CN109260120A - 一种莹肌如瑜散发酵原浆化妆品及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种莹肌如瑜散发酵原浆化妆品及其制备方法与应用。其制备方法的步骤如下:(1)莹肌如瑜散干粉的制备:将大米、燕麦、皂荚、砂仁、甘松、升麻、绿小豆、白芨混合,干燥,粉碎机粉碎,过筛,得到莹肌如瑜散干粉;(2)莹肌如瑜散发酵初始体系的制备:将酵母菌液与步骤(1)所得的莹肌如瑜散干粉和水混合,即得莹肌如瑜散发酵初始体系;(3)莹肌如瑜散发酵初原液的制备:对步骤(2)所得的莹肌如瑜散发酵初始体系进行发酵培养,得到莹肌如瑜散发酵初原液;(4)莹肌如瑜散发酵原浆的制备:将步骤(3)所得的莹肌如瑜散发酵初原液进行灭菌、然后进行离心,取离心后的上清液,即得到莹肌如瑜散发酵原浆。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种莹肌如瑜散发酵原浆化妆品及其制备方法与应用。
背景技术
莹肌如瑜散由古方经典《普济方》中的莹肌如玉散转化而来,取皂荚、糯米、绿小豆、楮实、白及、白丁香、升麻、砂仁、甘松、三赖子,研为细末涂面上,治黑干黑曾、粉刺。
由朱棣领衔和教授滕硕长史刘醇等编辑而成的普济方一书,广泛搜集明初以前各种医学典籍中的有关方剂,被誉为中国古代最大的一部方书,堪称为集15世纪以前方书编辑之大成。普济方重视辨证论治,从脏腑气血辨治皮肤病,美容方药组成中主要是具有健脾补肾益气养血祛风的药物,如白芷白术川芎熟地肉桂等。书中方药载有具体用量制备及使用方法,对于研发新的美容方药剂型等均有较高的临床指导价值及应用前景。该书美容方药的用药规律:一是以植物药为主;二是多为芳香药及甘润之品,味辛甘,辛香甘润;三是不少药具有抗衰老功能,含维生素类物质,具有营养抗皱之效;四是抗(真)菌;五是石灰及灰类药为消靥痣之专品,对美容药剂的制作开发有一定的参考意义。
本发明根据莹肌如玉散的配方制作莹肌如瑜散发酵原浆,并经过不断的配方调制,最后选用《2015版已使用化妆品名录》中可用的原料包括:大米、燕麦、皂荚、砂仁、甘松、升麻、绿小豆,白芨混合经过发酵获得莹肌如瑜散发酵原浆。此配方中的大米具有清洁皮肤去角质,其所富含的维生素B、E还能起到滋养皮肤的作用。燕麦含有丰富的燕麦葡聚糖,保湿效果显著。皂荚所含的皂苷是天然的表面活性剂,清洁能力好。白芨富含淀粉、葡萄糖、挥发油、粘液质等,外用涂擦,可消除脸上痤疮般下的痕迹,让肌肤光滑无痕。本发明选用以上原料发酵制得的莹肌如瑜散发酵原浆既保留了原料本身所具有的功效性同时,发酵过程又赋予了其意料不到的效果。
当前人们的生活水平不断提高,越来越多的消费者开始重视既对人体健康无害,又具有美容保健作用的天然护肤化妆品。利用中草药提取物作为美容护肤化妆品的添加剂,具有药效稳定持久,既产生功效又没有毒副作用的优势,深受人们的青睐。目前,中草药所含的各种天然活性成分,被广泛应用于现代化妆品中,并发挥各种作用。
随着基因工程、细胞工程、酶工程技术的不断发展和完善,微生物发酵技术有了突飞猛进的发展,在天然活性物质的研究开发中发挥着越来越重要的作用。发酵过程所需条件非常温和,而且反应产物单纯和能耗少,是一个与环境友善的绿色化学过程。
北京工商大学理学院的赵丹、许丹妮、王冬冬、张佳婵、李萌、王昌涛在《日用化学工业》杂志2016年04期上发表论文《灵芝发酵液的成分检测及美白与抗衰老功效评价》,文章中提出,为开发灵芝发酵液在化妆品领域的应用,使用葡萄酒酵母发酵灵芝并测定发酵液中所含有的多糖、多酚、黄酮和多肽含量。通过DPPH自由基清除实验和羟自由基清除实验对灵芝发酵液的抗氧化能力进行检测,并测定其对成纤维细胞存活率的影响以评估其可能在抗衰老方面发挥的作用。最后通过体外酪氨酸酶实验和小鼠黑色素瘤细胞内的酪氨酸酶活性及黑色素合成抑制实验对灵芝发酵液的美白功效进行评价。结果表明,灵芝发酵液富含多糖,质量浓度为9.910g/L,多酚、黄酮和多肽的质量浓度分别为0.054,0.045和2.931g/L。体积分数分别为25.89%和42.18%的灵芝发酵液可清除50%的DPPH自由基和羟自由基;体积分数为0.05%~0.2%范围内的灵芝发酵液可有效促进成纤维细胞增殖;灵芝发酵液对酪氨酸酶活性抑制率高达73.22%,其通过抑制酪氨酸酶活性起到抑制黑色素合成的作用。因此灵芝发酵液具有一定的抗衰老和美白功效。
