CN108034617B - 一种贝莱斯芽孢杆菌及其分离筛选方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种贝莱斯芽孢杆菌及其分离筛选方法与应用，属于微生物技术与食品加工领域。本发明提供一种贝莱斯芽孢杆菌具有较好的发酵能力，通过筛选得到贝莱斯芽孢杆菌，在进行发酵的时候，具备高产蛋白酶、淀粉酶和豆豉纤溶酶的能力；将贝莱斯芽孢杆菌制备成食品发酵菌剂，可以大规模的应用到食品发酵中；通过使用贝莱斯芽孢杆菌发酵制得的发酵食品，游离氨基酸和豆豉纤溶酶含量高，营养丰富，具有易消化、防血栓等特点。

Description

一种贝莱斯芽孢杆菌及其分离筛选方法与应用
技术领域
本发明涉及微生物技术与食品加工领域，具体而言，涉及一种贝莱斯芽孢杆菌及其分离筛选方法与应用。
背景技术
发酵食品是指利用有益微生物加工制造而成的一类具有独特风味与营养价值的食品，具有悠久的历史。豆豉作为发酵食品之一，其原料为黑豆或黄豆，通过微生物发酵而具有独特的风味。按制曲发酵时参与的主要微生物不同，豆豉分为毛霉型、曲霉型、根霉型和细菌型。在我国，细菌型豆豉是以云贵川一带民间制作的水豆豉为代表。水豆豉是由黄豆经细菌发酵而形成的酿造调味食品，产品呈湿态，含水量高，在堆积发酵过程中发生水解作用而产生一些特殊气味。水豆豉营养丰富，含有丰富的蛋白质，维生素和矿物质，深受当地人民喜爱。
淡豆豉也属于细菌型豆豉，在中医药学上是一味中药，2002年被我国卫生部定为第一批药食两用品种。而水豆豉由于含盐量高，多数被作为调味品使用。为了促进水豆豉行业得到健康快速的发展，应该在调味品的基础上，进一步将水豆豉开发成新的功能性食品。芽孢杆菌能产生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等十几种酶，约50％的工业产酶量均发酵自芽孢杆菌属。其中，最受关注的是芽孢杆菌产生的豆豉纤溶酶。豆豉纤溶酶不仅血栓溶解能力强，同时还可激活体内的组织纤溶酶原激活物，不会引起内出血且无毒副作用，体内半衰期长，可通过消化道直接吸收，是潜在的溶栓药物。因此，水豆豉作为一种功能性预防血栓的保健食品具有很好的开发和使用价值。
目前，我国水豆豉的生产仍然是以自然发酵为主。由于自然发酵依靠的是环境中的微生物，容易受到温度、湿度等因素的影响，使不同批次产品的质量出现较大差异。此外，参与自然发酵的微生物组成不受人为控制，无法保障发酵产物的营养价值。更重要的是，传统发酵有可能引入致病微生物或受真菌毒素污染，存在食用的安全隐患。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种贝莱斯芽孢杆菌，贝莱斯芽孢杆菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14856；该贝莱斯芽孢杆菌具有较好的产酶能力，具有较大的工业应用价值和应用前景。
本发明的第二目的在于提供上述的贝莱斯芽孢杆菌的生物学纯培养物。
本发明的第三目的在于提供一种如上述的贝莱斯芽孢杆菌的分离筛选方法。
本发明的第四目的在于提供上述的贝莱斯芽孢杆菌在制备食品发酵菌剂或发酵食品中的应用。
本发明的第五目的在于提供一种食品发酵菌剂，其包括上述的贝莱斯芽孢杆菌。
本发明的第六目的在于提供一种发酵食品，其包括上述的贝莱斯芽孢杆菌。
为了实现本发明的上述目的，采用以下技术方案：
一种贝莱斯芽孢杆菌，贝莱斯芽孢杆菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14856。
上述的贝莱斯芽孢杆菌的生物学纯培养物。
一种如上述的贝莱斯芽孢杆菌的分离筛选方法，其包括：取水豆豉，加入生理盐水，振荡混匀，并梯度稀释，得到梯度稀释液，利用倾注培养法培养梯度稀释液，采用平板划线法分离纯化菌株；通过酪蛋白平板法、淀粉培养基法和纤维蛋白平板法筛选以及化学法复筛分离菌株，得到的产酶能力强的贝莱斯芽孢杆菌；倾注培养法包括恒温培养阶段和厌氧培养阶段，恒温培养阶段的培养温度34.3℃-38.6℃条件下培养45-55h；厌氧培养阶段的培养温度34.3℃-38.6℃条件下培养65-75h。
上述的贝莱斯芽孢杆菌在制备食品发酵菌剂或发酵食品中的应用。
一种食品发酵菌剂，其包括上述的贝莱斯芽孢杆菌。
一种发酵食品，其包括上述的贝莱斯芽孢杆菌。
