CN112362869B - 一种多项呼吸道抗原检测卡及试剂盒 - Google Patents

一种多项呼吸道抗原检测卡及试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN112362869B
CN112362869B CN202110045330.2A CN202110045330A CN112362869B CN 112362869 B CN112362869 B CN 112362869B CN 202110045330 A CN202110045330 A CN 202110045330A CN 112362869 B CN112362869 B CN 112362869B
Authority
CN
China
Prior art keywords
test strip
antibody
influenza
respiratory
virus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110045330.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112362869A (zh
Inventor
杨帆
李桂芹
秦冬力
赵鹏
孙树凯
张静静
杨明霞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong Kanghua Biomedical Technology Co Ltd
Original Assignee
Shandong Kanghua Biomedical Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong Kanghua Biomedical Technology Co Ltd filed Critical Shandong Kanghua Biomedical Technology Co Ltd
Priority to CN202110045330.2A priority Critical patent/CN112362869B/zh
Publication of CN112362869A publication Critical patent/CN112362869A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112362869B publication Critical patent/CN112362869B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911—Bacteria
    • G01N33/56933—Mycoplasma
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/585—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex
    • G01N33/587—Nanoparticles
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/01—DNA viruses
    • G01N2333/075—Adenoviridae
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/11—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/115—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
    • G01N2333/135—Respiratory syncytial virus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/30—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Mycoplasmatales, e.g. Pleuropneumonia-like organisms [PPLO]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
    • G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及一种多项呼吸道抗原检测卡，检测卡包括甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条，甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条均包括胶体金结合物垫，胶体金结合物垫包括链霉亲和素结合物垫和双纳米颗粒双标记抗体结合物垫；本检测卡中的试纸条使生物原料反应充分，提高抗原检测的灵敏度，有效降低漏检，同时样品垫中添加阻断剂提高特异性，能够同时检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道腺病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎支原体抗原。

