CN111856019A - 一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条、试剂盒及检测方法 - Google Patents

一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条、试剂盒及检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种检测新型冠状病毒（2019‑nCoV）抗原的试纸条，包括胶体金双结合物垫，所述胶体金双结合物垫包括链霉亲和素结合物垫和双标记抗体结合物垫，所述双标记抗体结合物垫为胶体金和生物素标记；在制备胶体金双结合物垫时引入生物素‑亲和素放大系统，采用双标记抗体，提高抗原检测的灵敏度，有效降低漏检。

Description

一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条、试剂盒及 检测方法
技术领域
本发明涉及人呼吸道病毒检测领域，具体是一种针对新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原检测的试纸条、试剂盒及检测方法。
背景技术
目前，传染病仍是人类健康的重大威胁，尤其是急性呼吸道传染病，由于其种类多、 传播快、流行广等特点，发病率和死亡率高，对人类健康、社会稳定和经济发展造成重大威胁。冬春季是呼吸道传染病的高发季节，呼吸道感染主要病原体就是病毒，由于呼吸道病毒变异频繁，新的病毒或变异株不断出现，常易引起新发/突发传染病暴发流行。
2019-nCoV潜伏期较长，一般为3-7天，最长不超过14天，主要通过直接接触分泌物或气溶胶、飞沫传播，也有证据表明可经粪口途径传播；临床表现为发热、乏力等全身症状，伴有干咳、呼吸困难等，可迅速发展为重症肺炎、呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征、脓毒性休克、多器官功能衰竭，严重酸碱代谢紊乱等甚至危及生命。
目前，临床上病毒检测的金标准仍是病毒培养法，但该法耗时长、敏感性低、对实验操作要求高。目前检测新型冠状病毒（2019-nCoV）方法主要是PCR法，但需配套设备，对技术人员要求较高，而且操作复杂、耗时长，难以在基层开展应用。鉴于此，亟待有灵敏度高，特异性好，实验操作简单，且耗时短的用于检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原产品的出现。
发明内容
本发明要解决的技术问题是针对以上不足，提供一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，其检测灵敏度高、特异性好、操作简单，适用于新型冠状病毒（2019-nCoV）在社区卫生服务站、基层医院的早筛早诊。
还提供一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试剂盒，其使用便捷、操作简单，可以快速、准确检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原。
还提供一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的检测方法，该方法简单、操作性强、耗时短。
为了解决以上技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，包括胶体金双结合物垫，所述胶体金双结合物垫包括链霉亲和素结合物垫和双标记抗体结合物垫，所述双标记抗体结合物垫为胶体金和生物素标记。
在制备胶体金双结合物垫时引入生物素-亲和素放大系统，采用双标记抗体，提高抗原检测的灵敏度，有效降低漏检。
作为一种优化方案，所述链霉亲和素结合物垫的制备方法如下：
将40nm胶体金溶液调节pH为9.0，加入链霉亲和素，其终浓度为15～20μg/mL，室温静置1h，加入1/10体积含10% BSA磷酸盐溶液，室温静置30min，在4℃条件下7000 rpm离心30min，获得沉淀物即为胶体金标记的链霉亲和素，制得胶体金标记物；
取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后胶体金标记物40～50mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收、干燥，得链霉亲和素结合物垫。
作为一种优化方案，所述双标记抗体结合物垫的制备方法如下：
将13nm胶体金溶液调节pH为9.0，加入2019-nCoV抗体，其终浓度10～15μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL 生物素-N羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为1-2μmoL/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10% BSA磷酸盐溶液，室温静置30min，在4℃条件下10000 rpm离心30min，获得沉淀即为双标记抗体，制得双标记物；
取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后双标记物40～50mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收、干燥，得双标记抗体结合物垫。
作为一种优化方案，还包括样品垫，所述样品垫使用样品垫处理液处理，所述样品垫处理液包括pH为8～11的缓冲液、大分子聚合物、表面活性剂和封闭剂。
作为一种优化方案，所述缓冲液为10～200mM的Tris-HCL缓冲液；所述大分子聚合物为PVP、PEG20000中的至少一种，添加量为0.05%～1%；所述表面活性剂为吐温20、曲拉通X-100、S9中的至少两种，添加量为0.05%~0.5%；所述封闭剂为酪蛋白、BSA中的一种，添加量为0.05%～5%。
上述组分通过彼此之间的配合最终形成亲水性且具有强大缓冲能力的复合体系，使用上述样品垫可减慢样本处理液中水分子的流动，为示踪物的反应提供一个液体环境，使生物原料分布均匀；此外使用上述样品垫还能够对样本中抗原起到保护作用，降低非特异性反应。
作为一种优化方案，还包括硝酸纤维素膜、吸水纸和底板，所述底板中间位置粘贴硝酸纤维素膜，上方粘贴吸水纸，下方粘贴制备的链霉亲和素结合物垫、双标记抗体结合物垫和样品垫。
作为一种优化方案，所述硝酸纤维素膜上包被2019-nCoV抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线；所述2019-nCoV抗体浓度为0.8mg/mL，所述羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0mg/mL。
一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试剂盒，包括上述的试纸条和样本稀释液。
作为一种优化方案，所述样本稀释液包括pH为8.0～8.5的Tris-HCL缓冲液、质量分数为0.1～0.5％ 的酪蛋白、体积分数为0.01～0.04％的吐温20和体积分数为0.05～0.15％的Proclin-300。
一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的检测方法，其特征在于：所述检测方法包括以下步骤：
(1)检测：
a、检测样本包括口咽拭子、鼻咽拭子、痰液；
b、在附属的试剂管中加入0.5mL样本稀释液；
c、将采集样本后的棉棒浸在试剂管中的稀释液中搅拌，从试剂管的外侧，用手指挤压棉棒数次，使提取液充分浸透棉棒，然后拔出棉棒，绞出的液体作为样品待测；
d、滴加3滴（约100µL）步骤c制得的样品液到检测卡的加样孔，样品液通过加样孔到达试纸条，15分钟观察结果，20分钟后结果无效；
(2)结果判断：
a、阴性：仅质控区出现一条红色条带，在测试区内无红色条带出现；
b、阳性：两条条带出现，一条红色条带位于测试区内，另一条红色条带位于质控区；
c、无效：质控区未出现红色条带，表明操作过程不正确或检测卡已损坏。
本发明采取以上技术方案，具有以下优点：
1、本发明将生物素-亲和素放大系统应用于胶体金免疫层析体系，并采用双标记抗体技术即胶体金和生物素标记抗体，放大检测信号，从而提高抗原检测灵敏度，尤其是检测弱阳性样本时，有效降低假阴性。
2、采用胶体金双结合物垫，采用不同粒径的胶体金制备，粒径大小不同，层析速度有差异，有助于两个胶体金结合物垫中生物原料充分反应，提高检测的灵敏度。
3、本发明制备的试剂盒操作简单，个人可检测，达到真正的POCT检测，增加检测和诊疗的实效性，对感染者快速分流，阻断传染源，有效防止疫情扩散。
4、本发明的检测方法，步骤简单，可操作性强，可以快速、便捷的实现新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的检测。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，实施例中未注明具体条件，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市场购买获得的常规产品。
所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，包括胶体金双结合物垫样品垫，所述胶体金双结合物垫包括链霉亲和素结合物垫和双标记抗体结合物垫，此外还有硝酸纤维素膜、吸水纸和底板。
所述链霉亲和素结合物垫的制备方法如下：
将40nm胶体金溶液调节pH为9.0，加入链霉亲和素，其终浓度为17μg/mL，室温静置1h。加入1/10体积含10% BSA磷酸盐溶液，室温静置30min，在4℃、7000 rpm条件下离心30min，获得沉淀物即为胶体金标记的链霉亲和素，制得胶体金标记物。
取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后胶体金标记物45mL倒入不锈钢盘，复溶后胶体金标记物45mL含6.75mL链霉亲和素-AuNp，使金溶液完全均匀吸收、干燥，得链霉亲和素结合物垫。
所述双标记抗体结合物垫的制备方法如下：
将13nm胶体金溶液调节pH为9.0，加入2019-nCoV抗体，其终浓度10μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL 生物素-N羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为1μmoL/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10% BSA磷酸盐溶液，室温静置30min，在4℃、10000 rpm条件下离心30min，获得沉淀即为双标记抗体，制得双标记物；
取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后双标记物45mL倒入不锈钢盘，复溶后双标记物45mL含9mL的biotinylated-2019-nCoV抗体-AuNp，使金溶液完全均匀吸收、干燥，得双标记抗体结合物垫。
所述样品垫使用样品垫处理液处理，所述样品垫处理液包括pH为8～11的缓冲液、大分子聚合物、表面活性剂和封闭剂。
所述缓冲液为15mM的Tris-HCL缓冲液，所述大分子聚合物为PEG20000，所述表面活性剂为吐温20和S9，所述封闭剂为酪蛋白。
配制1L样品垫处理液：15mM Tris-HCL (pH 8.5)、4g PEG20000、5g酪蛋白、2.5mL吐温20、1mL S9。
处理样品垫：每张30cm×25cm的样品垫，用50mL所述处理液均匀涂布后置于电热鼓风干燥箱中干燥8h以上，干燥保存备用。
所述硝酸纤维素膜上包被2019-nCoV抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线；所述2019-nCoV抗体浓度为0.8mg/mL，所述羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0mg/mL。
所述底板为PVC板，中间粘贴硝酸纤维素膜，上方粘贴吸水纸，下方粘贴制备的链霉亲和素结合物垫、双标记抗体结合物垫和样品垫；将上述步骤得到的产品压平整后，切成4.0mm宽的试纸条。
实施例2：一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，包括胶体金双结合物垫样品垫，所述胶体金双结合物垫包括链霉亲和素结合物垫和双标记抗体结合物垫，此外还有硝酸纤维素膜、吸水纸和底板。
所述链霉亲和素结合物垫的制备方法如下：
将40nm胶体金溶液调节pH为9.0，加入链霉亲和素，其终浓度为15μg/mL，室温静置1h。加入1/10体积含10% BSA磷酸盐溶液，室温静置30min，在4℃、7000 rpm条件下离心30min，获得沉淀物即为胶体金标记的链霉亲和素，制得胶体金标记物。
取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后胶体金标记物45mL倒入不锈钢盘，复溶后胶体金标记物45mL含6.75mL链霉亲和素-AuNp，使金溶液完全均匀吸收、干燥，得链霉亲和素结合物垫。
所述双标记抗体结合物垫的制备方法如下：
将13nm胶体金溶液调节pH为9.0，加入2019-nCoV抗体，其终浓度10μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL 生物素-N羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为1μmoL/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10% BSA磷酸盐溶液，室温静置30min，在4℃、10000rpm条件下离心30min，获得沉淀即为双标记抗体，制得双标记物；
取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后双标记物45mL倒入不锈钢盘，复溶后双标记物45mL含9mL的biotinylated-2019-nCoV抗体-AuNp，使金溶液完全均匀吸收、干燥，得双标记抗体结合物垫。
所述样品垫使用样品垫处理液处理，所述样品垫处理液包括pH为8～11的缓冲液、大分子聚合物、表面活性剂和封闭剂。
所述缓冲液为15mM的Tris-HCL缓冲液，所述大分子聚合物为PEG20000，所述表面活性剂为吐温20和S9，所述封闭剂为酪蛋白。
配制1L样品垫处理液：15mM Tris-HCL (pH 8.5)、4g PEG20000、5g酪蛋白、2.5 mL吐温20、1mL S9。
处理样品垫：每张30cm×25cm的样品垫，用50mL所述处理液均匀涂布后置于电热鼓风干燥箱中干燥8h以上，干燥保存备用。
所述硝酸纤维素膜上包被2019-nCoV抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线；所述2019-nCoV抗体浓度为0.8mg/mL，所述羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0mg/mL。
所述底板为PVC板，中间粘贴硝酸纤维素膜，上方粘贴吸水纸，下方粘贴制备的链霉亲和素结合物垫、双标记抗体结合物垫和样品垫；将上述步骤得到的产品压平整后，切成4.0mm宽的试纸条。
实施例3：一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，包括胶体金双结合物垫样品垫，所述胶体金双结合物垫包括链霉亲和素结合物垫和双标记抗体结合物垫，此外还有硝酸纤维素膜、吸水纸和底板。
