CN111983228A - 一种高灵敏度检测a族乙型溶血性链球菌的试纸条、试剂盒及检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的试纸条,其检测灵敏度高、显色速度快,并通过处理玻璃纤维使示踪物结合物垫与样品垫统一为抗体‑红色乳胶微球标记物一体垫,不会形成蓄水区,示踪物的释放速度加快,缩短判读时间,由于减少一道生产工序,节省了人工成本;还提供一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的试剂盒,其使用便捷、操作简单,可防止因混合顺序或混合比例不当易出现错误结果;还提供一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的检测方法,该方法简单、操作性强、耗时短。
Description
技术领域
本发明涉及A族乙型溶血性链球菌检测技术领域,具体是一种针对A族乙型溶血性链球菌检测的试纸条、试剂盒及检测方法。
背景技术
A族乙型溶血性链球菌(Group A streptococcus,StrepA),又称化脓性链球菌,占致病性链球菌90%以上,是链球菌中致病力最强的细菌,能产生多种酶和外毒素,可引起急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、猩红热、肺炎和变态反应性疾病,如急性风湿热(ARF)、风湿性心脏病(RHD)、急性肾小球肾炎等。
WHO数据表明,全球每年由A族乙型溶血性链球菌引起的急性咽峡炎约为6.16亿例,脓包病为1.11亿例,严重疾病约为1810万例,且每年新增178万例,每年至少有103.4万人死于A族乙型溶血性链球菌感染引起的疾病。该菌感染及其后遗症一直是困扰公共健康和国民经济的严重问题,尤其是对于儿童和青少年影响最大。随着人们生活水平的提高,发展中国家越来越重视临床用药的依据,因此A族乙型溶血性链球菌的检测势在必行。
目前检测A族乙型溶血性链球菌存在以下问题:
1、常用的样本为口咽拭子,且试剂盒灵敏度普遍为105及以上,此灵敏度试剂盒受拭子采样位置及采样量的影响较大,易出现假阴性的结果。
2、拭子需前期处理,需两种液体按比例混合,若混合顺序或混合比例不当易出现错误结果。
3、常规免疫层析法产品示踪物结合物垫压膜1mm,样品垫压示踪物垫1mm,如此搭联,会形成蓄水区,示踪物释放速度慢。
发明内容
本发明要解决的技术问题是针对以上不足,提供一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的试纸条,其检测灵敏度高、显色速度快,并通过处理玻璃纤维使示踪物结合物垫与样品垫统一为抗体-红色乳胶微球标记物一体垫,不会形成蓄水区,示踪物的释放速度加快,缩短判读时间,由于减少一道生产工序,节省了人工成本。
还提供一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的试剂盒,其使用便捷、操作简单,可防止因混合顺序或混合比例不当易出现错误结果。
还提供一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的检测方法,该方法简单、操作性强、耗时短。
为了解决以上技术问题,本发明采用的技术方案如下:
一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的试纸条,其特征在于:所述试剂条包括硝酸纤维素膜和抗体-红色乳胶微球标记物一体垫,所述抗体-红色乳胶微球标记物一体垫位于硝酸纤维素膜的下方,所述抗体-红色乳胶微球标记物一体垫带有颜色的一端与硝酸纤维素膜连接。
作为一种优化方案,所述抗体-红色乳胶微球标记物一体垫的制备方法如下:
(1)、红色乳胶微球的清洗、活化
量取粒径为400nm红色乳胶微球,按照每100μL加入900μL 的比例加入MES缓冲液(50mM,pH6.0)超声混匀,15000rpm离心15min,弃上清,留沉淀,如此操作两次,沉淀中加入1000μLMES缓冲液(50mM,pH6.0)复溶,超声混匀,分别加入NHS和EDC,使其终浓度为1mg/mL,室温孵育30min,15000rpm离心15min,弃上清,留沉淀,沉淀用10mL硼砂缓冲液(0.1mol/LNa2B4O7,所述硼砂缓冲液的pH8.5)重悬,振荡,超声处理后即成活化后的乳胶微球;
(2)、抗体-红色乳胶微球标记物制备
取A 族链球菌单克隆抗体加入步骤(1)制备的活化后的乳胶微球中(终浓度为0.5~1ug/mL),缓慢混匀,室温孵育6-10h, 17000-19000 r/min离心 10 min,弃上清;沉淀用10mL含有0.5%-1%酪蛋白的硼砂缓冲液重悬,超声后重复离心1次,去上清;沉淀如上述方法重悬,即为A族链球菌抗体-红色乳胶微球标记物,4℃放置备用;
(3)、含抗体-红色乳胶微球标记物一体垫的制备
玻璃纤维的预处理:将玻璃纤维用处理液浸泡,晾干后裁切成1.4cm*30cm的条式备用;所述处理液为pH8.0~9.0的Tris缓冲液、0.5mg/mL的BSA、0.15%吐温20、2%蔗糖;
在处理后的玻璃纤维结合垫上喷涂A族链球菌抗体-红色乳胶微球标记物,在1.4cm*30cm的条式玻璃纤维边缘只喷一条宽0.5-0.7cm长30cm抗体-红色乳胶微球标记物,喷涂量为50-60μL红色乳胶微球标记物,喷涂浓度为20%-50%,喷涂完后在相对湿度不超过30%的环境中37℃烘干,即制得含抗体-红色乳胶微球标记物一体垫,密封干燥保存备用。
作为一种优化方案,所述硝酸纤维素膜的制备方法如下:
所述硝酸纤维素膜上包被A 族链球菌单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体,形成检测线和质控线;所述A 族链球菌单克隆抗体浓度为1.5mg/mL,所述羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0mg/mL。
作为一种优化方案,其特征在于:还包括吸水纸和底板,所述硝酸纤维素膜粘贴在底板的中间位置,所述硝酸纤维素膜的上方与吸水纸粘贴。
一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的试剂盒,包括检测卡和样本稀释液,所述检测卡包括相互扣合的卡体和卡盖,所述卡体和卡盖之间具有上述的试纸条。
作为一种优化方案,所述样本处理液由A液和B液组成,所述A液包括2M的亚硝酸钠溶液、0.01%吐温20、0.1‰苯酚红,所述A液为粉红色,B液包括1M的醋酸、0.01%吐温20,所述B液为无色。
作为一种优化方案,所述A液和B液正确混合,则混合液体的颜色由粉红色变成无色,所述A液和B液没有正确混合,则混合液体的颜色不变色或深黄色。
一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的检测方法,其特征在于:所述检测方法包括以下步骤:
(1)样本处理
将处理液中的A液加入到样本处理管中,再加入处理液中的B液,挤压样本处理管外壁使A液和B液混匀,立即将已采样的拭子放到样本处理管中,转动挤压拭子10次,静置1分钟,然后从样本处理管外壁挤干拭子,使裂解后的混合液尽量多的留在管内,弃去拭子。
(2)检测
a、取出检测卡,放在台面上;
b、向检测卡的加样处中滴加约80~100μL步骤(1)中样本处理管中的液体;
c、5分钟判读结果, 10分钟后结果无效;
(3)结果判读
a、阳性(+):质控线和检测线各出现一条红线;
b、阴性(-):只有质控线出现一条红线,检测线位置无红线出现;
c、无效:质控线位置无线条出现,说明操作失误或试剂失效。
本发明采取以上技术方案,具有以下优点:
1、本发明采用红色乳胶微球,粒径400nm,为大颗粒胶体金粒径的5-10倍,极大的提高了灵敏度,由105提升至104。
2、本专利采用含示踪物的抗体-红色乳胶微球标记物一体垫,使示踪物结合物垫与样品垫统一为一片材质,避免了层与层之间搭联形成的蓄水区,加快了示踪物的释放速度,提升了显色速度,缩短了判读时间;而且由于硝酸纤维素膜下方只粘贴示踪物一体垫,减少了生产工序,极大的节约了人工成本。
3、本发明样本处理液中的A液和B液反应后会发生颜色变化,提示操作的正确性,避免了因混合顺序或混合比例不当出现错误结果。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述,实施例中未注明具体条件,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市场购买获得的常规产品。
所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例,基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1:一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的试纸条,所述试剂条包括吸水纸、底板、硝酸纤维素膜和抗体-红色乳胶微球标记物一体垫,所述抗体-红色乳胶微球标记物一体垫位于硝酸纤维素膜的下方,所述抗体-红色乳胶微球标记物一体垫带有颜色的一端与硝酸纤维素膜连接,所述硝酸纤维素膜粘贴在底板的中间位置,所述硝酸纤维素膜的上方与吸水纸粘贴,所述底板为PVC板,将上述步骤得到的产品压平整后,切成3.0mm宽的试纸条。
所述抗体-红色乳胶微球标记物一体垫的制备方法如下:
(1)、红色乳胶微球的清洗、活化
量取粒径为400nm红色乳胶微球,按照每100μL加入900μL 的比例加入MES缓冲液(50mM,pH6.0)超声混匀,15000rpm离心15min,弃上清,留沉淀,如此操作两次,沉淀中加入1000μLMES缓冲液(50mM,pH6.0)复溶,超声混匀,分别加入NHS和EDC,使其终浓度为1mg/mL,室温孵育30min,15000rpm离心15min,弃上清,留沉淀,沉淀用10mL硼砂缓冲液(0.1mol/LNa2B4O7,所述硼砂缓冲液的pH8.5)重悬,振荡,超声处理后即成活化后的乳胶微球。
(2)、抗体-红色乳胶微球标记物制备
取A 族链球菌单克隆抗体加入步骤(1)制备的活化后的乳胶微球中(终浓度为0.5ug/mL),缓慢混匀,室温孵育6h,17000 r/min离心 10 min,弃上清;沉淀用10mL含有0.5%酪蛋白的硼砂缓冲液重悬,超声后重复离心1次,去上清;沉淀如上述方法重悬,即为A族链球菌抗体-红色乳胶微球标记物,4℃放置备用。
(3)、含抗体-红色乳胶微球标记物一体垫的制备
玻璃纤维的预处理:将玻璃纤维用处理液浸泡,晾干后裁切成1.4cm*30cm的条式备用;所述处理液为pH8.0的Tris缓冲液、0.5mg/mL的BSA、0.15%吐温20、2%蔗糖。
在处理后的玻璃纤维结合垫上喷涂A族链球菌抗体-红色乳胶微球标记物,在1.4cm*30cm的条式玻璃纤维边缘只喷一条宽0.5cm长30cm抗体-红色乳胶微球标记物,喷涂量为50μL红色乳胶微球标记物,喷涂浓度为20%,喷涂完后在相对湿度不超过30%的环境中37℃烘干,即制得含抗体-红色乳胶微球标记物一体垫,密封干燥保存备用。
所述硝酸纤维素膜的制备方法如下:
所述硝酸纤维素膜上包被A 族链球菌单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体,形成检测线和质控线;所述A 族链球菌单克隆抗体浓度为1.5mg/mL,所述羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0mg/mL。
实施例2:一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的试纸条,所述试剂条包括吸水纸、底板、硝酸纤维素膜和抗体-红色乳胶微球标记物一体垫,所述抗体-红色乳胶微球标记物一体垫位于硝酸纤维素膜的下方,所述抗体-红色乳胶微球标记物一体垫带有颜色的一端与硝酸纤维素膜连接,所述硝酸纤维素膜粘贴在底板的中间位置,所述硝酸纤维素膜的上方与吸水纸粘贴,所述底板为PVC板,将上述步骤得到的产品压平整后,切成3.0mm宽的试纸条。
所述抗体-红色乳胶微球标记物一体垫的制备方法如下:
(1)、红色乳胶微球的清洗、活化
量取粒径为400nm红色乳胶微球,按照每100μL加入900μL 的比例加入MES缓冲液(50mM,pH6.0)超声混匀,15000rpm离心15min,弃上清,留沉淀,如此操作两次,沉淀中加入1000μLMES缓冲液(50mM,pH6.0)复溶,超声混匀,分别加入NHS和EDC,使其终浓度为1mg/mL,室温孵育30min,15000rpm离心15min,弃上清,留沉淀,沉淀用10mL硼砂缓冲液(0.1mol/LNa2B4O7,所述硼砂缓冲液的pH8.5)重悬,振荡,超声处理后即成活化后的乳胶微球;
(2)、抗体-红色乳胶微球标记物制备
