CN109260134A - 一种瑜蓉芳发酵原浆化妆品及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种瑜蓉芳发酵原浆化妆品及其制备方法与应用。其制备方法的步骤如下：(1)瑜蓉芳干粉的制备：将马齿苋、冬瓜籽、冰片、僵蚕、白蔹、白芨、大豆混合，干燥，粉碎机粉碎，过筛，得到瑜蓉芳干粉；(2)瑜蓉芳发酵初始体系的制备：将酵母菌液与步骤(1)所得的瑜蓉芳干粉和水混合，再加入搅碎后的鲜芦荟，搅拌均匀，即得瑜蓉芳发酵初始体系；(3)瑜蓉芳发酵初原液的制备：对步骤(2)所得的瑜蓉芳发酵初始体系进行发酵培养，得到瑜蓉芳发酵初原液；(4)瑜蓉芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的瑜蓉芳发酵初原液进行灭菌、然后进行离心，取离心后的上清液，即得到瑜蓉芳发酵原浆。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种瑜蓉芳发酵原浆化妆品及其制备方法与应用。
背景技术
瑜蓉芳发酵原浆源自古方玉容散，记载于药典《普济方》中，其由白附子、冬瓜子、冰片各、楮实、白僵蚕、白蘞、钟乳石、白及、麝香组成，研为细末，豆浆调匀，涂患处治面上诸黑干黑曾，癫痕。
由朱棣领衔和教授滕硕长史刘醇等编辑而成的普济方一书，广泛搜集明初以前各种医学典籍中的有关方剂，被誉为中国古代最大的一部方书，堪称为集15世纪以前方书编辑之大成。普济方重视辨证论治，从脏腑气血辨治皮肤病，美容方药组成中主要是具有健脾补肾益气养血祛风的药物，如白芷白术川芎熟地肉桂等。书中方药载有具体用量制备及使用方法，对于研发新的美容方药剂型等均有较高的临床指导价值及应用前景。该书美容方药的用药规律:一是以植物药为主；二是多为芳香药及甘润之品，味辛甘，辛香甘润；三是不少药具有抗衰老功能，含维生素类物质，具有营养抗皱之效；四是抗菌；五是石灰及灰类药为消靥痣之专品，对美容药剂的制作开发有一定的参考意义。
本发明根据玉容散的配方制作瑜蓉芳发酵原浆，根据化妆品使用名录选取使用的原料，并经过不断的配方调制，最后选用将马齿苋、冬瓜籽、冰片、僵蚕、白蔹、白芨0.1～1重量份、大豆经过发酵获得伍参圆发酵原浆。此配方保留了普济方的原始用料中的五大参为中药材，配以核桃和绿茶茶叶，采用酿酒酵母对原料进行发酵。马齿苋富含维生素C、维生素E以及膳食纤维、果胶、矿物质等。其中维生素C和维生素E是较强的抗氧化剂，有抗皮肤衰老的功效。另外，维生素C有一定的消除色素斑作用，而维生素E可以保护线粒体的磷脂，有抗自由基作用，是美容佳品。白芨富含淀粉、葡萄糖、挥发油、粘液质等，外用涂擦，可消除脸上痤疮般下的痕迹，让肌肤光滑无痕。大豆富含大豆蛋白和大豆异黄酮，能够滋润皮肤，令其变得细嫩。此外大豆中含有的维生素A、B、D、E及钙、磷、铁，可维持肌肤弹性、使皮肤润泽细嫩富有弹性。本发明选用以上原料发酵制得的莹瑜容芳发酵原浆既保留了原料本身所具有的功效性同时，发酵过程又赋予了其意料不到的效果。
当前人们的生活水平不断提高，越来越多的消费者开始重视既对人体健康无害，又具有美容保健作用的天然护肤化妆品。利用中草药提取物作为美容护肤化妆品的添加剂，具有药效稳定持久，既产生功效又没有毒副作用的优势，深受人们的青睐。目前，中草药所含的各种天然活性成分，被广泛应用于现代化妆品中，并发挥各种作用。
随着基因工程、细胞工程、酶工程技术的不断发展和完善，微生物发酵技术有了突飞猛进的发展，在天然活性物质的研究开发中发挥着越来越重要的作用。发酵过程所需条件非常温和，而且反应产物单纯和能耗少，是一个与环境友善的绿色化学过程。
北京工商大学理学院的赵丹、许丹妮、王冬冬、张佳婵、李萌、王昌涛在《日用化学工业》杂志2016年04期上发表论文《灵芝发酵液的成分检测及美白与抗衰老功效评价》，文章中提出，为开发灵芝发酵液在化妆品领域的应用，使用葡萄酒酵母发酵灵芝并测定发酵液中所含有的多糖、多酚、黄酮和多肽含量。通过DPPH自由基清除实验和羟自由基清除实验对灵芝发酵液的抗氧化能力进行检测，并测定其对成纤维细胞存活率的影响以评估其可能在抗衰老方面发挥的作用。最后通过体外酪氨酸酶实验和小鼠黑色素瘤细胞内的酪氨酸酶活性及黑色素合成抑制实验对灵芝发酵液的美白功效进行评价。结果表明，灵芝发酵液富含多糖，质量浓度为9.910g/L，多酚、黄酮和多肽的质量浓度分别为0.054，0.045和2.931g/L。体积分数分别为25.89％和42.18％的灵芝发酵液可清除50％的DPPH自由基和羟自由基；体积分数为0.05％～0.2％范围内的灵芝发酵液可有效促进成纤维细胞增殖；灵芝发酵液对酪氨酸酶活性抑制率高达73.22％，其通过抑制酪氨酸酶活性起到抑制黑色素合成的作用。因此灵芝发酵液具有一定的抗衰老和美白功效。
北京工商大学理学院、中国检验检疫科学研究院化妆品技术中、心云南白药集团医药电子商务有限公司的赵丹、李萌、苏宁、安全、张佳婵、王昌涛在《日用化学品科学》杂志2016年06期上发表论文《枸杞发酵液的抗衰老活性和皮肤安全性研究》，文章中提出，采用枸杞为原料，德氏乳杆菌为菌种进行发酵获得枸杞发酵液。对枸杞发酵液的生理生化性质与成分进行检测，通过自由基清除实验与成纤维细胞增殖实验对枸杞发酵液的抗衰老活性进行检测，利用人体斑贴实验对枸杞发酵液的安全性进行评估。实验结果表明，枸杞发酵液为黏稠弱酸性液体，主要成分是多糖，具有较强的清除DPPH自由基和羟自由基的能力，在一定体积分数内可促进成纤维细胞增殖。
北京工商大学理学院、北京工商大学北京食品营养与人类健康高精尖创新中心的许丹妮、史豆豆、赵丹、王昌涛、李萌在《日用化学品科学》杂志2016年12期上发表论文《葡萄籽发酵液抗衰老活性研究》，文章中提出，利用乳酸菌发酵葡萄籽得到葡萄籽发酵液。对发酵液中的主要活性成分进行检测，通过测定自由基清除效果以及成纤维细胞增殖实验来衡量发酵液的抗衰老活性。结果表明葡萄籽发酵液中蛋白质、黄酮、原花青素的含量分别为2.89，1.01，0.43mg/m L。体积分数为0.43％和1.25％的发酵液可清除50％的ABTS自由基和DPPH自由基；发酵液原液对羟自由基的清除率为40％，对铁离子的还原能力表示为2073.43μmol Trolox/L。
北京工商大学理学院/植物资源研究与开发北京市重点实验室、中国检验检疫科学研究院化妆品技术中心、云南白药集团公司的许丹妮、刘平平、苏宁、安全、赵丹、李萌、王昌涛在《湖北农业科学》杂志2017年05期上发表论文《马齿苋发酵液中活性成分含量及化妆品功效研究》，文章中提出，采用紫外分光光度法测定马齿苋(Portulaca oleracea L.)发酵液中总糖、黄酮、蛋白质的含量，分析了发酵液对DPPH自由基的清除效果，通过测定发酵液对B16细胞中酪氨酸酶活性的抑制效果评价发酵液的美白功效。结果表明，马齿苋发酵液中总糖、黄酮含量分别为3.90、0.59mg/mL；蛋白质含量为55.72±0.83μg/m L。发酵液对DPPH自由基的清除效果良好，对B16细胞中酪氨酸酶的活性有抑制作用。
北京工商大学植物资源研究与开发重点实验室、北京食品营养与人类健康高精尖创新中心的赵丹、曹玉峰、丁文玉、王昌涛、史豆豆、虞旦、张佳婵、李萌在《食品与机械》杂志2017年09期上发表论文《玫瑰发酵液的抗氧化及美白功效探究》，文章中提出，通过对玫瑰发酵液的抗氧化和美白功效及皮肤安全性进行评价，探究美白机理。利用酿酒酵母发酵玫瑰获得玫瑰发酵液，检测其对自由基的清除作用以及对酪氨酸酶活性与黑色素合成的影响，利用基因芯片检测其美白机理，采用人体斑贴试验评估其皮肤安全性。结果表明，玫瑰发酵液具有较强的清除DPPH自由基能力，对细胞外酪氨酸酶活性的抑制作用与浓度呈正比，对B16细胞内酪氨酸酶活性以及黑色素合成都有一定的抑制作用；玫瑰发酵液能够抑制黑色素瘤通路上游的NGF和FGF2基因表达；人体斑贴试验显示玫瑰发酵液未引起阳性刺激反应。玫瑰发酵液具有较高的皮肤安全性，同时具有抗氧化、抑制酪氨酸酶活性与黑色素生成的功效，其通过抑制NGF和FGF2的表达发挥美白作用。
本发明利用微生物在生长过程中分泌的多种酶对中草药中的活性成分进行提取和修饰，从而获得安全、纯天然的中药护肤品。
发明内容
本发明的目的是提供一种瑜蓉芳发酵原浆。
本发明的另一目的是提供瑜蓉芳发酵原浆的制备方法。
本发明的还提供了瑜蓉芳发酵原浆在制备治疗银屑病的保健化妆品中的用途。
本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：
一种瑜蓉芳发酵原浆，该瑜蓉芳发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)瑜蓉芳干粉的制备：将马齿苋2～4重量份、冬瓜籽0.1～1重量份、冰片0.1～1重量份、僵蚕0.1～1重量份、白蔹0.1～1.5重量份、白芨0.1～1重量份、大豆0.1～1重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过20～30目筛，得到瑜蓉芳干粉；
(2)瑜蓉芳发酵初始体系的制备：将浓度为(105～108)CFU·mL-1、pH值为6.5～7.5的酵母菌液，与步骤(1)所得的瑜蓉芳干粉和水混合，酵母菌液、瑜蓉芳干粉和水的配比比例为(5～10)mL：(13～20)g：300mL，再加入搅碎后的鲜芦荟2～4重量份，搅拌均匀，即得瑜蓉芳发酵初始体系；
(3)瑜蓉芳发酵初原液的制备：在35～45℃下，对步骤(2)所得的瑜蓉芳发酵初始体系进行发酵培养24～30h，得到瑜蓉芳发酵初原液；
(4)瑜蓉芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的瑜蓉芳发酵初原液在115～121℃下进行灭菌25～35min、然后在离心半径为8～11cm，转速为3800～4200r·min-1条件下，进行离心10～15min，取离心后的上清液，即得到瑜蓉芳发酵原浆。
所述的瑜蓉芳发酵原浆，该瑜蓉芳发酵原浆采用如下制备方法制备，优选的步骤如下：
(1)瑜蓉芳干粉的制备：将马齿苋3重量份、冬瓜籽0.5重量份、冰片0.5重量份、僵蚕0.5重量份、白蔹1重量份、白芨0.5重量份、大豆0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到瑜蓉芳干粉；
(2)瑜蓉芳发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的瑜蓉芳干粉和水混合，酵母菌液、瑜蓉芳干粉和水的配比比例为8mL：15g：300mL，再加入搅碎后的鲜芦荟3重量份，搅拌均匀，即得瑜蓉芳发酵初始体系；
(3)瑜蓉芳发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的瑜蓉芳发酵初始体系进行发酵培养28h，得到瑜蓉芳发酵初原液；
(4)瑜蓉芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的瑜蓉芳发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到瑜蓉芳发酵原浆。
一种瑜蓉芳发酵原浆的制备方法，该制备方法的步骤如下：
(1)瑜蓉芳干粉的制备：将马齿苋2～4重量份、冬瓜籽0.1～1重量份、冰片0.1～1重量份、僵蚕0.1～1重量份、白蔹0.1～1.5重量份、白芨0.1～1重量份、大豆0.1～1重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过20～30目筛，得到瑜蓉芳干粉；
(2)瑜蓉芳发酵初始体系的制备：将浓度为(105～108)CFU·mL-1、pH值为6.5～7.5的酵母菌液，与步骤(1)所得的瑜蓉芳干粉和水混合，酵母菌液、瑜蓉芳干粉和水的配比比例为(5～10)mL：(13～20)g：300mL，再加入搅碎后的鲜芦荟2～4重量份，搅拌均匀，即得瑜蓉芳发酵初始体系；
(3)瑜蓉芳发酵初原液的制备：在35～45℃下，对步骤(2)所得的瑜蓉芳发酵初始体系进行发酵培养24～30h，得到瑜蓉芳发酵初原液；
(4)瑜蓉芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的瑜蓉芳发酵初原液在115～121℃下进行灭菌25～35min、然后在离心半径为8～11cm，转速为3800～4200r·min-1条件下，进行离心10～15min，取离心后的上清液，即得到瑜蓉芳发酵原浆。
所述的瑜蓉芳发酵原浆的制备方法，该制备方法优选的步骤如下：
(1)瑜蓉芳干粉的制备：将马齿苋3重量份、冬瓜籽0.5重量份、冰片0.5重量份、僵蚕0.5重量份、白蔹1重量份、白芨0.5重量份、大豆0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到瑜蓉芳干粉；
(2)瑜蓉芳发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的瑜蓉芳干粉和水混合，酵母菌液、瑜蓉芳干粉和水的配比比例为8mL：15g：300mL，再加入搅碎后的鲜芦荟3重量份，搅拌均匀，即得瑜蓉芳发酵初始体系；
(3)瑜蓉芳发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的瑜蓉芳发酵初始体系进行发酵培养28h，得到瑜蓉芳发酵初原液；
(4)瑜蓉芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的瑜蓉芳发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到瑜蓉芳发酵原浆。
一种瑜蓉芳发酵原浆制备抗衰老化妆品中的应用，该瑜蓉芳发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)瑜蓉芳干粉的制备：将马齿苋3重量份、冬瓜籽0.5重量份、冰片0.5重量份、僵蚕0.5重量份、白蔹1重量份、白芨0.5重量份、大豆0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到瑜蓉芳干粉；
(2)瑜蓉芳发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的瑜蓉芳干粉和水混合，酵母菌液、瑜蓉芳干粉和水的配比比例为8mL：15g：300mL，再加入搅碎后的鲜芦荟3重量份，搅拌均匀，即得瑜蓉芳发酵初始体系；
(3)瑜蓉芳发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的瑜蓉芳发酵初始体系进行发酵培养28h，得到瑜蓉芳发酵初原液；
(4)瑜蓉芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的瑜蓉芳发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到瑜蓉芳发酵原浆。
一种瑜蓉芳发酵原浆制备治疗银屑病化妆品中的应用，该瑜蓉芳发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)瑜蓉芳干粉的制备：将马齿苋3重量份、冬瓜籽0.5重量份、冰片0.5重量份、僵蚕0.5重量份、白蔹1重量份、白芨0.5重量份、大豆0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到瑜蓉芳干粉；
(2)瑜蓉芳发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的瑜蓉芳干粉和水混合，酵母菌液、瑜蓉芳干粉和水的配比比例为8mL：15g：300mL，再加入搅碎后的鲜芦荟3重量份，搅拌均匀，即得瑜蓉芳发酵初始体系；
(3)瑜蓉芳发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的瑜蓉芳发酵初始体系进行发酵培养28h，得到瑜蓉芳发酵初原液；
(4)瑜蓉芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的瑜蓉芳发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到瑜蓉芳发酵原浆。
所述的瑜蓉芳发酵原浆，其特征在于，采用化妆品常规的制备方法，将瑜蓉芳发酵原浆制备成面膜、精华液或爽肤水。
酵母菌为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae，ATCC编号为26603，市售。
实验一：治疗银屑病的发酵原浆筛选实验研究
1实验动物
白色豚鼠，体质量(330±20)g，性别随机，购自北京大学医学部实验动物科学部，许可证号：SCXK(京)2016-0010，分笼饲养。实验前适应性喂养1周，温度为(22±3)℃，12h光照，湿度45％，自由进食，单笼饲养，排除饮食及环境等所有可能对实验动物产生的影响。
2实验试剂与材料
2.1盐酸普萘洛尔注射液，由江苏朗欧药业有限公司生产，批准文号：国药准字H32024747，规格：5mL:5mg
2.2阳性药物：卡泊三醇软膏，由重庆华邦制药有限公司生产，批准文号：国药准字H20113541，规格：0.005％(15g:0.75mg)。
2.3乳膏基质，含硬脂酸、液状石蜡、白凡士林、羊毛脂、三乙醇胺，由西安天正药用辅料有限公司提供。
2.4无钙镁PBS缓冲液，由南京便诊生物科技有限公司提供。
2.5ELISA试剂盒，购于南京森贝伽生物科技有限公司。
2.6发酵原浆液甲：(1)干粉的制备：将马齿苋45g、冬瓜籽7.5g、冰片7.5g、僵蚕7.5g、白蔹15g、白芨7.5g、大豆7.5g混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到干粉；
(2)发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的干粉和水混合，酵母菌液、干粉和水的配比比例为8mL：15g：300mL，再加入搅碎后的鲜芦荟45g，搅拌均匀，即得发酵初始体系；
(3)发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的发酵初始体系进行发酵培养28h，得到发酵初原液；
(4)发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到发酵原浆液甲。
2.7发酵原浆液乙：(1)干粉的制备：将马齿苋45g、冬瓜籽7.5g、冰片7.5g、僵蚕7.5g、白蔹15g、白芨7.5g、大豆7.5g混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到干粉；
(2)发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的植物乳杆菌液，与步骤(1)所得的干粉和水混合，酵母菌液、干粉和水的配比比例为8mL：15g：300mL，再加入搅碎后的鲜芦荟45g，搅拌均匀，即得发酵初始体系；
(3)发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的发酵初始体系进行发酵培养28h，得到发酵初原液；
(4)发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到发酵原浆液乙。
2.8发酵原浆液丙：(1)干粉的制备：将马齿苋45g、冬瓜籽7.5g、冰片7.5g、僵蚕7.5g、白蔹15g、白芨7.5g、大豆7.5g混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到干粉；
(2)发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的乳酸乳球菌液，与步骤(1)所得的干粉和水混合，酵母菌液、干粉和水的配比比例为8mL：15g：300mL，再加入搅碎后的鲜芦荟45g，搅拌均匀，即得发酵初始体系；
(3)发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的发酵初始体系进行发酵培养28h，得到发酵初原液；
(4)发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到发酵原浆液丙。
2.9发酵原浆液丁：(1)干粉的制备：将马齿苋45g、冬瓜籽7.5g、冰片7.5g、僵蚕7.5g、白蔹15g、白芨7.5g、大豆7.5g混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到干粉；
(2)发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的嗜酸乳杆菌液，与步骤(1)所得的干粉和水混合，酵母菌液、干粉和水的配比比例为8mL：15g：300mL，再加入搅碎后的鲜芦荟45g，搅拌均匀，即得发酵初始体系；
(3)发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的发酵初始体系进行发酵培养28h，得到发酵初原液；
(4)发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到发酵原浆液丁。
3分组与造模
将豚鼠随机分为：空白对照组、模型组，阳性对照组、发酵原浆液甲组、发酵原浆液乙组、发酵原浆液丙组、发酵原浆液丁组，共7组，每组10只豚鼠。
取乳膏基质，外涂于所有的豚鼠耳背的皮肤上，每日涂3次，每次间隔8小时，除了空白对照组之外，在其他各组豚鼠耳背的皮肤上外涂乳膏基质后的2小时后，再均匀外涂盐酸普萘洛尔注射液，也是每日涂3次，每次间隔8小时，连续外涂28天后，豚鼠耳背皮肤角质细胞过度增生，形成了过度的角质化，则可以认定为豚鼠耳背皮肤银屑病动物模型造模成功。
取造模成功的豚鼠，按照上述方式继续外涂乳膏基质和盐酸普萘洛尔注射液，此外，除了空白对照组和模型组之外，其他各组分别在外涂盐酸普萘洛尔注射液后的2小时后，均匀外搽相应的治疗品，阳性对照组外搽卡泊三醇软膏，发酵原浆液甲组外搽发酵原浆液甲、发酵原浆液乙组外搽发酵原浆液乙、发酵原浆液丙组外搽发酵原浆液丙、发酵原浆液丁组外搽发酵原浆液丁，连续外搽15天。
4取样与检测
实验结束后，将豚鼠处死，取其一侧的耳背的皮肤0.6g，加4mL无钙镁PBS缓冲液，匀浆，以4200r·min-1的转速，离心8min。离心后，取上清液，采用ELISA试剂盒对耳背皮肤中TNF-α和ICAM-1的含量进行检测。
再取使用豚鼠另一侧的耳背皮肤，用9％的甲醛溶液固定，石蜡包埋，HE染色，光学显微镜下观测豚鼠耳背皮肤颗粒层、角质层、棘细胞层、基底细胞层，精确测量耳廓表皮的厚度(mm)，进行组间比较。
5统计学分析
实验计量数据采用表示，t检验分析，P＜0.05为具有显著性差异。
6实验结果
见表1。
表1 对耳背皮肤中TNF-α和ICAM-1含量及皮肤厚度影响(n＝10)
注：与模型组比较，*P＜0.05；与阳性对照组比较，#P＜0.05
6.1耳背皮肤中TNF-α和ICAM-1含量及皮肤厚度
模型组：皮肤组织中TNF-α含量、ICAM-1含量以及皮肤厚度均显著高于空白对照组，说明造模成功。
阳性对照组：皮肤组织中的TNF-α含量、ICAM-1含量以及皮肤厚度均显著低于模型组，有统计学意义(P＜0.05)；
发酵原浆液甲组：皮肤组织中的TNF-α含量、ICAM-1含量以及皮肤厚度均显著低于模型组，有统计学意义(P＜0.05)；
发酵原浆液乙组：皮肤组织中的TNF-α含量、ICAM-1含量以及皮肤厚度略低于模型组，但是没有显著性差异，不具有统计学意义(P＞0.05)。
发酵原浆液丙组：皮肤组织中的TNF-α含量、ICAM-1含量以及皮肤厚度略低于模型组，但是没有显著性差异，不具有统计学意义(P＞0.05)。
发酵原浆液丁组：皮肤组织中的TNF-α含量、ICAM-1含量以及皮肤厚度略低于模型组，但是没有显著性差异，不具有统计学意义(P＞0.05)。
6.2光镜下观测结果
详见说明书附图1至附图7。
正常组：皮肤的角质层完整，有少许的呈棕褐色的颗粒细胞，棘细胞层为多角状，基底层细胞呈现为单层柱状。
模型组：皮肤角化不全，有较多的呈黑色的颗粒细胞，棘细胞层明显增厚，单层柱状的基底层细胞很少。
阳性对照组：皮肤的角质层完整，有少许的呈棕褐色的颗粒细胞，棘细胞层为多角状，基底层细胞多呈现为单层柱状。
发酵原浆液甲组：皮肤的角质层完整，有少许的呈棕褐色的颗粒细胞，棘细胞层为多角状，基底层细胞多呈现为单层柱状。
发酵原浆液乙组：皮肤角化不全，颗粒细胞多呈现为黑色，少量呈现为棕褐色，棘细胞层明显增厚，可见少量的单层柱状的基底层细胞。
发酵原浆液丙组：皮肤角化不全，颗粒细胞多呈现为黑色，少量呈现为棕褐色，棘细胞层明显增厚，可见少量的单层柱状的基底层细胞。
发酵原浆液丁组：皮肤角化不全，颗粒细胞多呈现为黑色，少量呈现为棕褐色，棘细胞层明显增厚，可见少量的单层柱状的基底层细胞。
7实验结论
发酵原浆液甲组豚鼠耳背皮肤中TNF-α和ICAM-1含量明显下降，皮肤厚度也明显变薄，均接近阳性对照组；光镜下观测，发酵原浆液甲组豚鼠耳背皮肤的状态与阳性对照组也非常接近，所以，可以说明，发酵原浆液甲对银屑病有明显的治疗作用。
附图说明：
图1为正常组豚鼠耳背皮肤光镜下观测图(×400)
图2为模型组豚鼠耳背皮肤光镜下观测图(×400)
图3为阳性对照组豚鼠耳背皮肤光镜下观测图(×400)
图4为发酵原浆液甲组豚鼠耳背皮肤光镜下观测图(×400)
图5为发酵原浆液乙组豚鼠耳背皮肤光镜下观测图(×400)
图6为发酵原浆液丙组豚鼠耳背皮肤光镜下观测图(×400)
图7为发酵原浆液丁组豚鼠耳背皮肤光镜下观测图(×400)
具体实施方式
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1：
瑜蓉芳发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)瑜蓉芳干粉的制备：将马齿苋45g、冬瓜籽7.5g、冰片7.5g、僵蚕7.5g、白蔹15g、白芨7.5g、大豆7.5g混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到瑜蓉芳干粉；
(2)瑜蓉芳发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的瑜蓉芳干粉和水混合，酵母菌液、瑜蓉芳干粉和水的配比比例为8mL：15g：300mL，即得瑜蓉芳发酵初始体系；
(3)瑜蓉芳发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的瑜蓉芳发酵初始体系进行发酵培养28h，得到瑜蓉芳发酵初原液；
(4)瑜蓉芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的瑜蓉芳发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到瑜蓉芳发酵原浆。
实施例2：
瑜容芳发酵乳液制备：
操作步骤：
(1)在烧杯中依次称取A相原料；
(2)在另一称重烧杯中称取去离子水，用称量纸称取卡波姆，边搅拌边缓慢将卡波撒入水中，搅拌15-20分钟，转速50-100转/分钟，润湿、分散均匀后，依次称取加入B相其他原料；
(3)分别用玻璃棒手搅加热A、B相原料，升温至80-85℃后，将A相料液加入B相烧杯中进行均质，均质速度大约在3500r/min左右，均质5-8min；
(4)以转速35-40转/分钟搅拌降温至45℃，依次加入NaOH、MTI和香精，搅拌降温；
(5)降至室温后称量，添加去离子水补足重量，搅拌均匀。
Claims (7)
1.一种瑜蓉芳发酵原浆，其特征在于，该瑜蓉芳发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)瑜蓉芳干粉的制备：将马齿苋2～4重量份、冬瓜籽0.1～1重量份、冰片0.1～1重量份、僵蚕0.1～1重量份、白蔹0.1～1.5重量份、白芨0.1～1重量份、大豆0.1～1重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过20～30目筛，得到瑜蓉芳干粉；
(2)瑜蓉芳发酵初始体系的制备：将浓度为(105～108)CFU·mL-1、pH值为6.5～7.5的酵母菌液，与步骤(1)所得的瑜蓉芳干粉和水混合，酵母菌液、瑜蓉芳干粉和水的配比比例为(5～10)mL：(13～20)g：300mL，再加入搅碎后的鲜芦荟2～4重量份，搅拌均匀，即得瑜蓉芳发酵初始体系；
(3)瑜蓉芳发酵初原液的制备：在35～45℃下，对步骤(2)所得的瑜蓉芳发酵初始体系进行发酵培养24～30h，得到瑜蓉芳发酵初原液；
(4)瑜蓉芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的瑜蓉芳发酵初原液在115～121℃下进行灭菌25～35min、然后在离心半径为8～11cm，转速为3800～4200r·min-1条件下，进行离心10～15min，取离心后的上清液，即得到瑜蓉芳发酵原浆。
2.如权利要求1所述的瑜蓉芳发酵原浆，其特征在于，该瑜蓉芳发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)瑜蓉芳干粉的制备：将马齿苋3重量份、冬瓜籽0.5重量份、冰片0.5重量份、僵蚕0.5重量份、白蔹1重量份、白芨0.5重量份、大豆0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到瑜蓉芳干粉；
(2)瑜蓉芳发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的瑜蓉芳干粉和水混合，酵母菌液、瑜蓉芳干粉和水的配比比例为8mL：16g：320mL，再加入搅碎后的鲜芦荟3重量份，搅拌均匀，即得瑜蓉芳发酵初始体系；
(3)瑜蓉芳发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的瑜蓉芳发酵初始体系进行发酵培养28h，得到瑜蓉芳发酵初原液；
(4)瑜蓉芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的瑜蓉芳发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到瑜蓉芳发酵原浆。
3.一种瑜蓉芳发酵原浆的制备方法，其特征在于，该制备方法的步骤如下：
(1)瑜蓉芳干粉的制备：将马齿苋2～4重量份、冬瓜籽0.1～1重量份、冰片0.1～1重量份、僵蚕0.1～1重量份、白蔹0.1～1.5重量份、白芨0.1～1重量份、大豆0.1～1重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过20～30目筛，得到瑜蓉芳干粉；
(2)瑜蓉芳发酵初始体系的制备：将浓度为(105～108)CFU·mL-1、pH值为6.5～7.5的酵母菌液，与步骤(1)所得的瑜蓉芳干粉和水混合，酵母菌液、瑜蓉芳干粉和水的配比比例为(5～10)mL：(13～20)g：300mL，再加入搅碎后的鲜芦荟2～4重量份，搅拌均匀，即得瑜蓉芳发酵初始体系；
(3)瑜蓉芳发酵初原液的制备：在35～45℃下，对步骤(2)所得的瑜蓉芳发酵初始体系进行发酵培养24～30h，得到瑜蓉芳发酵初原液；
(4)瑜蓉芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的瑜蓉芳发酵初原液在115～121℃下进行灭菌25～35min、然后在离心半径为8～11cm，转速为3800～4200r·min-1条件下，进行离心10～15min，取离心后的上清液，即得到瑜蓉芳发酵原浆。
4.如权利要求3所述的瑜蓉芳发酵原浆的制备方法，其特征在于，该制备方法的步骤如下：
(1)瑜蓉芳干粉的制备：将马齿苋3重量份、冬瓜籽0.5重量份、冰片0.5重量份、僵蚕0.5重量份、白蔹1重量份、白芨0.5重量份、大豆0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到瑜蓉芳干粉；
(2)瑜蓉芳发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的瑜蓉芳干粉和水混合，酵母菌液、瑜蓉芳干粉和水的配比比例为8mL：16g：320mL，再加入搅碎后的鲜芦荟3重量份，搅拌均匀，即得瑜蓉芳发酵初始体系；
(3)瑜蓉芳发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的瑜蓉芳发酵初始体系进行发酵培养28h，得到瑜蓉芳发酵初原液；
(4)瑜蓉芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的瑜蓉芳发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到瑜蓉芳发酵原浆。
5.一种瑜蓉芳发酵原浆制备抗衰老化妆品中的应用，其特征在于，该瑜蓉芳发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)瑜蓉芳干粉的制备：将马齿苋3重量份、冬瓜籽0.5重量份、冰片0.5重量份、僵蚕0.5重量份、白蔹1重量份、白芨0.5重量份、大豆0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到瑜蓉芳干粉；
(2)瑜蓉芳发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的瑜蓉芳干粉和水混合，酵母菌液、瑜蓉芳干粉和水的配比比例为8mL：16g：320mL，再加入搅碎后的鲜芦荟3重量份，搅拌均匀，即得瑜蓉芳发酵初始体系；
(3)瑜蓉芳发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的瑜蓉芳发酵初始体系进行发酵培养28h，得到瑜蓉芳发酵初原液；
(4)瑜蓉芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的瑜蓉芳发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到瑜蓉芳发酵原浆。
6.一种瑜蓉芳发酵原浆制备治疗银屑病化妆品中的应用，其特征在于，该瑜蓉芳发酵原浆采用如下制备方法制备，步骤如下：
(1)瑜蓉芳干粉的制备：将马齿苋3重量份、冬瓜籽0.5重量份、冰片0.5重量份、僵蚕0.5重量份、白蔹1重量份、白芨0.5重量份、大豆0.5重量份混合，干燥，粉碎机粉碎，过30目筛，得到瑜蓉芳干粉；
(2)瑜蓉芳发酵初始体系的制备：将浓度为107CFU·mL-1、pH值为7.0的酿酒酵母菌液，与步骤(1)所得的瑜蓉芳干粉和水混合，酵母菌液、瑜蓉芳干粉和水的配比比例为8mL：16g：320mL，再加入搅碎后的鲜芦荟3重量份，搅拌均匀，即得瑜蓉芳发酵初始体系；
(3)瑜蓉芳发酵初原液的制备：在40℃下，对步骤(2)所得的瑜蓉芳发酵初始体系进行发酵培养28h，得到瑜蓉芳发酵初原液；
(4)瑜蓉芳发酵原浆的制备：将步骤(3)所得的瑜蓉芳发酵初原液在118℃下进行灭菌30min、然后在离心半径为9cm，转速为4000r·min-1条件下，进行离心12min，取离心后的上清液，即得到瑜蓉芳发酵原浆。
7.如权利要求1所述的瑜蓉芳发酵原浆，其特征在于，采用化妆品常规的制备方法，将瑜蓉芳发酵原浆制备成面膜、精华液或爽肤水。
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| CN201811425582.2A CN109260134A (zh) | 2018-11-27 | 2018-11-27 | 一种瑜蓉芳发酵原浆化妆品及其制备方法与应用 |
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| CN201811425582.2A CN109260134A (zh) | 2018-11-27 | 2018-11-27 | 一种瑜蓉芳发酵原浆化妆品及其制备方法与应用 |
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111228165A (zh) * | 2019-12-25 | 2020-06-05 | 深圳阿尔法生物科技有限公司 | 一种桃花冬瓜籽发酵原浆化妆品及其制备方法与应用 |
| CN115154393A (zh) * | 2022-07-04 | 2022-10-11 | 完美（广东）日用品有限公司 | 一种芦荟发酵液及其制备方法与应用 |
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2018
- 2018-11-27 CN CN201811425582.2A patent/CN109260134A/zh not_active Withdrawn
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