JP5456056B2 - 体液中のifi16の検出 - Google Patents
体液中のifi16の検出 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5456056B2 JP5456056B2 JP2011540139A JP2011540139A JP5456056B2 JP 5456056 B2 JP5456056 B2 JP 5456056B2 JP 2011540139 A JP2011540139 A JP 2011540139A JP 2011540139 A JP2011540139 A JP 2011540139A JP 5456056 B2 JP5456056 B2 JP 5456056B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ifi16
- sample
- receptor
- extracellular
- pbs
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/18—Togaviridae; Flaviviridae
- G01N2333/183—Flaviviridae, e.g. pestivirus, mucosal disease virus, bovine viral diarrhoea virus, classical swine fever virus (hog cholera virus) or border disease virus
- G01N2333/186—Hepatitis C; Hepatitis NANB
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/10—Musculoskeletal or connective tissue disorders
- G01N2800/101—Diffuse connective tissue disease, e.g. Sjögren, Wegener's granulomatosis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/10—Musculoskeletal or connective tissue disorders
- G01N2800/101—Diffuse connective tissue disease, e.g. Sjögren, Wegener's granulomatosis
- G01N2800/102—Arthritis; Rheumatoid arthritis, i.e. inflammation of peripheral joints
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/10—Musculoskeletal or connective tissue disorders
- G01N2800/101—Diffuse connective tissue disease, e.g. Sjögren, Wegener's granulomatosis
- G01N2800/104—Lupus erythematosus [SLE]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は、細胞外形態にあるインターフェロン誘導性タンパク質16(IFI16)の定性的及び/又は定量的決定のための方法に関する。
(a)前記試料を、IFI16に特異的に結合する少なくとも1のレセプターと結合させ、そして
(b)IFI16に対するこのレセプター特異的結合を検出する
ことを含む。
(i)IFI16に特異的に結合する少なくとも1つのレセプター、及び
(ii)更なるキット成分、例えば、緩衝液、塩、試薬及び/又は使用説明書
を含む、診断用途のための試薬キットに関する。
図1:IFI16サンドイッチELISAの図示
ELISAマイクロタイタープレートを、ポリクローナルウサギ抗−IFI16抗体を用いてコーティングした。引き続き、このプレートをPBS−Triton(PBS−T;0.25% Triton X100、PBS中)で洗浄し、30分間にわたり、自由結合部(free binding site)をPBS−T/BSA 3%(PBS−TB)で37℃で飽和させた。PBS−Tでの洗浄後に、精製した6His−IFI16タンパク質を用いたインキュベーションが引き続き(1h)、これはPBS−T中に5% FCSに希釈され、標準として使用された。BSAはネガティブコントロールとして働く。この試料をPBS−Tを用いて3回洗浄し、それぞれの場合にモノクローナルマウス抗IFI16抗体を添加し、1時間室温でインキュベーションした。PBS−Tを用いた4回の洗浄後に、それぞれの場合に、PBS−TB中に希釈したHRP−コンジュゲートした抗マウス抗体100μlを用いてインキュベーションが引き続いた(1h、室温)。3回の洗浄工程後に、このIFI16タンパク質/抗体複合体を、テトラメチルベンジジン(TMB)を用いたインキュベーションにより可視化し、ストップ溶液(Stop Solution)でもって停止した。この吸収を、マイクロプレートリーダー中で450nmで測定した。この濃度の決定を、図2の標準曲線を使用して実施し、これについては、精製した6His−IFI16の増加する濃度を使用した。この測定の線形性を、1〜15.6ng/mlの範囲内で示す。
血清中を循環するIFI16の濃度を、ELISAを利用して、SSc(99)、SLE(30)、SjS(20)、RA(30)を患う患者及びC型肝炎ウィルス感染(HCV)を有する患者中で、健康な被験体(CTRLS,54)中で決定した。
