CN104280554A - 一种双纳米金标记物信号放大蛋白质标志物快速检测装置及方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种双纳米金标记物信号放大蛋白质标志物快速检测装置及方法，棉线两端固定黏附在贴于塑料卡片上的两块双面胶上，棉线检测区域通过滴加方式固定单克隆抗体，棉线一端固定了两个纳米金结合垫；第一结合垫(1)固定了修饰了另一种单克隆抗体和一端带有巯基一端带有生物素基团DNA的纳米金粒子，第二结合垫(2)则固定了修饰有链酶亲合素的纳米金粒子；棉线另一端则贴有吸水滤纸。本发明采用两种纳米金粒子为标记物，实现了信号放大的目的。另外采用棉线为检测载体，大大简化了传统纳米金层析试纸条装置，同时不需要点喷设备，制备简便，价格低廉，一次性使用，干试剂化，检测灵敏，快速，使用完处理方便，适于现场诊断。

Description

一种双纳米金标记物信号放大蛋白质标志物快速检测装置及方法
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，涉及一种双纳米金标记物信号放大蛋白质标志物快速检测装置及方法，具体地说，涉及一种基于棉线为载体的双纳米金标记物信号放大蛋白质标志物快速检测装置及方法。
背景技术
20世纪90年代Beggs等人首次开发了胶体金层析试纸条技术，用于蛋白质检测。传统的纳米金层析试纸条技术构造较为复杂，制备需要昂贵的点喷设备。本发明的目的在于克服上述技术存在的缺陷，提供一种双纳米金标记物信号放大蛋白质标志物快速检测装置及方法，该方法采用商品化的棉线为载体，检测区域的抗体采用滴加方式固定，使得整个检测装置结构简单化，制备方便，价格便宜，使用方便，检测时间短。另外，我们在传统的夹心免疫反应基础上采用了两种纳米金标记物，大大提高了检测灵敏度。
发明内容
其具体技术方案为：
一种双纳米金标记物信号放大蛋白质标志物快速检测装置，棉线两端固定黏附在贴于塑料卡片上的两块双面胶上，棉线检测区域通过滴加方式固定单克隆抗体，棉线一端固定了两个纳米金结合垫；第一结合垫1固定了修饰了另一种单克隆抗体和一端带有巯基一端带有生物素基团DNA的纳米金粒子，第二结合垫2则固定了修饰有链酶亲合素的纳米金粒子；棉线另一端则贴有吸水滤纸。
优选地，所述双面胶规格为：2.2cm×1.0cm，两块双面胶之间的距离为2.3cm。
优选地，所述检测区距离上面的双面胶下边缘0.6cm。
优选地，所述结合垫尺寸：宽3mm，长9mm，两块结合垫紧密相连。
一种双纳米金标记物信号放大蛋白质标志物快速检测方法，包括以下步骤：检测时在第一结合垫1上滴加带有待测抗原的样品溶液，第二结合垫2则滴加缓冲溶液，等待十五分钟，棉线检测区域出现红色条带，显示两种纳米金标记物被捕获于检测区域；检测时采用商用扫描仪扫描检测区域，用ImageJ软件分析颜色强度，即可得到定量分析信息。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明采用两种纳米金粒子为标记物，实现了信号放大的目的。另外采用棉线为检测载体，大大简化了传统纳米金层析试纸条装置，同时不需要点喷设备，制备简便，价格低廉，一次性使用，干试剂化，检测灵敏，快速，使用完处理方便，适于现场诊断。
附图说明
图1为双纳米金标记物信号放大蛋白质标志物快速检测装置的结构图；
图2为双纳米金标记物信号放大蛋白质标志物快速检测方法的示意图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明。
我们首次利用棉线和纳米金标记物实现了对肺癌标志物(鳞状癌胚抗原)的低成本、高灵敏、快速检测。其中作为分析物的鳞状癌胚抗原和一对单克隆抗体组成了干试剂棉线即时诊断设备模型。而且，我们利用两种纳米金标记物实现了信号放大过程。与简单的基于棉线设备的夹心免疫反应相比，采用两种纳米金标记物明显提高了检测灵敏度。与传统的蛋白质检测方法相比，我们设计的方法避免了多次反应和多步洗涤。通过观察检测区颜色变化进行定性检测，定量检测数据通过扫面仪和相应的软件分析而得到。在最佳条件下，该方法检测鳞状癌胚抗原，检测限可达1ng/mL，满足临床诊断的要求。整个检测过程在室温下进行，这大大简化了检测程序。与传统的试纸条生物传感器相比，我们只需要8微升的试样。同时，我们还用同样的方法成功实现了另外一种肺癌标志物(铁蛋白)的快速检测。
具体构成：棉线两端固定黏附在贴于塑料卡片上的两块双面胶上，棉线检测区域通过滴加方式固定鳞状癌胚抗原单克隆抗体，棉线一端固定了两个纳米金结合垫。结合垫1固定了修饰了另一种单克隆抗体和一端带有巯基一端带有生物素基团DNA的纳米金粒子，结合垫2则固定了修饰有链酶亲合素的纳米金粒子。棉线另一端则贴有吸水滤纸。检测时在结合垫1上滴加带有待测抗原的样品溶液，结合垫2则滴加缓冲溶液，等待十五分钟，棉线检测区域出现红色条带，显示两种纳米金标记物被捕获于检测区域。检测时采用商用扫描仪扫描检测区域，用ImageJ软件分析颜色强度，即可得到定量分析信息。血清样品检测时，用缓冲溶液1∶1稀释样品，然后按照上述方法进行检测。
同时，该装置已经成功实现了另外一种肺癌标志物(铁蛋白)的检测和一种疾病相关DNA序列的检测。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。

Claims (5)

1.一种双纳米金标记物信号放大蛋白质标志物快速检测装置，其特征在于，棉线两端固定黏附在贴于塑料卡片上的两块双面胶上，棉线检测区域通过滴加方式固定单克隆抗体，棉线一端固定了两个纳米金结合垫；第一结合垫(1)固定了修饰了另一种单克隆抗体和一端带有巯基一端带有生物素基团DNA的纳米金粒子，第二结合垫(2)则固定了修饰有链酶亲合素的纳米金粒子；棉线另一端则贴有吸水滤纸。
2.根据权利要求1所述的双纳米金标记物信号放大蛋白质标志物快速检测装置，其特征在于，所述双面胶规格为：2.2cm×1.0cm，两块双面胶之间的距离为2.3cm。
3.根据权利要求1所述的双纳米金标记物信号放大蛋白质标志物快速检测装置，其特征在于，所述检测区距离上面的双面胶下边缘0.6cm。
4.根据权利要求1所述的双纳米金标记物信号放大蛋白质标志物快速检测装置，其特征在于，所述结合垫尺寸：宽3mm，长9mm，两块结合垫紧密相连。
5.一种双纳米金标记物信号放大蛋白质标志物快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：检测时在第一结合垫(1)上滴加带有待测抗原的样品溶液，第二结合垫(2)则滴加缓冲溶液，等待十五分钟，棉线检测区域出现红色条带，显示两种纳米金标记物被捕获于检测区域；检测时采用商用扫描仪扫描检测区域，用ImageJ软件分析颜色强度，即可得到定量分析信息。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105891485A (zh) * 2016-05-11 2016-08-24 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 一种定量检测癌胚抗原的免疫层析试纸条及其制备方法
CN107515299A (zh) * 2017-07-07 2017-12-26 西北农林科技大学 一种生物探针、检测呋喃唑酮的试纸条及其应用
CN110133254A (zh) * 2018-02-02 2019-08-16 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种插拔式可实现信号二次放大的拉曼层析试纸
CN112362869A (zh) * 2021-01-14 2021-02-12 山东康华生物医疗科技股份有限公司 一种多项呼吸道抗原检测卡及试剂盒
CN115078715A (zh) * 2022-06-14 2022-09-20 深圳市雷诺华科技实业有限公司 一种超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂及其制备方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GINAZHOU ET AL: "Immunochromatographic Assay on Thread", 《ANAL.CHEM.》 *
XUN MAO ET AL: "Disposable dry-reagent cotton thread-based point-of-care diagnosis devices for protein and nucleic acid test", 《BIOSENSORS AND BIOELECTRONICS》 *
XUN MAO ET AL: "Novel gold nanoparticle trimer reporter probe combined with dry-reagent cotton thread immunoassay device for rapid human ferritin test", 《ANALYTICA CHIMICA ACTA》 *
杜婷娥等: "基于棉线的鳞状癌胚抗原即时诊断装置的研究", 《中国化学会第29届学术年会摘要集-第04分会：纳米生物传感新方法》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105891485A (zh) * 2016-05-11 2016-08-24 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 一种定量检测癌胚抗原的免疫层析试纸条及其制备方法
CN107515299A (zh) * 2017-07-07 2017-12-26 西北农林科技大学 一种生物探针、检测呋喃唑酮的试纸条及其应用
CN110133254A (zh) * 2018-02-02 2019-08-16 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种插拔式可实现信号二次放大的拉曼层析试纸
CN112362869A (zh) * 2021-01-14 2021-02-12 山东康华生物医疗科技股份有限公司 一种多项呼吸道抗原检测卡及试剂盒
CN115078715A (zh) * 2022-06-14 2022-09-20 深圳市雷诺华科技实业有限公司 一种超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂及其制备方法

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