TWI789713B - 提升登革感染重症個體預測準確性之分群方法 - Google Patents

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Abstract

本發明有關於一種提升登革感染重症個體預測準確性之分群方法，其係同時檢測及交叉比對離體生物樣本是否含有登革病毒之非結構性蛋白1 (non-structural protein 1，NS1)及內源性抗NS1抗體，可有效降低檢測結果的偽陰率，並提高登革熱重症患者之分群準確性。

Description

提升登革感染重症個體預測準確性之分群方法
本發明係有關一種醫學檢測方法，特別是有關於一種利用檢測離體生物樣本之登革病毒非結構性蛋白1(Non-structural protein 1，NS1)及內源性抗NS1抗體以提高登革熱重症個體預測準確性的分群方法。
登革熱是傳播快且病程短的疾病，每年全球約有3億9千萬受登革病毒感染。臺灣在過去20年來，已發生數次登革熱地區性流行；除了流行於南臺灣，在非主要疫區的新北市、台中市，也陸續爆發本土登革熱群聚性感染，顯示登革熱有本土化的趨勢，其威脅範圍擴及全臺灣，登革熱儼然已成為我國重要的新興感染症與公共衛生難題。
登革患者的臨床症狀差異很大，由類似常見感冒的發燒，到致命性登革休克症候群或登革出血熱均有可能。若能早期診斷登革熱重症，即可以提供時效性的病情監控管理；然而，目前現有的檢驗技術尚無法滿足可預估登革熱嚴重度的臨床需求。近年的新研究更發現NS1是一個重要的病毒毒素，已知會造成與登革重症期間的血漿滲漏，凝血功能失調與血小板過低等重要致病作用。另外，抗NS1抗體更在動物實驗被證實具有治療登革感染造成的出血病變的效果。
先前研究已發現，在登革感染患者的血清樣本中病毒毒素NS1會與凝血酶或凝血酶原形成複合物，延長活化部份凝血活酶時間而引發出血重症。因此，現行檢驗流程針對疑似登革感染的個案會進行第一次採檢(簡稱為一採)並進行登革病毒的NS1抗原快篩。若一採快篩結果為陰性，則再進行第二次採檢(簡稱為二採)並進行登革病毒特異性的real-time PCR、RT-PCR、IgM/IgG等檢驗，其中IgM/IgG檢驗係指二採血清之抗登革病毒IgM或IgG抗體陽轉(seroconversion)或IgG抗體增加至少四倍判斷為陽性。
然而，現行檢驗流程對於登革熱輕症患者檢驗結果的偽陰性偏高，易造成誤判。有鑑於此，亟需提供一種提升登革感染重症預測準確性之分群方法，以改善習知登革熱患者檢測結果偽陰性偏高的問題。
因此，本發明之一態樣是提供一種提升登革感染重症預測準確性之分群方法，其係同時檢測及交叉比對離體生物樣本是否含有登革病毒之非結構性蛋白1 (non-structural protein 1，NS1)及內源性抗NS1抗體，藉此有效降低檢測結果的偽陰率，並提高登革熱重症患者之分群準確性。
根據本發明之上述態樣，提出一種提升登革感染重症預測準確性之分群方法。在一實施例中，此分群方法包括提供離體生物樣本，對離體生物樣本進行至少一檢測步驟，以獲得第一檢測結果及第二檢測結果，以及交叉比對該第一檢測結果及該第二檢測結果，以獲得一分群結果。
在上述實施例中，離體生物樣本尚未被診斷為或被鑑別診斷為登革病毒感染或登革病毒疑似感染。
在上述實施例中，第一檢測結果是對應於登革病毒之非結構性蛋白1(Non-structural protein 1，NS1)及/或NS1複合物，而第二檢測結果是對應於內源性抗NS1抗體。
在上述實施例中，當第一檢測結果及該第二檢測結果之至少一者為陽性，則判斷離體生物樣本對應之個體歸類於登革感染重症群。
在上述實施例中，離體生物樣本包含血液、尿液、唾液、組織液及/或淋巴液。
在上述實施例中，第一檢測結果是利用一抗體檢測NS1及/或NS1複合物，此抗體為一外源性抗NS1抗體，且NS1複合物包含前述的NS1-凝血酶或NS1-凝血酶原。
在上述實施例中，登革病毒之血清型可包含第一型、第二型、第三型及第四型。
在上述實施例中，內源性抗NS1抗體為人類化抗體，內源性抗NS1抗體包含第一抗體及第二抗體，第一抗體可例如專一性辨識該NS1之第109個至第122個胺基酸殘基，且第二抗體可例如專一性辨識該NS1之第114個至第119個胺基酸殘基。在一例示中，內源性抗NS1抗體之種型為IgG及/或IgM，且第二檢測結果係指第一抗體與第二抗體的含量比。
在上述實施例中，個體可例如為哺乳動物，例如人類。
在上述實施例中，當第一檢測結果及第二檢測結果之二者為陰性結果，則判斷離體生物樣本對應之個體歸類於非登革感染重症。
在上述實施例中，至少一檢測步驟包含酵素連結免疫吸附分析法(ELISA)、西方墨點分析法、側層流免疫分析法、多重免疫分析法、放射免疫分析法、免疫放射量測分析法、螢光免疫分析法、化學發光免疫分析法及/或免疫濁度測定法。
應用本發明的提升登革感染重症預測準確性之分群方法，其係同時檢測及交叉比對離體生物樣本是否含有登革病毒之NS1及內源性抗NS1抗體，可有效降低檢測結果的偽陰率，並提高登革熱重症患者之分群準確性。
藉由以下詳細說明，並參酌所附圖式，以下詳細說明本發明的實施例。圖式及說明書使用之相同圖號，盡可能是指相同或類似的部分。
此處參照引用的所有文獻，視同透過引用每篇個別文獻或專利申請書特定且個別併入參考文獻。倘若引用文獻對一術語的定義或用法，與此處對該術語的定義不一致或相反，則適用此處對該術語的定義，而不適用該引用文獻對該術語的定義。
為了解釋說明書，將適用以下定義，在適當的情況中，單數名詞也包括複數，反之亦然。整個詳細說明闡述額外的定義。
除非上下文不適當，否則此處所述的「一(a/an)」及「該(the/said)」係定義為「一或多」且包括複數型。
如前所述，本發明提供一種提升登革感染重症預測準確性之分群方法，其係同時檢測及交叉比對離體生物樣本是否含有登革病毒之非結構性蛋白1 (NS1)及內源性抗-NS1抗體，可有效降低檢測結果的偽陰率，並提高登革熱重症患者之分群準確性。
此處所述之「登革病毒(dengue virus)」可與「登革熱病毒(dengue fever virus)」及「DENV」交替使用。前述登革病毒之血清型可包含但不限於第一型、第二型、第三型及第四型。
在登革感染患者的血清樣本中，登革病毒之非結構性蛋白1 (non-structural protein 1，NS1)會與凝血酶(thrombin)或凝血酶原形成複合物，延長活化部份凝血酶活化時間，進而引發出血重症。習知技術雖有利用檢測活體外生物樣品(in vitro biological sample)中是否存在含有NS1與凝血酶的複合物或含有NS1與凝血酶原的複合物，以判斷個體是否感染登革熱病毒。然而，在登革感染患者中，不同患者的疾病嚴重程度存在相當大的差異，罹患重症者甚至可能會死亡。現行檢驗流程僅檢測NS1與凝血酶的複合物或含有NS1與凝血酶原的複合物，其檢驗結果的偽陰性偏高，無法準確地判斷疾病嚴重度，很可能會輕忽病況而延誤治療的時程。
因此，本發明的方法是對離體生物樣本進行至少一檢測步驟，將所得的第一檢測結果及第二檢測結果進行交叉比對並獲得分群結果，以判斷離體生物樣本是否含有登革病毒之NS1及內源性抗NS1抗體，藉此有效降低檢測結果的偽陰率，並提高登革熱重症患者之分群準確性。補充說明的是，此處所述之「檢測」可與「檢驗」交替使用，「準確性」亦可與「準確率」交替使用。
