖提取效果的影响;图3B显示了改性酶后对虫草肽/蛋白提取效果的影响;其中A:200U/mL的阿拉伯呋喃糖苷酶、B:200U/mL的α淀粉酶、C:500U/mL的α半乳糖苷酶、D:200U/mL淀粉葡糖苷酶。
具体实施方式
前期预实验摸索阶段以及排列组合技术方案的实验较多,以下实施例中仅展示部分代表性结果。以下实施例仅为展示用,不构成对保护范围的限制,本申请的保护范围由权利要求界定。
实施例1原料和基本方法
原料:
出于价格和批次性质一致性因素,实验过程中使用的冬虫夏草为购自西藏某企业的养殖冬虫夏草(Cordyceps sinensis)完整体,规格和批次基本一致。后续实验完成后,使用采集子西藏的野生冬虫夏草验证和实际制备产品时,效果变化趋势基本一致。
纤维素酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、果胶酶、半纤维素酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、α淀粉酶、α半乳糖苷酶、淀粉葡糖苷酶购自夏盛或东恒华道,均为食品级。
提取物的制备方法:
经过初步摸索后获得的提取物制备的基本方法如下:
(1)将冬虫夏草烘干、粉碎、过100目筛得冬虫夏草粉;
(2)将冬虫夏草粉按照1:25g/mL的固液比加入含有所需量的酶或者酶混合物的蒸馏水中组成酶处理体系;
(3)调pH至7.0,酶处理2h,得酶处理液;
(4)将酶处理液放入90℃的水浴中,热水提取2h得提取液;
部分实验使用步骤(4)所得的提取液进行,部分实验使用中以下步骤(5)获得提取物粉末:
(5)将提取液冷却后旋转蒸发浓缩,冻干得提取物粉末。
虫草素的检测(液相检测):
液相色谱仪:岛津LC-20A;色谱柱:Venusil MP C18;流动相:乙腈:水(15:85);柱温:40℃;检测波长260nm。使用虫草素标准品(购自Solarbio)构建标准曲线计算样品中虫草素的量,进而以虫草素的量和对应虫草粉的量计算提取率(mg/kg)。
多糖得率的计算:
称取提取物以蒸馏水复溶;加入3倍体积95%乙醇进行醇沉淀12小时;离心、收集沉淀;再次以蒸馏水复溶使用分光光度计测定490nm处的光吸收;使用葡萄糖构建标准曲线计算多糖的量;进而以多糖量和对应虫草粉量的比值计算多糖得率(%)。
肽/蛋白得率计算
使用GB 5009.5—2016中推荐的方法2分光光度法进行,检测400nm光吸收,由于没有虫草类食品的折算系统,我们取略低于肉制品折算系数6.25的6.10用于折算。
DPPH自由基清除率测定:
样品按照虫草多糖含量0.05mg/mL配置;取液体样品2mL,与2mL 0.1mM的DPPH无水乙醇溶液(样品)或者2mL无水乙醇混合(对照),25℃下避光反应30min;以分光光度计测定样品反应液、对照反应液以及参比(2mL无水乙醇加2mL 0.1mM的DPPH无水乙醇溶液)517nm处的吸光度;按照以下公式计算DPPH自由基清除率:DPPH自由基清除率(%)=(1-(A样品-A对照)/A参比)。
还原力测定:
样品按照虫草多糖含量0.3mg/mL配置;取液体样品2mL,与1%质量的铁氰化钾水溶液2mL以及pH6.5的PBS 3mL混合;50℃反应30分钟;加入10%质量的三氯乙酸溶液2mL;离心10min;取上清2mL与蒸馏水2mL和0.1%质量的氯化铁水溶液混合,在700nm测定吸光度,直接以吸光度A700表示还原力。
实施例2不同酶和酶组合处理对虫草素和虫草多糖提取的影响
根据先前的经验和文献的记载,选取纤维素酶、半纤维素酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、果胶酶辅助提取;根据预实验,实验含纤维素酶500U/mL、半纤维素酶500U/mL、碱性蛋白酶1000U/mL、木瓜蛋白酶500U/mL、果胶酶800U/mL的酶处理体系对虫草素和虫草多糖提取的影响。结果如图1A所示:相比不使用酶直接热水提取,各种酶的使用均有效提高了虫草素和虫草多糖的提取效果,这与目前对虫草组成的分析相符(纤维素、果胶和某些蛋白结构)。
进一步实验多种酶的组合,纤维素酶300U/mL+木瓜蛋白酶200U/mL+果胶酶500U/mL、半纤维素酶300U/mL+木瓜蛋白酶200U/mL+果胶酶500U/mL、纤维素酶300U/mL+碱性蛋白酶500U/mL+果胶酶500U/mL、半纤维素酶300U/mL+碱性蛋白酶500U/mL+果胶酶500U/mL的代表性结果如图2A所示:相比图1中的单一酶,组合酶均明显提高了虫草多糖和虫草素的提取效果,特别是虫草多糖的提取率提高了50%-100%。