本发明的有益效果为：本发明提供一种贝莱斯芽孢杆菌具有较好的发酵能力，通过筛选得到贝莱斯芽孢杆菌，在进行发酵的时候，具备高产蛋白酶、淀粉酶和豆豉纤溶酶的能力，尤其是产豆豉纤溶酶的能力较强；将贝莱斯芽孢杆菌制备成食品发酵菌剂，可以大规模的应用到食品发酵中；通过发酵制得的发酵食品具有较高的游离氨基酸和豆豉纤溶酶含量，具有易于消化、营养丰富且还能一定预防血栓的特点。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明实验例1所提供的系统进化树示意图；
图2为本发明实验例1所提供的菌体显微结果图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。
营养琼脂、MRS培养基、酪蛋白培养基、LB肉汤购自北京路桥技术有限责任公司；革兰氏染液购自成都瑞琦科技实业股份有限公司；Primers由成都擎科梓熙生物技术有限公司合成；I-5TM 2×High-Fidelity Master Mix购自成都擎科梓熙生物技术有限公司；MarkerⅡ、Ⅲ购自TIANGEN；琼脂糖购自TSINGKE；T4648-1KU凝血酶、F3879-250MG纤维蛋白原购自SIGMA；U108373-10mg尿激酶购自aladdin；细菌微量生化鉴定管购自青岛高科技工业园海博生物技术有限公司。
C1000TouchTM Thermal Cycler PCR扩增仪、Power Pac BasicTM电泳仪、MolecularChemiDocTMXRS+Imaging System购自BIO-RAD；HR40-ⅡA2生物安全柜购自青岛海尔特种电器有限公司；GI54DWS自动高压蒸汽灭菌器购自致微(厦门)仪器有限公司；隔水式恒温培养箱购自上海飞跃实验仪器有限公司；厌氧工作站购自ELECTROTEK；SKY200B shaker incubator购自SUKUN；HHS型恒温水浴锅购自上海博迅实业有限公司医疗设备厂；SQP千分之一电子天平和万分之一天平购自赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；拍击式均质器购自INSREUMENTS；DS-Fi1c光学显微镜购自Nikon。
所用试剂或仪器耗材未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的一种贝莱斯芽孢杆菌及其分离筛选方法与应用进行具体说明。
一种贝莱斯芽孢杆菌，贝莱斯芽孢杆菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14856。
该贝莱斯芽孢杆菌的保藏信息：分类命名：贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis；于2017年11月03日在位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCCNo.14856。
上述的贝莱斯芽孢杆菌的生物学纯培养物。
一种如上述的贝莱斯芽孢杆菌的分离筛选方法，其包括：取水豆豉，加入生理盐水，振荡混匀，并梯度稀释，得到梯度稀释液，利用倾注培养法培养梯度稀释液，采用平板划线法分离纯化菌株；通过酪蛋白平板法，淀粉培养基法和纤维蛋白平板法筛选以及化学法复筛分离菌株，得到的产酶能力强的贝莱斯芽孢杆菌；倾注培养法包括恒温培养阶段和厌氧培养阶段，恒温培养阶段的培养温度34.3℃-38.6℃条件下培养45-55h；厌氧培养阶段的培养温度34.3℃-38.6℃条件下培养65-75h。
上述的贝莱斯芽孢杆菌在制备食品发酵菌剂或发酵食品中的应用。
一种食品发酵菌剂，其包括上述的贝莱斯芽孢杆菌。
一种发酵食品，其包括上述的贝莱斯芽孢杆菌。
进一步地，本发明较佳的实施例中，发酵食品由贝莱斯芽孢杆菌发酵制得，包括将贝莱斯芽孢杆菌的菌液接种于发酵原料，混匀后于25℃-45℃的培养箱中培养24h-120h得到发酵食品。
进一步地，本发明较佳的实施例中，发酵原料为黄豆；贝莱斯芽孢杆菌的接种量为黄豆湿重的0.01％-10％，贝莱斯芽孢杆菌的有效活菌数为5×108cfu/mL-3×109cfu/mL。
