CN111337682B - 一种新型冠状病毒IgM/IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒 - Google Patents

一种新型冠状病毒IgM/IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种新型冠状病毒IgM/IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，包括磁性颗粒‑抗FITC抗体、FITC标记新型冠状病毒抗原、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM/IgG单克隆抗体或辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgM/IgG单克隆抗体。本发明试剂盒与现有核酸检测试剂盒相比操作简便，安全无环境污染。此外，本发明还具有检测速度快、通量高、灵敏度高等优点。

Description

一种新型冠状病毒IgM/IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒
技术领域
本发明属于免疫分析检测技术领域，尤其是涉及一种新型冠状病毒IgM/IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒。
背景技术
新型冠状病毒（SARS-CoV-2）是2019年在人体中发现的冠状病毒新毒株。冠状病毒（coronavirus，CoV）属巢状病毒目，冠状病毒科，分为本 α、β、γ三个属。α、β属仅对哺乳动物致病，γ属主要引起鸟类感染，CoV主要通过直接接触分泌物或经气溶胶、飞沫传播，也有证据表明可经粪口途径传播。
到目前为止，引起人类呼吸道疾病的人冠状病毒（HCoV）已达7种：HCoV－229E、HCoV－OC43、SARS－CoV、HCoV－NL63、HCoV－HKU1、MERS－CoV和新型冠状病毒（2019），是人呼吸道感染的重要病原体。其中，新型冠状病毒（2019-nCoV），临床表现为发热、乏力等全身症状，伴有干咳，呼吸困难等，可迅速发展为重症肺炎、呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征，浓毒性休克，多器官功能衰竭，严重酸碱代谢紊乱等，甚至危及生命。
化学发光免疫分析方法检测速度非常快，基本上医院有相应的设备就可以完成，采用快速、高通量化学发光免疫检测平台，首个结果25分钟可出，最快的机型每小时可达恒速400测试，单一检验实验室日检测量可达6000测试。采用血液样本，有利于样本采集的标准化，克服取样误差，提高检测结果的准确性。
现在一个需要重视的问题是，有很多人可能是新冠病毒携带者，处于无症状带毒状态，但是具有极强的传染性，需要在较短的时间内迅速通过检测排查出这类人群。目前临床实验室的检测方法主要依靠核酸检测，核酸检测是可以找到感染的病毒证据，但核酸检测要在有条件和资质的实验室进行，存在检测时间长、步骤多、场地、设备、专业检测人员要求高等不足，难以大规模开展，而且成本较高。
人体一旦感染病毒，人体内的免疫系统立刻会开始反应，产生抗体。一般来说，在感染初期的3—7天，IgM抗体指标会迅速上升，达到峰值后逐步下降，随后IgG抗体会长期存在人体内。
由于方法学的限制，核酸检测会出现假阳性和假阴性，造成误诊和漏诊。采用化学发光免疫分析法对IgM/IgG抗体分析，可以在较短时间内迅速对轻症患者、疑似患者和密切接触者进行大规模排查，而且成本大概降低三分之二左右。人体一旦感染病毒，人体内的免疫系统立刻会开始反应，产生抗体。一般来说，在感染初期的3—7天，IgM抗体指标会迅速上升，达到峰值后逐步下降。IgG可用于新型冠状病毒感染肺炎原发感染中后期临床辅助诊断或者流行病学监测。
抗体测定还可用于流行病学调查，了解人群中有多少个体接触过相应的新型病毒，有助于国家对疫情的整体判断和控制。
发明内容
有鉴于此，本发明旨在提出一种新型冠状病毒IgM磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，避免了核酸检测试剂假阴性、操作繁琐等缺点，且解决了通量低，对检测环境和人员要求较高，成本高的缺陷。实现了大范围推广，流行病学调查，提升核酸检测的准确率，实现疑似病例鉴定和密切接触人群的普筛，结合核酸检测，降低漏检和错检率、多种检测试剂盒满足不同级别医院对新型冠状病毒的灵敏、快速和高通量检测需求。
为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：
一种新型冠状病毒IgM磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，包括磁性颗粒-抗FITC抗体、FITC标记新型冠状病毒抗原、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体或辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体；其中，FITC标记新型冠状病毒抗原中的新型冠状病毒抗原包括合成多肽SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4；且4种合成多肽的质量比为1:1:1:1。
优选的，FITC标记新型冠状病毒抗原中的新型冠状病毒抗原包括如表1所示的4种合成多肽或包括如表1所示的4种合成多肽的氨基酸序列的重组抗原，
表1 合成多肽的氨基酸序列
Figure DEST_PATH_IMAGE001
表2重组抗原的氨基酸系列信息
Figure DEST_PATH_IMAGE002
反应管的材料是透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或玻璃。
优选的，还包括稀释液；
当试剂盒中包括辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体时，稀释液包括如下组分，Tris 4-15 g/L；NaCl 5-20g/L ；BSA 5-20g/L；CaseinNa 2-5g/L ；Tween-20 0.5-5mL/L；ProClinTM300 0.5-2mL/L；且pH为8.0±0.20；
当试剂盒中包括碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体时，稀释液包括如下组分：Tris 4-15g/L；ZnCl2 0.5-2g/L；MgCl2 5-20g/L；聚合BSA 1-5g/L；ProClinTM300 1-2mL/L；且pH为8.0±0.20。
优选的，FITC标记新型冠状病毒抗原、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体的工作浓度均为0.01~0.5μg/mL。
优选的，辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体的制备方法如下，
A、辣根过氧化物酶活化：
1）配置5-10mg/mL HRP溶液；
2）配置10-20 mg/mL 过碘酸钠NaIO4溶液；
3）将步骤1）和步骤2）配制溶液按体积比（1-2）：1混匀，2-8℃避光反应30min；
4）配置浓度为10-40μL/mL的乙二醇水溶液，与步骤3）配制的溶液以相同体积混合，常温避光反应0.5-2h，活化即完成；
B、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体：
1）将待标记原料装入透析袋中，用0.02-0.1 M pH9 .6 的碳酸盐缓冲液，透析30min；
2）将标记原料与活化的HRP按质量比1:（1-3）进行混合，之后用0.02-0.1 M碳酸盐缓冲液于2-8℃透析24h，期间换液2-3次；
3）配置浓度为2-5mg/mL的 NaBH4水溶液，按1mgHRP加80μL配制好的NaBH4水溶液的比例进行混合，并于2-8℃避光反应2h；
4）将上述步骤3）完成的标记液用0 .01-0.05M PBS 于2-8℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存；
碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体的制备方法如下，
A、碱性磷酸酶活化：
1）配置5-20mg/mL ALP溶液；
2）配置10-20 mg/mL 过碘酸钠NaIO4溶液；
3）将上述步骤1）和步骤2）配制溶液按体积比（1-2）：1混合均匀，2-8℃避光反应0.5-1h；
4）配置浓度为10-40μL/mL的乙二醇水溶液，与上述步骤3）溶液以相同体积混合，常温避光反应10-30min，活化即完成；
B、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体：
1）将待标记原料装入透析袋中，用0.02-0.1 M pH8.5-10的碳酸盐缓冲液，透析0.5-1h；
2）将标记原料与活化的ALP按质量比1:（1-3）进行混合，之后用0.02-0.1 M碳酸盐缓冲液于2-8℃透析24h，期间换液2-3次；
3）配置浓度为2-5mg/mL的 NaBH4水溶液，按1mgALP加80μL配制好的NaBH4水溶液的比例进行混合，并于2-8℃避光反应1-2h；
4）将上述步骤3）完成的标记液用0 .01-0.05M PBS 于2-8℃透析20-24h，加入等体积甘油，-20℃保存。
本发明还提供一种新型冠状病毒IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，包括磁性颗粒-抗FITC抗体、FITC标记新型冠状病毒抗原、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体或辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体；其中，FITC标记新型冠状病毒抗原中的新型冠状病毒抗原包括合成多肽SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4；且4种合成多肽的质量比为1:1:1:1。
优选的，还包括稀释液；
当试剂盒中包括辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体时，稀释液包括如下组分，Tris 6-15g/L；NaCl 5-15g/L；BSA 5-20g/L；海藻糖 5-20g/L；Tween-20 0.5-2mL/L；ProClinTM300 0.5-1mL/L；硫酸庆大霉素1-3mL/L，且pH为8.0±0.20；
当试剂盒中包括碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体时，稀释液包括如下组分：Tris 2-8g/L； NaCl 5-15g/L； CaseinNa 0.5-5g/L；MgCl20.05-0.2g/L； ProClinTM3000.5-2mL/L，且pH为7.4±0.2。
优选的，FITC标记新型冠状病毒抗原、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体的工作浓度均为0.01~0.5μg/mL。
优选的，辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体的制备方法如下，
A、辣根过氧化物酶活化：
1）配制5-10mg/mL HRP溶液；
2）配制10-20 mg/mL 过碘酸钠NaIO4溶液；
3）将步骤1）和步骤2）配制溶液按体积比（1-2）：1混匀，2-8℃避光反应30min；
4）配制浓度为10-40μL/mL的乙二醇水溶液，与步骤3）配制的溶液以相同体积混合，常温避光反应20-60min，活化即完成；
B、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体：
1）将待标记原料装入透析袋中，用0.02-0.1 M pH9 .6 的碳酸盐缓冲液，透析30min；
2）将标记原料与活化的HRP按质量比1:（1-3）进行混合，之后用0.02-0.1 M碳酸盐缓冲液于2-8℃透析20-24h，期间换液2-3次；
3）配制浓度为2-5mg/mL的 NaBH4水溶液，按1mgHRP加80μL配制好的NaBH4水溶液的比例进行混合，并于2-8℃避光反应1-2h；
4）将上述步骤3）完成的标记液用0 .01-0.05M PBS 于2-8℃透析20-24h，加入等体积甘油，-20℃保存；
碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体的制备方法如下，
A、碱性磷酸酶活化：
1）配制5-20mg/mL ALP溶液；
2）配制10-20 mg/mL 过碘酸钠NaIO4溶液；
3）将上述步骤1）和步骤2）配制溶液按体积比（1-2）：1混合均匀，2-8℃避光反应0.5-1h；
4）配制浓度为10-40μL/mL的乙二醇水溶液，与上述步骤3）溶液以相同体积混合，常温避光反应10-30min，活化即完成，放-20℃保存；
B、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体：
1）将待标记原料装入透析袋中，用0.02-0.1 M pH8.5-10 的碳酸盐缓冲液，透析0.5-1h；
2）将标记原料与活化的ALP按质量比1:（1-3）进行混合，之后用0.02-0.1 M碳酸盐缓冲液于2-8℃透析24h，期间换液2-3；
3）配制浓度为2-5mg/mL的 NaBH4水溶液，按1mgALP加80μL配制好的NaBH4水溶液的比例进行混合，并于2-8℃避光反应1-2h；
4）将上述步骤3）完成的标记液用0 .01-0.05M PBS 于2-8℃透析20-24h，加入等体积甘油，-20℃保存。
优选的，所述FITC标记新型冠状病毒抗原的制备包括以下步骤，
1）将新型冠状病毒抗原装入透析袋中，用0 .02-0.1 M pH 8.5-10的碳酸盐缓冲液，透析0.5-2h，当新型冠状病毒抗原为合成多肽时，省略该步骤；
2）当新型冠状病毒抗原为重组抗原时，将FITC与新型冠状病毒抗原按摩尔比4:1进行混合，之后用0.02-0.1 M碳酸盐缓冲液于2-8℃透析20-24h，期间换液2-3次；
当新型冠状病毒抗原为合成多肽时，将FITC与新型冠状病毒抗原按摩尔比1:1进行混合，避光37℃反应8-12h。
3）将上述步骤2）完成的标记液用0 .01-0.05M PBS 于4℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存。
优选的，还包括化学发光底物；
当试剂盒中包括辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体或辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体时，化学发光底物包括A液和B液；
A液为0.5-1.5g/L鲁米诺，0.05-0.2g/L对碘酚，缓冲液为pH 7.5-9的2-10mmol/LTris-HCl，避光保存；
B液为0.5-1g/L过氧化脲，用工艺用水配制；A液和B液在使用前5min按体积比1:1混合；
当试剂盒中包括碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体或碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体时，化学发光底物包括如下组分，0.1-0.5g/L AMPPD，0.05-0.1g/L Na2SO3，2-10g/L SDS(十二烷基硫酸钠)，5-10g/L Tris；0.02-0.1mL/L Tween-20和1-3mLProclinTM300，pH值为9.0±0.50。
优选的，磁性颗粒-抗FITC抗体配制包括以下步骤，取200mL0.2-0.5M 羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液，加入20-60mg表面联有氨基或羧基的磁性颗粒，室温搅拌0.5-2h，之后加入7-22mg的抗FITC抗体，然后加入EDC，其浓度为5-20mg/mL，室温避光反应1h后，用0.01-0.05M PBS缓冲液洗涤3次，最后用0.01-0.05M PBS定溶至1L即可；所述磁性颗粒为表面包裹带有氨基或羧基活性基团的四氧化三铁，粒径1～2μm。
优选的，磁性颗粒-抗FITC抗体配制包括以下步骤，取100mL0 .05-0.2M 吗啉乙磺酸（MES）缓冲液，加入10-40mg表面联有氨基或羧基的磁性颗粒，室温搅拌0.5-2h，之后加入7-20mg的抗FITC抗体，然后加入EDC，其浓度为5-20mg/mL，2-8℃反应1h后，用0 .01-0.05MPBS缓冲液洗涤3次，最后用0 .01-0.05M PBS定溶至1L即可。
可以根据需要提供质控品，质控品包括阴性质控品和阳性质控品。
阴性质控品，对20份阴性参考品（N1-N20）进行检测，不得出现假阳性，阴性参考品符合率20/20。制备，选取20份新型冠状病毒IgM抗体阴性血清样本，其中包含甲型流感病毒、乙型流感病毒、肺炎支原体等阳性干扰样本，灭活后经一定倍数稀释后，每份分装量为0.5mL，-20℃保存。
阳性质控品，对10份阳性参考品（P1-P10）进行检测，不得出现假阴性，阳性参考品符合率10/10。制备，选取10份不同发病时间、发病程度及抗体不同反应强度的新型冠状病毒IgM抗体阳性血清样本，灭活后经一定倍数稀释后，每份分装量为0.5mL，-20℃保存。
最低检出限参考品，对检出限参考品L1-L4进行检测，L1和L2应检为阳性，L3可检为阳性或阴性，L4应检出阴性。制备，选取5份不同发病时间的新型冠状病毒IgM抗体阳性血清样本，灭活后混合，按照一定比例稀释，分别得到L1-L4，每份分装量为0.5mL，-20℃保存。
精密度参考品，检测应满足以下精密度，（1）批内精密度：检测精密度参考品，每个 水平重复检测20次，计算阴性检出率、阳性检出率。依据阳性质控品测定结果（S/CO）的平均 值与标准差（SD），根据公式（1）计算变异系数（CV），结果应符合以下要求
Figure DEST_PATH_IMAGE003
阴性质控品：阴 性检出率应为100%（n=20）；
Figure DEST_PATH_IMAGE004
弱阳性质控品：阳性检出率应≥90%（n=20）；
Figure DEST_PATH_IMAGE005
阳性质控品：阳 性检出率为100%，且CV≤10%（n=20）。变异系数（CV%）＝SD/平均值×100%…………公式（1）
（2）批间精密度：计算，用三批试剂盒检测参考品中精密度阳性质控品，每批次测试20管，计算阳性检出率。同时计算60次检测结果的平均值和标准差（SD），根据公式（1）计算变异系数（CV），结果应符合以下要求：检测参考品中精密度阳性质控品，阳性检出率应为100%，且CV≤15%。
试剂盒中还应包括20倍浓缩洗液、阴性对照以及阳性对照试剂，其中阳性对照的制备方法：取5份阳性人血清混合，经56℃热灭活45分钟，用含牛血清白蛋白的缓冲液稀释至工作浓度，加入体积浓度1%ProClinTM 300，分装，贴标签，储存于2~8℃；
阴性对照的制备方法：含牛血清白蛋白的缓冲液加入体积浓度1%的ProClin TM300。分装，贴标签，储存于2~8℃。其中缓冲液的配方为：5-15g/L BSA，0.01-0.02mol/L PBS（pH值：7-8，有效期：14个月）
20倍浓缩洗液包括58g/L 磷酸氢二钠，5.92g/L磷酸二氢钠，180g/L NaCl，10mL/LTween-20和1‰ Proclin300；
本发明的原理是，本发明采用的是磁微粒化学发光免疫分析（MCLIA）测定系统，该系统由免疫反应系统和化学发光系统组成，用免疫反应后的产物所产生化学发光信号来指示免疫反应物的存在与否及其含量的高低，以此达到对抗原或抗体物质含量的检测。MCLIA为当今最为敏感的微量免疫测定法，具有灵敏度高、稳定性好、无污染等优点。
本发明采用间接法原理检测人血清中的新型冠状病毒IgM/IgG抗体。将磁性颗粒-抗FITC抗体、FITC标记新型冠状病毒抗原（合成多肽或重组抗原）和样本加入到反应管中，若样本中含有新型冠状病毒IgM/IgG抗体，则与以上试剂中的合成多肽或重组抗原形成复合物，同时结合到磁性颗粒上，洗掉游离成分。将碱性磷酸酶标记或辣根过氧化物酶鼠抗人IgM/IgG单克隆抗体加入反应管中，碱性磷酸酶标记或辣根过氧化物酶的鼠抗人IgM/IgG单克隆抗体作为二抗，与样本中的IgM/IgG抗体结合，并形成碱性磷酸酶标记抗体或辣根过氧化物酶的-IgM/IgG抗体-重组抗原-磁性颗粒复合物，洗掉游离成分。加入化学发光底物液，碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶催化底物液发光，测定各样本管的发光值（RLU）。样本的发光值与其中的新型冠状病毒IgM/IgG抗体浓度呈正相关，从而检测人血清中的新型冠状病毒IgM/IgG抗体。
本发明制备的试剂盒将化学发光免疫分析和磁微粒技术结合，大大提高了检测的灵敏度和准确性，具有灵敏度高、特异性好、稳定性高、适用性强和实验成本低等特点，本技术具有以下优点：（1）以磁微粒为固相载体，大大增加了抗体的有效包被量，节约了抗体的用量；（2）以磁微粒为固相载体包被抗体，增加了抗原-抗体的接触面积，及发光面积，提高了反应的灵敏度；（3）反应在液相中进行，且利用旋转磁场使磁微粒其搅拌作用，大大缩短了反应时间。
相对于现有技术，本发明所述的一种新型冠状病毒IgM/IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，具有以下优势：
表3 IgM抗体检测试剂盒优势
Figure DEST_PATH_IMAGE006
表4 IgG抗体检测试剂盒优势
Figure DEST_PATH_IMAGE007
附图说明
图1为实施例一的ROC曲线分析图；
图2为实施例二的ROC曲线分析图；
图3为实施例三的ROC曲线分析图；
图4为实施例四的ROC曲线分析图。
具体实施方式
除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下面结合实施例来详细说明本发明。
实施例一以及实施例二通用试剂如下所示：
所述FITC标记新型冠状病毒抗原的制备包括以下步骤，
1） 将FITC与新型冠状病毒合成多肽按摩尔比1:1进行混合，避光37℃反应12h。
2）将上述步骤1）完成的标记液用0.01M PBS 于4℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存。
其中，新型冠状病毒抗原为4种合成多肽按相同质量比混合；4种合成多肽的氨基酸序列如表1所示。
需要说明的是，本申请使用的FITC标记的新型冠状病毒合成多肽可为以上方法合成，也可以通过其他现有的常规方式合成，只要能够达到将FITC与新型冠状病毒合成多肽连接就可以。
20倍浓缩洗液包括58g/L 磷酸氢二钠，5.92g/L磷酸二氢钠，180g/L NaCl，10mL/LTween-20和质量浓度2% Proclin300。
阴性对照以及阳性对照试剂，其中阴性对照，制备方法：将含牛血清白蛋白的缓冲液加入1%体积浓度的ProClin TM 300。分装，贴标签，储存于2~8℃。其中缓冲液的配方为：10g/L BSA，0.02mol/L PBS（pH值：7-8，有效期：14个月）
阳性对照，制备方法：取5份阳性人血清混合，经56℃热灭活45分钟，用含牛血清白蛋白的缓冲液稀释至工作浓度，加入ProClinTM 300，分装，贴标签，储存于2~8℃。其中缓冲液的配方为：10g/L BSA，0.02mol/L PBS（pH值：7-8，有效期：14个月）。
实施例一以及实施例二中，磁性颗粒-抗FITC抗体配制包括以下步骤，取200mL0.2M 羟乙基哌嗪乙硫磺酸（HEPES）缓冲液，加入60mg表面联有氨基或羧基的磁性颗粒，室温搅拌30min，之后加入21mg的抗FITC抗体，然后加入EDC，其浓度为10mg/mL，室温避光反应1h后，用0 .01M PBS缓冲液洗涤3次，最后用0 .01M PBS定溶至1L即可；所述磁性颗粒为表面包裹带有氨基或羧基活性基团的四氧化三铁，粒径1～2μm。
实施例三以及实施例四中，磁性颗粒-抗FITC抗体配制包括以下步骤，取100mL0.1M 吗啉乙磺酸（MES）缓冲液，加入20mg表面联有氨基或羧基的磁性颗粒，室温搅拌40min，之后加入7mg的抗FITC抗体，然后加入EDC，其浓度为8mg/mL，2-8℃反应1h后，用0 .01M PBS缓冲液洗涤3次，最后用0 .01M PBS定溶至1L即可；所述磁性颗粒为表面包裹带有氨基或羧基活性基团的四氧化三铁，粒径1～2μm。
实施例一
一种新型冠状病毒IgM磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，包括以上所述的磁性颗粒-抗FITC抗体、以上所述FITC标记新型冠状病毒抗原、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体、20倍浓缩洗液、稀释液、化学发光底物、阴性对照以及阳性对照等试剂。
碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体的制备方法如下：
A、碱性磷酸酶（ALP）活化
1）配置10mg/mL ALP溶液；
2）配置12.8 mg/mL 过碘酸钠NaIO4溶液；
3）将上述步骤1）和步骤2）配制溶液按体积比1：1混合均匀，4℃避光反应30min；
4）配置浓度为20μL/mL的乙二醇水溶液，与上述步骤3）溶液以相同体积混合，常温避光反应30min，活化即完成，放-20℃保存（保存时间不超过3个月）；
B、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体
1）将待标记原料装入透析袋中，用0.05 M pH9 .6 的碳酸盐缓冲液，透析30min；
2）将标记原料与活化的ALP按质量比1:3进行混合，之后用0.05 M碳酸盐缓冲液于4℃透析24h，期间换液2-3次；
3）配置浓度为2mg/mL的 NaBH4水溶液，按1mgALP加80μL配制好的NaBH4水溶液的比例进行混合，并于2-8℃避光反应2h；
4）将上述步骤3）完成的标记液用0 .01 PBS 于4℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存。
稀释液通过如下步骤配制而成，在1L工艺用水中，加入6g Tris、1.36gZnCl2，9.6gMgCl2搅拌至完全溶解；再加入2.1g 聚合BSA搅拌至完全溶解；再加入1.1mL ProClinTM300，搅拌30分钟。用6M HCl 或2M NaOH 调整pH值在8.0±0.2范围内的要求。
化学发光底物通过如下步骤配制而成， 量取900mL的纯化水；分别添加0.25gAMPPD，0.05g Na2SO3，5gSDS(十二烷基硫酸钠)，6gTris，搅拌至完全溶解；再分别添加0.05mLTween-20和1mL ProclinTM300，定容至1L。调节pH至9.0，储存于2~8℃。
将FITC标记新型冠状病毒重组抗原、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体用稀释液进行稀释，稀释到工作浓度0.2μg/mL；也可以在制备相关试剂后，直接稀释至工作浓度，在操作时，直接使用，不需要稀释。
样本分析过程：
1、将待检试剂盒在室温（18~25℃）下平衡30分钟。
2、配制洗液：用蒸馏水将浓缩洗液按1:20稀释（1mL洗液加19mL蒸馏水）。若浓缩洗液有结晶，可将浓缩洗液置于室温或37℃待结晶溶解后再进行稀释。
根据以上研究，确定本试剂盒的反应步骤为：
1、样本处理：取1mL生理盐水，加入20μL样本，用漩涡混匀仪混匀5秒，静置15分钟后开始实验。
2、根据实验需要取出适量的反应管。设置阴性、阳性对照各2管。每管先加入50μLFITC标记的新型冠状病毒抗原（合成多肽）、75μL处理后样本或阴性、阳性对照，再加入50μL抗FITC抗体标记的磁性颗粒，在37℃下反应20分钟。
3、磁分离清洗。
4、每管加入75µL碱性磷酸酶标记的新型冠状病毒IgM抗体。
5、在37℃下反应15分钟。
6、磁分离清洗。
7、每管加入化学发光底物200μL，避光检测，反应5秒读数。
该实施例制备的试剂盒检测效果评价如下：
该产品临床试验以《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》明确的疾病确诊/排除标准为对比，选取684例病例，其中确诊病例282例，排除病例402例。
以下检测使用的仪器是：化学发光法免疫分析仪Axceed260；产品注册号-津械注准20182400046；
1、稳定性
1.1设计要求：试剂盒37±1℃放置7天，外观、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出限、精密性检测结果均应符合设计要求。
1.2试验方法：将试剂盒在37℃存放7天后取出，检测参考品。
表5 实施例一中稳定性检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE008
表6 实施例一中稳定性具体检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE009
Figure DEST_PATH_IMAGE010
Figure DEST_PATH_IMAGE011
2、精密度
2.1设计要求
2.1.1批内精密度：检测参考品中3个不同水平精密度参考品，应符合以下要求
2.1.1.1精密度参考品N：阴性检出率应为100%（n=20）；
2.1.1.2精密度参考品L：阳性检出率应≥90%（n=20）；
2.1.1.3精密度参考品CV：阳性检出率为100%，且CV≤10%（n=20）。
2.1.2批间精密性：检测参考品中精密度阳性质控品，阳性检出率应为100%，且CV≤15%。
2.2试验方法
2.2.1批内精密性：检测精密度参考品，每个水平重复检测20次，计算阴性检出率、阳性检出率。依据阳性质控品测定结果（S/CO）的平均值与标准差（SD），根据公式（2）计算变异系数（CV），结果应符合2.1.1要求。
变异系数（CV%）＝SD/平均值×100%…………公式（2）
2.2.2批间精密性：用三批试剂盒检测参考品中精密度参考品CV，每批次测试20管，计算阳性检出率。同时计算60次检测结果的平均值和标准差（SD），根据公式（2）计算变异系数（CV），结果应符合2.1.2要求。
2.3精密性参考品测定结果
表7实施例一精密性检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE012
Figure DEST_PATH_IMAGE013
Figure DEST_PATH_IMAGE014
3、灵敏度与特异性
表8 实施例一中排除2019-nCoV感染的部分检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE015
表9 实施例一中确诊2019-nCoV感染的部分检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE016
根据检验结果使用SPSS软件进行ROC曲线分析，具体结果如下表所示，ROC曲线分析图如图1所示。
表10 实施例一曲线下的面积
Figure DEST_PATH_IMAGE017
样本S/CO ≥ 1，检测结果判为阳性；样本S/CO < 1，检测结果判为阴性。其中S/CO值为检测样本的发光值/cutoff值。通过ROC曲线确定试剂盒在不同cutoff值的情况下，试剂盒灵敏度及特异性的表现，筛选出最优的cutoff值。
ROC曲线分析结果显示曲线下面积为0.963，表明本发明所述试剂盒在临床诊断中的准确性较高。
实施例二
一种新型冠状病毒IgM磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，包括以上所述的磁性颗粒-抗FITC抗体、以上所述FITC标记新型冠状病毒抗原、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体、20倍浓缩洗液、稀释液、化学发光底物、阴性对照以及阳性对照等试剂。
辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体的制备方法如下，
A：辣根过氧化物酶（HRP）活化
1）配置10mg/mL HRP溶液；
2）配置12.8 mg/mL 过碘酸钠NaIO4溶液；
3）将步骤1）和步骤2）配制溶液按体积比2：1混匀，4℃避光反应30min；
4）配置浓度为20μL/mL的乙二醇水溶液，与步骤3）配制的溶液以相同体积混合，常温避光反应30min，活化即完成，放-20℃保存（保存时间不超过3个月）；
B、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体
1）将待标记原料装入透析袋中，用0.05 M pH9 .6 的碳酸盐缓冲液，透析30min；
2）将标记原料与活化的HRP按质量比1:3进行混合，之后用0.05M碳酸盐缓冲液于4℃透析24h（期间换液2-3次）；
3）配置浓度为2mg/mL的 NaBH4水溶液，按1mgHRP加80μL配制好的NaBH4水溶液的比例进行混合，并于4℃避光反应2h；
4）将上述步骤3）完成的标记液用0 .01M PBS 于4℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存。
稀释液通过如下步骤配制而成，在1.98L工艺用水中，加入12.08g Tris、11.255gNaCl，搅拌至完全溶解；再加入20g BSA、5g CaseinNa搅拌过夜至完全溶解；再加入2.0mLTween-20、4.0 mL ProClinTM300，搅拌30分钟。纯化水定容至2L，用pH计测定其pH值，用6M HCl 或2M NaOH 调整pH值在8.0±0.20范围内的要求用。
化学发光底物包括A液和B液：
A液为0.7g/L鲁米诺，0.08g/L对碘酚，缓冲液为pH8.6的5mmol/L Tris-HCl，避光保存；
B液为0.675g/L过氧化脲，用工艺用水配制；A液和B液在使用前5min按体积比1:1混合。
将FITC标记新型冠状病毒重组抗原、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体用稀释液进行稀释，稀释到工作浓度0.2μg/mL；也可以在制备相关试剂后，直接稀释至工作浓度，在操作时，直接使用，不需要稀释。
样本分析过程：
1、 样本处理：取1mL生理盐水，加入20μL样本，用漩涡混匀仪混匀5秒，静置15分钟后开始实验。
2、根据实验需要取出适量的反应管。设置阴性、阳性对照各2管。每管先加入50μLFITC标记的新型冠状病毒抗原（合成多肽）、75μL处理后样本或阴性、阳性对照，再加入50μL抗FITC抗体标记的磁性颗粒，在37℃下反应20分钟。
3、磁分离清洗。
4、每管加入75µL辣根过氧化物酶标记的新型冠状病毒IgM抗体。
5、在37℃下反应15分钟。
6、磁分离清洗。
7、每管加入化学发光法液A、化学发光底物液B各100μL，避光检测，反应30秒读数。
该实施例制备的试剂盒检测效果评价如下：
该产品临床试验以《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》明确的疾病确诊/排除标准为对比，选取684例病例，其中确诊病例282例，排除病例402例。
以下检测使用的仪器是：化学发光法免疫分析仪Axceed260；产品注册号-津械注准20182400046；
1、稳定性
1.1设计要求：试剂盒37±1℃放置7天，外观、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出限、精密度检测结果均应符合设计要求。
1.2试验方法：将试剂盒在37℃存放7天后取出，检测参考品。
1.3试验结果
表11 实施例二稳定性检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE018
表12 实施例二稳定性具体检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE019
Figure DEST_PATH_IMAGE020
Figure DEST_PATH_IMAGE021
2、精密度
2.1设计要求
2.1.1批内精密度：检测参考品中3个不同水平精密度参考品，应符合以下要求
2.1.1.1精密度参考品N：阴性检出率应为100%（n=20）；
2.1.1.2精密度参考品L：阳性检出率应≥90%（n=20）；
2.1.1.3精密度参考品CV：阳性检出率为100%，且CV≤10%（n=20）。
2.1.2批间精密度：检测参考品中精密度参考品CV，阳性检出率应为100%，且CV≤15%。
2.2试验方法
2.2.1批内精密度：检测精密度参考品，每个水平重复检测20次，计算阴性检出率、阳性检出率。依据测定结果（S/CO）的平均值与标准差（SD），根据公式（2）计算变异系数（CV），结果应符合2.1.1要求。
变异系数（CV%）＝SD/平均值×100%…………公式（2）
2.2.2批间精密度：用三批试剂盒检测参考品中精密度参考品CV，每批次测试20管，计算阳性检出率。同时计算60次检测结果的平均值和标准差（SD），根据公式（2）计算变异系数（CV），结果应符合2.1.2要求。
2.3精密度参考品测定结果
表13 实施例二精密度检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE022
Figure DEST_PATH_IMAGE023
Figure DEST_PATH_IMAGE024
3、灵敏度与特异性
表14 实施例二中排除2019-nCoV感染的部分检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE025
表15 实施例二中确诊2019-nCoV感染的部分检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE026
根据检验结果使用SPSS软件进行ROC曲线分析，具体结果如下表所示，ROC曲线分析图如图2所示。
表16 实施例二中曲线下的面积
Figure DEST_PATH_IMAGE027
样本S/CO ≥ 1，检测结果判为阳性；样本S/CO < 1，检测结果判为阴性。其中S/CO值为检测样本的发光值/cutoff值。通过ROC曲线确定试剂盒在不同cutoff值的情况下，试剂盒灵敏度及特异性的表现，筛选出最优的cutoff值。
ROC曲线分析结果显示曲线下面积为0.963，表明本发明所述试剂盒在临床诊断中的准确性较高。
实施例三
一种新型冠状病毒IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，包括以上所述的磁性颗粒-抗FITC抗体、以上所述FITC标记新型冠状病毒抗原、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体、20倍浓缩洗液、稀释液、化学发光底物、阴性对照以及阳性对照等试剂。
碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体的制备方法如下：
A、碱性磷酸酶（ALP）活化
1）配制10mg/mL ALP溶液；
2）配制12.8 mg/mL 过碘酸钠NaIO4溶液；
3）将上述步骤1）和步骤2）配制溶液按体积比1：1混合均匀，2-8℃避光反应30min；
4）配制浓度为20μL/mL的乙二醇水溶液，与上述步骤3）溶液以相同体积混合，常温避光反应20min，活化即完成，放-20℃保存（保存时间不超过3个月）；
B、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体
1）将待标记原料装入透析袋中，用0.05 M pH9 .6 的碳酸盐缓冲液，透析30min；
2）将标记原料与活化的ALP按质量比1:3进行混合，之后用0.05 M碳酸盐缓冲液于2-8℃透析24h，期间换液2-3次；
3）配制浓度为2mg/mL的 NaBH4水溶液，按1mgALP加80μL配制好的NaBH4水溶液的比例进行混合，并于2-8℃避光反应2h；
4）将上述步骤3）完成的标记液用0 .01 PBS 于2-8℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存。
稀释液通过如下步骤配制，在1.6L工艺用水中，加入12.684g Tris、18.396gNaCl，搅拌至完全溶解；再加入2.1g CaseinNa搅拌至完全溶解；再加入0.2331g MgCl2搅拌至完全溶解；再加入2.1mL ProClinTM300，搅拌30分钟。用纯化水定容至2L，用pH计测定其pH值，用6M HCl 或2M NaOH 调整pH值在7.4±0.2范围内的要求。
化学发光底物包括如下组分，0.25g/L AMPPD，0.05g/L Na2SO3，5g/L SDS(十二烷基硫酸钠)，6g/L Tris；0.05mL/L Tween-20和1mL ProclinTM300，pH值为9.0。
将FITC标记新型冠状病毒重组抗原、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体用稀释液进行稀释，稀释到工作浓度0.2μg/mL；也可以在制备相关试剂后，直接稀释至工作浓度，在操作时，直接使用，不需要稀释。
样本分析过程：
1、将待检试剂盒在室温（18~25℃）下平衡30分钟。
2、配制洗液：用蒸馏水将20倍浓缩洗液按1:20稀释（1mL洗液加19mL蒸馏水）。若浓缩洗液有结晶，可将浓缩洗液置于室温或37℃待结晶溶解后再进行稀释。
根据以上研究，确定本试剂盒的反应步骤为：
1、样本处理：取1mL生理盐水，加入20μL样本，用漩涡混匀仪混匀5秒，静置15分钟后开始实验。
2、根据实验需要取出适量的反应管。设置阴性、阳性对照各2管。每管先加入50μLFITC标记的新型冠状病毒抗原（合成多肽）、75μL处理后样本或阴性、阳性对照，再加入50μL抗FITC抗体标记的磁性颗粒，在37℃下反应20分钟。
3、磁分离清洗。
4、每管加入75µL碱性磷酸酶标记的新型冠状病毒IgG抗体。
5、在37℃下反应15分钟。
6、磁分离清洗。
7、每管加入化学发光底物液200μL，避光检测，反应5秒读数。
该实施例制备的试剂盒检测效果评价如下：
该产品临床试验以《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》明确的疾病确诊/排除标准为对比，选取684例病例，其中确诊病例282例，排除病例402例。
该实施例制备的试剂盒检测效果评价如下：
以下检测使用的仪器是：化学发光法免疫分析仪Axceed260；产品注册号-津械注准20182400046；
1.稳定性
1.1设计要求：试剂盒37±1℃放置7天，外观、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出限、精密度检测结果均应符合设计要求。
1.2试验方法：将试剂盒在37℃存放7天后取出，检测参考品。
1.3试验结果
表17 实施例三中稳定性检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE028
表18 实施例三中稳定性具体检测数据
Figure DEST_PATH_IMAGE029
Figure DEST_PATH_IMAGE030
Figure DEST_PATH_IMAGE031
2、精密度
2.1设计要求
2.1.1批内精密度：检测参考品中3个不同水平精密度参考品，应符合以下要求
2.1.1.1精密度参考品N：阴性检出率应为100%（n=20）；
2.1.1.2精密度参考品L：阳性检出率应≥90%（n=20）；
2.1.1.3精密度参考品CV：阳性检出率为100%，且CV≤10%（n=20）。
2.1.2批间精密度：检测参考品中精密度参考品CV，阳性检出率应为100%，且CV≤15%。
2.2试验方法
2.2.1批内精密度：检测精密度参考品，每个水平重复检测20次，计算阴性检出率、阳性检出率。依据测定结果（S/CO）的平均值与标准差（SD），根据公式（2）计算变异系数（CV），结果应符合2.1.1要求。
变异系数（CV%）＝SD/平均值×100%…………公式（2）
2.2.2批间精密度：用三批试剂盒检测参考品中精密度参考品CV，每批次测试20管，计算阳性检出率。同时计算60次检测结果的平均值和标准差（SD），根据公式（2）计算变异系数（CV），结果应符合2.1.2要求。
2.3精密度参考品测定结果
表19 实施例三中精密度检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE032
Figure DEST_PATH_IMAGE033
3、灵敏度与特异性
表20 实施例三中排除2019-nCoV感染的部分检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE034
表21 实施例三中确诊2019-nCoV感染的部分检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE035
根据检验结果使用SPSS软件进行ROC曲线分析，具体结果如下表所示，ROC曲线分析图如图3所示。
表22 实施例三中曲线下的面积
Figure DEST_PATH_IMAGE036
样本S/CO ≥ 1，检测结果判为阳性；样本S/CO < 1，检测结果判为阴性。其中S/CO值为检测样本的发光值/cutoff值。通过ROC曲线确定试剂盒在不同cutoff值的情况下，试剂盒灵敏度及特异性的表现，筛选出最优的cutoff值。
ROC曲线分析结果显示曲线下面积为0.984，表明本发明所述试剂盒在临床诊断中的准确性较高。
实施例四
一种新型冠状病毒IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，包括以上所述的磁性颗粒-抗FITC抗体、以上所述FITC标记新型冠状病毒抗原、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体、20倍浓缩洗液、稀释液、化学发光底物、阴性对照以及阳性对照等试剂。
辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体的制备方法如下，
A：辣根过氧化物酶（HRP）活化
1）配制10mg/mL HRP溶液；
2）配制12.8 mg/mL 过碘酸钠NaIO4溶液；
3）将步骤1）和步骤2）配制溶液按体积比1：1混匀，2-8℃避光反应30min；
4）配制浓度为20μL/mL的乙二醇水溶液，与步骤3）配制的溶液以相同体积混合，常温避光反应20min，活化即完成，放-20℃保存（保存时间不超过3个月）；
B、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体
1）将待标记原料装入透析袋中，用0.05 M pH9 .6 的碳酸盐缓冲液，透析30min；
2）将标记原料与活化的HRP按质量比1:3进行混合，之后用0.05M碳酸盐缓冲液于2-8℃透析24h（期间换液2-3次）；
3）配制浓度为2mg/mL的 NaBH4水溶液，按1mgHRP加80μL配制好的NaBH4水溶液的比例进行混合，并于2-8℃避光反应2h；
4）将上述步骤3）完成的标记液用0 .01M PBS 于2-8℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存。
稀释液包括如下组分：Tris 12.05g/L；NaCl 5.8g/L；BSA 10g/L；海藻糖 10g/L；Tween-20 1mL/L； ProClinTM300 0.75mL/L；硫酸庆大霉素 2.5 mL/L，且pH为8.0±0.20；
化学发光底物包括A液和B液
A液为0.7g/L鲁米诺，0.08g/L对碘酚，缓冲液为pH8.6的5mmol/L Tris-HCl，避光保存；
B液为0.675g/L过氧化脲，用工艺用水配制；A液和B液在使用前5min按体积比1:1混合；
将FITC标记新型冠状病毒重组抗原、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体用稀释液进行稀释，稀释到工作浓度0.2μg/mL；也可以在制备相关试剂后，直接稀释至工作浓度，在操作时，直接使用，不需要稀释。
样本分析过程：
1、将待检试剂盒在室温（18~25℃）下平衡30分钟。
2、配制洗液：用蒸馏水将浓缩洗液按1:20稀释（1mL洗液加19mL蒸馏水）。若浓缩洗液有结晶，可将浓缩洗液置于室温或37℃待结晶溶解后再进行稀释。
根据以上研究，确定本试剂盒的反应步骤为：
1、样本处理：取1mL生理盐水，加入20μL样本，用漩涡混匀仪混匀5秒，静置15分钟后开始实验。
2、根据实验需要取出适量的反应管。设置阴性、阳性对照各2管。每管先加入50μLFITC标记的新型冠状病毒抗原（合成多肽）、75μL处理后样本或阴性、阳性对照，再加入50μL抗FITC抗体标记的磁性颗粒，在37℃下反应20分钟。
3、磁分离清洗。
4、每管加入75µL辣根过氧化物酶标记的新型冠状病毒IgG抗体。
5、在37℃下反应15分钟。
6、磁分离清洗。
7 每管加入化学发光法液A、化学发光底物液B各100μL，避光检测，反应30秒读数。
该产品临床试验以《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》明确的疾病确诊/排除标准为对比，选取684例病例，其中确诊病例282例，排除病例402例。
该实施例制备的试剂盒检测效果评价如下：
以下检测使用的仪器是：以下检测使用的仪器是：化学发光法免疫分析仪Axceed260；产品注册号-津械注准20182400046；
1、稳定性
1.1设计要求：试剂盒37±1℃放置7天，外观、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出限、精密度检测结果均应符合设计要求。
1.2试验方法：将试剂盒在37℃存放7天后取出，检测参考品。
1.3试验结果
表 23 实施例四中稳定性检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE037
表 24 实施例四中稳定性具体检测数据
Figure DEST_PATH_IMAGE038
Figure DEST_PATH_IMAGE039
Figure DEST_PATH_IMAGE040
2、精密度
2.1设计要求
2.1.1批内精密度：检测参考品中3个不同水平精密度参考品，应符合以下要求
2.1.1.1精密度参考品N：阴性检出率应为100%（n=20）；
2.1.1.2精密度参考品L：阳性检出率应≥90%（n=20）；
2.1.1.3精密度参考品CV：阳性检出率为100%，且CV≤10%（n=20）。
2.1.2批间精密度：检测参考品中精密度参考品CV，阳性检出率应为100%，且CV≤15%。
2.2试验方法
2.2.1批内精密度：检测精密度参考品，每个水平重复检测20次，计算阴性检出率、阳性检出率。依据测定结果（S/CO）的平均值与标准差（SD），根据公式（2）计算变异系数（CV），结果应符合2.1.1要求。
变异系数（CV%）＝SD/平均值×100%…………公式（2）
2.2.2批间精密度：用三批试剂盒检测参考品中精密度参考品CV，每批次测试20管，计算阳性检出率。同时计算60次检测结果的平均值和标准差（SD），根据公式（2）计算变异系数（CV），结果应符合2.1.2要求。
2.3精密度参考品测定结果
表25 实施例四中精密度检测数据
Figure DEST_PATH_IMAGE041
Figure DEST_PATH_IMAGE042
Figure DEST_PATH_IMAGE043
3、灵敏度与特异性
表 26 实施例四中排除2019-nCoV感染的部分检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE044
表 27 实施例四中确诊2019-nCoV感染的部分检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE045
根据检验结果使用SPSS软件进行ROC曲线分析，具体结果如下表所示，ROC曲线分析图如图4所示。
表28 实施例四中曲线下的面积
Figure DEST_PATH_IMAGE046
样本S/CO ≥ 1，检测结果判为阳性；样本S/CO < 1，检测结果判为阴性。其中S/CO值为检测样本的发光值/cutoff值。通过ROC曲线确定试剂盒在不同cutoff值的情况下，试剂盒灵敏度及特异性的表现，筛选出最优的cutoff值。
ROC曲线分析结果显示曲线下面积为0.984，表明本发明所述试剂盒在临床诊断中的准确性较高。
以上所述仅为本发明的较佳施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司
重庆医科大学
<120> 一种新型冠状病毒IgM/IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒
<160> 10
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
1 5 10 15
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln
20 25
<210> 2
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val Gln Pro
1 5 10 15
Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe
20 25 30
Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr
35 40 45
<210> 3
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Trp Phe Thr Ala Leu Thr Gln His Gly Lys Glu Asp Leu Lys Phe Pro
1 5 10 15
Arg Gly Gln Gly Val Pro Ile Asn Thr Asn Ser
20 25
<210> 4
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Gln Leu Glu Ser Lys Met Ser Gly Lys Gly Gln Gln Gln Gln Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Thr Lys Lys Ser Ala Ala Glu Ala Ser Lys Lys Pro Arg Gln
20 25 30
Lys Arg Thr Ala Thr Lys Ala Tyr
35 40
<210> 5
<211> 204
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Met Ser Asp Asn Gly Pro Gln Asn Gln Arg Asn Ala Pro Arg Ile Thr
1 5 10 15
Phe Gly Gly Pro Ser Asp Ser Thr Gly Ser Asn Gln Asn Gly Glu Arg
20 25 30
Ser Gly Ala Arg Ser Lys Gln Arg Arg Pro Gln Gly Leu Pro Asn Asn
35 40 45
Thr Ala Ser Trp Phe Thr Ala Leu Thr Gln His Gly Lys Glu Asp Leu
50 55 60
Lys Phe Pro Arg Gly Gln Gly Val Pro Ile Asn Thr Asn Ser Ser Pro
65 70 75 80
Asp Asp Gln Ile Gly Tyr Tyr Arg Arg Ala Thr Arg Arg Ile Arg Gly
85 90 95
Gly Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg Trp Tyr Phe Tyr Tyr
100 105 110
Leu Gly Thr Gly Pro Glu Ala Gly Leu Pro Tyr Gly Ala Asn Lys Asp
115 120 125
Gly Ile Ile Trp Val Ala Thr Glu Gly Ala Leu Asn Thr Pro Lys Asp
130 135 140
His Ile Gly Thr Arg Asn Pro Ala Asn Asn Ala Ala Ile Val Leu Gln
145 150 155 160
Leu Pro Gln Gly Thr Thr Leu Pro Lys Gly Phe Tyr Ala Glu Gly Ser
165 170 175
Arg Gly Gly Ser Gln Ala Ser Ser Arg Ser Ser Ser Arg Ser Arg Asn
180 185 190
Ser Ser Arg Asn Ser Thr Pro Gly Ser Ser Arg Gly
195 200
<210> 6
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Ser Arg Gly Gly Ser Gln Ala Ser Ser Arg Ser Ser Ser Arg Ser Arg
1 5 10 15
Asn Ser Ser Arg Asn Ser Thr Pro Gly Ser Ser Arg Gly Thr Ser Pro
20 25 30
Ala Arg Met Ala Gly Asn Gly Gly Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu
35 40 45
Leu Asp Arg Leu Asn Gln Leu Glu Ser Lys Met Ser Gly Lys Gly Gln
50 55 60
Gln Gln Gln Gly Gln Thr Val Thr Lys Lys Ser Ala Ala Glu Ala Ser
65 70 75 80
Lys Lys Pro Arg Gln Lys Arg Thr Ala Thr Lys Ala Tyr Asn Val Thr
85 90 95
Gln Ala Phe Gly Arg Arg Gly Pro Glu Gln Thr Gln Gly Asn Phe Gly
100 105 110
Asp Gln Glu Leu Ile Arg Gln Gly Thr Asp Tyr Lys His Trp Pro Gln
115 120 125
Ile Ala Gln Phe Ala Pro Ser Ala Ser Ala Phe Phe Gly Met Ser Arg
130 135 140
Ile Gly Met Glu Val Thr Pro Ser Gly Thr Trp Leu Thr Tyr Thr Ala
145 150 155 160
Ala Ile Lys Leu Asp Asp Lys Asp Pro Asn Phe Lys Asp Gln Val Ile
165 170 175
Leu Leu Asn Lys His Ile Asp Ala Tyr Lys Thr Phe Pro Pro Thr Glu
180 185 190
Pro Lys Lys Asp Lys Lys Lys Lys Ala Asp Glu Thr Gln Ala Leu Pro
195 200 205
Gln Arg Gln Lys Lys Gln Gln Thr Val Thr Leu Leu Pro Ala Ala Asp
210 215 220
Leu Asp Asp Phe Ser Lys Gln Leu Gln Gln Ser Met Ser Ser Ala Asp
225 230 235 240
Ser Thr Gln Ala
<210> 7
<211> 325
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser
325
<210> 8
<211> 395
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Thr Leu Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn
1 5 10 15
Phe Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr
20 25 30
Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser
35 40 45
Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr
50 55 60
Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly
65 70 75 80
Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala
85 90 95
Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly
100 105 110
Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe
115 120 125
Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val
130 135 140
Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu
145 150 155 160
Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser
165 170 175
Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln
180 185 190
Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg
195 200 205
Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys
210 215 220
Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe
225 230 235 240
Asn Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys
245 250 255
Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr
260 265 270
Asp Ala Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro
275 280 285
Cys Ser Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser
290 295 300
Asn Gln Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro
305 310 315 320
Val Ala Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser
325 330 335
Thr Gly Ser Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala
340 345 350
Glu His Val Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly
355 360 365
Ile Cys Ala Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg
370 375 380
Ser Val Ala Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr
385 390 395
<210> 9
<211> 305
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser
1 5 10 15
Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu
20 25 30
Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys
35 40 45
Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe
50 55 60
Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp
65 70 75 80
Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr
85 90 95
Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro
100 105 110
Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe
115 120 125
Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp
130 135 140
Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe
145 150 155 160
Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala
165 170 175
Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr
180 185 190
Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile Pro Phe Ala Met Gln Met Ala
195 200 205
Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn
210 215 220
Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln
225 230 235 240
Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val
245 250 255
Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser
260 265 270
Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg
275 280 285
Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly
290 295 300
Arg
305
<210> 10
<211> 299
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
Asn Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser
1 5 10 15
Ala Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu
20 25 30
Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser
35 40 45
Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val
50 55 60
Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr
65 70 75 80
Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
85 90 95
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg
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Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ser
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Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln
130 135 140
Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly Lys Ala
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165 170 175
Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn
180 185 190
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195 200 205
Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu
210 215 220
Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly
225 230 235 240
Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile
245 250 255
Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp
260 265 270
Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr
275 280 285
Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala
290 295

Claims (12)

1.一种新型冠状病毒IgM磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：包括磁性颗粒-抗FITC抗体、FITC标记新型冠状病毒抗原以及酶标记的鼠抗人IgM单克隆抗体；其中，所述酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶；FITC标记新型冠状病毒抗原中的新型冠状病毒抗原包括合成多肽SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4；且4种合成多肽的质量比为1:1:1:1。
2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgM磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：还包括稀释液；
当试剂盒中包括辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体时，稀释液包括如下组分，Tris 4-15 g/L；NaCl 5-20g/L ；BSA 5-20g/L；CaseinNa 2-5g/L ；Tween-20 0.5-5mL/L；ProClinTM300 0.5-2mL/L；且pH为8.0±0.20；
当试剂盒中包括碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体时，稀释液包括如下组分：Tris4-15g/L；ZnCl2 0.5-2g/L；MgCl2 5-20g/L；聚合BSA 1-5g/L； ProClinTM300 1-2mL/L； 且pH为8.0±0.20。
3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgM磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：FITC标记新型冠状病毒抗原、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体的工作浓度均为0.01~0.5μg/mL。
4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgM磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体的制备方法如下，
A、辣根过氧化物酶活化：
1）配制5-10mg/mL 辣根过氧化物酶溶液；
2）配制10-20 mg/mL 过碘酸钠NaIO4溶液；
3）将步骤1）和步骤2）配制溶液按体积比（1-2）：1混匀，2-8℃避光反应30min；
4）配制浓度为10-40μL/mL的乙二醇水溶液，与步骤3）配制的溶液以相同体积混合，常温避光反应0.5-2h，活化即完成；
B、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体：
1）将待标记原料装入透析袋中，用0.02-0.1 M pH9 .6 的碳酸盐缓冲液，透析30min；
2）将标记原料与活化的辣根过氧化物酶按质量比1:（1-3）进行混合，之后用0.02-0.1M碳酸盐缓冲液于2-8℃透析24h，期间换液2-3次；
3）配制浓度为2-5mg/mL的 NaBH4水溶液，按1mg辣根过氧化物酶加80μL配制好的NaBH4水溶液的比例进行混合，并于2-8℃避光反应2h；
4）将上述步骤3）完成的标记液用0 .01-0.05M PBS 于2-8℃透析24h，加入等体积甘油，-20℃保存；
碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体的制备方法如下，
A、碱性磷酸酶活化：
1）配制5-20mg/mL 碱性磷酸酶溶液；
2）配制10-20 mg/mL 过碘酸钠NaIO4溶液；
3）将上述步骤1）和步骤2）配制溶液按体积比（1-2）：1混合均匀，2-8℃避光反应0.5-1h；
4）配制浓度为10-40μL/mL的乙二醇水溶液，与上述步骤3）溶液以相同体积混合，常温避光反应10-30min，活化即完成；
B、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体：
1）将待标记原料装入透析袋中，用0.02-0.1 M pH8.5-10的碳酸盐缓冲液，透析0.5-1h；
2）将标记原料与活化的碱性磷酸酶按质量比1:（1-3）进行混合，之后用0.02-0.1 M碳酸盐缓冲液于2-8℃透析24h，期间换液2-3次；
3）配制浓度为2-5mg/mL的 NaBH4水溶液，按1mg碱性磷酸酶加80μL配制好的NaBH4水溶液的比例进行混合，并于2-8℃避光反应1-2h；
4）将上述步骤3）完成的标记液用0.01-0.05M PBS 于2-8℃透析20-24h，加入等体积甘油，-20℃保存。
5.一种新型冠状病毒IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：包括磁性颗粒-抗FITC抗体、FITC标记新型冠状病毒抗原以及酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体，其中，所述的酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶；FITC标记新型冠状病毒抗原中的新型冠状病毒抗原包括合成多肽SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4；且4种合成多肽的质量比为1:1:1:1。
6.根据权利要求5所述的新型冠状病毒IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：还包括稀释液；
当试剂盒中包括辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体时，稀释液包括如下组分，Tris 6-15g/L；NaCl 5-15g/L；BSA 5-20g/L；海藻糖 5-20g/L；Tween-20 0.5-2mL/L；ProClinTM300 0.5-1mL/L；硫酸庆大霉素1-3mL/L，且pH为8.0±0.2；
当试剂盒中包括碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体时，稀释液包括如下组分：Tris2-8g/L； NaCl5-15g/L； CaseinNa 0.5-5g/L；MgCl20.05-0.2g/L； ProClinTM300 0.5-2mL/L，且pH为7.4±0.2。
7.根据权利要求5所述的新型冠状病毒IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：FITC标记新型冠状病毒抗原、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体的工作浓度均为0.01~0.5μg/mL。
8.根据权利要求5所述的新型冠状病毒IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体的制备方法如下，
A、辣根过氧化物酶活化：
1）配制5-10mg/mL 辣根过氧化物酶溶液；
2）配制10-20 mg/mL 过碘酸钠NaIO4溶液；
3）将步骤1）和步骤2）配制溶液按体积比（1-2）：1混匀，2-8℃避光反应30min；
4）配制浓度为10-40μL/mL的乙二醇水溶液，与步骤3）配制的溶液以相同体积混合，常温避光反应20-60min，活化即完成；
B、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体：
1）将待标记原料装入透析袋中，用0.02-0.1 M pH9 .6 的碳酸盐缓冲液，透析30min；
2）将标记原料与活化的辣根过氧化物酶按质量比1:（1-3）进行混合，之后用0.02-0.1M碳酸盐缓冲液于2-8℃透析20-24h，期间换液2-3次；
3）配制浓度为2-5mg/mL的 NaBH4水溶液，按1mg辣根过氧化物酶加80μL配制好的NaBH4水溶液的比例进行混合，并于2-8℃避光反应1-2h；
4）将上述步骤3）完成的标记液用0 .01-0.05M PBS 于2-8℃透析20-24h，加入等体积甘油，-20℃保存；
碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体的制备方法如下，
A、碱性磷酸酶活化：
1）配制5-20mg/mL 碱性磷酸酶溶液；
2）配制10-20 mg/mL 过碘酸钠NaIO4溶液；
3）将上述步骤1）和步骤2）配制溶液按体积比（1-2）：1混合均匀，2-8℃避光反应0.5-1h；
4）配制浓度为10-40μL/mL的乙二醇水溶液，与上述步骤3）溶液以相同体积混合，常温避光反应10-30min，活化即完成，放-20℃保存；
B、碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体：
1）将待标记原料装入透析袋中，用0.02-0.1 M pH8.5-10 的碳酸盐缓冲液，透析0.5-1h；
2）将标记原料与活化的碱性磷酸酶按质量比1:（1-3）进行混合，之后用0.02-0.1 M碳酸盐缓冲液于2-8℃透析24h，期间换液2-3次；
3）配制浓度为2-5mg/mL的 NaBH4水溶液，按1mg碱性磷酸酶加80μL配制好的NaBH4水溶液的比例进行混合，并于2-8℃避光反应1-2h；
4）将上述步骤3）完成的标记液用0 .01-0.05M PBS 于2-8℃透析20-24h，加入等体积甘油，-20℃保存。
9.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgM磁微粒化学发光免疫检测试剂盒或权利要求5所述的新型冠状病毒IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：所述FITC标记新型冠状病毒抗原的制备包括以下步骤，
1）将FITC与新型冠状病毒抗原按摩尔比1:1进行混合，避光37℃反应8-12h；
2）将上述步骤1）完成的标记液用0 .01-0.05M PBS 于4℃透析20-24h，加入等体积甘油，-20℃保存。
10.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgM磁微粒化学发光免疫检测试剂盒或权利要求5所述的新型冠状病毒IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：还包括化学发光底物；
当试剂盒中包括辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体或辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体时，化学发光底物包括A液和B液：
A液为0.5-1.5g/L鲁米诺，0.05-0.2g/L对碘酚，缓冲液为pH 7.5-9的2-10mmol/LTris-HCl，避光保存；
B液为0.5-1g/L过氧化脲，用工艺用水配制；A液和B液在使用前5min按体积比1:1混合；
当试剂盒中包括碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体或碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体时，化学发光底物包括如下组分，0.1-0.5g/L AMPPD，0.05-0.1g/L Na2SO3，2-10g/L SDS(十二烷基硫酸钠)，5-10g/L Tris；0.02-0.1mL/L Tween-20和1-3mLProclinTM300，pH值为9.0±0.50。
11.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgM磁微粒化学发光免疫检测试剂盒或权利要求5所述的新型冠状病毒IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：磁性颗粒-抗FITC抗体配制包括以下步骤，取200mL0.2-0.5M 羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液，加入20-60mg表面联有氨基或羧基的磁性颗粒，室温搅拌0.5-2h，之后加入7-22mg的抗FITC抗体，然后加入EDC，其浓度为5-20mg/mL，室温避光反应1h后，用0.01-0.05M PBS缓冲液洗涤3次，最后用0.01-0.05M PBS定溶至1L即可；所述磁性颗粒为表面包裹带有氨基或羧基活性基团的四氧化三铁，粒径1～2μm。
12.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgM磁微粒化学发光免疫检测试剂盒或权利要求5所述的新型冠状病毒IgG磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：磁性颗粒-抗FITC抗体配制包括以下步骤，取100mL0 .05-0.2M 吗啉乙磺酸缓冲液，加入10-40mg表面联有氨基或羧基的磁性颗粒，室温搅拌0.5-2h，之后加入7-20mg的抗FITC抗体，然后加入EDC，其浓度为5-20mg/mL，2-8℃反应1h后，用0 .01-0.05M PBS缓冲液洗涤3次，最后用0 .01-0.05M PBS定溶至1L即可。
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