KR102453319B1

KR102453319B1 - 락토바실러스 쿤키 Hankook-001 균주를 이용한 항산화, 항염, 미백, 항주름용 발효추출물 및 그 제조 방법, 그 발효추출물을 포함하는 항산화, 항염, 미백, 항주름용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102453319B1
Application number: KR1020210104865A
Authority: KR
Inventors: 강현수; 임미진; 박상주; 이석현; 최정주
Original assignee: 주식회사 한국화장품제조
Priority date: 2021-08-09
Filing date: 2021-08-09
Publication date: 2022-10-12

Abstract

본 발명은 락토바실러스 쿤키 Hankook-001 균주를 이용한 항산화, 항염, 미백, 항주름용 발효추출물 및 그 제조 방법, 그 발효추출물을 포함하는 항산화, 항염, 미백, 항주름용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 산삼 배양근을 추출하고, 락토바실러스 쿤키 Hankook-001 균주(Lactobacillus kunkeei Hankook-001)(기탁번호: KCTC 14478BP)를 이용하여 발효한 발효추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공함으로써, 항산화, 항염, 미백, 항주름의 효과를 제공할 수 있는 락토바실러스 쿤키 Hankook-001 균주를 이용한 항산화, 항염, 미백, 항주름용 발효추출물 및 그 제조 방법, 그 발효추출물을 포함하는 항산화, 항염, 미백, 항주름용 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

락토바실러스 쿤키 Hankook-001 균주를 이용한 항산화, 항염, 미백, 항주름용 발효추출물 및 그 제조 방법, 그 발효추출물을 포함하는 항산화, 항염, 미백, 항주름용 화장료 조성물{Fermented extract for antioxidant, anti-inflammatory, whitening, and anti-wrinkle using Lactobacillus kunkeei Hankook-001strain, and manufacturing method of it, and cosmetic composition containing fermented extract}

인간의 피부는 크게 피부의 겉 표면을 둘러싸고 있는 '표피', 표피 아래에서 혈관, 신경 등의 구조물들을 지지하는 기질을 공급하는 '진피', 그리고 진피와 근육 사이에서 지방을 다량 함유하고 있는 '피하 조직'으로 구성되어 있다.

그 중에서도 진피에는 약 70% 내외의 수분을 함유하고 있으며, 표피에는 약 30% 정도의 수분을 함유하고 있다고 알려져 있다.

하지만, 이는 건강한 사람의 피부 기준에 불과하며 표피의 수분율이 10% 이하로 떨어질 경우, 피부가 거칠어지고 피부 노화가 촉진되는 등 부정적인 영향을 띄게 된다.

또한, 건조한 피부가 유지됨에 따라 피부에 대한 트러블과 건선 및 아토피 등 다양한 염증이 유발될 수 있다.

한편, 유산균은 인체 내에서 유익한 역할을 하는 세균으로서 탄수화물 같은 당을 발효시켜 유산(젖산)을 생성하는 균으로, 지금까지 400여 종이 발견되었으며, 그 중 상품성이 있는 것은 18종으로 알려져 있다.

이들 유산균은 면역증강 특히, 위 장관 면역 증강의 생리활성을 가진다고 알려져 있으며, 최근 웰빙 추세에 따라, 먹어서 좋은 식품이 발랐을 때도 좋을 것이라는 사회적 분위기가 조성됨에 따라, 몸에 이로운 다양한 화장품 소재들이 개발되면서 유산균의 배양액이 피부의 보습, 각질층의 턴오버(turn over) 속도 증가, 주름살 완화 등의 효과가 보고되어 있다.

일례로, 한국공개특허 제1991-0019600호에는 보습 및 활성 산소 제거 능이 있는 화장료용 유산균 배양액에 관한 기술이 개시되어 있으며, 한국공개특허 제2013-0096604호의 경우, 발아곡물의 발효 추출물을 주성분으로 하는 발효 화장품 및 그 제조방법에 관한 기술로서, 유산균을 발효 배양하여 생성되는 산물을 화장료 조성물에 포함하거나, 발아 곡물 등을 특정 속의 유산균으로 발효시켜 얻어진 발효액을 화장료에 배합하여 사용하는 기술이 개시되어 있다.

그리고, 한국공개특허 제2013-0115943호의 경우는 유산균 파쇄물의 상등액을 포함하는 항염증, 피부미백 및 항노화용 조성물에 관한 기술이 개시되어 있다.