进一步地，本发明较佳的实施例中，接种贝莱斯芽孢杆菌前，还包括贝莱斯芽孢杆菌的复苏培养。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供将贝莱斯芽孢杆菌的分离筛选方法和食品发酵菌剂、发酵食品的制备。
贝莱斯芽孢杆菌的分离筛选与鉴定，具体操作如下：
1.1取水豆豉25g，加入到225mL的无菌生理盐水中；
1.2摇床震荡30min或拍击式均质器拍打2min，充分溶解混匀；
1.3按照10、102、103、104、105、106和107一共7个梯度，进行稀释；
1.4采用倾注培养法分离培养菌液，包括恒温培养阶段和厌氧培养阶段，其中恒温培养阶段是在34.3℃的恒温培养箱中培养55h；厌氧培养阶段是在34.3℃的厌氧工作站中培养75h；
1.5用接种环挑取单斑，采用平板划线法的方式，接种于平板，进行纯化培养；
1.6重复步骤1.5的操作，连续纯化4代，并通过酪蛋白平板法，淀粉培养基法和纤维蛋白平板法初筛，以及化学法复筛；筛选产酶能力较强的贝莱斯芽孢杆菌，得到贝莱斯芽孢杆菌及其生物学纯培养物。
将步骤1.6分离得到的贝莱斯芽孢杆菌制成食品发酵菌剂，当然也可以用于发酵食品。
水豆豉的发酵，具体方法如下：
包括贝莱斯芽孢杆菌菌液的准备，具体方法包括：用接种环刮取接种贝莱斯芽孢杆菌菌体于LB肉汤内，放入37℃，160rpm摇床进行复苏培养，复苏12h后；按1％比例吸取菌液至新的LB肉汤内，放入37℃，160rpm摇床培养至对数期后；按照黄豆湿重比吸取相应接菌量的菌液，10000g 4℃离心10min，去上清，加入适量生理盐水，混匀后再次10000g 4℃离心10min，去上清。再加入适量生理盐水，重悬后即为黄豆接种的菌液。
2.1称取10kg的黄豆作为发酵原料，加黄豆三倍质量的超纯水浸泡，浸泡12h；
2.2沥干水后，于高压蒸汽灭菌锅内121℃灭菌30min；
2.3自然冷却后，按照黄豆湿重0.01％的接种量接种贝莱斯芽孢杆菌菌液，得到发酵混合物；接种的贝莱斯芽孢杆菌的有效活菌为3×109cfu/mL；
2.4将发酵混合物摇匀后，在25℃的恒温培养箱中培养发酵120h，得到水豆豉食品。
实施例2
本实施例提供将贝莱斯芽孢杆菌的分离筛选方法和食品发酵菌剂、发酵食品的制备。
贝莱斯芽孢杆菌的分离筛选与鉴定，具体操作如下：
1.1取水豆豉10g，加入到90mL的无菌生理盐水中；
1.2摇床震荡30min或拍击式均质器拍打2min，充分溶解混匀；
1.3按照10、102、103、104、105、106和107一共7个梯度，进行稀释；
1.4采用倾注培养法分离培养菌液，包括恒温培养阶段和厌氧培养阶段，其中恒温培养阶段是在38.6℃的恒温培养箱中培养45h；厌氧培养阶段是在38.6℃的厌氧工作站中培养85h；
1.5用接种环挑取单斑，采用平板划线法的方式，接种于平板，进行纯化培养；
1.6重复步骤1.5的操作，连续纯化4代，并通过酪蛋白平板法，淀粉培养基法和纤维蛋白平板法初筛，以及化学法复筛；筛选产酶能力较强的贝莱斯芽孢杆菌，得到贝莱斯芽孢杆菌及其生物学纯培养物。
将步骤1.6分离得到的贝莱斯芽孢杆菌制成食品发酵菌剂，当然也可以用于发酵食品。
将获得的贝莱斯芽孢杆菌菌株就行了微生物保藏；该贝莱斯芽孢杆菌的保藏信息：分类命名：贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis；于2017年11月03日在位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.14856。
水豆豉的发酵，具体方法如下：
包括贝莱斯芽孢杆菌菌液的准备，具体方法包括：用接种环刮取接种贝莱斯芽孢杆菌菌体于LB肉汤内，放入37℃，160rpm摇床进行复苏培养，复苏12h后；按1％比例吸取菌液至新的LB肉汤内，放入37℃，160rpm摇床培养至对数期后；按照黄豆湿重比吸取相应接菌量的菌液，10000g 4℃离心10min，去上清，加入适量生理盐水，混匀后再次10000g 4℃离心10min，去上清。再加入适量生理盐水，重悬后即为黄豆接种的菌液。
2.1称取10kg的黄豆作为发酵原料，加黄豆三倍质量的超纯水浸泡，浸泡12h；
2.2沥干水后，于高压蒸汽灭菌锅内121℃灭菌30min；
2.3自然冷却后，按照黄豆湿重3％的接种量接种贝莱斯芽孢杆菌菌液，得到发酵混合物；接种的贝莱斯芽孢杆菌的有效活菌为1×109cfu/mL；
2.4将发酵混合物摇匀后，在30℃的恒温培养箱中培养发酵70h，得到水豆豉食品。
当然还可以用其他的豆类进行发酵，也可以用其他的粮食作物等进行发酵，本实施例优选黄豆进行发酵。
实施例3
本实施例提供将贝莱斯芽孢杆菌的分离筛选方法和食品发酵菌剂、发酵食品的制备。
贝莱斯芽孢杆菌的分离与鉴定，具体操作如下：
1.1取水豆豉10g，加入到90mL的无菌生理盐水中；
1.2摇床震荡30min或拍击式均质器拍打2min，充分溶解混匀；
1.3按照10、102、103、104、105、106和107一共7个梯度，进行稀释；
1.4采用倾注培养法分离培养菌液，包括恒温培养阶段和厌氧培养阶段，其中恒温培养阶段是在36.0℃的恒温培养箱中培养48h；厌氧培养阶段是在36.0℃的厌氧工作站中培养72h；
1.5用接种环挑取单斑，采用平板划线法的方式，接种于平板，进行纯化培养；
1.6重复步骤1.5的操作，连续纯化4代，并通过酪蛋白平板法，淀粉培养基法和纤维蛋白平板法初筛，采用化学法复筛；筛选产酶能力较强的贝莱斯芽孢杆菌的，得到贝莱斯芽孢杆菌及其生物学纯培养物。
将步骤1.6分离得到的贝莱斯芽孢杆菌制成食品发酵菌剂，当然也可以用于发酵食品。
水豆豉的发酵，具体方法如下：
包括贝莱斯芽孢杆菌菌液的准备，具体方法包括：用接种环刮取接种贝莱斯芽孢杆菌菌体于LB肉汤内，放入37℃，160rpm摇床进行复苏培养，复苏12h后；按1％比例吸取菌液至新的LB肉汤内，放入37℃，160rpm摇床培养至对数期后；按照黄豆湿重比吸取相应接菌量的菌液，10000g 4℃离心10min，去上清，加入适量生理盐水，混匀后再次10000g 4℃离心10min，去上清。再加入适量生理盐水，重悬后即为黄豆接种的菌液。
2.1称取10kg的黄豆作为发酵原料，加黄豆三倍质量的超纯水浸泡，浸泡12h；
2.2沥干水后，于高压蒸汽灭菌锅内121℃灭菌30min；
2.3自然冷却后，按照黄豆湿重10％的接种量接种贝莱斯芽孢杆菌菌液，得到发酵混合物；接种的贝莱斯芽孢杆菌的有效活菌为5×108cfu/mL；
2.4将发酵混合物摇匀后，在45℃的恒温培养箱中培养发酵24h，得到水豆豉食品。
当然还可以用其他的豆类进行发酵，也可以用其他的粮食作物等进行发酵，本实施例优选黄豆进行发酵。
实验例1
本实验例提供了对实施例2分离得到的贝莱斯芽孢杆菌进行生化反应和分子鉴定。
分子鉴定：提取获得的贝莱斯芽孢杆菌的基因组DNA，并通过PCR扩增贝莱斯芽孢杆菌的管家基因gyrB；扩增gyrB基因的上游引物序列为gyrB-F:5′-AGCAGGGTACGGATGTGCGAGCCRTCNACRTCNGCRTCNGTCAT-3′；下游引物序列gyrB-R:5′-GAAGTCATCATGACCGTTCTGCAYGCNGGNGGNAARTTYGA-3′；PCR反应扩增体系：2×Mix12.5μL，10pmol/mL的gyrB-F和gyrB-R各1.0μL，基因组DNA模板2μL，ddH2O8.5μL；PCR反应程序为98℃预变性2min；(98℃10s，55℃10s，72℃15s)35个循环；72℃5min。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳确定后送测序，产物长度为1204bp；碱基序列如SEQ ID NO.1所示。
将测序获得的序列通过Mega6进行系统进化树分析，实验结果如图1所示，显示实验获得菌为贝莱斯芽孢杆菌。
染色和菌落观察：将细菌复苏后接种至营养琼脂，37℃恒温培养24h，观察菌落形态；菌株在营养琼脂上呈菌落颜色呈乳白色不透明，挑开菌落后有粘液状分泌物，表面有褶皱突起，边缘不整齐；结果如图2所示，革兰氏染色后观察发现，细菌革兰氏染色阳性，单个菌体呈杆状。
生化鉴定：复苏贝莱斯芽孢杆菌，用接种针从平板上挑取已纯化分离的同一菌落接种于相应的生化试管(安瓿瓶)、营养琼脂、血平板中。接种完置于37℃进行培养和生化试验鉴定；生化试验鉴定包括：厌氧生长、V-P、硝酸盐还原、淀粉水解、明胶液化、丙酸盐、柠檬酸盐、D-木糖、L-阿拉伯糖、D-甘露醇、7％氯化钠生长、pH5.7生长、溶血反应等试验。实验结果如表1所示。
表1 生化鉴定结果
从表1可以看出，实验结果与贝莱斯芽孢杆菌的预期结果一致，符合要求。
实验例2
本实验例提供对实施例3提供的贝莱斯芽孢杆菌的发酵效果进行分析。
参照实施例3的发酵过程，分别进行15份发酵实验，验证不同的发酵单因素即发酵时间、发酵温度和菌液接种量的发酵效果，其中第15号发酵未接种贝莱斯芽孢杆菌。
分析指标包括采用纤维蛋白平板法分析豆豉纤溶酶，化学法检测氨基酸态氮、总酸。
豆豉纤溶酶检测包括：取10mL温度降至55℃的1.8％琼脂糖，加入4mL的5mg/mL纤维蛋白原溶液。平板中加入200μL 100U/mL的凝血酶溶液，再加入2mLPBS，混匀后，立即将琼脂糖溶液倒入平板中，尽量避免产生气泡。待其冷却凝固后，即制成纤维蛋白平板。打孔，直径2mm，备用。取10g水豆豉样品，加入90mL生理盐水混匀，4℃浸提24h后以4000rpm，4℃离心10min取上清，将上清过0.22μm滤膜除菌，并取10μL加入纤维蛋白平板孔中，37℃培养18h后测定水解圈的大小，计算其面积。以尿激酶作标准曲线。
氨基酸态氮、总酸检测方法：参照国标《GB 5009.235-2016食品安全国家标准食品中氨基酸态氮的测定》。
不同单因素发酵条件的发酵结果如表2所示。
表2 单因素发酵结果
从表2可以看出，与15号未接菌的结果相比，每种条件发酵下的水豆豉产物的氨基酸态氮含量和豆豉纤溶酶浓度均有不同程度的提高。
按照四川省地方标准《DB 51/T391-2006豆豉技术要求》：豆豉中氨基酸态氮应≥0.2％，总酸含量应≤25g/kg。在本实验中，发酵温度25-45℃，接菌量0.01％-10％，发酵时间2-4天的水豆豉产物。氨基酸态氮含量在0.27％-0.81％。总酸含量在3.15-9.00g/kg。均符合四川省豆豉技术要求。
本研究符合四川省地方标准限量的发酵条件中，发酵温度25-40℃，接菌量0.01％-10％，发酵时间2-4天收获的水豆豉产物的豆豉纤溶酶浓度在43.97-404.40IU/g之间。本研究同时采集11份市售水豆豉进行分析，其中10份未检出豆豉纤溶酶，1份样本检出豆豉纤溶酶，浓度为1.32IU/g，远低于本发明实施例提供的贝莱斯芽孢杆菌发酵产生的豆豉纤溶酶的浓度。
基于以上分析，可以看出本发明分离法得到的贝莱斯芽孢杆菌活性强，发酵产物中豆豉纤溶酶的活性较高，具有较好的实际效果。
通过本发明筛选获得的贝莱斯芽孢杆菌不仅具有高产豆豉纤溶酶的能力，同时还具有较为稳定的产酶能力，经过传代后仍能稳定地产酶，能为发酵和生产提供一种优质的菌种。
综上所述，本发明提供一种贝莱斯芽孢杆菌能有效的增加发酵食品中的相关酶的含量和活性，发酵得到的发酵食品中含有丰富的易于消化的营养物质和豆豉纤溶酶等，有一定的预防血栓的效果，具有较好的经济应用价值和社会推广应用价值。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 四川大学
<120> 一种贝莱斯芽孢杆菌及其分离筛选方法与应用
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1204
<212> DNA
<213> Bacillus velezensis
<400> 1
aagtatcggc ggtcttcacg gtgtaggggc gtccgtcgta acgccttgtc gaccactctt 60
gacgttacgg ttcatcgtga cggaaaaatc cactatcagg cgtacgagcg cggtgtacct 120
gtggccgatc ttgaagtgat cggtgatact gataagaccg gaacgattac gcacttcgtt 180
ccggatccgg aaattttcaa agaaacaact gtatatgact atgatctgct ttcaaaccgt 240
gtccgggaat tggccttcct gacaaaaggc gtaaacatca cgattgaaga caaacgtgaa 300
ggacaagaac ggaaaaacga gtaccactac gaaggcggaa tcaaaagcta tgttgagtac 360
ttaaaccgtt ccaaagaagt cgttcatgaa gagccgattt atatcgaagg cgagaaagac 420
ggcataacgg ttgaagttgc attgcaatac aacgacagct atacaagcaa tatttattct 480
ttcacaaata atatcaacac atacgaaggc ggcacgcacg aggccggatt taaaaccggt 540
ctgacccgtg tcataaacga ctatgcaaga agaaaaggga ttttcaaaga aaatgatccg 600
aatttaagcg gggatgatgt gagagaaggg ctgactgcca ttatttcaat taagcaccct 660
gatccgcaat tcgaagggca gacgaaaacg aagctcggca actccgaagc gagaacgatc 720
actgatacgc tgttttcttc tgcgctggaa acattccttc ttgaaaatcc ggactcagcc 780
cgcaaaatcg ttgaaaaagg tttaatggcc gcaagagcgc ggatggcggc gaaaaaagca 840
agggaattga cccggcgcaa aagtgcgctt gagatttcca atctgccggg caaactggcg 900
gactgttctt ctaaagatcc gagcatttcc gagctgtata tcgtagaggg tgactctgcg 960
ggcggatcag cgaaacaggg acgggaccgt catttccaag ccattctgcc gctgcgcggt 1020
aagattctga acgttgagaa agccagactt gataagattc tctcaaacaa tgaggtcaga 1080
tcaatgatca cggccctcgg aacagggatc ggagaagatt ttaatcttga aaaagcgcgt 1140
tatcataaag tggtcatcat gactgacgcc gacgtcgacg gctcgcacat ccgtaaccct 1200
gcta 1204

Claims (9)

1.一种贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14856。
2.如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌的生物学纯培养物。
3.一种如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌的分离筛选方法，其特征在于，其包括：取水豆豉，加入生理盐水，振荡混匀，并梯度稀释，得到梯度稀释液，利用倾注培养法分离培养所述梯度稀释液，采用平板划线法分离纯化菌种，通过酪蛋白平板法，淀粉培养基法和纤维蛋白平板法筛选以及化学法复筛分离菌株，得到的产酶能力强的所述贝莱斯芽孢杆菌；所述倾注培养法包括恒温培养阶段和厌氧培养阶段，所述恒温培养阶段的培养温度34.3℃-38.6℃条件下培养45-55h；所述厌氧培养阶段的培养温度34.3℃-38.6℃条件下培养65-75h。
4.如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌在制备食品发酵菌剂或发酵食品中的应用。
5.一种食品发酵菌剂，其特征在于，其包括如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌。
6.一种发酵食品，其特征在于，其包括如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌。
7.根据权利要求6所述的发酵食品，其特征在于，所述发酵食品由所述贝莱斯芽孢杆菌发酵制得，包括将所述贝莱斯芽孢杆菌的菌液接种于发酵原料，混匀后于25℃-45℃的培养箱中培养24h-120h得到所述发酵食品。
8.根据权利要求7所述的发酵食品，其特征在于，所述发酵原料为黄豆；所述贝莱斯芽孢杆菌的接种量为所述黄豆湿重的0.01％-10％，所述贝莱斯芽孢杆菌的有效活菌数为5×108cfu/mL-3×109cfu/mL。
9.根据权利要求8所述的发酵食品，其特征在于，接种所述贝莱斯芽孢杆菌前，还包括所述贝莱斯芽孢杆菌的复苏培养。
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