CN110568187A - A族链球菌抗原检测试纸条、试剂盒及其制备方法 - Google Patents

A族链球菌抗原检测试纸条、试剂盒及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110568187A
CN110568187A CN201910761785.7A CN201910761785A CN110568187A CN 110568187 A CN110568187 A CN 110568187A CN 201910761785 A CN201910761785 A CN 201910761785A CN 110568187 A CN110568187 A CN 110568187A
Authority
CN
China
Prior art keywords
group
streptococcus
solution
antibody
detection
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910761785.7A
Other languages
English (en)
Inventor
杨标
金巍
刘中华
王国强
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangsu World Biological Polytron Technologies Inc
Original Assignee
Jiangsu World Biological Polytron Technologies Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangsu World Biological Polytron Technologies Inc filed Critical Jiangsu World Biological Polytron Technologies Inc
Priority to CN201910761785.7A priority Critical patent/CN110568187A/zh
Publication of CN110568187A publication Critical patent/CN110568187A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911—Bacteria
    • G01N33/56944—Streptococcus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种A族链球菌抗原检测试纸条、试剂盒及其制备方法，涉及A族链球菌检测技术领域。本发明公开的A族链球菌抗原试纸条，通过将包被包括有抗A族链球菌检测抗体的硝酸纤维素膜上、包被有抗A族链球菌免疫标记抗体的免疫结合垫、吸水纸、样品垫依次贴附到聚氯乙烯底板制得；该检测卡可通过检测标记物的方法检测待检样品中是否存在A族链球菌抗原；该试纸条和包括有该试纸条的检测卡可特异快速地进行A族链球菌早期感染的检测与诊断，减低成本，快速检测，满足临床使用的需要。

Description

A族链球菌抗原检测试纸条、试剂盒及其制备方法
技术领域：
本发明涉及A族链球菌检测技术领域，具体而言，涉及一种A族链球菌抗原检测卡及其制备方法和检测试剂盒。
背景技术：
A族链球菌(Strep-A)，又称化脓性链球菌，是一种全球范围内的人类重要致病菌。它不仅可单独引起感染，也可与其它化脓菌引起混合感染。病人尤其是儿童如不及时接受抗感染治疗，易引起急性咽炎、脓胞病、中毒性休克综合征、侵袭性筋膜炎、猩红热、肺炎、丹毒和变态反应性疾病，如急性风湿热(ARF)、风湿性心脏病(RHD)、急性肾小球肾炎等。
有人估计全球每年有51.7万人死于严重Strep-A感染和疾病，另外还有1810万人患严重Strep-A感染，每年新病人178万，其中侵袭性Strep-A感染有66.3万，死亡16.3万人。国内Strep-A是极其重要的致病菌，其诱发的猩红热为国家乙类传染病，平均每年发病约5-6万人，引起人们的广泛关注，为全球热点课题。
而目前，市面上缺乏针对A族链球菌检测的试剂盒。