北京工商大学理学院、中国检验检疫科学研究院化妆品技术中、心云南白药集团医药电子商务有限公司的赵丹、李萌、苏宁、安全、张佳婵、王昌涛在《日用化学品科学》杂志2016年06期上发表论文《枸杞发酵液的抗衰老活性和皮肤安全性研究》,文章中提出,采用枸杞为原料,德氏乳杆菌为菌种进行发酵获得枸杞发酵液。对枸杞发酵液的生理生化性质与成分进行检测,通过自由基清除实验与成纤维细胞增殖实验对枸杞发酵液的抗衰老活性进行检测,利用人体斑贴实验对枸杞发酵液的安全性进行评估。实验结果表明,枸杞发酵液为黏稠弱酸性液体,主要成分是多糖,具有较强的清除DPPH自由基和羟自由基的能力,在一定体积分数内可促进成纤维细胞增殖。
北京工商大学理学院、北京工商大学北京食品营养与人类健康高精尖创新中心的许丹妮、史豆豆、赵丹、王昌涛、李萌在《日用化学品科学》杂志2016年12期上发表论文《葡萄籽发酵液抗衰老活性研究》,文章中提出,利用乳酸菌发酵葡萄籽得到葡萄籽发酵液。对发酵液中的主要活性成分进行检测,通过测定自由基清除效果以及成纤维细胞增殖实验来衡量发酵液的抗衰老活性。结果表明葡萄籽发酵液中蛋白质、黄酮、原花青素的含量分别为2.89,1.01,0.43mg/m L。体积分数为0.43%和1.25%的发酵液可清除50%的ABTS自由基和DPPH自由基;发酵液原液对羟自由基的清除率为40%,对铁离子的还原能力表示为2073.43μmol Trolox/L。
北京工商大学理学院/植物资源研究与开发北京市重点实验室、中国检验检疫科学研究院化妆品技术中心、云南白药集团公司的许丹妮、刘平平、苏宁、安全、赵丹、李萌、王昌涛在《湖北农业科学》杂志2017年05期上发表论文《马齿苋发酵液中活性成分含量及化妆品功效研究》,文章中提出,采用紫外分光光度法测定马齿苋(Portulaca oleracea L.)发酵液中总糖、黄酮、蛋白质的含量,分析了发酵液对DPPH自由基的清除效果,通过测定发酵液对B16细胞中酪氨酸酶活性的抑制效果评价发酵液的美白功效。结果表明,马齿苋发酵液中总糖、黄酮含量分别为3.90、0.59mg/m L;蛋白质含量为55.72±0.83μg/m L。发酵液对DPPH自由基的清除效果良好,对B16细胞中酪氨酸酶的活性有抑制作用。
北京工商大学植物资源研究与开发重点实验室、北京食品营养与人类健康高精尖创新中心的赵丹、曹玉峰、丁文玉、王昌涛、史豆豆、虞旦、张佳婵、李萌在《食品与机械》杂志2017年09期上发表论文《玫瑰发酵液的抗氧化及美白功效探究》,文章中提出,通过对玫瑰发酵液的抗氧化和美白功效及皮肤安全性进行评价,探究美白机理。利用酿酒酵母发酵玫瑰获得玫瑰发酵液,检测其对自由基的清除作用以及对酪氨酸酶活性与黑色素合成的影响,利用基因芯片检测其美白机理,采用人体斑贴试验评估其皮肤安全性。结果表明,玫瑰发酵液具有较强的清除DPPH自由基能力,对细胞外酪氨酸酶活性的抑制作用与浓度呈正比,对B16细胞内酪氨酸酶活性以及黑色素合成都有一定的抑制作用;玫瑰发酵液能够抑制黑色素瘤通路上游的NGF和FGF2基因表达;人体斑贴试验显示玫瑰发酵液未引起阳性刺激反应。玫瑰发酵液具有较高的皮肤安全性,同时具有抗氧化、抑制酪氨酸酶活性与黑色素生成的功效,其通过抑制NGF和FGF2的表达发挥美白作用。
本发明利用微生物在生长过程中分泌的多种酶对中草药中的活性成分进行提取和修饰,从而获得安全、纯天然的中药护肤品。
发明内容
本发明的目的是提供一种莹肌如瑜散发酵原浆。
本发明的另一目的是提供莹肌如瑜散发酵原浆的制备方法。
本发明的还提供了莹肌如瑜散发酵原浆在制备治疗痤疮的保健化妆品中的用途。
本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的:
一种莹肌如瑜散发酵原浆,该莹肌如瑜散发酵原浆采用如下制备方法制备,步骤如下:
(1)莹肌如瑜散干粉的制备:将大米1~2重量份、燕麦0.1~1重量份、皂荚0.1~1重量份、砂仁0.1~1重量份、甘松0.1~1重量份、升麻0.1~1重量份、绿小豆0.1~1重量份,白芨0.1~1重量份混合,干燥,粉碎机粉碎,过20~30目筛,得到莹肌如瑜散干粉;
(2)莹肌如瑜散发酵初始体系的制备:将浓度为(105~108)CFU·mL-1、pH值为6.5~7.5的酵母菌液,与步骤(1)所得的莹肌如瑜散干粉和水混合,酵母菌液、莹肌如瑜散干粉和水的配比比例为(5~10)mL:(13~20)g:300mL,即得莹肌如瑜散发酵初始体系;
(3)莹肌如瑜散发酵初原液的制备:在35~45℃下,对步骤(2)所得的莹肌如瑜散发酵初始体系进行发酵培养24~30h,得到莹肌如瑜散发酵初原液;