한편, 일반적으로 산삼의 종류는 토양의 천연산삼의 종류는 토양의 자생지의 여건에 따라 천종, 지종 등 18종으로 분류된다고 한다.

자연적으로 산에서 나서 씨가 떨어져 생긴 천종(천연산삼), 야생동물이나 조류가 산삼씨를 먹고 산중에 배설하여 자란 지종, 사람이 씨를 뿌려 자란 인종, 이미 자란 인삼을 산에 심은 산양산삼, 사람이 인위적으로 양생시킨 장뇌삼(가삼), 연수를 알 수 없어 오래된 산삼으로 아이처럼 생긴 동자삼 등 산삼의 종류는 많이 있지만 천연산삼은 그 모양새나 약효에서 산양산삼, 가삼 등과는 전혀 다른 모습과 약효를 지니고 있다.

또한, 타 식물이 전혀 가지고 있지 않은 사포닌 (saponin) 등 생리활성 물질을 다량함유하고 있어서 면역기능 항진, 암세포 생장억제, 항당뇨작용, 심장강화 및 혈압조절, 간기능 강화, 위장기능 강화, 강장효과, 뇌기능강화, 노화억제, 허약체질 개선 등의 효능이 있으며 약리적인 효능이 매우 뛰어나 오랫동안 동양의 신비한 영약으로 알려져 있다.

산삼의 배양근을 인공적으로 조직배양하여 추출한 추출물이 천연 산삼과 그 성분과 기능이 유사하여 식물조직배양으로부터 얻어진 산삼 배양근을 대상으로 삼았다.

이러한 산삼 배양근의 약효성분이 인체내로 용이하게 흡수되도록 하며, 인삼에 극미량으로 존재하는 성분들을 강화시키는 방법으로서 유산균을 이용하여 발효하거나 효소를 처리하는 방법등이 사용되고 있다.

본 출원에서는 친환경 시대에 맞추어 상기한 락토바실러스 쿤키 Hankook-001 균주를 이용하여 항산화, 항염, 미백, 항주름에 유용하게 사용될 수 있는 화장료 조성물을 제공하였으며, 이를 통해 제조된 화장품으로써의 효과를 검증하였으며, 이에 락토바실러스 쿤키 Hankook-001 균주를 포함하는 화장료 조성물이 항산화, 항염, 미백, 항주름 효과를 제공할 수 있음을 확인하여 본 출원을 완성하였다.

한국공개특허 제1991-0019600호 한국공개특허 제2013-0096604호 한국공개특허 제2013-0115943호

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하고자 연구 개발된 것으로서, 본 발명의 목적은 항산화, 항염, 미백, 항주름에 효과가 있는 발효추출물의 제조방법을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은 락토바실러스 쿤키 Hankook-001(Lactobacillus kunkeei Hankook-001)(기탁번호: KCTC 14478BP)로 발효한 발효 추출물의 제조방법을 제공함으로써, 화장품 원료로서 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 항산화, 항염, 미백, 항주름에 효과가 있는 발효 추출물의 제조 방법에 있어서, 조직배양으로 얻은 산삼 배양근을 추출하여 산삼 배양근 추출물을 수득하고, 상기 추출물에 락토바실러스 쿤키 Hankook-001(Lactobacillus kunkeei Hankook-001) 균주를 접종하여 발효시킨후, 침전물과 유산균체를 제거하여 발효추출물을 제조하는 것을 특징으로 한다.

본 발명을 통하여 알 수 있는 것과 같이, 락토바실러스 쿤키 Hankook-001 (Lactobacillus kunkeei Hankook-001)(기탁번호: KCTC 14478BP) 균주를 사용하여 발효한 발효추출물을 함유하는 화장료 조성물은 항산화, 항염, 미백, 항주름의 효과를 발휘한다.

