CN108498755B

CN108498755B - 治疗心脑血管疾病的中药组合物及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN108498755B
Application number: CN201810346463.1A
Authority: CN
Inventors: 贾洪章
Original assignee: 贾洪章
Current assignee: Beijing Hong Tianli Pharmaceutical Co.,Ltd.
Priority date: 2018-04-17
Filing date: 2018-04-17
Publication date: 2021-04-09
Anticipated expiration: 2038-04-17
Also published as: JP2021518852A; WO2019200768A1; EP3782635A1; CN108498755A; EP3782635A4; JP7071764B2; US20210161983A1; US11369653B2

Abstract

本发明属于药物研究开发领域，公开了一种治疗心脑血管疾病的中药组合物及其制备方法和用途。具体地，本发明涉及一种治疗心脑血管疾病的中药组合物，其活性成分由：1)6‑12份川芎和5‑10份郁金的乙醇提取物，和2)上述川芎和郁金提取剩余物与5‑10份牛膝的水提取物构成。本发明药物属于植物复方药，具有配方精准、配方用量协同作用强、生产工艺的稳定性和重复性好、安全性好无毒副作用等优点，对于心肌收缩障碍和心肌舒张障碍、血小板聚集血栓形成及心肌缺血、心肌缺氧、心肌疲劳等均有显著的药效作用，尤其适合于治疗冠心病以及慢性或急性心力衰竭，将是这一疾病领域的临床治疗的革新性重大突破。

Description

治疗心脑血管疾病的中药组合物及其制备方法和用途

发明领域

本发明属于药物研究开发领域，涉及了用于治疗心脑血管疾病的中药组合物及其制备方法和用途。

发明背景

心脑血管疾病是一种严重威胁人类，特别是50岁以上中老年人健康的常见病，具有高患病率、高致残率和高死亡率的特点。根据我国流行病学调查，近五十年来不论在农村或城市，心脑血管疾病的发病率和死亡率均呈上升趋势。目前，心脑血管疾病已是我国因疾病致死的第一致死病因。心脑血管疾病也是西方国家人群死亡的主要原因。

在各种心脑血管疾病中，冠心病尤其引人关注。冠心病(CoronaryAtherosclerotic Heart Disease，或Coronary Disease)，全称冠状动脉粥样硬化性心脏病，有时也叫缺血性心脏病，是指冠状动脉粥样硬化导致心肌缺血、缺氧而引起的心脏病。冠状动脉是唯一供给心脏血液的血管，其形态似冠状，故称为冠状动脉。这条血管也随同全身血管一样的硬化，呈粥样改变，造成供养心脏血液循环障碍，引起心肌缺血、缺氧，即为冠心病。冠心病是中、老年人的常见病、多发病，严重危及人的生命。冠心病临床可分为隐匿型、心绞痛型、心肌梗塞型、心律失常型、猝死型等5种类型。

大多数的心血管疾病，包括冠心病，最终都会导致心力衰竭的发生。心力衰竭(Heart Failure)，简称心衰，是指由于心脏的收缩功能和/或舒张功能发生障碍，不能将静脉回心血量充分排出心脏，导致静脉系统血液淤积，动脉系统血液灌注不足，从而引起心脏循环障碍症候群，此种障碍症候群集中表现为肺淤血、腔静脉淤血。心力衰竭往往并不是一个独立的疾病，而是心脏疾病发展的终末阶段。临床上，心衰可表现为急性心力衰竭和慢性心力衰竭。从病因来看，心衰可分为收缩性或舒张性心力衰竭。

对于冠心病和心力衰竭的治疗，现代医学已有很多研究，但是效果还不能令人满意。特别是，虽然对于心脏的收缩功能障碍导致的冠心病和心力衰竭有一些效果较好的药物(例如Entresto等)，但是对于由心肌舒张功能障碍引起的冠心病和慢性心衰，医学界公认还没有有效的治疗药物。但是，由心肌舒张功能障碍引起的冠心病、心力衰竭等心血管疾病在中老年人中比较普遍，这是因为随着年龄的增长，心肌纤维化不断加重，心肌舒张功能的范围不断缩小，因心肌舒张不到位，进入心肌血氧自然会减少，故出现心肌缺血、缺氧临床症状。又因为心肌舒张不到位，行程变短，所以心律也会失常，严重的心肌纤维化，舒张功能障碍还会出现心血瘀阻现象发生心梗、猝死。

因此，治疗心脑血管疾病(例如冠心病、心力衰竭等)的药物，尤其是舒张功能障碍导致的心脑血管疾的病药物是人们所急需的。

中药(TCM)在中国已有数千年的使用历史。中药主要是基于植物制剂中的多种化学成分，其通过多种分子靶点和细胞机制而相互作用并且同时发挥作用。所述多种成分具有不同的功能：某些可以发挥治疗有效性，而另外一些可以减少毒性或者提高生物利用度。目前，植物提取物的混合物已经在世界范围内广泛用于疾病的控制，并且公认具有毒副作用小、耐受性好等优于西药的优点。

关于中药治疗冠心病、心力衰竭等心脑血管疾病已有很多报道。西医中冠心病、心力衰竭在中医中往往诊断为胸痹。中医认为胸痹是胸部闷痛、甚则胸痛彻背、短气、喘息不得卧为主症的一种疾病。中医对胸痹的诊断治疗分为五种类型：心血瘀阻型、痰浊瘀寒型、阴寒凝滞型、心肾阴虚型、气阴两虚型。《灵枢·五邪》篇曾指出：“邪在心，则病心痛”。《素问·藏气法时论篇》亦说：“心病者，胸中痛，肋支满，肋下痛……”。

现有技术已经提出了很多据称对冠心病、心力衰竭等心脑血管疾病具有治疗效果的中药组合物或中药制剂。但是，这些中药组合物往往组成复杂(由十几种甚至更多种药材组成)，而且大多数仅是简单地对少量临床病人进行试用，缺少符合现代药物学要求的严格的、系统的体外和体内实验。另外，由于这些现有中药组合物组成复杂、活性成分不明而无法进行严格的质量控制和标准化，难以实现工业化。

发明内容

因此，本发明的一个目的是提供一种治疗和/或预防心脑血管疾病(例如冠心病、心力衰竭、心绞痛、心肌梗死、血栓、脑卒中等)的新型中药组合物。

本发明的另一个目的是提供一种治疗和/或预防由心肌收缩障碍、心肌舒张障碍、血栓形成、心肌缺血、心肌缺氧、或心肌疲劳(尤其是心肌舒张功能障碍)引起的心脑血管疾病的新型中药组合物。

本发明的一个实施方案涉及一种治疗心脑血管疾病的中药组合物，其活性成分由以下的组分1)、组分2)构成：

1)6-12份川芎和5-10份郁金的乙醇提取物；

2)上述川芎和郁金提取剩余物和5-10份牛膝的水提取物。

上述中药组合物中，以川芎、郁金和牛膝提取物作为活性组分。本领域技术人员理解，按照需要上述中药组合物还可以含有其他辅助性药材或辅料(如助剂、佐剂或药物赋形剂等)。

因此，在本发明的一个实施方式中，所述中药组合物仅由上述组分1)、组分2)组成。在本发明的其他实施方式中，所述中药组合物可以含有其他辅助性药材或辅料。例如，本发明的另一个实施方式涉及一种治疗心脑血管疾病的中药组合物，由以下的组分1)、组分2)、组分3)构成：

1)6-12份川芎和5-10份郁金的乙醇提取物；

2)上述川芎和郁金提取剩余物和5-10份牛膝的水提取物；

3)5-10份薤白和6-12份杜仲的水提取物。

此外，本发明还涉及一种中药组合物的制备方法，包括以下步骤：

1)称取6-12份川芎和5-10份郁金，合并后用乙醇提取并浓缩；

2)称取5-10份牛膝与步骤1)的提取剩余物合并，用水提取并浓缩；

3)合并步骤1)、步骤2)的提取浓缩物，然后干燥。

上述步骤2)中还可以可选地额外加入5-10份薤白和6-12份杜仲。

本发明的中药组合物可以按照需要配置各种形式的口服药物制剂(如片剂、胶囊、粒剂、丸剂、口服液等)，其包含本发明的中药组合物和常规可药用助剂或辅料。

本发明的中药组合物也可以按照需要配置各种形式的口服保健品，其包含本发明的中药组合物和常规助剂或辅料。

本发明的中药组合物可以用于治疗或预防心脑血管疾病，特别是例如冠心病、心力衰竭(包括收缩性心力衰竭或舒张性心力衰竭)、心绞痛、心肌梗死、血栓、脑卒中等。

本发明的中药组合物尤其适合于治疗和/或预防心肌收缩障碍、心肌舒张障碍、血栓形成、心肌缺血、心肌缺氧、或心肌疲劳、或由这些病症引起的心脑血管疾病(特别是心肌舒张功能障碍)。

本发明还涉及治疗或预防心脑血管疾病，特别是例如冠心病、心力衰竭(包括收缩性心力衰竭或舒张性心力衰竭)、心绞痛、心肌梗死、血栓、脑卒中等疾病的方法，包括给予患者治疗有效量的本发明的中药组合物。

本发明通过特定的配方用量和提取工艺，制出的药物具有以下特点：

1、配方精准、活性成分确定、配方用量协同作用强、生产工艺的稳定性和重复性好。

2、对于心肌收缩障碍和心肌舒张障碍、血小板聚集血栓形成、心肌缺血、心肌缺氧、心肌疲劳等均有显著的药效作用。具体地，

1)治疗心肌收缩功能障碍引起的心衰与国际上最新、最优的药物效果相当。

2)治疗心肌舒张功能障碍引起慢性心衰药效显著，优于国际上最新、最优的药物。

3)治疗心肌缺血、缺氧疗效显著。

4)防血栓形成效果显著、具有溶栓药效。

5)恢复受损的心肌疗效显著。

6)有效提高心肌抗疲劳。

3、安全性可靠(急毒试验和长毒试验均表现优异)，在治疗心衰的同时为肝肾功能带来益处，不损伤人体其他器官，安全性优于同类药物。

具体实施方式

本发明是一种复方制剂，主要用于治疗中医诊断胸痹(西医诊断冠心病)，是以中医心脉气滞血瘀为基础，结合现代医学对心肌收缩、舒张功能的理论进行研制的。

中医对胸痹心痛主要论述为是由心气、心血运行不畅所致心脉痹阻证。西医论述为冠心病是冠脉血流和心肌需求之间不平衡所致疾病。这在病理上具有高度的一致性。中医认为，胸痹病因是正气内虚、外邪入侵，或饮食不节、情绪过激、劳逸失度等导致脉痹不畅，心脏阴阳气血失调，以膻中或胸部憋闷、疼痛为主要表现的疾病，相当于西医诊断为冠心病心绞痛。

本药的适应病症为胸痹心痛，辩证属气滞血瘀，表现为胸痛、胸闷、心悸、舌暗或有瘀斑，脉涩或沉弦。其病机为气滞血瘀。致病常因情绪过激，七情异常伤及脏腑，脏腑功能虚损，气失调达造成气滞，血失调达则致血瘀，或饮食不节、过食肥甘，酗酒和生冷之品伤及脾胃，酿痰生湿，湿阻气机，气机不畅而导致气滞，湿阻血脉，则致血瘀；劳逸失度，过劳耗气伤阴，过逸则气血运行滞缓，亦可导致气滞血瘀。不通则痛，气之不通及血之不通，皆可导致胸闷心痛。《仁斋直指方论》说：“气为血之帅，气行则血行，气止则血止，气寒则血凝，气有一息不通，则血有一息不行”。由此论证，气滞可以导致血瘀，瘀阻心脉则胸闷、胸痛，病引肩背。另一方面，血瘀形成，亦可阻滞气机，导致气之不通，气由血载，血至气乃至，血止气则止，气欲至达全身，必贯注血脉之中。二者互为因果。心脉不通，气血阻滞，心失所养，心不藏神，可出现心悸之症。气滞血瘀则见舌暗紫斑及脉涩沉弦之象。

对于气滞血瘀之胸痹，其主要治法为行气活血，通络止痛。主要针对其主要病机调整气血、功能紊乱和失调的关系，“气行则血行”治瘀宜调气，瘀化则气顺，《血证论·脏腑病机论》曰：“气冲和调达，不至遏抑，则血脉得畅”。气血调畅，血脉通达，则瘀除病解。因此，行气活血，通脉止痛为标本互治之法。

本发明的治疗心脑血管疾病的中药组合物，其活性成分由以下的组分1)、组分2)构成：

1)6-12份川芎和5-10份郁金的乙醇提取物；

2)上述川芎和郁金提取剩余物和5-10份牛膝的水提取物。

川芎、郁金和牛膝提取物作为中药组合物的活性组分。这三味药可以独立成药，亦可以加入其它辅助药材进一步复配，例如可以加入5-10份薤白和6-12份杜仲的水提取物(用于辅助治疗冠心病、心力衰竭导致的并发症，如肩背痛等)。

郁金：辛、苦、凉，入心肺、肝经。行气解郁，凉血破瘀为君，《本草纲目》曰：“入心及包经”，“治血气治心腹痛”；

川芎：辛、温，入肝、胆、心包经。活血行气，止痛为臣，其为血中之气药，君臣两药伍用，加强行气活血之力；二者皆入心经或心包经，行气活血，善养心脉。

牛膝：甘、微苦、平、归肝、肾经，逐瘀通络为佐药(五药合用时为臣药，三药合用时为佐药)。增强活血化瘀，并具通络之功。《本草经疏》称其“性善下行......，逐气血，尤能通气滞血凝也”。

郁金可开心、肺、肝气，川芎引气血上行，牛膝引气血下行，三药(五药)合用，互相配合，使气血周身循行，故气行血活，淤祛脉通，供达行气活血，通脉止痛之功。郁金因起产地不同而药性略有不同，本发明中优选使用温郁金或桂郁金。

薤白：辛、苦、温。归心、肺、胃、大肠经。通阳散结，行气导滞为佐，助于君臣祛逐治胸痹心痛，脘腹痞满胀痛。《本草求真》中称：“实通气，滑窍，助阳佳品”。

杜仲：甘、温，归肝、肾经。补益肝肾。《神农本草经》称其“主腰背痛”。本品补益肝肾，有益于肾阳助心阳，利气血通畅，辅佐君、臣之药，治病引肩背彻痛。

现有技术中也存在一些号称治疗冠心病等疾病的中药组合物，但是本发明的中药组合物不同于任何现有技术组合物。例如，中国专利申请CN103933474A公开了一种治疗冠心病的药物组合物，它是由下述重量配比的原料药制备而成的制剂：丹参15～20份，当归10～15份，生地10～15份，熟地10～15份，赤芍10～15份，桃仁10～15份，红花7～11份，川芎4～8份，香附8～12份，郁金8～12份，柴胡8～12份，白芍8～12份，桔梗4～8份，牛膝8～12份，甘草4～8份。该药物组合物也含有川芎、郁金、牛膝，但其与本发明的中药组合物具有实质的不同。

从中医角度分析，CN103933474A的药物组合物含有香附、柴胡、桔梗、甘草4味理气解毒药，丹参、桃仁、红花、川穹、牛膝5味活血药以及当归、熟地、生地、白芍、赤芍5味补血药，因此用于益气补血，主适应症为血虚证(多见于中老年人)。而本发明组合物由川芎、郁金、牛膝组成(或进一步辅以薤白、杜仲)，主适应症为气滞血瘀引起的胸痹心痛(因情绪过激、七情异常导致，可见于各年龄层)。因此，两者药材构成、药理、药效、适应症均显著不同。

从西医角度或化学角度分析，CN103933474A的药物组合物含有15味药材，所以组成成分非常复杂、活性成分难以确定，其中川芎、郁金、牛膝三者占比极低，显然不构成主要活性组分。而本发明恰恰相反，以川芎、郁金、牛膝的特定提取物混合构成活性组分。另外，CN103933474A中的药物组合物用药是以水或乙醇提取均可；而本发明的中药组合物不能通过将各原料药简单混合直接用水或乙醇提取而得到，而必须采用特定的提取物组合才能获得。所以两者的活性成分的构成在分子层面显然有实质性的不同。

发明人采用现代医学手段，通过大量体内、体外实验以实验数据证明：上述中药组合物(三药合用或五药合用)对于心肌收缩障碍和心肌舒张障碍、血小板聚集血栓形成及心肌缺血、缺氧、抗心肌疲劳等均有显著的药效作用发现，且安全可靠、对人体无毒副作用。具体地，

2)治疗心肌舒张功能障碍引起慢性II、III级心衰药效显著，优于国际上最新、最优的药物。

3)治疗心肌缺血、缺氧疗效显著，优于同类阳性对照药。

4)防血栓形成效果显著、具有溶栓药效。

5)恢复受损的心肌疗效显著。

6)有效提高心肌抗疲劳。

本发明组合物中的各原料中药都是常用中药，在《中国药典》以及《中华本草》等中均有详细的记载，并且都可以通过商业途径容易地获得。

本发明所述的“乙醇”可以是纯乙醇或乙醇的水溶液，例如为40-95％的乙醇水溶液、或40-80％的乙醇水溶液，优选使用50-70％的乙醇。取决于具体实施方式，可以使用60％、65％、70％等各种浓度的乙醇水溶液。以上浓度指体积浓度。

本说明书中，用“任选的”修饰的药材、组分等表示该药材或组分根据需要在某些实施方式中可以存在，而在其他某些实施方式中可以不存在。类似地，用“任选的”或“任选地”修饰的操作或步骤表示该步骤或操作根据需要在某些实施方式的方法中可以存在，而在其他某些实施方式的方法中可以不存在。

本说明书中提供的各味药的用量一般指重量。本领域技术人员可以理解，这里所规定的比例允许具有一定的误差，误差通常在±8％、±5％或±3％范围内变动。

业已发现，郁金、川芎、牛膝的比例是很重要的，不在本发明规定范围内时，所得组合物不能表现出明显的药效。

各原料药的优选相对用量比例如下：

川芎：优选6-12份，更优选8-10份，最优选约9份；

郁金：优选5-10份，更优选6-8份，最优选约7份；

牛膝：优选5-10份，更优选6-8份，最优选约7份。

当使用薤白和杜仲时，其优选相对用量比例如下：

薤白：优选5-10份，更优选6-8份，最优选约7份；

杜仲：优选6-12份，更优选8-10份，最优选约9份。

本领域技术人员可以理解：以上所述每一味原料药的任意一个优选用量范围可以与其他原料药的任意一个优选用量范围任意组合，所得各种组合方式都构成本发明的特定实施方式。因此本发明提供了如下一些实施方式。

出人意料地，发明人发现如果只是将规定重量比例的川芎、郁金和牛膝合并后进行简单的水提取或醇提取，所得提取物并不能或几乎不能表现出理想的药效活性，而只有采用本发明所规定的重量比例和特定提取物组合才能得到具有理想药物活性的中药组合物。

1)6-12份川芎和5-10份郁金的乙醇提取物；

2)上述川芎和郁金提取剩余物和5-10份牛膝的水提取物。

本发明的中药组合物优选加工后以预混物或制剂的的形式提供给患者直接服用。

值得注意的是：本发明组合物中的组分1)“6-12份川芎和5-10份郁金的乙醇提取物”并不意味着川芎和郁金必须合在一起同时提取；两者可以分别用乙醇提取再将提取物进行组合，这两种提取物的组合与组分1)是等效的。同样的，本发明组合物中的组分2)“川芎和郁金提取剩余物和5-10份牛膝的水提取物”并不意味着必须将牛膝和川芎、郁金提取剩余物合在一起同时提取；可以将牛膝单独水提，再将川芎、郁金提取剩余物单独水提(或将川芎提取剩余物、郁金提取剩余物分别单独水提)，这些水提取物的组合与组分2)是等效的。本说明书中，“组分1)”、“组分2)”的使用仅是为了表述方便，并不意味着对本发明的中药组合物中组分数目的限定。本领域技术人员可以理解：只要组合物的组成实质上与上述组分1)、组分2)的组合等效，即属于本发明的中药组合物。

因此，本发明的中药组合物并不限定于特定的制备方法。但是，出于成本和效率的考虑，本发明的中药组合物优选通过以下方法进行制备。具体地，所述中药组合物的制备方法包括以下步骤：

1)称取6-12份川芎和5-10份郁金，合并后用乙醇提取并浓缩；

3)合并步骤1)、步骤2)的提取浓缩物，然后干燥。

每一步骤中的具体提取时间、重复次数、乙醇溶液的浓度、提取溶剂的用量等操作参数可以根据需要进行适当调整。

在一些优选实施方式中，步骤1)的具体工艺为：取6-12份(优选8-10份)川芎和5-10份(优选6-8份)郁金，合并后用5-10倍(例如8倍)50-70％乙醇(例如55％、60％、65％)提取回流提取1-3次，每次1-3小时，过滤，合并提取液，减压浓缩，优选浓缩至密度为1.05-1.15g/ml即可。

在一些优选实施方式中，步骤2)的具体工艺为：取5-10份(优选6-8份)牛膝与步骤1)的提取剩余物(药渣)合并，然后用8-15倍(例如8倍或10倍)水提取回流提取1-3次，每次1-3小时，过滤，合并提取液，减压浓缩，优选浓缩至密度为1.05-1.15g/ml即可。

在一些优选实施方式中，步骤3)中的干燥可以采用制药领域常用的任何干燥方法，例如喷雾干燥、微波干燥、真空干燥等，但是优选采用喷雾干燥。干燥过程中可以加入必要的助剂或载剂。干燥后一般获得颗粒状或粉末状固体组合物。所得产品可以任选地进行常规后处理。

以上所述步骤1)、步骤2)、步骤3)之前、之后或步骤之间都可以包括其他额外操作，例如可以进行灭菌操作、加热或冷却等操作。

为了制备本发明的五药合用组合物，可以在上述步骤2)中额外加入5-10份薤白和6-12份杜仲，从而与其他药材一起提取；也可以在步骤2)和步骤3)之间额外插入一个独立的薤白和杜仲水提步骤；甚至可以在步骤2)中额外加入薤白一同提取，而在步骤3)之前额外再插入一个杜仲水提步骤。本领域技术人员可以明白：这些方式都是等效的、可以相互替代的，本说明书中任何地方(包括权利要求书)提到其中一种方式的描述，都表示可以替换为其等效实施方式。

本领域技术人员可以理解：在需要时，本发明的中药组合物中可加入药物可接受的助剂或辅料，按照制剂学常规技术制成所需的制剂。制剂中的药物活性物质，可以是0.1-99.9％(例如1-99％或50-98％或50-95％等)，其余为药物可接受的助剂或辅料。

本发明的制剂可以是任何可药用的剂型，包括：颗粒剂，片剂，糖衣片剂，薄膜衣片剂，肠溶衣片剂，胶囊剂，口服液，滴丸剂，冲剂，丸剂，散剂，混悬剂，粉剂等。

优选的，本发明的制剂是口服剂型，如：颗粒剂，片剂，胶囊剂，丸剂等。

优选的，本发明的药物制剂，以单位剂量形式存在，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片，颗粒剂每袋，胶囊的每粒胶囊等。

单位剂量形式的制剂中优选含1％左右至90％左右(例如20％-80％或30-60％)的活性成分。例如，胶囊、片剂或糖衣丸等单次给药的单位剂型可含有约1mg至约100g(例如10mg至80g、50mg至50g、1g-20g等)的活性成分。

为了制成合适的剂型，作为药物活性物质的本发明的中药组合物可以任选地与适于给药的无机或有机、固体或液体可药用助剂或辅料混合或结合。例如，适合的载体特别包括填充剂如糖(例如乳糖)、甘露醇或山梨醇、纤维素制品和/或磷酸钙(磷酸三钙或磷酸氢钙)；粘合剂如淀粉糊、明胶、甲基纤维素和/或聚乙烯乙烯吡咯烷酮；崩解剂如淀粉、羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐(如海藻酸纳)。

在一些具体实施方式中，本发明还提供了为有治疗需要的患者治疗心脑血管疾病或病状的方法，该方法包括给患者施用有效量的根据本发明任一实施方式的中药组合物。其中，所述患者优选是哺乳动物，尤其优选人。所述施用优选是经口施用。

在一些具体实施方式中，本发明还提供了根据本发明任一实施方式的中药组合物在治疗患者的心脑血管疾病或病状方面的用途。其中，所述患者优选是哺乳动物，尤其优选人。

在一些具体实施方式中，本发明还提供了根据本发明任一实施方式的中药组合物在制备用于治疗心脑血管疾病或病症的药物中的用途。其中，所述疾病或病症优选是哺乳动物、尤其是人的疾病或病症。所述药物优选是口服药物。

在一些具体实施方式中，本发明还提供了用于治疗心脑血管疾病或病症的根据本发明任一实施方式的中药组合物。其中，所述疾病或病症优选是哺乳动物、尤其是人的疾病或病症。所述中药组合物优选用于口服。

在一些具体实施方式中，本发明还提供了一种口服药物制剂或保健品，其包含根据本发明任一实施方式的中药组合物和常规助剂或辅料。

在本说明书中，术语“治疗”指对疾病或病症的预防性或防止性治疗、以及治愈性或缓解性治疗。

尤其适于采用本发明的中药组合物进行治疗的心脑血管疾病是冠心病、心力衰竭(包括收缩性心力衰竭或舒张性心力衰竭)、心绞痛、心肌梗死、血栓、脑卒中等。

本发明的中药组合物适合于治疗和/或预防心肌收缩障碍、心肌舒张障碍、血栓形成、心肌缺血、心肌缺氧、或心肌疲劳、或者由这些病症引起的各种心脑血管疾病(特别是心肌舒张功能障碍)。

本说明书中，术语“舒张性心衰”(Diastolic Heart Failure，DHF)和术语“射血分数正常的心衰”(Heart Failure with a Normal Ejection Fraction，HFNET)以及术语“射血分数保留的心衰”(Heart Failure with Preserved Ejection Fraction，HFpEF)被认为具有相同的含义，可以互换使用。

本说明书中，术语“收缩性心衰”(Systolic Heart Failure，SHF)和术语“射血分数低下的心衰”(Heart Failure with Reduced Ejection Fraction，HFrEF)或“射血分数降低的心衰”被认为具有相同的含义，可以互换使用。

治疗中给药的具体方式和剂量可以由主治医生考虑患者的具体情况，尤其是年龄、体重、生活方式、活动水平、疾病严重程度等条件来选择。

一般情况下，哺乳动物的单次给药量约在1-20,000mg/kg范围内(例如2-5,000mg/kg)。例如，对于优选的治疗人类患者来说，当以中药提取物预混物形式给药时，合适的剂量可以在1-2,000mg/kg、2-1,000mg/kg、5-500mg/kg或10-400mg/kg范围内。如果需要，也可以把此给药量分成任选地平均的几份服用。以上提及的剂量可以按照一定间隔重复施用，例如，每天三次、每天一次、每周一次等等。

本说明书中，“mg/kg”或“mg·kg^-1’的意思是按照待治疗的哺乳动物(包括人)的每公斤体重计给药的毫克数，“g/kg”或“g·kg^-1”的意思是按待治疗的哺乳动物(包括人)的每公斤体重计给药的克数。其它“mg/100g”或“mg/10g”等的含义类似。

以上所提到的本发明的各个具体实施方式和各个特征的优选级和优选方面可以任意组合，其组合所得各种技术方案都在本发明的范围内。

附图说明

图1示出了不同药物连续给药后对恒河猴的心脏收缩功能的影响，其中(A)是LVEF的变化趋势，(B)是各组LVEF相对于基线值的变化趋势，(C)是FS的变化趋势，(D)是各组FS相对于基线值的变化趋势。

图2示出了不同药物连续给药后对恒河猴的心脏舒张功能的影响，其中(A)是E/e’的变化趋势，(B)是各组E/e’相对于基线值的变化趋势，(C)是e’的变化趋势，(D)是Vp的变化趋势。

具体实施例

以下通过实施例的具体实施方式再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。应当理解，此处所描述的具体实例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。在不脱离本发明的精神和原则之内做的任何修改，以及根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的等同替换或者改进，均应包括在本发明的保护范围内。

以下实施例中所报道的数字是尽可能精确的，但是本领域技术人员理解由于不可避免的测量误差和实验操作问题，每一个数字都应该被理解为约数，而不是绝对准确的数字。例如，由于称量器具的误差，关于各实施例组合物中各药物的重量值，应该理解为其可能具有±5％以内的误差。

实施例1中药组合物1的制备

本例为五药合用组合物，其中使用了川芎、郁金、牛膝、薤白、杜仲。所用的原料药之中，川芎采集自中国四川省，郁金采集自中国贵州省，牛膝采集自中国四川省，薤白采集自中国江苏省，杜仲采集自中国河北省。

实施例1的中药组合物制备工艺如下：

(1)取90g川芎、70g郁金，加8倍量60％乙醇提取2.5小时，过滤；然后再加8倍量60％乙醇提取2.5小时，过滤(药渣备用)；合并两次所得滤液，真空浓缩至密度约1.1g/ml，得浓缩膏；

(2)取上一步骤所得药渣，合并70g牛膝、70g薤白、90g杜仲，加10倍量水提取2个小时，过滤；然后再加10倍量水提取2个小时，过滤；合并两次所得滤液，真空浓缩至密度约1.1g/ml，得浓缩膏；

(3)合并步骤1所得浓缩膏和步骤2所得浓缩膏，喷雾干燥后即得本发明实施例1所述中药组合物(亦称为“HTL001”)。所得组合物为褐色粉末状，可直接用于下面的体外体内实验。

实施例2中药组合物2的制备

本例为三药合用组合物，其中使用了川芎、郁金、牛膝。所用的原料药之中，川芎采集自中国四川省，郁金采集自中国贵州省，牛膝采集自中国四川省。

实施例2的中药组合物制备工艺如下：

(1)取90g川芎、70g郁金，加8倍量65％乙醇提取2.5小时，过滤；然后再加8倍量65％乙醇提取2.5小时，过滤(药渣备用)；合并两次所得滤液，真空浓缩至密度约1.1g/ml，得浓缩膏；

(2)取上一步骤所得药渣，合并70g牛膝，加8倍量水提取2个小时，过滤；然后再加8倍量水提取2个小时，过滤；合并两次所得滤液，真空浓缩至密度约1.1g/ml，得浓缩膏；

(3)合并步骤1所得浓缩膏和步骤2所得浓缩膏，喷雾干燥后即得本发明实施例2所述中药组合物(亦称为“HTL002”)。所得组合物为褐色粉末状，可直接用于下面的体外体内实验。

对比例1对比中药组合物1的制备

取90g川芎、70g郁金、70g牛膝，加8倍量65％乙醇提取2.5小时，过滤；然后再加8倍量65％乙醇提取2.5小时，过滤；合并两次所得滤液，真空浓缩至密度约1.1g/ml，得浓缩膏；喷雾干燥后即得对比例1中药组合物。所得组合物为褐色粉末状。

对比例2对比中药组合物2的制备

取90g川芎、70g郁金、70g牛膝，加8倍量水提取2个小时，过滤；然后再加8倍量水提取2个小时，过滤；合并两次所得滤液，真空浓缩至密度约1.1g/ml，得浓缩膏；喷雾干燥后即得对比例2中药组合物。所得组合物为褐色粉末状。

下面对实施例1或2所述中药组合物和对比例1、对比例2中药组合物进行各种药效学研究，以验证其药效。

1.实施例组合物和对比例组合物对SD大鼠心肌缺血损伤的保护作用研究

本实验采用大鼠永久性心肌缺血模型针对抗心肌缺血作用进行药物筛选，确定待测药物组合物的有效性。

1.1试剂、仪器

受试样品：实施例2组合物、对比例1组合物、对比例2组合物，用蒸馏水配制成所需浓度。

阳性对照品：复方丹参滴丸，天津天士力制药股份有限公司，每丸重27mg。

氯化三苯基四氮唑(TTC)，Sigma公司，生理盐水配成1％溶液。

戊巴比妥钠，Sigma公司。

氯化钠注射液，山东科伦药业有限公司。

ALC-V8动物呼吸机：上海奥尔科特生物技术有限公司。

C-5050ZOOM数码摄相机：OLYMPUS。

BIOPAC Systems MP150心电记录仪：美国BIOPAC公司。

1.2实验动物

SD大鼠，雄性，体重240-300g，由中国药品检定研究院提供。

1.3实验方法

1)动物分组、处理

动物适应性喂养1周后随机分为模型对照组、复方丹参滴丸146mg/kg组、实施例2组合物270mg/kg组(1号组)、对比例1组合物270mg/kg组(2号组)、对比例2组合物270mg/kg组(3号组)，每组6-7只。连续给药7天，实验前大鼠禁食12小时。

2)实验过程

动物称重，通过腹腔注射3％戍巴比妥钠麻醉大鼠；固定后，气管插管，用呼吸机辅助呼吸。插上心电图记录针(左下肢VIN+，右上肢VIN-，左上肢GND)，记录心电。大鼠左腋下缘3-4肋或4-5肋间开胸，撕破胸膜，用3/82×66/0带线缝合针左冠状动脉前降支结扎，观察心电图变化，出现缺血指征即表明模型成功，关胸，缝合。24小时后称重，麻醉，取出心脏，生理盐水清洗，磨具切4片，TTC染色6分钟。滤纸吸干残余液体，正反面摄像。采用AdobePhotoshop软件统计梗死区占左心室面积比值。