取A 族链球菌单克隆抗体加入步骤(1)制备的活化后的乳胶微球中(终浓度为0.6ug/mL),缓慢混匀,室温孵育6-10h, 18000 r/min离心 10 min,弃上清;沉淀用10mL含有0.75%酪蛋白的硼砂缓冲液重悬,超声后重复离心1次,去上清;沉淀如上述方法重悬,即为A族链球菌抗体-红色乳胶微球标记物,4℃放置备用;
(3)、含抗体-红色乳胶微球标记物一体垫的制备
玻璃纤维的预处理:将玻璃纤维用处理液浸泡,晾干后裁切成1.4cm*30cm的条式备用;所述处理液为pH8.5的Tris缓冲液、0.5mg/mL的BSA、0.15%吐温20、2%蔗糖;
在处理后的玻璃纤维结合垫上喷涂A族链球菌抗体-红色乳胶微球标记物,在1.4cm*30cm的条式玻璃纤维边缘只喷一条宽0.6cm长30cm抗体-红色乳胶微球标记物,喷涂量为55μL红色乳胶微球标记物,喷涂浓度为30%,喷涂完后在相对湿度不超过30%的环境中37℃烘干,即制得含抗体-红色乳胶微球标记物一体垫,密封干燥保存备用。
所述硝酸纤维素膜的制备方法如下:
所述硝酸纤维素膜上包被A 族链球菌单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体,形成检测线和质控线;所述A 族链球菌单克隆抗体浓度为1.5mg/mL,所述羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0mg/mL。
实施例3:一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的试纸条,所述试剂条包括吸水纸、底板、硝酸纤维素膜和抗体-红色乳胶微球标记物一体垫,所述抗体-红色乳胶微球标记物一体垫位于硝酸纤维素膜的下方,所述抗体-红色乳胶微球标记物一体垫带有颜色的一端与硝酸纤维素膜连接,所述硝酸纤维素膜粘贴在底板的中间位置,所述硝酸纤维素膜的上方与吸水纸粘贴,所述底板为PVC板,将上述步骤得到的产品压平整后,切成3.0mm宽的试纸条。
所述抗体-红色乳胶微球标记物一体垫的制备方法如下:
(1)、红色乳胶微球的清洗、活化
量取粒径为400nm红色乳胶微球,按照每100μL加入900μL 的比例加入MES缓冲液(50mM,pH6.0)超声混匀,15000rpm离心15min,弃上清,留沉淀,如此操作两次,沉淀中加入1000μLMES缓冲液(50mM,pH6.0)复溶,超声混匀,分别加入NHS和EDC,使其终浓度为1mg/mL,室温孵育30min,15000rpm离心15min,弃上清,留沉淀,沉淀用10mL硼砂缓冲液(0.1mol/LNa2B4O7,所述硼砂缓冲液的pH8.5)重悬,振荡,超声处理后即成活化后的乳胶微球;
(2)、抗体-红色乳胶微球标记物制备
取A 族链球菌单克隆抗体加入步骤(1)制备的活化后的乳胶微球中(终浓度为1ug/mL),缓慢混匀,室温孵育10h, 19000 r/min离心 10 min,弃上清;沉淀用10mL含有1%酪蛋白的硼砂缓冲液重悬,超声后重复离心1次,去上清;沉淀如上述方法重悬,即为A族链球菌抗体-红色乳胶微球标记物,4℃放置备用;
(3)、含抗体-红色乳胶微球标记物一体垫的制备
玻璃纤维的预处理:将玻璃纤维用处理液浸泡,晾干后裁切成1.4cm*30cm的条式备用;所述处理液为pH9.0的Tris缓冲液、0.5mg/mL的BSA、0.15%吐温20、2%蔗糖;
在处理后的玻璃纤维结合垫上喷涂A族链球菌抗体-红色乳胶微球标记物,在1.4cm*30cm的条式玻璃纤维边缘只喷一条宽0.7cm长30cm抗体-红色乳胶微球标记物,喷涂量为60μL红色乳胶微球标记物,喷涂浓度为50%,喷涂完后在相对湿度不超过30%的环境中37℃烘干,即制得含抗体-红色乳胶微球标记物一体垫,密封干燥保存备用。
所述硝酸纤维素膜的制备方法如下:
所述硝酸纤维素膜上包被A 族链球菌单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体,形成检测线和质控线;所述A 族链球菌单克隆抗体浓度为1.5mg/mL,所述羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0mg/mL。
实施例4:一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的试剂盒,包括检测卡和样本稀释液,所述检测卡包括相互扣合的卡体和卡盖,所述卡体和卡盖之间具有实施例1-实施例3任一个实施例所述的试纸条,卡体上具有凹槽,试剂条为与凹槽内,检测卡和样本稀释液位于盒体内。
