CN111474348B - 一种新型冠状病毒的检测试剂盒以及检测方法 - Google Patents
一种新型冠状病毒的检测试剂盒以及检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111474348B CN111474348B CN202010312710.3A CN202010312710A CN111474348B CN 111474348 B CN111474348 B CN 111474348B CN 202010312710 A CN202010312710 A CN 202010312710A CN 111474348 B CN111474348 B CN 111474348B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ncov
- igg
- igm
- igras
- marker
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种检测新型冠状病毒的检测试剂盒,包括抗2019‑nCoV IgM反应结合物、抗2019‑nCoV IgG反应结合物、2019‑nCoV IGRAs反应结合物、抗2019‑nCoV IgM标记物、抗2019‑nCoV IgG标记物、2019‑nCoV IGRAs标记物等试剂。本发明的试剂盒联合抗2019‑nCoV IgM、抗2019‑nCoV IgG和2019‑nCoV IGRAs的检测结果,有助于2019‑nCoV急性感染期和复发期的早期辅助诊断,2019‑nCoV近期感染和远期感染的判断,以及2019‑nCoV感染者抗体未出现时的显性感染者和隐性感染者的辅助诊断。可以更简便、快速、准确检测确认阳性感染者,提高对新型冠状病毒核酸阴性疑似患者的检出率,对轻型或无症状新型冠状病毒肺炎恢复者的追踪。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学检测技术领域,尤其涉及一种新型冠状病毒的检测试剂盒以及检测方法。
背景技术
2019新型冠状病毒(2019-nCoV),冠状病毒是一个大型病毒家族,已知可引起感冒以及中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。人感染了冠状病毒后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。在较严重病例中,感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭,甚至死亡。目前对于新型冠状病毒所致疾病没有特异治疗方法。目前,疑似病例,具备以下病原学证据之一者即可确诊:1.实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性;2.病毒基因测序,与已知的新型冠状病毒高度同源。目前核酸和病毒基因测序检测难度大,核酸检出率不高,目前核酸对于真实病例的检测率不过30%至50%,操作繁琐,新冠肺炎临床确诊慢,核酸假阴性是检测实验所面临的一个常见问题,与诸多试验因素相关,比如:不同的原材料供货方、生产工艺、研发人员能力、技术手段使用、患者病毒感染周期、样本类型选择、采样质量、取样过程、运送过程、核酸提取的纯度和得率以及实验操作因素等都会影响到核酸检测试剂的准确度。病毒抗原检测标本一般为上呼吸道标本,一般采用口咽拭子或鼻咽拭子进行取样,在发病初期具有良好的检测效果,但随病情的发展和治疗其检测阳性率有所下降,抗原检测试剂的敏感性受到抗体原料和标记物性能的影响极大,也受患者病毒感染周期、样本类型选择、采样质量和取样过程等因素影响,使不同厂家检测试剂的敏感性跨度较大,一般在20%~70%之间,并且在病毒载量较低时无法检测到目标病毒,检测阴性不能作为排除感染的诊断标准,且核酸检测只有当病毒仍然存在时,检测结果才会呈阳性。检测不能识别经历过感染、康复并清除了体内病毒的人。另外也报道了2019-nCoVIgM/IgG抗体可用作对新型冠状病毒核酸检测阴性疑似病例的补充检测指标或疑似病例诊断中与核酸检测协同使用,IgM抗体是初次体液免疫应答中最早出现的抗体,IgG抗体是血清和体液中含量最高的抗体,占血清总Ig的75%~80%,其亲和力高,在体内分布广泛,IgG抗体水平恢复期比急性期呈4倍或以上升高仅有回顾性诊断意义,一般在患者恢复期才大量产生,时效性差,IgG抗体无法作为病毒感染的早期诊断,对传染性极高新型冠状病毒2019-nCoV的诊断和防控毫无意义。而目前市面上的2019-nCoV IgM抗体检测采用间接法,受IgG抗体含量高的影响极大,造成敏感性低,检出率不高,且易受血样本中干扰因素的交叉反应的影响,容易造成假阳性。因此急需研制一种特异、敏感的2019-nCoV检测试剂,为目前的诊断手段提供补充。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供。
为实现上述目的,本发明采取的技术方案为:一种检测新型冠状病毒的检测试剂盒,包括抗2019-nCoV IgM反应结合液、抗2019-nCoV IgG反应结合液、2019-nCoV IGRAs反应结合液、抗2019-nCoV IgM标记物、抗2019-nCoV IgG标记物、2019-nCoV IGRAs标记物、抗2019-nCoV IgM样本稀释液、抗2019-nCoV IgG样本稀释液、抗2019-nCoV IgM阴性对照品、抗2019-nCoV IgM阳性对照品、抗2019-nCoV IgG低亲和力对照品、抗2019-nCoV IgG高亲和力对照品、2019-nCoV IGRAs校准品、2019-nCoV IGRAs空白培养管、2019-nCoV IGRAs测试培养管、2019-nCoV IGRAs阳性培养管、抗2019-nCoV IgG亲和力对照缓冲液、抗2019-nCoVIgG亲和力解离缓冲液。
优选地,所述试剂盒还包括2019-nCoV IGRAs生物素化抗体。
优选地,所述抗2019-nCoV IgM反应结合液中含有鼠抗人IgM单克隆抗体或2019-nCoV抗原。
优选地,所述抗2019-nCoV IgG反应结合液中含有2019-nCoV抗原。
优选地,所述2019-nCoV抗原为2019-nCoV的N蛋白、S蛋白、S1蛋白、RBD蛋白任意一种或其任一组合。优选地,所述2019-nCoV抗原为2019-nCoV的N蛋白和S1蛋白的组合。
优选地,所述2019-nCoV IGRAs反应结合液中含有鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体。