如图1B和图2B所示,在蛋白酶,纤维素酶等酶的作用下,不仅冬虫夏草中的某些蛋白结构得以降解,提高了虫草素和多糖的产量;虫草肽/蛋白的含量也得以提升。
实施例3进一步加入改性酶的效果
选取效果最佳的纤维素酶300U/mL+木瓜蛋白酶200U/mL+果胶酶500U/mL的方案,在此基础上进一步研究加入糖苷酶的效果。经过预实验摸索,选用200U/mL的阿拉伯呋喃糖苷酶、200U/mL的α淀粉酶、500U/mL的α半乳糖苷酶、200U/mL淀粉葡糖苷酶进一步辅助酶解和酶改性。
加入改性酶后对虫草素和虫草多糖提取的影响如图3A所示:相比纤维素酶、木瓜蛋白酶和果胶酶的组合,加入阿拉伯呋喃糖苷酶、α淀粉酶、α半乳糖苷酶、淀粉葡糖苷酶对虫草多糖和虫草素的提取效果基本没有影响(阿拉伯呋喃糖苷酶、α淀粉酶组略有增加);此外,图3B所示:这些糖苷酶酶对虫草肽/蛋白的提取率也基本无影响。
加入改性酶制备的提取物DPPH自由基清除率和还原力测定结果如下表1(三次重复取平均值)
表1加入改性酶制备的提取物DPPH自由基清除率和还原力测定结果
加入的改性酶 | DPPH自由基清除率% | 还原力A700 |
无 | 48.33 | 0.133 |
阿拉伯呋喃糖苷酶 | 80.42 | 0.237 |
α淀粉酶 | 65.75 | 0.201 |
α半乳糖苷酶 | 54.52 | 0.167 |
淀粉葡糖苷酶 | 50.47 | 0.156 |
结果表明,在酶解体系中进一步增加糖苷酶对虫草多糖和虫草素的提取基本没有促进作用,但通过在酶解过程中加入阿拉伯呋喃糖苷酶、α淀粉酶,特别是阿拉伯呋喃糖苷酶同步酶改性多糖的三螺旋结构明显增加了提取物的抗氧化性能(三螺旋结构变化由刚果红和多糖溶液混合物最大吸收波长的变化来表征,参考何晋浙,分析化学,2010年,第38卷,第3期,由于后续解析尚未完成,本申请中未列详细结果)。
实施例4使用冬虫夏草提取物、桑白皮提取物、高山火绒草提取物、油橄榄叶提取物、黄芩提取物制备复方植物提取组合物
复方植物提取组合物由冬虫夏草提取物10份、桑白皮提取物4份、高山火绒草提取物5份、油橄榄叶提取物4份、黄芩提取物2份、角鲨烷4份、聚甘油-10硬脂酸酯20份、苯氧乙醇5份、水45份组成,制备过程中使用高速剪切乳化混合水溶和脂溶性成分。
使用上述复方植物提取组合物实际制备面霜和护手霜(加入量5%,其他成分包括鲸蜡醇、单硬脂酸甘油酯、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、甘油、山梨醇、丙二醇、三乙醇胺等),用于受试动物和人员都取得了较好的抗衰老、修复和美白方面的效果。
Claims (5)
1.一种具有抗衰、修复和美白功效的含有冬虫夏草(Cordyceps sinensis)提取物的复方植物提取物组合物,其特征在于,所述组合物包含冬虫夏草提取物8-11份、桑白皮提取物3-5份、高山火绒草提取物3-5份、油橄榄叶提取物3-5份和黄芩提取物1-3份;
所述冬虫夏草提取物按照以下方法制备:
(1) 粉碎冬虫夏草获得冬虫夏草粉;
(2) 将冬虫夏草粉按照1:20-30 g/mL的固液比加入含有纤维素酶200-500U/mL、木瓜蛋白酶100-300U/mL、果胶酶300-600U/mL以及阿拉伯呋喃糖苷酶100-300U/mL的蒸馏水中组成酶处理体系;
(3) 调pH至7.0,酶处理2h,得酶处理液;
(4) 将酶处理液放入90℃的水浴中,热水提取2h得提取液;
(5) 将提取液冷却后旋转蒸发浓缩,冻干得提取物粉末;
所述冬虫夏草提取物中包含蛋白、肽、多糖、虫草素和黄酮成分。
2.根据权利要求1所述的组合物,其中步骤(2)为将冬虫夏草粉按照1:25g/mL的固液比加入含有纤维素酶300U/mL、木瓜蛋白酶200U/mL、果胶酶500U/mL以及阿拉伯呋喃糖苷酶200U/mL的蒸馏水中组成酶处理体系。
3.根据权利要求1或2所述的组合物在制备具有抗衰老、修复和美白作用的化妆品中的用途。
4.化妆品,其特征在于,所述化妆品包含根据权利要求1或2所述的组合物。
5.根据权利要求4所述的化妆品,其中所述化妆品为面霜、面膜、眼霜、颈霜、护手霜、身体乳、保湿液或精华液。
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