Description

一种多项呼吸道抗原检测卡及试剂盒
技术领域
本发明涉及人呼吸道病毒检测领域，具体是一种针对甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道腺病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎支原体抗原检测卡及试剂盒。
背景技术
流感病毒有甲、乙、丙三型，甲型最容易引起流行，乙型次之，丙型极少引起流行。依据外膜植物血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）蛋白抗原性的不同，甲型流感病毒目前可分为15个H亚型（H1～H15）和9个N亚型（N1～N9）。由于编码HA和（或）NA的核酸序列容易发生突变，致使HA和（或）NA的抗原表位发生改变，这种抗原性的转变使人群原有的特异性免疫力失效，故甲型流感病毒常引起较大规模甚至世界性的流感流行。易感人群多为老年人（>65岁）和婴幼儿（<6岁）；临床特点为急起高热，全身酸痛、乏力，或伴轻度呼吸道症状。该病潜伏期短，传染性强，传播迅速。流感病毒分甲、乙、丙三型，甲型流感威胁最大。由于流感病毒致病力强，易发生变异，若人群对变异株缺乏免疫力，易引起暴发流行，迄今世界已发生过五次大的流行和若干次小流行，造成数十亿人发病，数千万人死亡，严重影响了人们的社会生活和生产建设。
呼吸道合胞病毒(RSV)是一种单链、负股、有包膜的RNA病毒，为副黏病毒科肺炎病毒属成员，根据单克隆抗体及核苷酸序列不同，RSV分为A、B 两个抗原亚型，每一亚型又根据G蛋白抗原的不同分为不同的亚系，主要区别在于G、F、N、P蛋白上的抗原组成不同，G蛋白负责病毒与细胞的黏附，F蛋白负责病毒侵入细胞内，同时融合多个细胞膜形成多核巨细胞，对于RSV来说是不可缺少的。该病经空气飞沫和密切接触传播。多见于新生儿和6 个月以内的婴儿，潜伏期3～7日，婴幼儿症状较重，可有高热、鼻炎、咽炎及喉炎，以后表现为细支气管炎及肺炎。少数病儿可并发中耳炎、胸膜炎及心肌炎等。成人和年长儿童感染后，主要表现为上呼吸道感染。
人腺病毒（Human adenovirus，HAdV），腺病毒呈无囊膜的球形结构，其病毒粒子在感染的细胞核内常呈晶格状排列，每个病毒颗粒包含一个36 kb的线性双链DNA，有核衣壳。目前已发现的腺病毒有7个亚群（A～G），86个型别，其中对人类具有致病性的有55个血清型。可感染呼吸系统、消化系统、泌尿系统和眼等，引起相应的临床症状，但呼吸道腺病毒更为常见，其中可导致呼吸道感染的腺病毒包括腺病毒3、7、11、14、21、55型等，主要集中在B亚属，B亚属分别为两个亚种分别命名为B1（腺病毒3、7、16、21和50型）和B2（腺病毒11、14、34和35型），其中3、4、7、14型为最常见的引起爆发疫情的型别。感染后，主要表现为呼吸道感染，一般有发热、咳嗽、咽痛、流涕、肺部啰音类似典型肺炎的表现。
肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae，MP）属细胞外寄生菌，是人类原发性非典型肺炎的病原体。支原体大小介于细菌与病毒之间肺炎支原体，是已知能独立生活的病原微生物中最小者。含DNA和RNA，缺乏细胞壁，呈球形、杆状、丝状等多种形态，革兰染色阴性。MP感染，由支原体感染引起，其基本病理呈间质性肺炎或毛细支气管炎样改变，临床表现以顽固性剧烈咳嗽为特征。
MP肺炎的发病主要是由飞沫传播，当病原体由呼吸道进入后，在粘膜表面与呼吸道粘膜上皮细胞的神经氨酸受体紧密结合而附着，从而造成粘膜上皮细胞的破坏，这是MP的主要致病方式。
黏附素主要包括P1和P30。P1被认为是肺炎支原体的主要黏附素。缺乏P1或P1 在顶器表面分布不足或未定居于顶器表面的合适位置，肺炎支原体就不能黏附于呼吸道上皮，也无毒力。研究证明 P1 蛋白还有抗原性及免疫原性。
经研究发现了一个阻止MP对小鸡红细胞黏附的单克隆抗体，能识别野生性肺炎支原体中的一个20kDa蛋白，即P30蛋白。并发现肺炎支原体Ⅱ型非吸附无毒力突变珠不存在P30 蛋白，而Ⅱ型突变株的回复后又可重新合成P30蛋白，并获得细胞黏附功能，并具有毒力。P30与P1相似，群居于顶器上，具有高的免疫原性，与P1黏附素有许多共同的特征。
病原体感染的实验室检查方法，主要分为分离培养、血清学检测和抗原检测三种。分离培养有诊断意义，但其漏诊率较高，因此后期大多采用血清型检测进行诊断，而抗原检测凭借其敏感性高、特异性强的优势，慢慢取代血清学检测，对病原体感染的预防、诊断、治疗和预后都有极大贡献。
发明内容
本发明要解决的技术问题是针对以上不足，提供一种多项呼吸道抗原检测卡，检测卡可以快速、准确检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道腺病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎支原体抗原，可同时检测鼻咽拭子、口咽拭子不同检测介质中的甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道腺病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎支原体抗原，一次性取样可同时检测多种病原体，可更好的辅助临床呼吸道感染的病因诊断、鉴别诊断和临床用药。
还提供一种多项呼吸道抗原试剂盒，该试剂盒操作简单，携带方便，个人可检测，达到真正的POCT检测，可有效控制因就医筛查引起的疫情传播；病毒感染出现症状后即可检测出，可用于疾病早期诊断，对患者的治疗有重要的指导意义。
为了解决以上技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种多项呼吸道抗原检测卡，检测卡包括甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条，甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条均包括胶体金结合物垫，胶体金结合物垫包括链霉亲和素结合物垫和双纳米颗粒双标记抗体结合物垫；
链霉亲和素结合物垫的制备方法如下：
调节40nm胶体金溶液至PH为9.0，加入链霉亲和素，终浓度为8～15μg/mL，室温静置1h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置1h，在4℃8000rpm离心30min获得沉淀物即为胶体金标记的链霉亲和素，取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后胶体金标记物40～50mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收，干燥，得链霉亲和素结合物垫；
双纳米颗粒双标记抗体结合物垫的制备方法如下：
调节13nm胶体金溶液PH至8.5，加入相应标记抗体，甲型流感病毒抗体、乙型流感病毒抗体、呼吸道腺病毒抗体、呼吸道合胞病毒抗体或肺炎支原体抗体，终浓度15～20μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL 生物素-N-羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为1～2µmol/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置1h，在4℃10000rpm离心30min获得沉淀即为小颗粒纳米金；
调节80nm胶体金溶液PH至9.0，加入相应标记抗体，甲型流感病毒抗体、乙型流感病毒抗体、呼吸道腺病毒抗体、呼吸道合胞病毒抗体或肺炎支原体抗体，终浓度20～30μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL 生物素-N-羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为1～2µmol/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置1h，在4℃8000rpm离心45min获得沉淀即为大颗粒纳米金；
小颗粒纳米金与大颗粒纳米金按一定体积比混合制得双纳米颗粒双标记抗体混合物，其比例为3:5；
取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后双纳米颗粒双标记抗体混合物40～50mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收，干燥，得双纳米颗粒双标记抗体结合物垫。
作为一种优化方案，甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条均包括样品垫，样品垫使用样品垫处理液处理，样品垫处理液包括pH为8.0～11.0的缓冲液、大分子聚合物、表面活性剂、封闭剂和阻断剂。
作为一种优化方案，相对于每100mL的缓冲液， 大分子聚合物的添加量为0.05～0.20g，表面活性剂的添加量为0.05～0.20mL，封闭剂的添加量为0.05～0.20g，阻断剂的添加量为0.5～2.0mL。
作为一种优化方案，缓冲液为Tris缓冲液、磷酸缓冲液、硼酸缓冲液中的一种；大分子聚合物为PVP、PEG20000中的至少一种；表面活性剂为吐温20、吐温80、曲拉通100、S9、S21中的至少两种；封闭剂为酪蛋白、酪蛋白钠、BSA中的一种；阻断剂为HBR。
作为一种优化方案，缓冲液为10～100mM的Tris-HCL缓冲液；大分子聚合物为PVP；表面活性剂为曲拉通100、S9；封闭剂为酪蛋白钠；阻断剂为HBR。
作为一种优化方案，还包括硝酸纤维素膜、吸水纸和底板，底板的中间位置粘贴硝酸纤维素膜，上方粘贴吸水纸，下方粘贴制备的链霉亲和素结合物垫、双纳米颗粒双标记抗体结合物垫和样品垫。
作为一种优化方案，硝酸纤维素膜上包被相应抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线。
作为一种优化方案，甲型流感病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被甲型流感病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线；甲型流感病毒抗体浓度为1.5～2.0mg/mL；羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0～2.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
乙型流感病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被乙型流感病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，乙型流感病毒抗体浓度为1.5～2.0mg/mL；羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0～2.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
呼吸道腺病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被呼吸道腺病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，呼吸道腺病毒抗体浓度为1.5～2.0mg/mL；羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0～2.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
呼吸道合胞病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被呼吸道合胞病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，呼吸道合胞病毒抗体浓度为1.5～2.0mg/mL；羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0～2.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
肺炎支原体抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被肺炎支原体抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，肺炎支原体抗体浓度为1.5～2.0mg/mL，其P1:P30比例3:2；羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0～2.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用。
一种多项呼吸道抗原试剂盒，试剂盒包括上述检测卡和样本稀释液。
作为一种优化方案，样本稀释液包括PH为8.0～10.5的Tris-HCL缓冲液、质量分数为0.1～1.0％ 的酪蛋白、体积分数为0.01～0.10％的吐温20、体积分数为0.05～0.20％的曲拉通100和体积分数为0.10～0.20％的Proclin-300。
本发明采取以上技术方案，具有以下优点：
1、本专利检测卡中的试纸条将亲和素-生物素放大系统应用于胶体金颗粒免疫层析体系，并采用双纳米颗粒双标记抗体，使生物原料反应充分，提高抗原检测的灵敏度，有效降低漏检，同时样品垫中添加阻断剂提高特异性，能够同时检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道腺病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎支原体抗原，为提高抗原检测的灵敏度，同时采用双胶体金颗粒结合物垫，采用不同粒径的胶体金颗粒标记制备，粒径大小不同，层析速度略有差异，有助于两个胶体金结合物垫中生物原料充分反应。
2、本专利检测卡可以快速、准确检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道腺病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎支原体抗原，可同时检测鼻咽拭子、口咽拭子、痰液不同检测介质中的甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道腺病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎支原体抗原，一次性取样可同时检测多种病原体，可更好的辅助临床呼吸道感染的病因诊断、鉴别诊断和临床用药。
3、本专利试剂盒操作简单，携带方便，个人可检测，达到真正的POCT检测，可有效控制因就医筛查引起的疫情传播；病毒感染出现症状后即可检测出，可用于疾病早期诊断，对患者的治疗有重要的指导意义，同时分辨并排除相关呼吸道病原体感染，及时阻断传染源。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，实施例中未注明具体条件，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市场购买获得的常规产品。
所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：一种多项呼吸道抗原检测卡，检测卡包括甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条、肺炎支原体抗原试纸条、卡体和卡盖，卡体和卡盖扣合在一起，卡体上设置有凹槽，甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条位于凹槽内。
甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条均包括底板、样品垫、胶体金结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，底板为PVC板，样品垫、胶体金结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸粘贴在底板上且依次搭接，胶体金结合物垫包括链霉亲和素结合物垫和双纳米颗粒双标记抗体结合物垫，在底板的中间位置粘贴制备的硝酸纤维素膜，在底板固定硝酸纤维素膜位置的上方粘贴吸水纸；在底板固定硝酸纤维素膜位置的下方，粘贴制备的胶体金结合物垫包括链霉亲和素结合物垫、双纳米颗粒双标记抗体结合物垫、样品垫，将上述步骤得到的产品压平整后，切成3.0mm～4.0mm宽的试纸条。
链霉亲和素结合物垫的制备方法如下：
调节40nm胶体金溶液至PH为9.0，加入链霉亲和素，终浓度为8μg/mL，室温静置1h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置1h，在4℃8000rpm离心30min获得沉淀物即为胶体金标记的链霉亲和素，取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后胶体金标记物40mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收，干燥，得链霉亲和素结合物垫。
双纳米颗粒双标记抗体结合物垫的制备方法如下：
调节13nm胶体金溶液PH至8.5，加入相应标记抗体（甲型流感病毒抗体/乙型流感病毒抗体/呼吸道腺病毒抗体/呼吸道合胞病毒抗体/肺炎支原体抗体），终浓度15μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL 生物素-N-羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为1µmol/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置1h，在4℃10000rpm离心30min获得沉淀即为小颗粒纳米金。
调节80nm胶体金溶液PH至9.0，加入相应标记抗体（甲型流感病毒抗体/乙型流感病毒抗体/呼吸道腺病毒抗体/呼吸道合胞病毒抗体/肺炎支原体抗体），终浓度20μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL 生物素-N-羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为1µmol/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置1h，在4℃8000rpm离心45min获得沉淀即为大颗粒纳米金。
小颗粒纳米金与大颗粒纳米金按一定体积比混合制得双纳米颗粒双标记抗体混合物，其比例为3:5。
取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后双纳米颗粒双标记抗体混合物40mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收，干燥，得双纳米颗粒双标记抗体结合物垫。
甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条均包括样品垫，样品垫使用样品垫处理液处理，样品垫处理液包括pH为8.0的缓冲液、大分子聚合物、表面活性剂、封闭剂和阻断剂。
其中，相对于每100mL的缓冲液， 大分子聚合物的添加量为0.05g，表面活性剂的添加量为0.05mL，封闭剂的添加量为0.05g，阻断剂的添加量为0.5mL。
缓冲液为Tris缓冲液、磷酸缓冲液、硼酸缓冲液中的一种；大分子聚合物为PVP、PEG20000中的至少一种；表面活性剂为吐温20、吐温80、曲拉通100、S9、S21中的至少两种；封闭剂为酪蛋白、酪蛋白钠、BSA中的一种；阻断剂为HBR。
缓冲液为10mM的Tris-HCL缓冲液；大分子聚合物为PVP；表面活性剂为曲拉通100、S9；封闭剂为酪蛋白钠；阻断剂为HBR。
配制1L样品垫处理液：10mM Tris-HCL(pH 8.0) 1.21gTris、0.5g PVP、0.5mL曲拉通100、0.5mL S9、0.5g酪蛋白钠、5mLHBR。
处理样品垫：每张30cm×25cm的样品垫，用50mL处理液均匀涂布后置于电热鼓风干燥箱中干燥12h以上，干燥保存备用。
底板的中间位置粘贴硝酸纤维素膜，上方粘贴吸水纸，下方粘贴制备的链霉亲和素结合物垫、双纳米颗粒双标记抗体结合物垫和样品垫，硝酸纤维素膜上包被相应抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线。
甲型流感病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被甲型流感病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线；甲型流感病毒抗体浓度为1.5mg/mL；羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
乙型流感病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被乙型流感病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，乙型流感病毒抗体浓度为1.5mg/mL；羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
呼吸道腺病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被呼吸道腺病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，呼吸道腺病毒抗体浓度为1.5mg/mL；羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
呼吸道合胞病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被呼吸道合胞病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，呼吸道合胞病毒抗体浓度为1.5mg/mL；羊抗鼠IgG抗体浓度为1.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
肺炎支原体抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被肺炎支原体抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，肺炎支原体抗体浓度为1.5mg/mL，其P1:P30比例3:2；羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用。
还包括保护剂，保护剂为蔗糖、海藻糖中的一种。
实施例2：一种多项呼吸道抗原检测卡，检测卡包括甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条、肺炎支原体抗原试纸条、卡体和卡盖，卡体和卡盖扣合在一起，卡体上设置有凹槽，甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条位于凹槽内。
甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条均包括底板、样品垫、胶体金结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，底板为PVC板，样品垫、胶体金结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸粘贴在底板上且依次搭接，胶体金结合物垫包括链霉亲和素结合物垫和双纳米颗粒双标记抗体结合物垫，在底板的中间位置粘贴制备的硝酸纤维素膜，在底板固定硝酸纤维素膜位置的上方粘贴吸水纸；在底板固定硝酸纤维素膜位置的下方，粘贴制备的胶体金结合物垫包括链霉亲和素结合物垫、、双纳米颗粒双标记抗体结合物垫、样品垫，将上述步骤得到的产品压平整后，切成3.0mm～4.0mm宽的试纸条。
链霉亲和素结合物垫的制备方法如下：
调节40nm胶体金溶液至PH为9.0，加入链霉亲和素，终浓度为15μg/mL，室温静置1h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置1h，在4℃8000rpm离心30min获得沉淀物即为胶体金标记的链霉亲和素，取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后胶体金标记物50mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收，干燥，得链霉亲和素结合物垫。
双纳米颗粒双标记抗体结合物垫的制备方法如下：
调节13nm胶体金溶液PH至8.5，加入相应标记抗体（甲型流感病毒抗体/乙型流感病毒抗体/呼吸道腺病毒抗体/呼吸道合胞病毒抗体/肺炎支原体抗体），终浓度20μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL 生物素-N-羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为2µmol/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置1h，在4℃10000rpm离心30min获得沉淀即为小颗粒纳米金。
调节80nm胶体金溶液PH至9.0，加入相应标记抗体（甲型流感病毒抗体/乙型流感病毒抗体/呼吸道腺病毒抗体/呼吸道合胞病毒抗体/肺炎支原体抗体），终浓度30μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL 生物素-N-羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为2µmol/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置1h，在4℃8000rpm离心45min获得沉淀即为大颗粒纳米金。
小颗粒纳米金与大颗粒纳米金按一定体积比混合制得双纳米颗粒双标记抗体混合物，其比例为3:5。
取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后双纳米颗粒双标记抗体混合物50mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收，干燥，得双纳米颗粒双标记抗体结合物垫。
甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条均包括样品垫，样品垫使用样品垫处理液处理，样品垫处理液包括pH为11.0的缓冲液、大分子聚合物、表面活性剂、封闭剂和阻断剂。
其中，相对于每100mL的缓冲液， 大分子聚合物的添加量为0.10g，表面活性剂的添加量为0.10mL，封闭剂的添加量为0.10g，阻断剂的添加量为1.2mL。
缓冲液为Tris缓冲液、磷酸缓冲液、硼酸缓冲液中的一种；大分子聚合物为PVP、PEG20000中的至少一种；表面活性剂为吐温20、吐温80、曲拉通100、S9、S21中的至少两种；封闭剂为酪蛋白、酪蛋白钠、BSA中的一种；阻断剂为HBR。
缓冲液为55mM的Tris-HCL缓冲液；大分子聚合物为PVP；表面活性剂为曲拉通100、S9；封闭剂为酪蛋白钠；阻断剂为HBR。
配制1L样品垫处理液：55mM Tris-HCL(pH 9.5)中含6.06gTris、1.0g PVP、1.0mL曲拉通100、1.0mL S9、1.0g酪蛋白钠、12mLHBR。
处理样品垫：每张30cm×25cm的样品垫，用50mL处理液均匀涂布后置于电热鼓风干燥箱中干燥12h以上，干燥保存备用。
底板的中间位置粘贴硝酸纤维素膜，上方粘贴吸水纸，下方粘贴制备的链霉亲和素结合物垫、双纳米颗粒双标记抗体结合物垫和样品垫，硝酸纤维素膜上包被相应抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线。
甲型流感病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被甲型流感病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线；甲型流感病毒抗体浓度为2.0mg/mL；羊抗鼠IgG 抗体浓度为2.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
乙型流感病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被乙型流感病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，乙型流感病毒抗体浓度为2.0mg/mL；羊抗鼠IgG 抗体浓度为2.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
呼吸道腺病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被呼吸道腺病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，呼吸道腺病毒抗体浓度为2.0mg/mL；羊抗鼠IgG 抗体浓度为2.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
呼吸道合胞病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被呼吸道合胞病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，呼吸道合胞病毒抗体浓度为2.0mg/mL；羊抗鼠IgG抗体浓度为2.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
肺炎支原体抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被肺炎支原体抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，肺炎支原体抗体浓度为2.0mg/mL，其P1:P30比例3:2；羊抗鼠IgG 抗体浓度为2.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用。
还包括保护剂，保护剂为蔗糖、海藻糖中的一种。
实施例3：一种多项呼吸道抗原检测卡，检测卡包括甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条、肺炎支原体抗原试纸条、卡体和卡盖，卡体和卡盖扣合在一起，卡体上设置有凹槽，甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条位于凹槽内。
甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条均包括底板、样品垫、胶体金结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，底板为PVC板，样品垫、胶体金结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸粘贴在底板上且依次搭接，胶体金结合物垫包括链霉亲和素结合物垫和双纳米颗粒双标记抗体结合物垫，在底板的中间位置粘贴制备的硝酸纤维素膜，在底板固定硝酸纤维素膜位置的上方粘贴吸水纸；在底板固定硝酸纤维素膜位置的下方，粘贴制备的胶体金结合物垫包括链霉亲和素结合物垫、、双纳米颗粒双标记抗体结合物垫、样品垫，将上述步骤得到的产品压平整后，切成3.0mm～4.0mm宽的试纸条。
链霉亲和素结合物垫的制备方法如下：
调节40nm胶体金溶液至PH为9.0，加入链霉亲和素，终浓度为12μg/mL，室温静置1h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置1h，在4℃8000rpm离心30min获得沉淀物即为胶体金标记的链霉亲和素，取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后胶体金标记物45mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收，干燥，得链霉亲和素结合物垫。
双纳米颗粒双标记抗体结合物垫的制备方法如下：
调节13nm胶体金溶液PH至8.5，加入相应标记抗体（甲型流感病毒抗体/乙型流感病毒抗体/呼吸道腺病毒抗体/呼吸道合胞病毒抗体/肺炎支原体抗体），终浓度18μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL 生物素-N-羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为1.5µmol/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置1h，在4℃10000rpm离心30min获得沉淀即为小颗粒纳米金。
调节80nm胶体金溶液PH至9.0，加入相应标记抗体（甲型流感病毒抗体/乙型流感病毒抗体/呼吸道腺病毒抗体/呼吸道合胞病毒抗体/肺炎支原体抗体），终浓度25μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL 生物素-N-羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为1.5µmol/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置1h，在4℃8000rpm离心45min获得沉淀即为大颗粒纳米金。
小颗粒纳米金与大颗粒纳米金按一定体积比混合制得双纳米颗粒双标记抗体混合物，其比例为3:5。
取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后双纳米颗粒双标记抗体混合物45mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收，干燥，得双纳米颗粒双标记抗体结合物垫。
甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条均包括样品垫，样品垫使用样品垫处理液处理，样品垫处理液包括pH为10的缓冲液、大分子聚合物、表面活性剂、封闭剂和阻断剂。
其中，相对于每100mL的缓冲液， 大分子聚合物的添加量为0.20g，表面活性剂的添加量为0.20 mL，封闭剂的添加量为0.20g，阻断剂的添加量为2.0 mL。
缓冲液为Tris缓冲液、磷酸缓冲液、硼酸缓冲液中的一种；大分子聚合物为PVP、PEG20000中的至少一种；表面活性剂为吐温20、吐温80、曲拉通100、S9、S21中的至少两种；封闭剂为酪蛋白、酪蛋白钠、BSA中的一种；阻断剂为HBR。
缓冲液为100mM的Tris-HCL缓冲液；大分子聚合物为PVP；表面活性剂为曲拉通100、S9；封闭剂为酪蛋白钠；阻断剂为HBR。
配制1L样品垫处理液：100mM Tris-HCL(pH 11)中含12.11gTris、2.0g PVP、2.0mL曲拉通100、2.0mL S9、2.0g酪蛋白钠、20mLHBR。
处理样品垫：每张30cm×25cm的样品垫，用50mL处理液均匀涂布后置于电热鼓风干燥箱中干燥12h以上，干燥保存备用。
