CN103197063A - 一种免疫层析试剂盒及其检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种免疫层析试剂盒及其检测方法,它包括至少一个试剂条,所述试剂条包括样品垫片(1)、检测膜(2)、吸水垫片(3)和支撑片(4),所述检测膜(2)上设有测试带(7)和质控带(8),所述样品垫片(1)和检测膜(2)之间设有偶合物垫片(5)所述偶合物垫片(5)与检测膜(2)之间设有第二层玻璃纤维垫片(6-2);采用上述结构,减少了测试盒的整体变异系数,使偶合物与待检测蛋白在检测膜前的反应充分,从而提高检测的灵敏度和精确度,适用于定量诊断的质量标准。
Description
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域,尤其涉及到一种用于疾病诊断定量检测的试剂盒及其检测方法。
背景技术
目前,免疫层析技术已被广泛的应用于疾病的诊断中,但由于技术本身的局限性,已有的免疫层析技术绝大部分应用于定性的诊断试剂中,而很难运用于定量的诊断试剂中,其原因在于试剂盒中的检测灵敏度低,无法达到几十pg/ml的检测水平,特别是偶合物和待检测蛋白的聚合体颗粒的大小很难控制,其偶合颗粒还存在有不均匀的现象发生,造成精确度和准确度低,变动系数大,其变动系数在低端临近最低检测水平时,检测膜的检测方法往往大于15%,制约了免疫层析技术精密定量的发展,从而达不到定量诊断的行业标准。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种灵敏度、精确度高的免疫层析试剂盒及其该试剂盒的检测方法。
为了解决上述技术问题,本发明提供了一种免疫层析试剂盒,它包括至少一个试剂条,所述试剂条包括样品垫片、检测膜、吸水垫片和支撑片,所述检测膜上设有测试带和质控带,所述测试带或质控带由蛋白或核糖核酸制成,所述样品垫片和检测膜之间设有偶合物垫片,所述样品垫片与偶合物垫片之间设有第一层玻璃纤维垫片,所述偶合物垫片与检测膜之间设有第二层玻璃纤维垫片,所述第一层玻璃纤维垫片或样品垫片上包被有阻断试剂,所述样品垫片、偶合物垫片、第二层玻璃纤维垫片和检测膜依次呈搭接的状态,所述吸水垫片设置于检测膜上,并与检测膜保持水平状态。
作为本发明的进一步改进,所述样品垫片、偶合物垫片、第一层玻璃纤维垫片或第二层玻璃纤维垫片由玻璃纤维或棉纤维制成。
本发明还提供了一种试剂盒的检测方法,包括下列步骤:
步骤一,采集样品;
步骤二,过滤处理:取待测样品滴入样品垫片上,样品垫片过滤样品中颗粒杂质或细胞,过滤后样品通过第一层玻璃纤维垫片,第一层玻璃纤维垫片上包被有阻断试剂,样品与阻断试剂反应,将样品中非特异性结合蛋白中和,降低假阳性,样品中的待测蛋白再与偶合物垫片中的偶合物结合反应形成免疫聚合体,所述免疫聚合体与未结合的偶合物通过第二层玻璃纤维垫片进一步过滤,所述未结合的偶合物为内控偶合物,使得聚合体大小均匀,减少试剂盒整体变动系数,延长反应时间;
步骤三,反应处理:免疫聚合体和内控偶合物流入检测膜,同时与测试带上的物质免疫反应并结合,待检测蛋白聚合体固定于测试带位置,内控偶合物继续流入质控带,同时与质控带上的物质反应并结合,内控偶合物停留于质控带内,多余液体流入吸水垫片内;
步骤四,捕获信息:测试带和质控带上的偶合物带有光学信号,所述信号通过检测仪器捕获并按设定反应曲线进行定量计算;
步骤五,分析判断:得出检测蛋白的浓度。
与现有技术相比,本发明具有以下优点。
(1)样品垫过滤了样品中的大颗粒杂质和细胞,第一层玻璃纤维垫片或样品垫片上包被有阻断试剂,样品与第一层玻璃纤维垫片上的阻断试剂反应,在第一层玻璃纤维垫片中先中和并过滤非特异性结合蛋白,再与偶合物结合反应,从而有效的降低了假阳性,便于提供更精确的检测结果。
(2)所述样本、免疫聚合体、内控偶合物通过第二层玻璃纤维垫片进一步过滤,使聚合体颗粒更加的均匀,减少了测试盒的整体变异系数,使偶合物与待检测蛋白在检测膜前的反应充分,从而提高检测的灵敏度和精确度,适用于定量诊断的质量标准。
(3)样品垫片和检测膜之间增加二层玻璃纤维垫片过滤点,通过上述结构改进,达到 pg/ml级的检测水平,在混和检测膜的情况下,变动系数在接近低端检测数值时,变动系数(CV)小于15%。
附图说明
图1为本发明试剂盒中单个试纸条的剖面图。
1-样品垫片,2-检测膜,3-吸水垫片,4-支撑片,5-偶合物垫片,6-1 第一层玻璃纤维垫片,6-2 第二层玻璃纤维垫片,7-测试带,8-质控带。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。
实施例一。