优选地,所述抗2019-nCoV IgM标记物是2019-nCoV Ag*抗2019-nCoV标记物或2019-nCoV Ag-Mark*抗Mark标记物。所述2019-nCoV Ag表示2019新型冠状病毒的抗原,“*”表示两者之间采用桥接方式连接,Mark为蛋白标签。
或者,所述抗2019-nCoV IgM标记物是鼠抗人IgM单克隆抗体标记物。
优选地,所述2019-nCoV抗原为2019-nCoV的N蛋白、S蛋白、S1蛋白、RBD蛋白任意一种或其任一组合。优选地,所述2019-nCoV抗原为2019-nCoV的N蛋白和S1蛋白的组合。
优选地,所述Mark为myc标签、HA标签、Flag标签、His标签或GST标签中的任意一种;相对应的抗Mark标记物为抗myc、抗HA、抗Flag、抗His或抗GST中的任意一种。
优选地,所述抗2019-nCoV IgG标记物为鼠抗人IgG单克隆抗体标记物。
优选地,所述2019-nCoV IGRAs标记物为鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体标记物或是链霉亲和素标记物。
优选地,所述抗2019-nCoV IgM样本稀释液是含有抗人IgG、酪蛋白、小牛血清的Tris-HCl缓冲液;更优选地,是含有抗人IgG、酪蛋白和小牛血清的Tris-HCl缓冲液。
优选地,所述抗2019-nCoV IgG样本稀释液是含有酪蛋白、小牛血清的Tris-HCl缓冲液;更优选地,是含有酪蛋白和小牛血清的Tris-HCl缓冲液。
优选地,所述抗2019-nCoV IgM阴性对照品为人阴性混合血清。
优选地,所述抗2019-nCoV IgM阳性对照品为抗2019-nCoV IgM阳性血清。
优选地,所述抗2019-nCoV IgG低亲和力对照品为抗2019-nCoV IgG低亲和力血清。
优选地,所述抗2019-nCoV IgG高亲和力对照品为抗2019-nCoV IgG高亲和力血清。
优选地,所述2019-nCoV IGRAs校准品为不同浓度的γ-干扰素。
优选地,所述2019-nCoV IGRAs空白培养管中不添加任何刺激抗原。
优选地,所述2019-nCoV IGRAs测试培养管中以2019-nCoV Ag作为测试刺激抗原。
优选地,所述2019-nCoV IGRAs阳性培养管中以植物血凝素作为阳性刺激抗原。
优选地,所述抗2019-nCoV IgG亲和力对照缓冲液为含有牛血清白蛋白的Tris-HCl缓冲液。
优选地,所述抗2019-nCoV IgG亲和力解离缓冲液为含有尿素的的Tris-HCl缓冲液。
本发明还提供了一种应用本发明所述的试剂盒进行2019-nCoV检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)检测样品中的抗2019-nCoV IgM:将稀释后的样本与抗2019-nCoV IgM反应结合体反应,形成“反应结合体*抗2019-nCoV IgM”复合物;然后与抗2019-nCoV IgM标记物反应,形成“反应结合体*抗2019-nCoVIgM*标记物”;通过判读复合物上的“标记物”的检测信号,如检测信号大于判读临界值,即可判为有反应性,否则为无反应性;
(2)检测样品中的抗2019-nCoV IgG:将稀释后的样本与抗2019-nCoV IgG反应结合体反应,形成“反应结合体*抗2019-nCoV IgG”复合物;然后与抗2019-nCoV IgG标记物反应,形成“反应结合体*抗2019-nCoVIgG*标记物”;通过判读复合物上的“标记物”的检测信号,如检测信号大于判读临界值,即可判为有反应性,否则为无反应性;
(3)检测干扰素:将样品分装至2019-nCoV IGRAs空白培养管、2019-nCoV IGRAs测试培养管、2019-nCoV IGRAs阳性对照管中,直立静置于37℃培养箱中培养6~12h,然后离心,取血浆样本,然后与2019-nCoV IGRAs反应结合体反应,形成“反应结合体*γ-干扰素”复合物,进一步与2019-nCoV IGRAs标记物反应,形成“反应结合体*γ-干扰素*标记物反应”复合物;通过复合物上的“标记物”的检测信号与2019-nCoV IGRAs空白培养管、2019-nCoV IGRAs测试培养管、2019-nCoV IGRAs阳性对照管中的γ-干扰素含量的差值和比值判读是否阴性或阳性;
(4)通过上述获得的抗2019-nCoV IgM、抗2019-nCoV IgG以及2019-nCoV IGRAs的监测结果判定是否感染。
本发明的有益效果:本发明公开了一种检测新型冠状病毒的检测试剂盒,包括抗2019-nCoV IgM反应结合物、抗2019-nCoV IgG反应结合物、2019-nCoV IGRAs反应结合物、抗2019-nCoV IgM标记物、抗2019-nCoV IgG标记物、2019-nCoV IGRAs标记物等试剂。本发明的试剂盒联合抗2019-nCoV IgM、抗2019-nCoV IgG和2019-nCoV IGRAs的检测结果,有助于2019-nCoV急性感染期和复发期的早期辅助诊断,2019-nCoV近期感染和远期感染的判断,以及2019-nCoV感染者抗体未出现时的显性感染者和隐性感染者的辅助诊断。可以更简便、快速、准确检测确认阳性感染者,提高对新型冠状病毒核酸阴性疑似患者的检出率,对轻型或无症状新型冠状病毒肺炎恢复者的追踪。
具体实施方式
为了更加简洁明了的展示本发明的技术方案、目的和优点,下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细描述。
实施例1本发明试剂盒的制备,具体步骤如下:
(1)抗2019-nCoV IgM反应结合物:将鼠抗人IgM单克隆抗体采用50mmol/L、pH7.8Tris-HCl缓冲液进行稀释至1~7μg/mL,将鼠抗人IgM单克隆抗体包被在固相载体上。固相载体可以是硝酸纤维素膜、磁珠、微孔反应板和芯片等。
(2)抗2019-nCoV IgG反应结合物:将2019-nCoV抗原采用50mmol/L、pH7.8 Tris-HCl缓冲液进行稀释至1~7μg/mL,将2019-nCoV抗原包被在固相载体上。固相载体可以是硝酸纤维素膜、磁珠、微孔反应板和芯片等。
(3)2019-nCoV IGRAs反应结合物:将鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体采用50mmol/L、pH7.8 Tris-HCl缓冲液进行稀释至1~7μg/mL,将鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体包被在固相载体上。固相载体可以是硝酸纤维素膜、磁珠、微孔反应板和芯片等。