도 1은 본 발명 락토바실러스 쿤키 Hankook-001(Lactobacillus kunkeei Hankook-001)(기탁번호: KCTC 14478BP) 동정 결과 16S rRNA 서열 도이다.
도 2는 실시예 1 내지 실시예 2의 추출물 또는 발효추출물의 자유라디칼 소거활성을 확인한 결과이다.
도 3은 실시예 1 내지 실시예 2의 추출물 또는 발효추출물의 HDF 세포 생존율을 확인한 결과이다.
도 4는 실시예 1 내지 실시예 2의 추출물 또는 발효추출물의 B16F0 세포 생존율을 확인한 결과이다.
도 5는 실시예 1 내지 실시예 2의 추출물 또는 발효추출물의 RAW 264.7세포 생존율을 확인한 결과이다.
도 6은 실시예 1 내지 실시예 2의 추출물 또는 발효추출물의 NO 생성 억제를 확인한 결과이다.
도 7은 실시예 1 내지 실시예 2의 추출물 또는 발효추출물의 Melanin assay를 확인한 결과이다.
도 8은 실시예 1 내지 실시예 2의 추출물 또는 발효추출물의 MMP-1 발현을 확인한 결과이다.
도 9는 본 발명 락토바실러스 쿤키 Hankook-001 (Lactobacillus kunkeei Hankook-001)(기탁번호: KCTC 14478BP) 균주의 기탁을 입증하는 기탁증이다.

이하, 본 발명을 설명한다.

본 발명에 따른 항산화, 항염, 미백, 항주름용 발효 추출물의 제조 방법은,

조직 배양으로 얻어진 산삼 배양근을 정제수로 추출하여 추출물을 수득하고,

상기 추출물에 기탁번호 KCTC 14478BP의 락토바실러스 쿤키 Hankook-001을 접종하여 발효시킨 후, 침전물과 유산균체를 제거하여 발효추출물을 제조하는 것을 특징으로 한다.

본 발명에서 최종적으로 얻은 발효추출물은 화장료 조성물 전체에 대해 0.01 ~ 10.0 중량% 함유되는 것이 바람직하며 0.01 중량% 미만으로 포함되는 경우에는 피부에 대한 개선 효과가 미미하고, 10.0 중량%를 초과하는 경우에는 재료 투입량 대비 효율성이 떨어져 경제적이지 못하기 때문에 농도에 따른 실험을 통하여 0.01 ~10.0% 로 한다.

본 발명에서 락토바실러스 쿤키 Hankook-001(Lactobacillus kunkeei Hankook-001)(기탁번호: KCTC 14478BP) 균주의 배양은 바람직하게는 배양액의 pH를 5.0 내지 7.0, 보다 구체적으로 5.8으로 조정하고, 최적 배양 시간은 12시간 내지 48시간, 보다 구체적으로 44시간, 최적 배양 온도는 27 내지 37℃, 보다 구체적으로 32℃로 배양하는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 화장료 조성물이 샴푸, 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형으로 이루어진 기초 화장료 제형;

수중유형 또는 유중수형의 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이새도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류 중에서 선택된 색조화장료 제형; 중에서 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 한다.

본 발명에서의 용어, '조성물'이란, 바람직하게는 피부외용제 조성물을 의미하고, 피부외용제 조성물이란, 일반적으로 피부에 적용되는 조성물 전부를 의미하고, 의약품,의약부외품, 화장료 등을 포함하는 것이다.

또한, 본 발명의 발효추출물의 유효성분의 피부외용제에 대한 배합량은 조성물 총량을 기준으로 0.01 ~ 10.0% 로 하는 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 0.1 ~ 5.0% 이다.

한편, 본 발명에서 "유효성분으로 포함된다"는 의미는 본 발명의 조성물로부터 피부 상태의 개선 효과를 나타낼 수 있는 정도로 조성물에 배양물 여과액이 첨가되는 것을 의미하고, 성분 전달 및 안정화 등을 위하여 다양한 성분을 부성분으로 첨가하여 다양한 형태로 제형화하는 것을 포함하는 의미이다.

이하, 실시예를 통해 본 발명을 좀 더 구체적으로 설명한다. 단, 이들 실시예는 본 발명의 예시적인 기재일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되는 것은 아니다.

실시예 1 : 산삼 배양근 발효추출물의 제조

산삼 배양근 100g을 추출용기에 넣고 정제수 1000g을 넣어 혼합한 다음 90℃에서 3시간 동안 추출하여 추출물을 제조하고 냉각하여 여과하였다.

다음으로 배양을 위해서 혼합추출물을 121 ℃에서 15분 간 멸균하였다.

멸균이 끝난 다음, 방냉하여 락토바실러스 쿤키 Hankook-001을 접종하여 35℃, 150rpm, 2일간 배양 발효시켜 발효액을 제조하였다.

이어 상기 발효액을 10,000rpm에서 20분간 원심 분리하여 침전물과 유산규체가 제거된 발효 추출물을 얻었다.

이를 감압농축 및 진공건조하여 분말을 얻었다.

실시예 2 : 산삼 배양근 추출물의 제조

이를 감압농축 및 진공건조하여 분말을 얻었다.

실험예 1 : 자유라디칼 소거활성 측정 실험

상기 실시예 1내지 실시예 2에서 제조한 각 추출물의 자유라디칼 소거활성을 측정하기 위해 DPPH법을 이용하여 자유라디칼 소거 활성을 측정하였다.

DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-1picrylhydrazyl free radical)라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 자유라디칼 소거활성을 측정한다.

피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율을 측정하였다.

DPPH 자유라디칼 소거활성 측정을 위하여 농도별로 추출물을 준비하였다.

상기 농도의 추출물을 96웰 플레이트에 각각 넣고, 여기에 100uM 메탄올용액으로 제조된 DPPH를 첨가하여 용액의 총 부피가 200㎕가 되도록 하였다.

이것을 37℃에서 30분간 방치한 후 560nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과를 표 1과 도 2에 나타내었다.

<수학식>

자유라디칼 소거활성(%)= {100-(B/A)}X100

A: 본 발명의 시료를 처리하지 않은 대조군 웰의 흡광도

B: 본 발명의 시료를 처리한 실험군 웰의 흡광도

실험예 2 : 시료의 세포독성

상기 실시예 1 내지 2에서 제조한 각 혼합물의 세포독성을 확인하기 위해 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay를 진행하였다.

HDF(Human deraml fibroblast), B16F0, RAW 264.7 cells를 96well plate에 1 × 104 / well로 분주하고 37%, 5% CO2 습윤 배양기에서 18 hr 동안 안정화시켰다.

이후 시료를 5% 처리하고 20 hr 동안 반응하였다.

배지를 모두 제거하고 0.5 mg/ml MTT 시약을 처리하여 1 hr 동안 반응시켰다.

이후 MTT 용액을 제거한 후, 200 ul의 DMSO를 넣어 formazan 결정을 녹인후 분광광도계를 이용하여 590 nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과를 HDF(Human deraml fibroblast)Cell은 표 2와 도 3, B16F0 Cell은 표 3과 도 4, RAW 264.7 cells은 표 4와 도 5에 나타내었다.

실험예 3: NO 생성 억제 측정

상기 실시예 1과 실시예 2에서 얻어진 각 추출물의 항염 활성 효과를 확인해 보기 위해 염증 유발에 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 NO생성에 대한 효과를 알아보았다.

Nitric Oxide 측정은 cell의 supernatant에서의 NO의 양을 nitrite와 nitrate로서 측정하였다.

Nitrite에 대한 nitrate로 환원된 후의 안전한 형태인 griess reagent를 사용하였으며, 96 well plate (5 × 10⁴cells/well)에 RAW264.7 세포의 confluence가 80%일 때, PBS로 2번 washing한 후에 무혈청 배지를 사용하여 18 시간 이상 배양시킨 후에 시료를 농도별로 처리하여 1 시간 동안 배양한 후 lipopolysacchride (LPS) 1 μg/mL 처리하고 24 시간 동안 배양하였다.

배양액의 상층액을 취하여 griess 시약과 반응시킨 후 ELISA reader로 540 nm에서 흡광도를 측정하여 NO 생성율을 백분율로 표시하였다.

염증반응의 대표적인 인자인 NO의 생성 억제하는지 확인하기 위해 RAW264.7 세포에 lipopolysaccharide (LPS)를 1 μg/mL 처리한 다음 2 시간 뒤에 추출물을 각 농도별로 처리하였다.

18 시간 동안 배양 후 배양액 내의 NO 양을 측정하였다.

그 결과를 표 5와 도 6에 나타내었다.

실험예 4: Melanin assay 측정

상기 실시예 1 내지 2에서 제조한 각 혼합물의 멜라닌 생성 억제 효과를 확인하기 위해 Melanin assay을 진행하였다.

B16F0(melanocyte)cells를 2.5 × 10³ cells/well의 농도로 96 well plate에 분주하고 37%, 5% CO₂ 습윤 배양기에서 24 hr 동안 안정화 시킨 후 시료를 농도별로 처리하여 2 hr 동안 반응하였다.

반응 후 자극제인 α-MSH를 최종 농도가 100 nM이 되도록 희석하여 처리하였다.

72시간 후 배지로 방출된 멜라닌의 양을 분광광도계를 이용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하여 계산하였다.

그 결과를 표 6과 도 7에 나타내었다.

실험예 5: MMP-1 측정

상기 실시예 1 내지 실시예 2에서 제조한 각 혼합물의 MMP-1의 mRNA를 확인하기 위해 Real time PCR을 진행하였다.

HDF(Human deraml fibroblast)cells를 3 × 10⁵ / 60 mm culture dish에 분주하고 37%, 5% CO₂ 습윤 배양기에서 18 hr 동안 안정화시킨후 serum free 배지로 교체하였다.

이후 시료를 5% 처리하고. 2시간 뒤에 UV-B를 10 mJ/cm²로 조사하여 20 hr 동안 반응하였다. 반응 후 세포를 NucleoZOL lysis buffer(NM, 740404)를 이용하여 harvest한 뒤, MN사에서 제공하는 protocol을 이용하여 RNA isolation을 진행 하였으며, 분리된 RNA를 microplate reader를 이용하여 정량한 뒤 HiSenScript™ RH(-) RT PreMix Kit(intron, 25087)을 이용하여 cDNA를 합성하였다.

합성된 cDNA와 2X Real-Time PCR Master Mix & Premix(BioFACT)를 이용하여 real-time PCR 수행후 증폭산물을 정량 분석하였다. PCR에 사용된 MMP-1, β-actin primer sequence는 표 7에 나타내었다.

그 결과를 표 8와 도 8에 나타내었다.

실시예 3 : 본 발명의 추출물을 함유하는 샴푸 제조

95% 에탄올 5g에 암모늄라우레스설페이트 5g, 코실베타인 5g, 알킬에테르셀페이트 0.5g, 실리콘 0.5g, 폴리쿼터0.2g, 향료 0.2g, 보존제 0.02g를 혼합하였다.

실시예에서 수득한 본 발명의 추출물 5g, 글리세린 5g을 정제수 85.33g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 샴푸를 얻었다.

실시예 4 : 본 발명의 추출물을 함유하는 화장수 제조

95% 에탄올 8g에 폴리피로리돈 0.05g, 올레일알콜 0.1g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2g, 향료 0.2g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합하였다.

실시예에서 수득한 본 발명의 추출물 10g, 글리세린 5g을 정제수 85.33g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 화장수를 얻었다.

실시예 5 : 본 발명의 추출물을 함유한 유액 제조

세틸알콜1.2g, 스쿠알란 10g, 바세린 2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2g, 글리세린모노에스테아레이드 1g, 폴리옥시에틸렌(20몰 부가)모노올레이트 1g및 향로 0.1g을 70℃에서 가열 및 혼합하여 용해하고, 실시예에서 수득한 본 발명의 추출물 0.1g, 디프로필렌글리콜 5g, 폴리에틸렌글리콜-1500 2g, 트리에탄올아민 0.2g, 정제수 76.6g을 75℃로 가열해서 용해하였다.

양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 유액을 얻었다.

실시예 6 : 본 발명의 추출물을 함유한 미용액 제조

95% 에틸알콜 5g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2g, 키툴로오즈 0.3g, 히아루론산나트륨 0.2g, 비타민 E-아세테이트 0.2g, 감초산 나트륨 0.2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1g, 실시예에서 수득한 본 발명의 추출물 1g 및 적량의 색소를 혼합하여 미용액을 얻었다.

이상의 설명으로부터, 본 출원이 속하는 기술분야의 당업자는 본 출원이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 출원의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 출원의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

한국생명공학연구원

KCTC14478BP

20210222

<110> HANKOOK COSMETICS MANUFACTURING CO., LTD. <120> Fermented extract for antioxidant, anti-inflammatory, whitening, and anti-wrinkle using Lactobacillus kunkeei Hankook-001strain, and manufacturing method of it, and cosmetic composition containing fermented extract <130> Hankook-001 <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 871 <212> RNA <213> Unknown <220> <223> Lactobacillus kunkeei <400> 1 ctggcggcgt gcctaataca tgcaagtcga acgagctctc ccaaattgat tttatgcttg 60 cataaatgat ttttggattc ggagcgagtg gcgaactggt gagtaacacg tgggtaacct 120 gccccgaagc gggggataac atttggaaac aagtgctaat accgcataat tagttggaac 180 cgcatggttc caacttgaaa gatggctctg ctatcacttt gggatggacc cgcgccgtat 240 tagttagttg gtgagataaa agcccaccaa gacgatgata cgtagccgac ctgagagggt 300 aatcggccac attgggactg agacacggcc cagactccta cgggaggcag cagtagggaa 360 tcttccacaa tggacgaaag tctgatggag caacgccgcg tgagtgatga aggttttcgg 420 atcgtaaaac tctgttgtta aagaagaaca agtgttagag taactgttaa cactttgacg 480 gtatttaacc agaaagccac ggctaactac gtgccagcag ccgcggtaat acgtaggtgg 540 caagcgttgt ccggatttat tgggcgtaaa gcgagcgcag gcggttttgt aagtctgctg 600 tgaaagccct cagctcaact gaggaagtgc agtggaaact acaaaacttg agtacagaag 660 aggaaagtgg aactccatgt gtagcggtga aatgcgtaga tatatggaag aacaccagtg 720 gcgaaggcgg ctttctggtc tgttactgac gctgaggctc gaaagcatgg gtagcgaaca 780 ggattagata ccctggtagt ccatgccgta aacgatgaat actaggtgtt ggagggtttc 840 cgcccttcag tgccgcagct aacgcattaa g 871 <210> 2 <211> 734 <212> RNA <213> Unknown <220> <223> Lactobacillus kunkeei <400> 2 aggtgttgga gggtttccgc ccttcagtgc cgcagctaac gcattaagta ttccgcctgg 60 ggagtacgac cgcaaggttg aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac aagtggtgga 120 gcatgtggtt taattcgatg ctacgcgaag aaccttacca gctcttgaca tcttctgcca 180 acccaagaga ttgggcgttc ccttcgggga cagaatgaca ggtggtgcat ggttgtcgtc 240 agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctt attattagtt 300 gccagcattt agttgggcac tctagtgaga ctgccggtga taaaccggag gaaggtgggg 360 acgacgtcaa atcatcatgc cccttatgag ctgggctaca cacgtgctac aatggatggt 420 acaacgagtc gcgaaaccgc gaggtcaagc taatctctta aagccattct cagttcggat 480 tgcaggctgc aactcgcctg catgaagttg gaatcactag taatcgtgga tcagcatgcc 540 acggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc acaccatgag agtttgtaac 600 acccaaagac gatggggtaa ccttttagga gctagtcgtc taaggtggga cagatgatta 660 gggtgaagtc gtaacaaggt agccgtagga gaacctgcgg ctggatcacc ttcctttcta 720 cctggatctc ctcc 734

Claims

항산화, 항염, 미백, 항주름용 발효 추출물의 제조 방법에 있어서,
조직 배양으로 얻어진 산삼 배양근 100 중량부, 정제수 1,000 중량부를 추출용기에 투입하여 혼합한 후, 90℃에서 3시간 동안 추출하여 추출물을 수득하고,
상기 추출물을 121 ℃에서 15분 간 멸균한 후, 방냉한 뒤, 상기 방냉된 추출물에 기탁번호 KCTC 14478BP의 락토바실러스 쿤키 Hankook-001을 접종하여 35℃, 150rpm, 2일간 배양 발효하며, 상기 발효액을 10,000rpm에서 20분간 원심 분리하여 침전물과 유산균체를 제거한 후, 발효추출물을 제조하는 것을 특징으로 하되,
상기 기탁번호 KCTC 14478BP의 락토바실러스 쿤키 Hankook-001 균주의 배양 환경 조건은,
배양액의 pH는 5.8, 배양 시간은 44시간, 배양 온도는 32℃인 것을 특징으로 하며,
상기 발효추출물은,
화장료 조성물 전체 함량에 대해 0.01 ~ 10 중량% 함유되어 있는 것을 특징으로 하는 락토바실러스 쿤키 Hankook-001 균주를 이용한 항산화, 항염, 미백, 항주름용 발효추출물의 제조 방법.
제 1항에 있어서,
상기 화장료 조성물의 제형은,
샴푸, 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형으로 이루어진 기초화장료 제형;
수중유형 또는 유중수형의 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이새도, 치크칼라 및 아이브로우펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형; 중에서 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는,
락토바실러스 쿤키 Hankook-001 균주를 이용한 항산화, 항염, 미백, 항주름용 발효추출물의 제조 방법.
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