一种免疫层析试剂盒,它包括至少一个试剂条,所述试剂条包括样品垫片1、检测膜2、吸水垫片3和支撑片4,所述检测膜2上设有测试带7和质控带8,所述测试带7或质控带8由蛋白或核糖核酸制成,所述样品垫片1和检测膜2之间设有偶合物垫片5,所述偶合物垫片5与检测膜2之间设有第二层玻璃纤维垫片6-2,所述样品垫片1、偶合物垫片5、第二层玻璃纤维垫片6-2和检测膜2依次呈搭接的状态,样品垫片1上包被有阻断试剂,所述吸水垫片3设置于检测膜2上,并与检测膜2保持水平状态。
所述样品垫片1、偶合物垫片5和第二层玻璃纤维垫片6-2由玻璃纤维或棉纤维制成。
本发明试剂盒的检测方法为:
1、采集样品;
2、过滤处理:取待测样品60-100μl滴入样品垫片1上,样品垫片1上包被有阻断试剂,样品垫片1过滤样品中颗粒杂质和细胞并阻断样品中的非特异性结合蛋白,过滤后,样品中的待测蛋白再与偶合物垫片5中的偶合物结合反应形成免疫聚合体,所述免疫聚合体与未结合的偶合物通过第二层玻璃纤维垫片6-2进一步过滤,所述未结合的偶合物为内控偶合物,使得聚合体颗粒均匀,减少试剂盒整体变异系数,免疫反应充分;
3、反应处理:免疫聚合体和内控偶合物流入检测膜2,同时与测试带7上的物质免疫反应并结合,待检测蛋白聚合体固定于测试带7位置,内控偶合物继续流入质控带8,同时与质控带8上的物质反应并结合,内控偶合物停留于质控带8内,多余液体流入吸水垫片3内;4、捕获信息:测试带7和质控带8上的偶合物带有光学信号,所述信号通过检测仪器捕获并按设定反应曲线进行定量计算;
5、分析判断:计算检测蛋白的浓度。
实施例二。
如图1所示,一种免疫层析试剂盒,它包括至少一个试剂条,所述试剂条包括样品垫片1、检测膜2、吸水垫片3和支撑片4,所述检测膜2上设有测试带7和质控带8,所述测试带7或质控带8由蛋白或核糖核酸制成,所述样品垫片1和检测膜2之间设有偶合物垫片5,所述样品垫片1与偶合物垫片5之间设有第一层玻璃纤维垫片6-1,所述偶合物垫片5与检测膜2之间设有第二层玻璃纤维垫片6-2,所述第一层玻璃纤维垫片6-1上包被有阻断试剂,所述样品垫片1、偶合物垫片5、第二层玻璃纤维垫片6-2和检测膜2依次呈搭接的状态,所述吸水垫片3设置于检测膜2上,并与检测膜2保持水平状态。
所述样品垫片1、偶合物垫片5、第一层玻璃纤维垫片6-1和第二层玻璃纤维垫片6-2由玻璃纤维或棉纤维制成。
本发明试剂盒的检测方法为:
1、采集样品;
2、过滤处理:取待测样品60-100l滴入样品垫片1上,样品垫片1过滤样品中颗粒杂质和细胞,过滤后样品通过第一层玻璃纤维垫片6-1,第一层玻璃纤维垫片6-1上包被有免疫阻断试剂,样品与阻断试剂反应,将样品中非特异性结合蛋白中和,降低假阳性,样品中的待测蛋白再与偶合物垫片5中的偶合物结合反应形成免疫聚合体,所述免疫聚合体与未结合的偶合物通过第二层玻璃纤维垫片6-2进一步过滤,所述未结合的偶合物为内控偶合物,使得免疫聚合体颗粒均匀,减少试剂盒整体变异系数,免疫反应;
3、反应处理:免疫聚合体和内控偶合物流入检测膜2,同时与测试带7上的物质反应并结合,待检测蛋白免疫聚合体固定于测试带7位置,内控偶合物继续流入质控带8,同时与质控带8上的物质反应并结合,内控偶合物停留于质控带8内,多余液体流入吸水垫片3内;
4、捕获信息:测试带7和质控带8上的偶合物带有光学信号,所述信号通过检测仪器捕获并按设定反应曲线进行定量计算;
5、分析判断:计算检测蛋白的浓度;
6、结果评价:使用此试纸条检测,通过实验观察,与现有技术相比数据,检测的灵敏度提高,检测结果见表1:
表1:
标准品 | 现有技术试剂条 | 本试剂条 |
0pg/ml-1 | 0.009 | 0.007 |
0pg/ml-2 | 0.010 | 0.006 |
0pg/ml-3 | 0.008 | 0.011 |
0pg/ml-4 | 0.007 | 0.010 |
0pg/ml-5 | 0.008 | 0.008 |
0pg/ml-6 | 0.012 | 0.010 |
平均值 | 0.009 | 0.009 |
偏差 | 0.002 | 0.002 |
变动系数 | 16.9% | 18.9% |
125pg/ml-1 | 0.064 | 0.166 |
125pg/ml-2 | 0.058 | 0.171 |
125pg/ml-3 | 0.044 | 0.177 |
125pg/ml-4 | 0.068 | 0.151 |
125pg/ml-5 | 0.053 | 0.139 |
125pg/ml-6 | 0.064 | 0.159 |
平均值 | 0.059 | 0.160 |
偏差 | 0.008 | 0.013 |
变动系数 | 13.8% | 7.8% |
平均值比例 | 6.5 | 18.2 |
表2:
临床样品 | 现有技术试剂条 | 本试剂条 |
样品1 | 0.218 | 0.678 |
样品2 | 0.320 | 0.554 |
样品3 | 0.247 | 0.625 |
样品4 | 0.214 | 0.591 |
样品5 | 0.228 | 0.608 |
平均值 | 0.245 | 0.611 |
偏差 | 0.039 | 0.041 |
变动系数 | 15.9% | 6.7% |
样品1 | 0.609 | 1.153 |
样品2 | 0.648 | 1.301 |
样品3 | 0.549 | 1.301 |
样品4 | 0.493 | 1.333 |
样品5 | 0.481 | 1.156 |
平均值 | 0.556 | 1.249 |
偏差 | 0.065 | 0.078 |
变动系数 | 11.7% | 6.2% |
表2显示本发明试剂条与现有大型仪器试剂条相比,偏差数值高,从而表明本发明试剂条的精确度相对现有技术试剂条更高。
上述内容为本发明的示例及说明,但不意味着本发明可取得的优点受此限制,凡是本发明实践过程中可能对结构的简单变换、和/或一些实施方式中实现的优点的其中一个或多个均在本申请的保护范围内。
Claims (6)
1.一种免疫层析试剂盒,它包括至少一个试剂条,所述试剂条主要包括样品垫片(1)、检测膜(2)、吸水垫片(3)和支撑片(4),所述检测膜(2)上设有测试带(7)和质控带(8),其特征在于:所述样品垫片(1)和检测膜(2)之间设有偶合物垫片(5),所述偶合物垫片(5)与检测膜(2)之间设有第二层玻璃纤维垫片(6-2),所述样品垫片(1)、偶合物垫片(5)、第二层玻璃纤维垫片(6-2)和检测膜(2)依次呈搭接的状态。
2.根据权利要求1所述的免疫层析试剂盒,其特征在于:所述样品垫片(1)与偶合物垫片(5)之间设有第一层玻璃纤维垫片(6-1),所述第一层玻璃纤维垫片(6-1)或样品垫片(1)上包被有阻断试剂。
3.根据权利要求1所述的免疫层析试剂盒,其特征在于:所述吸水垫片(3)设置于检测膜(2)上,并与检测膜(2)保持水平状态。
4.根据权利要求1所述的免疫层析试剂盒,其特征在于:所述样品垫片(1)、偶合物垫片(5)、第一层玻璃纤维垫片(6-1)或第二层玻璃纤维垫片(6-2)由玻璃纤维或棉纤维制成。
5.根据权利要求1所述的免疫层析试剂盒,其特征在于:所述测试带(7)或质控带(8)由蛋白或核糖核酸制成。
6.一种根据权利要求1所述试剂盒的检测方法,其特征在于:包括下列步骤:
步骤一,采集样品;
步骤二,过滤处理:取待测样品滴入样品垫片(1)上,样品垫片(1)过滤样品中颗粒杂质或细胞,过滤后样品通过第一层玻璃纤维垫片(6-1),第一层玻璃纤维垫片(6-1)上包被有阻断试剂,样品与阻断试剂反应,将样品中非特异性结合蛋白中和,降低假阳性,样品中的待测蛋白再与偶合物垫片(5)中的偶合物结合反应形成免疫聚合体,所述免疫聚合体与未结合的偶合物通过第二层玻璃纤维垫片(6-2)进一步过滤,所述未结合的偶合物为内控偶合物,使得聚合体大小均匀,减少试剂盒整体变动系数,延长反应时间;
步骤三,反应处理:免疫聚合体和内控偶合物流入检测膜(2),同时与预先包被在检测膜测试带(7)上的物质特异性免疫结合,由此待检测蛋白免疫聚合体被固定于测试带(7)位置,内控偶合物继续流入质控带(8),同时与质控带(8)上的物质反应并结合,内控偶合物停留于质控带(8)内,多余液体流入吸水垫片(3)内;
步骤四,捕获信息:测试带(7)和质控带(8)上的偶合物带有光学信号,所述信号通过检测仪器捕获并按设定反应曲线进行定量计算;
步骤五,分析判断:得出检测蛋白的浓度。
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GR01 | Patent grant | ||
C56 | Change in the name or address of the patentee | ||
CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 225300 Jiangsu city of Taizhou province China pharmaceutical Road East, Xinyang City Road on the north side (G30 building) Patentee after: Silgen biotech Jiangsu Co. Ltd. Address before: 225300 Jiangsu city of Taizhou province China pharmaceutical Road East, Xinyang City Road on the north side (G30 building) Patentee before: Silgen biotech (Jiangsu) Co., Ltd. |