ヒトのケラチノサイトを、200、400又は800J/m2の線量(それぞれUV200、UV400又はUV800)でもってUVB照射に曝露するか、又は偽照射(NT)し、次いで16又24時間(それぞれ16h又は24h)インキュベーションした。上清を回収し、実施例2に説明したとおりにTCAにより細胞外タンパク質を沈殿させた。抗IFI16ポリクローナル抗体を使用したイムノブロット分析は、細胞外IFI16の存在を、400及び800J/m2のUVB照射線量に曝露した細胞の上清中に明らかにした。細胞内IFI16を発現するヒトケラチノサイト(TE)から抽出された全細胞タンパク質を、IFI16イムノブロットについてポジティブコントロールとして使用した。
ELISAマイクロタイタープレートを、ポリクローナルウサギ抗−IFI16抗体を用いてコーティングした。引き続き、このプレートを洗浄し、自由結合部をPBS/0.05% Tween−20/3% BSA(PBS−TB)で室温で1時間飽和させた。洗浄後に、標準として使用された、PBS/0.05% Tween20/1% BSA(PBS−TD)中の5%FBS中に希釈した、精製した6His−IFI16タンパク質を用いたインキュベーションが引き続いた(1h、室温)。BSAはネガティブコントロールとして働いた。この試料を洗浄し、それぞれの場合にモノクローナルマウス抗IFI16抗体を添加し、1時間室温でインキュベーションした。洗浄後に、HRP−コンジュゲートした抗マウス抗体を用いてインキュベーションが引き続いた(1h、室温)。洗浄後に、このIFI16タンパク質/抗体複合体を、テトラメチルベンジジン(TMB)を用いたインキュベーションにより可視化し、ストップ溶液でもって停止した。この吸収を、マイクロプレートリーダー中で450nmで測定した。この濃度の決定を、図5の標準曲線を使用して実施し、これについては精製した6His−IFI16の増加する濃度を使用した。この測定の線形性を、1〜32ng/mlの範囲内で示す。
血清中を循環するIFI16の濃度を、ELISAを利用して、SSc(50)、SLE(50)、SjS(51)、RA(50)、抗リン脂質症候群(pAPS、80)を患う患者及びC型肝炎ウィルス感染(HCV、82)を有する患者中で、健康な被験体(CTRL,50)中で決定した。この試験したコホートは、図3で試験されるものとは異なる患者を表す。
ヒトのケラチノサイト単層を、異なる線量(200、400及び800J/m2、それぞれ)でUVB照射し、2μMのドキソルビシン(Doxo)及び80μMのエトポシド(VP-16)で処置したか、または未処置のままにした。処置16時間後に、細胞外IFI16の決定のためにこの上清を回収し、分離し、その一方で、この残りの細胞を、PARPの細胞内開裂形態の決定(細胞死の経過の決定)のために溶解した。回収した上清を、実施例4に説明したとおりにTCA 25%を用いて濃縮した。試料につき等しい量の全細胞タンパク質を、そして、等しい容積の濃縮した上清を、SDS−PAGE(NEXT GEL Amresco, OH, USA、7.5%)で分画化し、ニトロセルロース膜(Biorad, CA, USA)に移した。抗IFI16ポリクローナル抗体を使用するイムノブロット分析は、UVB照射線量400及び800J/m2に曝露された細胞の上清中の細胞外IFI16の存在を明らかにした。この現象は、細胞損傷に一般的に関連せず、というのも、ドキソルビシン及びエトポシドのような薬理学的に細胞毒性の薬物への曝露の場合に化学的に誘導された細胞死を経るケラチノサイト中ではこれは観察されなかったからである(PARP開裂により実証されるとおり、ネクローシス及びアポトーシスの細胞死の認識されたマーカー(Cepeda V. et al., Recent Pat Anticancer Drug Discov. 2006 Jan;1(1):39-53))。
IFI16 ELISA
発達したIFI16 ELISAのために以下の緩衝液を使用した:PBS−T(0.25% Triton X100、PBS中);及びPBS−TB(0.25% Triton X100及び3%BSA、PBS中)。
細胞上清中のIFI16のウェスタンブロット分析
血清不含培地(Epilife, Cascade Biologies, USA)中で培養したヒト初代ケラチノサイトの上清を、トリクロロ酢酸(TCA)での沈殿にかけた。沈殿したタンパク質をイムノブロットにより分析した。
改善した線形性を有するIFI16 ELISA
発達したIFI16 ELISAのために以下の緩衝液を使用した:PBS−TB(0.05% Tween20及び3%BSA、PBS中)及びPBS−TD(0.05% Tween20及び1%BSA、PBS中)。
細胞死を経る細胞の上清中のIFI16のウェスタンブロット分析
血清不含培地(Epilife, Cascade Biologies, USA)中で培養したヒト初代ケラチノサイトの上清を、トリクロロ酢酸(TCA)での沈殿にかけた。沈殿したタンパク質をイムノブロットにより分析した。
Claims (15)
- 血液、血漿又は血清、又は組織試料の上清又は細胞培養試料の上清から選択された試料中の細胞外インターフェロン誘導性タンパク質16(IFI16)を決定するためのin vitro方法。
- 前記決定が
(a)前記試料を、IFI16に特異的に結合する少なくとも1のレセプターと結合させ、そして
(b)IFI16に対する前記レセプターの特異的結合を検出する
ことを含む、請求項1記載の方法。 - 前記試料を、IFI16に特異的に結合する少なくとも2つのレセプターと接触させ、その際、前記レセプターの1つが検出可能なレセプターであり、この他のレセプターが固相に固定化されているか又は固相結合基を有する、請求項2記載の方法。
- 少なくとも1つのレセプターが、抗体又はその抗原結合断片である請求項2又は3記載の方法。
- 前記検出可能なレセプターが、検出可能なラベル化基を有する請求項3又は4記載の方法。
- 前記検出可能なラベル化基が、酵素の、蛍光の、放射性の、又は核酸ラベル化基である請求項5記載の方法。
- 前記試料が、ヒト試料である請求項1から6のいずれか1項記載の方法。
- 細胞外IFI16の存在及び/又は増加した量が、病理学的状態の指標である請求項1から7のいずれか1項記載の方法。
- 細胞外IFI16の存在及び/又は増加した量が、自己免疫及び/又は炎症性疾患の指標である請求項1から7のいずれか1項記載の方法。
- 前記自己免疫疾患が、全身性硬化症(SSc)、全身性エリトマトーデス(SLE)及びシェーグレン症候群(SjS)から選択される請求項9記載の方法。
- 前記疾患が関節リウマチから選択される請求項9記載の方法。
- 細胞外IFI6の存在及び/又は増加した量が、感染性疾患の指標である請求項1から7のいずれか1項記載の方法。
- 前記感染性疾患がHCV感染である請求項12記載の方法。
- さらに、少なくとも1つの付加的な診断マーカーの決定を含む請求項1から13のいずれか1項記載の方法。
- 前記少なくとも1つの付加的な診断マーカーが抗−IFI16−自己抗体である請求項14記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US12209108P | 2008-12-12 | 2008-12-12 | |
US61/122,091 | 2008-12-12 | ||
PCT/EP2009/067128 WO2010066913A1 (en) | 2008-12-12 | 2009-12-14 | Detection of ifi16 in body fluids |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2012511708A JP2012511708A (ja) | 2012-05-24 |
JP5456056B2 true JP5456056B2 (ja) | 2014-03-26 |
Family
ID=41582229
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011540139A Expired - Fee Related JP5456056B2 (ja) | 2008-12-12 | 2009-12-14 | 体液中のifi16の検出 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20110300529A1 (ja) |
EP (1) | EP2376921A1 (ja) |
JP (1) | JP5456056B2 (ja) |
CN (1) | CN102246044B (ja) |
AU (1) | AU2009326977A1 (ja) |
CA (1) | CA2746288A1 (ja) |
WO (1) | WO2010066913A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IT1399609B1 (it) * | 2010-01-28 | 2013-04-26 | Uni Degli Studi Del Piemonte Orientale A Avogadro | Ifi16 extracellulare come agente terapeutico |
CN106636324B (zh) * | 2016-08-08 | 2019-07-30 | 齐齐哈尔市第一医院 | 一种核酸及其蛋白在诊断主体类风湿性关节炎风险中的应用及试剂盒 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007043103A1 (ja) * | 2005-09-30 | 2007-04-19 | Kansai Technology Licensing Organization Co., Ltd. | シェーグレン症候群診断法及び診断キット |
ITTO20060614A1 (it) * | 2006-08-21 | 2008-02-22 | Uni Degli Studi Del Piemonte | "diagnosi differenziale per la sclerodermia" |
WO2008028251A1 (en) * | 2006-09-07 | 2008-03-13 | The University Of Queensland | Dna-binding protein, nucleoprotein complex and method of use |
CN101271115A (zh) * | 2008-04-30 | 2008-09-24 | 东北师范大学 | 人血清中血管生成素检测方法及其应用 |
-
2009
- 2009-12-14 EP EP09768533A patent/EP2376921A1/en not_active Withdrawn
- 2009-12-14 US US13/139,318 patent/US20110300529A1/en not_active Abandoned
- 2009-12-14 JP JP2011540139A patent/JP5456056B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2009-12-14 CA CA2746288A patent/CA2746288A1/en not_active Abandoned
- 2009-12-14 AU AU2009326977A patent/AU2009326977A1/en not_active Abandoned
- 2009-12-14 WO PCT/EP2009/067128 patent/WO2010066913A1/en active Application Filing
- 2009-12-14 CN CN200980149484.3A patent/CN102246044B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20110300529A1 (en) | 2011-12-08 |
EP2376921A1 (en) | 2011-10-19 |
CN102246044B (zh) | 2015-01-14 |
AU2009326977A1 (en) | 2011-06-23 |
JP2012511708A (ja) | 2012-05-24 |
WO2010066913A1 (en) | 2010-06-17 |
CA2746288A1 (en) | 2010-06-17 |
CN102246044A (zh) | 2011-11-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6441407B2 (ja) | 非特異的結合を減少させるためのイムノアッセイ方法及び試薬 | |
US9528998B2 (en) | Methods and reagents for diagnosing rheumatoid arthrtis | |
US20050227223A1 (en) | Method of judging viral infection | |
US20160109469A1 (en) | Method of measuring lipoprotein's capacity to accept cholesterol | |
JP7105970B1 (ja) | SARS-CoV-2の免疫測定方法及び免疫測定キット | |
US20220187310A1 (en) | Anti-drug antibody assay | |
US20180059107A1 (en) | Method of detecting or diagnosing sjogren's syndrome based on the presence of auto-antibody against aquaporin 5 | |
JP6048923B2 (ja) | B型慢性肝炎の検出方法および検出キット | |
US20210318311A1 (en) | Simultaneous detection of humoral and inflammatory biomarkers | |
JP5456056B2 (ja) | 体液中のifi16の検出 | |
KR102441636B1 (ko) | Ns3 포획 펩타이드를 사용한 대상체 항-hcv 항체 검출 검정 | |
US20120040373A1 (en) | Integrated Diagnosis of Heparin-Induced Thrombocytopenia | |
EP3477303A1 (en) | Method and means for diagnosing autoimmune hepatitis using autoantibody markers | |
KR102621473B1 (ko) | 성인형 스틸병 진단용 바이오마커 조성물 | |
JP5750646B2 (ja) | Scca2濃度測定によるアレルギー疾患の検査方法 | |
WO2017033846A1 (ja) | 免疫試験方法および免疫試験キット | |
JP2010507780A (ja) | B型インフルエンザウイルスの検出 | |
KR101667086B1 (ko) | Ku86 에 대한 자기항체의 면역측정 방법, 거기에 사용하는 키트, 및 그것을 사용한 원발성 간세포암의 판정 방법 | |
CN107022028B (zh) | 特异性抗CitH3单克隆抗体及其酶联免疫吸附试验试剂盒在脓毒症诊断中的应用 | |
JP5750645B2 (ja) | アレルギー疾患の検査方法 | |
CA3217475A1 (en) | Devices, methods, and kits for diagnosing sars cov-2 infection | |
JP2023547188A (ja) | 住血吸虫感染症の検出のためのタンパク質 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20121213 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20130531 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130603 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130903 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20131209 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20140107 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |