CN203786123U - 一种快速检测Aspirin药效的胶体金试纸 - Google Patents
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Abstract
本实用新型公开了一种快速检测Aspirin药效的胶体金试纸，所述胶体金试纸包括支撑垫片5，位于所述支撑垫片上的硝酸纤维素膜1，所述硝酸纤维素膜的一端连接吸水垫4，另一端连接偶合物垫片2，所述偶合物垫片连接样本垫片3，所述样本垫片另一端部的下方设有第一固定部件7，上方设有第二固定部件6，其特征在于，所述硝酸纤维素膜1中间部位检测线8包被有单克隆鼠抗11dhTxB2抗体，检测线两边分别设有控制线9，所述偶合物垫片2上涂布有金标记的BSA-11dhTxB2以及控制线偶合物。
Description
技术领域
本实用新型属于临床医学诊断领域，具体涉及一种用于检测Aspirin的胶体金试纸。
背景技术
Aspirin（阿司匹林）是广泛使用的防止心血管疾病的辅助处方，因为它可以抑制血栓素A2(TxA2)的生成，TxA2可以有效收缩血管，促进血小板凝聚。虽然阿司匹林每年在全世界被上百万人消耗，但最近的研究显示并非所有的个体对于阿司匹林的反应都是一致的。研究显示，冠心病以及相关的患者使用血液基础血小板凝集方式和尿液11dhTxB2测定时，其胆固醇，甘油三酯和C反应蛋白水平对于阿司匹林的反应会降低。与无症状的患者相比，冠心病患者服用阿司匹林后显示出显著较高的尿液11dhTxB2水平。
由于对乙酰水杨酸(ASA)的反应有所差异，需要一种可靠的方式分析个体对阿司匹林的特异反应，帮助确定是否需要改变治疗措施。现有测定阿司匹林药效的两个基本方式：血小板聚集法和尿液11dhTxB2测定法。血小板聚集法有很多形式，一般包括患者血液样本的搜集，半体内凝集的测定。虽然这些检测相对较快，但它们对于变量很灵敏，这些变量又往往与阿司匹林药效无关，如温韦伯氏因子水平，因子VIII，以及红细胞比容管，事实是血小板的活化仅需调节温度即可。另外，其他的血小板聚集方式需要特殊的设备，限制了医师在一个检测程序中运行大量样本的能力。由于这些原因，直接测定TxA2的代谢物对于确定个体对阿司匹林的反应更为适宜。不幸的是，TxA2在血液1中的寿命很短，这样分析TxA2就非常困难，但是它会在酶的作用下分解成很多代谢物包括11-去氢血栓素B2(11dhTxB2)和11-去氢-2,3-dinor血栓素B2(11dh2,3DTxB2)，它们被肾脏吸收，排泄在尿液里。11dhTxB2在尿液中非常稳定，是TxB2在尿液中最丰富的代谢物，它有相对较长的循环时间45分钟。而且与血液中测定TxA2相比，尿液11dhTxB2水平对于体内血栓素代谢提供了更加精确的指示。免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique)是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸（HAuCl4）在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。
目前，检测11dhTxB2(11-去氢血栓素)的方法目前主要是酶联免疫技术（ELISA），ELISA技术存在以下缺点：检测设备要求高，成本高；干扰因素较多，重复性不好；检测时间长。因此酶联免疫技术检测11dhTxB2不适合临床快速诊断。鉴于目前尚无快速的检测方法，本实用新型的目的是提供一种可用于快速检测11dhTxB2的胶体金试纸以及一种可用于快速检测11dhTxB2的胶体金试纸盒，所述胶体金试纸和胶体金试纸盒具有方便快捷、操作简单、结果准确等优点。
实用新型内容
本实用新型的一个目的是提供一种快速检测Aspirin药效的胶体金试纸，本实用新型所述快速检测Aspirin药效的胶体金试纸具有方便快捷、操作简单、结果准确等优点，适于临床快速诊断。
本实用新型的技术方案是：
一种快速检测Aspirin药效的胶体金试纸，包括支撑垫片5，位于所述支撑垫片上的硝酸纤维素膜1，所述硝酸纤维素膜的一端连接吸水垫4，另一端连接偶合物垫片2，所述偶合物垫片连接样本垫片3，所述样本垫片另一端部的下方设有第一固定部件7，上方设有第二固定部件6，其特征在于，所述硝酸纤维素膜1中间部位检测线8包被有单克隆鼠抗11dhTxB2抗体，检测线两边分别设有控制线9，所述偶合物垫片2上涂布有金标记的BSA-11dhTxB2以及控制线偶合物。
优选地，所述控制线9包被有抗DNP抗体，所述控制线偶合物为DNP-BSA标记的胶体金。
其中所述BSA是指牛血清白蛋白。
优选地，所述第一固定部件7为双面胶，第二固定部件6为单面胶。
优选地，所述两条控制线9与检测线8为平行设置。
本实用新型的另一个目的是提供了一种快速检测Aspirin药效的胶体金试纸盒，在本实用新型所述的检测Aspirin药效的胶体金试纸的基础上还包括一外壳10。
所述外壳优选塑料外壳。
所述外壳包裹所述试纸，露出样本垫片3、硝酸纤维素膜1上的检测线8和两条控制线9、以及吸水垫4。
本实用新型所述的试纸盒具有方便携带和贮存的优点。
本实用新型所述的快速检测Aspirin药效的胶体金试纸或试纸盒的工作原理是：采用双向侧流免疫反应原理，通过竞争法制备而成。检验时样本中的11dhTxB2与偶合垫上的BSA-11dhTxB2胶体金偶合物同时在硝基纤维素膜上层析流动，当样本中的11dhTxB2与BSA-11dhTxB2胶体金偶合物层析至硝基纤维素膜上的检测区（11dhTxB2检测线）时，与预先包被在硝基纤维素膜上的抗11dhTxB2抗体发生反应形成免疫复合物从而被固定在硝基纤维素膜的检测线上。样本中的11dhTxB2越多，检测线上被固定的胶体金免疫复合物越少，条带上的光密度值就越低。同时，在检测过程中，控制线偶合物（即DNP-BSA标记的胶体金），也会随样本在硝基纤维素膜上层析，当层析至硝基纤维素膜的控制线时，DNP-BSA胶体金会与预先包被在硝基纤维素膜上的抗DNP抗体发生反应从而被固定在对照区（控制线）上。由于胶体金为红色，因而固定在硝基纤维素膜控制线上的抗DNP中的DNP-BSA胶体金免疫复合物将显示红色。样本中11dhTxB2浓度与检测线光密度值成反比关系。
当反应结束后，利用多功能免疫检测仪(瑞莱生物工程（深圳）有限公司）将控制线和检测线的光密度进行分析，并将所分析得到的结果进行运算，从而得到相对光密度值（RI）。然后检测仪根据已预先设置在检测仪内的标准曲线对11dhTxB2的浓度进行计算并显示结果，以ng/mL为单位表示。
附图说明
图1是本实用新型所述快速检测Aspirin药效的胶体金试纸的一种优选实施方式的结构示意图。
其中，1:硝酸纤维素膜，2：偶合物垫片，3:样本垫片，4:吸水垫，5:支撑垫片，6:单面胶，7:双面胶，8:检测线，9:控制线。
图2是本实用新型所述快速检测Aspirin药效的胶体金试纸盒的一种优选实施方式的示图。
其中，3:样本垫片，8:检测线，9:控制线，4:吸水垫，10：外壳。
具体实施方式
以下结合附图对本实用新型所述快速检测Aspirin药效的胶体金试纸或试纸盒进行详细说明，不能理解为是对本实用新型的限制。以下实施例中所使用的材料和试剂除特别说明外，均为普通市售。
【实施例1】制备快速检测Aspirin药效的胶体金试纸
如图1所示的胶体金试纸结构，包括支撑垫片5，位于所述支撑垫片上的硝酸纤维素膜1，所述硝酸纤维素膜的一端上方层叠连接吸水垫4，另一端上方层叠连接偶合物垫片2，所述偶合物垫片远离硝酸纤维素膜1的一端上方层叠连接样本垫片3，所述样本垫片另一端部的下方粘接双面胶7，上方粘接单面胶6，其特征在于，所述硝酸纤维素膜1中间部位检测线8包被有单克隆鼠抗11dhTxB2抗体，检测线两边分别设有控制线9，所述偶合物垫片2上涂布有金标记的BSA-11dhTxB2以及控制线偶合物。
所述控制线9包被有抗DNP抗体，所述控制线偶合物为DNP-BSA标记的胶体金。
其中，硝酸纤维素膜1在胶体金试纸中用于固定包被抗体，同时也是免疫反应的发生处；检测线8是将单克隆鼠抗11dhTxB2抗体使用1*PBS、甲醇等缓冲液稀释到0.5mg/ml的浓度，取1ul/cm划线于所述硝酸纤维素膜1上，干燥，即得；控制线9是将抗DNP抗体使用1*PBS、甲醇等缓冲液稀释到0.5mg/ml的浓度，取1ul/cm划线于所述硝酸纤维素膜1上，干燥，即得。
其中，所述偶合物垫片2的原材料为玻璃纤维滤膜，将用于制备偶合物垫片的玻璃纤维滤膜放入预封闭缓冲液（包含0.1-1%的酪蛋白，0.5-5%的牛血清白蛋白、0.005-0.5%的硼酸、0.01-0.2%的PEG）中浸泡5分钟后取出，干燥后，用Biodot包膜仪器将金标记的BSA-11dhTxB2以及控制线偶合物涂布在偶合物垫片2上，涂布量是1ul/mm，干燥，即得。优选地，所述偶合物垫片2的预封闭缓冲液包含0.8%的酪蛋白，4%的牛血清白蛋白，0.007%的硼酸，0.1%的PEG。
其中，所述样本垫片3可对液态样品起到初步过滤作用。将样本垫片用141封闭液（包含：0.1-1%的Tris，0.1-1%的酪蛋白）浸泡5分钟后，干燥，即得。优选地，所述141封闭液包含：0.3%的Tris，0.8%的酪蛋白，将上述各组成部件按图1所示结构粘贴在支撑垫片5上，获得快速检测Aspirin药效的胶体金试纸。
【实施例2】用本实用新型所述胶体金试纸快速检测Aspirin药效
取本实用新型优选的一种快速检测Aspirin药效的胶体金试纸，如图1所示，所述胶体金试纸包括支撑垫片5，位于所述支撑垫片上的硝酸纤维素膜1，所述硝酸纤维素膜的一端上方层叠连接吸水垫4，另一端上方层叠连接偶合物垫片2，所述偶合物垫片远离硝酸纤维素膜1的一端上方层叠连接样本垫片3，所述样本垫片另一端部的下方粘接双面胶7，上方粘接单面胶6，其特征在于，所述硝酸纤维素膜1中间部位检测线8包被有单克隆鼠抗11dhTxB2抗体，检测线两边分别设有控制线9，所述偶合物垫片2上涂布有金标记的BSA-11dhTxB2以及控制线偶合物。优选地，所述控制线9包被有抗DNP抗体，所述控制线偶合物为DNP-BSA标记的胶体金。按以下步骤进行检测：1）抽取的病人尿液样本，如低温保存样本需恢复至室温。2）将待测样品加入样本垫片3上，反应。3）判读，将所述胶体金试纸置于多功能免疫检测仪,SSJ-2或MINI(瑞莱生物工程（深圳）有限公司）中判定结果。
【实施例3】用本实用新型所述胶体金试纸盒快速检测Aspirin药效
取本实用新型优选的一种快速检测Aspirin药效的胶体金试纸盒，如图1和图2所示，所述胶体金试纸包括支撑垫片5，位于所述支撑垫片上的硝酸纤维素膜1，所述硝酸纤维素膜的一端连接吸水垫4，另一端连接偶合物垫片2，所述偶合物垫片连接样本垫片3，所述样本垫片另一端部的下方粘接双面胶7，上方粘接单面胶6，其特征在于，所述硝酸纤维素膜1中间部位检测线8包被有单克隆鼠抗11dhTxB2抗体，检测线两边分别设有控制线9，所述偶合物垫片2上涂布有金标记的BSA-11dhTxB2以及控制线偶合物。优选地，所述控制线9包被有抗DNP抗体，所述控制线偶合物为DNP-BSA标记的胶体金。所述胶体金试纸还包括一外壳10，所述外壳包裹所述试纸，露出样本垫片3、硝酸纤维素膜1上的检测线8和两条控制线9、以及吸水垫4。按以下步骤进行检测：1）采集的病人尿液样本，如低温保存样本需恢复至室温。2）将待测样品加入样本垫片3上，反应。3）判读，将所述胶体金试纸置于多功能免疫检测仪,SSJ-2或MINI(瑞莱生物工程（深圳）有限公司）中判定结果。
Claims (5)
1.一种快速检测Aspirin药效的胶体金试纸，包括支撑垫片（5），位于所述支撑垫片上的硝酸纤维素膜（1），所述硝酸纤维素膜的一端连接吸水垫（4），另一端连接偶合物垫片（2），所述偶合物垫片连接样本垫片（3），所述样本垫片另一端部的下方设有第一固定部件（7），上方设有第二固定部件（6），其特征在于，所述硝酸纤维素膜（1）中间部位检测线（8）包被有单克隆鼠抗11dhTxB2抗体，检测线两边分别设有控制线（9），所述偶合物垫片（2）上涂布有金标记的BSA-11dhTxB2以及控制线偶合物。
2.如权利要求1所述的胶体金试纸，其特征在于，所述控制线（9）包被有抗DNP抗体，所述控制线偶合物为DNP-BSA标记的胶体金。
3.如权利要求1所述的胶体金试纸，其特征在于，所述第一固定部件（7）为双面胶，第二固定部件（6）为单面胶。
4.如权利要求1-3中任一项所述的胶体金试纸，其特征在于，所述胶体金试纸外还包括一外壳（10），所述外壳包裹所述胶体金试纸外，露出样本垫片（3）、硝酸纤维素膜（1）上的检测线（8）和两条控制线（9）、以及吸水垫（4）。
5.如权利要求4所述的胶体金试纸，其特征在于，所述两条控制线（9）与检测线（8）为平行设置。
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| CN105628923A (zh) * | 2015-12-24 | 2016-06-01 | 杭州市农业科学研究院 | 一种半定量免疫胶体金试纸条及其应用 |
| CN112424604A (zh) * | 2018-06-25 | 2021-02-26 | 瓦斯库技术公司 | 用于检测11-脱氢-血栓烷b2的方法和试剂盒 |
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- 2014-03-31 CN CN201420151273.1U patent/CN203786123U/zh not_active Expired - Lifetime
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