(4)抗2019-nCoV IgM标记物:用1%碳酸钾调整信号物至pH值8.0~9.6,按300μg/ml~700μg/ml蛋白抗体信号物加入抗2019-nCoV或抗Mark,纯化,将标记物母液用标记物稀释液稀释至工作浓度。标记物稀释液为纯化水溶解的Tris-Base 2.42g/L、BSA20g/L、PVP403g/L、Casein 1g/L、海藻糖20g/L、蔗糖10g/L、吐温-20 1ml/L、Proclin-300 1ml/L混合液。信号物可以是胶体金、荧光微球、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖甘酶、吖啶酯和三联吡啶钌等。
(5)抗2019-nCoV IgG标记物:用1%碳酸钾调整信号物至pH值8.0~9.6,按300μg/ml~700μg/ml蛋白抗体信号物加入鼠抗人IgG单克隆抗体,纯化,将标记物母液用标记物稀释液稀释至工作浓度。标记物稀释液为纯化水溶解的Tris-Base 2.42g/L、BSA20g/L、PVP403g/L、Casein 1g/L、海藻糖20g/L、蔗糖10g/L、吐温-20 1ml/L、Proclin-300 1ml/L混合液。信号物可以是胶体金、荧光微球、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖甘酶、吖啶酯和三联吡啶钌等。
(6)2019-nCoV IGRAs标记物:用1%碳酸钾调整信号物至pH值8.0~9.6,按300μg/ml~700μg/ml蛋白抗体信号物加入鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体,纯化,将标记物母液用标记物稀释液稀释至工作浓度。标记物稀释液为纯化水溶解的Tris-Base 2.42g/L、BSA20g/L、PVP40 3g/L、Casein 1g/L、海藻糖20g/L、蔗糖10g/L、吐温-20 1ml/L、Proclin-300 1ml/L混合液。信号物可以是胶体金、荧光微球、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖甘酶、吖啶酯和三联吡啶钌等。
(7)抗2019-nCoV IgM样本稀释液:10~100μg/mL抗人IgG、0.1%酪蛋白、10%(V/V)小牛血清的50mmol/L、pH7.8 Tris-HCl缓冲液。
(8)抗2019-nCoV IgG样本稀释液:0.1%酪蛋白、10%(V/V)小牛血清的50mmol/L、pH7.8 Tris-HCl缓冲液。
(9)抗2019-nCoV IgM阴性对照品:抗2019-nCoV IgM阴性混合血清。
(10)抗2019-nCoV IgM阳性对照品:用50mmol/L、pH7.8 Tris-HCl缓冲液稀释的抗2019-nCoV IgM阳性混合血清。
(11)抗2019-nCoV IgG低亲和力对照品:用含30ppm的proclin300、1%(M/V)BSA的50mmol/L、pH7.8 Tris-HCl缓冲液稀释的低亲和力抗2019-nCoV IgG混合血清。
(12)抗2019-nCoV IgG高亲和力对照品:用含30ppm的proclin300、1%(M/V)BSA的50mmol/L、pH7.8 Tris-HCl缓冲液稀释的高亲和力抗2019-nCoV IgG混合血清。
(13)2019-nCoV IGRAs校准品:用含30ppm的proclin300、1%(M/V)BSA的50mmol/L、pH7.8 Tris-HCl缓冲液稀释的配制的0,14,5000pg/mLγ干扰素的校准品。
(14)抗2019-nCoV IgG亲和力对照缓冲液:含30ppm的proclin300、1%(M/V)BSA的50mmol/L、pH7.8 Tris-HCl缓冲液。
(15)抗2019-nCoV IgG亲和力解离缓冲液:含30ppm的proclin300、1%(M/V)BSA、2~20mo l/L尿素的50mmol/L、pH7.8 Tris-HCl缓冲液。
(16)2019-nCoV IGRAs空白培养管:含1%(M/V)BSA的50mmol/L、pH7.8 Tris-HCl缓冲液。
(17)2019-nCoV IGRAs测试培养管:含有1~10μg 2019-nCoV抗原的1%(M/V)BSA的50mmol/L、pH7.8 Tris-HCl缓冲液。
(18)2019-nCoV IGRAs阳性培养管:含有1~10μg植物血凝素的1%(M/V)BSA的50mmol/L、pH7.8 Tris-HCl缓冲液。
实施例2采用本发明的试剂检测2019-nCoV
本实施例中的试剂盒包括以下试剂:
(1)含有鼠抗人IgM单克隆抗体的抗2019-nCoV IgM反应结合液。
(2)含有联合N蛋白和S1蛋白作为2019-nCoV抗原的抗2019-nCoV IgG反应结合体液。
(3)含有鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体的2019-nCoV IGRAs反应结合液。
(4)含有2019-nCoV Ag*抗2019-nCoV的标记物或2019-nCoV Ag-Mark*抗Mark标记物的抗2019-nCoV IgM标记物作为抗2019-nCoV IgM标记物,本实施例中抗2019-nCoV标记物为抗2019-nCoV N蛋白与S1蛋白抗体的标记物或Mark为His标签。
(5)含有鼠抗人IgG单克隆抗体的标记物作为抗2019-nCoV IgG标记物。
(6)含有鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体的标记物作为2019-nCoV IGRAs标记物。
(7)含有适量抗人IgG、酪蛋白、小牛血清的Tris-HCl的缓冲液作为(7)抗2019-nCoV IgM样本稀释液。
(8)含有酪蛋白和小牛血清的Tris-HCl缓冲液作为(8)2019-nCoV IgG样本稀释液。
(9)人阴性混合血清作为抗2019-nCoV IgM阴性对照品。
(10)含有抗2019-nCoV IgM阳性血清作为(10)抗2019-nCoV IgM阳性对照品。
(11)含有抗2019-nCoV IgG低亲和力的血清作为作为抗2019-nCoV IgG低亲和力对照品。
(12)含有抗2019-nCoV IgG高亲和力的血清作为抗2019-nCoV IgG高亲和力对照品。
(13)0,14,5000pg/mL的γ-干扰素为2019-nCoV IGRAs校准品。
(14)含有8mol/L尿素的Tris-HCl缓冲液为抗2019-nCoV IgG亲和力解离缓冲液。
(15)含有牛血清白蛋白的Tris-HCl缓冲液为抗2019-nCoV IgG亲和力对照缓冲液。
(16)2019-nCoV IGRAs空白培养管中无添加任何刺激抗原。
(17)2019-nCoV IGRAs测试培养管含有特异性2019-nCoV Ag作为测试刺激抗原。
(18)2019-nCoV IGRAs阳性培养管含有植物血凝素作为阳性刺激抗原。
检测方法:
(1)2019-nCoV IgM抗体检测采用捕获桥式法:a)将样本或对照品加入至抗2019-nCoV IgM样本稀释液按体积比1:10~1:1000进行稀释,优选的稀释比例为1:100;b)稀释后的样本或对照品与抗2019-nCoV IgM反应结合体中的鼠抗人IgM反应,如样本或对照品中存在抗2019-nCoV IgM,则形成“鼠抗人IgM*抗2019-nCoV IgM”复合物;c)然后与抗2019-nCoVIgM标记物中的2019-nCoV Ag*抗2019-nCoV标记物或2019-nCoV Ag-Mark*抗Mark标记物反应,形成“鼠抗人IgM*抗2019-nCoV IgM*2019-nCoV Ag*抗2019-nCoV标记物”或“鼠抗人IgM*抗2019-nCoV IgM*2019-nCoV Ag-Mark*抗Mark标记物”的复合物;d)通过显色或发光检测,通过判读复合物上的“标记物”的检测信号,如检测信号大于判读临界值,即可判为有反应性,否则为无反应性。
(2)2019-nCoV IgG抗体亲和力检测采用间接亲和力法:a)将样本或对照分别加入对照缓冲液、解离缓冲液中,均按体积比1:10~1:1000进行稀释处理,优选的稀释比例为1:100;b)将稀释处理后的样本或对照品与抗2019-nCoV IgG反应结合液中的2019-nCoV Ag反应,如样本或对照品中存在抗2019-nCoV IgG,则形成“2019-nCoV Ag*抗2019-nCoV Ag”复合物;c)然后与抗2019-nCoV IgG标记物中的特异性鼠抗人IgG标记物反应,形成“2019-nCoV Ag*抗2019-nCoV IgG*鼠抗人IgG标记物”复合物;d)通过显色或发光检测,通过判读复合物上的“标记物”的检测信号,如对照测试的检测信号大于判读临界值,即可判为有反应性,否则为无反应性。并分析对照测试和解离测试的检测信号的关系,如果IgG抗体亲和力<50%,为低亲和力IgG抗体,为近期感染;IgG抗体亲和力>59.9%,为高亲和力IgG抗体,为远期感染;IgG抗体亲和力在50%~59.9%间为灰区。
(3)2019-nCoV感染T细胞检测采用效应细胞免疫体外释放干扰素(记为:2019-nCoV IGRAs),使用双抗体夹心法检测干扰素:a)将含有肝素锂/肝素钾的采血管采集静脉血,分装至2019-nCoV IGRAs空白培养管、2019-nCoV IGRAs测试培养管、2019-nCoV IGRAs阳性对照管中,直立静置于37℃培养箱中培养6~12h;b)2019-nCoV IGRAs空白培养管、2019-nCoV IGRAs测试培养管、2019-nCoV IGRAs阳性对照管离心分别取血浆样本,与2019-nCoV IGRAs反应结合体中的鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体反应,如校准品或样本中有人γ-干扰素,则形成“鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体*γ-干扰素”复合物;c)然后与鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体标记物反应,形成“鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体*γ-干扰素*鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体标记物复合物”;d)通过显色或发光检测,通过判读复合物上的“标记物”的检测信号,其检测信号值和校准品或样品中的γ-干扰素含量成正比。再通过2019-nCoVIGRAs空白培养管、2019-nCoV IGRAs测试培养管、2019-nCoV IGRAs阳性对照管中的γ-干扰素含量差值和比值判读是否阴性或阳性。
2019-nCoV IgM抗体/IgG抗体亲和力及2019-nCoV感染T细胞检测结果的判读和确认,见表1。
表1本发明联合检测结果的判读和确认
实施例3
本实施例中的试剂盒包括的试剂与实施例2的不同之处在于:2019-nCoV IGRAs反应结合体中含有链霉亲和素;还包括以生物素标记的鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体作为2019-nCoV IGRAs生物素化抗体。
检测方法:
(1)2019-nCoV IgM抗体检测采用捕获法:a)将样本或对照品加入至抗2019-nCoVIgM样本稀释液按体积比1:10~1:1000进行稀释,优选的稀释比例为1:100;b)稀释后的样本或对照品与抗2019-nCoV IgM反应结合液中的鼠抗人IgM单克隆抗体反应,如样本或对照品中存在抗2019-nCoV IgM,则形成“鼠抗人IgM*抗2019-nCoV IgM”复合物;c)然后再与抗2019-nCoV IgM桥接抗原的特异性的2019-nCoV Ag标记物反应,形成“鼠抗人IgM*抗2019-nCoVIgM*2019-nCoV Ag标记物”;d)通过显色或发光检测,通过判读复合物上的“标记物”的检测信号,如检测信号大于判读临界值,即可判为有反应性,否则为无反应性。
(2)2019-nCoV IgG抗体亲和力检测采用间接亲和力法:a)将样本或对照加入对照缓冲液、解离缓冲液中按体积比1:10~1:1000进行稀释处理,优选的稀释比例为1:100;b)将稀释处理后的样本或对照品与抗2019-nCoV IgG反应结合体中的2019-nCoV Ag反应,如样本或对照品中存在抗2019-nCoV IgG,则形成“2019-nCoV Ag*抗2019-nCoV IgG”复合物;c)然后与抗2019-nCoV IgG标记物中的特异性鼠抗人IgG标记物反应,形成“2019-nCoV Ag*抗2019-nCoV IgG*鼠抗人IgG标记物”复合物;d)通过显色或发光检测,通过判读复合物上的“标记物”的检测信号,如对照测试的检测信号大于判读临界值,即可判为有反应性,否则为无反应性。并分析对照测试和解离测试的检测信号的关系,如果IgG抗体亲和力<50%,为低亲和力IgG抗体,为近期感染;IgG抗体亲和力>59.9%,为高亲和力IgG抗体,为远期感染;IgG抗体亲和力在50%~59.9%间为灰区。
(3)2019-nCoV感染T细胞检测采用效应细胞免疫体外释放干扰素(2019-nCoVIGRAs),使用生物素亲和素、双抗体夹心法检测干扰素:a)将含有肝素锂/肝素钾的采血管采集静脉血,分装至2019-nCoV IGRAs空白培养管、2019-nCoV IGRAs测试培养管、2019-nCoV IGRAs阳性对照管中,直立静置于37℃培养箱中培养6~12h;b)2019-nCoV IGRAs生物素化抗体中的生物素标记鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体与2019-nCoV IGRAs反应结合体中的链霉亲和素反应,形成“链霉亲和素*生物素标记鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体”。c)2019-nCoV IGRAs空白培养管、2019-nCoV IGRAs测试培养管、2019-nCoV IGRAs阳性对照管离心分别取血浆样本,与2019-nCoV IGRAs反应结合体中的鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体反应,如校准品或样本中有人γ-干扰素,则形成“链霉亲和素*生物素标记鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体*γ-干扰素”复合物;d)然后与鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体标记物反应,形成“链霉亲和素*生物素标记鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体*γ-干扰素*鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体标记物”复合物;e)通过显色或发光检测,通过判读复合物上的“标记物”的检测信号,其检测信号值和校准品或样品中的γ-干扰素含量成正比。再通过2019-nCoV IGRAs空白培养管、2019-nCoV IGRAs测试培养管、2019-nCoV IGRAs阳性对照管中的γ-干扰素含量差值和比值判读是否阴性或阳性。
实施例4
本实施例中的试剂盒包括的试剂与实施例2的不同之处在于:以2019-nCoV特异性抗原作为抗2019-nCoV IgM或抗2019-nCoV IgG反应结合体;以鼠抗人IgM单克隆抗体标记物作为抗2019-nCoV IgM标记物;2019-nCoV IGRAs标记物含有链霉亲和素标记物;还包括以生物素标记的鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体作为2019-nCoV IGRAs生物素化抗体。
(1)2019-nCoV IgM抗体检测采用间接法:a)将样本或对照品加入至抗2019-nCoVIgM样本稀释液按体积比1:10~1:1000进行稀释,优选的稀释比例为1:100;b)稀释后的样本或对照品与抗2019-nCoV IgM反应结合体中的鼠抗人IgM反应,如样本或对照品中存在抗2019-nCoV IgM,形成“鼠抗人IgM*抗2019-nCoV IgM”复合物;c)与抗2019-nCoV IgM桥接抗原特异性的2019-nCoV Ag反应;d)而2019-nCoV Ag与针对2019-nCoV Ag的抗体(抗2019-nCoV Ag)或针对2019-nCoV Ag上标签(2019-nCoV Ag M)的抗体(抗2019-nCoV Ag M)的标记物反应,形成“鼠抗人IgM*抗2019-nCoVIgM*2019-nCoV Ag*抗2019-nCoV Ag标记物”或“鼠抗人IgM*抗2019-nCoVIgM*2019-nCoV Ag M*抗2019-nCoV Ag M标记物”的复合物;e)通过显色或发光检测,通过判读复合物上的“标记物”的检测信号,如检测信号大于判读临界值,即可判为有反应性,否则为无反应性。
(2)2019-nCoV IgG抗体亲和力检测采用间接亲和力法:a)将样本或对照加入对照缓冲液、解离缓冲液中按体积比1:10~1:1000进行进行稀释处理,优选的稀释比例为1:100;b)将稀释处理后的样本或对照品与抗2019-nCoV IgG反应结合体中的2019-nCoV Ag反应,如样本或对照品中存在抗2019-nCoV IgG,形成“2019-nCoV Ag*抗2019-nCoV Ag”复合物;c)并与抗2019-nCoV IgG标记物中的特异性鼠抗人IgG标记物反应,形成“2019-nCoVAg*抗2019-nCoV IgG*鼠抗人IgG标记物”复合物;d)通过显色或发光检测,通过判读复合物上的“标记物”的检测信号,如对照测试的检测信号大于判读临界值,即可判为有反应性,否则为无反应性。并分析对照测试和解离测试的检测信号的关系,如果IgG抗体亲和力<50%,为低亲和力IgG抗体,为近期感染;IgG抗体亲和力>59.9%,为高亲和力IgG抗体,为远期感染;IgG抗体亲和力在50%~59.9%间为灰区。
(3)2019-nCoV感染T细胞检测采用效应细胞免疫体外释放干扰素(2019-nCoVIGRAs),使用双抗体夹心桥式法检测干扰素:a)将含有肝素锂/肝素钾的采血管采集静脉血,分装至2019-nCoV IGRAs空白培养管、2019-nCoV IGRAs测试培养管、2019-nCoV IGRAs阳性对照管中,直立静置于37℃培养箱中培养6~12h;b)2019-nCoV IGRAs空白培养管、2019-nCoV IGRAs测试培养管、2019-nCoV IGRAs阳性对照管离心分别取血浆样本,与2019-nCoV IGRAs反应结合体中的鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体反应,如校准品或样本中有人γ-干扰素,则形成“鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体*γ-干扰素”复合物;c)并与2019-nCoVIGRAs生物素化抗体中的生物素标记鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体反应;d)在与2019-nCoVIGRAs标记物中的链霉亲和素标记物形成“鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体*γ-干扰素*生物素标记鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体*链霉亲和素标记物”复合物”;e)通过显色或发光检测,通过判读复合物上的“标记物”的检测信号,其检测信号值和校准品或样品中的γ-干扰素含量成正比。再通过2019-nCoV IGRAs空白培养管、2019-nCoV IGRAs测试培养管、2019-nCoV IGRAs阳性对照管中的γ-干扰素含量差值和比值判读是否阴性或阳性。
实施例5筛选2019-nCoV Ag(2019新型冠状病毒的抗原蛋白)
选用2019-nCoV的N蛋白、S蛋白、S1蛋白、RBD蛋白,通过单独使用N蛋白、S蛋白、S1蛋白、RBD蛋白,以及联合N蛋白+S蛋白、N蛋白+S1蛋白、N蛋白+RBD蛋白。抗2019-nCoV IgM检测采用实施例2中的捕获桥式法采用胶体金法进行筛选,抗2019nCoV IgG检测采用实施例2中的间接法,采用胶体金法进行筛选。2019nCoV IGRAs检测采用实施例2中的双抗体夹心法,采用体外释放荧光免疫法进行筛选。
检测各自的参考品,发现N蛋白+S1蛋白联合使用时,抗2019nCoV IgM、抗2019nCoVIgG和2019nCoV IGRAs检测的阴性和阳性参考品的符合率最高,且在抗2019nCoV IgM、抗2019nCoV IgG检测中的灵敏度最好。原因可能是S蛋白承担与宿主细胞膜受体结合及膜融合功能,是宿主中和抗体的重要作用位点。S蛋白分为两个功能单位:S1和S2。S1通过与宿主受体结合促进病毒感染。S1包含两个域,即N端结构域和C端RBD结构域,可直接与宿主受体相互作用。冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白)是位于病毒内部的蛋白成分,其在β属冠状病毒之间相对比较保守,参与RNA合成,N蛋白在病毒感染的过程中大量表达并诱导产生强烈的免疫反应。结果见表2-表4。
表2不同2019-nCoV Ag检测抗2019nCoV IgM的结果
表3不同2019-nCoV Ag检测抗2019nCoV IgG的结果
表4不同2019-nCoV Ag检测2019nCoV IGRAs的结果
实施例6不同表达系统表达的2019-nCoV Ag筛选
在实施例5的基础上,选用大肠埃希菌表达系统表达的2019-nCoV N蛋白抗原①和S1蛋白抗原②、昆虫表达系统表达的2019-nCoV N蛋白抗原③和S1蛋白抗原④、哺乳动物表达系统表达的2019-nCoV S1蛋白抗原⑤。大肠埃希菌表达系统表达的2019-nCoV N蛋白抗原①和S1蛋白抗原②由菲鹏生物股份有限公司和泰州市百英生物科技有限公司提供,昆虫表达系统表达的2019-nCoV N蛋白抗原③和S1蛋白抗原④由杭州索莱尔博奥生物技术有限公司提供,哺乳动物表达系统表达的2019-nCoV S1蛋白抗原由南京欧凯生物科技有限公司提供。
抗2019nCoV IgM检测采用实施例2中的捕获桥式法,采用免疫荧光法进行筛选。抗2019nCoV IgG检测采用实施例2中的间接法,采用免疫荧光法进行筛选。2019nCoV IGRAs检测采用实施例2中的双抗体夹心法,采用体外释放荧光免疫法进行筛选。
检测各自的参考品,发现昆虫表达系统表达的2019-nCoV N蛋白抗原③+哺乳动物表达系统表达的2019-nCoV S1蛋白抗原⑤联合使用时,抗2019nCoV IgM、抗2019nCoV IgG和2019nCoV IGRAs检测的阴性和阳性参考品的符合率最高,且在抗2019nCoV IgM、抗2019nCoV IgG检测中的灵敏度最好。原因可能是S1蛋白具有很多的糖基化和磷酸化位点,采用哺乳动物表达系统表达更接近天然抗原的结构,N蛋白没有糖基化位点,适合用大肠埃希菌表达系统或昆虫表达系统表达,但是采用大肠埃希菌表达系统表达的抗原如不能达到高纯度,易与肠道疾病的检测者样本中大肠埃希菌抗体发生非特异性交叉反应,导致假阳性,或者未去除的大肠埃希菌可以激活样本中的效应T细胞产生γ干扰素,使2019nCoVIGRAs检测为假阳性。结果见表5-表7。
表5不同表达系统表达的2019-nCoV Ag检测抗2019nCoV IgM的结果
抗2019nCoV IgM | ①+② | ①+④ | ①+⑤ | ②+③ | ③+④ | ③+⑤ |
阴性参考品20份 | 18/20 | 19/20 | 19/20 | 19/20 | 20/20 | 20/20 |
阳性参考品10份 | 8/10 | 8/10 | 8/10 | 8/10 | 8/10 | 10/10 |
检出限参考品 | 1:16 | 1:16 | 1:32 | 1:16 | 1:16 | 1:64 |
表6不同表达系统表达的2019-nCoV Ag检测抗2019nCoV IgG的结果
表7不同表达系统表达的2019-nCoV Ag检测2019nCoV IGRAs的结果
实施例7 2019-nCoV N蛋白直接标记与桥式标记的效果比较
采用抗2019nCoV IgM检测采用本实施例2中的捕获桥式法,采用胶体金法进行筛选。发现2019-nCoV N蛋白桥式标记使用时,其效价较直接标记法高,且与2019-nCoV S1蛋白标记物联合使用,抗2019nCoV IgM检测的阴性和阳性参考品的符合率最高,且在抗2019nCoV IgM检测中的灵敏度最好。原因可能是N蛋白不稳定,等电点较高,标记过程中易出现蛋白失活或标记率过低。结果见表8。
表8不同标记方法的2019nCoV N蛋白检测抗2019nCoV IgM的结果
抗2019nCoV IgM | 直接标记 | 桥式标记 |
2019nCoV N蛋白效价 | 1:500 | 1:2500 |
阴性参考品20份 | 18/20 | 20/20 |
阳性参考品10份 | 8/10 | 10/10 |
检出限参考品 | 1:16 | 1:64 |
实施例8
2019-nCoV N蛋白和S1蛋白抗原保存液(稀释液)的筛选。选用50mmol/L、pH7.2磷酸盐缓冲液,50mmol/L、pH9.6碳酸盐缓冲液,50mmol/L、pH7.8 Tris-HCl缓冲液。采用抗2019nCoV IgM检测采用实施例2中的捕获桥式法,采用免疫荧光法进行筛选。发现使用50mmol/L、pH7.8 Tris-HCl缓冲液时,蛋白的稳定性好。结果见表9。
表9不同抗原保存液对2019-nCoV N蛋白和S1蛋白抗原稳定性影响
实施例9
抗2019-nCoV IgM样本稀释液蛋白的选择。选用抗人IgG、酪蛋白、小牛血清。采用抗2019nCoV IgM检测采用本发明1)模式一中的捕获桥式法,采用胶体金法进行筛选。发现抗人IgG+酪蛋白+小牛血清联合使用时,抗2019nCoV IgM检测的阴性和阳性参考品的符合率最高,且在抗2019nCoV IgM检测中的灵敏度最好。原因可能是抗人IgG能将样本中IgG中和,从而使抗2019nCoV IgM有效结合2019-nCoV Ag,提高了灵敏度,且酪蛋白能够降低非特异性,有效降低了本底,并在小牛血清的联合作用下减少了非特异性反应。结果见表10。
表10抗2019-nCoV IgM样本稀释液蛋白的选择
抗2019nCoV IgM | 抗人IgG | 酪蛋白 | 小牛血清 | 抗人IgG+酪蛋白+小牛血清 |
本底 | 较低 | 较低 | 高 | 低 |
阴性参考品20份 | 20/20 | 19/20 | 18/20 | 20/20 |
阳性参考品10份 | 10/10 | 8/10 | 8/10 | 10/10 |
检出限参考品 | 1:16 | 1:8 | 1:4 | 1:32 |
实施例10
抗2019nCoV IgM检测方法的比较。采用实施例2中的捕获桥式法、实施例3中的捕获法、实施例4中的间接法进行比较,结果发现采用实施例2的捕获桥式法时,抗2019nCoVIgM检测的阴性和阳性参考品的符合率最高,且在抗2019nCoV IgM检测中的灵敏度最好。结果如表11。
表11不同检测方法检测抗2019nCoV IgM的结果
抗2019nCoV IgM | 捕获桥式法 | 捕获法 | 间接法 |
本底 | 低 | 较低 | 高 |
阴性参考品20份 | 20/20 | 19/20 | 18/20 |
阳性参考品10份 | 10/10 | 9/10 | 8/10 |
检出限参考品 | 1:64 | 1:16 | 1:4 |
实施例6
2019-nCoV IGRAs检测方法的比较。采用本实施例2中的双抗体夹心法、实施例3中的生物素亲和素双抗体夹心法、实施例4中的双抗体夹心法桥式法,采用实施例2中的双抗体夹心法操作简便、成本低,且性能与实施例3中的生物素亲和素双抗体夹心法、实施例4中的双抗体夹心法桥式法相当,结果如表12。
表12不同检测方法检测2019-nCoV IGRAs的结果
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (6)
1.一种检测新型冠状病毒的检测试剂盒,其特征在于,包括抗2019-nCoV IgM反应结合物、抗2019-nCoV IgG反应结合物、2019-nCoV IGRAs反应结合物、抗2019-nCoV IgM标记物、抗2019-nCoV IgG标记物、2019-nCoV IGRAs标记物、抗2019-nCoV IgM样本稀释液、抗2019-nCoV IgM阴性对照品、抗2019-nCoV IgM阳性对照品、抗2019-nCoV IgG低亲和力对照品、抗2019-nCoV IgG高亲和力对照品、2019-nCoV IGRAs校准品、2019-nCoV IGRAs空白培养管、2019-nCoV IGRAs测试培养管、2019-nCoV IGRAs阳性培养管、抗2019-nCoV IgG亲和力对照缓冲液、抗2019-nCoV IgG亲和力解离缓冲液;
所述试剂盒还包括2019-nCoV IGRAs生物素化抗体;
所述抗2019-nCoV IgM反应结合物中含有鼠抗人IgM单克隆抗体或2019-nCoV抗原;所述抗2019-nCoV IgG反应结合物中含有2019-nCoV抗原;所述2019-nCoV IGRAs反应结合物中含有鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体;
所述2019-nCoV抗原为2019-nCoV的N蛋白和S1蛋白的组合;
所述2019-nCoV的N蛋白和S1蛋白抗原保存液为50mmol/L、pH7.8 的Tris-HCl缓冲液;
所述抗2019-nCoV IgM标记物是2019-nCoV Ag *抗2019-nCoV 标记物或2019-nCoVAg-Mark*抗Mark标记物,其中,所述2019-nCoV Ag表示2019新型冠状病毒的抗原,“*”表示两者之间采用桥接方式连接,Mark为蛋白标签。
2.如权利要求1所述的新型冠状病毒的检测试剂盒,其特征在于,所述抗2019-nCoVIgM标记物是鼠抗人IgM单克隆抗体标记物。
3.如权利要求1所述的新型冠状病毒的检测试剂盒,其特征在于,所述Mark为myc标签、HA标签、Flag标签、His标签或GST标签中的任意一种;相对应的抗Mark标记物为抗myc、抗HA、抗Flag、抗His或抗GST。
4.如权利要求1所述的新型冠状病毒的检测试剂盒,其特征在于,所述抗2019-nCoVIgG标记物为鼠抗人IgG单克隆抗体标记物;所述2019-nCoV IGRAs标记物为鼠抗人γ-干扰素单克隆抗体标记物或是链霉亲和素标记物。
5.如权利要求1所述的新型冠状病毒的检测试剂盒,其特征在于,所述抗2019-nCoVIgM样本稀释液是含有抗人IgG、酪蛋白、小牛血清的Tris-HCl缓冲液。
6.如权利要求1所述的新型冠状病毒的检测试剂盒,其特征在于,所述抗2019-nCoVIgM阴性对照品为人阴性混合血清;所述抗2019-nCoV IgM阳性对照品为抗2019-nCoV IgM阳性血清;所述抗2019-nCoV IgG低亲和力对照品为抗2019-nCoV IgG低亲和力血清;所述抗2019-nCoV IgG高亲和力对照品为抗2019-nCoV IgG高亲和力血清;所述2019-nCoVIGRAs校准品为不同浓度的γ-干扰素;所述2019-nCoV IGRAs空白培养管中不添加任何刺激抗原;所述2019-nCoV IGRAs测试培养管中以2019-nCoV Ag作为测试刺激抗原;所述抗2019-nCoV IgG亲和力对照缓冲液为含有牛血清白蛋白的Tris-HCl缓冲液;所述抗2019-nCoV IgG亲和力解离缓冲液为含有尿素的Tris-HCl缓冲液。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010312710.3A CN111474348B (zh) | 2020-04-20 | 2020-04-20 | 一种新型冠状病毒的检测试剂盒以及检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010312710.3A CN111474348B (zh) | 2020-04-20 | 2020-04-20 | 一种新型冠状病毒的检测试剂盒以及检测方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN111474348A CN111474348A (zh) | 2020-07-31 |
CN111474348B true CN111474348B (zh) | 2022-12-02 |
Family
ID=71754288
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202010312710.3A Active CN111474348B (zh) | 2020-04-20 | 2020-04-20 | 一种新型冠状病毒的检测试剂盒以及检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN111474348B (zh) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111748653B (zh) * | 2020-08-04 | 2023-03-31 | 中崇信诺生物科技泰州有限公司 | 一种用于新型冠状病毒检测试剂盒的质控品及其制备方法 |
CN112526139A (zh) * | 2020-11-09 | 2021-03-19 | 杭州医学院 | 一种表征covid-19康复患者血浆中和抗体活性的间接elisa检测方法 |
CN113009153B (zh) * | 2021-02-25 | 2023-12-15 | 山东莱博生物科技有限公司 | 一种基于磁微粒化学发光的新冠病毒中和抗体检测试剂盒及其应用 |
CN114062672B (zh) * | 2021-11-12 | 2023-04-25 | 福州大学 | 一种检测covid-19抗体的血糖生物传感器 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017192756A1 (en) * | 2016-05-03 | 2017-11-09 | Nirmidas Biotech, Inc. | Methods and systems for diagnosis and treatment of viral infections |
CN110818800B (zh) * | 2018-08-14 | 2023-09-15 | 上海透景诊断科技有限公司 | 一种通过构建桥连复合物间接检测目的分析物的检测方法 |
-
2020
- 2020-04-20 CN CN202010312710.3A patent/CN111474348B/zh active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN111474348A (zh) | 2020-07-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN111474348B (zh) | 一种新型冠状病毒的检测试剂盒以及检测方法 | |
CA1268419A (en) | Immunoassay for htlv-iii antigens | |
US11959912B2 (en) | Fluorescence immunochromatographic detection card and a preparation method therefor and use thereof | |
EP0983508B1 (en) | Detection of water-borne parasites using electrochemiluminescence | |
CN111273001A (zh) | 一种快速检测血液样本中新冠状病毒2019-nCoV的系统及其制备方法 | |
US20190302127A1 (en) | Method for diagnosing traumatic brain injury | |
JP3542808B2 (ja) | 細胞計数イムノアッセイ | |
US20230358757A1 (en) | Antigen for 2019 novel coronavirus and detection use thereof | |
CN112630428A (zh) | 一种检测新冠病毒IgG/IgM总抗体的方法和试剂盒 | |
WO2004088311A1 (ja) | ノロウイルス又はサポウイルス検体用希釈液及びウイルス検出方法 | |
CN111521818B (zh) | 特异性IgA在制备评价COVID-19患病风险、患病严重程度以及预后评估的试剂盒中的应用 | |
CN110818800B (zh) | 一种通过构建桥连复合物间接检测目的分析物的检测方法 | |
CN112305218A (zh) | 一种新型冠状病毒抗体胶体金免疫侧向层析检测方法及其应用 | |
CN111273017A (zh) | 一种快速检测新型冠状病毒的荧光免疫层析试剂盒 | |
US20120064543A1 (en) | Method for detecting substance in biological sample | |
CN114720691B (zh) | 一种检测生物标志物的试剂盒及其制备方法和应用 | |
CN113791212B (zh) | 新型冠状病毒中和抗体磁珠荧光检测试剂盒及其检测方法 | |
JP2001124779A (ja) | Hcvコア抗原の検出または定量方法およびそれに用いる検出または定量試薬。 | |
CN113252911B (zh) | SARS-CoV-2中和抗体的检测试剂盒及其应用 | |
Chiodi et al. | Measles IgM antibodies in cerebrospinal fluid and serum in subacute sclerosing panencephalitis | |
CN111505310A (zh) | 特异性IgA和IgM在早期评价COVID-19患病风险中的应用 | |
WO2022032497A1 (zh) | 用于检测冠状病毒中和抗体的试剂盒、方法 | |
US9658227B2 (en) | Recombinant GRA antigens and the use of same for early diagnosis of toxoplasmosis | |
CN113607957A (zh) | 一种针对SARS-CoV-2 RBD结构域的特异性中和抗体竞争法ELISA试剂盒 | |
RU2759149C1 (ru) | Способ проведения иммуноферментного анализа для выявления антител в биологическом образце человека, специфичных к коронавирусу человека SARS-COV2, тест-система |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CP03 | Change of name, title or address | ||
CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 510000 No. 6, Yinyi street, economic and Technological Development Zone, Guangzhou, Guangdong Patentee after: Guangzhou Fenghua Biological Co.,Ltd. Address before: No.6, Yinyi street, development zone, Guangzhou, Guangdong 510000 Patentee before: GUANGZHOU FENGHUA BIOENGINEERING Co.,Ltd. |