CN115078715A - 一种超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂及其制备方法 - Google Patents

一种超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂及其制备方法，该诊断试剂包括：样品垫、第一结合垫、第二结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫、背衬；第一结合垫的左侧与所述样品垫的右侧搭接，第二结合垫的左侧与所述第一结合垫的右侧搭接，第二结合垫的右侧与所述硝酸纤维素膜的左侧搭接，第一结合垫上含有链霉亲和素偶联的大颗粒金，第二结合垫上含有生物素化ssDNA偶联小颗粒金标记新型冠状病毒单克隆抗体一；硝酸纤维素膜上设置有测试线和质控线，测试线包被有新型冠状病毒单克隆抗体二，质控线包被有羊抗鼠IgG抗体。本发明是一种基于链霉亲和素偶联大颗粒金、生物素化单链DNA偶联小颗粒金组成的层析放大系统，具有超高的灵敏度。

Description

一种超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及临床医学检验技术领域，具体涉及一种超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂及其制备方法。
背景技术
目前现有技术手段常采用将链霉亲和素包被在硝酸纤维素膜(NC膜)上，将其中一株生物素化的抗体置于样品垫上，将抗体偶联的大颗粒金(40nm左右，40nm的胶体金颗粒提供较大的可视性)放置在样品垫后的标记垫上，样品中的待测物与两种抗体结合后沿NC膜移动，当遇到固定在NC膜上的链霉亲和素后，链霉亲和素特异的与生物素产生比较强的结合，从而形成肉眼可见的红色线条。
目前此技术相对于传统的胶体金技术可以较大的提升灵敏度，然而也存在一定的缺陷：偶联有抗体的40nm左右的金颗粒较大层析速度相对较慢，会导致抗原抗体不能充分结合，从而对灵敏度的提升是有限的。
因此，需要开发一种的新的层析试剂来解决上述问题。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供一种超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂及其制备方法。
为实现上述目的，本发明的具体方案如下：
本发明提供一种超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂，包括：样品垫、第一结合垫、第二结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫、背衬；
所述背衬上从左到右依次设置样品垫、第一结合垫、第二结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，
所述样品垫的右侧与所述第一结合垫的左侧搭接，第一结合垫右侧与第二结合垫的左侧搭接，所述第二结合垫的右侧与所述硝酸纤维素膜的左侧搭接，所述硝酸纤维素膜的右侧与所述吸水垫的左侧搭接。
进一步的，所述样品垫的右侧压在所述第一结合垫的左侧上面，所述第一结合垫的右侧压在所述第二结合垫的左侧上面，所述第二结合垫的右侧压在所述硝酸纤维素膜的左侧上面，所述吸水垫的左侧压在所述硝酸纤维素膜的右侧上面。
进一步的，所述第一结合垫上包被：大颗粒金标记链霉亲和素。
进一步的，所述第二结合垫上包被：生物素化ssDNA偶联小颗粒金标记新型冠状病毒单克隆抗体一。
进一步的，所述硝酸纤维素膜上从左到右依次设置：测试线和质控线。
进一步的，所述测试线和质控线分别包被：新型冠状病毒单克隆抗体二、羊抗鼠IgG抗体。
本发明提供一种超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂的制备方法，包括如下步骤：
S1，将样品垫、第一结合垫、第二结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫上从左到右相互搭接依次设置在背衬上；
S2，在第一结合垫上包被大颗粒金标记链霉亲和素，第二结合垫上包被生物素化ssDNA偶联小颗粒金标记新型冠状病毒单克隆抗体一；
S3，在硝酸纤维素膜上从左到右依次设置：测试线和质控线；
S4，在测试线和质控线分别包被新型冠状病毒单克隆抗体二、羊抗鼠IgG抗体。
采用本发明的技术方案，具有以下有益效果：
1.采用大颗粒金连接链霉亲和素与生物素化ssDNA标记小颗粒金偶联抗体，与现有的将链霉亲和素包被在硝酸纤维素膜上的方式具有更高的灵敏度，稳定性更佳；
2.与现有的增加前垫来提搞灵敏度的方法相比，检测流速快，背景更白，特异性好；
3.采用链霉亲和素与生物素的放大方式可以减少原材料金和抗体的用量，节省成本。
附图说明
图1是本发明的层析诊断试剂结构示意图；
图2是本发明的层析诊断试剂反应后的示意图；
图3是本发明超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂的制备方法流程图。
图中：1、样品垫；2、第一结合垫；3、第二结合垫；4、硝酸纤维素膜；5、吸水垫；6、背衬；T line、测试线；C line、质控线。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的详细说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。另外还需要说明的是，为了便于描述，附图中仅示出了与本发明相关的部分而非全部结构。
在本发明的描述中，除非另有明确的规定和限定，术语“相连”、“连接”、“固定”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或成一体；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
在本发明中，除非另有明确的规定和限定，第一特征在第二特征之“上”或之“下”可以包括第一和第二特征直接接触，也可以包括第一和第二特征不是直接接触而是通过它们之间的另外的特征接触。而且，第一特征在第二特征“之上”、“上方”和“上面”包括第一特征在第二特征正上方和斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度高于第二特征。第一特征在第二特征“之下”、“下方”和“下面”包括第一特征在第二特征正下方和斜下方，或仅仅表示第一特征水平高度小于第二特征。
在本实施例的描述中，术语“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”等方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述和简化操作，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，术语“第一”、“第二”仅仅用于在描述上加以区分，并没有特殊的含义。
如图1所示，本发明提供一种超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂，包括：样品垫1、第一结合垫2、第二结合垫3、硝酸纤维素膜4、吸水垫5、背衬6；
所述背衬6用于支撑整个层析诊断试剂，所述样品垫1用于滴放样品，所述第一结合垫2、第二结合垫3分别用于放置大颗粒金标记链霉亲和素和生物素化ssDNA标记小颗粒金偶联抗体，所述硝酸纤维膜用于设置测试线和控制线，所述吸水垫5用于引流。
所述背衬6上从左到右依次设置样品垫1、第一结合垫2、第二结合垫3、硝酸纤维素膜4、吸水垫5，所述样品垫1的右侧与所述结合垫2的左侧搭接，所述结合垫3的左侧与所述结合垫2的右侧搭接，所述结合垫3的右侧与所述硝酸纤维素膜4的左侧搭接，所述硝酸纤维素膜4的右侧与所述吸水垫5的左侧搭接。
所述第一结合垫2上含有大颗粒金(40nm)标记链霉亲和素，所述第二结合垫3上含有生物素化ssDNA(单链DNA)偶联小颗粒金(10nm)标记新型冠状病毒(2019-nCoV)单克隆抗体一；所述硝酸纤维素膜4上从左到右依次设置测试线(T line)和质控线(C line)，所述测试线包被有新型冠状病毒(2019-nCoV)单克隆抗体二，所述质控线包被有羊抗鼠IgG抗体。
如图2所示，为本发明的层析试剂反应后的示意图。抗原与抗体反应后，分别在测试线(T line)和质控线(C line)产生颜色变化，若发生颜色变化则证明有抗原的存在。
如图3所示，本发明还提供一种超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂的制备方法，包括如下步骤：
S1，将样品垫1、第一结合垫2、第二结合垫3、硝酸纤维素膜4、吸水垫5上从左到右相互搭接依次设置在背衬6上；
S2，在第一结合垫2上包被大颗粒金标记链霉亲和素，第二结合垫3上包被生物素化ssDNA偶联小颗粒金标记新型冠状病毒单克隆抗体一；
S3，在硝酸纤维素膜4上从左到右依次设置：测试线(T line)和质控线(C line)；
S4，在测试线和质控线分别包被新型冠状病毒(2019-nCoV)单克隆抗体二、羊抗鼠IgG抗体。
本发明的原理如下：
参考图1，沿F方向层析反应，将链霉亲和素偶联的大颗粒金(40nm)作为第一个标记垫，将生物素化ssDNA(单链DNA)偶联小颗粒金(10nm)标记抗体作为第二个标记垫，待测样本中的待测物与第二个标记垫上的标记抗体结合，随着层析的进行，在NC膜上固定的抗体结合抗原形成三明治夹心。随后链霉亲和素偶联的大颗粒金迁移到抗原抗体结合处时，通过与生物素特异性结合增强显色效果，起到放大信号的目的。由于金颗粒小，生物素化ssDNA偶联的小颗粒金标记抗体与待测物在层析时的流动相混合较为充分，能最大程度的捕获待测物。同时本发明采用ssDNA作为生物素的延长间隔臂来减少与链霉亲和素的连接位阻，使得灵敏度提升效果明显。根据本方案，可提供更高灵敏度的新冠抗原测定方法、以及用于该测定的试剂和试剂盒。与以往的方法相比，检出能力进一步得到大幅改善，作为层析测定方法，其实用性更高。
以上所述仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是在本发明的发明构思下，利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本发明的保护范围内。

Claims (7)

1.一种超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂，其特征在于，包括：样品垫(1)、第一结合垫(2)、第二结合垫(3)、硝酸纤维素膜(4)、吸水垫(5)、背衬(6)；
所述背衬(6)上从左到右依次设置样品垫(1)、第一结合垫(2)、第二结合垫(3)、硝酸纤维素膜(4)、吸水垫(5)，
所述样品垫(1)的右侧与所述第一结合垫(2)的左侧搭接，第一结合垫(2)右侧与第二结合垫(3)的左侧搭接，所述第二结合垫(3)的右侧与所述硝酸纤维素膜(4)的左侧搭接，所述硝酸纤维素膜(4)的右侧与所述吸水垫(5)的左侧搭接。
2.根据权利要求1所述的超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂，其特征在于，所述样品垫(1)的右侧压在所述第一结合垫(2)的左侧上面，所述第一结合垫(2)的右侧压在所述第二结合垫(3)的左侧上面，所述第二结合垫(3)的右侧压在所述硝酸纤维素膜(4)的左侧上面，所述吸水垫(5)的左侧压在所述硝酸纤维素膜(4)的右侧上面。
3.根据权利要求1所述的超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂，其特征在于，所述第一结合垫(2)上包被：大颗粒金标记链霉亲和素。
4.根据权利要求1所述的超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂，其特征在于，所述第二结合垫(3)上包被：生物素化ssDNA偶联小颗粒金标记新型冠状病毒单克隆抗体一。
5.根据权利要求1所述的超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂，其特征在于，所述硝酸纤维素膜(4)上从左到右依次设置：测试线和质控线。
6.根据权利要求5所述的超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂，其特征在于，所述测试线和质控线分别包被：新型冠状病毒单克隆抗体二、羊抗鼠IgG抗体。
7.一种超高灵敏度的新冠抗原层析诊断试剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1，将样品垫(1)、第一结合垫(2)、第二结合垫(3)、硝酸纤维素膜(4)、吸水垫(5)上从左到右相互搭接依次设置在背衬(6)上；
S2，在第一结合垫(2)上包被大颗粒金标记链霉亲和素，第二结合垫(3)上包被生物素化ssDNA偶联小颗粒金标记新型冠状病毒单克隆抗体一；
S3，在硝酸纤维素膜(4)上从左到右依次设置：测试线和质控线；
S4，在测试线和质控线分别包被新型冠状病毒单克隆抗体二、羊抗鼠IgG抗体。
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