CN102507932A - 一种IgM抗体检测试纸条 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种IgM抗体检测试纸条，具有IgM抗体检测线，在IgM抗体检测线之前包被能够吸附人IgG和类风湿因子的物质。较佳地，物质是抗人IgG抗体、Protein G和人IgG适配体。IgM抗体检测线和物质均位于硝酸纤维素膜上；或者，物质位于IgM抗体检测线之前的吸附垫上，该吸附垫可以位于硝酸纤维素膜与结合垫之间，也可位于结合垫与样品垫之间。本发明的IgM抗体检测试纸条，可以简便快速地检测IgM抗体，且检测准确性显著提高，为下一步准确治疗提供有力依据，适于大规模推广应用。

Description

一种IgM抗体检测试纸条
技术领域
本发明涉及临床诊断技术领域，具体涉及抗体检测试纸条技术领域，特别涉及一种IgM抗体检测试纸条。
背景技术
免疫球蛋白(Imunoglobulin，Ig)是一种具有抗体活性或化学结构上与抗体相似的球蛋白；是一类重要的免疫效应分子，多数为丙种球蛋白，由两条相同的轻链和两条相同的重链所组成，在体内以两种形式存在：可溶性免疫球蛋白存在于体液中，具抗体活性，参与体液免疫；膜型免疫球蛋白是B细胞抗原受体。
免疫球蛋白由高等动物免疫系统淋巴细胞产生，经抗原的诱导可以转化为抗体。因结构不同可分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE 5种。
人体血清免疫球蛋白的主要成分是IgG，它占总的免疫球蛋白的70-75％，分子量约15万，含糖2～3％。尽管免疫球蛋白千变万化，但都有类似的结构。IgM是具有μ链的免疫球蛋白类别；分泌型IgM通常为五聚体，是免疫应答产生的早期抗体；膜型IgM组成B细胞受体。
目前的临床免疫诊断主要是基于IgG，如各种病原微生物检测、肿瘤检测、自身免疫疾病等。而IgM抗体检测相对于IgG抗体检测，具备以下三个优势：
第一，机体感染病原微生物后，体液免疫反应首先产生以IgM为主的免疫球蛋白，随后IgM抗体滴度下降，IgG效价迅速上升。检测抗该病原微生物的特异性IgM抗体，可作为早期感染的诊断指标。
第二，在新生儿感染诊断方面，IgM抗体检测也具有优势。因为当母体感染了病原微生物后，针对该病原微生物的特异性IgG抗体可通过胎盘进入到胎儿的血液，建立被动的免疫，而IgM抗体由于分子量巨大，无法通过胎盘传递给新生儿；因此在诊断新生儿是否感染该病原体时，检测IgG抗体价值不大，而IgM抗体诊断具备非常大的意义。
第三，IgM抗体能够反映机体感染病原微生物的治疗效果。因为IgG抗体一旦产生将在机体内存在很长一段时间，而IgM抗体只在感染的初期产生并逐渐消失；再度感染又将重新产生；从IgM抗体的水平可以判断治疗情况。
目前临床上已有多种检测IgM的产品，如检测抗弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、疱疹病毒IgM抗体的试剂盒。
IgM抗体检测一般采用捕获法和间接法；这两种方法在不同程度上受到特异性IgG和类风湿因子(RF)的干扰，造成假阳性或者假阴性。已有IgM抗体检测试剂盒是通过将IgG/IgM分离来提高检测的准确性；IgG/IgM分离主要通过层析柱来完成的。但是这种分离方式耗费时间，操作繁琐，无法实现自动化，临床上应用非常不便利。
为了解决存在的上述问题，需要提供一种IgM抗体检测产品，其可以简便快速地检测IgM抗体，且检测准确性显著提高，为下一步准确治疗提供有力依据。
