CN107988180A

CN107988180A - 酰基acp合成酶及其多克隆抗体

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Publication number: CN107988180A
Application number: CN201711376287.8A
Authority: CN
Inventors: 宫春杰; 胡征; 薛栋升; 王崇鞠; 孔萌萌
Original assignee: Hubei University of Technology
Current assignee: Hubei University of Technology
Priority date: 2017-12-19
Filing date: 2017-12-19
Publication date: 2018-05-04

Abstract

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种酰基ACP合成酶及其多克隆抗体。酰基ACP合成酶的多克隆抗体的制备方法，包括步骤：1)以氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的酰基ACP合成酶为抗原，免疫小鼠制备抗血清；2)纯化抗血清得到酰基ACP合成酶的多克隆抗体。本发明利用PCR技术在喜冷杆菌属Cryobacterium中扩增得到酰基ACP合成酶基因，并通过基因工程技术得到Ecoli BL21‑pET21a‑OAS重组菌株，诱导表达重组菌株得到酰基ACP合成酶蛋白，该蛋白具有较好的低温耐受，而且以酰基ACP合成酶为抗原成功得到酰基ACP合成酶的多克隆抗体，该多克隆抗体能够准确检测酰基ACP合成酶。

Description

酰基ACP合成酶及其多克隆抗体

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种酰基ACP合成酶及其多克隆抗体。

背景技术

不饱和脂肪酸具有抗氧化、抗衰老、预防心脑血管疾病的作用。也可大大降低患肿瘤的风险。对人类的这些益处让科学家对多不饱和脂肪酸的极大关注，也表明其有很强的应用价值，仅存于植物和海洋生物中，是人体生活所必须的，人与动物不能合成。因此利用微生物合成不饱和脂肪酸是一个替代途径。目前，国内在不饱和脂肪酸的生产方面的研究主要停留在海洋生物体内提取水平。但是，随着海洋开发强度的加大，海洋资源日益匮乏，不饱和脂肪酸不能满足人们生产生活的需要。利用微生物生产不饱和脂肪酸已成为现今研究的一个热点。

酰基ACP合成酶全称：酰基-酰基载体蛋白合成酶，英文名称为3-oxoacyl-(acylcarrier protein)synthases，酰基ACP合成酶是细菌参与不饱和脂肪酸合成必须的酶，酰基ACP合成酶能催化直链脂肪酸合成酰基ACP，酰基ACP是一类小分子蛋白，在细菌不饱和脂肪酸合成过程中发挥重要作用，为了研究细菌不饱和脂肪酸合成的机制，纯化得到酰基ACP合成酶是关键。

发明内容

为解决以上问题，本发明提供一种酰基ACP合成酶及其制备方法。

本发明的目的之一是提供一种酰基ACP合成酶的氨基酸序列；所述酰基ACP合成酶序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的目的之二是提供一种编码酰基ACP合成酶的氨基酸基因的碱基序列；所述酰基ACP合成酶的氨基酸基因的碱基序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明的目的之三是提供一种酰基ACP合成酶的多克隆抗体的制备方法。

酰基ACP合成酶的多克隆抗体的方法，包括以下步骤：

1)以氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的酰基ACP合成酶为抗原，免疫小鼠制备抗血清；

2)纯化抗血清得到酰基ACP合成酶的多克隆抗体。

进一步地，所述酰基ACP合成酶的制备方法为：

1.1)利用PCR技术扩增SEQ ID NO.2所示的碱基序列；

1.2)将SEQ ID NO.2所示的碱基序列克隆入载体质粒中，构建酰基ACP合成酶的表达载体；

1.3)将表达载体转化入大肠杆菌感受态菌体中得到重组菌体，依次经扩大培养、诱导表达、收集菌体、破碎菌体和纯化蛋白过程得到酰基ACP合成酶蛋白。

进一步地，所述纯化抗血清的方法为：将酰基ACP合成酶蛋白与Ni-NTA偶联制备成抗体纯化层析柱，再将待纯化的抗血清与PBS按照1:1比例混合后经过抗体纯化层析柱，待抗血清中的抗体与酰基ACP合成酶蛋白结合完全后用甘氨酸洗脱缓冲液洗脱，获得纯化的酰基ACP合成酶的多克隆抗体。

更进一步地，所述步骤1.1)中，PCR技术扩增所用的引物为：正向引物如SEQ IDNO.3所示，反向引物如SEQ ID NO.4所示。

更进一步地，所述步骤1.2)中载体质粒为pET21a(+)。

更进一步地，所述步骤1.3)中，大肠杆菌感受态菌体为大肠杆菌BL21感受态菌体。

更进一步地，所述步骤1.3)中，所述纯化蛋白过程中利用Ni-NTA亲和层析色谱柱进行蛋白纯化。

本发明的有益效果在于：本发明通过PCR技术在喜冷杆菌属中扩增得到酰基ACP合成酶基因，并且通过NCBI Blast碱基序列比对证明该酰基ACP合成酶基因碱基序列属于喜冷杆菌属的新的酰基ACP合成酶基因序列。通过基因工程技术得到表达酰基ACP合成酶蛋白的E.coli BL21-pET21a-OAS重组菌株，诱导表达重组菌株得到酰基ACP合成酶蛋白。利用Ecoli BL21-pET21a-OAS重组菌株诱导表达酰基ACP合成酶蛋白的方法简单，易操作，而且发现了新的酰基ACP合成酶基因序列，对于酰基ACP合成酶的研究提供了新的研究方向。

附图说明

图1为PCR扩增酰基ACP合成酶基因的琼脂糖凝胶电泳鉴定图；其中ladder泳道为DNA marker，PCR product泳道为PCR扩增双功能亚甲基四氢叶酸脱氢酶/环化酶基因的产物；

图2为表达载体pET21a-OAS的构建示意图；

图3为重组菌株Ecoli BL21-pET21a-OAS表达酰基ACP合成酶蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定图；其中Marker泳道为protein marker；1泳道为酰基ACP合成酶蛋白；

图4为酰基ACP合成酶多克隆抗体的Western Blotting分析图，其中Magic泳道为蛋白质分子量标准，C.B 02泳道为细菌Cryobacterium baishanse 02超声破碎离心后的上清液样品。

具体实施方式

实施例1

酰基ACP合成酶基因的获取

1)获取含有目的基因的菌株

本发明利用喜冷杆菌属菌株，喜冷杆菌属菌株筛选自长白山土壤，具体的筛选过程如专利号为201710034491.5的中国发明专利，该菌株的命名为：Cryobacteriumbaishanse 02，保存于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M2016604。保藏日期为2016年10月31日，保藏地址为，中国武汉，武汉大学。喜冷杆菌属菌株Cryobacteriumbaishanse 02为耐冷菌株，在4℃的环境中仍保持较高的代谢活性。

2)基因组的提取

利用DNA提取试剂盒(TAKARA Dalian)提取Cryobacterium baishanse 02菌株的基因组作为模板，提取的基因组样品于-20℃保存待用。

3)PCR扩增目的基因

设计引物：正向引物如SEQ ID NO.3所示，反向引物如SEQ ID NO.4所示；PCR反应体系如下表1所示：

表1

成分	体积
		10×PCR缓冲液	5μl
引物F	1μl
		引物R	1μl
模板	80ng
		MgSO₄	2μl
dNTP	5μl
		去离子水	35μl
总计	50μl

PCR反应条件为：95℃预变性5min；95℃30s，55℃30s，68℃延伸2min，共计30个循环；68℃延伸10min；15℃保持10min。

将PCR扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳，如图1所示，PCR扩增产物的大小与预计的1236bp接近，将PCR扩增产物切胶回收，送生物公司测序以准确判断PCR扩增产物的碱基序列，测序委托铂尚生物技术有限公司完成。

测序结果如SEQ ID NO.2所示，将SEQ ID NO.2所示的碱基序列在NCBI Blast网站(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)上进行碱基序列比对，比对结果与Cryobacterium arcticum strain PAMC 27867的酰基ACP合成酶相似性为95％，与Cryobacterium sp LW097的酰基ACP合成酶相似性为87％,即可判断SEQ ID NO.2所示的碱基序列属于Cryobacterium属的新的酰基ACP合成酶序列。

实施例2

构建酰基ACP合成酶的表达载体

将实施例1中得到的PCR扩增产物进行胶回收，用限制性内切酶EcoRI和NdeI对PCR扩增产物进行双酶切反应；同时用限制性内切酶EcoRI和NdeI对载体pET21a(+)进行双酶切反应，然后经高效DNA连接酶High Ligation(TOYOBO)催化连接经双酶切反应后的pET21a(+)和PCR扩增产物；构建得到酰基ACP合成酶的表达载体pET21a-OAS，表达载体pET21a-OAS的构建如图2所示。

实施例3

表达和纯化酰基ACP合成酶蛋白

将实施例2得到的表达载体pET21a-OAS转化入大肠杆菌BL21的感受态菌体中，大肠杆菌BL21的感受态的制备采用CaCl₂法，CaCl₂法制备大肠杆菌BL21的感受态为实验室常规实验手段，在此不再赘述。将得到的表达载体pET21a-OAS转化入大肠杆菌BL21后得到重组菌株Ecoli BL21-pET21a-OAS。将Ecoli BL21-pET21a-OAS扩大培养至OD₆₀₀＝0.6后添加1mM IPTG，28℃诱导培养表达酰基ACP合成酶蛋白，诱导培养结束后收集菌体，依次经菌体破碎和Ni-NTA亲和层析色谱柱纯化后得到纯化后的酰基ACP合成酶蛋白，如图3所示，得到酰基ACP合成酶蛋白的蛋白分子量在29.0～44.3KD之间，与理论预计值42.6KD一致，表明纯化得到的蛋白即为酰基ACP合成酶蛋白。

实施例4

酰基ACP合成酶的功能初步鉴定

测定原理：酰基ACP合成酶在ATP存在的情况下，催化脂肪酸与ACP(酰基载体蛋白)共价连接合成酰基ACP，DTNB能灵敏检测巯基基团，ACP中含有巯基乙胺基团，可被DTNB检测，因此，采用DTNB作为显色剂可定量检测ACP的消耗量，进而反应酰基ACP合成酶的酶活性。

反应体系为：10mmol/L直链脂肪酸2ul；1mol/L Tris-Hcl(pH 7.0)5ul；100mmol/LMgSO₄5ul；100mmol/LATP5ul；5ug/ul ACP 2ul，0.1ug/ul酰基ACP合成酶蛋白2ul；用纯水补充至50ul。

测定方法：采用分光光度计法，反应60min后，加入DTNB，OD₄₁₂测定吸光值，得到ACP的剩余含量，进而得到ACP的消耗量。

酶活定义：酰基ACP合成酶在一定温度和pH条件下，每分钟催化1molACP生成酰基ACP定义为一个活力单位。

研究温度对酰基ACP合成酶影响试验：

将反应体系在4℃、10℃、20℃、30℃、40℃、45℃、50℃、60℃、70℃、80℃下分别测定酶活，结果见表2：

表2

温度℃	相对酶活％
		4	16％
10	31％
		20	48％
30	69％
		40	79％
45	85％
		50	71％
60	35％
		70	9％
80	0％

由表2可以看出，本发明得到的酰基ACP合成酶最适温度为45℃，而且酰基ACP合成酶在4℃具有16％的相对酶活，与现有的酰基ACP合成酶相比，本发明得到的酰基ACP合成酶具有较好的低温耐受，这可能因为编码酰基ACP合成酶的碱基序列来自于Cryobacteriumbaishanse 02，Cryobacterium baishanse 02为低温菌，使得到的酰基ACP合成酶具有低温耐受特性，利用本发明的酰基ACP合成酶能够在低温条件下能催化脂肪酸与ACP共价连接合成酰基ACP，酰基ACP参与不饱和脂肪酸的合成，对不饱和脂肪酸的开发提供新的途径。

实施例5

酰基ACP合成酶的多克隆抗体的制备：

取实施例3纯化后的酰基ACP合成酶蛋白作为抗原，采用皮下注射免疫约5周龄的小鼠，50μg每次，2周免疫一次，共免疫4次；采血检测，通过ELISA方法确定抗体针对抗原的效价，效价大于1:50000进行最终采血制备抗血清，然后纯化抗血清制备多克隆抗体。

一)ELISA方法确定抗体针对抗原的效价的方法为：

1)将抗原用碳酸钠缓冲液(pH 9.6)稀释到10μg/ml，将抗原置于酶标96孔板，每孔100μl孵育1h。

2)用PBS-T将酶标96孔板清洗3次。

3)用5％skim milk封闭酶标板1小时，每孔100μl。

4)用PBS-T将酶标板清洗3次。

5)用PBS-T稀释血清5000倍，孵育抗原1h。

6)用PBS-T将酶标板清洗3次。

7)每孔加入100μl HRP标记的羊抗鼠抗体，用PBS-T稀释羊抗鼠抗体5000倍，孵育1h。

8)利用PBS-T将酶标板清洗3次。

9)清洗完毕后每孔加入100μl显色液ABST，反应20min后每孔加入50μl过氧化氢；

10)最后分光光度计上测420nm上述步骤9)中样品的OD值，并得出效价为1：16，大于1:50000然后进行最终采血得到抗血清。

二)纯化抗血清：

纯化抗血清的方法是：将抗原蛋白(酰基ACP合成酶蛋白)与Ni-NTA偶联制备成抗体纯化层析柱，将上述采血所得的抗血清与PBS按照1:1比例混合后，缓慢经过抗体纯化层析柱，待抗血清中的抗体与抗原蛋白结合后用甘氨酸洗脱缓冲液洗脱，获得纯化的多克隆抗体，纯化后的多克隆抗体利用PBS过夜透析，次日进行浓度测定。

上述纯化的多克隆抗体浓度的测定方法，包括以下步骤：

1)CBB染色液配制：根据样品数量，将5×CBB染色液稀释，充分混匀。

2)根据需要取适量BSA标准蛋白，配制终浓度分别为1mg/ml、0.75mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml和0.125mg/ml标准样，并混匀。标准样采用PBS为溶剂。

3)标准曲线绘制：取一块酶标板，按下表格加入试剂：

孔号	A	B	C	D	E	F
							标准样浓度(mg/ml)	0	0.125	0.25	0.5	0.75	1
各浓度标准样(μl)	1	1	1	1	1	1
							去离子水	9	9	9	9	9	9
CBB染色液	200	200	200	200	200	200
							对应蛋白含量(μg)	0	0.125	0.25	0.5	0.75	1
最终体积(μl)	210	210	210	210	210	210

4)振荡混匀后，室温下静置30min。

5)用酶标仪测定562nm处的吸光值，以不含BSA的光吸收为空白对照。以蛋白含量(μg)为横坐标，吸收值为纵坐标，绘出标准曲线。

6)样品测定：将待测蛋白样品用去离子水稀释不同浓度梯度，各取1μl并稀释至10μl，再加入200μl 1×CBB，混匀后室温下静置30min，然后以不含蛋白的溶剂为空白对照，测定样品吸收值。

7)根据测得的吸收值，在标准曲线上计算样品的蛋白含量。

8)计算蛋白浓度：以查得的蛋白含量，并根据稀释倍数计算样品的实际浓度。

三)利用Western Blotting检测酰基ACP合成酶的方法为：

1)细菌Cryobacterium baishanse 02(保存于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M2016604)培养至OD至约为2.0，取1.5ml离心收集菌体，300μl Tris-HCl重悬，超声破碎取20μl破碎夜与5μl 5×SDS上样缓冲液混合，其中10μl进行SDS-PAGE电泳。蛋白质分子量标准上样量为0.8μl。

2)上样后，电泳仪恒定为18mA，直到电泳结束。

3)电泳后，将凝胶上蛋白样品转移至PVDF膜，恒定电流为0.23A进行转膜，时间为35分钟。

4)电泳结束后将PVDF膜干燥后于5％skim milk中封闭1小时。

5)PBST清洗PVDF膜5次。

6)用PBST稀释上述纯化的抗体(1:5000)，孵育PVDF膜1小时。

7)PBST清洗PVDF膜5次。

8)用PBST稀释二抗(1:20000，羊抗鼠-HRP)，孵育PVDF膜1小时。

9)PBST清洗5次，ECL显影，暗室成像。

结果如图4所示，结果表明制备得到的酰基ACP合成酶的多克隆抗体可以检测到酰基ACP合成酶蛋白。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