(4)莹肌如瑜散发酵原浆的制备:将步骤(3)所得的莹肌如瑜散发酵初原液在115~121℃下进行灭菌25~35min、然后在离心半径为8~11cm,转速为3800~4200r·min-1条件下,进行离心10~15min,取离心后的上清液,即得到莹肌如瑜散发酵原浆。
所述的莹肌如瑜散发酵原浆,该莹肌如瑜散发酵原浆采用如下制备方法制备,优选的步骤如下:
(1)莹肌如瑜散干粉的制备:将大米1重量份、燕麦0.5重量份、皂荚0.5重量份、砂仁0.5重量份、甘松0.5重量份、升麻0.5重量份、绿小豆0.5重量份、白芨0.5重量份混合,干燥,粉碎机粉碎,过30目筛,得到莹肌如瑜散干粉;
(2)莹肌如瑜散发酵初始体系的制备:将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液,与步骤(1)所得的莹肌如瑜散干粉和水混合,酵母菌液、莹肌如瑜散干粉和水的配比比例为8mL:15g:300mL,即得莹肌如瑜散发酵初始体系;
(3)莹肌如瑜散发酵初原液的制备:在40℃下,对步骤(2)所得的莹肌如瑜散发酵初始体系进行发酵培养28h,得到莹肌如瑜散发酵初原液;
(4)莹肌如瑜散发酵原浆的制备:将步骤(3)所得的莹肌如瑜散发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm,转速为4000r·min-1条件下,进行离心12min,取离心后的上清液,即得到莹肌如瑜散发酵原浆。
一种莹肌如瑜散发酵原浆的制备方法,该制备方法的步骤如下:
(1)莹肌如瑜散干粉的制备:将大米1~2重量份、燕麦0.1~1重量份、皂荚0.1~1重量份、砂仁0.1~1重量份、甘松0.1~1重量份、升麻0.1~1重量份、绿小豆0.1~1重量份,白芨0.1~1重量份混合,干燥,粉碎机粉碎,过20~30目筛,得到莹肌如瑜散干粉;
(2)莹肌如瑜散发酵初始体系的制备:将浓度为(105~108)CFU·mL-1、pH值为6.5~7.5的酵母菌液,与步骤(1)所得的莹肌如瑜散干粉和水混合,酵母菌液、莹肌如瑜散干粉和水的配比比例为(5~10)mL:(13~20)g:300mL,即得莹肌如瑜散发酵初始体系;
(3)莹肌如瑜散发酵初原液的制备:在35~45℃下,对步骤(2)所得的莹肌如瑜散发酵初始体系进行发酵培养24~30h,得到莹肌如瑜散发酵初原液;
(4)莹肌如瑜散发酵原浆的制备:将步骤(3)所得的莹肌如瑜散发酵初原液在115~121℃下进行灭菌25~35min、然后在离心半径为8~11cm,转速为3800~4200r·min-1条件下,进行离心10~15min,取离心后的上清液,即得到莹肌如瑜散发酵原浆。
所述的莹肌如瑜散发酵原浆的制备方法,该制备方法优选的步骤如下:
(1)莹肌如瑜散干粉的制备:将大米1重量份、燕麦0.5重量份、皂荚0.5重量份、砂仁0.5重量份、甘松0.5重量份、升麻0.5重量份、绿小豆0.5重量份、白芨0.5重量份混合,干燥,粉碎机粉碎,过30目筛,得到莹肌如瑜散干粉;
(2)莹肌如瑜散发酵初始体系的制备:将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液,与步骤(1)所得的莹肌如瑜散干粉和水混合,酵母菌液、莹肌如瑜散干粉和水的配比比例为8mL:15g:300mL,即得莹肌如瑜散发酵初始体系;
(3)莹肌如瑜散发酵初原液的制备:在40℃下,对步骤(2)所得的莹肌如瑜散发酵初始体系进行发酵培养28h,得到莹肌如瑜散发酵初原液;
(4)莹肌如瑜散发酵原浆的制备:将步骤(3)所得的莹肌如瑜散发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm,转速为4000r·min-1条件下,进行离心12min,取离心后的上清液,即得到莹肌如瑜散发酵原浆。
一种莹肌如瑜散发酵原浆制备抗衰老化妆品中的应用,该莹肌如瑜散发酵原浆采用如下制备方法制备,步骤如下:
(1)莹肌如瑜散干粉的制备:将大米1重量份、燕麦0.5重量份、皂荚0.5重量份、砂仁0.5重量份、甘松0.5重量份、升麻0.5重量份、绿小豆0.5重量份、白芨0.5重量份混合,干燥,粉碎机粉碎,过30目筛,得到莹肌如瑜散干粉;
(2)莹肌如瑜散发酵初始体系的制备:将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液,与步骤(1)所得的莹肌如瑜散干粉和水混合,酵母菌液、莹肌如瑜散干粉和水的配比比例为8mL:15g:300mL,即得莹肌如瑜散发酵初始体系;