底板的中间位置粘贴硝酸纤维素膜，上方粘贴吸水纸，下方粘贴制备的链霉亲和素结合物垫、双纳米颗粒双标记抗体结合物垫和样品垫，硝酸纤维素膜上包被相应抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线。
甲型流感病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被甲型流感病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线；甲型流感病毒抗体浓度为1.8mg/mL；羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.5mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
乙型流感病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被乙型流感病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，乙型流感病毒抗体浓度为1.8mg/mL；羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.5mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
呼吸道腺病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被呼吸道腺病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，呼吸道腺病毒抗体浓度为1.8mg/mL；羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.5mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
呼吸道合胞病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被呼吸道合胞病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，呼吸道合胞病毒抗体浓度为1.8mg/mL；羊抗鼠IgG抗体浓度为1.5mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
肺炎支原体抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被肺炎支原体抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，肺炎支原体抗体浓度为1.8mg/mL，其P1:P30比例3:2；羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.5mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用。
还包括保护剂，保护剂为蔗糖、海藻糖中的一种。
实施例4：一种多项呼吸道抗原试剂盒，包括实施例1-3其中之一的检测卡和样本稀释液，样本稀释液包括PH为8.0～10.5的Tris-HCL缓冲液、质量分数为0.1～1.0％ 的酪蛋白、体积分数为0.01～0.10％的吐温20、体积分数为0.05～0.20％的曲拉通100和体积分数为0.10～0.20％的Proclin-300。
配制1L样本稀释液：终浓度为10mM Tris-HCL (pH 8.0)中含1.21gTris、1.0g酪蛋白、0.1mL吐 温20 、0.5ml曲拉通100、1.0mL Proclin-300 ，余量为纯化水。
分别将甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条置于检测卡中，试纸条位于检测卡卡体的凹槽内，将卡盖和卡体扣合，得到多项呼吸道抗原检测卡；将配制的样本稀释液装入瓶内，与检测卡分别置于盒体内，得到多项呼吸道抗原检测试剂盒。
实施例5：一种多项呼吸道抗原试剂盒，包括实施例1-3其中之一的检测卡和样本稀释液。
样本稀释液包括PH为8.0～10.5的Tris-HCL缓冲液、质量分数为0.1～1.0％ 的酪蛋白、体积分数为0.01～0.10％的吐温20、体积分数为0.05～0.20％的曲拉通100和体积分数为0.10～0.20％的Proclin-300。
配制1L样本稀释液：终浓度为10mM Tris-HCL (pH 9.0)中含1.21gTris、5.0g酪蛋白、0.6mL吐温20 、1.0ml曲拉通100、1.5mL Proclin-300 ，余量为纯化水。
分别将甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条置于检测卡中，试纸条位于检测卡卡体的凹槽内，将卡盖和卡体扣合，得到多项呼吸道抗原检测卡；将配制的样本稀释液装入瓶内，与检测卡分别置于盒体内，得到多项呼吸道抗原检测试剂盒。
实施例6：一种多项呼吸道抗原试剂盒，包括实施例1-3其中之一的检测卡和样本稀释液。
样本稀释液包括PH为8.0～10.5的Tris-HCL缓冲液、质量分数为0.1～1.0％ 的酪蛋白、体积分数为0.01～0.10％的吐温20、体积分数为0.05～0.20％的曲拉通100和体积分数为0.10～0.20％的Proclin-300。
配制1L样本稀释液：终浓度为10mM Tris-HCL (pH 10.5)中含1.21gTris、10.0g酪蛋白、1.0mL吐温20 、2.0ml曲拉通100、2.0mL Proclin-300 ，余量为纯化水。
分别将甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条置于检测卡中，试纸条位于检测卡卡体的凹槽内，将卡盖和卡体扣合，得到多项呼吸道抗原检测卡；将配制的样本稀释液装入瓶内，与检测卡分别置于盒体内，得到多项呼吸道抗原检测试剂盒。
实施例7：一种用实施例4-6其中之一所述的试剂盒检测多项呼吸道抗原的检测方法，检测方法如下：
(1)检测
a、检测样本包括鼻咽拭子、口咽拭子、痰液；
b、在附属的试剂管中加入0.55mL样本稀释液；
c、将采集样本后的拭子浸入样本稀释液中，使样本稀释液充分浸透拭子，旋转挤压拭子10次，然后拔出拭子，绞出的液体作为样品液待测；
d、滴加3滴样品液，滴加量60～80µL到检测卡的加样孔，10～15min观察结果，20min后结果无效；
(2)结果判断
a、阴性：仅质控区C出现一条红色条带，在测试区T内无红色条带出现；
b、阳性：两条条带出现，一条红色条带位于测试区T内，另一条红色条带位于质控区C；
c、无效：质控区C未出现红色条带，表明操作过程不正确或检测卡已损坏。
实验数据如下：
灵敏度试验
（1）甲型流感病毒按下表进行稀释，各稀释20份，结果如下表：
含量(TCID<sub>50</sub>/L) 10<sup>5</sup> 10<sup>4</sup> 10<sup>3</sup> 10<sup>2</sup>
检出情况 100% 100% 80% 35%
（2）乙型流感病毒按下表进行稀释，各稀释20份，结果如下表：
含量(TCID<sub>50</sub>/L) 10<sup>5</sup> 10<sup>4</sup> 10<sup>3</sup> 10<sup>2</sup>
检出情况 100% 100% 75% 20%
（3）呼吸道腺病毒按下表进行稀释，各稀释20份，结果如下表：
含量(VP/mL) 10<sup>5</sup> 10<sup>4</sup> 10<sup>3</sup> 10<sup>2</sup>
检出情况 100% 100% 85% 40%
（4）呼吸道合胞病毒按下表进行稀释，各稀释20份，结果如下表：
含量(TCID<sub>50</sub>/mL) 10<sup>5</sup> 10<sup>4</sup> 10<sup>3</sup> 10<sup>2</sup>
检出情况 100% 100% 80% 30%
（5）肺炎支原体按下表进行稀释，各稀释20份，结果如下表：
含量(CFU/mL) 10<sup>5</sup> 10<sup>4</sup> 10<sup>3</sup> 10<sup>2</sup>
检出情况 100% 100% 95% 45%
本发明试剂盒甲型流感病毒最低可检出104TCID50/L、乙型流感病毒最低可检出104TCID50/L、呼吸道腺病毒抗原最低可检出104VP/mL、呼吸道合胞病毒最低可检出104TCID50/mL、肺炎支原体抗原最低可检出103CFU/mL。
特异性（抗干扰能力）试验
临床检验中，检测样本常包含与抗原结构相近或临床症状相似的其他病原体，选取临床确诊副流感病毒（混合）、肺炎衣原体、腺病毒、肺炎链球菌、流感病毒A型、流感病毒B型阳性样本各10例，用本发明的试剂盒检测，结果均为阴性，证明本试剂盒特异性好，不与副流感病毒（混合）、肺炎衣原体、腺病毒、肺炎链球菌、流感病毒A型、流感病毒B型产生交叉反应。
本专利检测方法，该方法使用样本量少、可操作性强、耗时短，可在20min内得到检测结果。