上述之「離體生物樣本」一般係指登革病毒感染個體內可影響的範圍，並無特別限制，可包含但不限於血液(例如血清、血漿或全血)、尿液、唾液、淋巴液或組織液等，或是血液、尿液、淋巴液或組織液流經的附近組織或細胞等。在一些例子中，上述離體生物樣本以含有被登革病毒感染之細胞者較佳，這些細胞可包括但不限於神經細胞、肌肉細胞、肝臟細胞、內皮細胞、血球細胞及淋巴細胞，又以含有哺乳動物之內皮細胞或血球細胞為較佳。在其他例子中，上述離體生物樣本可例如為新鮮、經組織培養或經冷藏或冷凍之樣品。在一些具體例中，上述離體生物樣本可經過習知前處理(例如純化、離心、萃取或濃縮等方法)，以提升待測物(例如NS1及/或NS1複合物、內源性抗NS1抗體等)濃度。
上述之「第一檢測結果」是對應於登革病毒之非結構性蛋白1 (Non-structural protein 1，NS1)及/或NS1複合物。申言之，前述第一檢測結果是利用一抗體檢測NS1及/或NS1複合物，其中此抗體為外源性抗NS1抗體。在一例示中，NS1複合物包含NS1-凝血酶或NS1-凝血酶原。
上述之「外源性抗體」可例如為單株抗體或多株抗體。在一些實施例中，專一性辨識NS1的抗體可例如為單株抗體。在其他實施例中，專一性辨識NS1複合物的抗體可例如為多株抗體。
前述的外源性抗體包括抗體為主的結合部分(antibody-based binding moiety)、免疫球蛋白分子(immunoglobulin molecules)及其免疫活性決定位(immunologically active determinants)，例如含有一個會與NS1或前述的複合物免疫專一性結合的抗原結合位(antigen-binding site)的分子。外源性抗體的抗體種型不拘，可包括不限於例如IgG、IgA、IgM及IgE等。
上述的外源性抗體亦可包括與NS1或前述NS1複合物專一性反應的抗原結合片段。抗原結合片段的結構不拘，在兼顧互補決定區(complementarity-determining region；CDR)結構穩定性的前提下，可為完整的抗體結構，或是簡化的抗體結構，例如單鏈可變區片段(single-chain variable fragment；scFv)、單鏈可變區片段二聚體﹝(scFv) 2﹞、單鏈可變區片段三聚體﹝(scFv) 3﹞、可變區片段(variable fragment；Fv)、Fab片段、Fab'片段、F(ab') 2片段、奈米抗體〔nanobody，又稱單域抗體(single domain antibody，sdAb)或重鏈抗體(heavy-chain antibody)〕或上述之任意組合。
除了檢測離體生物樣本的NS1及/或NS1複合物之外，患者感染登革病毒後，體內會產生對抗NS1的「內源性抗體」。發明人也發現患者體內之NS1及/或NS1複合物的濃度、對抗特定NS1胜肽序列的內源性抗體濃度與登革疾病嚴重度有關。在一實施例中，可檢測離體生物樣本的內源性抗NS1抗體，以獲得第二檢測結果。
在此實施例中，內源性抗NS1抗體的種類不拘，可包含但不限於第一抗體及第二抗體。在一些例示中，上述第一抗體係指專一性辨識登革病毒NS1之第109個至第122個胺基酸殘基的內源性抗體，其中NS1之第109個至第122個胺基酸殘基可定義為修飾後NS1側翼結構域胜肽(modified NS1-WD peptide)，以下稱為抗修飾後NS1側翼結構域(NS1-WD)胜肽的抗體或抗NS1-WD胜肽的抗體。在過去的臨床研究發現，患者體內這類抗NS1-WD胜肽的抗體濃度越高者，較不容易發展為重症。另外，抗NS1-WD胜肽的抗體之質與量也與疾病的嚴重度有關。
在另一些例示中，上述第二抗體係指專一性辨識登革病毒NS1之第114個至第119個胺基酸殘基的內源性抗體，其中NS1之第114個至第119個胺基酸殘基屬於登革病毒之四種血清型保留序列(conserved sequence)，有利於辨識登革病毒之四種血清型的NS1，亦稱為「抗所有血清型NS1的抗體」或「抗NS1的抗體」。
在其他實施例中，上述內源性抗NS1抗體之種型不拘，可例如為IgG及/或IgM。在一些具體例中，上述第二檢測結果係指第一抗體與第二抗體的含量比。
在一些具體例中，可利用例如人類化抗體(humanized antibody，hAb)專一性辨識上述內源性抗NS1抗體。關於產生人類化抗體之方法，為本發明所屬技術領域的通常知識。在一些例子中，可使用受體人類抗體骨架，並以嚙齒目動物抗體之CDR序列取代人類抗體的對應序列，以獲得人類化抗體，而這類人類化抗體屬於人-鼠嵌合抗體。在人-鼠嵌合抗體的例子中，受體人類抗體骨架可選用公開數據庫取得之人類抗體種系序列，其中受體人類抗體骨架的人種並無特別限制，端視欲檢測的離體生物樣本而定。
此處所述之「個體」、「受試者」或「患者」係指哺乳動物。在一具體例中，個體、受試者或患者可例如為人類。
此處所述之具有「輕症」之登革熱患者係指呈現「警示徵象(warning signs)」(或稱「警示症狀」)或無警示徵象，其中警示徵象可包括但不限於例如腹部疼痛或壓痛(abdominal pain or tenderness)、持續性嘔吐(persistent vomiting)、臨床體液蓄積(clinical fluid accumulation)及黏膜出血(mucosal bleed)等。在其他例子中，無警示徵象的輕症患者可歸類為A群患者，呈現警示徵象的輕症患者則可歸類為B群患者。相關判斷原則可參照世界衛生組織(World Health Organization，WHO)發佈的登革熱臨床處理手冊(Handbook for Clinical Management of Dengue)。
此處所述之具有「重症」之登革熱患者係指呈現例如嚴重血漿滲漏(severe plasma leakage)而造成休克(shock)及體液蓄積併呼吸窘迫(respiratory distress)、嚴重出血(severe bleeding)或嚴重器官損傷(severe organ impairment)等徵象。在其他例子中，重症患者亦可歸類為C群患者。相關判斷原則可參照上述WHO發佈的登革熱臨床處理手冊。
此處所述之「登革感染重症群」係指根據本發明之分群方法判斷者。一般而言，醫學檢驗領域係以α代表偽陽性，或稱為特異性(specificity，亦稱為專一性)的反面；而以β代表偽陰性，或稱為敏感性(sensitivity)的反面。在應用時，本發明之分群方法是同時檢測及交叉比對離體生物樣本是否含有登革病毒之NS1及內源性抗NS1抗體，將第一檢測結果及第二檢測結果之至少一者為陽性時歸類於登革感染重症群，藉此有效降低β數值(即降低「偽陰率」)，進而提高登革熱重症患者之「分群準確率」(即相當於提高「1-β」的數值，亦指分群準確性)。另外，當第一檢測結果及第二檢測結果之二者為陰性結果，則判斷離體生物樣本對應之個體歸類於非登革感染重症。
在上述實施例中，上述檢測步驟可包含但不限於酵素連結免疫吸附分析法(ELISA)、西方墨點分析法、側層流免疫分析法、多重免疫分析法、放射免疫分析法、免疫放射量測分析法、螢光免疫分析法、化學發光免疫分析法及/或免疫濁度測定法等。在其他實施例中，亦可使用其他方式檢測離體生物樣本之NS1及內源性抗NS1抗體。
另外說明的是，習知檢驗流程大多是根據單一檢測結果以先後順序判斷登革熱患者的嚴重程度，實無法有效降低檢測結果的偽陰性。在一些具體例中，相較於現行檢驗流程的偽陰率約10%~30%，本發明之分群方法之「登革感染重症群」經臨床醫師診斷並確認後，確實可將檢測結果之偽陰率降低至約4.5%。
以下利用數個實施例以說明本發明之應用，然其並非用以限定本發明，本發明技術領域中具有通常知識者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾。   實施例一 1. 病毒株
