CN104480162A - 一种高效提取猴头菇多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
一种高效提取猴头菇多糖的方法,该提取方法具体步骤为:(1)材料预处理;(2)微波提取;(3)超声提取;(4)酶解提取;(5)超滤分离;(6)真空干燥。本发明的一种高效提取猴头菇多糖的方法,复合微波、超声提取,使细胞内容物更大量的释放,同时加入酶解提取,去除了蛋白等杂质,最后进行超滤分离,使其收率高、纯度好。
Description
技术领域
本发明涉及一种多糖提取方法,特别是一种高效提取猴头菇多糖的方法。
背景技术
猴头菇又叫猴头菌,原是一种深藏于密林中的珍贵食用菌。子实体圆而厚,常悬于树干上,布满针状菌刺,形状极似猴子的头,故而得名猴头菇。猴头菇,性平味甘,人胃经,有助于消化,利五脏,扶正固本,具有健脑提神的功效,有“素中荤”之称,长期以来人们把它同“熊掌,海参,鱼翅”共同列为四大名菜,或把它与燕窝相提并论,民间谚语有“多食猴头,返老还童”之说闭。《临海水土异物志》中记载“民皆好淡猴头羹,虽五肉膝不能及之”其俗称为“宁负千石粟不愿负猴头羹”都说明了人们对猴头菇的喜爱。
目前,猴头菇的药用价值引起了国内外学者的广泛关注。猴头菇富含多糖体、多肤等物质,能抑制癌细胞中遗传物质的合成,从而预防和治疗消化道癌症和其他恶性肿瘤;此外,猴头菇中含有多种氨基酸等物质,能够提高肌体免疫力,延缓衰老。
猴头菇的有效药理成分尚未完全研究清楚,到目前为止已从猴头菌中分离得到许多化合物。但已知有确切疗效的是猴头菇多,猴头菇多糖是最主要的活性物质,多糖具有广泛的生物学活性,如免疫调节剂、抵抗肿瘤增殖、抵抗病原感染、降低糖尿病患者的血糖浓度、降低患者血脂浓度等的作用。
猴头菇多糖目前已制成各种药物及保健品,深受人们喜爱。猴头多糖应用前景广泛,已吸引了越来越多研究者的注意。进一步开展猴头菇多糖的分离纯化等实验研究,对药物和食品开发以及猴头菇资源的利用都具有重要的意义。
目前常用的猴头菇多糖的提取方法有碱提法、酸提法、盐提法还有热水浸提法。稀酸、稀碱法,试剂用量少,仪器均为常规仪器,因此操作简单易行。但稀酸、稀碱条件下,易使多糖发生糖苷键的断裂,部分多糖发生水解而使多糖的提取率减少,而且杂质含量,也比较多,有一定的适用范围,所以本发明在水提的基础上,复合微波、超声提取,使细胞内容物更大量的释放,同时加入酶解提取,去除了蛋白等杂质,大大提高了多糖的提取含量。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效提取猴头菇多糖的方法,复合微波、超声提取,使细胞内容物更大量的释放,同时加入酶解提取,去除了蛋白等杂质,最后进行超滤分离,使其收率高、纯度好。
本发明的目的通过以下技术方案来实现:一种高效提取猴头菇多糖的方法,该提取方法具体步骤为:
(1)材料预处理:取干燥猴头菇,粉碎,过50~120目筛,得干燥猴头菇粉末,按干燥猴头菇粉末与蒸馏水1:5~35的重量配比,加入蒸馏水,于50℃~65℃得温度条件下,浸泡1-5小时,得到待提取物;
(2)微波提取:取步骤(1)的待提取物,放入微波中,调节微波的功率为500-1000W,处理时间为5-15min;
(3)超声提取:把步骤(2)微波处理后的物质置于超声波中,在20~60℃的温度条件下,用5~20KHz超声波萃取0.5h~2.0h,过滤,得到滤液1;
(4)酶解提取:调节滤液1的pH为3~6,加入足量纤维素酶,在30~60℃的温度条件下,水解0.5h~3.0h,离心分离取滤液2,调滤液2的pH为3~6,加入足量果胶酶,在30~60℃的温度条件下,水解0.5h~1.5h,离心分离取滤液3,调滤液3的pH为3~6,加入足量木瓜蛋白酶,在30~60℃的温度条件下,水解l.0h~2.0h,离心分离取滤液4,备用;
(5)超滤分离:调节滤液4的PH值为8-9,加入体积为滤液4体积0.5-1.0倍的30%双氧水,于40-45℃的温度下搅拌0.5h-1h,以5k的聚砜膜超滤,收集分子量1000道尔顿以上的组分;
(6)真空干燥:取步骤(5)中得到的分子量1000道尔顿以上的组分,在真空度-0.095MPa,干燥温度20-50℃的条件下,干燥20min,得到猴头菇多糖。
所述纤维素酶,为酶治性为10000~20000 u/g的纤维素酶,质量为滤液1质量的0.5-1.0倍。
所述果胶酶,为酶活性为15000~25000 u/g的果胶酶,质量为滤液2质量的1.0-1.5倍。
所述木瓜蛋白酶,为酶活性为800000-1000000 u/g的木瓜蛋白酶,质量为滤液3质量的0.5-1.5倍。
本发明的有益效果:
1、本发明采用微波、超声的提取方法,微波可穿透萃取介质,直接作用于物料内部,使内部温度迅速上升,增大目标物质在介质中的溶解度,质量稳定,所制得产品纯度高,生物活性高;
2、针对猴头菇子实体本身含有纤维素、果胶、蛋白质等杂质的干扰,筛选适用于此的纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶反应体系,使杂质充分脱除,猴头菇粗多糖得率可达15.3%;
3、采用双氧水脱色,条件温和,不易损坏多糖结构,且副产物为水,绿色环保,符合保健食品的生产要求;
4、采用聚砜膜,将切向流过滤技术应用到猴头菇多糖的制备中,在过滤的同时也对聚砜膜表面冲刷,使膜表面不会形成杂质大分子凝胶层,从而确保稳定,快速的超滤速度,大大缩短工艺时间,便于工业化生产。
具体实施方式
实施例1
(1)材料预处理:取干燥猴头菇(可由新鲜猴头菇经自然风干得到),粉碎,过80目筛,得猴头菇干燥粉末,按重量配比加入10倍质量的蒸馏水,于50℃~65℃下,侵泡4小时;
(2)微波提取:取步骤(1)的待提取物,放入微波中,调节微波的功率为500W,处理时间为10min;
(3)超声提取:接着把步骤(2)的物质放入超声波中,20~60℃下用5~20KHz超声波萃取0.5h,过滤,取滤液1;滤渣可重复进行以上操作,滤液进行下一步提取;
(4)酶解提取:调节滤液pH为4.5,加入足量纤维素酶,30~60℃水解0.5h,离心取滤液2调pH为4.5,加入足量果胶酶,30~60℃水解0.5h,离心取滤液3调pH为4.5,加入足量木瓜蛋白酶,30~60℃水解l.0h,离心,取滤液4;
(5)超滤分离:调节滤液4的PH值为8-9,加入体积为滤液4体积0.5-1.0倍的30%,双氧水,于40-45℃保温搅拌0.5h-1h,以5k的聚砜膜超滤,收集分子量1000道尔顿以上的组分;
(6)真空干燥:在真空度-0.095MPa,干燥温度20-50℃下,干燥20min,得到猴头菇多糖。
提取的猴头菇多糖得率为19.05%。
实施例2
(1)材料预处理:取干燥猴头菇(可由新鲜猴头菇经自然风干得到),粉碎,过80目筛,得猴头菇干燥粉末,按重量配比加入10倍质量的蒸馏水,于50℃~65℃下,侵泡4小时;
(2)微波提取:取步骤(1)的待提取物,放入微波中,调节微波的功率为800W,处理时间为10min;
(3)超声提取:接着把步骤(2)的物质放入超声波中,20~60℃下用5~20KHz超声波萃取1.0h,过滤,取滤液1;滤渣可重复进行以上操作,滤液进行下一步提取;
(4)酶解提取:调节滤液pH为4.5,加入足量纤维素酶,30~60℃水解1.0h,离心取滤液2调pH为4.5,加入足量果胶酶,30~60℃水解1.0h,离心取滤液3调pH为4.5,加入足量木瓜蛋白酶,30~60℃水解l.0h5,离心,取滤液4;
(5)超滤分离:调节滤液4的PH值为8-9,加入体积为滤液4体积0.5-1.0倍的30%,双氧水,于40-45℃保温搅拌0.5h-1h,以5k的聚砜膜超滤,收集分子量1000道尔顿以上的组分;
(6)真空干燥:在真空度-0.095MPa,干燥温度20-50℃下,干燥20min,得到猴头菇多糖。
提取的猴头菇多糖得率为21.32%。
Claims (4)
1.一种高效提取猴头菇多糖的方法,其特征在于:该提取方法具体步骤为:
(1)材料预处理:取干燥猴头菇,粉碎,过50~120目筛,得干燥猴头菇粉末,按干燥猴头菇粉末与蒸馏水1:5~35的重量配比,加入蒸馏水,于50℃~65℃得温度条件下,浸泡1-5小时,得到待提取物;
(2)微波提取:取步骤(1)的待提取物,放入微波中,调节微波的功率为500-1000W,处理时间为5-15min;
(3)超声提取:把步骤(2)微波处理后的物质置于超声波中,在20~60℃的温度条件下,用5~20KHz超声波萃取0.5h~2.0h,过滤,得到滤液1;
(4)酶解提取:调节滤液1的pH为3~6,加入足量纤维素酶,在30~60℃的温度条件下,水解0.5h~3.0h,离心分离取滤液2,调滤液2的pH为3~6,加入足量果胶酶,在30~60℃的温度条件下,水解0.5h~1.5h,离心分离取滤液3,调滤液3的pH为3~6,加入足量木瓜蛋白酶,在30~60℃的温度条件下,水解l.0h~2.0h,离心分离取滤液4,备用;
(5)超滤分离:调节滤液4的PH值为8-9,加入体积为滤液4体积0.5-1.0倍的30%双氧水,于40-45℃的温度下搅拌0.5h-1h,以5k的聚砜膜超滤,收集分子量1000道尔顿以上的组分;
(6)真空干燥:取步骤(5)中得到的分子量1000道尔顿以上的组分,在真空度-0.095MPa,干燥温度20-50℃的条件下,干燥20min,得到猴头菇多糖。
2.根据权利要求1所述的一种高效提取猴头菇多糖的方法,其特征在于:所述纤维素酶,为酶治性为10000~20000 u/g的纤维素酶,质量为滤液1质量的0.5-1.0倍。
3.根据权利要求1所述的一种高效提取猴头菇多糖的方法,其特征在于:所述果胶酶,为酶活性为15000~25000 u/g的果胶酶,质量为滤液2质量的1.0-1.5倍。
4.根据权利要求1所述的一种高效提取猴头菇多糖的方法,其特征在于:所述木瓜蛋白酶,为酶活性为800000-1000000 u/g的木瓜蛋白酶,质量为滤液3质量的0.5-1.5倍。
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