CN112595852A - 一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测SARS‑CoV‑2病毒抗体的试剂盒及其制备方法，解决了现有的免疫学分析方法中的夹心法在检测SARS‑CoV‑2病毒抗体，费时费力，试剂盒灵敏度和特异性也相对局限技术问题。本发明包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂中含有链霉亲和素磁珠，所述链霉亲和素磁珠被SARS‑CoV‑2抗原用的生物素酯包被，所述R2试剂中包括含有碱性磷酸酶标记的SARS‑CoV‑2抗体。本发明具有检测方便，灵敏度和准确率高等优点。
Description
技术领域
本发明涉及病毒检测技术领域，具体涉及一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒及其制备方法。
背景技术
目前市面上试剂盒要应用免疫学分析方法检测病毒抗体，通常采用夹心法。以制备检测SARS-CoV N蛋白抗体的试剂盒为例，固相端为SARS-CoV N蛋白特异性抗原，标记端为SARS-CoV N蛋白特异性抗原，加入待测物后孵育，待测物中的SARS-CoV N蛋白抗体与固相端SARS-CoV N蛋白特异性抗体结合形成免疫复合物，同时标记端的SARS-CoV N蛋白特异性抗原与样本中SARS-CoV N蛋白抗体上的另一端结合，形成标记后的免疫复合物，通过洗涤，将未被结合的酶结合物以及其它物质去除。通过显色或者发光等方式对标记物进行检测，可以判断待测物中是否含有SARS-CoV N蛋白抗体。
从上述描述可以发现，要使用该方法制备的试剂盒检测抗体，试剂盒的固项及酶标的制备关键是要制备针对抗体的特异性抗原。抗原的制备一般要链接一些标签蛋白，易与样本中的其他蛋白结合，产生非特异性的吸附。制备出抗原后还需要完成相应的配对，筛选出灵敏度和特异性最高的。
要完成这一系列工作，通常会花费很多时间、物力、人力。做出来的试剂盒灵敏度和特异性相对局限。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：现有的免疫学分析方法中的夹心法在检测SARS-CoV-2病毒抗体，费时费力，试剂盒灵敏度和特异性也相对局限。
本发明通过下述技术方案实现：
一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂中含有链霉亲和素磁珠，所述链霉亲和素磁珠被SARS-CoV-2抗原用的生物素酯包被。
本发明优选一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒，所述R2试剂中包括含有碱性磷酸酶标记的SARS-CoV-2抗体。
本发明优选一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒，所述生物素酯的浓度为5-15mmol/L。
本发明优选一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒，所述链霉亲和素磁珠的直径为1μm。
本发明采用竞争法制备试剂盒检测SARS-CoV-2抗体，样本中的SARS-CoV-2抗体与试剂盒酶标上的SARS-CoV-2抗体竞争结合试剂盒固相端的SARS-CoV-2抗原，解决了双抗原中两个标签蛋白与样本中的其它物质结合造成的假阳性。
本发明优选一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒，还包括发光底物、标准品和质控品。
本发明优选一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒，包括盒体，所述盒体上设置有R1孔和R2孔，所述R1孔中设置有所述R1试剂，所述R2孔中设置有所述R2试剂。
一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：将SARS-CoV-2抗原用的生物素酯标记后包被于链霉亲和素磁珠，得到R1试剂；
步骤2：将SARS-CoV-2抗体活化后与活化的碱性磷酸酶ALP混匀反应，制备ALP标记的SARS-CoV-2抗体，得到R2试剂。
本发明优选一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒的制备方法，还包括步骤3：将R1试剂加入到R1孔中，将R2试剂加入到R2孔中。
本发明中的试剂盒的检测方法：
1、将SARS-CoV-2抗原用5-15mmol/L的生物素酯1:20标记后包被于直径1微米的链霉亲和素磁珠。
2、将SARS-CoV-2抗体活化后与活化的碱性磷酸酶ALP混匀反应，制备ALP标记的SARS-CoV-2抗体。
3、将步骤1、2中的试剂与待测物混匀后孵育。
4、洗涤，将未被结合的酶结合物以及其它物质去除，加入发光底物AMPPD，酶结合物催化发光底物发射光子。
5、通过光子数判断待测物中是否存在SARS-CoV-2抗体。
该方法使用到化学发光免疫分析中常用的原材料，与SARS-CoV-2抗体、SARS-CoV-2抗原都容易从市面采购。且生物素标记和碱性磷酸酶标记快速。可以快速制备用于检测SARS-CoV-2抗体的试剂。
本发明具有如下的优点和有益效果：
本发明采用竞争法制备试剂盒检测SARS-CoV-2抗体，样本中的SARS-CoV-2抗体与试剂盒酶标上的SARS-CoV-2抗体竞争结合试剂盒固相端的SARS-CoV-2抗原，解决了双抗原中两个标签蛋白与样本中的其它物质结合造成的假阳性，该方法的阳性符合率可达96％，阴性符合率可达98％。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。
实施例1
一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂中含有链霉亲和素磁珠，所述链霉亲和素磁珠被SARS-CoV-2抗原用的生物素酯包被。
本发明检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒，所述R2试剂中包括含有碱性磷酸酶标记的SARS-CoV-2抗体。
本发明检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒，所述生物素酯的浓度为5-15mmol/L。
本发明检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒，所述链霉亲和素磁珠的直径为1μm。
本发明采用竞争法制备试剂盒检测SARS-CoV-2抗体，样本中的SARS-CoV-2抗体与试剂盒酶标上的SARS-CoV-2抗体竞争结合试剂盒固相端的SARS-CoV-2抗原，解决了双抗原中两个标签蛋白与样本中的其它物质结合造成的假阳性。
本发明检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒，还包括发光底物、标准品和质控品。
本发明检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒，包括盒体，所述盒体上设置有R1孔和R2孔，所述R1孔中设置有所述R1试剂，所述R2孔中设置有所述R2试剂。
实施例2
一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：将SARS-CoV-2抗原用的生物素酯标记后包被于链霉亲和素磁珠，得到R1试剂；
步骤2：将SARS-CoV-2抗体活化后与活化的碱性磷酸酶ALP混匀反应，制备ALP标记的SARS-CoV-2抗体，得到R2试剂。
本发明优选一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒的制备方法，还包括步骤3：将R1试剂加入到R1孔中，将R2试剂加入到R2孔中。
采用实施例1制备的试剂盒进行SARS-CoV-2抗体的检测方法，具体步骤如下：
1、从试剂盒中的R1孔中取出50μL的磁珠工作液，即R1试剂；
2、从试剂盒中的R2孔中取出50μL的酶工作液，即R2试剂；
3、将步骤1中的磁珠工作液与步骤2中的酶工作液与50μl待测物混匀后孵育，反应20min；
4、洗涤，将未被结合的酶结合物以及其它物质去除，加入发光底物AMPPD，酶结合物催化发光底物发射光子；
5、通过光子数判断待测物中是否存在SARS-CoV-2抗体。
该方法使用到化学发光免疫分析中常用的原材料，与SARS-CoV-2抗体、SARS-CoV-2抗原都容易从市面采购。且生物素标记和碱性磷酸酶标记快速。可以快速制备用于检测SARS-CoV-2抗体的试剂。
该方法与SARS-CoV-2荧光定量PCR结果做比对，测定结果如下表1所示，测定332例阳性样本，阳性符合率可达96％、测定328例阴性样本，阴性符合率可达98％。
表1.检测结果统计
以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂和发光底物，所述R1试剂中含有链霉亲和素磁珠，所述链霉亲和素磁珠被SARS-CoV-2抗原用的生物素酯包被。
2.根据权利要求1所述的一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒，其特征在于，所述R2试剂中包括含有碱性磷酸酶标记的SARS-CoV-2抗体。
3.根据权利要求1或2所述的一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒，其特征在于，所述生物素酯的浓度为5-15mmol/L。
4.根据权利要求1或2所述的一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁珠的直径为1μm。
5.根据权利要求1或2所述的一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒，其特征在于，还包括发光底物、标准品和质控品。
6.根据权利要求1或2所述的一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒，其特征在于，包括盒体，所述盒体上设置有R1孔和R2孔，所述R1孔中设置有所述R1试剂，所述R2孔中设置有所述R2试剂。
7.一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒的制备方法，其特征在于，制备如权利要求1-5任一项所述的试剂盒，包括如下步骤：
步骤1：将SARS-CoV-2抗原用的生物素酯标记后包被于链霉亲和素磁珠，得到R1试剂；
步骤2：将SARS-CoV-2抗体活化后与活化的碱性磷酸酶ALP混匀反应，制备ALP标记的SARS-CoV-2抗体，得到R2试剂。
8.根据权利要求7所述的一种检测SARS-CoV-2病毒抗体的试剂盒的制备方法，其特征在于，还包括步骤3：将R1试剂加入到R1孔中，将R2试剂加入到R2孔中。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210402 |
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