登革病毒血清型第一型(DENV 1，臺灣病毒株8700828)、第二型(DENV 2，病毒株16681以及臺灣病毒株454009 A)、第三型(DENV 3，臺灣病毒株8700829)以及第四型(DENV 4，臺灣病毒株59201818)可使用習知培養方法在C6/36細胞中複製，為病毒培養乃本發明所屬技術領域中具有通常知識者所熟知，在此不另贅述。去除細胞後的上清液係利用市售離心設備(例如Macrosep® Advance Centrifugal Devices，截留分子量為30 kDa；Pall Corp., Port Washington, NY)，以6000 × g的轉速在4 °C下濃縮成高病毒力價的DENV後，儲存至低於−70 °C的環境中備用。 2. 血清收集
此實施例使用67名登革確診患者之血清是由國立成功大學附設醫院(NCKUH)在2015年臺灣台南爆發DENV的期間，於上述患者的急性期(發病後0-7天)時所取得。上述血清係按照臺灣疾病管制署設立的實驗室標準檢測登革病毒的感染。根據WHO發布最新的原則，登革熱患者可依嚴重程度分成重症患者、有警示徵象的輕症患者或無警示徵象的輕症患者等。此外，此實施例使用26名健康志願者的血清作為陰性控制組。所有血清收集均依照成大醫院(NCKUH)人體研究倫理審查委員會(institutional review board，IRB)核准的相關準則及規定進行(IRB #A-BR-101–140)，並取得所有參與者及/或其法定代理人的知情同意。 3. 檢測NS1及/或NS1複合物
關於檢測受試者血清中NS1及/或NS1複合物，可使用習知檢測方式或參考臺灣專利公告號第I624668號專利所揭露的方式，在此一併列為參考文獻。
此實施例係利用市售套組(例如SD BIOLINE™ Dengue Duo套組，Standard diagnostic Inc.)並根據製造商的操作手冊進行。簡言之，快篩試劑(rapid test)的觀測窗顯示控制線(control line，以「C」標記)以及試驗線(test line，以「T」標記)，其中試驗線含有1μL的小鼠抗NS1單株抗體(型號12100/12110，偉喬生醫股份有限公司，臺灣)作為捕獲抗體；快篩試劑的膠金墊則含有小鼠抗NS1單株抗體-膠體金，以及1μL的綿羊抗凝血酶多株抗體(sheep anti-thrombin polyclonal antibody)作為偵測抗體。接著，將80 µL的血清樣品加入快篩試劑的樣品墊(sample pad)中進行反應。在反應的第15分鐘時，利用肉眼判讀結果，其結果即相當於第一檢測結果。 4. 酵素結合免疫吸附分析法(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)
進行間接ELISA時，將50 μl之NS1、牛血清蛋白(bovine serum albumin，BSA)、以胜肽共軛之BSA (peptides-conjugated BSA)或抗體 (2 μg/ml，溶於pH 7.3的PBS) 分別塗佈於96孔的ELISA 培養盤中，置於4 °C至隔夜。利用含1% BSA的 PBS阻斷(blocking) 1小時後，將抗體[即抗NS1-WD胜肽的人類化抗體、抗所有血清型NS1 (辨認NS1之第114個至第119個胺基酸)的人類化抗體、抗NS1-WD胜肽的小鼠抗體(單株抗體株33D2，參閱SCIENTIFIC REPORTs 7: 6975，DOI:10.1038/s41598-017-07308-3，在此一併列為本文之參考文獻)、抗所有血清型NS1小鼠抗體(單株抗體株19-5，辨認NS1之第114個至第119個胺基酸殘基，參閱SCIENTIFIC REPORTs 7: 6975，在此一併列為本文之參考文獻)]或患者血清(以1:50 稀釋)培養於各孔中，在37 °C反應1小時。上述抗NS1-WD胜肽的人類化抗體以及抗所有血清型NS1的人類化抗體，其重鏈可變區CDRs及輕鏈可變區CDRs與上文對應之小鼠單株抗體株相同，但其餘序列則替換為人類化抗體的序列。上述利用抗NS1-WD胜肽的小鼠抗體以及抗所有血清型NS1小鼠抗體檢測的結果，則做為比較例。關於人類化抗體在CDRs以外的序列，可使用本發明所屬技術領域中通常知識者所熟知者，故不另贅述。接著，將共軛山葵過氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)之抗人類IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA)二級抗體 (經1:10,000稀釋)加入各孔中，於37 °C再反應1小時。各孔以PBST潤洗後，利用四甲基聯苯胺(tetramethylbenzidine，TMB；Clinical Science Products, Mansfield, MA)作為受質進行呈色反應。之後，各孔加入終止溶液(2N H 2SO 4)停止反應，利用市售微量盤判讀儀(例如VersaMax microplate reader；Molecular Devices, Sunnyvale, CA)於OD450nm讀取吸光度，其結果相當於第二檢測結果。   5. 統計分析
所有數值利用Prism軟體(GraphPad, San Diego, CA)分析。所有結果是利用非成對司徒頓t檢定(unpaired Student’s t-test)或單因子變異數分析(one-way ANOVA)，以分別比較二個或二個以上的獨立族群。所有數值由三個獨立試驗得出，以平均值± SD表示。統計顯著性設定以圖號*代表p ＜ 0.05，以圖號**代表p ＜ 0.01，以圖號***代表p ＜ 0.001，而ns代表在95%雙尾信賴區間下無顯著差異。   實施例二
利用實施例一的方法分別檢測患者血清中抗修飾後NS1-WD胜肽的抗體(IgG)光學密度(OD)值與抗所有血清型NS1的抗體(IgG)之OD值，以二者OD比值(NS1-WD IgG / NS1 IgG)對不同嚴重度的登革熱患者進行評估，其結果如圖1所示。
請參閱圖1，其係繪示根據本發明一實施例的各種登革熱患者血清之抗修飾後NS1側翼結構域(NS1-WD) IgG / 抗NS1 IgG的含量比，其中圖號*代表p ＜ 0.05，圖號**代表p ＜ 0.01，而圖號***代表p ＜ 0.001。
如圖1所示，相較於具有警示徵象的登革熱患者血清(N = 20)或無警示徵象的登革熱患者血清(N = 30)，登革感染重症患者血清(N = 17)之抗NS1-WD IgG / 抗NS1 IgG的含量比為顯著降低。進一步分析後，所有患者的抗NS1 IgG的OD值在統計上無顯著差異(結果未顯示)，顯示檢測抗NS1-WD胜肽之抗體確實有助於提升登革熱患者分群準確性。
請參閱圖2，其係繪示根據習知方法對於登革感染重症預測的專一性與敏感度之間的一致性結果。圖2使用的習知方法包括根據患者症狀、病史及簡單非專一性檢驗結果(包括根據單一檢測結果或未針對抗NS1-WD IgG的檢驗結果)，進行專一性與敏感度二者之一致性分析。
由圖2結果可知，習知方法(僅根據症狀、病史及簡單非專一性檢驗結果)的檢驗方法之敏感性高於專一性，曲線下面積(area under curve，AUC)為0.7036 (信賴區間為0.60-0.81)。
請參閱圖3，其係繪示根據本發明一實施例之登革熱患者血清之NS1抗原對於登革感染重症預測的專一性與敏感度之間的一致性結果(相當於第一檢測結果)。由圖3結果可知，登革熱患者血清之NS1抗原的檢驗方法之敏感性亦高於專一性，曲線下面積(AUC)為0.8052 (信賴區間為0.71-0.90)。
請參閱圖4，其係繪示根據本發明一實施例之登革熱患者血清之內源性抗NS1抗體比例對於登革感染重症預測的專一性與敏感度二者的一致性結果(相當於第二檢測結果)。由圖4結果可知，由登革熱患者血清之內源性抗NS1抗體的檢驗方法之敏感性亦高於專一性，曲線下面積(AUC)為0.7027 (信賴區間為0.59-0.81)。
請參閱表1，其係列出根據本發明一實施例之同時檢測及交叉比對登革熱患者血清之NS1抗原與內源性抗NS1抗體比例的陽性或陰性的個數與鑑別診斷確認的結果，其中重症與輕症是根據WHO發佈的登革熱臨床處理手冊對受試者事後進行鑑別診斷確認後的結果。 [表1]
共99人 重症 (65人) 輕症 (34人)
NS1抗原 (+) 或 抗-NS1抗體比例 (+) 62 13
NS1抗原 (-) 及 抗-NS1抗體比例 (-) 3 21
根據表1可知，利用人類化抗體檢測內源性抗-NS1抗體比例且同時檢測登革熱患者血清之NS1與內源性抗-NS1抗體之至少一者為陽性時，判斷離體生物樣本對應之受試者歸類於登革感染重症群，經事後診斷或鑑別診斷的確認後，以本發明之方法預估登革熱重症之分群準確率(亦指分群準確性)可高達95.5% (即62/65= 95.5%)，相當於偽陰率(即β值)降至4.5%。因此，本發明之分群方法可應用於預估登革熱重症患者，亦有利於做為臨床醫療人員評估風險及/或擬定治療策略之參考。
相較之下，利用小鼠抗體檢測內源性抗-NS1抗體比例對登革熱患者進行分群，其偽陰率偏高。請參閱圖5，其係繪示根據比較例之小鼠抗體檢測登革熱患者血清之內源性抗NS1抗體比例對於登革感染重症預測的專一性與敏感度二者的一致性結果(相當於第二檢測結果)。由圖5結果可知，以小鼠抗體檢測登革熱患者血清之內源性抗NS1抗體的檢驗方法之敏感性(72.97%)則低於專一性(83.33%)，曲線下面積(AUC)為0.7739 (信賴區間為0.6557-0.8921)。
請參閱表2，其係列出根據比較例之小鼠抗體檢測登革熱患者血清之內源性抗NS1抗體比例的陽性或陰性的個數與鑑別診斷確認的結果，其中重症與輕症是根據WHO發佈的登革熱臨床處理手冊對受試者事後進行鑑別診斷確認後的結果。   [表2]
共67人 重症 (37人) 輕症 (30人)
抗-NS1抗體比例 (+) 27 5
抗-NS1抗體比例 (-) 10 25
由表2可知，比較例以小鼠抗體檢測登革熱患者血清之內源性抗-NS1抗體為陽性時，判斷離體生物樣本對應之受試者歸類於登革感染重症群，經事後診斷或鑑別診斷的確認後，其預估登革熱重症之分群準確率(亦指分群準確性)僅達72.9% (即27/37= 72.9%)，而分群偽陰率高達27.1% (即10/37= 27.1%)，確實遠高於本發明之分群方法的偽陰率(4.5%)。
綜言之，上述特定的抗原、特定的抗體、特定的病患群、特定的分析模式或特定的評估方法僅用於例示說明提升登革感染重症預測準確性之分群方法。然而，本發明所屬技術領域中具有通常知識者應可理解，在不脫離本發明的精神及範圍內，其他的抗原、其他的抗體、其他的病患群、其他的分析模式或其他的評估方法亦可用於提升登革感染重症預測準確性之分群方法，並不限於上述。舉例而言，在不影響分群準確性的前提下，第一檢測結果可使用其他方式檢測NS1及/或NS1複合物，或者第二檢測結果可使用其他方式檢測內源性抗NS1抗體。
由上述實施例可知，本發明之提升登革感染重症預測準確性之分群方法係同時檢測及交叉比對離體生物樣本是否含有登革病毒之NS1及內源性抗NS1抗體，可有效降低檢測結果的偽陰率，並提高登革熱重症患者之分群準確性。
雖然本發明已以數個特定實施例揭露如上，但可對前述揭露內容進行各種潤飾、各種更動及替換，而且應可理解的是，在不脫離本發明之精神和範圍內，某些情況將採用本發明實施例之某些特徵但不對應使用其他特徵。因此，本發明的精神和權利要求範圍不應限於以上例示實施例所述。
無
為讓本發明之上述和其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之詳細說明如下： [圖1]係繪示根據本發明一實施例的各種登革熱患者血清之修飾後NS1側翼結構域(NS1-WD) IgG / NS1 IgG的含量比。 [圖2]係繪示根據習知方法對於登革感染重症預測的專一性與敏感度二者的一致性結果。 [圖3]係繪示根據本發明一實施例之登革熱患者血清之NS1抗原對於登革感染重症預測的專一性與敏感度二者的一致性結果。 [圖4]係繪示根據本發明一實施例之登革熱患者血清之內源性抗NS1抗體比例對於登革感染重症預測的專一性與敏感度二者的一致性結果。 [圖5]係繪示根據比較例之小鼠抗體檢測登革熱患者血清之內源性抗NS1抗體比例對於登革感染重症預測的專一性與敏感度二者的一致性結果。

Claims (10)

  1. 一種提升登革感染重症個體預測準確性之分群方法，包括：提供一離體生物樣本，其中該離體生物樣本尚未被診斷為或被鑑別診斷為一登革病毒感染或一登革病毒疑似感染；對一離體生物樣本進行至少一檢測步驟，以獲得一第一檢測結果及一第二檢測結果，其中該第一檢測結果是利用一抗體檢測登革病毒之非結構性蛋白1(Non-structural protein 1，NS1)及/或NS1複合物，該抗體為一外源性抗NS1抗體，該第二檢測結果是對應於一內源性抗NS1抗體，該內源性抗NS1抗體包含一第一抗體及一第二抗體，該第一抗體係專一性辨識該NS1之第109個至第122個胺基酸殘基，該第二抗體係專一性辨識該NS1之第114個至第119個胺基酸殘基，且該第二檢測結果係指該第一抗體與該第二抗體的含量比；以及交叉比對該第一檢測結果及該第二檢測結果，以獲得一分群結果，其中當該第一檢測結果及該第二檢測結果之至少一者為陽性，則判斷該離體生物樣本對應之一個體歸類於一登革感染重症群。
  2. 如請求項1所述之提升登革感染重症個體預測準確性之分群方法，其中該離體生物樣本包含血液、尿液、唾液、組織液及/或淋巴液。
  3. 如請求項1所述之提升登革感染重症個體預測準確性之分群方法，其中該NS1複合物包含該NS1-凝血酶或該NS1-凝血酶原。
  4. 如請求項1所述之提升登革感染重症個體預測準確性之分群方法，其中該登革病毒之一血清型包含第一型、第二型、第三型及第四型。
  5. 如請求項1所述之提升登革感染重症個體預測準確性之分群方法，其中一人類化抗體係專一性辨識該內源性抗NS1抗體。
  6. 如請求項5所述之提升登革感染重症個體預測準確性之分群方法，其中該內源性抗NS1抗體之一種型為IgG及/或IgM。
  7. 如請求項1所述之提升登革感染重症個體預測準確性之分群方法，其中該個體為一哺乳動物。
  8. 如請求項1所述之提升登革感染重症個體預測準確性之分群方法，其中該個體為一人類。
  9. 如請求項1所述之提升登革感染重症個體預 測準確性之分群方法，其中當該第一檢測結果及該第二檢測結果之二者為陰性結果，則判斷該離體生物樣本對應之該個體歸類於一非登革感染重症。
  10. 如請求項1所述之提升登革感染重症個體預測準確性之分群方法，其中該至少一檢測步驟包含酵素連結免疫吸附分析法(ELISA)、西方墨點分析法、側層流免疫分析法、多重免疫分析法、放射免疫分析法、免疫放射量測分析法、螢光免疫分析法、化學發光免疫分析法及/或免疫濁度測定法。
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