发明内容
本发明的目的是克服了上述现有技术中的缺点，提供一种IgM抗体检测试纸条，该IgM抗体检测试纸条，可以简便快速地检测IgM抗体，且检测准确性显著提高，为下一步准确治疗提供有力依据，适于大规模推广应用。
为了实现上述目的，本发明的IgM抗体检测试纸条，具有IgM抗体检测线，其特点是，在所述IgM抗体检测线之前包被能够吸附人IgG和类风湿因子的物质。
较佳地，所述物质是抗人IgG抗体、Protein G、聚合IgG和人IgG适配体。
较佳地，所述物质和所述IgM抗体检测线均位于微孔膜上。
更佳地，所述微孔膜包括硝酸纤维素膜、尼龙膜或乙酸纤维素膜。
较佳地，所述IgM抗体检测线之前具有吸附垫，所述物质位于所述吸附垫上。
较佳地，所述IgM抗体检测线之前还具有结合垫，所述吸附垫位于所述IgM抗体检测线与所述结合垫之间。
较佳地，所述IgM抗体检测线之前还具有结合垫和样品垫，所述样品垫位于所述结合垫之前，所述吸附垫位于所述样品垫与所述结合垫之间。
更佳地，所述IgM抗体检测试纸条通过所述结合垫上的标记物进行显色或者发光进行显示检测结果。
更进一步地，所述标记物采用胶体金、胶体硒、量子点、乳胶颗粒或荧光素进行标记。
较佳地，所述物质形成一条或数条吸附线。
较佳地，所述IgM抗体检测线包被抗人IgM的抗体或者与人IgM结合的抗原。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明的IgM抗体检测试纸条，具有IgM抗体检测线，在所述IgM抗体检测线之前包被能够吸附人IgG和类风湿因子的物质，从而能够去除影响检测结果的人IgG和RF(类风湿因子)，提高了检测的准确性。
(2)本发明的IgM抗体检测试纸条去除影响检测结果的人IgG和RF的方法，不同于传统的在检测之前的前处理，取样后只需直接检测，检测和去除人IgG、RF的反应同步进行，操作简便，去除效果较佳。
因此，本发明可以在IgM抗体检测的同时，同步实现人IgG、RF的去除，从而显著提高IgM抗体检测的准确度；操作简便，方法简单，适于大规模推广应用。
附图说明
图1是本发明的一具体实施例的主视示意图。其中1是样品垫，2是箭头(指示浸入样品的最高位置)；3是结合垫(含被标记抗体/抗原)；4是吸附线(含有能够结合人IgG和RF的物质)；5是IgM抗体检测线(包被抗人IgM的抗体，或者与人IgM结合的抗原)；6是质控线；7是硝酸纤维素膜；8是吸水纸。
图2是本发明的另一具体实施例的主视示意图。其中1是样品垫，4’是吸附垫(位于样品垫与结合垫之间；含有能够结合人IgG和RF的物质)；2是箭头(指示浸入样品的最高位置)；3是结合垫(含被标记抗体/抗原)；5是IgM抗体检测线(包被抗人IgM的抗体，或者与人IgM结合的抗原)；6是质控线；7是硝酸纤维素膜；8是吸水纸。
图3是本发明的另一具体实施例的主视示意图。其中1是样品垫，4’是吸附垫(位于硝酸纤维素膜与结合垫之间；含有能够结合人IgG和RF的物质)；2是箭头(指示浸入样品的最高位置)；3是结合垫(含被标记抗体/抗原)；5是IgM抗体检测线(包被抗人IgM的抗体，或者与人IgM结合的抗原)；6是质控线；7是硝酸纤维素膜；8是吸水纸。
具体实施方式
为了能够更清楚地理解本发明的技术内容，特举以下实施例详细说明。其中图1显示的是本发明的一具体实施例，图2显示的是本发明的另一具体实施例，图3显示的是本发明的又一具体实施例。其中相同的部件采用相同的附图标记。
请参见图1-3所示，本发明的IgM抗体检测试纸条上含有能够吸附人IgG和RF的物质，位于IgM抗体检测线之前。请参见图1所示，在本发明的一具体实施例中，所述的能够吸附人IgG和RF的物质包被在硝酸纤维素膜上，能够简便地去除样本中的人IgG和RF。请参见图2所示，在本发明的一具体实施例中，所述的能够吸附人IgG和RF的物质包被在吸附垫上，该吸附垫位于结合垫与样品垫之间，能够简便地去除样本中的人IgG和RF。请参见图3所示，在本发明的一具体实施例中，所述的能够吸附人IgG和RF的物质包被在吸附垫上，该吸附垫位于结合垫与硝酸纤维素膜之间，能够简便地去除样本中的人IgG和RF。
总所周知，免疫层析检测试纸条一般自上而下依次由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组成；所述结合垫上包被有免疫标记抗体/抗原，硝酸纤维素膜上包被有抗体/抗体。检测时，免疫标记抗体/抗原与样品中的靶标物质、硝酸纤维素膜上的抗体/抗原形成夹心结构，显示检测结果。
本发明的IgM抗体检测试纸条的制备过程简述如下，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring Harbor LaboratoryPress，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1吸附剂包被在硝酸纤维素膜上
一、胶体金标记
用于梅毒诊断的抗原(梅毒螺旋体特异性抗原(TP47+15，TP17))胶体金标记方法如下：用碳酸钾溶液调节50ml胶体金溶液pH值至7.7；在搅拌的条件下，逐滴缓慢将0.65ml 1mg/ml待标记梅毒螺旋体特异性抗原加入上述胶体金溶液中，混匀，室温静置30min；将12.5ml封闭液缓慢加入上述胶体金溶液中，混匀，室温静置30min；8000g 4℃离心1h，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用25ml洗涤液溶解，6000g 4℃离心1h，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用1.2ml洗涤液溶解，转入1.5ml离心管中，4500g 4℃离心1h，去上清；所有沉淀用1ml胶体金抗体重悬液重悬，4℃保存。
二、胶体金垫(结合垫)的喷点
用于梅毒诊断的抗原(梅毒螺旋体特异性抗原)胶体金垫的喷点方法如下：胶体金抗原溶液稀释：用胶体金抗原重悬液将上述制备的胶体金抗原结合物稀释4倍；设定点膜仪，开启点膜仪的电源，设定喷点程序，喷点量为8ul/cm；1号管道为喷点通道；点膜仪初始化：将1号管道置于胶体金抗原重悬溶液中，选择初始化程序，初始化6个循环；喷点：将金标垫按固定位置平放在点膜仪上，按控制面板上“GO”键开始喷点，点完后取下，检查喷点好的金标垫，喷点的胶体金抗原条带均匀、连续和贯通整个金标垫的直线为合格喷点品，两条直线中出现断点为不合格喷点品；每放一片金标垫，按一次控制面板上的“GO”键为喷点一次(一片)；喷点结束，将喷点的金标垫置于室温中自然干燥1小时，膜上应看不到喷点痕迹。
三、硝酸纤维素膜的制备
用于梅毒诊断的硝酸纤维素膜划线方法如下：
取鼠抗人IgG抗体500ug，加到5ml刻度离心管中，抗体稀释液至1ml，容器标记A标志；取梅毒螺旋体特异性抗原(TP47+15，TP17)500ug，加到5ml刻度离心管中，抗原稀释液至1ml，容器标记T标志。取鼠抗人梅毒螺旋体特异性抗原(TP47+15，TP17)抗体25ul，加到5ml刻度离心管中，抗体稀释液至1ml，容器标记C标志。设定点膜仪，开启点膜仪的电源，设定喷点程序，喷点量为1ul/cm；1号管道为吸附线喷点通道，2号管道为检测线喷点通道，3号管道为质控线喷点通道；点膜仪初始化：将1号管道置于吸附线溶液中，将2号管道置于检测线溶液中，将3号管道置于质控线溶液中，选择初始化程序，初始化6个循环；喷点：将硝酸纤维素膜按固定位置平放在点膜仪上，按控制面板上“GO”键开始喷点，点完后取下，检查喷点好的硝酸纤维素膜，吸附线、检测线和质控线为三条均匀、连续和贯通整个硝酸纤维素膜的直线为合格喷点品，三条直线中出现断点为不合格喷点品；每放一片硝酸纤维素膜，按一次控制面板上的“GO”键为喷点一次(一片)；喷点结束，将喷点的硝酸纤维素膜置于室温中自然干燥1小时，膜上应看不到喷点痕迹。
四、贴膜、切膜
将底板上较宽部分的保护纸除去，沿上面保护纸的下边缘，将划好线的硝酸纤维素膜，以C线在上方的方式贴到底板板上；将胶体金垫贴在T线下方，与NC膜少许接触；将样品垫贴在胶体金垫下方，与胶体金垫少许接触；接着除去上方保护纸，将吸水纸贴在NC膜的上方，与NC膜少许接触；将保护纸及指示带纸逐一贴在组装好的试纸条外面，组装成大卡。
接通切割机电源，设定切膜程序，设定切割宽度为4mm；将大卡合格品平放入切割机平台轨道中，正面朝上，按操作面板上“GO”键，开始切割；每放一片大卡合格品，按操作面板上“GO”键一次，直至切割完所有大卡合格品。
五、试剂盒组装
取铝箔袋和干燥剂；打开热封机，预热；将待装袋的试纸条、1袋干燥剂装入铝箔袋中；按照规定的长度切断装有试纸条和干燥剂的铝箔袋；用热封机封好铝箔袋；贴上标签。
实施例2吸附垫位于样品垫与金标垫之间
一、胶体金标记
同实施例1。
二、胶体金垫(结合垫)的喷点
同实施例1。
三、硝酸纤维素膜的制备
用于梅毒诊断的硝酸纤维素膜划线方法如下：
取梅毒螺旋体特异性抗原(TP47+15，TP17)500ug，加到5ml刻度离心管中，抗原稀释液至1ml，容器标记T标志。取鼠抗人梅毒螺旋体特异性抗原(TP47+15，TP17)抗体25ul，加到5ml刻度离心管中，抗体稀释液至1ml，容器标记C标志。设定点膜仪，开启点膜仪的电源，设定喷点程序，喷点量为1ul/cm；1号管道为检测线喷点通道，2号管道为质控线喷点通道；点膜仪初始化：将1号管道置于检测线溶液中，将2号管道置于质控线溶液中，选择初始化程序，初始化6个循环；喷点：将硝酸纤维素膜按固定位置平放在点膜仪上，按控制面板上“GO”键开始喷点，点完后取下，检查喷点好的硝酸纤维素膜，检测线和质控线为两条均匀、连续和贯通整个硝酸纤维素膜的直线为合格喷点品，两条直线中出现断点为不合格喷点品；每放一片硝酸纤维素膜，按一次控制面板上的“GO”键为喷点一次(一片)；喷点结束，将喷点的硝酸纤维素膜置于室温中自然干燥1小时，膜上应看不到喷点痕迹。
四、吸附垫的制备
取鼠抗人IgG抗体500ug，加到5ml刻度离心管中，抗体稀释液至1ml，容器标记A标志；设定点膜仪，开启点膜仪的电源，设定喷点程序，喷点量为1ul/cm；1号管道为吸附线喷点通道；点膜仪初始化：将1号管道置于吸附线溶液中，选择初始化程序，初始化6个循环；喷点：将硝酸纤维素膜按固定位置平放在点膜仪上，按控制面板上“GO”键开始喷点，点完后取下，检查喷点好的硝酸纤维素膜，吸附线为一条均匀、连续和贯通整个硝酸纤维素膜的直线为合格喷点品，该直线中出现断点为不合格喷点品；每放一片硝酸纤维素膜，按一次控制面板上的“GO”键为喷点一次(一片)；喷点结束，将喷点的硝酸纤维素膜置于室温中自然干燥1小时，膜上应看不到喷点痕迹。
将吸附线上下两侧裁掉，剩余0.5cm的宽度，吸附线位于中间位置；该膜即为吸附垫。
五、贴膜、切膜
将底板上较宽部分的保护纸除去，沿上面保护纸的下边缘，将划好线的硝酸纤维素膜，以C线在上方的方式贴到底板板上；将胶体金垫贴在T线下方，与NC膜少许接触；将吸附垫贴在金标垫下方，与金标垫少许接触；将样品垫贴在吸附垫下方，与吸附垫少许接触；接着除去上方保护纸，将吸水纸贴在NC膜的上方，与NC膜少许接触；将保护纸及指示带纸逐一贴在组装好的试纸条外面，组装成大卡。
接通切割机电源，设定切膜程序，设定切割宽度为4mm；将大卡合格品平放入切割机平台轨道中，正面朝上，按操作面板上“GO”键，开始切割；每放一片大卡合格品，按操作面板上“GO”键一次，直至切割完所有大卡合格品。
六、试剂盒组装
取铝箔袋和干燥剂；打开热封机，预热；将待装袋的试纸条、1袋干燥剂装入铝箔袋中；按照规定的长度切断装有试纸条和干燥剂的铝箔袋；用热封机封好铝箔袋；贴上标签。
实施例3吸附垫位于金标垫与硝酸纤维素膜之间
一、胶体金标记
同实施例1。
二、胶体金垫(结合垫)的喷点
同实施例1。
三、硝酸纤维素膜的制备
用于梅毒诊断的硝酸纤维素膜划线方法如下：
取抗人μ链抗体1mg，加到5ml刻度离心管中，抗体稀释液至1ml，容器标记T标志。取鼠抗人梅毒螺旋体特异性抗原(TP47+15，TP17)抗体25ul，加到5ml刻度离心管中，抗体稀释液至1ml，容器标记C标志。设定点膜仪，开启点膜仪的电源，设定喷点程序，喷点量为1ul/cm；1号管道为检测线喷点通道，2号管道为质控线喷点通道；点膜仪初始化：将1号管道置于检测线溶液中，将2号管道置于质控线溶液中，选择初始化程序，初始化6个循环；喷点：将硝酸纤维素膜按固定位置平放在点膜仪上，按控制面板上“GO”键开始喷点，点完后取下，检查喷点好的硝酸纤维素膜，检测线和质控线为两条均匀、连续和贯通整个硝酸纤维素膜的直线为合格喷点品，两条直线中出现断点为不合格喷点品；每放一片硝酸纤维素膜，按一次控制面板上的“GO”键为喷点一次(一片)；喷点结束，将喷点的硝酸纤维素膜置于室温中自然干燥1小时，膜上应看不到喷点痕迹。
四、吸附垫的制备
取Protein G 1000ug，加到5ml刻度离心管中，抗体稀释液至1ml，容器标记A标志；设定点膜仪，开启点膜仪的电源，设定喷点程序，喷点量为1ul/cm；1号管道为吸附线喷点通道；点膜仪初始化：将1号管道置于吸附线溶液中，选择初始化程序，初始化6个循环；喷点：将硝酸纤维素膜按固定位置平放在点膜仪上，按控制面板上“GO”键开始喷点，点完后取下，检查喷点好的硝酸纤维素膜，吸附线为一条均匀、连续和贯通整个硝酸纤维素膜的直线为合格喷点品，该直线中出现断点为不合格喷点品；每放一片硝酸纤维素膜，按一次控制面板上的“GO”键为喷点一次(一片)；喷点结束，将喷点的硝酸纤维素膜置于室温中自然干燥1小时，膜上应看不到喷点痕迹。
将吸附线上下两侧裁掉，剩余0.5cm的宽度，吸附线位于中间位置；该膜即为吸附垫。
五、贴膜、切膜
将底板上较宽部分的保护纸除去，沿上面保护纸的下边缘，将划好线的硝酸纤维素膜，以C线在上方的方式贴到底板板上；将吸附垫贴在硝酸纤维膜下方，与硝酸纤维素膜少许接触；将胶体金垫贴在吸附垫下方，与吸附垫少许接触；将样品垫贴在胶体金垫下方，与胶体金垫少许接触；接着除去上方保护纸，将吸水纸贴在NC膜的上方，与NC膜少许接触；将保护纸及指示带纸逐一贴在组装好的试纸条外面，组装成大卡。
接通切割机电源，设定切膜程序，设定切割宽度为4mm；将大卡合格品平放入切割机平台轨道中，正面朝上，按操作面板上“GO”键，开始切割；每放一片大卡合格品，按操作面板上“GO”键一次，直至切割完所有大卡合格品。
六、试剂盒组装
取铝箔袋和干燥剂；打开热封机，预热；将待装袋的试纸条、1袋干燥剂装入铝箔袋中；按照规定的长度切断装有试纸条和干燥剂的铝箔袋；用热封机封好铝箔袋；贴上标签。
实施例4临床样本验证
将上述的试纸条，用临床样本进行验证。
试纸条检测端(图1-3中试纸条的左端)带有吸水纸，反应时插入样品中。
检测时如果C区出现条带即质控线6，则T区出现条带(IgM抗体检测线5)即表示样品为阳性；未出现条带则表示阴性。图1中A区是否出现条带(吸附线4)与检测结果无关。
检测时如果C区未出现条带，则表示试纸条失效。
采用经临床确证的标本，进行本发明试纸条的检测，并采用对照试剂盒作为对比，对照试剂盒为意大利DiaSorin公司梅毒IgM酶联免疫吸附分析试剂盒；检测结果如下：
Figure BDA0000115372660000091
该试纸条的检测灵敏度为：53/53×100％＝100％；
该试纸条的检测特异性为：(94+15)/(94+16)＝99.09％。
上述实施例结果表明本胶体金IgM抗体检测的准确率非常高，尤其是在RF阳性患者中；满足临床应用。
因此，本发明可以将IgM抗体检测和去除人IgG、RF同步进行，简便快速，显著提高IgM抗体检测的准确性，为下一步准确治疗提供了有力依据，适于大规模推广应用。
在此说明书中，本发明已参照其特定的实施例作了描述。但是，很显然仍可以作出各种修改和变换而不背离本发明的精神和范围。因此，说明书和附图应被认为是说明性的而非限制性的。

Claims (11)

1.一种IgM抗体检测试纸条，具有IgM抗体检测线，其特征在于，在所述IgM抗体检测线之前包被能够吸附人IgG和类风湿因子的物质。
2.根据权利要求1所述的IgM抗体检测试纸条，其特征在于，所述物质包括抗人IgG抗体、Protein G、聚合IgG或人IgG适配体。
3.根据权利要求1所述的IgM抗体检测试纸条，其特征在于，所述物质和所述IgM抗体检测线均位于微孔膜上。
4.根据权利要求3所述的IgM抗体检测试纸条，其特征在于，所述微孔膜包括硝酸纤维素膜、尼龙膜或乙酸纤维素膜。
5.根据权利要求1所述的IgM抗体检测试纸条，其特征在于，所述IgM抗体检测线之前具有吸附垫，所述物质位于所述吸附垫上。
6.根据权利要求5所述的IgM抗体检测试纸条，其特征在于，所述IgM抗体检测线之前还具有结合垫，所述吸附垫位于所述IgM抗体检测线与所述结合垫之间。
7.根据权利要求5所述的IgM抗体检测试纸条，其特征在于，所述IgM抗体检测线之前还具有结合垫和样品垫，所述样品垫位于所述结合垫之前，所述吸附垫位于所述样品垫与所述结合垫之间。
8.根据权利要求6或7所述的IgM抗体检测试纸条，其特征在于，所述IgM抗体检测试纸条通过所述结合垫上的标记物进行显色或者发光进行显示检测结果。
9.根据权利要求8所述的IgM抗体检测试纸条，其特征在于，所述标记物采用胶体金、胶体硒、量子点、乳胶颗粒或荧光素进行标记。
10.根据权利要求1所述的IgM抗体检测试纸条，其特征在于，所述物质形成一条或数条吸附线。
11.根据权利要求1所述的IgM抗体检测试纸条，其特征在于，所述IgM抗体检测线包被抗人IgM的抗体或者与人IgM结合的抗原。
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