CN107942062A - 同步检测赭曲霉素、呕吐毒素和t‑2毒素的试纸卡、制备及检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及同步检测赭曲霉素、呕吐毒素和T‑2毒素的试纸卡、制备及检测方法，属于免疫学检测领域，试纸卡包括卡壳和试纸条，试纸条包括底板及依次搭接粘贴在底板上的吸水垫、检测垫、结合垫和样品垫；检测垫为设有质控线、检测线T1、检测线T2和检测线T3的NC膜，质控线包被羊抗鼠二抗，检测线T1包被OTA‑BSA，检测线T2包被DON‑BSA，检测线T3包被T‑2‑BSA；结合垫为包埋时间分辨荧光微球标记的赭曲霉素、呕吐毒素和T‑2毒素单克隆抗体的玻璃纤维素膜；样品垫是经样品垫处理液浸泡后干燥的玻璃纤维素膜。本发明为系统化、便捷化、规范化地定量同步检测至少两种真菌毒素提供一种新方法，稳定性好、敏感度高。

Description

同步检测赭曲霉素、呕吐毒素和T-2毒素的试纸卡、制备及检 测方法

技术领域

本发明属于免疫学检测领域，具体地，涉及同步检测赭曲霉素、呕吐毒素和T-2毒素的试纸卡、制备及检测方法。

背景技术

赭曲霉素、呕吐毒素和T-2毒素是常见的三种真菌毒素，以玉米为主的饲料、农产品易被其污染，动物摄入了霉变的饲料后，严重影响动物的生长、繁殖率和子代存活率。赭曲霉素(OTA)由赭曲霉和硫色曲霉产生，几乎可污染玉米、小麦等所有谷物，其急性毒性较强，实验证实赭曲霉素对动物具有致畸性。呕吐毒素的主体成分为脱氧雪腐镰刀烯醇(DON)，主要来源于镰刀菌属，能够引起猪的呕吐，当人摄入了被DON污染的食物后，会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡。T-2毒素是单端孢霉烯族化合物中毒素最强的一种，能够通过多种途径对人和动物的多种组织和器官产生毒害作用，在动物体内的重要损害部位之一是肝脏，主要作用于细胞分裂旺盛的组织器官。这三种毒素严重威胁着动物和人类的健康，而建立一种快速、准确的同步检测粮食和饲料中赭曲霉素、呕吐毒素和T-2毒素的方法具有重要的意义。

目前有关赭曲霉素、呕吐毒素和T-2毒素的检测方法有薄膜层析和液相色谱等，此类分析方法虽然准确、稳定，但因成本高、操作繁琐、检测周期长等缺点，仅适用于检测机构而无法应用于实际生产生活。以简便快捷为优势的免疫检测技术是市场上应用最广泛的，其中，将荧光微球作为示踪物的免疫标记技术是本领域当前的研究热点。荧光微球是指将荧光物质引入到有机或无机纳米粒子中，纳米材料的包裹使其具有很好的稳定性。与同时发展起来的酶联免疫吸附(ELISA)和同类型的胶体金免疫层析技术比较，荧光微球免疫层析技术操作简便，更加快捷。尽管如此，在实际操作中，如何基于荧光微球制备更高标准的同步测定至少两种真菌毒素的试纸卡仍然存在现实的困难，因为在制备过程中，包括荧光微球的大小和修饰、抗体的选择、荧光微球与抗体的偶联效率等因素都会对结果造成影响，因此，制备灵敏性和稳定性等更高的同步检测至少两种真菌毒素的试纸卡仍然是意向重大的研究课题。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供同步检测赭曲霉素、呕吐毒素和T-2毒素的试纸卡、制备及检测方法。

