CN111505310A - 特异性IgA和IgM在早期评价COVID-19患病风险中的应用 - Google Patents
特异性IgA和IgM在早期评价COVID-19患病风险中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本申请提供了特异性IgA和IgM为检测靶标在早期评价个体患有COVID‑19风险中的应用,进而在早期就能够对个体患有COVID‑19风险的进行评价,增强个体预警和防控,有利于对COVID‑19的传播进行控制。本申请还提供了一种早期评价个体患有COVID‑19风险的试剂盒,以及用于检测特异性IgA和IgM的试剂在制备早期评价个体患有COVID‑19风险的试剂盒中的应用。
Description
技术领域
本申请涉及生物医学领域,特别涉及特异性IgA和IgM在早期评价COVID-19患病风险中的应用。
背景技术
新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)于2019年12月在武汉首次报道并在全球范围内快速传播,对人民健康造成了重大影响。世界卫生组织已经宣布该疾病为全球大流行病,但临床上对该种感染并没有检测金标准。
目前使用较多的核酸检测方法假阴性的问题比较严重,疑似病例的病毒核酸检测假阴性率较高,对于确诊COVID-19的病人,阳性率也只有30%~50%。核酸检测过程的采样环节、核酸提取环节和qPCR检测环节均易产生假阴性的问题。
此外,目前针对COVID-19的血清学检测方法仅在国家卫健委发布的新型冠状病毒肺炎诊疗方案试行第七版中有所提及,即“血清新型冠状病毒特异性IgM抗体和IgG抗体阳性;血清新型冠状病毒特异性IgG抗体由阴性转为阳性或恢复期较急性期4倍及以上升高”为确诊病例的血清学依据。特异性IgM抗体和IgG抗体在发病中后期才能达到检测阈值,不利于COVID-19的及时检测。
可见,针对COVID-19的早期检测显得十分迫切且意义重大。
发明内容
有鉴于此,本申请将特异性IgA和IgM作为检测靶标,进而在早期就能够对个体患有COVID-19风险的进行评价,增强个体预警和防控,有利于对COVID-19的传播进行控制。
第一方面,本申请提供了特异性IgA和IgM为检测靶标在早期评价个体患有COVID-19风险中的应用,所述早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后2~7天。
可选的,所述检测靶标来自于所述个体的血清、血浆和全血中的至少一种。
可选的,所述个体为COVID-19疑似病例。
可选的,当所述特异性IgA检测为阳性,所述特异性IgM检测为阴性时,则评价所述个体有患COVID-19的风险。
进一步的,所述评价包括:通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种检测所述个体的所述特异性IgA和IgM,当所述特异性IgA的检测结果高于IgA截止值时,所述特异性IgA为阳性;当所述特异性IgM的检测结果低于IgM截止值时,所述特异性IgM为阴性。
进一步的,所述评价包括:通过胶体金方法检测所述个体特异性IgA和IgM,当所述特异性IgA检测为阳性,所述特异性IgM检测为阴性时,则评价所述个体有患COVID-19的风险。
可选的,所述早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后3~5天。
本申请通过将特异性IgA和IgM作为检测靶标用于早期评价个体患有COVID-19风险,进而可以在早期就提高对个体患病的预警和防控,有利于对COVID-19传播的控制。
第二方面,本申请提供了一种早期评价个体患有COVID-19风险的试剂盒,以特异性IgA和IgM为检测靶标,所述早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后2~7天。
可选的,所述检测靶标来自于所述个体的血清、血浆和全血中的至少一种。
可选的,所述早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后3~5天。
可选的,还包括检测所述特异性IgA和IgM的试剂。进一步的,包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法、酶联免疫方法和胶体金方法中的至少一种检测所述特异性IgA和IgM的试剂。
可选的,所述个体为COVID-19疑似病例。
本申请提供了早期评价个体患有COVID-19风险的试剂盒,在早期对COVID-19患病风险进行评估,进而可以在早期就对个体产生预警效果,有利于对COVID-19的防控。
第三方面,本申请提供了用于检测特异性IgA和IgM的试剂在制备早期评价个体患有COVID-19风险的试剂盒中的应用,所述早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后2~7天。
可选的,所述早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后3~5天。
可选的,所述用于检测特异性IgA和IgM的试剂包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法、酶联免疫方法和胶体金方法中的至少一种检测所述特异性IgA和IgM的试剂。
本申请将特异性IgA和IgM作为检测靶标,在早期对个体患有COVID-19风险进行评价,对个体的预警和防控有重要意义,对COVID-19的辅助诊断有重要的参考价值,提高了COVID-19确诊速度,同时避免造成大规模传播。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本申请实施例中COVID-19患者发病后的累积血清转化曲线。
具体实施方式
下面将结合本申请实施例中的附图,对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本申请保护的范围。
本申请提供了特异性IgA和IgM为检测靶标在早期评价个体患有COVID-19风险中的应用,早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后2~7天。
本申请发明人发现IgA和IgM的检测结果,是与COVID-19密切相关的生物指标,并且IgA的出现要早于IgM,因此通过将特异性IgA和IgM作为检测靶标,进而可以在早期评价个体的COVID-19患病风险,对患者治疗和防控,以及对COVID-19传播的控制有着重要的指导意义。
在本申请实施方式中,在早期评价个体患有COVID-19风险中的应用可以但不限于为在早期评价个体患有COVID-19风险试剂盒中的应用和/或在早期评价个体患有COVID-19风险系统中的应用。
在本申请实施方式中,通过特异性IgA和IgM的相关性在早期评价个体患有COVID-19风险。
在本申请实施方式中,检测靶标来自于个体的血清、血浆和全血中的至少一种。进一步的,血浆和全血中加入抗凝剂,避免凝固。更进一步的,抗凝剂包括乙二胺四乙酸、肝素和枸橼酸钠中的至少一种。
在本申请实施方式中,个体为COVID-19疑似病例。根据国家卫生健康委员会发布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方法(试行第七版)》中的规定疑似病例的诊断标准来判断个体是否为COVID-19疑似病例,例如,通过结合流行病学史和临床表现综合分析。通过检测疑似病例中的特异性IgA和IgM,在早期就对疑似病例的确诊或排除具有重要的参考价值。
在本申请实施方式中,当特异性IgA检测为阳性,特异性IgM检测为阴性时,则评价个体有患COVID-19的风险。可以理解的,当特异性IgA检测为阳性,特异性IgM检测为阴性时,可以在早期评价个体有患COVID-19的风险,也就是说在早期就可以对个体的患病风险进行评估,进而可以在早期就对个体进行隔离,避免传播,同时还可以进行肺部CT检测、核酸检测等,进一步判断个体是否患有COVID-19,提高COVID-19诊断速度。
在本申请实施方式中,评价包括:通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种检测个体的特异性IgA和IgM,当特异性IgA的检测结果高于IgA截止值时,特异性IgA为阳性;当特异性IgM的检测结果低于IgM截止值时,特异性IgM为阴性。进一步的,当特异性IgA的OD值高于IgA截止值时,特异性IgA为阳性;当特异性IgM的OD值低于IgM截止值时,特异性IgM为阴性。在本申请实施方式中,截止值(cut-off值)为正常人群中的特异性IgA和IgM的量或浓度的值的平均值、百分比值或最小值,还可以通过统计学分析确定截止值。在本申请一实施例中,采用正常人群中的特异性IgA和IgM的量或浓度的值的平均值作为截止值。在本申请另一实施例中,通过统计学分析确定截止值。
在本申请一实施例中,可以通过两步间接免疫的化学发光方法进行检测。在一实施例中,将个体的血清、血浆和全血中的至少一种进行预处理后,与磁珠孵育;洗涤之后与化学发光标记物孵育;再加入底物溶液进行显色,在特定波长下读取OD值。若样本中存在SARS-CoV-2的IgA抗体或IgM抗体,则可形成磁珠包被物-SARS-CoV-2IgA抗体-化学发光标记物复合物或磁珠包被物-SARS-CoV-2IgM抗体-化学发光标记物复合物,化学发光标记物的发光强度与特异性IgA抗体或IgM抗体的含量成正相关的关系。可选的,化学发光标记物可以但不限于为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌或吖啶酯。可选的,化学发光底物液包括预激发液和激发液。例如预激发液可以为H2O2溶液,激发液为NaOH溶液。进一步的,磁珠和化学发光标记物分别标记有特异性IgA和IgA抗体。可选的,可以在450nm读取OD值,判断阴性和阳性。可选的,预处理包括但不限于灭活、稀释等。
在本申请一实施例中,将个体的血清、血浆和全血中的至少一种进行预处理后,置于蛋白芯片中进行孵育,再经洗涤后加入示踪剂和显色剂,在特定波长下读取OD值,判断阴性和阳性。可选的,蛋白芯片中设置有SARS-CoV-2的IgA抗体或IgM抗体的点样点。进一步的,蛋白芯片还设置有质控蛋白点,质控蛋白点在检测过程中均能够显色。进一步的,蛋白芯片还设置有空白对照检测点。进一步的,根据显色剂选择检测波长。
在本申请一实施例中,将个体的血清、血浆和全血中的至少一种进行预处理后,置于包被有抗原的酶标板中,经过孵育和洗涤后,加入酶标记物体,经过孵育和洗涤后,加入显色剂孵育,最后加入终止剂终止反应,在特定波长下读取OD值,判断阴性和阳性。进一步,通常以标准品浓度对OD值建立回归关系,进而计算浓度,判断阴性和阳性。在另一实施例中,将个体的血清、血浆和全血中的至少一种进行预处理后,置于包被有抗原的酶标板中,经过孵育和洗涤后,加入生物素二抗,经过孵育和洗涤后,加入亲和素-HRP溶液孵育后洗涤,再加入显色剂,避光反应至多20分钟;加终止剂终止反应;用酶标仪在波长450nm处测定OD值。进一步,通常以标准品浓度对OD值建立回归关系,进而计算浓度。
在本申请实施方式中,评价包括:通过胶体金方法检测个体特异性IgA和IgM,当特异性IgA检测为阳性,特异性IgM检测为阴性时,则评价个体有患COVID-19的风险。在一实施例中,通过胶体金方法检测,当具有显色结果时判断为阳性,不具有显色结果时判断为阴性。
在本申请实施方式中,早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后2~5天。进一步的,早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后3~5天。
本申请通过将特异性IgA和IgM作为检测靶标用于早期评价个体患有COVID-19风险,进而可以在早期就提高对个体患病的预警和防控,有利于对COVID-19传播的控制。
本申请还提供了一种早期评价个体患有COVID-19风险的试剂盒,以特异性IgA和IgM为检测靶标,早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后2~7天。
在本申请实施方式中,早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后2~5天。进一步的,早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后3~5天。
在本申请实施方式中,检测靶标来自于个体的血清、血浆和全血中的至少一种。进一步的,血浆和全血中加入抗凝剂,避免凝固。更进一步的,抗凝剂包括乙二胺四乙酸、肝素和枸橼酸钠中的至少一种。
在本申请实施方式中,还包括检测特异性IgA和IgM的试剂。进一步的,包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法、酶联免疫方法和胶体金方法中的至少一种检测特异性IgA和IgM的试剂。在一实施例中,通过化学发光方法检测特异性IgA和IgM的试剂包括磁珠、化学发光标记物底物溶液等。在一实施例中,通过蛋白芯片方法检测特异性IgA和IgM的试剂包括蛋白芯片、示踪剂和显色剂等。在一实施例中,通过酶联免疫方法检测特异性IgA和IgM的试剂包括包被有抗原的酶标板、酶标记物体和显色剂等。在另一实施例中,通过酶联免疫方法检测特异性IgA和IgM的试剂包括包被有抗原的酶标板、生物素二抗、亲和素-HRP溶液和显色剂等。
在本申请实施方式中,还包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种检测个体的特异性IgA和IgM,当特异性IgA的检测结果高于IgA截止值时,特异性IgA为阳性;当特异性IgM的检测结果低于IgM截止值时,特异性IgM为阴性。进一步的,当特异性IgA的OD值高于IgA截止值时,特异性IgA为阳性;当特异性IgM的OD值低于IgM截止值时,特异性IgM为阴性。在本申请实施方式中,截止值(cut-off值)为正常人群中的特异性IgA和IgM的量或浓度的值的平均值、百分比值或最小值,还可以通过统计学分析确定截止值。在本申请一实施例中,采用正常人群中的特异性IgA和IgM的量或浓度的值的平均值作为截止值。在本申请另一实施例中,通过统计学分析确定截止值。
在本申请实施方式中,个体为COVID-19疑似病例。根据国家卫生健康委员会发布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方法(试行第七版)》中的规定疑似病例的诊断标准来判断个体是否为COVID-19疑似病例,例如,通过结合流行病学史和临床表现综合分析。通过检测疑似病例中的特异性IgA和IgM,在早期就对疑似病例的确诊或排除具有重要的参考价值。
本申请提供了早期评价个体患有COVID-19风险的试剂盒,在早期对COVID-19患病风险进行评估,进而可以在早期就对个体产生预警效果,有利于对COVID-19的防控。
本申请还提供了用于检测特异性IgA和IgM的试剂在制备早期评价个体患有COVID-19风险的试剂盒中的应用,早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后2~7天。
在本申请实施方式中,早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后2~5天。进一步的,早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后3~5天。
在本申请实施方式中,用于检测特异性IgA和IgM的试剂包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法、酶联免疫方法和胶体金方法中的至少一种检测特异性IgA和IgM的试剂。
本申请通过检测IgA和IgM,应用在早期辅助诊断个体是否患有COVID-19中,以及应用在早期辅助诊断个体患有COVID-19的风险提高中,进而提供了用于COVID-19的早期诊断的方法,使得COVID-19确诊速度提高,加快对患者的治疗和防控,避免造成大规模传播。
实施例
本申请对37位COVID-19患者(实验组)和61位非COVID-19患者(对照组)进行检测比对分析,该研究得到广州医科大学附属第一医院伦理委员会的批准。
将上述实验组和对照组的血清样本在56℃灭活30min,用化学发光免疫分析试剂盒和KAESER 6600全自动化学发光免疫分析仪(重庆科斯迈生物科技有限公司)检测实验组和对照组的血清样本中针对SARS-CoV-2的刺突蛋白(S蛋白)特异性IgA、IgM和IgG抗体水平。其中,化学发光免疫分析试剂盒采用两步间接免疫分析,血清样品与磁珠孵育,未结合的材料通过磁分离进行洗涤,收集磁珠并与吖啶酯标记物一起孵育;添加底物溶液以显色,在450nm处检测光密度(OD)值,根据研究中所有SARS-CoV-2阴性血清样品的平均背景反应性进行统计学分析确定截止值(也称为临界值),对于IgA,OD的截止值为3.48;对于IgM,OD的截止值为0.78;对于IgG,OD的截止值为1.71。
对COVID-19患者中抗SARS-CoV-2抗体的血清转化进行检测,即检测了37位COVID-19患者在住院期间收集的191份血清样品中针对SARS-CoV-2的刺突蛋白(S蛋白)蛋白特异性抗体,结果如图1所示。可以看出,IgA第一个血清转化日是症状发作后2天,IgG和IgM的的第一个血清转化日是症状发作后5天,症状发作或发病是指个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征。同时,在症状发作1-3天内,有两个患者的可以检测到特异性IgA,此时还没有患者能够检测到特异性IgG和IgM。在症状发作的14天时,IgA、IgM和IgG的血清转化率分别为90.32%(28/31)、77.41%(24/31)和77.41%(24/31);根据累积血清转化曲线,IgA,IgM和IgG的中位时间分别为13天、15天和15天。
由此可以看出,血清IgA比IgG和IgM抗体能够更早地被检测到,特异性IgA在早期评价COVID-19患病风险中有重要的应用价值,同时结合IgM,进而能够在早期评价COVID-19患病风险。IgG和IgM同种型的抗体已在临床中被普遍用作检测抗体,而IgA的诊断价值已被大大忽略,本申请提高了IgA的诊断价值,在早期对COVID-19患病风险治疗评估有着重要意义。
以上所揭露的仅为本申请较佳实施例而已,当然不能以此来限定本申请之权利范围,本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程,并依本申请权利要求所作的等同变化,仍属于发明所涵盖的范围。
Claims (10)
1.特异性IgA和IgM为检测靶标在早期评价个体患有COVID-19风险中的应用,其特征在于,所述早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后2~7天。
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述检测靶标来自于所述个体的血清、血浆和全血中的至少一种。
3.如权利要求1所述的应用,其特征在于,当所述特异性IgA检测为阳性,所述特异性IgM检测为阴性时,则评价所述个体有患COVID-19的风险。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,所述评价包括:
通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种检测所述个体的所述特异性IgA和IgM,当所述特异性IgA的检测结果高于IgA截止值时,所述特异性IgA为阳性;当所述特异性IgM的检测结果低于IgM截止值时,所述特异性IgM为阴性。
5.如权利要求3所述的应用,其特征在于,所述评价包括:
通过胶体金方法检测所述个体特异性IgA和IgM,当所述特异性IgA检测为阳性,所述特异性IgM检测为阴性时,则评价所述个体有患COVID-19的风险。
6.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后3~5天。
7.一种早期评价个体患有COVID-19风险的试剂盒,其特征在于,以特异性IgA和IgM为检测靶标,所述早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后2~7天。
8.如权利要求7所述的试剂盒,其特征在于,所述早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后3~5天。
9.用于检测特异性IgA和IgM的试剂在制备早期评价个体患有COVID-19风险的试剂盒中的应用,其特征在于,所述早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后2~7天。
10.如权利要求9所述的应用,其特征在于,所述早期为个体具有发热、呼吸道症状或肺炎影像学特征后3~5天。
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LI GUO ET AL: "Profiling Early Humoral Response to Diagnose Novel Coronavirus Disease (COVID-19)", 《CLINICAL INFECTIOUS DISEASES》 * |
刘昊等: "全球首创!独家产品新冠病毒IgA/IgM/IgG抗体联合检测脱颖而出!已获CE准入!", 《体外诊断网》 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112114151A (zh) * | 2020-08-20 | 2020-12-22 | 深圳爱信生物技术有限公司 | 一种2019-nCoV的IgG、IgM和IgA抗体联合检测试剂盒及其检测方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
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WO2021217506A1 (zh) | 2021-11-04 |
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