所述链霉亲和素结合物垫的制备方法如下：
将40nm胶体金溶液调节pH为9.0，加入链霉亲和素，其终浓度为19μg/mL，室温静置1h，加入1/10体积含10% BSA磷酸盐溶液，室温静置30min，在4℃、7000 rpm条件下离心30min，获得沉淀物即为胶体金标记的链霉亲和素，制得胶体金标记物。
取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后胶体金标记物40mL倒入不锈钢盘，复溶后胶体金标记物40mL含6mL链霉亲和素-AuNp，使金溶液完全均匀吸收、干燥，得链霉亲和素结合物垫。
所述双标记抗体结合物垫的制备方法如下：
将13nm胶体金溶液调节pH为9.0，加入2019-nCoV抗体，其终浓度13μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL生物素- N羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为1.5μmoL/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10% BSA磷酸盐溶液，室温静置30min，在4℃、10000 rpm条件下离心30min，获得沉淀即为双标记抗体，制得双标记物；
取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后双标记物40mL倒入不锈钢盘，复溶后双标记物40mL含8mL的biotinylated-2019-nCoV抗体-AuNp，使金溶液完全均匀吸收、干燥，得双标记抗体结合物垫。
所述样品垫使用样品垫处理液处理，所述样品垫处理液包括pH为8～11的缓冲液、大分子聚合物、表面活性剂和封闭剂。
所述缓冲液为10mM的Tris-HCL缓冲液，所述大分子聚合物为PEG20000，所述表面活性剂为吐温20和S9，所述封闭剂为酪蛋白。
配制1L样品垫处理液：10mM Tris-HCL(pH 8.0)、0.5g PEG20000、0.5g酪蛋白、0.4mL吐温20、0.1mL S9。
处理样品垫：每张30cm×25cm的样品垫，用50mL所述处理液均匀涂布后置于电热鼓风干燥箱中干燥8h以上，干燥保存备用。
所述硝酸纤维素膜上包被2019-nCoV抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线；所述2019-nCoV抗体浓度为0.8mg/mL，所述羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0mg/mL。
所述底板为PVC板，中间粘贴硝酸纤维素膜，上方粘贴吸水纸，下方粘贴制备的链霉亲和素结合物垫、双标记抗体结合物垫和样品垫；将上述步骤得到的产品压平整后，切成4.0mm宽的试纸条。
实施例4：一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，包括胶体金双结合物垫样品垫，所述胶体金双结合物垫包括链霉亲和素结合物垫和双标记抗体结合物垫，此外还有硝酸纤维素膜、吸水纸和底板。
所述链霉亲和素结合物垫的制备方法如下：
将40nm胶体金溶液调节pH为9.0，加入链霉亲和素，其终浓度为20μg/mL，室温静置1h，加入1/10体积含10% BSA磷酸盐溶液，室温静置30min，在4℃、7000 rpm条件下离心30min，获得沉淀物即为胶体金标记的链霉亲和素，制得胶体金标记物。
取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后胶体金标记物50mL倒入不锈钢盘，复溶后胶体金标记物50mL含7.5mL链霉亲和素-AuNp，使金溶液完全均匀吸收、干燥，得链霉亲和素结合物垫。
所述双标记抗体结合物垫的制备方法如下：
将13nm胶体金溶液调节pH为9.0，加入2019-nCoV抗体，其终浓度15μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL生物素-N羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为2μmoL/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10% BSA磷酸盐溶液，室温静置30min，在4℃、10000 rpm条件下离心30min，获得沉淀即为双标记抗体，制得双标记物；
取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后双标记物50mL倒入不锈钢盘，复溶后双标记物50mL含10mL biotinylated-2019-nCoV抗体-AuNp，使金溶液完全均匀吸收、干燥，得双标记抗体结合物垫。
所述样品垫使用样品垫处理液处理，所述样品垫处理液包括pH为8～11的缓冲液、大分子聚合物、表面活性剂和封闭剂。
所述缓冲液为200mM的Tris-HCL缓冲液，所述大分子聚合物为PEG20000，所述表面活性剂为吐温20和S9，所述封闭剂为酪蛋白。
配制1L样品垫处理液：200mM Tris-HCL(pH 11)、10g PEG20000、50g酪蛋白、4mL吐温20、1mL S9。
处理样品垫：每张30cm×25cm的样品垫，用50mL所述处理液均匀涂布后置于电热鼓风干燥箱中干燥8h以上，干燥保存备用。
所述硝酸纤维素膜上包被2019-nCoV抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线；所述2019-nCoV抗体浓度为0.8mg/mL，所述羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0mg/mL。
所述底板为PVC板，中间粘贴硝酸纤维素膜，上方粘贴吸水纸，下方粘贴制备的链霉亲和素结合物垫、双标记抗体结合物垫和样品垫；将上述步骤得到的产品压平整后，切成4.0mm宽的试纸条。
实施例5：一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试剂盒，包括实施例1-4其中之一所述的试纸条和样本稀释液。
所述样本稀释液包括pH为8.0～8.5的Tris-HCL缓冲液、质量分数为0.1～0.5％的酪蛋白、体积分数为0.01～0.04％的吐温20和体积分数为0.05～0.15％的Proclin-300。
配制1L样本稀释液：10mM Tris-HCL (pH 8.0)、5g酪蛋白、0.2mL吐 温20 、1mLProclin-300 ，余量为纯化水。
将试纸条置于检测卡中，试纸条位于检测卡卡体的凹槽内，将卡盖和卡体扣合，得到2019-nCoV抗原检测卡；将配制的样本稀释液液装入瓶内，与检测卡分别置于盒体内，得到2019-nCoV抗原检测试剂盒。
实施例6：一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试剂盒，包括实施例1-4其中之一所述的试纸条和样本稀释液。
配制1L样本稀释液：15mMTris-HCL (pH 8.5)、1g酪蛋白、0.1mL吐温20 、0.5mLProclin-300 ，余量为纯化水。
将试纸条置于检测卡中，试纸条位于检测卡卡体的凹槽内，将卡盖和卡体扣合，得到2019-nCoV抗原检测卡；将配制的样本稀释液液装入瓶内，与检测卡分别置于盒体内，得到2019-nCoV抗原检测试剂盒。
实施例7：一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试剂盒，包括实施例1-4其中之一所述的试纸条和样本稀释液。
配制1L样本稀释液：15mM Tris-HCL (pH 8.5)、3g酪蛋白、0.4mL吐 温20 、 1.5mLProclin-300，余量为纯化水。
将试纸条置于检测卡中，试纸条位于检测卡卡体的凹槽内，将卡盖和卡体扣合，得到2019-nCoV抗原检测卡；将配制的样本稀释液液装入瓶内，与检测卡分别置于盒体内，得到2019-nCoV抗原检测试剂盒。
实施例8：一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
(1)检测：
a、检测样本包括口咽拭子、鼻咽拭子、痰液；
b、在附属的试剂管中加入0.5mL样本稀释液；
c、将采集样本后的棉棒浸在试剂管中的稀释液中搅拌，从试剂管的外侧，用手指挤压棉棒数次，使提取液充分浸透棉棒，然后拔出棉棒，绞出的液体作为样品待测；
d、滴加3滴（约100µL）步骤c制得的样品液到检测卡的加样孔，样品液通过加样孔到达试纸条，15分钟观察结果，20分钟后结果无效；
(2)结果判断：
a、阴性：仅质控区（C）出现一条红色条带，在测试区（T）内无红色条带出现。
b、阳性：两条条带出现。一条红色条带位于测试区（T）内，另一条红色条带位于质控区（C）。
c、无效：质控区（C）未出现红色条带，表明操作过程不正确或检测卡已损坏。
本发明灵敏度试验：
将2019-nCoV抗原按下表进行稀释，各稀释20份，结果如下表：
抗原浓度(ng/mL) 100 10 5 0.5 0.4 0.3
检出情况 100% 100% 100% 95% 85% 80%
本发明最低可检出0.5ng/mL。
本发明试剂盒的特异性（抗干扰能力）试验：
临床检验中，检测样本常包含与抗原结构相近或临床症状相似的其他病原体，选取临床确诊副流感病毒（混合）、肺炎衣原体、肺炎支原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎链球菌、流感病毒A型、流感病毒B型阳性样本各10例，用本发明的试剂盒检测，结果均为阴性，证明本试剂盒特异性好，不与副流感病毒（混合）、肺炎衣原体、肺炎支原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎链球菌、流感病毒A型、流感病毒B型产生交叉反应。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，实施方式的举例，其中未详细述及的部分均为本领域普通技术人员的公知常识，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，其特征在于：包括胶体金双结合物垫，所述胶体金双结合物垫包括链霉亲和素结合物垫和双标记抗体结合物垫，所述双标记抗体结合物垫为胶体金和生物素标记。
2.如权利要求1所述的一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，其特征在于：所述链霉亲和素结合物垫的制备方法如下：
将40nm胶体金溶液调节pH为9.0，加入链霉亲和素，其终浓度为15～20μg/mL，室温静置1h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置30min，在4℃、7000rpm条件下离心30min，获得沉淀物即为胶体金标记的链霉亲和素，制得胶体金标记物；
取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后胶体金标记物40～50mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收、干燥，得链霉亲和素结合物垫。
3.如权利要求1所述的一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，其特征在于：所述双标记抗体结合物垫的制备方法如下：
将13nm胶体金溶液调节pH为9.0，加入2019-nCoV抗体，其终浓度10～15μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL生物素-N羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为1-2μmoL/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10% BSA磷酸盐溶液，室温静置30min，在4℃、10000 rpm条件下离心30min，获得沉淀即为双标记抗体，制得双标记物；
取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后双标记物40～50mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收、干燥，得双标记抗体结合物垫。
4.如权利要求1-3任一项权利要求所述的一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，其特征在于：还包括样品垫，所述样品垫使用样品垫处理液处理，所述样品垫处理液包括pH为8～11的缓冲液、大分子聚合物、表面活性剂和封闭剂。
5.如权利要求4所述的一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，其特征在于：所述缓冲液为10～200mM的Tris-HCL缓冲液；所述大分子聚合物为PVP、PEG20000中的至少一种，添加量为0.05%～1%；所述表面活性剂为吐温20、曲拉通X-100、S9中的至少两种，添加量为0.05%~0.5%；所述封闭剂为酪蛋白、BSA中的一种，添加量为0.05%～5%。
6.如权利要求4所述的一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，其特征在于：还包括硝酸纤维素膜、吸水纸和底板，所述底板的中间位置粘贴硝酸纤维素膜，上方粘贴吸水纸，下方粘贴制备的链霉亲和素结合物垫、双标记抗体结合物垫和样品垫。
7.如权利要求5所述的一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条，其特征在于：所述硝酸纤维素膜上包被2019-nCoV抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线；所述2019-nCoV抗体浓度为0.8mg/mL，所述羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0mg/mL。
8.一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1-7任一项权利要求所述的试纸条和样本稀释液。
9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：所述样本稀释液包括pH为8.0～8.5的Tris-HCL缓冲液、质量分数为0.1～0.5％ 的酪蛋白、体积分数为0.01～0.04％的吐温20和体积分数为0.05～0.15％的Proclin-300。
10.一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的检测方法，其特征在于：所述检测方法包括以下步骤：
(1)检测：
a、检测样本包括口咽拭子、鼻咽拭子、痰液；
b、在附属的试剂管中加入0.5mL样本稀释液；
c、将采集样本后的棉棒浸在试剂管中的稀释液中搅拌，从试剂管的外侧，用手指挤压棉棒数次，使提取液充分浸透棉棒，然后拔出棉棒，绞出的液体作为样品待测；
d、滴加3滴（约100µL）步骤c制得的样品液到检测卡的加样孔，样品液通过加样孔到达试纸条，15分钟观察结果，20分钟后结果无效；
(2)结果判断：
a、阴性：仅质控区出现一条红色条带，在测试区内无红色条带出现；
b、阳性：两条条带出现，一条红色条带位于测试区内，另一条红色条带位于质控区；
c、无效：质控区未出现红色条带，表明操作过程不正确或检测卡已损坏。
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