CN107828753A

CN107828753A - 组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体及其制备方法

Info

Publication number: CN107828753A
Application number: CN201711244150.7A
Authority: CN
Inventors: 宫春杰; 童心语; 胡征; 杨波; 王毅
Original assignee: Hubei University of Technology
Current assignee: Hubei University of Technology
Priority date: 2017-11-30
Filing date: 2017-11-30
Publication date: 2018-03-23

Abstract

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体及其制备方法。组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体的制备方法，包括步骤：1)以氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的组氨醇磷酸氨基转移酶为抗原，免疫小鼠制备抗血清；2)纯化抗血清得到组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体。本发明利用PCR技术在喜冷杆菌属Cryobacterium中扩增得到组氨醇磷酸氨基转移酶基因，并通过基因工程技术得到Ecoli BL21‑pET21a‑HPAT重组菌株，诱导表达重组菌株得到组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白，该蛋白具有较好的低温耐受，而且以组氨醇磷酸氨基转移酶为抗原成功得到组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体。

Description

组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体及其制备方法

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体及其制备方法。

背景技术

组氨醇磷酸氨基转移酶，英文名：Histidinol-phosphate aminotransferase。转氨酶是催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的一类酶，其普遍存在于动物、植物组织和微生物中，心肌、脑、肝、肾等动物组织以及绿豆芽中含量较高。组氨醇磷酸氨基转移酶是组氨酸合成过程中的一个关键酶，在磷酸吡哆醛的辅助下可以催化组氨醇磷酸和2-酮戊二酸生产谷氨酸。

利用组氨醇磷酸氨基转移酶生产谷氨酸具有较好的应用前景，和微生物发酵法生产谷氨酸相比，酶法生产谷氨酸具有成本低、反应步骤简单、副反应少、易分离等优点。

近年来，研究者一直致力于组氨醇磷酸氨基转移酶机制的研究，如文献“Characterization of histidinol phosphate aminotransferase from Escherichiacoli，Biochimica et Biophysica Acta 1647(2003)321–324”中从组氨醇磷酸氨基转移酶的光谱性质阐述组氨醇磷酸氨基转移酶亚群I转氨酶的机制，但是仅从组氨醇磷酸氨基转移酶的光谱性质解释其亚群I转氨酶的机制是不全面的，为了全面深入分析组氨醇磷酸氨基转移酶，制备其多克隆抗体是一个必须的前提基础，而且目前尚未有与组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体的相关报道。

发明内容

为解决以上问题，本发明提供一种组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体及其制备方法，以组氨醇磷酸氨基转移酶为抗原得到组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体，而且得到的组氨醇磷酸氨基转移酶具有较好的低温耐受。

本发明的目的之一是提供一种组氨醇磷酸氨基转移酶的氨基酸序列；所述组氨醇磷酸氨基转移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的目的之二是提供一种编码组氨醇磷酸氨基转移酶基因的碱基序列；所述组氨醇磷酸氨基转移酶基因的碱基序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明的目的之三是提供一种组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体的制备方法。

组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：

1)以氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的组氨醇磷酸氨基转移酶为抗原，免疫小鼠制备抗血清；

2)纯化抗血清得到组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体。

进一步地，所述步骤1)中组氨醇磷酸氨基转移酶的制备方法为：

1.1)利用PCR技术扩增SEQ ID NO.2所示的碱基序列；

1.2)将SEQ ID NO.2所示的碱基序列克隆入载体质粒中，构建组氨醇磷酸氨基转移酶的表达载体；

1.3)将表达载体转化入大肠杆菌感受态菌体中得到重组菌体，依次经扩大培养、诱导表达、收集菌体、破碎菌体和纯化蛋白过程得到组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白。

更进一步地，所述步骤1.1)中，PCR技术扩增所用的引物为：正向引物如SEQ IDNO.3所示，反向引物如SEQ ID NO.4所示。

更进一步地，所述步骤1.2)中载体质粒为pET21a(+)。

更进一步地，所述步骤1.3)中，大肠杆菌感受态菌体为大肠杆菌BL21感受态菌体。

更进一步地，所述步骤1.3)中，所述纯化蛋白过程中利用Ni-NTA亲和层析色谱柱进行蛋白纯化。

进一步地，所述步骤2)中纯化抗血清的方法为：将组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白与Ni-NTA偶联制备成抗体纯化层析柱，再将待纯化的抗血清与PBS按照1:1比例混合后经过抗体纯化层析柱，待抗血清中的抗体与组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白结合完全后用甘氨酸洗脱缓冲液洗脱，获得纯化的组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体。

本发明的有益效果在于：

1，本发明通过PCR技术在喜冷杆菌属Cryobacterium中扩增得到组氨醇磷酸氨基转移酶基因，并且通过NCBI Blast碱基序列比对证明该组氨醇磷酸氨基转移酶基因碱基序列属于喜冷杆菌属的新的组氨醇磷酸氨基转移酶基因序列。通过基因工程技术得到表达组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白的Ecoli BL21-pET21a-HPAT重组菌株，诱导表达重组菌株得到组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白，组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白为低温酶，即在低温条件下发挥活性，具有较好低温的耐受力，能为工业生产节约能耗。

2，本发明以组氨醇磷酸氨基转移酶为抗原制备得到组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体，为进一步开展组氨醇磷酸氨基转移酶功能分析奠定基础，并为Cryobacterium属的菌种的鉴定提供证据及低温适应机制的研究提供新的方向。

附图说明

图1为PCR扩增组氨醇磷酸氨基转移酶基因的琼脂糖凝胶电泳鉴定图；其中M泳道为DNA marker，1号泳道为PCR扩增组氨醇磷酸氨基转移酶基因的产物；

图2为表达载体pET21a-HPAT的构建示意图；

图3为重组菌株Ecoli BL21-pET21a-HPAT表达组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定图；其中Marker泳道为protein marker；HPAT泳道为组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白；

图4为组氨醇磷酸氨基转移酶多克隆抗体的Western Blotting分析图，其中Magic泳道为蛋白质分子量标准，C.b 02泳道为细菌Cryobacterium baishanse 02超声破碎离心后的上清液样品。

具体实施方式

实施例1

组氨醇磷酸氨基转移酶基因的获取

1)获取含有目的基因的菌株

本发明利用喜冷杆菌属菌株，喜冷杆菌属菌株筛选自长白山土壤，具体的筛选过程如申请号为201710034491.5的中国发明专利，该菌株的命名为：Cryobacteriumbaishanse 02，保存于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M2016604。保藏日期为2016年10月31日，保藏地址为，中国武汉，武汉大学。

2)基因组的提取

利用DNA提取试剂盒(TAKARA Dalian)提取Cryobacterium baishanse 02菌株的基因组作为模板，提取的基因组样品于-20℃保存待用。

3)PCR扩增目的基因

设计引物：正向引物如SEQ ID NO.3所示，反向引物如SEQ ID NO.4所示；PCR反应体系如下表1所示：

表1

成分	体积
		10×PCR缓冲液	5μl
引物F	1μl
		引物R	1μl
模板	80ng
		MgSO₄	2μl
dNTP	5μl
		去离子水	35μl
总计	50μl

PCR反应条件为：95℃预变性5min；95℃30s，55℃30s，68℃延伸1.30min，共计30个循环；68℃延伸10min；15℃保持10min。

将PCR扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳，如图1所示，PCR扩增产物的大小与预计的1107bp接近，将PCR扩增产物切胶回收，送生物公司测序以准确判断PCR扩增产物的碱基序列，测序委托铂尚生物技术有限公司完成。

测序结果如SEQ ID NO.2所示，将SEQ ID NO.2所示的碱基序列在NCBI Blast网站(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)上进行碱基序列比对，比对结果与Cryobacterium arcticum strain PAMC 27867的组氨醇磷酸氨基转移酶相似性为95％，即可判断SEQ ID NO.2所示的碱基序列属于Cryobacterium属的新的组氨醇磷酸氨基转移酶序列。

实施例2

构建组氨醇磷酸氨基转移酶的表达载体

将实施例1中得到的PCR扩增产物进行胶回收，用限制性内切酶XhoI和NdeI对PCR扩增产物进行双酶切反应；同时用限制性内切酶XhoI和NdeI对载体pET21a(+)进行双酶切反应，然后经高效DNA连接酶High Ligation(TOYOBO)催化连接经双酶切反应后的pET21a(+)和PCR扩增产物；构建得到组氨醇磷酸氨基转移酶的表达载体pET21a-HPAT，表达载体pET21a-HPAT的构建如图2所示。

实施例3

表达和纯化组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白

将实施例2得到的表达载体pET21a-HPAT转化入大肠杆菌BL21的感受态菌体中，大肠杆菌BL21的感受态的制备采用CaCl₂法，CaCl₂法制备大肠杆菌BL21的感受态为实验室常规实验手段，在此不再赘述。将得到的表达载体pET21a-HPAT转化入大肠杆菌BL21后得到重组菌株Ecoli BL21-pET21a-HPAT。将Ecoli BL21-pET21a-HPAT扩大培养至OD₆₀₀＝0.6后添加1mM IPTG，28℃诱导培养表达组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白，诱导培养结束后收集菌体，依次经菌体破碎和Ni-NTA亲和层析色谱柱纯化后得到纯化后的组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白，如图3所示，得到组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白的蛋白分子量在29.0～44.3之间，与理论预计值38.3KD一致，表明纯化得到的蛋白即为组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白。

实施例4

组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白的活力影响试验

组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白的酶活测定，原理为：在磷酸吡哆醛的辅助下组氨醇磷酸氨基转移酶能催化组氨醇磷酸和2-酮戊二酸生成谷氨酸。利用组氨醇磷酸的消耗量测定组氨醇磷酸氨基转移酶的酶活力，具体方法为：

底物的配制：配制50mmol/L的组氨醇磷酸和2-酮戊二酸的反应液，加入1mmol/L的磷酸吡哆醛，反应液PH为7.0；

酶活力单位定义：组氨醇磷酸氨基转移酶在一定的温度和PH条件下，每秒钟催化转换1mol组氨醇磷酸生成谷氨酸定义为一个活力单位。

表2

温度℃	相对酶活％
		4	15％
18	32％
		28	62％
37	75％
		50	62％
60	45％
		70	15％
80	0％

由表2可以看出，本发明得到的组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白最适温度为37℃，而且组氨醇磷酸氨基转移酶在4℃具有15％的相对酶活，与现有的组氨醇磷酸氨基转移酶相比，本发明得到的组氨醇磷酸氨基转移酶具有较好的低温耐受，这是因为组氨醇磷酸氨基转移酶的碱基序列来自于Cryobacterium baishanse 02，Cryobacterium baishanse 02为低温菌，使得到的组氨醇磷酸氨基转移酶具有低温耐受特性，利用本发明的组氨醇磷酸氨基转移酶能够在低温条件下生产谷氨酸，能为工业生产节约能耗，具有较好的应用前景。

实施例5

组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体的制备：

取实施例3纯化后的组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白作为抗原，采用皮下注射免疫约5周龄的小鼠，50μg每次，2周免疫一次，共免疫4次；采血检测，通过ELISA方法确定抗体针对抗原的效价，效价大于1:50000进行最终采血制备抗血清，然后纯化抗血清制备多克隆抗体。

一)ELISA方法确定抗体针对抗原的效价的方法为：

1)将抗原用碳酸钠缓冲液(pH 9.6)稀释到10μg/ml，将抗原置于酶标96孔板，每孔100μl孵育1h。

2)用PBS-T将酶标96孔板清洗3次。

3)用5％skim milk封闭酶标板1小时，每孔100μl。

4)用PBS-T将酶标板清洗3次。

5)用PBS-T稀释血清5000倍，孵育抗原1h。

6)用PBS-T将酶标板清洗3次。

7)每孔加入100μl HRP标记的羊抗鼠抗体，用PBS-T稀释羊抗鼠抗体5000倍，孵育1h。

8)利用PBS-T将酶标板清洗3次。

9)清洗完毕后每孔加入100μl显色液ABST，反应20min后每孔加入50μl过氧化氢；

10)最后分光光度计上测420nm上述步骤9)中样品的OD值，并得出效价为1：16，大于1:50000然后进行最终采血得到抗血清。

二)纯化抗血清：

纯化抗血清的方法是：将抗原蛋白(组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白)与Ni-NTA偶联制备成抗体纯化层析柱，将上述采血所得的抗血清与PBS按照1:1比例混合后，缓慢经过抗体纯化层析柱，待抗血清中的抗体与抗原蛋白结合后用甘氨酸洗脱缓冲液洗脱，获得纯化的多克隆抗体，纯化后的多克隆抗体利用PBS过夜透析，次日进行浓度测定。

上述纯化的多克隆抗体浓度的测定方法，包括以下步骤：

1)CBB染色液配制：根据样品数量，将5×CBB染色液稀释，充分混匀。

2)根据需要取适量BSA标准蛋白，配制终浓度分别为1mg/ml、0.75mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml和0.125mg/ml标准样，并混匀。标准样采用PBS为溶剂。

3)标准曲线绘制：取一块酶标板，按下表格加入试剂：

孔号	A	B	C	D	E	F
							标准样浓度(mg/ml)	0	0.125	0.25	0.5	0.75	1
各浓度标准样(μl)	1	1	1	1	1	1
							去离子水	9	9	9	9	9	9
CBB染色液	200	200	200	200	200	200
							对应蛋白含量(μg)	0	0.125	0.25	0.5	0.75	1
最终体积(μl)	210	210	210	210	210	210

4)振荡混匀后，室温下静置30min。

5)用酶标仪测定562nm处的吸光值，以不含BSA的光吸收为空白对照。以蛋白含量(μg)为横坐标，吸收值为纵坐标，绘出标准曲线。

6)样品测定：将待测蛋白样品用去离子水稀释不同浓度梯度，各取1μl并稀释至10μl，再加入200μl 1×CBB，混匀后室温下静置30min，然后以不含蛋白的溶剂为空白对照，测定样品吸收值。

7)根据测得的吸收值，在标准曲线上计算样品的蛋白含量。

8)计算蛋白浓度：以查得的蛋白含量，并根据稀释倍数计算样品的实际浓度。

三)利用Western Blotting检测组氨醇磷酸氨基转移酶的方法为：

1)细菌Cryobacterium baishanse 02(保存于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M2016604)培养至OD至约为2.0，取1.5ml离心收集菌体，300μl Tris-HCl重悬，超声破碎取20μl破碎夜与5μl 5×SDS上样缓冲液混合，其中10μl进行SDS-PAGE电泳。蛋白质分子量标准上样量为0.8μl。

2)上样后，电泳仪恒定为18mA，直到电泳结束。

3)电泳后，将凝胶上蛋白样品转移至PVDF膜，恒定电流为0.23A进行转膜，时间为35分钟。

4)电泳结束后将PVDF膜干燥后于5％skim milk中封闭1小时。

5)PBST清洗PVDF膜5次。

6)用PBST稀释上述纯化的抗体(1:5000)，孵育PVDF膜1小时。

7)PBST清洗PVDF膜5次。

8)用PBST稀释二抗(1:20000，羊抗鼠-HRP)，孵育PVDF膜1小时。

9)PBST清洗5次，ECL显影，暗室成像。

结果如图4所示，结果表明制备得到的组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体可以检测到组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

序列表

<110> 湖北工业大学

<120> 组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体及其制备方法

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 368

<212> PRT

<213> Cryobacterium

<400> 1

Met Ser Pro Ser Asp Gln Pro Ser Val Arg Leu Arg Pro Glu Ile Val

1 5 10 15

Ala Leu Pro Ala Tyr Arg Gln Gly Lys Ala Ala Asn Ala Ser Ala Phe

20 25 30

Lys Leu Ser Ser Asn Glu Asn Pro Phe Asp Pro Leu Pro Gly Val Val

35 40 45

Asp Ala Val Asn Ala Val Ser Ala Phe Asn Arg Tyr Pro Asp Ala Ser

50 55 60

Ala Leu Ala Leu Arg Glu Arg Leu Ala Ala Arg Tyr Gly Val Ala Ser

65 70 75 80

Asp Glu Val His Ile Gly Ala Gly Ser Val Ala Leu Leu Ala Gln Leu

85 90 95

Ile Thr Ala Ala Ala Gly Pro Gly Asp Glu Val Leu Tyr Ser Trp Arg

100 105 110

Ser Phe Glu Ala Tyr Pro Ser Leu Val Thr Val Ser Gly Ala Thr Ser

115 120 125

Val Thr Val Pro Asn Arg Ala Asp His Gly His Asp Leu Pro Ala Met

130 135 140

Ala Ala Met Ile Thr Pro Arg Thr Arg Val Val Leu Val Cys Ser Pro

145 150 155 160

Asn Asn Pro Thr Gly Val Val Val Thr Ala Asp Glu Phe Ala Ala Phe

165 170 175

Met Asp Gln Val Pro Thr Asp Leu Leu Val Ile Leu Asp Glu Ala Tyr

180 185 190

Ala Glu Phe Val Thr Asp Pro Ala Ala Val Asp Gly Thr Thr Leu Leu

195 200 205

Gly Arg Tyr Pro Asn Leu Val Val Leu Arg Thr Phe Ser Lys Ala Tyr

210 215 220

Gly Leu Ala Gly Leu Arg Val Gly Tyr Gly Ile Gly Pro Val Gly Ile

225 230 235 240

Leu Asp Ala Ala Arg Ala Thr Ala Ile Pro Leu Ser Val Thr Gly Gln

245 250 255

Ala Ser Ala Ala Ala Leu Ala Ser Leu Asp Ala Glu Ala Glu Leu Leu

260 265 270

Ala Arg Val Ala Val Ile Ala Ala Arg Arg Asp Gly Ile Gln Gln Ala

275 280 285

Leu Ala Gly Ala Gly Leu His Ser Pro Ser Ser Gln Ala Asn Phe Val

290 295 300

Trp Leu Pro Leu Gly Glu Ala Thr Ala Ala Ala Thr Glu Arg Phe Thr

305 310 315 320

Asp Ala Gly Leu Val Val Arg Pro Phe His Pro Glu Gly Ile Arg Val

325 330 335

Ser Ile Gly Glu Glu Glu Ser Val Ala Thr Leu Leu Arg Ile Ser Ala

340 345 350

Glu Ile Val Gln Asp Leu Pro Thr Gly His Pro Ala Arg Arg Leu Gly

355 360 365

<210> 2

<211> 1107

<212> DNA

<213> Cryobacterium

<400> 2

gtgagccctt ctgaccagcc atcagtccgc ctgcgccccg agatcgttgc gctgccggcg 60

taccggcagg gcaaggcggc caacgcatcc gccttcaagc tgtcgagcaa cgagaacccg 120

ttcgacccgc tgcccggggt cgtcgacgcc gtcaacgccg tctcggcgtt caaccggtac 180

ccggatgcct ccgccctcgc cctgcgcgag cggctggcca cccgcttcgg cgtttccgcc 240

gacgaggtgc acatcggcgc cggctctgtg gccctgctcg cccagctgat caccgccgcc 300

gccggccccg gcgacgaggt gctttactcc tggcgctcct tcgaggccta cccgagcctc 360

gtcacggtgt ccggcgccac cagcgtgacg gtgccgaacc gcgccgacca cggccacgat 420

ctgccggcga tggccgccag gatcaccccc cgcacccgcg tcgtgatcgt ctgcagcccg 480

aacaacccca ccggcgtggt cgtcacggcc gccgagttcg cggccttcat gcgacaggtg 540

cccgccgacc tgctcgtcat cctcgatgag gcatacgccg aattcgtcac cgacccggcc 600

gccgtcgacg gcaccacact gctgggccgc taccccaacc ttgtggtgtt gcgcaccttc 660

tccaaggcgt acggtctcgc cggtctccgc gtcggctacg gcatcggccc tgtcggcatc 720

ctcgacgccg cccgcgccac ggccatcccg ctctccgtca ccggccaggc ctccgcggcg 780

gcgctggcct cgctcgacgc cgaagccgaa ctgctggccc gcgtgggcat catcgccgag 840

cgccgcgacg gcatccagca ggccctggcc gttgccggcc tgcacagccc gtcgtcgcag 900

gcgaacttcg tctggctgcc gctgggcgag gccaccgcgg cggccaccga acgtttcacc 960

gatgccgggc tcgtcgtccg gcccttccac ccggagggca tccgggtctc gattggcgag 1020

gaggaatctg tggccacact cctacggatc agcgctgaga ttgtgcagga tctaccaacg 1080

gggcatccgg cccggcggct aggttag 1107

<210> 3

<211> 31

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 3

ggaattccat atggtgagcc cttctgacca g 31

<210> 4

<211> 27

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 4

ccgctcgaga cctagccggg ccggatg 27

Claims

1.一种组氨醇磷酸氨基转移酶，其特征在于：所述组氨醇磷酸氨基转移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种编码权利要求1所述的组氨醇磷酸氨基转移酶的基因，其特征在于：所述组氨醇磷酸氨基转移酶基因的碱基序列如SEQ IDNO.2所示。

3.一种组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体，其特征在于：所述多克隆抗体的抗原为SEQ ID NO.1所示氨基酸序列组成的多肽。

4.一种制备权利要求3所述的组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体的方法，其特征在于：包括以下步骤：

2)纯化抗血清得到组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体。

5.根据权利要求4所述的组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述组氨醇磷酸氨基转移酶的制备方法为：

1.1)利用PCR技术扩增SEQ ID NO.2所示的碱基序列；

6.根据权利要求4所述的组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述纯化抗血清的方法为：将组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白与Ni-NTA偶联制备成抗体纯化层析柱，再将待纯化的抗血清与PBS按照1:1比例混合后经过抗体纯化层析柱，待抗血清中的抗体与组氨醇磷酸氨基转移酶蛋白结合完全后用甘氨酸洗脱缓冲液洗脱，获得纯化的组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体。

7.根据权利要求5所述的组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤1.1)中，PCR技术扩增所用的引物为：正向引物如SEQ ID NO.3所示，反向引物如SEQ ID NO.4所示。

8.根据权利要求5所述的组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤1.2)中载体质粒为pET21a(+)。

9.根据权利要求5所述的组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤1.3)中，大肠杆菌感受态菌体为大肠杆菌BL21感受态菌体。

10.根据权利要求5所述的组氨醇磷酸氨基转移酶的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤1.3)中，所述纯化蛋白过程中利用Ni-NTA亲和层析色谱柱进行蛋白纯化。