序列表

<110> 湖北工业大学

<120> 酰基ACP合成酶及其多克隆抗体

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 411

<212> PRT

<213> Cryobacterium

<400> 1

Met Thr Lys Lys Ile Val Val Thr Gly Leu Gly Ala Thr Ser Pro Leu

1 5 10 15

Gly Gly Thr Ala Thr Asp Ser Trp Asn Ala Leu Leu Ala Gly Glu Ser

20 25 30

Gly Ala Ser Thr Leu Asp Tyr Glu Trp Val Glu Arg Thr Ala Leu Pro

35 40 45

Ile Thr Phe Ala Ala Gln Ala Arg Val Lys Pro Ile Asp Val Leu Ala

50 55 60

Arg His Glu Thr Lys Arg Leu Asp Pro Ser Ser Gln Phe Ala Leu Ile

65 70 75 80

Ala Gly Arg Glu Ala Trp Ala Asp Ala Gly Met Pro Ala Val Glu Pro

85 90 95

Glu Arg Leu Ala Val Asp Trp Ala Thr Gly Ile Gly Gly Val Trp Thr

100 105 110

Leu Leu Asp Ala Trp Asp Thr Leu Arg Glu Arg Gly Pro Arg Arg Val

115 120 125

Leu Pro Met Thr Val Pro Met Leu Met Pro Asn Gly Pro Gly Ala Ala

130 135 140

Ile Gly Met Asp Leu His Ala Arg Ala Gly Ile Thr Thr Val Val Ser

145 150 155 160

Ala Cys Ala Ser Ser Thr Glu Ser Leu Val Asn Ala Tyr Asn Arg Leu

165 170 175

Gln Ala Gly Leu Ala Asp Val Val Ile Ala Gly Gly Ser Glu Ala Ala

180 185 190

Ile His Pro Leu Pro Ile Ala Ser Phe Ala Ala Met Gln Ala Leu Ser

195 200 205

Lys Arg Asn Asp Asp Pro Ala Thr Ala Ser Arg Pro Tyr Asp Val Thr

210 215 220

Arg Asp Gly Phe Val Leu Gly Glu Gly Ala Ala Ala Leu Val Val Glu

225 230 235 240

Thr Glu Glu His Ala Leu Ala Arg Gly Ala His Ile Tyr Ala Glu Leu

245 250 255

Leu Gly Gly Ser Ile Thr Ser Asp Ala Tyr His Ile Thr Ala Pro Asp

260 265 270

Pro Glu Gly Ser Ala Ala Ala Arg Ala Met Ile Gln Thr Ile Gln Asn

275 280 285

Ala Gly Ala Asp Leu Ala Asp Val Met His Ile Asn Ala His Ala Thr

290 295 300

Ser Thr Pro Val Gly Asp Ile Ala Glu Tyr Asn Ala Leu Arg Arg Val

305 310 315 320

Phe Gly Asp Leu Leu Glu Gly Ile Pro Val Ser Ala Thr Lys Ala Ser

325 330 335

Thr Gly His Leu Leu Gly Gly Ala Gly Ala Ile Glu Ala Leu Phe Thr

340 345 350

Val Lys Ala Leu Ala Glu Arg Ile Leu Pro Pro Thr Ile Asn Leu Thr

355 360 365

Glu Gln Asp Ala Ala Ile Pro Leu Asp Val Val Thr Ser Pro Arg Ala

370 375 380

Leu Gly Ala Gly Asp Leu Leu Ala Ile Ser Asn Ser Phe Gly Phe Gly

385 390 395 400

Gly His Asn Ala Val Val Ala Phe Arg Ser Val

405 410

<210> 2

<211> 1236

<212> DNA

<213> Cryobacterium

<400> 2

atgaccaaga aaatcgttgt caccggtctc ggtgccacct cccccctcgg cgggaccgcc 60

acagatacct ggaacgccct cctcgccggc gagtccggcg catccaccct cgactatgag 120

tgggtcgagc gcaccgcgct ccccatcacc ttcgccgccc aggcgcgcgt caagcccatc 180

gacgtcctcg cacgccacga gaccaagcgc ctcgacccgt ccagccagtt cgccctcatc 240

gccggccgtg aggcctgggc cgatgcgggc atgcccgccg ttgagcccga gcggctcgcc 300

gtggactggg ccaccggaat cggtggggtc tggactctgc tggacgcctg ggacaccctg 360

cgcgaacgcg gcccgcgccg ggtcctgccg atgacggttc ccatgctcat gcccaacgga 420

cctggagcgg cgatcggcat ggacctgcac gcacgggccg gcatcaccac cgtggtatcc 480

gcctgcgcct cgagcaccga gtccctcgtg aacgcgtaca accgcctcca ggccggcctc 540

gccgacgtcg tcatcgccgg gggttcggag gcggccatcc acccgctgcc catcgcctcc 600

tttgcggcca tgcaggctct gtccaagcgc aacgacgacc ccgcgacggc ctcccgcccc 660

tacgacgtca gccgggacgg cttcgtgctc ggtgagggcg ccgcggcgct cgtcgtggag 720

acggaggagc acgccttggc ccgcggcgca cacatctacg ccgaactgct gggcggctcg 780

atcacgagtg acgcatacca catcaccgcg ccggaccccg agggctccgc tgcggcacgc 840

gccatgatcc agaccatccg gaatgccggc gccgacctgg ccgacgtcat gcacatcaat 900

gcgcacgcca ccagcacgcc cgtgggcgat atcgccgagt acaacgcgct gcgccgcgtt 960

ttcggcgacc tgctcgaagg catccccgtg tcggccacca aggcctcgac cgggcacctg 1020

ctcggcggcg ccggagcgat cgaggcactg ttcacggtca aggccctgtc cgaacggatg 1080

cttccgccga ccatcaacct gaccgagcag gatgccgcca tcccgctgga tgtcgtcact 1140

tcgccccggt ccctgggcgc cggggacctg ctcgcgatca gcaactcgtt cgggttcggc 1200

ggccacaacg ccgtcgtcgc cttccggtcg gtctaa 1236

<210> 3

<211> 33

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 3

ggaattccat atgaccaaga aaatcgttgt cac 33

<210> 4

<211> 26

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 4

ggaattcgac cgaccggaag gcgacg 26

Claims

1.一种酰基ACP合成酶，其特征在于：所述酰基ACP合成酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种编码权利要求1所述的酰基ACP合成酶的基因，其特征在于：所述酰基ACP合成酶基因的碱基序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一种酰基ACP合成酶的多克隆抗体，其特征在于：所述多克隆抗体的抗原为SEQ IDNO.1所示氨基酸序列组成的多肽。

4.一种制备权利要求3所述的酰基ACP合成酶的多克隆抗体的方法，其特征在于：包括以下步骤：

2)纯化抗血清得到酰基ACP合成酶的多克隆抗体。

5.根据权利要求4所述的酰基ACP合成酶的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述酰基ACP合成酶的制备方法为：

1.1)利用PCR技术扩增SEQ ID NO.2所示的碱基序列；

6.根据权利要求4所述的酰基ACP合成酶的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述纯化抗血清的方法为：将酰基ACP合成酶蛋白与Ni-NTA偶联制备成抗体纯化层析柱，再将待纯化的抗血清与PBS按照1:1比例混合后经过抗体纯化层析柱，待抗血清中的抗体与酰基ACP合成酶蛋白结合完全后用甘氨酸洗脱缓冲液洗脱，获得纯化的酰基ACP合成酶的多克隆抗体。

7.根据权利要求5所述的酰基ACP合成酶的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤1.1)中，PCR技术扩增所用的引物为：正向引物如SEQ ID NO.3所示，反向引物如SEQ IDNO.4所示。

8.根据权利要求5所述的酰基ACP合成酶的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤1.2)中载体质粒为pET21a(+)。

9.根据权利要求5所述的酰基ACP合成酶的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤1.3)中，大肠杆菌感受态菌体为大肠杆菌BL21感受态菌体。

10.根据权利要求5所述的酰基ACP合成酶的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤1.3)中，所述纯化蛋白过程中利用Ni-NTA亲和层析色谱柱进行蛋白纯化。