CN111289746A - 一种新型冠状病毒IgM+IgG抗体检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种新型冠状病毒IgM+IgG抗体检测方法，属于病毒检测领域，包括取试纸卡，用采血器具进行在指尖或耳垂进行采血取血样，采血完毕后进行止血；按照采血流程将取好的血样加在加样孔内，将稀释液瓶盖拧开，往滴入血样的加样孔中滴入稀释液2‑3滴；在20分钟内读取结果；如果在样本加入后20秒后，仍没有爬上膜，再往加样孔滴入2滴样本；请勿于30分钟之后读取结果；判断结果，本产品采用双抗体夹心法，通过包被在nc膜上的新冠病毒抗原及金垫上的标记抗体（IgM+IgG），利用胶体金免疫层析间接法的原理来达到检测人血清中的新型冠状病毒（2019‑nCoV）IgM+IgG抗体的目的，检测方法快速准确。
Description
技术领域
本发明属于病毒检测术领域，尤其涉及一种新型冠状病毒IgM+IgG抗体检测方法。
背景技术
2019新型冠状病毒（2019-nCoV），2020年1月12日被世界卫生组织命名。冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征（MERS）和严重急性呼吸综合征（SARS）等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。
人感染了冠状病毒后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。目前对于新型冠状病毒所致疾病没有特异治疗方法，新型冠状病毒的传播途径有直接传播、气溶胶传播、接触传播，传染性极强，因此对于得新型冠状病毒得患者需要隔离处理，感染病毒的人会出现程度不同的症状，有的只是发烧或轻微咳嗽，有的会发展为肺炎，有的则更为严重甚至死亡，对于新型冠状病毒的确诊变得非常重要，如何快速且准确的确定是否患有新型冠状病毒的肺炎变成了目前难以解决的问题。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种新型冠状病毒IgM+IgG抗体检测方法。本发明克服了。
本发明的技术方案是：一种新型冠状病毒IgM+IgG抗体检测方法，包括以下步骤：
S1：从塑封包装中取出试纸卡（试纸卡来自COVID-19 Human IgM/IgG Rapid Test（新冠病毒IgM/IgG快速检测试剂盒）货号是DC0301），平置于干燥的桌面上，试纸卡上显示有质控区（C）和测试区（1、2）；
S2：用采血器具进行在指尖或耳垂进行采血取血样，采血完毕后进行止血；按照采血流程将取好的血样加在加样孔内；
S3：将稀释液瓶盖拧开，往滴入血样的加样孔中滴入稀释液2-3滴；在20分钟内读取结果；如果在样本加入后20秒后，仍没有爬上膜，再往加样孔滴入2滴样本；请勿于30分钟之后读取结果；
S4：判断结果：
阴性：仅在质控区（C）出现一条紫红色条带，在测试区（1、2）内无紫红色条带出现；
阳性：位于测试区（1、2）内出现两条紫红色条带，位于质控区（C）出现一条紫红色条带；
无效结果：质控区（C）未出现紫红色条带，表明操作过程不正确或试剂条已变质损坏；用新的试剂条重新测试。
作为优选，步骤S2中，所述采血器具包括采血针、采血吸管、酒精棉球、棉球。
作为优选，步骤S2中，其中采血与加样的步骤：先用酒精棉球消毒采血部位，用采血针刺破采血部位后加样检测；血滴可以直接滴入加样孔，或先吸入洁净的移液管，然后滴入加样孔，然后加入稀释液2-3滴。
作为优选，采用移液管转移的方法是：用手握住移液管，轻轻将移液管的一端接触加样孔的移液垫进行转移。
作为优选，步骤S2中，采的第一滴血要弃用，用第二、三滴血做检测。
作为优选，步骤S2中，采血吸管只能一人使用，避免交叉感染。
作为优选，步骤S2中，所述止血步骤：采血完毕后要用棉球压迫采血部位进行止血。
作为优选，步骤S4中，在阳性的检测时，测试区（1、2）内的紫红色条带可显现出颜色深浅的现象，不论该色带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应判为阳性结果。
特别注意：该检测产品无病毒灭活功能，操作过程中如检测临床样本或病毒毒株，请做好防护措施，检测结束，请将检测卡与使用过的吸管、采血针等试验材料做无害化处理，防止病毒交叉传染。
工作原理：病毒入侵人体后会迅速被人体免疫系统识别，人体血液中在1-7天会出现特异性免疫球蛋白抗体。IgM为机体初次免疫应答最早出现的特异性抗体，可用于病毒感染的早期诊断；IgG检测可以作为正在感染或者既往感染的判断依据。
本产品采用双抗体夹心法，通过包被在nc膜上的新冠病毒抗原及金垫上的标记抗体（IgM+IgG），利用胶体金免疫层析间接法的原理来达到检测人血清中的新型冠状病毒（2019-nCoV）IgM+IgG抗体的目的。
这种新型冠状病毒抗体的制备方法：选取抗原抗体共表达的方式，将新型冠状病毒治愈者的抗原基因共同表达在大肠杆菌周质腔内，利用流式细胞术进行三轮淘选；用大肠杆菌表达基因后纯化的抗体，用ELISA方法检测抗体特异性；
抗体的制备方法如下：
取所有菌落用LB液体培养基稀释至OD600≈0.2，37°C培养2h，使之OD600≈0.4，加入IPTG至终浓度为2.5mmol/L，诱导4h；在1.5mlEppendorf管中加入1.5ml培养物，6000rpm离心3min，去掉上清；
菌体沉淀用350μlSucrose/Trissolution重悬，Sucrose的浓度为0.75mmol/L，Tris的浓度为0.1mol/L；加入35μl浓度为10mg/ml新鲜配制的溶菌酶母液；逐滴加入700μl1mmol/LEDTA溶液，同时涡旋混匀；冰上孵育15min；加入50μl0.5mol/LMgCl2溶液，并在冰上孵育10min；4°C，10000rpm离心10min；原生质球沉淀用1mlPBS溶液重悬洗涤，6000rpm离心3min，去上清；原生质球沉淀用100μlPBS重悬；
在100μlPBS重悬的已诱导菌液中加入10μl质量体积比为1%BSA贮存液、1.5μgFITC标记后的S1，冰上避光孵育1h；8000rpm，离心3min，1mlPBS重悬洗涤一次，沉淀用100μlPBS重悬；设置阴性对照，将空白菌DH5α处理成为原生质球，空白菌DH5α中不含pBSD-IBDVScFv重组质粒，用标记后的VP2抗原孵育；
用流式细胞仪于488nm波长激光下，检测样品及阴性对照的荧光强度，收集样品中荧光强度高于阴性对照的部分；将分选出来的细菌进行质粒制备，电击转化至大肠杆菌DH5α，构建次级筛选库，按上述的方法进行第二轮筛选，将每个峰值范围内的细胞分选出来，制备质粒后转化大肠杆菌DH5α，构建次级筛选库，按上述的方法进行第三轮筛选后，挑取单菌落20个，扩培后逐个用流式细胞仪进行检测，选出荧光信号比阴性对照强的克隆，进行测序并分析；
本发明的有益效果是：
本产品采用双抗体夹心法，通过包被在nc膜上的新冠病毒抗原及金垫上的标记抗体（IgM+IgG），利用胶体金免疫层析间接法的原理来达到检测人血清中的新型冠状病毒（2019-nCoV）IgM+IgG抗体的目的，检测方法快速准确。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是新型冠状病毒IgM+IgG抗体的检测结果呈现阴性；
图2是新型冠状病毒IgM+IgG抗体的检测结果呈现阳性；
图3是新型冠状病毒IgM+IgG抗体的检测结果无效。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。
实施例1
如图1所示，一种新型冠状病毒IgM+IgG抗体检测方法，包括以下步骤：
S1：从塑封包装中取出试纸卡（试纸卡来自COVID-19 Human IgM/IgG Rapid Test（新冠病毒IgM/IgG快速检测试剂盒）货号是DC0301），平置于干燥的桌面上，试纸卡上显示有质控区（C）和测试区（1、2）；
S2：用采血器具进行在指尖或耳垂进行采血取血样，采血完毕后进行止血；按照采血流程将取好的血样加在加样孔内；
S3：将稀释液瓶盖拧开，往滴入血样的加样孔中滴入稀释液2-3滴；在20分钟内读取结果；如果在样本加入后20秒后，仍没有爬上膜，再往加样孔滴入2滴样本；请勿于30分钟之后读取结果；
S4：判断结果：
阴性：仅在质控区（C）出现一条紫红色条带，在测试区（1、2）内无紫红色条带出现；
本实施例中，步骤S2中，所述采血器具包括采血针、采血吸管、酒精棉球、棉球。
本实施例中，步骤S2中，其中采血与加样的步骤：先用酒精棉球消毒采血部位，用采血针刺破采血部位后加样检测；血滴可以直接滴入加样孔，或先吸入洁净的移液管，然后滴入加样孔，然后加入稀释液2-3滴。
本实施例中，采用移液管转移的方法是：用手握住移液管，轻轻将移液管的一端接触加样孔的移液垫进行转移。
本实施例中，步骤S2中，采的第一滴血要弃用，用第二、三滴血做检测。
本实施例中，步骤S2中，采血吸管只能一人使用，避免交叉感染。
本实施例中，步骤S2中，所述止血步骤：采血完毕后要用棉球压迫采血部位进行止血。
工作原理：病毒入侵人体后会迅速被人体免疫系统识别，人体血液中在1-7天会出现特异性免疫球蛋白抗体。IgM为机体初次免疫应答最早出现的特异性抗体，可用于病毒感染的早期诊断；IgG检测可以作为正在感染或者既往感染的判断依据。
实施例2
如图2所示，一种新型冠状病毒IgM+IgG抗体检测方法，包括以下步骤：
S1：从塑封包装中取出试纸卡（试纸卡来自COVID-19 Human IgM/IgG Rapid Test（新冠病毒IgM/IgG快速检测试剂盒）货号是DC0301），平置于干燥的桌面上，试纸卡上显示有质控区（C）和测试区（1、2）；
S2：用采血器具进行在指尖或耳垂进行采血取血样，采血完毕后进行止血；按照采血流程将取好的血样加在加样孔内；
S3：将稀释液瓶盖拧开，往滴入血样的加样孔中滴入稀释液2-3滴；在20分钟内读取结果；如果在样本加入后20秒后，仍没有爬上膜，再往加样孔滴入2滴样本；请勿于30分钟之后读取结果；
S4：判断结果：
阳性：位于测试区（1、2）内出现两条紫红色条带，位于质控区（C）出现一条紫红色条带；在阳性的检测时，测试区（1、2）内的紫红色条带可显现出颜色深浅的现象，不论该色带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应判为阳性结果。
本实施例中，步骤S2中，所述采血器具包括采血针、采血吸管、酒精棉球、棉球。
本实施例中，步骤S2中，其中采血与加样的步骤：先用酒精棉球消毒采血部位，用采血针刺破采血部位后加样检测；血滴可以直接滴入加样孔，或先吸入洁净的移液管，然后滴入加样孔，然后加入稀释液2-3滴。
本实施例中，采用移液管转移的方法是：用手握住移液管，轻轻将移液管的一端接触加样孔的移液垫进行转移。
本实施例中，步骤S2中，采的第一滴血要弃用，用第二、三滴血做检测。
本实施例中，步骤S2中，采血吸管只能一人使用，避免交叉感染。
本实施例中，步骤S2中，所述止血步骤：采血完毕后要用棉球压迫采血部位进行止血。
工作原理：病毒入侵人体后会迅速被人体免疫系统识别，人体血液中在1-7天会出现特异性免疫球蛋白抗体。IgM为机体初次免疫应答最早出现的特异性抗体，可用于病毒感染的早期诊断；IgG检测可以作为正在感染或者既往感染的判断依据。
实施例3
如图3所示，一种新型冠状病毒IgM+IgG抗体检测方法，包括以下步骤：
S1：从塑封包装中取出试纸卡（试纸卡来自COVID-19 Human IgM/IgG Rapid Test（新冠病毒IgM/IgG快速检测试剂盒）货号是DC0301），平置于干燥的桌面上，试纸卡上显示有质控区（C）和测试区（1、2）；
S2：用采血器具进行在指尖或耳垂进行采血取血样，采血完毕后进行止血；按照采血流程将取好的血样加在加样孔内；
S3：将稀释液瓶盖拧开，往滴入血样的加样孔中滴入稀释液2-3滴；在20分钟内读取结果；如果在样本加入后20秒后，仍没有爬上膜，再往加样孔滴入2滴样本；请勿于30分钟之后读取结果；
S4：判断结果：
无效结果：质控区（C）未出现紫红色条带，表明操作过程不正确或试剂条已变质损坏；用新的试剂条重新测试。
本实施例中，步骤S2中，所述采血器具包括采血针、采血吸管、酒精棉球、棉球。
本实施例中，步骤S2中，其中采血与加样的步骤：先用酒精棉球消毒采血部位，用采血针刺破采血部位后加样检测；血滴可以直接滴入加样孔，或先吸入洁净的移液管，然后滴入加样孔，然后加入稀释液2-3滴。
本实施例中，采用移液管转移的方法是：用手握住移液管，轻轻将移液管的一端接触加样孔的移液垫进行转移。
本实施例中，步骤S2中，采的第一滴血要弃用，用第二、三滴血做检测。
本实施例中，步骤S2中，采血吸管只能一人使用，避免交叉感染。
本实施例中，步骤S2中，所述止血步骤：采血完毕后要用棉球压迫采血部位进行止血。
工作原理：病毒入侵人体后会迅速被人体免疫系统识别，人体血液中在1-7天会出现特异性免疫球蛋白抗体。IgM为机体初次免疫应答最早出现的特异性抗体，可用于病毒感染的早期诊断；IgG检测可以作为正在感染或者既往感染的判断依据。
当然，上述说明也并不仅限于上述举例，本发明未经描述的技术特征可以通过或采用现有技术实现，在此不再赘述；以上实施例及附图仅用于说明本发明的技术方案并非是对本发明的限制，参照优选的实施方式对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内所做出的变化、改型、添加或替换都不脱离本发明的宗旨，也应属于本发明的权利要求保护范围。
Claims (8)
1.一种新型冠状病毒IgM+IgG抗体检测方法，其特征在于：一种新型冠状病毒IgM+IgG抗体检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1：从塑封包装中取出试纸卡，平置于干燥的桌面上，试纸卡上显示有质控区（C）和测试区（1、2）；
S2：用采血器具进行在指尖或耳垂进行采血取血样，采血完毕后进行止血；按照采血流程将取好的血样加在加样孔内；
S3：将稀释液瓶盖拧开，往滴入血样的加样孔中滴入稀释液2-3滴；在20分钟内读取结果；如果在样本加入后20秒后，仍没有爬上膜，再往加样孔滴入2滴样本；请勿于30分钟之后读取结果；
S4：判断结果：
阴性：仅在质控区（C）出现一条紫红色条带，在测试区（1、2）内无紫红色条带出现；
阳性：位于测试区（1、2）内出现两条紫红色条带，位于质控区（C）出现一条紫红色条带；
无效结果：质控区（C）未出现紫红色条带，表明操作过程不正确或试剂条已变质损坏；用新的试剂条重新测试。
2.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒IgM+IgG抗体检测方法，其特征在于：步骤S2中，所述采血器具包括采血针、采血吸管、酒精棉球、棉球。
3.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒IgM+IgG抗体检测方法，其特征在于：步骤S2中，其中采血与加样的步骤：先用酒精棉球消毒采血部位，用采血针刺破采血部位后加样检测；血滴可以直接滴入加样孔，或先吸入洁净的移液管，然后滴入加样孔，然后加入稀释液2-3滴。
4.根据权利要求3所述的一种新型冠状病毒IgM+IgG抗体检测方法，其特征在于：采用移液管转移的方法是：用手握住移液管，轻轻将移液管的一端接触加样孔的移液垫进行转移。
5.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒IgM+IgG抗体检测方法，其特征在于：步骤S2中，采的第一滴血要弃用，用第二、三滴血做检测。
6.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒IgM+IgG抗体检测方法，其特征在于：步骤S2中，采血吸管只能一人使用，避免交叉感染。
7.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒IgM+IgG抗体检测方法，其特征在于：步骤S2中，所述止血步骤：采血完毕后要用棉球压迫采血部位进行止血。
8.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒IgM+IgG抗体检测方法，其特征在于：步骤S4中，在阳性的检测时，测试区（1、2）内的紫红色条带可显现出颜色深浅的现象，不论该色带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应判为阳性结果。
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