所述样本处理液由A液和B液组成,所述A液包括2M的亚硝酸钠溶液、0.01%吐温20、0.1‰苯酚红,所述A液为粉红色,B液包括1M的醋酸、0.01%吐温20,所述B液为无色。
所述A液和B液正确混合,则混合液体的颜色由粉红色变成无色,所述A液和B液没有正确混合,则混合液体的颜色不变色或深黄色。
实施例5:一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的检测方法,所述检测方法包括以下步骤:
(1)样本处理
将处理液中的A液加入到样本处理管中,再加入处理液中的B液,挤压样本处理管外壁使A液和B液混匀,立即将已采样的拭子放到样本处理管中,转动挤压拭子10次,静置1分钟,然后从样本处理管外壁挤干拭子,使裂解后的混合液尽量多的留在管内,弃去拭子。
(2)检测
a、从试剂盒中取出检测卡,放在台面上。
b、向检测卡的加样处中滴加约80~100μL步骤(1)中样本处理管中的液体。
c、5分钟判读结果, 10分钟后结果无效。
(3)结果判读
a、阳性(+):质控线(C)和检测线(T)各出现一条红线。
b、阴性(-):只有质控线(C)出现一条红线,检测线(T)位置无红线出现。
c、无效:质控线(C)位置无线条出现,说明操作失误或试剂失效。
本发明试剂盒的敏感性、特异性验证:
(1)敏感性
外购菌液浓度为109,梯度稀释至105、104、103,进行敏感性试验,结果如下:
105质控品 阳性。
104质控品 阳性。
103质控品 阴性。
(2)特异性验证(抗干扰能力):
以下菌液为109无交叉干扰:表皮葡萄球菌、卡他布兰汉菌、粪肠球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、白色念珠菌、B链球菌、C链球菌、G链球菌、F链球菌、肺炎链球菌、唾液链球菌,证明本试剂盒特异性好。
最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,实施方式的举例,其中未详细述及的部分均为本领域普通技术人员的公知常识,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的试纸条,其特征在于:所述试剂条包括硝酸纤维素膜和抗体-红色乳胶微球标记物一体垫,所述抗体-红色乳胶微球标记物一体垫位于硝酸纤维素膜的下方,所述抗体-红色乳胶微球标记物一体垫带有颜色的一端与硝酸纤维素膜连接。
2.如权利要求1所述的一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的试纸条,其特征在于:所述抗体-红色乳胶微球标记物一体垫的制备方法如下:
(1)、红色乳胶微球的清洗、活化
量取粒径为400nm红色乳胶微球,按照每100μL加入900μL 的比例加入MES缓冲液(50mM,pH6.0)超声混匀,15000rpm离心15min,弃上清,留沉淀,如此操作两次,沉淀中加入1000μLMES缓冲液(50mM,pH6.0)复溶,超声混匀,分别加入NHS和EDC,使其终浓度为1mg/mL,室温孵育30min,15000rpm离心15min,弃上清,留沉淀,沉淀用10mL硼砂缓冲液(0.1mol/LNa2B4O7,所述硼砂缓冲液的pH8.5)重悬,振荡,超声处理后即成活化后的乳胶微球;
(2)、抗体-红色乳胶微球标记物制备
取A 族链球菌单克隆抗体加入步骤(1)制备的活化后的乳胶微球中(终浓度为0.5~1ug/mL),缓慢混匀,室温孵育6-10h, 17000-19000 r/min离心 10 min,弃上清;沉淀用10mL含有0.5%-1%酪蛋白的硼砂缓冲液重悬,超声后重复离心1次,去上清;沉淀如上述方法重悬,即为A族链球菌抗体-红色乳胶微球标记物,4℃放置备用;
(3)、含抗体-红色乳胶微球标记物一体垫的制备
玻璃纤维的预处理:将玻璃纤维用处理液浸泡,晾干后裁切成1.4cm*30cm的条式备用;所述处理液为pH8.0~9.0的Tris缓冲液、0.5mg/mL的BSA、0.15%吐温20、2%蔗糖;
在处理后的玻璃纤维结合垫上喷涂A族链球菌抗体-红色乳胶微球标记物,在1.4cm*30cm的条式玻璃纤维边缘只喷一条宽0.5-0.7cm长30cm抗体-红色乳胶微球标记物,喷涂量为50-60μL红色乳胶微球标记物,喷涂浓度为20%-50%,喷涂完后在相对湿度不超过30%的环境中37℃烘干,即制得含抗体-红色乳胶微球标记物一体垫,密封干燥保存备用。
3.如权利要求1所述的一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的试纸条,其特征在于:所述硝酸纤维素膜的制备方法如下:
所述硝酸纤维素膜上包被A 族链球菌单克隆抗体和羊抗鼠IgG抗体,形成检测线和质控线;所述A 族链球菌单克隆抗体浓度为1.5mg/mL,所述羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0mg/mL。
4.如权利要求1-3任一项所述的一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的试纸条,其特征在于:还包括吸水纸和底板,所述硝酸纤维素膜粘贴在底板的中间位置,所述硝酸纤维素膜的上方与吸水纸粘贴。
5.一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的试剂盒,其特征在于:包括检测卡和样本稀释液,所述检测卡包括相互扣合的卡体和卡盖,所述卡体和卡盖之间具有权利要求1-4任一项权利要求所述的试纸条。
6.如权利要求5所述的一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的试剂盒,其特征在于:所述样本处理液由A液和B液组成,所述A液包括2M的亚硝酸钠溶液、0.01%吐温20、0.1‰苯酚红,所述A液为粉红色,B液包括1M的醋酸、0.01%吐温20,所述B液为无色。
7.如权利要求6所述的一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的试剂盒,其特征在于:所述A液和B液正确混合,则混合液体的颜色由粉红色变成无色,所述A液和B液没有正确混合,则混合液体的颜色不变色或深黄色。
8.一种高灵敏度检测A族乙型溶血性链球菌的检测方法,其特征在于:所述检测方法包括以下步骤:
(1)样本处理
将处理液中的A液加入到样本处理管中,再加入处理液中的B液,挤压样本处理管外壁使A液和B液混匀,立即将已采样的拭子放到样本处理管中,转动挤压拭子10次,静置1分钟,然后从样本处理管外壁挤干拭子,使裂解后的混合液尽量多的留在管内,弃去拭子;
(2)检测
a、取出检测卡,放在台面上;
b、向检测卡的加样处中滴加约80~100μL步骤(1)中样本处理管中的液体;
c、5分钟判读结果, 10分钟后结果无效;
(3)结果判读
a、阳性(+):质控线和检测线各出现一条红线;
b、阴性(-):只有质控线出现一条红线,检测线位置无红线出现;
c、无效:质控线位置无线条出现,说明操作失误或试剂失效。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114689854A (zh) * | 2022-03-04 | 2022-07-01 | 北京泰格科信生物科技有限公司 | 一种b族链球菌抗原试纸条、检测卡、试剂盒及其制备方法和检测方法 |
CN114966063A (zh) * | 2022-02-26 | 2022-08-30 | 北京泰格科信生物科技有限公司 | 一种抗缪勒管激素测定试剂盒及其制备方法 |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050277163A1 (en) * | 1997-07-25 | 2005-12-15 | Shu-Ching Cheng | Methods of use of one step immunochromatographic device for streptococcus a antigen |
CN103926403A (zh) * | 2014-04-29 | 2014-07-16 | 广州市微米生物科技有限公司 | A族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡及其制备方法 |