(3)莹肌如瑜散发酵初原液的制备:在40℃下,对步骤(2)所得的莹肌如瑜散发酵初始体系进行发酵培养28h,得到莹肌如瑜散发酵初原液;
(4)莹肌如瑜散发酵原浆的制备:将步骤(3)所得的莹肌如瑜散发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm,转速为4000r·min-1条件下,进行离心12min,取离心后的上清液,即得到莹肌如瑜散发酵原浆。
一种莹肌如瑜散发酵原浆制备治疗痤疮化妆品中的应用,该莹肌如瑜散发酵原浆采用如下制备方法制备,步骤如下:
(1)莹肌如瑜散干粉的制备:将大米1重量份、燕麦0.5重量份、皂荚0.5重量份、砂仁0.5重量份、甘松0.5重量份、升麻0.5重量份、绿小豆0.5重量份、白芨0.5重量份混合,干燥,粉碎机粉碎,过30目筛,得到莹肌如瑜散干粉;
(2)莹肌如瑜散发酵初始体系的制备:将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液,与步骤(1)所得的莹肌如瑜散干粉和水混合,酵母菌液、莹肌如瑜散干粉和水的配比比例为8mL:15g:300mL,即得莹肌如瑜散发酵初始体系;
(3)莹肌如瑜散发酵初原液的制备:在40℃下,对步骤(2)所得的莹肌如瑜散发酵初始体系进行发酵培养28h,得到莹肌如瑜散发酵初原液;
(4)莹肌如瑜散发酵原浆的制备:将步骤(3)所得的莹肌如瑜散发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm,转速为4000r·min-1条件下,进行离心12min,取离心后的上清液,即得到莹肌如瑜散发酵原浆。
所述的莹肌如瑜散发酵原浆,采用化妆品常规的制备方法,将莹肌如瑜散发酵原浆制备成面膜、精华液或爽肤水。
酵母菌为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae,ATCC编号为26603,市售。
实验一:对兔耳增生性痤疮作用的发酵原浆筛选实验研究
1材料和方法
1.1材料
1.1.1发酵原浆液甲:
(1)干粉的制备:将大米15g、燕麦7.5g、皂荚7.5g、砂仁7.5g、甘松7.5g、升麻7.5g、绿小豆7.5g、白芨7.5g混合,干燥,粉碎机粉碎,过30目筛,得到柒干粉;
(2)发酵初始体系的制备:将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液,与步骤(1)所得的干粉和水混合,酵母菌液、干粉和水的配比比例为8mL:15g:300mL,即得发酵初始体系;
(3)发酵初原液的制备:在40℃下,对步骤(2)所得的发酵初始体系进行发酵培养28h,得到发酵初原液;
(4)发酵原浆的制备:将步骤(3)所得的发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm,转速为4000r·min-1条件下,进行离心12min,取离心后的上清液,即得到发酵原浆液甲。
1.1.2发酵原浆液乙:
(1)干粉的制备:将大米15g、燕麦7.5g、皂荚7.5g、砂仁7.5g、甘松7.5g、升麻7.5g、绿小豆7.5g、白芨7.5g混合,干燥,粉碎机粉碎,过30目筛,得到干粉;
(2)发酵初始体系的制备:将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的植物乳杆菌液,与步骤(1)所得的干粉和水混合,酵母菌液、干粉和水的配比比例为8mL:15g:300mL,即得发酵初始体系;
(3)发酵初原液的制备:在40℃下,对步骤(2)所得的发酵初始体系进行发酵培养28h,得到发酵初原液;
(4)发酵原浆的制备:将步骤(3)所得的发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm,转速为4000r·min-1条件下,进行离心12min,取离心后的上清液,即得到发酵原浆液乙。
1.1.3发酵原浆液丙:
(1)干粉的制备:将大米15g、燕麦7.5g、皂荚7.5g、砂仁7.5g、甘松7.5g、升麻7.5g、绿小豆7.5g、白芨7.5g混合,干燥,粉碎机粉碎,过30目筛,得到干粉;
