CN114034859A - 一种新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条 - Google Patents
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Abstract
本发明的新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条，其特征在于：包括底板、吸水垫、NC膜、胶体金垫和样品垫，其中NC膜、胶体金垫和样品垫依次叠压并固定在底板上，吸水垫叠压在NC膜上并固定在底板上；NC膜带有控制线C线和检测线T线，检测线T线分为T1检测线和T2检测线，T1检测线为新冠抗体检测线，T2检测线为呼吸道合胞病毒抗体检测线。本发明的有益效果是，在使用同一样本的前提下，可以同时检测两种项目，操作简单快速，减轻医护人员的工作量。同时抗体检测可以提高检测结果灵敏度，增加检测结果可靠性，减少假性结果的出现。
Description
技术领域
本发明涉及医学检验技术领域，具体为一种新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条。
背景技术
新型冠状病毒是人体内初次发现的冠状病毒新毒株，冠状病毒是一个大家族，可引发感冒、中东呼吸综合征和严重急性呼吸综合征等疾病，感染后会有发热、咳嗽、气促和呼吸困难等症状，较严重的会导致肺炎、肾衰竭甚至死亡。其传播途径为呼吸道飞沫传播和接触传播。
呼吸道合胞病毒是一种RNA病毒，感染后主要表现为上呼吸道感染，有高热、鼻炎、咽喉炎等症状，后期表现为细支气管炎及肺炎，该病的传播途径为密切接触和空气飞沫。
新冠病毒和呼吸道合胞病毒的传播途径相同，感染后症状也较为相似，都为呼吸道疾病，但从患者症状来看难以区分感染那种病毒，因此需要进行样本检测。最常见的检测方式为PCR检测、抗原检测和抗体检测，其中PCR检测灵敏度最高，但价格昂贵，需要专业实验室及人员进行检测，且结果等待时间过长；抗原检测方便迅速，不需要专业人员即可操作，但抗原检测灵敏度低，结果易出现偏差；抗体检测样本质量有保证、操作简单便捷、短时间内可出结果，且检测结果相对可靠。
针对新冠病毒和呼吸道合胞病毒的检测。市面上常见的检测试纸条多为两者分开检测，需多次滴加样本和稀释液，操作较为繁琐。现需一款试纸条，在使用同一样本的前提下，检测患者感染哪种病毒。
发明内容
本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种结构简单、使用方便的新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条。
本发明是通过如下技术方案实现的：
本发明的新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条，其特征在于：包括底板、吸水垫、NC膜、胶体金垫和样品垫，其中NC膜、胶体金垫和样品垫依次叠压并固定在底板上，吸水垫叠压在NC膜上并粘贴固定在底板上；NC膜带有控制线C线和检测线T线，检测线T线分为T1检测线和T2检测线， T1检测线为新冠抗体检测线，T2检测线为呼吸道合胞病毒抗体检测线。（底板是带胶的，各种垫都可以粘上。）
所述的胶体金垫上包被胶体金标记的新冠病毒抗原和呼吸道合胞病毒抗原以及C线抗原。
所述的NC膜上T1检测线包被的是鼠抗人新冠病毒抗体；T2检测线包被的是鼠抗人呼吸道合胞病毒抗体；C线包被的是C线抗体。
所述的胶体金垫上包被的新冠抗原浓度为10-15µg/ml；呼吸道合胞病毒抗原浓度为8-20µg/ml；C线抗原浓度为20-30µg/ml。
所述的NC膜上包被的鼠抗人新冠病毒抗体浓度为0.8-1.5mg/ml；鼠抗人呼吸道合胞病毒抗体浓度为1.2-1.6 mg/ml；C线抗体浓度为1.5-2.0 mg/ml。
所述的底板为PVC材质；样品垫和胶体金垫为玻璃纤维膜；NC膜为硝酸纤维素膜；吸水垫为吸水纸。
所述的胶体金垫的处理方式为：将新冠抗原、呼吸道合胞病毒抗原和C线抗原分别加入到pH为8.2的胶体金溶液中，配成三种溶液，终浓度分别为12µg/ml 、15µg/ml和25µg/ml；分别在摇床上摇晃5min后，静置2h，三种溶液都加入PEG20000(溶液重量百分比浓度为15%)和BSA(溶液重量百分比浓度为20%)混匀封闭；将三种溶液混合均匀后，在冷冻离心机上15000 r/min离心15min，除掉上清液，收集沉淀。将沉淀加入到胶体金稀释液中，混匀后涂布于胶体金垫上，冷冻干燥2h即得胶体金垫。
所述的NC膜的处理方式为：将新冠病毒抗体、呼吸道合胞病毒抗体和C线抗体分别加入到包被缓冲液（磷酸盐缓冲液、BSA、PEG20000和防腐剂）中，终浓度分别为1.0 mg/ml、1.4 mg/ml和 2.0 mg/ml。分别取3种包被液在硝酸纤维素膜上按1ul/mm进行划线（在T1、T2、C线处划线），于37℃烘箱中2h烘干即得检测垫。
包被缓冲液的组分：0.01M（物质的量） PH7.4磷酸盐缓冲液、重量浓度20%BSA、重量浓度15%PEG20000、重量浓度0.3%防腐剂HY500。
将上述的底板、吸水纸、NC膜、胶体金垫和样品垫按图1组装，即得新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测板，按需求剪裁成一定宽度的纸条即得新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条。
检测样本是血清、血浆或全血。
本发明的有益效果是，在使用同一样本的前提下，可以同时检测两种项目，操作简单快速，减轻医护人员的工作量。同时抗体检测可以提高检测结果灵敏度，增加检测结果可靠性，减少假性结果的出现。该试纸条灵敏度为95.83%；特异性为100%；准确性为97.76%。
附图说明
图1为本发明的主视图示意图。
图中：底板1、吸水垫2、NC膜3、胶体金垫4、样品垫5。
具体实施方式
实施例1
一种新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条，包括底板1、吸水垫2、NC膜3、胶体金垫4和样品垫5，其中NC膜、胶体金垫和样品垫依次叠压并粘贴固定在底板上，吸水垫叠压在NC膜上并固定在底板上；NC膜带有控制线C线和检测线T线，检测线T线分为T1检测线和T2检测线， T1检测线为新冠抗体检测线，T2检测线为呼吸道合胞病毒抗体检测线。（底板是带胶的，各种垫都可以粘上。）
所述的胶体金垫上包被胶体金标记的新冠病毒抗原和呼吸道合胞病毒抗原以及C线抗原。
所述的NC膜上T1检测线包被的是鼠抗人新冠病毒抗体；T2检测线包被的是鼠抗人呼吸道合胞病毒抗体；C线包被的是C线抗体。
所述的胶体金垫上包被的新冠抗原浓度为12 µg/ml；呼吸道合胞病毒抗原浓度为15 µg/ml；C线抗原浓度为25 µg/ml。
所述的NC膜上包被的鼠抗人新冠病毒抗体浓度为1.0mg/ml；鼠抗人呼吸道合胞病毒抗体浓度为1.4 mg/ml；C线抗体浓度为2.0 mg/ml。
所述的底板为PVC材质；样品垫和胶体金垫为玻璃纤维膜；NC膜为硝酸纤维素膜；吸水垫为吸水纸。
所述的胶体金垫的处理方式为：将新冠抗原、呼吸道合胞病毒抗原和C线抗原分别加入到pH为8.2的胶体金溶液中，终浓度分别为12µg/ml 、15µg/ml和25µg/ml；分别在摇床上摇晃5min后，静置2h，再加入PEG20000(溶液百分比浓度为15%)和BSA(溶液百分比浓度为20%)混匀封闭；将三种溶液混合均匀后，在冷冻离心机上15000 r/min离心15min，除掉上清液，收集沉淀。将沉淀加入到胶体金稀释液中，混匀后涂布于胶体金垫上，冷冻干燥2h即得胶体金垫。
所述的NC膜的处理方式为：将新冠病毒抗体、呼吸道合胞病毒抗体和C线抗体分别加入到包被缓冲液中，终浓度分别为1.0 mg/ml、1.4 mg/ml和 2.0 mg/ml。分别取3种包被液在硝酸纤维素膜上按1ul/mm进行划线，于37℃烘箱中2h烘干即得检测垫。
包被缓冲液的组分：0.01M（物质的量） PH7.4磷酸盐缓冲液、重量浓度20%BSA、重量浓度15%PEG20000、重量浓度0.3%防腐剂HY500。
将上述的底板、吸水纸、NC膜、胶体金垫和样品垫按图1组装，即得新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测板，按需求剪裁成一定宽度的纸条即得新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条。
检测样本是血清、血浆或全血。
该试纸条灵敏度为95.83%；特异性为100%；准确性为97.76%。
实施例2
一种新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条，包括底板1、吸水垫2、NC膜3、胶体金垫4和样品垫5，其中NC膜、胶体金垫和样品垫依次叠压并固定在底板上，吸水垫叠压在NC膜上并固定在底板上；NC膜带有控制线C线和检测线T线，检测线T线分为T1检测线和T2检测线， T1检测线为新冠抗体检测线，T2检测线为呼吸道合胞病毒抗体检测线。
所述的胶体金垫上包被胶体金标记的新冠病毒抗原和呼吸道合胞病毒抗原以及C线抗原。
所述的NC膜上T1检测线包被的是鼠抗人新冠病毒抗体；T2检测线包被的是鼠抗人呼吸道合胞病毒抗体；C线包被的是C线抗体。
所述的胶体金垫上包被的新冠抗原浓度为10 µg/ml；呼吸道合胞病毒抗原浓度为8 µg/ml；C线抗原浓度为20 µg/ml。
所述的NC膜上包被的鼠抗人新冠病毒抗体浓度为0.8 mg/ml；鼠抗人呼吸道合胞病毒抗体浓度为1.2 mg/ml；C线抗体浓度为1.5 mg/ml。
所述的底板为PVC材质；样品垫和胶体金垫为玻璃纤维膜；NC膜为硝酸纤维素膜；吸水垫为吸水纸。
胶体金垫的制作步骤为：将新冠抗原、呼吸道合胞病毒抗原和C线抗原分别加入到pH为7.5的胶体金溶液中，终浓度分别为10 µg/ml 、8 µg/ml和20µg/ml；分别在摇床上摇晃8min后，静置2.5h，再加入PEG20000(溶液百分比浓度为12%)和BSA(溶液百分比浓度为16%)混匀封闭；将三种溶液混合均匀后，在冷冻离心机上14000 r/min离心20min，除掉上清液，收集沉淀；将沉淀加入到胶体金稀释液中，混匀后涂布于胶体金垫上，冷冻干燥2.5h即得胶体金垫。
NC膜的制备步骤为，将新冠病毒抗体、呼吸道合胞病毒抗体和C线抗体分别加入到包被缓冲液中，终浓度分别为0.8 mg/ml、1.2 mg/ml和 1.5 mg/ml。分别取3种包被液在硝酸纤维素膜上按1.2 ul/mm进行划线，于35℃烘箱中2.5 h烘干即得检测垫。
包被缓冲液的组分：0.01M（物质的量） PH7.4磷酸盐缓冲液、重量浓度16%BSA、重量浓度12%PEG20000、重量浓度0.3%防腐剂HY500。
将上述的底板、吸水纸、NC膜、胶体金垫和样品垫按图1组装，即得新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测板，按需求剪裁成一定宽度的纸条即得新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条。
检测样本是血清、血浆或全血。
实施例3
一种新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条，包括底板1、吸水垫2、NC膜3、胶体金垫4和样品垫5，其中NC膜、胶体金垫和样品垫依次叠压并固定在底板上，吸水垫叠压在NC膜上并固定在底板上；NC膜带有控制线C线和检测线T线，检测线T线分为T1检测线和T2检测线， T1检测线为新冠抗体检测线，T2检测线为呼吸道合胞病毒抗体检测线。
所述的胶体金垫上包被胶体金标记的新冠病毒抗原和呼吸道合胞病毒抗原以及C线抗原。
所述的NC膜上T1检测线包被的是鼠抗人新冠病毒抗体；T2检测线包被的是鼠抗人呼吸道合胞病毒抗体；C线包被的是C线抗体。
所述的胶体金垫上包被的新冠抗原浓度为15µg/ml；呼吸道合胞病毒抗原浓度为20µg/ml；C线抗原浓度为30µg/ml。
所述的NC膜上包被的鼠抗人新冠病毒抗体浓度为1.5mg/ml；鼠抗人呼吸道合胞病毒抗体浓度为1.6 mg/ml；C线抗体浓度为1.8 mg/ml。
所述的底板为PVC材质；样品垫和胶体金垫为玻璃纤维膜；NC膜为硝酸纤维素膜；吸水垫为吸水纸。
胶体金垫的制作步骤为：将新冠抗原、呼吸道合胞病毒抗原和C线抗原分别加入到pH为8.6的胶体金溶液中，终浓度分别为15 µg/ml 、20 µg/ml和30µg/ml；分别在摇床上摇晃10min后，静置3h，再加入PEG20000(溶液百分比浓度为18%)和BSA(溶液百分比浓度为24%)混匀封闭；将三种溶液混合均匀后，在冷冻离心机上16000 r/min离心18min，除掉上清液，收集沉淀；将沉淀加入到胶体金稀释液中，混匀后涂布于胶体金垫上，冷冻干燥2 h即得胶体金垫。
NC膜的制备步骤为，将新冠病毒抗体、呼吸道合胞病毒抗体和C线抗体分别加入到包被缓冲液中，终浓度分别为1.5 mg/ml、1.6 mg/ml和 1.8 mg/ml。分别取3种包被液在硝酸纤维素膜上按1.5 ul/mm进行划线，于40℃烘箱中2 h烘干即得检测垫。
包被缓冲液的组分：0.01M PH7.4磷酸盐缓冲液、重量浓度24%BSA、重量浓度18%PEG20000、重量浓度0.3%防腐剂HY500。
将上述的底板、吸水纸、NC膜、胶体金垫和样品垫按图1组装，即得新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测板，按需求剪裁成一定宽度的纸条即得新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条。
检测样本是血清、血浆或全血。
Claims (9)
1.一种新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条，其特征在于：包括底板、吸水垫、NC膜、胶体金垫和样品垫，其中NC膜、胶体金垫和样品垫依次叠压并粘贴固定在底板上，吸水垫叠压在NC膜上并固定在底板上；NC膜带有控制线C线和检测线T线，检测线T线分为T1检测线和T2检测线， T1检测线为新冠抗体检测线，T2检测线为呼吸道合胞病毒抗体检测线。
2.根据权利要求1所述的新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条，其特征在于：胶体金垫上包被胶体金标记的新冠病毒抗原和呼吸道合胞病毒抗原以及C线抗原。
3.根据权利要求1所述的新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条，其特征在于：NC膜上T1检测线包被的是鼠抗人新冠病毒抗体；T2检测线包被的是鼠抗人呼吸道合胞病毒抗体；C线包被的是C线抗体。
4.根据权利要求1或2所述的新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条，其特征在于：胶体金垫上包被的新冠抗原浓度为10-15µg/ml；呼吸道合胞病毒抗原浓度为8-20µg/ml；C线抗原浓度为20-30µg/ml。
5.根据权利要求1或3所述的新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条，其特征在于： NC膜上包被的鼠抗人新冠病毒抗体浓度为0.8-1.5mg/ml；鼠抗人呼吸道合胞病毒抗体浓度为1.2-1.6 mg/ml；C线抗体浓度为1.5-2.0 mg/ml。
6.根据权利要求1、2或3所述的新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条，其特征在于：底板为PVC材质；样品垫和胶体金垫为玻璃纤维膜；NC膜为硝酸纤维素膜；吸水垫为吸水纸。
7.一种权利要求1所述的新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条的制备方法，其特征在于：胶体金垫的制作步骤为：将新冠抗原、呼吸道合胞病毒抗原和C线抗原分别加入到pH为7.5-8.6的胶体金溶液中，终浓度分别为10-15 µg/ml 、8-20 µg/ml和20-30µg/ml；分别在摇床上摇晃5-10min后，静置2-3h，再加入PEG20000(溶液百分比浓度为12-18%)和BSA(溶液百分比浓度为16-24%)混匀封闭；将三种溶液混合均匀后，在冷冻离心机上14000-16000 r/min离心15-20min，除掉上清液，收集沉淀；将沉淀加入到胶体金稀释液中，混匀后涂布于胶体金垫上，冷冻干燥2-2.5h即得胶体金垫。
8.根据权利要求7所述的新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条的制备方法，其特征在于：NC膜的制备步骤为，将新冠病毒抗体、呼吸道合胞病毒抗体和C线抗体分别加入到包被缓冲液中，终浓度分别为0.8-1.5 mg/ml、1.2-1.6 mg/ml和 1.5-2.0 mg/ml；
分别取3种包被液在硝酸纤维素膜上按1-1.5 ul/mm进行划线，于35-40℃烘箱中2-2.5h烘干即得检测垫。
9.根据权利要求8或9所述的新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条的制备方法，其特征在于：将底板、吸水纸、NC膜、胶体金垫和样品垫组装在一起，即得新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测板，按需求剪裁成一定宽度的纸条即得新冠及呼吸道合胞病毒抗体联合检测试纸条。
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