CN109431899A - 一种伍参圆发酵原浆化妆品及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种伍参圆发酵原浆化妆品及其制备方法与应用。其制备方法的步骤如下：(1)伍参圆干粉的制备：将人参、丹参、苦参、沙参、玄参、核桃、绿茶茶叶混合，干燥，粉碎机粉碎，过筛，得到伍参圆干粉；(2)伍参圆发酵初始体系的制备：将酵母菌液与步骤(1)所得的伍参圆干粉和水混合，即得伍参圆发酵初始体系；(3)伍参圆发酵初原液的制备：对步骤(2)所得的伍参圆发酵初始体系进行发酵培养，得到伍参圆发酵初原液；(4)伍参圆发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的伍参圆发酵初原液进行灭菌、然后进行离心，取离心后的上清液，即得到伍参圆发酵原浆。

Description

一种伍参圆发酵原浆化妆品及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种伍参圆发酵原浆化妆品及其制备方法与应用。
背景技术
据普济方中记载，五参圆采用人参、丹参、苦参、沙参、玄参调配，用胡桃15克与诸药和捣，为丸，茶水下，治酒刺，面疮。
由朱棣领衔和教授滕硕长史刘醇等编辑而成的普济方一书，广泛搜集明初以前各种医学典籍中的有关方剂，被誉为中国古代最大的一部方书，堪称为集15世纪以前方书编辑之大成。普济方重视辨证论治，从脏腑气血辨治皮肤病，美容方药组成中主要是具有健脾补肾益气养血祛风的药物，如白芷白术川芎熟地肉桂等。书中方药载有具体用量制备及使用方法，对于研发新的美容方药剂型等均有较高的临床指导价值及应用前景。该书美容方药的用药规律: 一是以植物药为主；二是多为芳香药及甘润之品，味辛甘，辛香甘润；三是不少药具有抗衰老功能，含维生素类物质，具有营养抗皱之效；四是抗菌；五是石灰及灰类药为消靥痣之专品，对美容药剂的制作开发有一定的参考意义。
本发明根据五参圆的配方制作伍参圆发酵原浆，根据化妆品使用名录选取使用的原料，并经过不断的配方调制，最后选用人参、丹参、苦参、沙参、玄参、核桃、绿茶茶叶经过发酵获得伍参圆发酵原浆。此配方保留了普济方的原始用料中的五大参为中药材，配以核桃和绿茶茶叶，采用酿酒酵母对原料进行发酵。人参的主要成分为人参皂甙、人参活素，及少量挥发油。各种氨基酸和肽类、葡萄糖、果糖、果胶以及维生素B1、B2、烟酸、泛酸等，能扩张皮肤的毛细血管，促进皮肤的血液循环，增强皮肤的营养，并能防止皮肤脱水、硬化、起皱，从而增强了皮肤的弹性，使细胞得到新生。丹参富含丹参酸和丹参酮，是天然的抗氧化剂，具有抗衰老，抗纤维化的功效。苦参能够平衡油脂分泌，疏通并收敛毛孔，清除皮肤内毒素杂质。核桃含有亚麻油酸及钙、磷、铁，是人体的肌肤美容剂，经常食用可以起到润肌肤、乌须发，及具有防治头发过早变白和脱落的作用。五参的配合加之核桃和绿茶，制作为具有美白、抗炎作用的伍参圆发酵原浆。
当前人们的生活水平不断提高，越来越多的消费者开始重视既对人体健康无害，又具有美容保健作用的天然护肤化妆品。利用中草药提取物作为美容护肤化妆品的添加剂，具有药效稳定持久，既产生功效又没有毒副作用的优势，深受人们的青睐。目前，中草药所含的各种天然活性成分，被广泛应用于现代化妆品中，并发挥各种作用。
随着基因工程、细胞工程、酶工程技术的不断发展和完善，微生物发酵技术有了突飞猛进的发展，在天然活性物质的研究开发中发挥着越来越重要的作用。发酵过程所需条件非常温和，而且反应产物单纯和能耗少，是一个与环境友善的绿色化学过程。
北京工商大学理学院的赵丹、许丹妮、王冬冬、张佳婵、李萌、王昌涛在《日用化学工业》杂志2016年04期上发表论文《灵芝发酵液的成分检测及美白与抗衰老功效评价》，文章中提出，为开发灵芝发酵液在化妆品领域的应用，使用葡萄酒酵母发酵灵芝并测定发酵液中所含有的多糖、多酚、黄酮和多肽含量。通过DPPH自由基清除实验和羟自由基清除实验对灵芝发酵液的抗氧化能力进行检测，并测定其对成纤维细胞存活率的影响以评估其可能在抗衰老方面发挥的作用。最后通过体外酪氨酸酶实验和小鼠黑色素瘤细胞内的酪氨酸酶活性及黑色素合成抑制实验对灵芝发酵液的美白功效进行评价。结果表明，灵芝发酵液富含多糖，质量浓度为9.910g/L，多酚、黄酮和多肽的质量浓度分别为0.054，0.045和2.931g/L。体积分数分别为25.89％和42.18％的灵芝发酵液可清除50％的DPPH自由基和羟自由基；体积分数为0.05％～0.2％范围内的灵芝发酵液可有效促进成纤维细胞增殖；灵芝发酵液对酪氨酸酶活性抑制率高达73.22％，其通过抑制酪氨酸酶活性起到抑制黑色素合成的作用。因此灵芝发酵液具有一定的抗衰老和美白功效。
北京工商大学理学院、中国检验检疫科学研究院化妆品技术中、心云南白药集团医药电子商务有限公司的赵丹、李萌、苏宁、安全、张佳婵、王昌涛在《日用化学品科学》杂志2016 年06期上发表论文《枸杞发酵液的抗衰老活性和皮肤安全性研究》，文章中提出，采用枸杞为原料，德氏乳杆菌为菌种进行发酵获得枸杞发酵液。对枸杞发酵液的生理生化性质与成分进行检测，通过自由基清除实验与成纤维细胞增殖实验对枸杞发酵液的抗衰老活性进行检测，利用人体斑贴实验对枸杞发酵液的安全性进行评估。实验结果表明，枸杞发酵液为黏稠弱酸性液体，主要成分是多糖，具有较强的清除DPPH自由基和羟自由基的能力，在一定体积分数内可促进成纤维细胞增殖。
北京工商大学理学院、北京工商大学北京食品营养与人类健康高精尖创新中心的许丹妮、史豆豆、赵丹、王昌涛、李萌在《日用化学品科学》杂志2016年12期上发表论文《葡萄籽发酵液抗衰老活性研究》，文章中提出，利用乳酸菌发酵葡萄籽得到葡萄籽发酵液。对发酵液中的主要活性成分进行检测，通过测定自由基清除效果以及成纤维细胞增殖实验来衡量发酵液的抗衰老活性。结果表明葡萄籽发酵液中蛋白质、黄酮、原花青素的含量分别为2.89， 1.01，0.43mg/m L。体积分数为0.43％和1.25％的发酵液可清除50％的ABTS自由基和DPPH 自由基；发酵液原液对羟自由基的清除率为40％，对铁离子的还原能力表示为2073.43μmol Trolox/L。
北京工商大学理学院/植物资源研究与开发北京市重点实验室、中国检验检疫科学研究院化妆品技术中心、云南白药集团公司的许丹妮、刘平平、苏宁、安全、赵丹、李萌、王昌涛在《湖北农业科学》杂志2017年05期上发表论文《马齿苋发酵液中活性成分含量及化妆品功效研究》，文章中提出，采用紫外分光光度法测定马齿苋(Portulaca oleracea L.)发酵液中总糖、黄酮、蛋白质的含量，分析了发酵液对DPPH自由基的清除效果，通过测定发酵液对B16 细胞中酪氨酸酶活性的抑制效果评价发酵液的美白功效。结果表明，马齿苋发酵液中总糖、黄酮含量分别为3.90、0.59mg/mL；蛋白质含量为55.72±0.83μg/mL。发酵液对DPPH自由基的清除效果良好，对B16细胞中酪氨酸酶的活性有抑制作用。
北京工商大学植物资源研究与开发重点实验室、北京食品营养与人类健康高精尖创新中心的赵丹、曹玉峰、丁文玉、王昌涛、史豆豆、虞旦、张佳婵、李萌在《食品与机械》杂志2017年09期上发表论文《玫瑰发酵液的抗氧化及美白功效探究》，文章中提出，通过对玫瑰发酵液的抗氧化和美白功效及皮肤安全性进行评价，探究美白机理。利用酿酒酵母发酵玫瑰获得玫瑰发酵液，检测其对自由基的清除作用以及对酪氨酸酶活性与黑色素合成的影响，利用基因芯片检测其美白机理，采用人体斑贴试验评估其皮肤安全性。结果表明，玫瑰发酵液具有较强的清除DPPH自由基能力，对细胞外酪氨酸酶活性的抑制作用与浓度呈正比，对 B16细胞内酪氨酸酶活性以及黑色素合成都有一定的抑制作用；玫瑰发酵液能够抑制黑色素瘤通路上游的NGF和FGF2基因表达；人体斑贴试验显示玫瑰发酵液未引起阳性刺激反应。玫瑰发酵液具有较高的皮肤安全性，同时具有抗氧化、抑制酪氨酸酶活性与黑色素生成的功效，其通过抑制NGF和FGF2的表达发挥美白作用。
本发明利用微生物在生长过程中分泌的多种酶对中草药中的活性成分进行提取和修饰，从而获得安全、纯天然的中药护肤品。
发明内容
本发明的目的是提供一种伍参圆发酵原浆。
本发明的另一目的是提供伍参圆发酵原浆的制备方法。
本发明的还提供了伍参圆发酵原浆在制备治疗黄褐斑的保健化妆品中的用途。
本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：
一种伍参圆发酵原浆，该伍参圆发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)伍参圆干粉的制备：将人参1～2重量份、丹参0.1～1重量份、苦参0.1～1重量份、沙参0.1～1重量份、玄参0.1～1重量份、核桃0.1～1重量份、绿茶茶叶0.1～1重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过20～30目筛，得到伍参圆干粉；
(2)伍参圆发酵初始体系的制备：将浓度为(105～108)CFU·mL-1、pH值为6.5～7.5的酵母菌液，与步骤(1)所得的伍参圆干粉和水混合，酵母菌液、伍参圆干粉和水的配比比例为(5～10)mL：(13～20)g：300mL，即得伍参圆发酵初始体系；
(3)伍参圆发酵初原液的制备：在35～45℃下，对步骤(2)所得的伍参圆发酵初始体系进行发酵培养24～30h，得到伍参圆发酵初原液；
(4)伍参圆发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的伍参圆发酵初原液在115～121℃下进行灭菌25～35min、然后在离心半径为8～11cm，转速为3800～4200r·min-1条件下，进行离心10～15min，取离心后的上清液，即得到伍参圆发酵原浆。
所述的伍参圆发酵原浆，该伍参圆发酵原浆采用如下制备方法制备，优选的步骤如下：
(1)伍参圆干粉的制备：将人参1重量份、丹参0.5重量份、苦参0.5重量份、沙参0.5重量份、玄参0.5重量份、核桃0.5重量份、绿茶茶叶0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到伍参圆干粉；
(2)伍参圆发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的伍参圆干粉和水混合，酵母菌液、伍参圆干粉和水的配比比例为8mL：15g： 300mL，即得伍参圆发酵初始体系；
(3)伍参圆发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的伍参圆发酵初始体系进行发酵培养28h，得到伍参圆发酵初原液；
(4)伍参圆发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的伍参圆发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到伍参圆发酵原浆。
一种伍参圆发酵原浆的制备方法，该制备方法的步骤如下：
(1)伍参圆干粉的制备：将人参1～2重量份、丹参0.1～1重量份、苦参0.1～1重量份、沙参0.1～1重量份、玄参0.1～1重量份、核桃0.1～1重量份、绿茶茶叶0.1～1重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过20～30目筛，得到伍参圆干粉；
(2)伍参圆发酵初始体系的制备：将浓度为(105～108)CFU·mL-1、pH值为6.5～7.5的酵母菌液，与步骤(1)所得的伍参圆干粉和水混合，酵母菌液、伍参圆干粉和水的配比比例为(5～10)mL：(13～20)g：300mL，即得伍参圆发酵初始体系；
(3)伍参圆发酵初原液的制备：在35～45℃下，对步骤(2)所得的伍参圆发酵初始体系进行发酵培养24～30h，得到伍参圆发酵初原液；
(4)伍参圆发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的伍参圆发酵初原液在115～121℃下进行灭菌25～35min、然后在离心半径为8～11cm，转速为3800～4200r·min-1条件下，进行离心10～15min，取离心后的上清液，即得到伍参圆发酵原浆。
所述的伍参圆发酵原浆的制备方法，该制备方法优选的步骤如下：
(1)伍参圆干粉的制备：将人参1重量份、丹参0.5重量份、苦参0.5重量份、沙参0.5重量份、玄参0.5重量份、核桃0.5重量份、绿茶茶叶0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到伍参圆干粉；
(2)伍参圆发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的伍参圆干粉和水混合，酵母菌液、伍参圆干粉和水的配比比例为8mL：15g： 300mL，即得伍参圆发酵初始体系；
(3)伍参圆发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的伍参圆发酵初始体系进行发酵培养28h，得到伍参圆发酵初原液；
(4)伍参圆发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的伍参圆发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到伍参圆发酵原浆。
一种伍参圆发酵原浆制备抗衰老化妆品中的应用，该伍参圆发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)伍参圆干粉的制备：将人参1重量份、丹参0.5重量份、苦参0.5重量份、沙参0.5重量份、玄参0.5重量份、核桃0.5重量份、绿茶茶叶0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到伍参圆干粉；
(2)伍参圆发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的伍参圆干粉和水混合，酵母菌液、伍参圆干粉和水的配比比例为8mL：15g： 300mL，即得伍参圆发酵初始体系；
(3)伍参圆发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的伍参圆发酵初始体系进行发酵培养28h，得到伍参圆发酵初原液；
(4)伍参圆发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的伍参圆发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到伍参圆发酵原浆。
一种伍参圆发酵原浆制备治疗黄褐斑化妆品中的应用，该伍参圆发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)伍参圆干粉的制备：将人参1重量份、丹参0.5重量份、苦参0.5重量份、沙参0.5重量份、玄参0.5重量份、核桃0.5重量份、绿茶茶叶0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到伍参圆干粉；
(2)伍参圆发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的伍参圆干粉和水混合，酵母菌液、伍参圆干粉和水的配比比例为8mL：15g： 300mL，即得伍参圆发酵初始体系；
(3)伍参圆发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的伍参圆发酵初始体系进行发酵培养28h，得到伍参圆发酵初原液；
(4)伍参圆发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的伍参圆发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到伍参圆发酵原浆。
所述的伍参圆发酵原浆，其特征在于，采用化妆品常规的制备方法，将伍参圆发酵原浆制备成面膜、精华液或爽肤水。
酵母菌为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae，ATCC编号为26603，市售。
实验一：治疗黄褐斑的发酵原浆筛选实验研究
本研究通过小鼠动物模型，拟从实验角度对各个发酵原浆的疗效加以研究。
1材料
1.1动物
健康3月龄纯系昆明种雌性小鼠60只，体重20～25g，购自北京大学医学部实验动物科学部，许可证号：SCXK(京)2016-0010，分笼饲养。实验前适应性喂养1周，温度为(22±2)℃，12h光照，湿度40％，自由进食，单笼饲养，排除饮食及环境等所有可能对实验动物产生的影响。
1.2实验用发酵原浆
1.1.1发酵原浆液甲：
(1)干粉的制备：将人参15g、丹参7.5g、苦参7.5g、沙参7.5g、玄参7.5g、核桃7.5g、绿茶茶叶7.5g混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到柒干粉；
(2)发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的干粉和水混合，酵母菌液、干粉和水的配比比例为8mL：15g：300mL，即得发酵初始体系；
(3)发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的发酵初始体系进行发酵培养28h，得到发酵初原液；
(4)发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到发酵原浆液甲。
1.1.2发酵原浆液乙：
(1)干粉的制备：将人参15g、丹参7.5g、苦参7.5g、沙参7.5g、玄参7.5g、核桃7.5g、绿茶茶叶7.5g混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到干粉；
(2)发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的植物乳杆菌液，与步骤(1)所得的干粉和水混合，酵母菌液、干粉和水的配比比例为8mL：15g：300mL，即得发酵初始体系；
(3)发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的发酵初始体系进行发酵培养28h，得到发酵初原液；
(4)发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到发酵原浆液乙。
1.1.3发酵原浆液丙：
(1)干粉的制备：将人参15g、丹参7.5g、苦参7.5g、沙参7.5g、玄参7.5g、核桃7.5g、绿茶茶叶7.5g混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到干粉；
(2)发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的乳酸乳球菌液，与步骤(1)所得的干粉和水混合，酵母菌液、干粉和水的配比比例为8mL：15g：300mL，即得发酵初始体系；
(3)发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的发酵初始体系进行发酵培养28h，得到发酵初原液；
(4)发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到发酵原浆液丙。
1.1.4发酵原浆液丁：
(1)干粉的制备：将人参15g、丹参7.5g、苦参7.5g、沙参7.5g、玄参7.5g、核桃7.5g、绿茶茶叶7.5g混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到干粉；
(2)发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的嗜酸乳杆菌液，与步骤(1)所得的干粉和水混合，酵母菌液、干粉和水的配比比例为8mL：15g：300mL，即得发酵初始体系；
(3)发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的发酵初始体系进行发酵培养28h，得到发酵初原液；
(4)发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到发酵原浆液丁。
3％氢醌霜：武汉市中医医院药剂科生产，批号20050905。
黄体酮注射液：浙江仙琚制药股份有限公司，批号：20050115。
1.3试剂
硫化钠(NaS)：由淄博安豪化工有限公司生产，批号：20150125，临用前配成10％水溶液。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)试剂盒：有上海研生生化试剂有限公司生产，批号：20150321。
1.4主要仪器
DY89-Ⅱ型电动玻璃匀浆机：由北京和信同通科技发展有限公司生产。系统生物显微镜：由上海精密仪器仪表有限公司生产。
2实验方法
2.1模型制作
小鼠2.5％戊巴比妥钠麻醉后，以0.4％的黄体酮注射液按0.02g/kg剂量小鼠后肢肌肉注射，每周6次，连续4周。正常组按0.02g/kg肌肉注射灭菌注射用水。
2.2动物分组及涂抹发酵原浆
取健康雌性小鼠60只，3个剂量组，随机分为6组，每组10只。正常组、模型组、发酵原浆甲组(剂量0.5g/g)、发酵原浆乙组(剂量0.5g/g)、发酵原浆丙组(剂量0.5g/g)、发酵原浆丁组(剂量0.5g/g)、3％氢醌阳性对照组(0.5g/g)。发酵原浆各治疗组分别在小鼠造模当日皮肤局部涂抹，每日1次，每周7次，连续涂抹35天。正常组和模型组于相应时间给予蒸馏水局部涂抹；3％氢醌阳性药对照组于造模当日开始局部涂抹，时间和疗程同发酵原浆治疗组。
2.3观察指标及检测
涂抹30天后，颈椎脱臼处死小鼠，背部去毛，迅速取肝组织及涂抹部位的皮肤组织各2 块，其中一块用冰冷的生理盐水冲洗，除去血液，滤纸吸干，切取肝脏及皮肤各0.5g，分别放入2.0ml预冷生理盐水的烧杯中，剪碎组织，再倒入试管中，以高速分散器10r/min匀浆两次，每次10秒；再以3500r/min转速离心15分钟，取上清液。采用黄嘌呤氧化酶法，按试剂盒检测说明书方法测定SOD；采用硫代巴比妥酸法，按试剂盒检测说明书方法测定MDA 值。同时，分离小鼠背部皮肤，取去毛的皮肤组织一块(2cm×1cm)，10％多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，切片，HE染色，常规组织病理检测，光镜观察，计数上皮增生、真皮血管数及真皮炎细胞数；免疫组化染色，观察黑色素细胞染色和数目(阳性细胞：无，计0分；<15％，计0.5分，<30％，计1分；>30％计2分)。
2.4统计学方法
计量资料采用组间比较t检验；分层计算资料采用秩和检验进行统计处理。
3结果
3.1各组小鼠皮肤、肝组织MDA、SOD含量的测定见表1。
本研究结果显示，造模后，动物皮肤及肝组织的MDA含量提高，SOD含量降低，与正常组比较差异非常显著(P<0.01)。治疗后，发酵原浆甲组的MDA含量有明显降低，SOD 含量有明显提高，与模型组比较，差异显著(P<0.05，P<0.01)；发酵原浆甲组与阳性对照组比较差异显著(P<0.05)，由此提示发酵原浆甲可清除氧自由基并减少自由基产生。发酵原浆乙组、发酵原浆丙组、发酵原浆丁组的MDA含量有所降低，SOD含量也有所提高，但与模型组比较，差异不明显，无显著性差异。
表1各组小鼠皮肤及肝组织MDA、SOD含量的测定
与模型组比较*P<0.05，**P<0.01；与阳性组比较△P<0.05
3.2各组小鼠皮肤病理组织形态学及免疫组织化学观察
3.2.1病理形态学观察如下，并见表2：
(1)正常组：小鼠上皮层的细胞有序成行排列，细胞没有增生，细胞核也没有明显的增大，在小鼠的真皮层中，没有见到血管扩张，罕见有炎性细胞。
(2)模型组：小鼠上皮层的细胞排列无序，混乱，细胞多出现增生的情况，细胞核增大，在小鼠的真皮层中，多数血管都呈现出扩张的情况，可见许多炎性细胞。
(3)阳性组：小鼠上皮层的细胞排列有一定的规整性，有些细胞可成排排列，可见只有少量细胞出现增生的情况，细胞核增大的少见，在小鼠的真皮层中，仅有少许血管出现扩张的情况，大部分血管没有扩张，罕见有炎性细胞。
(4)发酵原浆甲组：小鼠上皮层的细胞排列有一定的规整性，有些细胞可成排排列，可见只有少量细胞出现增生的情况，细胞核增大的少见，在小鼠的真皮层中，仅有少许血管出现扩张的情况，大部分血管没有扩张，罕见有炎性细胞。
(5)发酵原浆乙组：小鼠上皮层的大部分细胞排列依然比较混乱、无序，仅有少量细胞为成排排列，有大量的上皮细胞出现了增生的情况，细胞核依然处于增大的情况，明显明显缩小，在小鼠的真皮层中，有血管扩张的情况比较普遍，只有少量血管没有没有扩张，炎性细胞依然可见。
(6)发酵原浆丙组：小鼠上皮层的大部分细胞排列依然比较混乱、无序，仅有少量细胞为成排排列，有大量的上皮细胞出现了增生的情况，细胞核依然处于增大的情况，明显明显缩小，在小鼠的真皮层中，有血管扩张的情况比较普遍，只有少量血管没有没有扩张，炎性细胞依然可见。
(7)发酵原浆丁组：小鼠上皮层的大部分细胞排列依然比较混乱、无序，仅有少量细胞为成排排列，有大量的上皮细胞出现了增生的情况，细胞核依然处于增大的情况，明显明显缩小，在小鼠的真皮层中，有血管扩张的情况比较普遍，只有少量血管没有没有扩张，炎性细胞依然可见。
3.2.2免疫组织化学的病理形态学观察如下，并见表2：
(1)正常组：在上皮层中，偶见黑色素细胞，胞浆呈现为棕色。
(2)模型组：在上皮层中，产生了大量的黑色素细胞，约占50％，胞浆呈现为褐色。
(3)阳性组：在上皮层中，黑色素细胞大量减少，约占10％，胞浆呈现为棕色。
(4)发酵原浆甲组：在上皮层中，罕见黑色素细胞，胞浆呈现为淡棕色。
(5)发酵原浆乙组：在上皮层中，依然存在大量的黑色素细胞，约占30％，胞浆呈现为褐色。
(6)发酵原浆丙组：在上皮层中，依然存在大量的黑色素细胞，约占30％，胞浆呈现为褐色。
(7)发酵原浆丁组：在上皮层中，依然存在大量的黑色素细胞，约占30％，胞浆呈现为褐色。
表2各组小鼠皮肤组织病理形态学及黑色素细胞观察结果(n)
秩和检验；与模型组比较*P<0.05，**P<0.01
4结论
黄褐斑是长期的诸多因素导致的疾病。皮肤酪氨酸酶的活性下降，黑色素细胞小体数量增加，其中氧自由基是黄褐斑形成的重要原因之一。机体抗氧化系统中最重要的是抗氧化酶的作用，其中SOD是最主要的酶之一。实验研究表明，只有在特定制备方法下制备所得的发酵原浆甲才具有较强的祛斑作用。
具体实施方式
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1：
伍参圆发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)伍参圆干粉的制备：将人参15g、丹参7.5g、苦参7.5g、沙参7.5g、玄参7.5g、核桃7.5g、绿茶茶叶7.5g混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到伍参圆干粉；
(2)伍参圆发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的伍参圆干粉和水混合，酵母菌液、伍参圆干粉和水的配比比例为8mL：15g： 300mL，即得伍参圆发酵初始体系；
(3)伍参圆发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的伍参圆发酵初始体系进行发酵培养28h，得到伍参圆发酵初原液；
(4)伍参圆发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的伍参圆发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到伍参圆发酵原浆。
实施例2：
伍参圆发酵霜
操作步骤，如下：
(1)在烧杯中依次称取A相原料；
(2)在另一称重烧杯中称取丁二醇、甘油和汉生胶，用玻璃棒手搅分散均匀后加入去离子水；
(3)分别用玻璃棒手搅加热A、B相原料，升温至80-85℃后，B相搅拌5-10分钟，转速50-100转/分钟，将A相料液加入B相烧杯中进行均质，均质速度大约在3500r/min左右，均质5-8min；
(4)以转速35-40转/分钟搅拌降温至45℃，加入MTI，搅拌降温；
(5)降至室温后称量，添加去离子水补足重量，搅拌均匀，即得伍参圆发酵霜。

Claims (7)

1.一种伍参圆发酵原浆，其特征在于，该伍参圆发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)伍参圆干粉的制备：将人参1～2重量份、丹参0.1～1重量份、苦参0.1～1重量份、沙参0.1～1重量份、玄参0.1～1重量份、核桃0.1～1重量份、绿茶茶叶0.1～1重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过20～30目筛，得到伍参圆干粉；
(2)伍参圆发酵初始体系的制备：将浓度为(105～108)CFU·mL-1、pH值为6.5～7.5的酵母菌液，与步骤(1)所得的伍参圆干粉和水混合，酵母菌液、伍参圆干粉和水的配比比例为(5～10)mL：(13～20)g：300mL，即得伍参圆发酵初始体系；
(3)伍参圆发酵初原液的制备：在35～45℃下，对步骤(2)所得的伍参圆发酵初始体系进行发酵培养24～30h，得到伍参圆发酵初原液；
(4)伍参圆发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的伍参圆发酵初原液在115～121℃下进行灭菌25～35min、然后在离心半径为8～11cm，转速为3800～4200r·min-1条件下，进行离心10～15min，取离心后的上清液，即得到伍参圆发酵原浆。
2.如权利要求1所述的伍参圆发酵原浆，其特征在于，该伍参圆发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)伍参圆干粉的制备：将人参1重量份、丹参0.5重量份、苦参0.5重量份、沙参0.5重量份、玄参0.5重量份、核桃0.5重量份、绿茶茶叶0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到伍参圆干粉；
(2)伍参圆发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的伍参圆干粉和水混合，酵母菌液、伍参圆干粉和水的配比比例为8mL：16g：320mL，即得伍参圆发酵初始体系；
(3)伍参圆发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的伍参圆发酵初始体系进行发酵培养28h，得到伍参圆发酵初原液；
(4)伍参圆发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的伍参圆发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到伍参圆发酵原浆。
3.一种伍参圆发酵原浆的制备方法，其特征在于，该制备方法的步骤如下：
(1)伍参圆干粉的制备：将人参1～2重量份、丹参0.1～1重量份、苦参0.1～1重量份、沙参0.1～1重量份、玄参0.1～1重量份、核桃0.1～1重量份、绿茶茶叶0.1～1重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过20～30目筛，得到伍参圆干粉；
(2)伍参圆发酵初始体系的制备：将浓度为(105～108)CFU·mL-1、pH值为6.5～7.5的酵母菌液，与步骤(1)所得的伍参圆干粉和水混合，酵母菌液、伍参圆干粉和水的配比比例为(5～10)mL：(13～20)g：300mL，即得伍参圆发酵初始体系；
(3)伍参圆发酵初原液的制备：在35～45℃下，对步骤(2)所得的伍参圆发酵初始体系进行发酵培养24～30h，得到伍参圆发酵初原液；
(4)伍参圆发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的伍参圆发酵初原液在115～121℃下进行灭菌25～35min、然后在离心半径为8～11cm，转速为3800～4200r·min-1条件下，进行离心10～15min，取离心后的上清液，即得到伍参圆发酵原浆。
4.如权利要求3所述的伍参圆发酵原浆的制备方法，其特征在于，该制备方法的步骤如下：
(1)伍参圆干粉的制备：将人参1重量份、丹参0.5重量份、苦参0.5重量份、沙参0.5重量份、玄参0.5重量份、核桃0.5重量份、绿茶茶叶0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到伍参圆干粉；
(2)伍参圆发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的伍参圆干粉和水混合，酵母菌液、伍参圆干粉和水的配比比例为8mL：16g：320mL，即得伍参圆发酵初始体系；
(3)伍参圆发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的伍参圆发酵初始体系进行发酵培养28h，得到伍参圆发酵初原液；
(4)伍参圆发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的伍参圆发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到伍参圆发酵原浆。
5.一种伍参圆发酵原浆制备抗衰老化妆品中的应用，其特征在于，该伍参圆发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)伍参圆干粉的制备：将人参1重量份、丹参0.5重量份、苦参0.5重量份、沙参0.5重量份、玄参0.5重量份、核桃0.5重量份、绿茶茶叶0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到伍参圆干粉；
(2)伍参圆发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的伍参圆干粉和水混合，酵母菌液、伍参圆干粉和水的配比比例为8mL：16g：320mL，即得伍参圆发酵初始体系；
(3)伍参圆发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的伍参圆发酵初始体系进行发酵培养28h，得到伍参圆发酵初原液；
(4)伍参圆发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的伍参圆发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到伍参圆发酵原浆。
6.一种伍参圆发酵原浆制备治疗黄褐斑化妆品中的应用，其特征在于，该伍参圆发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)伍参圆干粉的制备：将人参1重量份、丹参0.5重量份、苦参0.5重量份、沙参0.5重量份、玄参0.5重量份、核桃0.5重量份、绿茶茶叶0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到伍参圆干粉；
(2)伍参圆发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的伍参圆干粉和水混合，酵母菌液、伍参圆干粉和水的配比比例为8mL：16g：320mL，即得伍参圆发酵初始体系；
(3)伍参圆发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的伍参圆发酵初始体系进行发酵培养28h，得到伍参圆发酵初原液；
(4)伍参圆发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的伍参圆发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到伍参圆发酵原浆。
7.如权利要求1所述的伍参圆发酵原浆，其特征在于，采用化妆品常规的制备方法，将伍参圆发酵原浆制备成面膜、精华液或爽肤水。
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