(2)发酵初始体系的制备:将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的乳酸乳球菌液,与步骤(1)所得的干粉和水混合,酵母菌液、干粉和水的配比比例为8mL:15g:300mL,即得发酵初始体系;
(3)发酵初原液的制备:在40℃下,对步骤(2)所得的发酵初始体系进行发酵培养28h,得到发酵初原液;
(4)发酵原浆的制备:将步骤(3)所得的发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm,转速为4000r·min-1条件下,进行离心12min,取离心后的上清液,即得到发酵原浆液丙。
1.1.4发酵原浆液丁:
(1)干粉的制备:将大米15g、燕麦7.5g、皂荚7.5g、砂仁7.5g、甘松7.5g、升麻7.5g、绿小豆7.5g、白芨7.5g混合,干燥,粉碎机粉碎,过30目筛,得到干粉;
(2)发酵初始体系的制备:将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的嗜酸乳杆菌液,与步骤(1)所得的干粉和水混合,酵母菌液、干粉和水的配比比例为8mL:15g:300mL,即得发酵初始体系;
(3)发酵初原液的制备:在40℃下,对步骤(2)所得的发酵初始体系进行发酵培养28h,得到发酵初原液;
(4)发酵原浆的制备:将步骤(3)所得的发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm,转速为4000r·min-1条件下,进行离心12min,取离心后的上清液,即得到发酵原浆液丁。
转化生长因子β1(TGF-β1)抗体,由上海康朗生物科技有限公司生产;
三步法染色试剂盒和DAB试剂盒,由北京赛驰生物科技有限公司生产;
盐酸赛拉嗪注射液,由吉林省康达动物药业有限公司生产,规格:2mL。
1.2方法
1.2.1动物模型的建立
健康成年日本大耳白兔20只,体质量2.0~2.3kg,雌雄各半,购自北京大学医学部实验动物科学部,许可证号:SCXK(京)2016-0010,分笼饲养。
白兔臀部肌肉注射盐酸赛拉嗪注射液(0.2mL/kg),将白兔麻醉,对白兔的耳腹侧面进行消毒,在每侧的兔耳腹侧中部沿长轴避开血管做4个边长为1cm的正方形切口,在保留软骨的条件下,手术切除全层皮肤及软骨膜,创面用湿盐水纱布压迫,再用油纱布包覆,胶布固定,每天更换1次,大约10天后,创口愈合,兔耳形成痤疮增生。
1.2.2动物分组及处理
20只日本大耳白兔共制备160个全层皮肤缺损创面,伤后21d创面均上皮化,局部涂抹发酵原浆甲、发酵原浆乙、发酵原浆丙、发酵原浆丁。
造有痤疮的兔子随机分为6组,其中实验治疗组4组:发酵原浆甲治疗组:给予发酵原浆甲治疗、发酵原浆乙治疗组:给予发酵原浆乙治疗、发酵原浆丙治疗组:给予发酵原浆丙治疗,发酵原浆丁治疗组:给予发酵原浆丁治疗,另外两组分别为:阳性对照组:相同容积的生理盐水对照组、阴性对照组:未处理的痤疮组,各组4只兔子(32个痤疮),均每天涂抹2次,用药10天后(即术后31d)取材、取每组痤疮数的一半;取材后继续涂抹剩余的痤疮,均每天涂抹1次,用药11天后(即术后43d)行剩余痤疮取材。
取材方式:按1.2.1麻醉方式及消毒,切口沿痤疮边缘位于兔耳正常皮肤与痤疮交界处,垂直于皮肤表面,深达软骨表面,整个痤疮组织完整切取。将每个痤疮平均分成2份,一份用作HE及TGF-β1免疫组织化学染色,另一份用作TGF-β1mRNA检测。
1.2.3痤疮厚度测定
术后32d、43d用彩色超声诊断仪,于同一测定人在相同条件下测定各组创面形成痤疮的厚度。
1.2.4痤疮硬度测定
术后32d、43d用痤疮硬度精密测定仪测定痤疮硬度:将硬度计垂直放置于待测的痤疮和皮肤上,靠硬度计本身重量作用于测定部位,根据测定不同痤疮和皮肤的硬度不同,仪表上即显示不同的数据。每个痤疮、皮肤分别测定3次,计算平均值,将读数换算成硬度值,单位为N/mm2。
1.2.5痤疮组织HE染色
痤疮组织标本用4%多聚甲醛固定,石腊包埋,连续5μm厚度切片,常规爬片。做HE染色,观察增生性痤疮的病理表现。
1.2.6 TGF-β1免疫组化
切片二甲苯脱腊和梯度酒精脱水,3%过氧化氢阻断过氧化物酶。然后与TGF-β1一抗(1:100)4℃冰箱孵育过夜,滴加适量生物素标记山羊抗鼠IgG,37℃孵育20min,磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3×5min,滴加辣根酶标记链霉卵白素,37℃孵育20min,PBS冲洗3×5min,DAB显色,自来水充分冲洗,如需要,苏木素复染,脱水,透明,封片。于光镜下观察阳性信号,阳性信号为黄色。在400倍光镜下观察结果,在每张切片的上、中、下、左、右找5个视野进行计数,阳性细胞反应率(R)=阳性细胞数/细胞总数,结果取均数。
1.3统计学处理
兔耳痤疮组织学检测数据分析采用SPSS15.0统计分析软件完成,数据采用均数±标准差表达,采用配对设计的t检验、单因素方差分析,以P<0.05确定差异有显著意义。
2结果
2.1痤疮组织学观察结果
在术后32d、43d兔耳痤疮组织发酵原浆甲治疗组痤疮面积变小,高度变低,质地变软,与发酵原浆乙组、发酵原浆丙组、以及对照组比较,相差十分显著。在HE染色法切片上,发酵原浆乙组、发酵原浆丙组、发酵原浆丁组以及对照组的痤疮组织内大量成纤维细胞、细胞外基质和毛细血管,浅部可见环形或螺旋样分布,组织内少量炎性细胞,发酵原浆甲治疗组痤疮组织内成纤维细胞明显少于发酵原浆乙组、发酵原浆丙组、发酵原浆丁组以及对照组,表皮层增厚,成纤维细胞排列较规则,细胞外基质多,可见少量毛细血管,在术后43d兔耳痤疮组织治疗组较术后32d真皮层更薄,成纤维细胞排列较整齐。实验结果见图1、图2、图3、图4、图5、图6。
2.2痤疮厚度测定
在术后32d、43d兔耳痤疮组织空白对照组、生理盐水组愈合创面厚度接近,明显高于发酵原浆甲组、发酵原浆乙组、发酵原浆丙组、发酵原浆丁组,而发酵原浆乙组、发酵原浆丙组、发酵原浆丁组又高于发酵原浆甲组。且发酵原浆甲组术后43d的愈合创面厚度与术后32d相比有明显的降低,而发酵原浆乙组、发酵原浆丙组与发酵原浆丁组术后43d的愈合创面厚度与术后32d相比没有明显的降低。实验结果见表1。
表1各组痤疮厚度(mm)
注:与空白对照组比较,*P<0.01,**P<0.05;术后32d与43d配对t检验,#P<0.01
2.3痤疮硬度测定
在术后32d、43d兔耳痤疮组织空白对照组、生理盐水组愈合创面硬度接近,明显高于发酵原浆甲组、发酵原浆乙组、发酵原浆丙组、发酵原浆丁组,而发酵原浆乙组、发酵原浆丙组、发酵原浆丁组又高于发酵原浆甲组。且发酵原浆甲组术后43d的愈合创面硬度与术后32d相比有明显的降低,而发酵原浆乙组、发酵原浆丙组发酵原浆丁组与术后43d的愈合创面硬度与术后32d相比没有明显的降低。实验结果见表2。
表2各组痤疮硬度(N/mm2)
注:与空白对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;术后32d与43d配对t检验,#P<0.01
2.4TGF-β1免疫组织化学
在术后32d、43d兔耳痤疮组织空白对照组、生理盐水组TGF-β1表达明显,黄色为阳性表达,在发酵原浆甲组TGF-β1表达明显下降,发酵原浆乙组与发酵原浆丙组TGF-β1表达有所下降,但不明显。且发酵原浆甲组术后43d的TGF-β1表达比术后32d有明显下降,而发酵原浆乙组与发酵原浆丙组术后43d的TGF-β1表达比术后32d没有明显下降。实验结果见表3。
表3各组TGF-β1表达分析(%)
注:与空白对照组比较及各实验组间比较,*P<0.05;术后32d与43d配对t检验,#P<0.05
3结论
发酵原浆甲的作用效果明显优于发酵原浆乙、发酵原浆丙和发酵原浆丁,说明在特定制备方法下制备的发酵原浆甲具备显著的、预料不到的技术效果。
附图说明:
图1:空白对照组组织切片图(×200)
图2:生理盐水组组织切片图(×200)
图3:发酵原浆甲组组织切片图(×200)
图4:发酵原浆乙组组织切片图(×200)
图5:发酵原浆丙组组织切片图(×200)
图6:发酵原浆丁组组织切片图(×200)
具体实施方式
下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
实施例1:
莹肌如瑜散发酵原浆采用如下制备方法制备,步骤如下:
(1)莹肌如瑜散干粉的制备:将大米15g、燕麦7.5g、皂荚7.5g、砂仁7.5g、甘松7.5g、升麻7.5g、绿小豆7.5g、白芨7.5g混合,干燥,粉碎机粉碎,过30目筛,得到莹肌如瑜散干粉;
(2)莹肌如瑜散发酵初始体系的制备:将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液,与步骤(1)所得的莹肌如瑜散干粉和水混合,酵母菌液、莹肌如瑜散干粉和水的配比比例为8mL:15g:300mL,即得莹肌如瑜散发酵初始体系;