同步检测赭曲霉素、呕吐毒素和T-2毒素的试纸卡的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、检测垫的制备：制备浓度为0.5mg/mL的羊抗鼠单克隆抗体包被液，浓度为0.3mg/mL的赭曲霉素半抗原-牛血清白蛋白偶联物包被液，浓度为0.3mg/mL的呕吐毒素半抗原-牛血清白蛋白偶联物包被液，浓度为0.8mg/mL的T-2毒素半抗原-牛血清白蛋白偶联物包被液；将四种包被液各自单独吸至划膜机管线中，均按照0.8μL/cm在硝酸纤维素膜上依次划出质控线C、检测线T1、检测线T2和检测线T3；其中，羊抗鼠单克隆抗体包被液划出质控线C，赭曲霉素半抗原-牛血清白蛋白偶联物包被液划出检测线T1，呕吐毒素半抗原-牛血清白蛋白偶联物包被液划出检测线T2，T-2毒素半抗原-牛血清白蛋白偶联物包被液划出检测线T3；将经划线的硝酸纤维素膜置于37℃鼓风干燥箱中干燥3-4h，制得检测垫；

步骤二、结合垫的制备：将荧光微球分散液置于离心管中；加入MES缓冲液，在超声条件下混匀，离心弃上清收集微球沉淀，重复此步骤以清洗微球；将微球沉淀溶解于MES缓冲液中，混匀，加入EDC溶液，22-25℃避光活化，离心弃上清，加MES缓冲液，超声打散微球，离心弃上清；加入硼酸缓冲液，超声打散，然后依次加入赭曲霉素单克隆抗体、呕吐毒素单克隆抗体和T-2毒素单克隆抗体，避光反应；加入甘氨酸溶液，避光反应30min，再加入BSA溶液，避光反应30min，完成封闭；离心复溶，形成荧光微球-抗体复合物溶液；将荧光微球-抗体复合物溶液喷至玻璃纤维素膜上，干燥，制得结合垫；

步骤三、样品垫的制备：将玻璃纤维素膜放入配置好的样品垫处理液中，浸泡0.5h，放入37℃鼓风干燥箱中，干燥8-10h，制得样品垫；所述样品垫处理液为pH 7.4的PBS缓冲液，其中含有的成分及其浓度分别为：质量分数为0.5％的蔗糖，质量分数为0.5％的PVP-K30，质量分数为0.5％的PEG-20000，质量分数为0.1％的PEG-6000，质量分数为0.3％的干酪素，体积分数为0.5％的Tween 20，质量分数为0.1％的S9，质量分数为0.1％的S17和质量分数为0.1％的S21。

步骤四、试纸卡的组装：以PVC板为底板，将样品垫、结合垫、检测垫和吸水垫依次搭接粘贴在底板上，每个相邻处搭接时有1-2mm重叠，并使检测垫上的检测线T1、检测线T2和检测线T3靠近样品垫一侧、质控线C靠近吸水垫一侧，用切条机将贴好的PVC板切成条状，形成试纸条；将试纸条与卡壳组合，形成试纸卡，密封保存。

进一步的，步骤二所述荧光微球的粒径为200nm。

进一步的，步骤二所述荧光微球-抗体复合物溶液中，赭曲霉素单克隆抗体的浓度为6μg/mL，呕吐毒素单克隆抗体的浓度为10μg/mL，T-2毒素单克隆抗体的浓度为8μg/mL。

进一步的，试纸卡包括卡壳和设在卡壳内的试纸条；卡壳包括相互扣合的卡盖和卡座；卡座内设有固定试纸条的卡槽，卡盖上对应于检测垫的区域设有视窗，卡盖上对应于样品垫的区域设有加样孔；所述底板为不吸水的PVC板，吸水垫为吸水滤纸。

本发明还保护利用上述制备方法制备的试纸卡，其中，所述检测垫为设有质控线C、检测线T1、检测线T2和检测线T3的硝酸纤维素膜，质控线C包被羊抗鼠单克隆抗体，检测线T1包被赭曲霉素半抗原-牛血清白蛋白偶联物，检测线T2包被呕吐毒素半抗原-牛血清白蛋白偶联物，检测线T3包被T-2毒素半抗原-牛血清白蛋白偶联物；所述结合垫为包埋时间分辨荧光微球标记的赭曲霉素单克隆抗体、呕吐毒素单克隆抗体及T-2毒素单克隆抗体的玻璃纤维素膜。

本发明另外还保护利用所述试纸卡定量检测饲料中赭曲霉素、呕吐毒素和T-2毒素的检测方法，该方法的操作步骤为：称取经均质器均质的饲料样品置于离心管中，加入70％的甲醇水溶液，振荡器剧烈震荡至少5min，离心取上清，用氮吹仪吹干，形成凝结物；加入样品稀释液稀释将凝结物溶解并稀释，得样品检测液；将样品检测液滴加到试纸条的样品垫上，反应5min，将试纸卡插入荧光免疫分析仪的卡槽中，读取T1/C、T2/C和T3/C值，根据浓度标准曲线，计算得到对应样品中所检毒素的浓度。

进一步的，所述样品稀释液为浓度0.02mol/L的PBS溶液，其中含有体积分数为0.5％的甲醇。

本发明所述试纸卡检测饲料中赭曲霉素、呕吐毒素和T-2毒素的原理是：将含有待测毒素的样品滴加在加样区，待测样品中的小分子毒素与结合垫中的荧光纳米微球标记的抗体复合物特异性结合并通过毛细作用向吸水垫一侧层析，当到达固定着抗原的检测线后，检测线上的抗原与样品中的毒素竞争抗体上的结合位点，而多余的荧光微球标记物继续向前层析，与固定在质控线的羊抗鼠单抗结合。反应结束后，用紫外光源对检测垫扫描，检测线T1、T2、T3和质控线C的荧光微球发出高强度荧光。另外荧光微球中稀土元素的荧光衰变时间相比普通荧光团长，是其103～106倍。通过延缓测量时间，待样品基质中自然发光的短寿命荧光全部衰变后，再测量稀土元素的特异性荧光，达到完全消除本底干扰的效果，实现高信噪比。

本发明的有益效果：

1、本发明所述试纸卡是基于荧光微球制备的，利用毒素分子与荧光微球标记的抗体复合物结合，进而检测线上的抗原与毒素分子竞争抗体上的结合位点，荧光微球发出高强度荧光，通过荧光信号的强弱和标准曲线实现对毒素分子的定量检测，相较于ELISA试剂盒、胶体金免疫试纸条或其它普通荧光免疫层析技术，本发明所述试剂卡的灵敏性要高出2-3个数量级，其次，带有羧基团的荧光微球与抗体以共价键相连，稳定性更高。另外，本发明所述试纸卡除具有一般试纸条检测方便等的优点外，其可检测样品中的三种真菌毒素的含量，且对样品的处理无需分开操作，相比于ELISA试剂盒检测时间，本发明试纸条的检测时间仅需5min，大大提高了检测效率、节省成本，非常适用于现场快速筛查，为赭曲霉素、呕吐毒素和T-2毒素的检测提供了一种切实有效的技术手段。

2、本发明所述在试纸卡的制备过程中，各部件的制备方法决定了其的检测灵敏性或稳定性等特性，其中，在结合垫制备中，EDC处理以活化微球表面羧基基团，促进其与抗体的结合，再相继加入甘氨酸和BSA进行二次封闭，能够避免非特异性反应对检测结果的干扰；在样品垫制备中，样品垫处理液中包含多种成分，不同浓度的成分之间协同作用，使浸泡处理后的样品垫在保证流动性的同时，均一性和稳定性均较好，提高免疫效果，为准确、灵敏地检测样品中毒素含量奠定了基础。

附图说明

图1为本发明试纸条及卡壳结构示意图；其中：1、样品垫；2、结合垫；3、检测垫；4、吸水垫；

图2为呕吐毒素标准曲线图；

图3为赭曲霉素标准曲线图；

图4为T-2毒素标准曲线图。

具体实施方式

下面通过具体的实施例对本发明做进一步的解释说明。

实施例一、一种同步检测饲料中赭曲霉素、呕吐毒素和T-2毒素的试纸条制备

制备过程包括：荧光微球-抗体复合物的制备、结合垫的制备、样品垫制备、检测垫的制备以及试纸条的组装。

1、荧光微球-抗体复合物的制备：

(1)清洗：取50μL荧光微球至1.5mL离心管中，加入1mL 0.01M MES缓冲液中，震荡混匀，15000r/min离心15min，弃上清，加入1mL 0.01M MES缓冲液，超声打散微球；重复此步骤三次，已达到清洗微球的目的；

(2)活化：向清洗后的1mL微球液中，加入250μL EDC溶液，避光活化2h，15000r/min离心15min，弃上清，加入1mL 0.01M MES缓冲液，超声打散微球，15000r/min离心15min，弃上清；

(3)标记：加入1mL 0.05M硼酸盐缓冲液，超声打散，依次加入6μg赭曲霉素单克隆抗体、10μg呕吐毒素单克隆抗体和8μg T-2毒素单克隆抗体混匀，避光反应2h；

(4)封闭1：加入100μL 1M甘氨酸溶液，避光反应30min；

(5)封闭2：加入100μL 10％BSA溶液，避光反应30min；

(6)离心复溶：15000r/min离心15min，弃上清，加入1mL稀释液，超声打散微球，制备成荧光微球-抗体复合物溶液。

其中，所用荧光微球的粒径为200nm；吸收波长为365nm，检测波长是610nm。

2、结合垫的制备：

将上述制备的荧光微球-抗体复合物溶液按照3μL/cm喷至玻璃纤维素膜上，37℃干燥3-4h即为所述结合垫，干燥后的结合垫放入干燥器中备用。

3、样品垫制备：

(1)配置pH 7.4的PBS：称取8g NaCl，5.8g Na₂HPO₄，0.2g KCl，0.2g KH₂PO₄溶于1L纯化水中，调节pH至7.4；

(2)配置样品垫处理液：准确称取5g蔗糖，5g PVP-K30，5g PEG-20000，1g PEG-6000，3g干酪素，1g S9，1g S17，1g S21，5mL Tween-20，至1L pH 7.4的PBS中，磁力搅拌器上混匀，得样品垫处理液，备用。其中，所述S9为Tetronic 1307是一种两性表面活性剂；所述S17为Ohodasurf ON-870，是一种乳化剂；所述S21为BRIJ 35，是一种非离子表面活性剂。S9、S17和S21添加至所述样品垫处理液后，较一般处理方法的免疫效果好，更适用于饲料样品的分析检测；

(3)样品垫的处理：将玻璃纤维素膜装于自封袋中，按80mL/张加入上述制备的样品垫处理液，浸泡30min；

(4)样品垫的干燥：将充分浸泡过的玻璃纤维素膜放入37℃鼓风干燥箱中，干燥8-10h，得样品垫；将样品垫放入干燥器中待用。

4、检测垫的制备：

(1)羊抗鼠包被液的制备：将羊抗鼠单抗用包被工作液稀释成0.5mg/mL；

(2)T1包被液的制备：将赭曲霉素半抗原-牛血清白蛋白偶联物(OTA-BSA)用包被工作液稀释至0.3mg/mL；

(3)T2包被液的制备：将呕吐毒素半抗原-牛血清白蛋白偶联物(DON-BSA)用包被工作液稀释至0.3mg/mL；

(4)T3包被液的制备：将T-2毒素半抗原-牛血清白蛋白偶联物用包被工作液稀释至0.8mg/mL；

(5)包被膜：将上述四种包被液分别倒吸至划膜机管线中，均按照0.8μL/cm、依次划出质控线C、检测线T1、检测线T2和检测线T3，且相邻两条线之间的间距为2-3mm，然后放入37℃鼓风干燥箱中，干燥3-4h，即制备成检测垫，放入干燥器中待用。所述检测垫是样品中有效成分与固定在膜上的活性物质发生特异性结合的区域。

5、试纸条的组装：

以不吸水的PVC胶粘板为底板，将样品垫、样品结合垫、检测垫和吸水垫依次搭接粘贴在底板上，各组分在相邻处有1-2mm重叠，用切条机将贴好的PVC板切成3mm宽的试纸条，通过卡座内的卡槽与卡座组合，卡座与卡盖扣合形成试纸卡。其中，卡盖上对应检测垫的区域设有视窗；检测垫上的T1线、T2线和T3线靠近样品垫一侧、对应的卡盖上的视窗侧边上有“T1”、“T2”和“T3”标志；质控线C线靠近吸水垫一侧，对应的卡盖上的视窗侧边上有“C”标志；卡盖上对应于样品垫的区域设有加样孔，加样孔侧边上有“S”标识，加样孔下方有箭头标识指示试纸卡放置方向，如图1所示。所述吸水垫为吸水滤纸，吸水滤纸裁切成长30cm，宽1.9-2.1cm。所述吸水垫具有虹吸效果。

所述卡盖的规格为70mm*20mm*5mm，卡盖中心的视窗大小为16mm*3mm。

实施例二、标准曲线的绘制

1、标准品的配置：

用0.1M pH7.4的PBS将赭曲霉素标准品梯度稀释成0.1ppb，0.3ppb，0.9ppb，2.7ppb，8.1ppb；用0.1M pH7.4的PBS将呕吐毒素标准品梯度稀释成0.1ppb，0.3ppb，0.9ppb，2.7ppb，8.1ppb；用0.1M pH7.4的PBS将T-2毒素标准品梯度稀释成0.1ppb，0.3ppb，0.9ppb，2.7ppb，8.1ppb；

2、读数：

分别取50μL上述标准品点卡，反应10min后，在便携式荧光免疫分析仪对应卡槽进行读数，读数结果见下表1所示：

3、计算方法的验证：

(1)四参数法，将赭曲霉素曲线相应参数输入便携式荧光免疫分析仪后，在标准曲线范围内选择0.5ppb和2.5ppb配置标准品，点卡，反应10min，读得两个浓度分别是2.485ppb和0.312ppb；

(2)分段线性，将赭曲霉素曲线相应参数输入便携式荧光免疫分析仪后，在标准曲线范围内选择0.5ppb和2.5ppb配置标准品，点卡，反应10min，读得两个浓度分别是0.655ppb和0.492ppb；

通过两组数据对比，可得出的结论是，样品浓度的计算方法应该选择分段线性。

(4)标准曲线的验证及绘制：将步骤2中读数值输入回归/拟合计算程序，绘制曲线图，如图2、图3和图4所示。

实施例三、利用本发明所述试纸卡检测饲料中呕吐毒素、赭曲霉素和T-2毒素的试纸条的检测方法

利用本发明所述试纸卡同步检测饲料中呕吐毒素、赭曲霉素和T-2毒素的试纸条的检测方法，包括以下步骤：称取5.0±0.05g研碎的样品至50mL聚苯乙烯离心管中，加入25mL甲醇溶液，用振荡器剧烈振荡5min；将振荡后的样品放入离心机，6000r/min离心5min；取1mL离心后上清液用氮吹仪吹干，吹干后准确加入1.0mL样品稀释液(0.02M PBS，0.5％甲醇)将凝结物充分溶解即得样品提取液；用样品稀释液按1:9比例稀释(例：100μL样品提取液+900μL样品稀释液)；取管中稀释后液体50μL滴在荧光微球试纸条样品垫上，开始计时5min；将试纸条插入便携式荧光免疫分析仪相应卡槽中读数(T/C值)，根据录入荧光分析仪的标准曲线，自动计算得到对应样品中所检毒素的浓度(ppb)。

实施例四、以检测豆粕中赭曲霉素、呕吐毒素和T-2毒素为例，比较荧光微球试纸条和胶体金试纸条的检测效果

1、用均质器均质饲料样品；

2、称取两份5.0±0.05g研碎的样品至两个50mL聚苯乙烯离心管中，其中管2加入10ng赭曲霉素、10ng呕吐毒素和10ng T-2毒素，加入1g NaCl和25ml甲醇，用振荡器剧烈振荡5min；

3、将振荡后的样品置于离心机，6000r/min离心5min；

4、取1mL离心后上清液用氮吹仪吹干，吹干后准确加入1.0mL样品稀释液将凝结物充分溶解即得样品提取液；

5、用样品稀释液按1:9比例稀释(例：100μL样品提取液+900μL样品稀释液)；

6、分别取管1中稀释后液体50μL和管2中稀释后液体50μL分别滴加卡1和卡2，计时反应5min；

7、将卡1插入便携式荧光免疫分析仪卡槽中读数，显示浓度值是0；将卡2插入便携式荧光免疫分析仪卡槽中读数，显示OTA浓度值是1.7ng/mL，DON浓度值为1.85ng/mL，T-2浓度值为1.68ng/mL；

8、与胶体金检测卡的比较：将管1中处理好的稀释液分别加入赭曲霉素胶体金检测卡1、呕吐毒素胶体金检测卡1和T-2毒素胶体金检测卡1中，将管2中处理好的稀释液分别加入赭曲霉素胶体金检测卡2、呕吐毒素胶体金检测卡2和T-2毒素胶体金检测卡2中，反应10min，结果：赭曲霉素卡1出线两条线，呈现阴性结果，呕吐毒素卡1出现两条线，呈现阴性结果，T-2毒素卡1出现两条线，呈现阴性结果；赭曲霉素卡2出线两条线，呈现阴性结果，呕吐毒素卡2出现两条线，呈现阴性结果，T-2毒素卡2出现两条线，呈现阴性结果。

上述实验结果进一步验证，荧光微球试纸条的敏感性较胶体金试纸条高。

实施例五、荧光微球标记赭曲霉素单克隆抗体复合物与胶体金标记赭曲霉素单克隆抗体复合物的稳定性比较

1、将制备好的胶体金-赭曲霉素单克隆抗体复合物的结合垫与荧光微球-赭曲霉素单克隆抗体复合物的结合垫均放置37℃鼓风干燥箱中；

2、在第3天，5天，1周，2周，4周，8周，12周，20周，36周，48周时分别对阴性和阳性样本进行检测，观察其稳定性；

3、检验结果如下表2所示：

由上表可得出结论：荧光微球标记抗体复合物的稳定性较胶体金标记抗体复合物的强。

Claims (7)

1.同步检测赭曲霉素、呕吐毒素和T-2毒素的试纸卡的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、检测垫的制备：制备浓度为0.5mg/mL的羊抗鼠单克隆抗体包被液，浓度为0.3mg/mL的赭曲霉素半抗原-牛血清白蛋白偶联物包被液，浓度为0.3 mg/mL的呕吐毒素半抗原-牛血清白蛋白偶联物包被液，浓度为0.8 mg/mL的T-2毒素半抗原-牛血清白蛋白偶联物包被液；将四种包被液各自单独吸至划膜机管线中，均按照0.8μL/cm在硝酸纤维素膜上依次划出质控线C、检测线T1、检测线T2和检测线T3；其中，羊抗鼠单克隆抗体包被液划出质控线C，赭曲霉素半抗原-牛血清白蛋白偶联物包被液划出检测线T1，呕吐毒素半抗原-牛血清白蛋白偶联物包被液划出检测线T2，T-2毒素半抗原-牛血清白蛋白偶联物包被液划出检测线T3；将经划线的硝酸纤维素膜置于37℃鼓风干燥箱中干燥3-4 h，制得检测垫；

步骤二、结合垫的制备：将荧光微球分散液置于离心管中；加入MES缓冲液，在超声条件下混匀，离心弃上清收集微球沉淀，重复此步骤以清洗微球；将微球沉淀溶解于MES缓冲液中，混匀，加入EDC溶液，22-25℃避光活化，离心弃上清，加MES缓冲液，超声打散微球，离心弃上清；加入硼酸缓冲液，超声打散，然后依次加入赭曲霉素单克隆抗体、呕吐毒素单克隆抗体和T-2毒素单克隆抗体，避光反应；加入甘氨酸溶液，避光反应30min，再加入BSA溶液，避光反应30min，完成封闭；离心复溶，形成荧光微球-抗体复合物溶液；将荧光微球-抗体复合物溶液喷至玻璃纤维素膜上，干燥，制得结合垫；

步骤三、样品垫的制备：将玻璃纤维素膜放入配置好的样品垫处理液中，浸泡0.5 h，放入37℃鼓风干燥箱中，干燥8-10 h，制得样品垫；所述样品垫处理液为pH 7.4 的PBS缓冲液，其中含有的成分及其浓度分别为：质量分数为0.5% 的蔗糖，质量分数为0.5% 的PVP-K30，质量分数为0.5% 的PEG-20000，质量分数为0.1%的PEG-6000，质量分数为0.3%的干酪素，体积分数为0.5%的Tween 20，质量分数为0.1%的S9，质量分数为0.1%的S17和质量分数为0.1%的S21；

步骤四、试纸卡的组装：以PVC板为底板，将样品垫、结合垫、检测垫和吸水垫依次搭接粘贴在底板上，每个相邻处搭接时有1-2mm重叠，并使检测垫上的检测线T1、检测线T2和检测线T3靠近样品垫一侧、质控线C靠近吸水垫一侧，用切条机将贴好的PVC板切成条状，形成试纸条；将试纸条与卡壳组合，形成试纸卡，密封保存。

2.如权利要求1所述同步检测赭曲霉素、呕吐毒素和T-2毒素的试纸卡的制备方法，其特征在于：步骤二所述荧光微球的粒径为200nm。

3.如权利要求1所述同步检测赭曲霉素、呕吐毒素和T-2毒素的的试纸卡的制备方法，其特征在于：步骤二所述荧光微球-抗体复合物溶液中，赭曲霉素单克隆抗体的浓度为6μg/mL，呕吐毒素单克隆抗体的浓度为10μg/mL，T-2毒素单克隆抗体的浓度为8 μg/mL。

4.如权利要求1所述同步检测赭曲霉素、呕吐毒素和T-2毒素的的试纸卡的制备方法，其特征在于：试纸卡包括卡壳和设在卡壳内的试纸条；卡壳包括相互扣合的卡盖和卡座；卡座内设有固定试纸条的卡槽，卡盖上对应于检测垫的区域设有视窗，卡盖上对应于样品垫的区域设有加样孔；所述底板为不吸水的PVC板，吸水垫为吸水滤纸。

5.利用如权利要求1-4任意一种制备方法制备的试纸卡，其特征在于：所述检测垫为设有质控线C、检测线T1、检测线T2和检测线T3的硝酸纤维素膜，质控线C包被羊抗鼠单克隆抗体，检测线T1包被赭曲霉素半抗原-牛血清白蛋白偶联物，检测线T2包被呕吐毒素半抗原-牛血清白蛋白偶联物，检测线T3包被T-2毒素半抗原-牛血清白蛋白偶联物；所述结合垫为包埋时间分辨荧光微球标记的赭曲霉素单克隆抗体、呕吐毒素单克隆抗体及T-2毒素单克隆抗体的玻璃纤维素膜。

6.利用权利要求5所述试纸卡定量检测饲料中赭曲霉素、呕吐毒素和T-2毒素的检测方法，其特征在于：称取经均质器均质的饲料样品置于离心管中，加入70%的甲醇水溶液，振荡器剧烈震荡至少5min，离心取上清，用氮吹仪吹干，形成凝结物；加入样品稀释液稀释将凝结物溶解并稀释，得样品检测液；将样品检测液滴加到试纸条的样品垫上，反应10min，将试纸卡插入荧光免疫分析仪的卡槽中，读取T/C值，根据浓度标准曲线，计算得到对应样品中所检毒素的浓度。

7.如权利要求6所述利用试纸卡定量检测饲料中赭曲霉素、呕吐毒素和T-2毒素的检测方法，其特征在于：所述样品稀释液为浓度0.02mol/L的PBS溶液，其中含有体积分数为0.5%的甲醇。