最后应说明的是：以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，实施方式的举例，其中未详细述及的部分均为本领域普通技术人员的公知常识，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种多项呼吸道抗原检测卡，其特征在于：检测卡包括甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条，甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条均包括胶体金结合物垫，胶体金结合物垫包括链霉亲和素结合物垫和双纳米颗粒双标记抗体结合物垫；
链霉亲和素结合物垫的制备方法如下：
调节40nm胶体金溶液至PH为9.0，加入链霉亲和素，终浓度为8～15μg/mL，室温静置1h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置1h，在4℃8000rpm离心30min获得沉淀物即为胶体金标记的链霉亲和素，取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后胶体金标记物40～50mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收，干燥，得链霉亲和素结合物垫；
双纳米颗粒双标记抗体结合物垫的制备方法如下：
调节13nm胶体金溶液PH至8.5，加入相应标记抗体，甲型流感病毒抗体、乙型流感病毒抗体、呼吸道腺病毒抗体、呼吸道合胞病毒抗体或肺炎支原体抗体，终浓度15～20μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL 生物素-N-羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为1～2µmol/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置1h，在4℃10000rpm离心30min获得沉淀即为小颗粒纳米金；
调节80nm胶体金溶液PH至9.0，加入相应标记抗体，甲型流感病毒抗体、乙型流感病毒抗体、呼吸道腺病毒抗体、呼吸道合胞病毒抗体或肺炎支原体抗体，终浓度20～30μg/mL，室温静置1h，加入1mg/mL 生物素-N-羟基丁二酰亚胺酯溶液，终浓度为1～2µmol/L，4℃静置24h，加入1/10体积含10%BSA磷酸盐溶液，室温静置1h，在4℃8000rpm离心45min获得沉淀即为大颗粒纳米金；
小颗粒纳米金与大颗粒纳米金按一定体积比混合制得双纳米颗粒双标记抗体混合物，其比例为3:5；
取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后双纳米颗粒双标记抗体混合物40～50mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收，干燥，得双纳米颗粒双标记抗体结合物垫。
2.如权利要求1的一种多项呼吸道抗原检测卡，其特征在于：甲型流感病毒抗原试纸条、乙型流感病毒抗原试纸条、呼吸道腺病毒抗原试纸条、呼吸道合胞病毒抗原试纸条和肺炎支原体抗原试纸条均包括样品垫，样品垫使用样品垫处理液处理，样品垫处理液包括pH为8.0～11.0的缓冲液、大分子聚合物、表面活性剂、封闭剂和阻断剂。
3. 如权利要求2的一种多项呼吸道抗原检测卡，其特征在于：相对于每100mL的缓冲液， 大分子聚合物的添加量为0.05～0.20g，表面活性剂的添加量为0.05～0.20mL，封闭剂的添加量为0.05～0.20g，阻断剂的添加量为0.5～2.0mL。
4.如权利要求2的一种多项呼吸道抗原检测卡，其特征在于：缓冲液为Tris缓冲液、磷酸缓冲液、硼酸缓冲液中的一种；大分子聚合物为PVP、PEG20000中的至少一种；表面活性剂为吐温20、吐温80、曲拉通100、S9、S21中的至少两种；封闭剂为酪蛋白、酪蛋白钠、BSA中的一种；阻断剂为HBR。
5.如权利要求4的一种多项呼吸道抗原检测卡，其特征在于：缓冲液为10～100mM的Tris-HCL缓冲液；大分子聚合物为PVP；表面活性剂为曲拉通100、S9；封闭剂为酪蛋白钠；阻断剂为HBR。
6.如权利要求2的一种多项呼吸道抗原检测卡，其特征在于：还包括硝酸纤维素膜、吸水纸和底板，底板的中间位置粘贴硝酸纤维素膜，上方粘贴吸水纸，下方粘贴制备的链霉亲和素结合物垫、双纳米颗粒双标记抗体结合物垫和样品垫。
7.如权利要求6的一种多项呼吸道抗原检测卡，其特征在于：硝酸纤维素膜上包被相应抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线。
8. 如权利要求6的一种多项呼吸道抗原检测卡，其特征在于：甲型流感病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被甲型流感病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线；甲型流感病毒抗体浓度为1.5～2.0mg/mL；羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0～2.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
乙型流感病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被乙型流感病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，乙型流感病毒抗体浓度为1.5～2.0mg/mL；羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0～2.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
呼吸道腺病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被呼吸道腺病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，呼吸道腺病毒抗体浓度为1.5～2.0mg/mL；羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0～2.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
呼吸道合胞病毒抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被呼吸道合胞病毒抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，呼吸道合胞病毒抗体浓度为1.5～2.0mg/mL；羊抗鼠IgG抗体浓度为1.0～2.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用；
肺炎支原体抗原试纸条上的硝酸纤维素膜包被肺炎支原体抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测线和质控线，其中，肺炎支原体抗体浓度为1.5～2.0mg/mL，其P1:P30比例3:2；羊抗鼠IgG 抗体浓度为1.0～2.0mg/mL；电热鼓风干燥箱中60℃干燥2h，干燥保存备用。
9.一种多项呼吸道抗原检测试剂盒，其特征在于：试剂盒包括如权利要求1～8任一项的检测卡和样本稀释液。
10.如权利要求9的多项呼吸道抗原试剂盒，其特征在于：样本稀释液包括PH为8.0～10.5的Tris-HCL缓冲液、质量分数为0.1～1.0％的酪蛋白、体积分数为0.01～0.10％的吐温20、体积分数为0.05～0.20％的曲拉通100和体积分数为0.10～0.20％的Proclin-300。
CN202110045330.2A 2021-01-14 2021-01-14 一种多项呼吸道抗原检测卡及试剂盒 Active CN112362869B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110045330.2A CN112362869B (zh) 2021-01-14 2021-01-14 一种多项呼吸道抗原检测卡及试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110045330.2A CN112362869B (zh) 2021-01-14 2021-01-14 一种多项呼吸道抗原检测卡及试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112362869A CN112362869A (zh) 2021-02-12
CN112362869B true CN112362869B (zh) 2021-05-18

Family

ID=74534934

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110045330.2A Active CN112362869B (zh) 2021-01-14 2021-01-14 一种多项呼吸道抗原检测卡及试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112362869B (zh)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113533721B (zh) * 2021-07-15 2022-05-10 上海伯杰医疗科技股份有限公司北京分公司 甲型/乙型流感病毒抗原胶体金法检测试纸条及其制备方法
CN114034859A (zh) * 2021-10-29 2022-02-11 济南百博生物技术股份有限公司 一种新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条
CN114236119A (zh) * 2021-11-08 2022-03-25 润和生物医药科技(汕头)有限公司 新冠总抗体和中和抗体胶体金快速检测试纸及其制备方法
CN113985028A (zh) * 2021-11-25 2022-01-28 济南百博生物技术股份有限公司 一种用于胶体金法抗原检测稀释液
CN114527272A (zh) * 2022-01-21 2022-05-24 北京泰格科信生物科技有限公司 一种呼吸道感染病毒抗原联合检测试剂盒及其制备方法
CN115015543B (zh) * 2022-04-17 2023-02-28 吉林迅准生物技术有限公司 一种多项病原体联合检测装置及其制备方法
CN114935656A (zh) * 2022-07-25 2022-08-23 山东康华生物医疗科技股份有限公司 一种优生优育十项抗体联合检测试剂盒及其制备方法
CN115993451B (zh) * 2023-01-10 2024-01-23 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种甲型流感病毒和腺病毒抗原定量检测试剂盒、制备方法及定量检测方法
CN115932260A (zh) * 2023-03-09 2023-04-07 天津博奥赛斯生物科技股份有限公司 一种新冠抗原检测试剂条及其制备方法
CN116718771B (zh) * 2023-08-08 2023-11-03 北京库尔科技有限公司 一种甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和新型冠状病毒抗原检测试剂盒
CN117825697B (zh) * 2024-03-01 2024-05-07 中国科学院过程工程研究所 一种危害因子检测试剂卡及检测方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104101706B (zh) * 2014-07-28 2016-05-18 国家纳米科学中心 一种检测甲流抗原的胶体金免疫层析试纸条及检测甲流抗原的方法
CN104280554A (zh) * 2014-10-12 2015-01-14 西北大学 一种双纳米金标记物信号放大蛋白质标志物快速检测装置及方法
CN104849465B (zh) * 2015-05-29 2016-06-29 广州华弘生物科技有限公司 肿瘤血清标志物ca153、cea、hcg乳腺癌三联诊断试剂盒
CN106052872B (zh) * 2016-06-01 2018-10-16 江南大学 一种基于纳米材料自组装的土霉素sers检测方法
CN107167598B (zh) * 2017-04-28 2019-02-26 东北农业大学 一种快速检测阪崎克罗诺杆菌的试剂盒及其应用
CN111856019A (zh) * 2020-02-04 2020-10-30 潍坊市康华生物技术有限公司 一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原的试纸条、试剂盒及检测方法
CN111707834A (zh) * 2020-06-24 2020-09-25 深圳海博生物技术有限公司 多种呼吸道病原体的IgA抗体检测试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date
CN112362869A (zh) 2021-02-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112362869B (zh) 一种多项呼吸道抗原检测卡及试剂盒
Puhach et al. SARS-CoV-2 viral load and shedding kinetics
CN112280897A (zh) 一种呼吸道感染病原体核酸联合检测试剂盒
Hodinka Respiratory RNA viruses
Kesson Respiratory virus infections
CN104251908B (zh) 样品垫处理液、h7亚型禽流感病毒胶体金试纸条及其制备方法
CN102735851B (zh) 一种猪肺炎支原体多重组抗原elisa检测试剂盒
Räty et al. Efficacy of PCR and other diagnostic methods for the detection of respiratory adenoviral infections
CN102337351B (zh) 一种流感病毒分型检测试剂盒
Stott et al. Some improved techniques for the study of rhinoviruses using HeLa cells
CN108384898A (zh) 用于检测呼吸道合胞病毒a、b型的试剂盒及其使用方法
CN108546786A (zh) 用于检测鼻病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的试剂盒及其使用方法
CN115015543A (zh) 一种多项病原体联合检测装置及其制备方法
RU2642588C1 (ru) Иммунохроматографическая тест-система для выявления патогенных штаммов helicobacter pylori
Gooskens et al. Severe influenza resembling hemorrhagic shock and encephalopathy syndrome
CN115453116A (zh) 一种同时检测六项呼吸道病原体的免疫层析联检试剂盒及制备方法
CN100503821C (zh) 甲型流感病毒胶体金快速检测试纸
Vallet et al. Detection of human coronavirus 229E in nasal specimens in large scale studies using an RT-PCR hybridization assay
CN100503822C (zh) 乙型流感病毒胶体金快速检测试纸
Skevaki et al. Microbiologic diagnosis of respiratory illness: practical applications
Stuart-Harris Clinical aspects of the respiratory tract
AU656162B2 (en) Method for visually detecting the presence of a virus in a clinical specimen
CN102507933B (zh) 一种呼吸道合胞病毒的检测方法
Ngeow et al. Young Malaysian children with lower respiratory tract infections show low incidence of chlamydial infection
CN114527272A (zh) 一种呼吸道感染病毒抗原联合检测试剂盒及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Yang Fan

Inventor after: Li Guiqin

Inventor after: Qin Dongli

Inventor after: Zhao Peng

Inventor after: Sun Shukai

Inventor after: Zhang Jingjing

Inventor after: Yang Mingxia

Inventor before: Yang Fan

Inventor before: Qin Dongli

Inventor before: Zhao Peng

Inventor before: Sun Shukai

Inventor before: Zhang Jingjing

Inventor before: Yang Mingxia

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant