CN114113588A - 一种新型冠状病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种新型冠状病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒及应用，属于免疫学检测领域。所述试剂盒含有以下试剂：酶标二抗、磁标异硫氰酸荧光素抗体、异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原、定标溶液、阳性对照品、阴性对照品和样本稀释液；所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的新型冠状病毒抗原能与新型冠状病毒抗体特异性结合；所述的磁标异硫氰酸荧光素抗体能与所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的异硫氰酸荧光素特异性结合；所述酶标二抗能与新冠病毒抗体特异性结合；所述酶标二抗上的酶能降解所述发光底物液中的发光底物，使所述发光底物发光。采用所述的试剂盒检测抗体，具有较高的检测限、特异性和准确度的效果。
Description
技术领域
本发明属于免疫学检测领域，特别地，涉及一种新型冠状病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒及应用。
背景技术
国际病毒分类委员会(International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)于2020年2月11日宣布，新型冠状病毒(2019-nCoV)的正式分类名为严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)。而世界卫生组织(WHO)同日宣布，由这一病毒导致的疾病的正式名称为COVID-19。冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。
人首次感染新型病毒后，机体的免疫系统会对病毒进行免疫防御，产生特异性的抗体。一般1-2周出现IgM抗体，约4周左右产生IgG抗体。新冠病毒IgM/IgG抗体试剂的使用，为临床提供了血清学的证据，可与核酸检测方法联合使用，从而为新冠病毒的诊断提供更全面、准确的信息。
抗体测定试剂盒还可助力新型冠状病毒(SARS-CoV-2)疫苗的开发，用于检测接种疫苗后体内产生抗体的情况及疫苗的效果。
抗体测定试剂盒还可用于流行病学调查，了解人群中有多少个体接触过相应的新型病毒，有助于国家对疫情的整体判断和控制。
发明内容
本发明解决了现有技术中新型冠状病毒抗体检测特异性不强、检测限和准确度不高的技术问题。
按照本发明的第一方面，提供了一种新型冠状病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒，所述试剂盒含有以下试剂：酶标二抗、磁标异硫氰酸荧光素抗体、异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原、定标溶液、发光底物液、阳性对照品和阴性对照品；所述酶标二抗为酶标IgM二抗或酶标IgG二抗；
所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的新型冠状病毒抗原能与新型冠状病毒抗体特异性结合；
所述的磁标异硫氰酸荧光素抗体能与所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的异硫氰酸荧光素特异性结合；
所述酶标二抗能与新冠病毒抗体特异性结合；
所述酶标二抗上的酶能降解所述发光底物液中的发光底物，使所述发光底物发光。
优选地，所述酶标二抗为酶标羊抗人二抗、酶标兔抗人二抗或酶标鼠抗人二抗。
优选地，所述酶标二抗为碱性磷酸酶标记的二抗，所述发光底物液中的发光底物为3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷或3-氨基苯二甲酰肼。
优选地，所述酶标二抗为辣根过氧化物酶标记的二抗，所述发光底物液中的发光底物为3-氨基苯二甲酰肼。
优选地，所述酶标二抗为用4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐活化的碱性磷酸酶与用2-亚氨基硫烷盐酸盐巯基化的二抗反应得到。
按照本发明的另一方面，提供了任一所述的试剂盒应用于检测抗体的方法，包括以下步骤：
(1)将定标溶液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品分别与异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原进行混合，使所述定标溶液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品中的新冠病毒抗体与所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的新型冠状病毒抗原特异性结合；
(2)向步骤(1)得到的产物中加入磁标异硫氰酸荧光素抗体，使所述磁标异硫氰酸荧光素抗体与所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的异硫氰酸荧光素特异性结合，然后进行磁分离，弃上清液后，清洗沉淀物；将酶标二抗加入到上述清洗后的沉淀物中，使酶标二抗上的抗体与所述定标溶液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品的新冠病毒抗体特异性结合，然后进行磁分离，弃上清液后，清洗沉淀物；
(3)向步骤(2)得到的产物中加入发光底物液，使所述发光底物液中的发光底物与特异性结合到所述定标溶液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品的新冠病毒抗体结合的酶标二抗中的酶反应，检测发光值；若待测样本的发光值/定标溶液的发光值≤1.0，则待测样本中的新型冠状病毒抗体为阴性；若待测样本的发光值/定标溶液的发光值＞1.0，待测样本中的新型冠状病毒抗体为阳性。
优选地，步骤(1)所述将定标溶液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品分别与异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原进行混合后，在20℃-37℃条件下反应10min-15min。
优选地，步骤(2)中加入磁标异硫氰酸荧光素抗体后，在20℃-37℃条件下反应10min-15min；步骤(2)中加入酶标二抗后，在20℃-37℃条件下反应10min-15min。
总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，主要具备以下的技术优点：
(1)本发明新型冠状病毒抗体的磁免疫化学发光检测试剂盒具有较高的检测限和特异性，并可以同时检测大批样本，技术上有明显的进步；通过对样本抗体的检测，可判定是否既往感染新型冠状病毒。
(2)本发明提供的试剂盒应用于检测新型冠状抗体时，具有较高的检测限、特异性和准确度的效果，阴性参照品和阳性参照品的合格率均为100％，而且实现了全自动化检测，缩短检测时间，提高检测通量，减少人为操作误差。
附图说明
图1为本发明磁免疫化学发光检测试剂盒ROC曲线。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
实施例1：试剂盒具体组分的制备
1、酶标抗体的制备
A、碱性磷酸酶活化
以DMSO为溶剂，配制10mM SMCC溶液；向29.5uL 10mM SMCC溶液中加入240uL 5mg/mL碱性磷酸酶，混匀后室温静置15min，再加入2.7uL 1M pH 7.3甘氨酸缓冲液，室温静置5min；0.01M pH 7.4的PBS溶液超滤脱盐，测定280nm的吸光度，酶浓度为：ABS280*稀释因子/1.0，酶质量：酶浓度*产物体积(mg/mL)，2～8℃保存。
B、羊抗人二抗活化
以0.1M硼酸盐为溶剂，配制pH 8.0的5mM EDTA.2H2O溶液；取400uL的3mg/mL的单克隆抗体用上述溶液作为流动相，过GE Healthcare Life Science的蛋白质分离纯化系统PD10脱盐柱，收集产物，产物2mg/mL；以0.1M硼酸盐为溶剂配制0.02M的2-IT溶液，取4uL的0.02M的2-IT溶液将其加入500uL的2mg/mL的脱盐产物内，混匀后室温静置30min，再加入5uL的1M pH7.3甘氨酸缓冲液，室温静置5min；0.01M的pH为7.4的PBS溶液超滤脱盐，产物加入2倍体积的1M的MgCl2，测定280nm的吸光度，蛋白浓度为：ABS280*稀释因子/1.36，蛋白质量：酶浓度*产物体积(mg/mL)，2～8℃保存。
C、偶联
活化的碱性磷酸酶与活化的抗体质量比0.91:1偶联，2～8℃静止反应16-18h；加入10uL 10mM马来酰亚胺溶液，混匀静止10min，10mM马来酰亚胺溶液配制过程为1.03mLDMF溶解10mg马来酰亚胺固体，再用0.01M的pH 7.4的PBS溶液稀释10倍，即配成10mM马来酰亚胺溶液；加入10uL的100mM乙醇胺溶液，混匀静止10min，100mM乙醇胺溶液配制过程为20uL乙醇胺溶于1.98mL的0.01M pH为7.4的PBS溶液中，再取上述乙醇胺溶液600uL，加入到400uL的0.01M pH为7.4的PBS溶液中，即得100mM乙醇胺溶液；用Superdex 200层析柱在GEHealthcare Life Science的蛋白质分离纯化系统上分离纯化上述产物，洗脱缓冲液为0.1M pH 7.4含5mM MgCl2，0.1mM ZnCl2和0.3％叠氮钠的Tris缓冲盐溶液，保存于含0.1MpH为7.4含5mM MgCl2、0.1mM ZnCl2和0.3％叠氮钠的Tris缓冲盐溶液。2～8℃保存。
实施例2：新型冠状病毒IgM检测试剂盒
组建检测新型冠状病毒IgM抗体的磁免疫化学发光检测试剂盒，使其含有下列组分：
(1)碱性磷酸酶标记的羊抗人IgM二抗的标记物
(2)磁标异硫氰酸荧光素(FITC)抗体
(3)异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗原
(4)新型冠状病毒IgM抗体定标溶液
(5)阳性对照品溶液
(6)阴性对照品溶液
(7)样本稀释液
(8)化学发光底物液
(9)浓缩洗涤溶液
本发明所用的酶标抗体稀释液是含5％牛血清白蛋白(BSA)的0.5M Tris缓冲液，pH 7.5。
所述磁标异硫氰酸荧光素(FITC)抗体稀释液是pH 8.0，含0.02％WPS(V:V)，1％TritionX-100(M:V)，0.5％BSA(M:V)，0.05M Tris缓冲盐溶液。
本发明所述异硫氰酸荧光素(FITC)修饰抗原稀释液是含5％牛血清白蛋白(BSA)的0.5M Tris缓冲液，pH 7.5。
新型冠状病毒IgM抗体定标溶液，是含新型冠状病毒IgM抗体100ng/mL，含5％牛血清白蛋白(BSA)的0.5M Tris缓冲液，pH 7.5。
样本稀释液为pH 7.5浓度为0.1M Tris缓冲盐溶液。
阳性对照品稀释液是含新型冠状病毒IgM抗体500ng/mL，含5％牛血清白蛋白(BSA)的0.5M Tris缓冲液，pH 7.5
阴性对照品稀释液含5％牛血清白蛋白(BSA)的0.5M Tris缓冲液，pH 7.5。
所述化学发光底物液的缓冲液是pH 9.0，0.1M Tris缓冲盐溶液。
所述浓缩洗涤溶液是含有体积分数1％吐温-20的pH为7.4，0.05M Tris缓冲盐溶液。
实施例3：新型冠状病毒IgG检测试剂盒
组建检测新型冠状病毒IgG抗体的磁免疫化学发光检测试剂盒，使其含有下列组分：
(1)碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG二抗的标记物
(2)磁标异硫氰酸荧光素(FITC)抗体
(3)异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗原
(4)新型冠状病毒IgG抗体定标溶液
(5)阳性对照品溶液
(6)阴性对照品溶液
(7)样本稀释液
(8)化学发光底物液
(9)浓缩洗涤溶液
本发明所用的酶标抗体稀释液是含5％牛血清白蛋白(BSA)的0.5M Tris缓冲液，pH 7.5。
所述磁标异硫氰酸荧光素(FITC)抗体稀释液是pH 8.0，含0.02％WPS(V:V)，1％TritionX-100(M:V)，0.5％BSA(M:V)，0.05M Tris缓冲盐溶液。
本发明所述异硫氰酸荧光素(FITC)修饰抗原稀释液是含5％牛血清白蛋白(BSA)的0.5M Tris缓冲液，pH 7.5。
新型冠状病毒IgG抗体定标溶液，是含新型冠状病毒IgG抗体100ng/mL，含5％牛血清白蛋白(BSA)的0.5M Tris缓冲液，pH 7.5。
样本稀释液为pH 7.5浓度为0.1M Tris缓冲盐溶液。
阳性对照品稀释液是含新型冠状病毒IgG抗体500ng/mL，含5％牛血清白蛋白(BSA)的0.5M Tris缓冲液，pH 7.5。
阴性对照品稀释液含5％牛血清白蛋白(BSA)的0.5M Tris缓冲液，pH 7.5。
所述化学发光底物液的缓冲液是pH 9.0，0.1M Tris缓冲盐溶液。
所述浓缩洗涤溶液是含有体积分数1％吐温-20的pH为7.4，0.05M Tris缓冲盐溶液。
实施例4：样品中新型冠状病毒抗体的检测
样品中新型冠状病毒抗体的检测，包括以下步骤：
(1)将定标液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品分别与异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原进行混合，所述定标液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品中的新冠病毒抗体与所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的新型冠状病毒抗原特异性结合，20℃-37℃条件下反应10min-15min；
(2)向步骤(1)得到的产物中加入磁标异硫氰酸荧光素抗体，20℃-37℃条件下反应5min-10min，使所述磁标异硫氰酸荧光素抗体与所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的异硫氰酸荧光素特异性结合，然后进行磁分离30s～2min，弃上清液后将沉淀物用浓缩洗涤液清洗；将酶标二抗加入到上述清洗后的沉淀物中，在20℃-37℃下反应10min-15min，使酶标二抗上的抗体与所述定标液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品的新冠病毒抗体特异性结合，然后进行磁分离30s～2min，弃上清液后将沉淀物用浓缩洗涤液清洗；
(3)向步骤(2)得到的产物中加入发光底物液，使所述发光底物液中的发光底物与结合到所述定标液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品的新冠病毒抗体特异性结合的酶标羊抗人二抗中的酶反应，检测发光值，以加入定标液的发光值确定Cutoff值，以加入待测样本的发光值与所述Cutoff值比较确定待测样本中新型冠状病毒抗体为阴性或阳性，即待测样本的发光值S/CO≤1.0，则待测样本中的新型冠状病毒抗体为阴性；待测样本的发光值S/CO＞1.0，待测样本中的新型冠状病毒抗体为阳性。
检测与结果分析：将稀释后的酶标二抗装入化学发光检测仪酶标抗体工作液容器中，其中与酶标抗体稀释液是按照1:1000～1:10000的体积比进行稀释的；将稀释的磁标异硫氰酸荧光素(FITC)抗体，稀释的异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗原装入化学发光检测仪磁珠抗原工作液容器中，其中与相应的稀释液是分别按照1:20～1:40，1:1000～10000的体积比进行稀释的；将样本稀释液装入化学发光检测仪样本稀释工作液容器中；对每个样本/标准品设置样品架上的位置，输入样本信息和需要检测的测试项目名称；将样本管/定标液管/对照品管放入已设定好的样品架上，化学发光检测仪分别吸取15μL样本，100μL样本稀释液和30μL异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗原，依次加入到反应杯中，在37℃下反应15min；再吸取30μL磁标异硫氰酸荧光素(FITC)抗体，在37℃下反应5min；再通过清洗装置进行磁分离30s，弃上清液后用洗涤液250μL～500μL对沉淀清洗3次～5次；吸取100μL酶标二抗加入到反应杯中，在37℃下反应15min，再通过清洗装置进行磁分离30s，弃上清液后用洗涤液250μL～500μL对沉淀清洗3次～5次；加入化学发光底物液200μL，检测发出的光强度(RLU)。
以加入定标液的发光值为Cutoff值；若待测样本的发光值S/Cutoff值≤1.0，则待测样本中的新型冠状病毒抗体为阴性；若待测样本的发光值S/Cutoff值＞1.0，待测样本中的新型冠状病毒抗体为阳性。所述Cutoff值由受试者工作特征(receiver operatingcharacteristic,ROC)曲线设定。
S为样本的发光值，Cutoff(CO)值＝定标液发光值平均值，测定仪可自动地计算每一个样本的S/CO值＝样本的发光值/定标液发光值平均值。本试剂盒以样本发光值(S)与Cutoff值(CO)的比值作为判定标准，S/CO≤1.0判定为新型冠状病毒抗体阴性；S/CO＞1.0判定为新型冠状病毒抗体阳性。
Cutoff(CO)值是通过以下方法建立的：
S1：对110份血清样本进行新型冠状病毒抗体的测定，记录发光值(RLU)，诊断信息(阴性或阳性)取该样本的原始诊断结果；
S2：将步骤S1所述发光值(RLU)进行数据录入，打开Medcal软件，输入要分析的数据，共分两列，第一列命名为g，表示诊断结果(“0”阴性，“1”阳性)；第二列命名为x，表示检验数据；录好数据后依次选择：统计-ROC曲线-ROC曲线分析；随后选择变量-检验数据，即要确定cutoff值的变量；分类变量选择诊断结果，进行统计分析；以阴性组和阳性组血清样本新型冠状病毒抗体发光值进行分析，将所有可能的切点作为阈值进行检测限和特异性计算，以检测限为纵坐标，以特异性为横坐标，作出ROC曲线，曲线刚开始部分上升较快，说明试剂盒分辨率较高，曲线下面积为0.999＞0.9表示曲线准确性较高，存在统计学意义；根据统计结果中各可能切点的检测限和特异性，计算Youden指数，找出检测限与特异性之和最大点作点为临界点，所对应的发光值即为Cutoff(CO)值。
表1 110例血清样本中的检测结果
ROC曲线分析如图1所示，ROC曲线分析见下表：
ROC曲线下面积(AUC)
aDelong et at.，1988
b二项式精确
Youden指数
ROC曲线的标准值和坐标
由上述ROC曲线分析可知，曲线下面积为0.999，具有较高的准确性。Cutoff值由标准值和坐标确定，本检验指标敏感性为100％，特异性为98.99％，查表得cutoff值为1054116。
实施例5：试剂盒质量的测定
1、试剂盒准确度
1.1新型冠状病毒IgM检测试剂盒准确度
按照实例4的方法测定新型冠状病毒IgM抗体检测试剂(酶免法)国家参考品中阴性参考品N1-N25和阳性参考品P1-P10，阴性参考品的符合率为25/25，阳性参考品的符合率为10/10，符合阴性参考品的符合率应为25/25，阳性参考品的符合率应为10/10要求。数据如下：
1.2新型冠状病毒IgG检测试剂盒准确度
按照实例4的方法测定新型冠状病毒IgG抗体检测试剂(酶免法)国家参考品中阴性参考品N1-N25和阳性参考品P1-P10，阴性参考品的符合率为25/25，阳性参考品的符合率为10/10，符合阴性参考品的符合率应为25/25，阳性参考品的符合率应为10/10要求。数据如下：
2、试剂盒的检测限
2.1新型冠状病毒IgM检测试剂盒的检测限
按照实例4的方法测定新型冠状病毒IgM抗体检测试剂(酶免法)国家参考品中最低检测限参考品L1-L10，L1-L6为阳性，L7-L10可为阴性，符合L1-L3应为阳性，L4-L10可为阳性或者阴性的要求。数据如下：
2.2新型冠状病毒IgG检测试剂盒的检测限
按照实例4的方法测定新型冠状病毒IgG抗体检测试剂(酶免法)国家参考品中最低检测限参考品L1-L10，L1-L8为阳性，L9-L10可为阴性，符合L1-L2应为阳性，L3-L10可为阳性或者阴性的要求。数据如下：
3、试剂盒的分析特异性
3.1新型冠状病毒IgM检测试剂盒的分析特异性
从一些未服用药物的健康个体获取标本(无溶血、黄疸和脂血)，添加适当浓度的重组人IgM抗体，分别制备阴、阳样本。
向样本中模拟添加胆红素、血红蛋白、甘油三酯及类风湿因子，制备不同干扰物实验浓度的样本按照实例4的方法测定，评估不同干扰物质浓度下对选定样本检测结果的影响。数据如下：
由数据可知：
(1)当样本中胆红素添加达20mg/dL时对IgM测定结果无影响，但当胆红素浓度高达25mg/dL时，S1、S2样本出现假阳性结果。故最终确定本试剂不产生干扰的胆红素最高浓度为20mg/dL。
(2)当样本中血红蛋白添加达500mg/dL时对IgM测定结果无影响，但当浓度高达700mg/dL时，S1、S2样本易出现假阳性结果。故最终确定本试剂不产生干扰的游离血红蛋白最高浓度为500mg/dL。
(3)当样本中甘油三脂添加达2000mg/dL时对IgM测定结果无影响，但当浓度高达2500mg/dL时，S1、S2样本易出现假阳性结果。故最终确定本试剂不产生干扰的甘油三脂最高浓度为2000mg/dL。
(4)当样本中类风湿因子添加达596IU/mL时对IgM测定结果无影响，但当浓度高达1192IU/ml时，S1、S2样本易出现假阳性结果。故最终确定本试剂不产生干扰的类风湿因子最高浓度为596IU/mL。
综上结果，待测样本内源性干扰物质类风湿因子测定值高于596IU/ml时、胆红素含量高于20mg/dL、血红蛋白高于500mg/dL、甘油三脂含量高于2000mg/dL时将会对实验结果产生影响，不得使用本试剂盒检测。
3.2新型冠状病毒IgG检测试剂盒的分析特异性
从一些未服用药物的健康个体获取标本(无溶血、黄疸和脂血)，添加适当浓度的重组人IgG抗体，分别制备阴、阳样本。
向样本中模拟添加胆红素、血红蛋白、甘油三酯及类风湿因子，制备不同干扰物实验浓度的样本按照实例4的方法测定，评估不同干扰物质浓度下对选定样本检测结果的影响。数据如下：
由数据可知：
(1)当样本中胆红素添加达20mg/dL时对IgG测定结果无影响，但当胆红素浓度高达25mg/dL时，S1、S2样本出现假阳性结果。故最终确定本试剂不产生干扰的胆红素最高浓度为20mg/dL。
(2)当样本中血红蛋白添加达500mg/dL时对IgG测定结果无影响，但当浓度高达700mg/dL时，S1、S2样本易出现假阳性结果。故最终确定本试剂不产生干扰的游离血红蛋白最高浓度为500mg/dL。
(3)当样本中甘油三脂添加达2000mg/dL时对IgG测定结果无影响，但当浓度高达2500mg/dL时，S1、S2样本易出现假阳性结果。故最终确定本试剂不产生干扰的甘油三脂最高浓度为2000mg/dL。
(4)当样本中类风湿因子添加达596IU/mL时对IgG测定结果无影响，但当浓度高达1192IU/ml时，S1、S2样本易出现假阳性结果。故最终确定本试剂不产生干扰的类风湿因子最高浓度为596IU/mL。
综上结果，待测样本内源性干扰物质类风湿因子测定值高于596IU/ml时、胆红素含量高于20mg/dL、血红蛋白高于500mg/dL、甘油三脂含量高于2000mg/dL时将会对实验结果产生影响，不得使用本试剂盒检测。
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种新型冠状病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有以下试剂：酶标二抗、磁标异硫氰酸荧光素抗体、异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原、定标溶液、发光底物液、阳性对照品和阴性对照品；所述酶标二抗为酶标IgM二抗或酶标IgG二抗；
所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的新型冠状病毒抗原能与新型冠状病毒抗体特异性结合；
所述的磁标异硫氰酸荧光素抗体能与所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的异硫氰酸荧光素特异性结合；
所述酶标二抗能与新冠病毒抗体特异性结合；
所述酶标二抗上的酶能降解所述发光底物液中的发光底物，使所述发光底物发光。
2.如权利要求1所述的新型冠状病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述酶标二抗为酶标羊抗人二抗、酶标兔抗人二抗或酶标鼠抗人二抗。
3.如权利要求1所述的新型冠状病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述酶标二抗为碱性磷酸酶标记的二抗，所述发光底物液中的发光底物为3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷或3-氨基苯二甲酰肼。
4.如权利要求1所述的新型冠状病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述酶标二抗为辣根过氧化物酶标记的二抗，所述发光底物液中的发光底物为3-氨基苯二甲酰肼。
5.如权利要求1所述的新型冠状病毒抗体磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述酶标二抗为用4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐活化的碱性磷酸酶与用2-亚氨基硫烷盐酸盐巯基化的二抗反应得到。
6.如权利要求1-5任一所述的试剂盒应用于检测抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将定标溶液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品分别与异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原进行混合，使所述定标溶液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品中的新冠病毒抗体与所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的新型冠状病毒抗原特异性结合；
(2)向步骤(1)得到的产物中加入磁标异硫氰酸荧光素抗体，使所述磁标异硫氰酸荧光素抗体与所述异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原上的异硫氰酸荧光素特异性结合，然后进行磁分离，弃上清液后，清洗沉淀物；将酶标二抗加入到上述清洗后的沉淀物中，使酶标二抗上的抗体与所述定标溶液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品的新冠病毒抗体特异性结合，然后进行磁分离，弃上清液后，清洗沉淀物；
(3)向步骤(2)得到的产物中加入发光底物液，使所述发光底物液中的发光底物与特异性结合到所述定标溶液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品的新冠病毒抗体结合的酶标二抗中的酶反应，检测发光值；若待测样本的发光值/定标溶液的发光值≤1.0，则待测样本中的新型冠状病毒抗体为阴性；若待测样本的发光值/定标溶液的发光值＞1.0，待测样本中的新型冠状病毒抗体为阳性。
7.如权利要求6所述的试剂盒应用于检测抗体的方法，其特征在于，步骤(1)所述将定标溶液、待测样本、阴性对照品和阳性对照品分别与异硫氰酸荧光素修饰新型冠状病毒抗原进行混合后，在20℃-37℃条件下反应10min-15min。
8.如权利要求6所述的试剂盒应用于检测抗体的方法，其特征在于，步骤(2)中加入磁标异硫氰酸荧光素抗体后，在20℃-37℃条件下反应10min-15min；步骤(2)中加入酶标二抗后，在20℃-37℃条件下反应10min-15min。
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2020
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| 陈曲波等主编: "《临床免疫检验标准化操作程序》", 上海科学技术出版社, pages: 193 * |
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