1.4数据统计

数据用

表示，组间进行T-test检验。

1.5实验结果

与模型组(模型组缺血面积比为24.3±3.5％)相比，连续给药7天后丹参滴丸146ml/kg组与1号组270mg/kg均能显著降低24h后SD大鼠永久性心肌缺血梗死面积比值(见下表)。

表1不同组合物对大鼠永久性心肌缺血梗死面积比的影响(n＝6-7)

与模型组比较，**P＜0.01

1.6结论

实施例2中药组合物在270mg/kg剂量下连续给药7天对大鼠永久性心肌缺血具有保护作用，而原料药组成与实施例2组合物非常相似的对比例1组合物、对比例2组合物均没有明显的抗心肌缺血作用。这说明川芎、郁金、牛膝简单混合并不能起到治疗作用，即药物的活性成分不能通过常规的醇提取或水提取简单获得。出人意料地，采用本发明所述特定提取方式和提取物组合，可以使得所得组合物具有显著的抗心肌缺血作用。

2.实施例2中药组合物耐缺氧药效学评价

本研究采用常压密闭整体耗氧量、负重游泳等耐缺氧模型，对本发明中药组合物的抗疲劳、耐缺氧作用进行体内实验。

实验一实施例2中药组合物对小鼠整体耗氧量的影响

1.1实验材料和试剂

受试物：实施例2中药组合物(HTL002)，棕褐色粉末，溶于蒸馏水，配成所需浓度。

阳性对照药：复方丹参滴丸，天士力制药集团股份有限公司产品，规格：每丸重27mg，一次10丸，一日3次，复方丹参滴丸以人用量体表面积法折算至小鼠剂量为105.3mg/kg。

钠石灰，天津市福晨化学试剂厂。

实验动物：ICR小鼠，雄性，20-22g，购自北京大学医学部(实验动物科学部)。

1.2实验方法

动物适应性喂养1周后随机分为模型组(空白对照组)、复方丹参滴丸对照组(25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg)，受试物组(150mg/kg、300mg/kg、600mg/kg、1200mg/kg)，每组10只，连续给药15天，每日给药一次。

末次给药1小时后，将动物放入预先装有20g钠石灰的250ml密闭广口瓶中，用硅胶将连有滴定管的橡胶塞与广口瓶密封，滴定管另一端插入水中。分别记录0-5min、5-10min滴定管内液面上升高度；动物死亡时间、死亡时滴定管内液面上升高度，实验后计算存活期总耗氧量/20g，单位时间耗氧量/20g，0-5min耗氧量/20g和5-10min耗氧量/20g。

1.3数据处理

数据用

表示，组间进行T-test检验。

1.4实验结果和讨论

常压缺氧时，由于氧化不完全的酸性代谢产物、CO₂蓄积，可刺激化学感受器或中枢神经，反射性地引起呼吸加深加快，心搏加强，心输出量增加，血液重新分配以保证脏器的血液供应。本实验中在常压缺氧条件下，通过计算不同时间段小鼠的耗氧量，死亡时间(即存活时间)和存活期耗氧量，说明受试物的耐缺氧作用。

实验表明，与模型组比较，受试物各剂量组在动物死亡时间上均明显延长，统计学有显著性差异(P＜0.05)；在0-5min内耗氧量/20g方面，各剂量组均比模型组有所增加，其中300mg/kg组统计学有显著性差异(P＜0.05)；在5-10min内耗氧量/20g，各剂量组均比模型组明显增加，统计学有显著性差异(P＜0.05)。(见下表)

1.5结论

实施例2中药组合物在150mg/kg、300mg/kg、600mg/kg和1200mg/kg四个剂量下，连续给药15天后，对小鼠有不同程度的耐缺氧作用。

实验二实施例2中药组合物对小鼠游泳时间的影响

1.1实验材料和试剂

阳性对照药：复方丹参滴丸，规格：每丸重27mg，一次10丸，一日3次，天士力制药集团股份有限公司产品，复方丹参滴丸以人用量体表面积法折算至小鼠剂量为105.3mg/kg。

1.2实验方法

动物适应性喂养1周后随机分为模型组(空白对照组)、复方丹参滴丸对照组(25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg)，受试物组(600mg/kg、1200mg/kg)，每组10只，连续给药15天，每日给药一次。

末次给药1小时后，将动物尾部负重9％体重的铁丝，放入水深20cm，水温30℃的水桶内游泳，观察小鼠游泳至力竭(在水下10秒钟不能上浮)，该时间为小鼠的负重游泳时间。

1.3数据处理

数据用

表示，组间进行T-test检验。

1.4实验结果和讨论

运动性疲劳的产生是由运动引起机体一系列生化改变导致的肌肉收缩力的降低，运动疲劳的发生最直接的表现是机体运动耐力的下降。本实验中负重游泳的时间可作为判断小鼠体力强壮程度、抗疲劳能力的客观指标。

与模型组比较，丹参滴丸(50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg)组、受试物(600mg/kg、1200mg/kg)组均比模型组负重游泳时间明显延长，统计学有显著性差异(P＜0.05)。(见表2)

表3实施例2中药组合物对小鼠负重游泳时间的影响(n＝10)

与模型组比较，**P＜0.01，*P＜0.05

1.5结论

实施例2中药组合物在600mg/kg和1200mg/kg两个剂量下，连续给药15天后，对小鼠负重游泳时间有明显延长作用，具有一定的抗疲劳作用。

以上常压密闭整体耗氧量模型和负重游泳模型的研究结果表明：实施例2中药组合物对测试小鼠有不同程度的抗疲劳、耐缺氧作用。

3.实施例2中药组合物对血小板聚集的影响

血小板聚集率是血小板功能的一个检测指标。血小板聚集率升高时，容易聚集形成血栓，其数值越高，形成血栓的可能越大。在动脉硬化、冠心病、脑梗、高血压、糖尿病等血栓性疾病中，血小板聚集率往往会升高。通过治疗，血小板聚集率下降时，不但可抑制血栓形成，还会使己形成的血栓溶解，因此测定血小板聚集率可以有观察疗效、筛查药物的作用。本研究采用凝血酶诱导大鼠血小板聚集模型，评估中药组合物的抑制血小板聚集的效果。

凝血酶诱导大鼠血小板聚集模型是一种经典模型。凝血酶是一种丝氨酸蛋白酶，也是血液凝血级联反应中的主要效应蛋白酶，显现出促凝的特性。凝血酶是由在凝血酶原复合物中的非活性凝血酶原在Xa因子(FXa)因子的作用下通过蛋白裂解的方式产生。

1.1实验材料和试剂

受试物：实施例2中药组合物(HTL002)，棕褐色粉末，溶于蒸馏水配成所需浓度。

阳性对照药物：波立维(硫酸氢氯吡格雷片)，赛诺菲(杭州)制药有限公司分装，规格75mg/片，每日一次，一次一片；波立维以人用量体表面积法折算至大鼠剂量为6.75mg/kg。

凝血酶，Sigma公司产品。

戊巴比妥钠，Sigma公司产品。

仪器：

血小板聚集仪，型号：LBY-NJ4，北京普利生仪器有限公司。

一次性使用人体静脉血样采集容器，湖南省浏阳市医用仪具厂。

一次性使用真空采血器配套用针，上海康侬医疗器械有限公司。

低速离心机，型号：LD5-2A，北京京立离心机有限公司。

实验动物：

SD大鼠，雄性，体重240-260g，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供。

1.2实验方法

1)动物分组及给药方式：

动物适应性喂养5天后，随机分为空白对照组、阳性对照组(波立维组，6.75mg/kg)组、受试物800mg/kg剂量组，每组20只，连续灌胃给药15天，每日给药一次。

2)手术操作步骤：

末次给药后，3％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(40mg/kg)，腹主动脉取血6ml入一次性使用人体静脉血样采集容器中，充分颠倒混匀。800转/分离心10分钟，吸取上层富含血小板血浆(PRP)，并计数其血小板数量。将己吸取过富含血小板血浆(PRP)的血再次用3000转/分，离心10分钟，取上层无血小板的备用血浆(PPP)。

在测定样品方杯中加入一小磁棒和300ul PRP置恒温孔中预热5分钟备用，在另一方杯中加入300ul PPP备用。用微量进样器吸取5ul凝血酶(5U/L)加入杯底，测量血小板最大聚集率，每个血样平行测试3-4个，取平均值。

1.3数据统计

数据用

表示，组间进行T-test检验。

1.4实验结果和讨论

在本实验中，阳性对照药波立维(6.75mg/kg)组血小板最大聚集率(35.8±29.7％)与模型组血小板最大聚集率(65.0±16.6％)比较明显降低，统计学有极显著性差异(P＜0.01)，说明本实验体系构建成功。

受试物在800mg/kg剂量下，血小板最大聚集率(40.8±23.5％)比模型组明显降低，且统计学有极显著性差异(P＜0.01)，提示受试物在800mg/kg剂量下具有抑制血小板聚集的作用(见下表)。

表4中药组合物对凝血酶诱导大鼠血小板聚集的影响

与模型组比较，**P＜0.01，*P＜0.05

1.5结论

受试物(HTL002)连续灌胃给药15天，在800mg/kg剂量组具有抑制血小板聚集的作用。

4.中药组合物对大鼠动静脉旁路血栓形成的影响

1.1材料试剂：

受试品：实施例2中药组合物(HTL002)，溶于蒸馏水，配成所需浓度。

阳性对照药物：波立维(硫酸氢氯吡格雷片)，赛诺菲(杭州)制药有限公司分装，规格75mg/片，每日一次，一次一片；波立维以建议人用量体表面积法折算给大鼠剂量为6.75mg/kg。

仪器：

电子天平，型号：FA1004，上海越平科学仪器有限公司。

医用真丝编织线(5M灭菌线团)，型号：0号，上海浦东金环医疗用品股份有限公司。

实验动物：

SD大鼠，雄性，体重240-260g，由北京大学医学部(实验动物科学部)提供。

1.2实验方法

1)动物分组及给药方式：

动物适应性喂养5天后，随机分为空白对照组、阳性对照药波立维(6.75mg/kg)组、复方丹参滴丸组、以及100、200、400和800mg/kg四个受试物剂量组，每组20只，连续灌胃给药15天，每日给药一次。

2)手术操作步骤：

末次给药后，通过腹腔注射3％戊巴比妥钠(Sigma公司)进行麻醉(40mg/kg)，分离右颈总动脉和左颈外静脉，在聚乙烯管中段放置6cm长医用手术丝线(0号)，整个管路中充满生理盐水，分别插入动物右颈总动脉和左颈外静脉内形成动静脉血管环路，15分钟后切断血流，将丝线取出称重。

1.3数据统计

数据用

表示，组间进行T-test检验。

1.4实验结果和讨论

本实验采用经典大鼠动静脉旁路法形成旁路动静脉血流，当动脉血流中的血小板接触丝线的粗糙面时黏附于线上，血小板聚集物环绕线的表面形成血小板血栓。当血小板黏附聚集功能受到抑制时，形成血栓的重量就较轻。因此，从血栓重量可测定血小板的黏附聚集功能。

本实验中，阳性对照药波立维(6.75mg/kg)组栓线净重(20.2±4.8mg)与模型组栓线净重(59.1±14.2mg)比较明显减轻，统计学有极显著性差异(P＜0.01)，说明本实验体系构建成功。

实验结果见下表。受试物在800mg/kg剂量下，栓线净重(47.8±17.2mg)比模型组有所减轻，且统计学有显著性差异(P＜0.05)，表明受试物在800mg/kg剂量下具有抑制血栓形成的作用。受试物在100、200和400mg/kg剂量下栓线净重与模型组相当，则未见统计学意义(P＞0.05)。

表5中药组合物对大鼠动静脉旁路血栓形成的影响

与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

1.5结论

受试物连续灌胃给药15天，在800mg/kg剂量下对大鼠动静脉旁路血栓的形成具有抑制作用。

5.连续3个月经口给药对自发慢性心功能不全恒河猴药效学研究

心力衰竭是全球最主要的死亡原因之一。Entresto是诺华公司首创的双效血管紧张素受体-脑啡肽酶抑制剂，于2015年经FDA批准上市，是目前公认的临床治疗心衰的-线药物和最佳选择。但是临床数据表明Entresto对于射血分数低下心衰(HFrEF)非常有效；而其对于占心衰患者约一半的射血分数保留的心衰(HFpEF)的疗效还尚未得到临床数据支持。HFpEF是一种高发病率和高死亡率的疾病，但目前尚无有效的治疗手段。

自发性恒河猴慢性心衰模型是全球最优临床模型，其在病因学、发病机制、疾病进程进展等方面都与人类高度相似，因此是研究人类心力衰竭发病机理、寻找早期诊断与治疗方法和技术、进行抗心衰新药筛选和评价的最佳动物模型。本研究将评估实施例2组合物和Entresto对自发心功能不全恒河猴收缩功能与舒张功能的药效学及安全性评估，评估不同剂量下的药效强度。实验设计和具体实验操作参考以下文献(及其引用的参考文献)进行：

文献1：Nagueh，Sherif F.，et al.″Recommendations for the evaluation ofleft ventricular diastolic function by echocardiography.″Journal of theAmerican Society of Echocardiography 22.2(2009)：107-133.

文献2：Solomon，Scott D.，et al.″The angiotensin receptor neprilysininhibitor LCZ696 in heart failure with preserved ejection fraction：a phase2double-blind randomised controlled trial.″The Lancet 380.9851(2012)：1387-1395.

文献3：Hansen，B.C.，and N.L.Bodkin.″Heterogeneity of insulin responses：phases leading to type 2(non-insulin-dependent)diabetes mellitus in therhesus monkey.″Diabetologia 29.10(1986)：713-719.

文献4：Qian，Can，et al.″Diastolic dysfunction in spontaneous type2diabetes rhesus monkeys：a study using echocardiography and magneticresonance imaging.″BMC cardiovascular disorders 15.1(2015)：59.

文献5：Jeong，Euy-Myoung，et al.″Role of mitochondrial oxidative stressin glucose tolerance，insulin resistance，and cardiac diastolic dysfunction.″Journal of the American Heart Association 5.5(2016)：e003046.

1.1实验动物

由雅安普莱美生物科技有限公司提供104只雄性恒河猴(年龄10至21岁)，针对心脏功能通过核磁共振、心电图进行诊断筛查。使用常规方法(例如以上文献1、文献2及其参考文献中所记载的方法)测量计算以下参数：

LVEF：左室射血分数；

FS：缩短分数；

EDV：舒张末期容积；

ESV：收缩末期容积；

SV：每搏输出量；

E：舒张早期二尖瓣口血流峰速；

e’：舒张早期二尖瓣环组织运动峰速；

a’：舒张晚期二尖瓣环组织运动峰速；

S：收缩期肺静脉血流峰速；

D：舒张早期肺静脉血流峰速；

Ar：舒张晚期肺静脉反向血流峰速；

Ar-ADur：舒张晚期肺静脉反向血流持续时间与舒张晚期二尖瓣口血流持续时间的差值；

Vp：左室血流传播速度；

SBP：收缩压；

DBP：舒张压。

数据分析由现场EchoPAC Software完成。

然后，参照人类诊断标准、根据测量的参数值对恒河猴进行分类，

其中LVEF＜65％且FS＜35％者诊断为收缩功能不全(简称SD)；

其中e′＜8且E/e’＞10者诊断为舒张功能不全(简称DD)。

再结合动物一般健康状况，最后筛选出12只收缩功能不全动物(SD猴)和18只舒张功能不全动物(DD猴)进行实验。

这些动物以18％脂肪含量的饲料饲喂。

1.2实验方法

1)动物分组

SD猴分组：动物随机分成3组，受试物组(n＝4)、阳性对照组(Entresto组，n＝3)和安慰剂组(n＝5)。

DD猴分组：动物随机分成3组，受试物组(n＝6)、阳性对照组(Entresto组，n＝5)和安慰剂组(n＝7)。

2)实验设计及剂量设计

检疫和准备期4周，然后灌胃给药13周。具体剂量如下：

阳性对照组(给药Entresto)：前2周，1.66mg/kg；之后2周，3.32mg/kg；之后2周，6.64mg/kg，最后7周，周，13.33mg/kg。

受试物组(给药HTL002)：前2周，130mg/kg；之后4周，200mg/kg；最后7周，周，250mg/kg。

安慰剂组：给予药物溶剂。

3)观测指标

实验过程中，每天隔笼观察动物1次，观察内容：皮肤、毛、眼、耳、鼻、口腔、胸部、腹部、泌尿生殖部、四肢等部位，以及呼吸、运动、泌尿、排便和行为改变等。

给药前分别测量记录LVEF、FS、EDV、ESV、SV、E、e’、a’、S、D、Ar、Ar-ADur、Vp、SBP、DBP等反映心脏功能的参数基线值以及肾小球滤过率(GFR，通过高效液相色谱法测定血浆碘海醇浓度来测量)基线值，给药过程中在第1、3、6、9、13周末分别再次测量上述参数值。

1.3数据统计

数据用

表示，组间进行T-test检验。

1.4实验结果和讨论

1)给药前的基线值

给药前测定的各参数值如下表所示。

2)给药后的参数值变化趋势

实验结果示于图1至图2中，在各附图中“Week”表示周，“Vehicle”表示安慰剂组，“HTL002”表示受试物组，“Entresto”表示阳性对照组，“Baseline”表示基线。

从图1可以看出：HTL002和Entresto给药1周后LVEF和FS有改善，给药3周-13周期间，均能保持显著增强；安慰剂组给药前后无显著变化。图1说明：HTL002和Entresto治疗13周，均能显著增强恒河猴收缩功能。

从图2可以看出：HTL002治疗9-13周后，显著改善了自发舒张功能不全恒河猴的舒张功能；而Entresto在治疗13周后没有显著改善舒张功能。

另外，整个治疗期间，HTL002组和Entresto组均未见副作用发生。

1.5结论

通过以上实验结果可知：

·HTL002和Entresto治疗3-13周期间，均能显著改善收缩功能，提示HTL002能用于治疗慢性射血分数低下心功能不全临床患者，起效时间和作用强度与Entresto相当。

·与给药前相比，HTL002治疗9-13周期间舒张功能显著改善；与给药前相比，Entresto治疗13周没有显著改善舒张功能。提示HTL002能改善慢性射血分数保留心功能不全临床患者舒张功能，但相关作用机理需要进一步研究。

·HTL002连续3个月给药对恒河猴是安全、无副作用的。

6.实施例2组合物的急毒试验

1.1实验动物

采用北京维通利华实验动物技术有限公司提供的ICR小鼠40只，雌雄各半，约28-35日龄，雌鼠接收时体重为15.2～17.5g，雄鼠接收时体重为15.5～18.3g。

1.2实验过程

实验动物的饲养条件：室温22.2±1.2℃，相对湿度46.9±4.0％；最小换气次数15次/小时；光照明∶暗＝12h∶12h。动物饲养于PC小鼠群养盒中，笼具规格为：294*190*125mm³，每盒5只，整个饲养过程中保持动物饮食活动自由。适应期6天。

分组方法：实验前对动物称重，雌雄动物分别随机分组。实验设给药组(HTL002)和溶剂对照组，每组小鼠20只，雌雄各半。实验动物药前禁食约4h，药后禁食1～2h，不禁水。具体剂量分组见下表。

表7 ICR小鼠灌胃受试物单次给药毒性试验剂量及分组

给药方案：本实验采用最大给药量法。药物溶剂采用国药集团化学试剂有限公司提供的0.5％CMC-Na溶液。通过灌胃给药，药物浓度采用最大浓度0.8g/ml，小鼠单次灌胃的给药体积为0.4ml/10g，共给药1次。即小鼠单次灌胃受试物的最大给药剂量为32g/kg，相当于人临床拟用剂量的约500倍。

药后4小时内严密观察动物对受试品的反应；以后每天观察一次，连续观察14天。

1.3实验结果：

溶剂对照组动物给药后连续观察4h及药后连续观察14天均未见明显异常。给药组动物给药后连续观察4h均未见明显异常。给药后D1天给药组4只雌鼠和6只雄鼠可见肛周污秽。给药后D3天至观察期结束给药组全部动物活动、饮水等未见异常；口、眼、鼻无异常分泌物；毛色、呼吸等未见异常。一般观察状况良好。

实验期间，溶剂对照组及给药组动物体重均逐渐增加。雌、雄鼠各阶段动物体重与溶剂对照组相比，均无显著性差异。

14天观察期结束后对全部动物实施安乐死后，对各组动物进行尸解及大体观察，全部动物心、肝、脾、肺、肾等脏器均未见明显异常。

1.4结论

实验结果证明：ICR小鼠单次灌胃最大耐受剂量(MTD)大于32g/kg体重，相当于临床拟用剂量的约500倍。

另外，以Beagle犬作为实验动物，采用与上述ICR小鼠类似的方法进行单次灌胃给药，实验结果证明：在0.6g/kg、1.2g/kg、2.4g/kg的给药剂量下(分别相当于人单次给药推荐剂量的5倍、10倍、20倍)，给药4h内实验动物的呼吸功能、血压、体温、心率和心电图各项指标均与溶剂对照组无显著差异，证明实验剂量下实验药物安全性良好。

7.实施例2组合物的长毒试验

本试验的目的是通过SD大鼠灌胃反复给予实验药品，观察SD大鼠可能出现的毒性反应性质和程度，毒性反应的发展和恢复情况。

1.1实验动物

采用北京维通利华实验动物技术有限公司提供的SD大鼠120只，雌雄各半，雌鼠约7周龄，接收时体重154～169g，雄鼠约6周龄，接收时体重148～168g。

1.2实验试剂

准确称取一定量实施例2组合物(HTL002)，用0.5％CMC-Na溶液配制成不同浓度的混悬液，现用现配。

1.3实验过程

实验动物的饲养条件：室温20-26℃，相对湿度40～70％。最小换气次数15次/小时，光照明∶暗＝12h∶12h。动物饲养于聚丙烯大鼠群养盒中，笼具规格为：545*395*200mm³，每盒2-5只，整个饲养过程中保持动物饮食活动自由。适应期6天。

分组方法：实验前对动物称重，雌雄动物分别随机分组。实验设溶剂对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。每组小鼠30只，雌雄各半。

表8 SD大鼠灌胃受试物90天重复给药毒性试验剂量设计

给药方案：第1-90天为给药期，第91-121天为恢复期。

给药途径：灌胃给药。

给药体积：2ml/100g。

给药时间：每天给药1次(注：每日给药时间相近)。

观察方案：给药前及给药后进行笼旁观察，每天1次观察全部动物，观察内容包括动物外观状况、被毛、体征、行为活动、呼吸状态、腺体分泌、动物姿势、粪便性状、死亡情况等。连续给药90天。给药结束时剖杀79只动物(1只动物意外死亡)，恢复4周后，剖杀剩余40只动物。检测指标包括动物一般状况、体重、饲料消耗量、血液常规、血清生化、电解质、凝血指标、尿指标、大体解剖和病理组织学检查等。

1.4实验结果：

1)一般生理指标观察

本实验过程中，给药各组和对照组动物行为活动、外观体征、粪便颜色、形状等均正常，未见任何与给药相关的中毒症状出现，一般观察情况良好。

整个实验期间，给药各组和对照组雌雄鼠体重均不断增加。给药各组动物体重及摄食量均未出现与给药相关的毒性变化。

2)临床病理学检查

给药结束时，低、中、高剂量组雌雄鼠总胆固醇(CHOL)含量均高于溶剂对照组(雌雄鼠升高率分别为16.7％-33.3％和30.8％-61.5％)，该指标变化有剂量效应关系，提示可能与给药相关，且雄鼠更敏感。但恢复期结束时，CHOL含量均可恢复至对照组水平。

给药结束及恢复期结束时，给药各组雌、雄鼠血液学、电解质、凝血指标、尿指标及血清生化其余各项指标与溶剂对照组比较均未出现毒理学意义的改变。

3)组织病理学检查

脏器重量和脏器系数：给药结束时，低、中、高剂量组雌雄鼠肝脏重量、肝脏系数、肾脏重量和肾脏系数均高于溶剂对照组，且有一定的剂量依赖性。恢复期结束时，各给药组雌、雄鼠脏器重量及系数与溶剂对照组相比均未见明显毒性变化。

组织病理学：给药结束，与溶剂对照组相比，受试物高剂量组动物各脏器未见与给药相关的病理改变。恢复期结束，与溶剂对照组相比，受试物高剂量组动物各脏器亦未见与给药相关的蓄积性或延迟性毒性反应。

1.5结论

1)在本实验条件下，SD大鼠灌胃给予受试物(剂量为2.5、5、10g·kg^-1)90天，三个剂量组动物总胆固醇(CHOL)含量、肝肾重量及系数均高于溶剂对照组，恢复期各项指标均恢复正常。SD大鼠灌胃给予10g·kg^-1剂量的受试物90天，给药动物的各脏器组织均未见与给药相关的毒性病理改变。停药4周后，给药动物的各脏器组织均未见延迟及蓄积性毒性病理改变。

2)在本实验条件下，SD大鼠灌胃受试物90天重复给药无严重毒性剂量(HNSTD)为10g·kg^-1，相当于人临床拟用剂量的156倍，说明受试物是非常安全的。

以上毒性试验(急毒试验和长毒试验)结果表明：实施例2组合物以临床拟用剂量的约500倍单次给药时，对试验动物是安全的；以临床拟用剂量的约150倍长期连续给药时，对试验动物仍是安全的。这表明：实施例2组合物不仅可以作为治疗慢性疾病(例如慢性心衰)的药物长期供病人服用，而且由于其没有明显副作用、对血栓形成等有预防作用，可以作为保健品(药物型营养品)供正常人群长期使用。

8.中药组合物对异丙肾上腺素诱导的大鼠心功能损伤的影响

下面以异丙肾上腺素诱导的大鼠心功能损伤模型为例，来验证实施例1组合物的药效。

1.1试剂和仪器：

受试品：实施例1组合物(HTL001)，褐色粉末，溶于蒸馏水。

阳性药：复方丹参滴丸，天士力制药集团股份有限公司。

戊巴比妥钠，Sigma公司。

异氟烷，河北九派制药有限公司。

异丙肾上腺素，日本东京化成工业株式会社。

仪器：

Visual Sonics Vevo770高分辨率小动物超声成像系统，716探头。

1.2实验动物

SD大鼠，雄性，体重240-300g，80只；由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。

1.3实验方法

1)动物分组、处理

动物称重，除正常对照组(10只)外，于后颈部皮下多点注射异丙肾上腺素(给药剂量27mg/kg，给药体积：0.1ml/100g)造模，每天一次，连续四天。将造模后存活的动物分为模型对照组、复方丹参滴丸150mg/kg剂量组(阳性对照组)、HTL001高剂量组(1800mg/kg)、HTL001中剂量组(600mg/kg)、HTL001低剂量组(200mg/kg)，每组7只。实验前大鼠禁食12小时。

于造模第四天开始灌胃给药，连续给药14天。

2)实验过程

分别对正常对照组、模型组和各给药组动物心脏功能进行超声检查。超声影像学检测前对动物进行气体麻醉，诱导麻醉时异氟烷浓度为3％，氧气流量计控制在0.6L/min，麻醉后仰卧位固定于检查台上，接入呼吸罩，维持麻醉为2％异氟烷和0.6L/min的氧气流量。

心脏的超声影像分析：取胸骨旁左室短轴切面，在二尖瓣腱索水平记录M型超声运动曲线后，计算左室短轴缩短分数(Shortening Fraction，FS)和左室射血分数(LVEF)。各指标均在连续3个心动周期上测量后取其平均值(探头频率15MHz)。

1.4数据统计

数据用

表示，组间进行T-test检验。

1.5实验结果

实验数据总结于下表中。

表9组合物对异丙肾上腺素诱导的大鼠心功能损伤的影响

与正常对照组比，#p＜0.001，与模型组相比，*P＜0.05。

从以上实验数据可以看出：相对于正常组，模型组的LVEF和FS明显受损，而复方丹参滴丸150mg/kg剂量组对于LVEF和FS起到明显的恢复作用，说明模型是成功的。而HTL001的中、高剂量组对于LVEF有明显的恢复作用，中剂量组对FS也作用明显。

1.6结论

实施例1组合物在600mg/kg、I800mg/kg两个给药剂量下对异丙肾上腺素诱导的大鼠心功能损伤具有保护作用。

另外，通过与以上实验2-7类似实验，可以证实实施例1的组合物与实施例2组合物具有类似的药效和安全性，包括对于心肌收缩障碍、心肌舒张障碍、血小板聚集血栓形成、心肌缺血、心肌缺氧、心肌疲劳等均有显著的药效，但是在某些药效方面作用强度略低，这可能是由于有效成分浓度相对降低造成的。

此外，通过给一些志愿者服用实施例1组合物或实施例2组合物，证明了实施例1、2组合物对于冠心病、心绞痛、心衰、血栓等均有显著疗效，明显改善了患者健康状况；实验中还发现：实施例1组合物对于心脏病引发的肩背疼痛症状缓解效果明显，这很可能是由于引入了薤白和杜仲导致的。

尽管上文已经对具体实施例进行了具体描述，本领域的技术人员可以理解的是，在不脱离本发明的精神的范围内可进行形式和细节上的改变和组合。可以理解，在不脱离本文披露的和根据所附权利要求所解释的较宽的范围内，可以对不同实施例的适应性描述做出各种改变。

Claims

1.一种治疗心脑血管疾病的中药组合物，其活性成分由以下的组分1）、组分2）构成：

1）6-12份川芎和5-10份郁金的乙醇提取物；

2）上述川芎和郁金提取剩余物和5-10份牛膝的水提取物。

2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述川芎为6-12份，所述郁金为6-8份，所述牛膝为6-8份。

3.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述川芎为8-10份，所述郁金为6-8份，所述牛膝为6-8份。

4.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述川芎为9份，所述郁金为7份，所述牛膝为7份。

5.一种治疗心脑血管疾病的中药组合物，由以下的组分1）、组分2）、组分3）构成：

1）6-12份川芎和5-10份郁金的乙醇提取物；

2）上述川芎和郁金提取剩余物和5-10份牛膝的水提取物；

3）5-10份薤白和6-12份杜仲的水提取物。

6.如权利要求5所述的中药组合物，其特征在于所述川芎为6-12份，所述郁金为6-8份，所述牛膝为6-8份，所述薤白为5-10份，所述杜仲为6-12份。

7.如权利要求5所述的中药组合物，其特征在于所述川芎为8-10份，所述郁金为6-8份，所述牛膝为6-8份，所述薤白为6-8份，所述杜仲为8-10份。

8.如权利要求5所述的中药组合物，其特征在于所述川芎为9份，所述郁金为7份，所述牛膝为7份，所述薤白为7份，所述杜仲为9份。

9.如权利要求1所述的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：

1）称取6-12份川芎和5-10份郁金，合并后用乙醇提取并浓缩；

2）称取5-10份牛膝与步骤1）的提取剩余物合并，用水提取并浓缩；

3）合并步骤1）、步骤2）的提取浓缩物，然后干燥。

10.如权利要求9所述的中药组合物的制备方法，其特征在于所述川芎为8-10份，所述郁金为6-8份，所述牛膝为6-8份。

11.如权利要求9-10任一项所述的中药组合物的制备方法，其特征在于：

步骤1）中使用50-70%的乙醇，且提取物浓缩至密度为1.05-1.15g/l；

步骤2）中提取物浓缩至密度为1.05-1.15g/l；

步骤3）中干燥采用喷雾干燥。

12.如权利要求5所述的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：

1）称取6-12份川芎和5-10份郁金，合并后用乙醇提取并浓缩；

2）称取5-10份牛膝、5-10份薤白和6-12份杜仲与步骤1）的提取剩余物合并，用水提取并浓缩；

3）合并步骤1）、步骤2）的提取浓缩物，然后干燥。

13.如权利要求12所述的中药组合物的制备方法，其特征在于：

步骤2）中提取物浓缩至密度为1.05-1.15g/l；

步骤3）中干燥采用喷雾干燥。

14.一种口服药物制剂或保健品，其包含如权利要求1-8任一项所述的中药组合物和常规助剂或辅料。

15.如权利要求1-8任一项所述的中药组合物在制备用于治疗或预防心脑血管疾病的口服药物中的用途，所述心脑血管疾病选自冠心病或脑卒中。

16.如权利要求1-8任一项所述的中药组合物在制备用于治疗或预防心脑血管疾病的口服药物中的用途，所述心脑血管疾病选自心力衰竭、心绞痛、心肌梗死、血栓。

17.如权利要求1-8任一项所述的中药组合物在制备用于治疗或预防心脑血管疾病的口服药物中的用途，所述心脑血管疾病选自收缩性心力衰竭或舒张性心力衰竭。

18.如权利要求1-8任一项所述的中药组合物在制备用于治疗或预防心脑血管疾病的口服药物中的用途，所述心脑血管疾病选自心肌收缩障碍、心肌舒张障碍、血栓形成、心肌缺血、心肌缺氧、或心肌疲劳。