发明内容：
本发明的目的在于提供一种A族链球菌抗原试纸条。该A族链球菌抗原试纸条可特异快速地进行A族链球菌早期感染的检测与诊断，减低成本，检测速度快。
本发明的另一目的在于提供上述A族链球菌抗原试纸条的制备方法。该制备方法得到的A族链球菌抗原检测卡应用简便，结果准确，为下一步准确治疗由A族链球菌引起的疾病提供了依据，适于大规模推广应用。
本发明的另一目的在于提供含有上述A族链球菌抗原试纸条的检测卡以及试剂盒。该试剂盒可特异快速地进行A族链球菌早期感染的检测与诊断，减低成本，快速检测，有效满足临床使用的需要。
为实现上述目的，本发明提供了一种A族链球菌抗原检测试纸条的制备方法采用了如下的技术方案：
a.向胶体金溶液中加入碳酸钾调节pH，再依次加入抗A族链球菌抗体、牛血清白蛋白溶液，离心得到沉淀，沉淀用重悬液重悬得到胶体金标记的抗A族链球菌抗体；
b.将硝酸纤维素膜粘贴于聚氯乙烯底板上，得到贴膜的聚氯乙烯底板；
c.用包被液稀释抗A族链球菌抗体得到检测线工作液；用包被液稀释羊抗鼠IgG多抗得到对照线工作液；
d.用步骤a得到的胶体金标记的抗A族链球菌抗体对结合垫进行喷金处理得到免疫结合垫，用步骤c得到的检测线工作液、羊抗鼠IgG多抗对照线工作液分别在步骤b得到的贴膜的聚氯乙烯底板上的硝酸纤维素膜上进行划线处理；
e.将样品垫、免疫结合垫、贴膜的聚氯乙烯底板和吸水纸如图1所示依次组装后切割得到A族链球菌抗原检测试纸条；
优选地，上述技术方案中步骤a的具体步骤是：向所述胶体金溶液中加入0.2M碳酸钾，混匀调节pH，然后加入抗A族链球菌抗体混匀后静置30min，再加入含10％牛血清白蛋白的牛血清白蛋白溶液，混匀静置30min，制得混合溶液，将混合溶液于4℃、转速为8000g的条件下离心30min得到沉淀，沉淀用重悬液重悬至所述混合溶液的体积的1/3，即得胶体金标记的抗A族链球菌抗体的溶液。
优选地，上述技术方案中步骤a中，所述碳酸钾为0.1-0.2M的碳酸钾溶液。
优选地，上述技术方案中步骤a所述胶体金溶液的浓度(W/V)为0.01％-0.04％。
优选地，上述技术方案中步骤a所述碳酸钾溶液体积与胶体金溶液体积比例为：1-10uL：1ml。
优选地，上述技术方案中步骤a所述抗A族链球菌抗体的浓度和胶体金溶液的比例为1-50ug:1mL。
优选地，上述技术方案中步骤a所述牛血清白蛋白溶液含有8-12％的牛血清白蛋白。
优选地，上述技术方案中步骤a所述牛血清白蛋白溶液的加入体积为所述胶体金溶液体积的1％-10％；
优选地，上述技术方案中步骤a所述重悬液为48-52mM的三羟甲基氨基甲烷溶液。
优选地，上述技术方案中步骤a所述三羟甲基氨基甲烷溶液每100ml含有：0.8-1.2g BSA、0.48-0.52g聚乙烯吡咯烷酮、1.8-2.2g海藻糖以及3.8-4.2g蔗糖，pH值为8.4-8.6。
优选地，上述技术方案中步骤c中所述包被液为0.01M-0.02M的磷酸盐缓冲液，每10mL包被液含有0.18-0.22g海藻糖，pH为7-8。
优选地，上述技术方案中步骤c中所述检测线工作液中抗A族链球菌抗体浓度为0.8-1.2mg/mL；所述对照线工作液中羊抗鼠IgG多抗的浓度为0.8-1.2mg/mL。
优选地，上述技术方案中步骤d中所述喷金处理和划线处理均通过喷金划膜设备实现。
优选地，上述技术方案中步骤d中所述结合垫为玻璃纤维膜。
优选地，上述技术方案中步骤e中所述样品垫为玻璃纤维膜；
优选地，上述技术方案中步骤e中所述样品垫在使用前，用样品垫处理液对样品垫浸泡后干燥，其中所述样品垫处理液是0.05M的三羟甲基氨基甲烷溶液，每100ml三羟甲基氨基甲烷溶液含有0.5g酪蛋白、0.5g表面活性剂S9以及1.0mL吐温20，pH为8.5。
本发明提供了一种A族链球菌抗原检测卡的制备方法，将上述获得的A族链球菌抗原检测试纸条置入塑料外壳中，其中，塑料外壳的加样孔在样品垫上方，塑料外壳的观察窗在检测线T和对照线C上方。
本发明提供了一种A族链球菌抗原试剂盒的制备方法，将上述获得的A族链球菌抗原检测卡装入铝箔袋，与采样吸管、说明书装盒组成A族链球菌抗原检测试剂盒，其中吸样管可选。
本发明提供了一种A族链球菌抗原试纸条,试纸条自上而下依次由样品垫、免疫结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫粘贴于聚氯乙烯底板上组成，其中，所述免疫结合垫上包被有标记胶体金的A族链球菌抗体，硝酸纤维素膜设有检测线T和控制线C，检测线包被了抗A族链球菌单克隆抗体，控制线包被了羊抗鼠IgG多抗。
本发明提供了一种A族链球菌抗原检测卡，包括装有上述试纸条的塑料外壳，其中塑料外壳设有加样孔和观察窗，加样孔在样品垫上方，观察窗在检测线T和对照线C上方。
本发明提供了一种A族链球菌抗原检测试剂盒，将上述检测卡和采样吸管、说明书装盒得到试剂盒。
本发明的有益效果包括：
(1)本发明提供的A族链球菌抗原试纸条的制备方法，由于经过处理的样品垫在检测过程中达到了减少其他病原体干扰的效果，使消除假阳性的同时不漏检，使得检测结果得到进一步提高，具有较好的特异性。
(2)本发明提供的由上述方法制得的A族链球菌抗原检测卡基于免疫侧向流层析技术，不需任何仪器设备，不用稀释样本，简便快速，能够通过手工操作、肉眼读取判断样本中是否含有A族链球菌抗原，不会对受检者身体造成伤害，检测速度快，成本低。
附图说明：
图1为本发明实施例中的A族链球菌抗原检测试纸条的结构示意图；
图2为本发明实施例中的A族链球菌抗原检测卡的透视图；
图3为本发明实施例中的A族链球菌抗原检测检测卡的俯视图；
图4为本发明实施例中的A族链球菌抗原检测卡检测不同浓度的A族链球菌的检测结果；
图5为本发明实施例中的A族链球菌抗原检测卡检测不同病原菌的检测结果。
图中：1--样品垫；2-免疫结合垫；3-硝酸纤维素膜；4-检测线；5-质控线；6-吸水纸；7-聚氯乙烯底板；8-塑料外壳；9-加样孔；10-观察窗。
具体实施方式：
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
如图1所示免疫层析检测试纸条自上而下依次由样品垫、免疫结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫粘贴于聚氯乙烯底板上组成；所述结合垫上包被有免疫标记抗体，硝酸纤维素膜上包被有检测抗体。检测时，免疫标记抗体和抗体将分别与被检测物质结合从而形成夹心结构。
较优地，所述免疫结合垫上标记有抗A族链球菌免疫标记抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有抗A族链球菌的检测抗体。
实施例1
本实施例提供的A族链球菌抗原检测卡的制备方法，具体步骤如下：
本实施例所用胶体金溶液为自产；抗A族链球菌抗体、羊抗鼠IgG多抗购买于上海硕颖生物科技有限公司；喷金划膜仪购买于上海捷宁生物科技有限公司。
(1)胶体金标记抗A族链球菌抗体
用300uL体积的0.2M碳酸钾溶液调节50ml浓度为0.01％的胶体金溶液中调节pH值；在搅拌的条件下，逐滴缓慢将0.5ml 1mg/ml待标记的抗A族链球菌抗体加入上述胶体金溶液中，混匀，室温静置30min；
混合溶液在8000g、4℃条件下离心30min，去上清，留疏松沉淀；沉淀用1.5ml重悬液复溶，重悬后的溶液终体积为标记前胶体金溶液(50 ml)的1/3，然后转入2.0ml离心管中，得含胶体金标记的抗A族链球菌抗体的溶液，测OD540nm值或4℃保存备用。
所用重悬液为50mM的三羟甲基氨基甲烷溶液，每100ml三羟甲基氨基甲烷溶液含有：1g BSA、0.5g聚乙烯吡咯烷酮、2g海藻糖以及4g蔗糖，pH值为8.5。
根据本发明的标记工艺得到的各种标记工艺下的胶体金标记抗体如下表所示：
实施例的化学试剂用量：
实例 胶体金浓度 0.2M碳酸钾用量 10％BSA用量 标记抗体浓度
实例1.1 0.01％ 1ul/ml金 0.1 ml/ml金 1ug/1ml金
实例1.2 0.02％ 3ul/ml金 0.05 ml/ml金 20ug/1ml金
实例1.3 0.04％ 10ul/ml金 0.01 ml/ml金 50ug/1ml金
(2)制备包被胶体金标记的抗A族链球菌抗体的结合垫
设定喷金划膜仪，开启电源，运行喷金模块，设定喷金程序；1号管道为喷金通道；喷金划膜仪初始化：将1号管道置于胶体金标记的抗A族链球菌抗体的溶液中，选择初始化程序，清洗管道10个循环；将结合垫(本实施例中选用玻璃纤维膜作为结合垫)按固定位置平放在板面上，开始喷金，条带均匀、连续和贯通整个结合垫的为合格品，两条直线中出现断点为不合格；喷金结束，清洗管道。
喷金处理后的结合垫置于室温，湿度≤30％条件下干燥1小时，干燥处理后置于铝箔袋中，加干燥剂室温密封保存备用。
(3)制备硝酸纤维素膜
取抗A族链球菌单克隆抗体500ug，用包被液稀释至0.5ml，得到检测线工作液，相应容器标记T标志。
取羊抗鼠IgG多抗500ug，用包被液稀释至0.5ml，得到对照线工作液，相应容器标记C标志，2-8℃保存备用。
将聚氯乙烯底板上较宽部分的保护纸除去，沿上面保护纸的下边缘，将空白的硝酸纤维素膜粘贴于聚氯乙烯底板上，得到贴膜的聚氯乙烯底板，置于室温中，湿度≤30％条件下或加干燥剂室温密封保存备用。
根据本发明的标记工艺得到的各种标记工艺下的包被液成份如下表所示：
实施例的0.01M磷酸盐缓冲液pH范围：
实例 实例1.1 实例1.2 实例1.3 实例1.4
pH范围 7.0 7.2 7.6 8.0
(4)划线
设定划膜仪，开启划膜仪的电源，设定划膜程序，划膜量为1ul/cm；1号管道为检测线通道，2号管道为对照线通道；划膜仪初始化：将1号管道置于检测线工作液中，将2号管道置于对照线工作液，选择初始化程序，清洗管道10个循环。
将贴有硝酸纤维素膜的聚氯乙烯底板的按固定位置平放在划膜仪上，开始划膜。检查划好线的硝酸纤维素膜，检测线和对照线为两条均匀、连续和贯通整个硝酸纤维素膜的直线为合格品，两条直线中出现断点区为不合格品，需标出。
划膜结束，将划膜的硝酸纤维素膜置于室温中，湿度≤30％条件下干燥6小时。
(5)贴膜、切膜
组装试纸条，将免疫结合垫贴于划膜的硝酸纤维素膜下方，与膜接触1-2mm；样品垫贴在免疫结合垫下方，与免疫结合垫少许接触；接着除去上方保护纸，将吸水纸贴在硝酸纤维素膜的上方，与膜接触1-2mm。
在使用样品垫前，用样品垫处理液对样品垫浸泡，然后干燥，样品垫处理液是0.05M的三羟甲基氨基甲烷溶液；每100ml三羟甲基氨基甲烷溶液含有：0.5g酪蛋白、0.5g表面活性剂S9以及1mL吐温20，pH为8.5。
接通切割机电源，设定切膜程序，设定切割宽度为4mm；将试纸条合格品平放入切割机平台轨道中，正面朝上，按操作面板上“开始”键，开始切割；每放一片试纸条合格品，按操作面板上“开始”键一次，直至切割完所有试纸条合格品。
切割完成后，将试纸条装入塑料外壳，压卡机压紧，即得到A族链球菌抗原检测卡。
本实施例得到的A族链球菌抗原检测试纸条的结构如图1所示；A族链球菌抗原检测卡的结构如图2和图3所示，其包括塑料外壳8以及在卡壳上盖上的加样孔9、观察窗10和卡入在外壳内聚氯乙烯底板7，聚氯乙烯底板7上具有自左往右依次搭接的样品垫1、免疫结合垫2、硝酸纤维素膜3和吸水垫6；
样品垫1、免疫结合垫2、硝酸纤维素膜3和吸水垫6均粘附在聚氯乙烯底板7上。
其中，硝酸纤维素膜3上具有检测线4和质控线5，检测线4上包被有抗A族链球菌单克隆抗体，质控线5包被有羊抗鼠IgG多抗。免疫结合垫2上含有胶体金标记的抗A族链球菌抗体。
实施例2试剂盒组装
取铝箔袋和干燥剂；打开热封机，预热；将待装袋的实施例1制得的检测卡、1袋干燥剂装入铝箔袋中；用热封机封好铝箔袋；贴上标签。
装有检测卡的铝箔袋与采样吸管、说明书装盒即为A族链球菌抗原检测试剂盒成品。
实施例3
采用实施例1提供的A族链球菌抗原检测卡或实施例2提供的A族链球菌抗原检测试剂盒检测样本的方法：
采用A族链球菌抗原检测卡在测试时，滴加100ul左右的待检样本在加样孔中，水平放置。
如样本中含有A族链球菌抗原，抗A族链球菌抗体-胶体金与样本中的A族链球菌抗原结合在一起，形成“抗原-抗体-金”复合物，复合物沿着试纸条层析移动，首先到达包被了抗A族链球菌抗体的检测线，“抗原-抗体-金”复合物将同抗A族链球菌抗体结合，并在检测线上滞留下来，形成一条红色的线，这表示阳性结果。线条颜色的深浅与样本中的抗原数量没有比例关系。如果检测线无显色表示样本中不含A族链球菌抗原或A族链球菌抗原低于本试纸最低检出限，游离的“抗体-金”复合物继续层析，到达包被了羊抗鼠IgG抗体的对照线，同羊抗鼠IgG结合在一起而富集在对照区，形成一条红色的线。对照线的出现证明试纸条检测功能正常。无论样本中是否含有A族链球菌抗体，在有效试验中，试纸条的对照线都应当显色。样本继续移动，到达吸水纸。吸水纸的作用是吸附剩余的复合物，使其在试纸条内移动，并消除本底的颜色。自试纸条加入样本起计时，15分钟左右方可读取结果。
实验例
1、检出限试验
采用实施例1提供的A族链球菌抗原检测卡或实施例2提供的A族链球菌抗原检测试剂盒，根据实施例3的检测方法对以下浓度样本分别进行检测：108CFU/ml、107CFU/ml、106CFU/ml、105CFU/ml、104CFU/ml、103CFU/ml的A族链球菌纯培养物以及不含A族链球菌的培养液。结果见图4，图4中：abcdefg分别对应不同浓度A族链球菌的检测结果，a：108CFU/ml；b：107CFU/ml；c：106CFU/ml；d：105CFU/ml；e：104CFU/ml；f：103CFU/ml；g：0CFU/ml。
根据图4结果，abcdefg的对照线均有颜色，结果可信，abc的检测线具有颜色，检出了A族链球菌，d的检测线颜色较浅，efg的检测线没有明显的颜色，因此，可以看出实施例1的A族链球菌抗原检测卡或实施例2提供的A族链球菌抗原检测试剂盒的最低检出限的浓度为不高于105CFU/ml。
2、特异性试验
采用实施例1提供的A族链球菌抗原检测卡或实施例2提供的A族链球菌抗原检测试剂盒，根据实施例3的检测方法对以下病原菌进行检测：
108CFU/ml的A族链球菌纯培养物、108CFU/ml的B族链球菌纯培养物、108CFU/ml的D族链球菌纯培养物，107PFU/ml的甲型流感病毒纯培养物，107PFU/ml的乙型流感病毒纯培养物。结果见图5，图5中：abcde对应不同的病原菌，a为A族链球菌，b为B族链球菌，c为D族链球菌，d为甲型流感病毒，e为乙型流感病毒。
图5结果显示，只有对A族链球菌样本检测的检测线和对照线具有明显的颜色，而针对B族链球菌、D族链球菌、甲型流感病毒、乙型流感病毒的检测结果均呈阴性，说明采用实施例1提供的A族链球菌抗原检测卡或实施例2提供的A族链球菌抗原检测试剂盒对呼吸道病原菌具有良好的特异性。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (11)

1.一种A族链球菌抗原试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
a.向胶体金溶液中加入碳酸钾调节pH，再依次加入抗A族链球菌抗体、牛血清白蛋白溶液，离心得到沉淀，沉淀用重悬液重悬得到胶体金标记的抗A族链球菌抗体；
b.将硝酸纤维素膜粘贴于聚氯乙烯底板上，得到贴膜的聚氯乙烯底板，置于室温中，湿度≤30%条件下或加干燥剂室温密封保存备用；
c.用包被液稀释抗A族链球菌抗体得到检测线工作液；用包被液稀释羊抗鼠IgG多抗得到对照线工作液；
d.用步骤a得到的胶体金标记的抗A族链球菌抗体对结合垫进行喷金处理得到免疫结合垫，用步骤c得到的检测线工作液、羊抗鼠IgG多抗对照线工作液分别在步骤b得到的贴膜的聚氯乙烯底板上的硝酸纤维素膜上进行划线处理，划线后置于室温中，湿度≤30%条件下干燥；
e.将样品垫、免疫结合垫、贴膜的聚氯乙烯底板和吸水纸依次组装后切割得到A族链球菌抗原检测试纸条。
2.根据权利要求1所述的A族链球菌抗原试纸条的制备方法，其特征在于：步骤a所述的具体步骤是向所述胶体金溶液中加入0.2M碳酸钾，混匀调节pH，然后加入抗A族链球菌抗体混匀后静置30min，再加入含10%牛血清白蛋白的牛血清白蛋白溶液，混匀静置30min，制得混合溶液，将混合溶液于4℃、转速为8000g的条件下离心30min得到沉淀，沉淀用重悬液重悬至所述混合溶液的体积的1/3，即得胶体金标记的抗A族链球菌抗体的溶液。
3.根据权利要求1或2所述的A族链球菌抗原试纸条的制备方法，其特征在于：步骤a中，所述碳酸钾为0.1-0.2M的碳酸钾溶液；
所述胶体金溶液的浓度（W/V）为0.01%-0.04%
所述碳酸钾溶液体积与胶体金溶液体积比例为：1-10 uL：1ml；
所述牛血清白蛋白溶液含有10%的牛血清白蛋白；
所述牛血清白蛋白溶液的加入体积为所述胶体金溶液体积的1%-10%；
所述重悬液为50mM 的三羟甲基氨基甲烷溶液；
所述三羟甲基氨基甲烷溶液每100ml含有：1g BSA、0.5g 聚乙烯吡咯烷酮、2g 海藻糖以及4g 蔗糖，pH值为8.5。
4.根据权利要求1所述的A族链球菌抗原试纸条的制备方法，其特征在于：步骤c中，所述包被液为0.01M-0.02M的磷酸盐缓冲液，每10mL包被液含有0.2g海藻糖，pH为7；
所述检测线工作液中抗A族链球菌抗体浓度为0.8-1.2mg/mL；所述对照线工作液中羊抗鼠IgG多抗的浓度为0.8-1.2mg/mL。
5.根据权利要求1所述的A族链球菌抗原试纸条的制备方法，其特征在于：步骤d中，所述喷金处理和划线处理均通过喷金划膜设备实现；
所述结合垫为玻璃纤维膜。
6.根据权利要求1所述的A族链球菌抗原试纸条的制备方法，其特征在于：步骤e中，所述样品垫为玻璃纤维膜；
所述样品垫在使用前，用样品垫处理液对样品垫浸泡后干燥，其中所述样品垫处理液是0.05M的三羟甲基氨基甲烷溶液，每100ml三羟甲基氨基甲烷溶液含有0.5g酪蛋白、0.5g表面活性剂S9以及1.0mL吐温20，pH为8.4-8.6。
7.一种A族链球菌抗原检测卡的制备方法，其特征在于：将权利要求1步骤e获得的A族链球菌抗原检测试纸条置入塑料外壳中，其中，塑料外壳的加样孔在样品垫上方，塑料外壳的观察窗在检测线T和对照线C上方。
8.一种A族链球菌抗原试剂盒的制备方法，其特征在于：将权利要求7中获得的A族链球菌毒抗原检测卡装入铝箔袋，与采样吸管、说明书装盒组成A族链球菌抗原检测试剂盒，其中吸样管可选。
9.一种A族链球菌抗原试纸条,试纸条自上而下依次由样品垫（1）、免疫结合垫（2）、硝酸纤维素膜（3）和吸水垫（6）粘贴于聚氯乙烯底板（7）上组成，其中，所述免疫结合垫上包被有标记胶体金的A族链球菌抗体，硝酸纤维素膜设有检测线T和控制线C，检测线包被了抗A族链球菌单克隆抗体，控制线包被了羊抗鼠IgG多抗。
10.一种A族链球菌抗原检测卡，包括装有权利要求9所述试纸条的塑料外壳（8），其中塑料外壳设有加样孔（9）和观察窗（10），加样孔在样品垫上方，观察窗在检测线T和对照线C上方。
11.一种A族链球菌抗原检测试剂盒，将权利要求10所述检测卡和采样吸管、说明书装盒得到试剂盒。
CN201910761785.7A 2019-08-21 2019-08-21 A族链球菌抗原检测试纸条、试剂盒及其制备方法 Pending CN110568187A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910761785.7A CN110568187A (zh) 2019-08-21 2019-08-21 A族链球菌抗原检测试纸条、试剂盒及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910761785.7A CN110568187A (zh) 2019-08-21 2019-08-21 A族链球菌抗原检测试纸条、试剂盒及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110568187A true CN110568187A (zh) 2019-12-13

Family

ID=68775689

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910761785.7A Pending CN110568187A (zh) 2019-08-21 2019-08-21 A族链球菌抗原检测试纸条、试剂盒及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110568187A (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111020042A (zh) * 2020-01-02 2020-04-17 圣湘生物科技股份有限公司 检测a族链球菌的组合物及方法
CN111856019A (zh) * 2020-02-04 2020-10-30 潍坊市康华生物技术有限公司 一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条、试剂盒及检测方法
CN111983228A (zh) * 2020-08-31 2020-11-24 山东康华生物医疗科技股份有限公司 一种高灵敏度检测a族乙型溶血性链球菌的试纸条、试剂盒及检测方法
CN114689854A (zh) * 2022-03-04 2022-07-01 北京泰格科信生物科技有限公司 一种b族链球菌抗原试纸条、检测卡、试剂盒及其制备方法和检测方法

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN200965534Y (zh) * 2006-10-27 2007-10-24 万华普曼生物工程有限公司 A型链球菌快速检测试纸
CN103926403A (zh) * 2014-04-29 2014-07-16 广州市微米生物科技有限公司 A族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡及其制备方法
CN203870107U (zh) * 2014-04-29 2014-10-08 广州市微米生物科技有限公司 A族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡
CN105277694A (zh) * 2014-08-18 2016-01-27 董俊 人a群链球菌量子点免疫层析检测卡及其制备方法和应用
CN105606808A (zh) * 2016-03-30 2016-05-25 珠海华澳生物科技有限公司 一种a/b族链球菌胶体金免疫层析检测装置及其检测方法
CN107942062A (zh) * 2017-11-29 2018-04-20 洛阳现代生物技术研究院有限公司 同步检测赭曲霉素、呕吐毒素和t‑2毒素的试纸卡、制备及检测方法
CN207717778U (zh) * 2016-12-30 2018-08-10 苏州和锐生物科技有限公司 TNF-α时间分辨荧光免疫层析定量检测试剂盒
CN108445211A (zh) * 2018-03-01 2018-08-24 珠海美华医疗科技有限公司 一种a族链球菌的poct荧光定量检测方法和检测试剂盒
CN108845128A (zh) * 2018-05-04 2018-11-20 广州敏捷生物技术有限公司 用于检测犬瘟热病毒抗原的免疫荧光层析检测卡与制备方法
CN108872163A (zh) * 2018-06-19 2018-11-23 哈尔滨工业大学 一种基于近红外激发和发射的血清标记物发光检测的侧流试纸条及其制备和使用方法

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN200965534Y (zh) * 2006-10-27 2007-10-24 万华普曼生物工程有限公司 A型链球菌快速检测试纸
CN103926403A (zh) * 2014-04-29 2014-07-16 广州市微米生物科技有限公司 A族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡及其制备方法
CN203870107U (zh) * 2014-04-29 2014-10-08 广州市微米生物科技有限公司 A族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡
CN105277694A (zh) * 2014-08-18 2016-01-27 董俊 人a群链球菌量子点免疫层析检测卡及其制备方法和应用
CN105606808A (zh) * 2016-03-30 2016-05-25 珠海华澳生物科技有限公司 一种a/b族链球菌胶体金免疫层析检测装置及其检测方法
CN207717778U (zh) * 2016-12-30 2018-08-10 苏州和锐生物科技有限公司 TNF-α时间分辨荧光免疫层析定量检测试剂盒
CN107942062A (zh) * 2017-11-29 2018-04-20 洛阳现代生物技术研究院有限公司 同步检测赭曲霉素、呕吐毒素和t‑2毒素的试纸卡、制备及检测方法
CN108445211A (zh) * 2018-03-01 2018-08-24 珠海美华医疗科技有限公司 一种a族链球菌的poct荧光定量检测方法和检测试剂盒
CN108845128A (zh) * 2018-05-04 2018-11-20 广州敏捷生物技术有限公司 用于检测犬瘟热病毒抗原的免疫荧光层析检测卡与制备方法
CN108872163A (zh) * 2018-06-19 2018-11-23 哈尔滨工业大学 一种基于近红外激发和发射的血清标记物发光检测的侧流试纸条及其制备和使用方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
龚成，等: "A族链球菌胶体金免疫层析试纸条的制备及其应用", 《分子影像杂志》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111020042A (zh) * 2020-01-02 2020-04-17 圣湘生物科技股份有限公司 检测a族链球菌的组合物及方法
CN111856019A (zh) * 2020-02-04 2020-10-30 潍坊市康华生物技术有限公司 一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条、试剂盒及检测方法
CN111983228A (zh) * 2020-08-31 2020-11-24 山东康华生物医疗科技股份有限公司 一种高灵敏度检测a族乙型溶血性链球菌的试纸条、试剂盒及检测方法
CN114689854A (zh) * 2022-03-04 2022-07-01 北京泰格科信生物科技有限公司 一种b族链球菌抗原试纸条、检测卡、试剂盒及其制备方法和检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110568187A (zh) A族链球菌抗原检测试纸条、试剂盒及其制备方法
CN111413495B (zh) 一种新型冠状病毒IgM/IgG胶体金检测试剂盒
CN111474354B (zh) 2019-nCoV新型冠状病毒检测层析试纸条、检测卡和试剂盒
CN107765002B (zh) 一种胶体金免疫层析试纸条及其制备方法和应用
CN104007261B (zh) 禽三种呼吸道疾病三联快速检测试剂盒及应用
JP6150559B2 (ja) マイコプラズマ・ニューモニアの検出方法
CN113533721B (zh) 甲型/乙型流感病毒抗原胶体金法检测试纸条及其制备方法
CN105950563B (zh) 杂交瘤细胞株7e3及其分泌的抗口蹄疫a型病毒的单克隆抗体与应用
WO2022032983A1 (zh) 一种检测非洲猪瘟病毒黏膜sIgA抗体的量子点微球免疫层析试纸条及其应用
CN111308072A (zh) 快速检测新型冠状病毒IgG抗体的胶体金免疫层析试剂盒及其制备方法
CN103033632B (zh) Abo血型反定型胶体金试剂盒及制备方法
CN101236201A (zh) 一种提高以胶体金属或乳胶颗粒作为标记物的检测试剂灵敏度的方法
CN112198312A (zh) 一种新型冠状病毒抗原与流感病毒抗原联合检测试剂条及其制备方法
WO2022053072A1 (zh) 荧光层析定量检测幽门螺杆菌抗体试剂卡及检测方法
CN111426839A (zh) 用于2019新型冠状病毒的检测试纸及制备工艺
CN110007095A (zh) 一种登革病毒ns1抗原检测试纸条、试剂盒及其制备方法
CN105759030B (zh) 一种检测弓形虫抗体的胶体金试纸条
CN114397458A (zh) 一种用于肺炎支原体抗原检测的检测盒
CN106771193B (zh) 一种单纯疱疹病毒II型IgM抗体的免疫层析检测试剂盒
CN101706499A (zh) Flag融合标签胶体金检测试纸条及其制备方法
CN105181964A (zh) 水貂阿留申病毒抗体胶体金检测试纸条及其制备方法
CN105527428B (zh) 一种快速检测大肠杆菌o157：h7的方法
CN111781353A (zh) 检测SARS-CoV-2抗体的胶体金试纸条及其制备方法和应用
CN110058010B (zh) 一种快速检测动物包虫自然感染抗体的试剂盒
CN113970637A (zh) 一种犬瘟热病毒乳胶微球检测试纸条及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20191213

RJ01 Rejection of invention patent application after publication