US20140220589A1 (en) * | 2010-09-23 | 2014-08-07 | Systagenix Wound Management (Us) Inc. | Ultrasensitive detection of beta hemolytic streptococcus |
CN207717778U (zh) * | 2016-12-30 | 2018-08-10 | 苏州和锐生物科技有限公司 | TNF-α时间分辨荧光免疫层析定量检测试剂盒 |
CN108398562A (zh) * | 2018-02-09 | 2018-08-14 | 河南省生物工程技术研究中心有限公司 | 胱抑素c荧光微球免疫层析定量检测试纸条及试纸卡 |
CN108445211A (zh) * | 2018-03-01 | 2018-08-24 | 珠海美华医疗科技有限公司 | 一种a族链球菌的poct荧光定量检测方法和检测试剂盒 |
CN110540597A (zh) * | 2018-12-20 | 2019-12-06 | 湖北工业大学 | 基于流感嗜血杆菌表面蛋白的乳胶微球免疫层析试纸的制备方法 |
CN110568187A (zh) * | 2019-08-21 | 2019-12-13 | 江苏硕世生物科技股份有限公司 | A族链球菌抗原检测试纸条、试剂盒及其制备方法 |
-
2020
- 2020-08-31 CN CN202010893746.5A patent/CN111983228A/zh active Pending
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050277163A1 (en) * | 1997-07-25 | 2005-12-15 | Shu-Ching Cheng | Methods of use of one step immunochromatographic device for streptococcus a antigen |
US20140220589A1 (en) * | 2010-09-23 | 2014-08-07 | Systagenix Wound Management (Us) Inc. | Ultrasensitive detection of beta hemolytic streptococcus |
CN103926403A (zh) * | 2014-04-29 | 2014-07-16 | 广州市微米生物科技有限公司 | A族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡及其制备方法 |
CN207717778U (zh) * | 2016-12-30 | 2018-08-10 | 苏州和锐生物科技有限公司 | TNF-α时间分辨荧光免疫层析定量检测试剂盒 |
CN108398562A (zh) * | 2018-02-09 | 2018-08-14 | 河南省生物工程技术研究中心有限公司 | 胱抑素c荧光微球免疫层析定量检测试纸条及试纸卡 |
CN108445211A (zh) * | 2018-03-01 | 2018-08-24 | 珠海美华医疗科技有限公司 | 一种a族链球菌的poct荧光定量检测方法和检测试剂盒 |
CN110540597A (zh) * | 2018-12-20 | 2019-12-06 | 湖北工业大学 | 基于流感嗜血杆菌表面蛋白的乳胶微球免疫层析试纸的制备方法 |
CN110568187A (zh) * | 2019-08-21 | 2019-12-13 | 江苏硕世生物科技股份有限公司 | A族链球菌抗原检测试纸条、试剂盒及其制备方法 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114966063A (zh) * | 2022-02-26 | 2022-08-30 | 北京泰格科信生物科技有限公司 | 一种抗缪勒管激素测定试剂盒及其制备方法 |
CN114689854A (zh) * | 2022-03-04 | 2022-07-01 | 北京泰格科信生物科技有限公司 | 一种b族链球菌抗原试纸条、检测卡、试剂盒及其制备方法和检测方法 |
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