(3)莹肌如瑜散发酵初原液的制备:在40℃下,对步骤(2)所得的莹肌如瑜散发酵初始体系进行发酵培养28h,得到莹肌如瑜散发酵初原液;
(4)莹肌如瑜散发酵原浆的制备:将步骤(3)所得的莹肌如瑜散发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm,转速为4000r·min-1条件下,进行离心12min,取离心后的上清液,即得到莹肌如瑜散发酵原浆。
实施例2:
莹肌如玉散发酵原浆面膜
操作步骤:
1、用称重过的烧杯将B相中芦荟粉及水称取后搅拌均匀,再依次称取B相剩余原料搅拌5~10分钟,转速35~40转/分钟,搅拌溶解(可适当加热,加快溶解,温度55~60℃)待用;
2、用另一称重过的烧杯依次称取丁二醇、甘油,然后称取透明汉生胶分散于丁二醇甘油中,然后加入水搅拌均匀后加入A相其余原料加热搅拌至80℃,保温30min后降温;
3、降温至45℃,加入B相待用溶液,搅拌混合均匀后加入C相原料,搅拌混合均匀;
4、搅拌降至室温后称量,添加去离子水补足重量,搅拌均匀;
5、将固定重量的面膜液倒入已经折好的面膜袋中,封口即可。
说明:透明质酸钠预先溶于水中,制备成1%的水溶液备用。
Claims (7)
1.一种莹肌如瑜散发酵原浆,其特征在于,该莹肌如瑜散发酵原浆采用如下制备方法制备,步骤如下:
(1)莹肌如瑜散干粉的制备:将大米1~2重量份、燕麦0.1~1重量份、皂荚0.1~1重量份、砂仁0.1~1重量份、甘松0.1~1重量份、升麻0.1~1重量份、绿小豆0.1~1重量份,白芨0.1~1重量份混合,干燥,粉碎机粉碎,过20~30目筛,得到莹肌如瑜散干粉;
(2)莹肌如瑜散发酵初始体系的制备:将浓度为(105~108)CFU·mL-1、pH值为6.5~7.5的酵母菌液,与步骤(1)所得的莹肌如瑜散干粉和水混合,酵母菌液、莹肌如瑜散干粉和水的配比比例为(5~10)mL:(13~20)g:300mL,即得莹肌如瑜散发酵初始体系;
(3)莹肌如瑜散发酵初原液的制备:在35~45℃下,对步骤(2)所得的莹肌如瑜散发酵初始体系进行发酵培养24~30h,得到莹肌如瑜散发酵初原液;
(4)莹肌如瑜散发酵原浆的制备:将步骤(3)所得的莹肌如瑜散发酵初原液在115~121℃下进行灭菌25~35min、然后在离心半径为8~11cm,转速为3800~4200r·min-1条件下,进行离心10~15min,取离心后的上清液,即得到莹肌如瑜散发酵原浆。
2.如权利要求1所述的莹肌如瑜散发酵原浆,其特征在于,该莹肌如瑜散发酵原浆采用如下制备方法制备,步骤如下:
(1)莹肌如瑜散干粉的制备:将大米1重量份、燕麦0.5重量份、皂荚0.5重量份、砂仁0.5重量份、甘松0.5重量份、升麻0.5重量份、绿小豆0.5重量份、白芨0.5重量份混合,干燥,粉碎机粉碎,过30目筛,得到莹肌如瑜散干粉;
(2)莹肌如瑜散发酵初始体系的制备:将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液,与步骤(1)所得的莹肌如瑜散干粉和水混合,酵母菌液、莹肌如瑜散干粉和水的配比比例为8mL:16g:320mL,即得莹肌如瑜散发酵初始体系;
(3)莹肌如瑜散发酵初原液的制备:在40℃下,对步骤(2)所得的莹肌如瑜散发酵初始体系进行发酵培养28h,得到莹肌如瑜散发酵初原液;
(4)莹肌如瑜散发酵原浆的制备:将步骤(3)所得的莹肌如瑜散发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm,转速为4000r·min-1条件下,进行离心12min,取离心后的上清液,即得到莹肌如瑜散发酵原浆。
3.一种莹肌如瑜散发酵原浆的制备方法,其特征在于,该制备方法的步骤如下:
(1)莹肌如瑜散干粉的制备:将大米1~2重量份、燕麦0.1~1重量份、皂荚0.1~1重量份、砂仁0.1~1重量份、甘松0.1~1重量份、升麻0.1~1重量份、绿小豆0.1~1重量份,白芨0.1~1重量份混合,干燥,粉碎机粉碎,过20~30目筛,得到莹肌如瑜散干粉;
(2)莹肌如瑜散发酵初始体系的制备:将浓度为(105~108)CFU·mL-1、pH值为6.5~7.5的酵母菌液,与步骤(1)所得的莹肌如瑜散干粉和水混合,酵母菌液、莹肌如瑜散干粉和水的配比比例为(5~10)mL:(13~20)g:300mL,即得莹肌如瑜散发酵初始体系;
(3)莹肌如瑜散发酵初原液的制备:在35~45℃下,对步骤(2)所得的莹肌如瑜散发酵初始体系进行发酵培养24~30h,得到莹肌如瑜散发酵初原液;
(4)莹肌如瑜散发酵原浆的制备:将步骤(3)所得的莹肌如瑜散发酵初原液在115~121℃下进行灭菌25~35min、然后在离心半径为8~11cm,转速为3800~4200r·min-1条件下,进行离心10~15min,取离心后的上清液,即得到莹肌如瑜散发酵原浆。
4.如权利要求3所述的莹肌如瑜散发酵原浆的制备方法,其特征在于,该制备方法的步骤如下:
(1)莹肌如瑜散干粉的制备:将大米1重量份、燕麦0.5重量份、皂荚0.5重量份、砂仁0.5重量份、甘松0.5重量份、升麻0.5重量份、绿小豆0.5重量份、白芨0.5重量份混合,干燥,粉碎机粉碎,过30目筛,得到莹肌如瑜散干粉;
(2)莹肌如瑜散发酵初始体系的制备:将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液,与步骤(1)所得的莹肌如瑜散干粉和水混合,酵母菌液、莹肌如瑜散干粉和水的配比比例为8mL:16g:320mL,即得莹肌如瑜散发酵初始体系;
(3)莹肌如瑜散发酵初原液的制备:在40℃下,对步骤(2)所得的莹肌如瑜散发酵初始体系进行发酵培养28h,得到莹肌如瑜散发酵初原液;
(4)莹肌如瑜散发酵原浆的制备:将步骤(3)所得的莹肌如瑜散发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm,转速为4000r·min-1条件下,进行离心12min,取离心后的上清液,即得到莹肌如瑜散发酵原浆。
5.一种莹肌如瑜散发酵原浆制备抗衰老化妆品中的应用,其特征在于,该莹肌如瑜散发酵原浆采用如下制备方法制备,步骤如下:
(1)莹肌如瑜散干粉的制备:将大米1重量份、燕麦0.5重量份、皂荚0.5重量份、砂仁0.5重量份、甘松0.5重量份、升麻0.5重量份、绿小豆0.5重量份混合,干燥,粉碎机粉碎,过30目筛,得到莹肌如瑜散干粉;
(2)莹肌如瑜散发酵初始体系的制备:将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液,与步骤(1)所得的莹肌如瑜散干粉和水混合,酵母菌液、莹肌如瑜散干粉和水的配比比例为8mL:16g:320mL,即得莹肌如瑜散发酵初始体系;
(3)莹肌如瑜散发酵初原液的制备:在40℃下,对步骤(2)所得的莹肌如瑜散发酵初始体系进行发酵培养28h,得到莹肌如瑜散发酵初原液;
(4)莹肌如瑜散发酵原浆的制备:将步骤(3)所得的莹肌如瑜散发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm,转速为4000r·min-1条件下,进行离心12min,取离心后的上清液,即得到莹肌如瑜散发酵原浆。
6.一种莹肌如瑜散发酵原浆制备治疗痤疮化妆品中的应用,其特征在于,该莹肌如瑜散发酵原浆采用如下制备方法制备,步骤如下:
(1)莹肌如瑜散干粉的制备:将大米1重量份、燕麦0.5重量份、皂荚0.5重量份、砂仁0.5重量份、甘松0.5重量份、升麻0.5重量份、绿小豆0.5重量份、白芨0.5重量份混合,干燥,粉碎机粉碎,过30目筛,得到莹肌如瑜散干粉;
(2)莹肌如瑜散发酵初始体系的制备:将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液,与步骤(1)所得的莹肌如瑜散干粉和水混合,酵母菌液、莹肌如瑜散干粉和水的配比比例为8mL:16g:320mL,即得莹肌如瑜散发酵初始体系;
(3)莹肌如瑜散发酵初原液的制备:在40℃下,对步骤(2)所得的莹肌如瑜散发酵初始体系进行发酵培养28h,得到莹肌如瑜散发酵初原液;
(4)莹肌如瑜散发酵原浆的制备:将步骤(3)所得的莹肌如瑜散发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm,转速为4000r·min-1条件下,进行离心12min,取离心后的上清液,即得到莹肌如瑜散发酵原浆。
7.如权利要求1所述的莹肌如瑜散发酵原浆,其特征在于,采用化妆品常规的制备方法,将莹肌如瑜散发酵原浆制备成面膜、精华液或爽肤水。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |
Application publication date: 20190125 |
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