CN111733141B - 一种可分泌抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞、单克隆抗体及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种可分泌抗新型冠状病毒(SARS‑COV‑2)N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞、单克隆抗体及应用。本发明提供了杂交瘤细胞株N‑3G3，保藏编号为CCTCC NO：C202075。本发明还保护杂交瘤细胞株N‑3G3分泌的单克隆抗体。灵敏性高且特异性高的抗体是抗原检测技术的开发和实施的关键。本发明基于单克隆抗体技术获得了抗SARS‑CoV‑2的N蛋白的特异性抗体，并用其制备了SARS‑COV‑2检测试纸条。采用本发明提供的试纸条检测SARS‑CoV‑2，操作简单、灵敏度高、特异性强，可实现对SARS‑COV‑2的快速监测及预防。

Description

一种可分泌抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞、 单克隆抗体及应用

技术领域

本发明属于免疫检测领域，具体涉及一种可分泌抗新型冠状病毒(SARS-COV-2)N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞、单克隆抗体及应用。

背景技术

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是属于套式病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)的β属冠状病毒。新型冠状病毒传播途径主要经呼吸道飞沫和密切接触传播，在相对密闭环境中也存在经气溶胶传播的可能。新型冠状病毒其传染性极高，感染后潜伏期1-14天，在临床上存在无症状感染者，且目前没有有效的疫苗及治疗药物。因此对新型冠状病毒进行早诊早治，切断传播源，防止病毒的传播和扩散极为重要。

新型冠状病毒感染引起的新冠肺炎在临床表现为发热和/或呼吸道症状，其诊断主要通过RT-PCR、血清学检查、肺部影像CT等。目前常用的RT-PCR方法检测时间长，且需要昂贵的仪器与设备及专业人员在专门的PCR实验室进行检测，而血清学检查通常要在感染7天以后才能检出IgM和/或IgG抗体，发展快速实时的、价格低廉的、灵敏性和特异性高的抗原检测新技术和新方法，对于早期诊断新型冠状病毒，防止其传播和扩散具有必要性和重要性。

发明内容

本发明的目的是提供一种可分泌抗新型冠状病毒(SARS-COV-2)N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞、单克隆抗体及应用。

本发明提供了杂交瘤细胞株N-3G3，已于2020年5月13日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC；地址：中国武汉，武汉大学；邮编：430072)，保藏编号为CCTCC NO：C202075。

本发明还保护杂交瘤细胞株N-3G3分泌的单克隆抗体。将杂交瘤细胞株N-3G3分泌的单克隆抗体命名为单克隆抗体N-3G3。

本发明还保护杂交瘤细胞株N-3G3在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a)、(b)或(c)：

(a)检测SARS-CoV-2的N蛋白；

(b)检测SARS-CoV-2；

(c)检测待测样本中是否含有SARS-CoV-2。

本发明还保护单克隆抗体N-3G3在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a)、(b)或(c)：

(a)检测SARS-CoV-2的N蛋白；

(b)检测SARS-CoV-2；

(c)检测待测样本中是否含有SARS-CoV-2。

本发明还保护一种试剂盒，包括杂交瘤细胞株N-3G3；所述试剂盒的功能为如下(a)、(b)、或(c)：

(a)检测SARS-CoV-2的N蛋白；

(b)检测SARS-CoV-2；

(c)检测待测样本中是否含有SARS-CoV-2。

本发明还保护一种试剂盒，包括单克隆抗体N-3G3；所述试剂盒的功能为如下(a)、(b)或(c)：

(a)检测SARS-CoV-2的N蛋白；

(b)检测SARS-CoV-2；

(c)检测待测样本中是否含有SARS-CoV-2。

本发明还保护一种胶体金试纸条，其特征在于：胶体金垫上包被胶体金标记的单克隆抗体N-3G3，检测垫的T线上包被单克隆抗体N-3G3，检测垫的C线上包被抗鼠IgG抗体。胶体金试纸条包括底板(又称背衬)、胶体金垫(又称样品垫)、检测垫和吸水垫。沿样品流动方向，胶体金垫、检测垫和吸水垫依次固定于底板上。抗鼠IgG抗体具体可为羊抗鼠IgG抗体。

本发明还保护一种荧光试纸条，其特征在于：荧光垫上包被荧光微球标记的单克隆抗体N-3G3，检测垫的T线上包被单克隆抗体N-3G3，检测垫的C线上包被抗鼠IgG抗体。荧光试纸条包括底板(又称背衬)、荧光垫(又称样品垫)、检测垫和吸水垫。沿样品流动方向，荧光垫、检测垫和吸水垫依次固定于底板上。抗鼠IgG抗体具体可为羊抗鼠IgG抗体。

以上任一所述试纸条中，单克隆抗体N-3G3作为检测抗体，同时作为捕获抗体。

检测垫的材质具体可为硝酸纤维素膜。

胶体金垫的材质具体可为玻璃纤维纸。

荧光垫的材质具体可为玻璃纤维纸。

单克隆抗体N-3G3针对新型冠状病毒N蛋白的优势表位，在特异性和灵敏度上具有显著的优势。

本发明还保护以上任一所述试纸条在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a)、(b)或(c)：

(a)检测SARS-CoV-2的N蛋白；

(b)检测SARS-CoV-2；

(c)检测待测样本中是否含有SARS-CoV-2。

本发明还保护一种试剂盒，包括以上任一所述试纸条；所述试剂盒的功能为如下(a)、(b)或(c)：

(a)检测SARS-CoV-2的N蛋白；

(b)检测SARS-CoV-2；

(c)检测待测样本中是否含有SARS-CoV-2。

以上任一所述产品可为试剂或试剂盒。

灵敏性高且特异性高的抗体是抗原检测技术的开发和实施的关键。本发明基于单克隆抗体技术获得了抗SARS-CoV-2的N蛋白的特异性抗体，并用其制备了SARS-COV-2检测试纸条。采用本发明提供的试纸条检测SARS-CoV-2，操作简单、灵敏度高、特异性强，可实现对SARS-COV-2的快速监测及预防。

附图说明

图1为实施例2中单克隆抗体N-3G3与SARS-COV-2的N蛋白的结合曲线。

图2为试纸条的结构示意图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。Balb/c小鼠：广东省实验动物中心，5周龄。SARS-COV-2的N蛋白：深圳市圳康科技有限公司，货号AG201。

实施例1、可分泌抗SARS-COV-2的N蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株的获得

将SARS-COV-2的N蛋白用生理盐水稀释后与Quick Anti-body－Mouse 3W佐剂等体积混合，后小腿肌肉注射免疫2只Balb/c小鼠，第14天按同样方式加强免疫。第21天自小鼠尾部取血，分离血清后采用间接ELISA法检测血清效价，效价达到融合要求。在细胞融合前3天，用100μg蛋白进行脾脏加强免疫。

将Balb/c小鼠脾脏细胞与对数生长期的NS1骨髓瘤细胞按1∶9比例混合后，在50％的PEG1500作用下进行融合。融合后细胞于含10％Clone Easy培养基的HAT半固体培养基培养8-10天，挑取细胞克隆到HT培养基筛选培养2天后，采用间接ELISA法检测细胞培养上清中的抗体特异性。将阳性细胞再用HT半固体培养基克隆1次，获得能稳定分泌抗体的单克隆细胞株，扩大培养后，用含10％DMSO的FBS冻存，细胞密度为10⁶个/mL。采用体内诱生法制备腹水，腹水经Protein A亲和层析纯化得到纯化的抗体，于0.01mol/L磷酸盐缓冲液中透析后，用Nanodrop测定蛋白浓度。获得了多株单克隆细胞株，经过对抗体效价进行鉴定，从单克隆细胞株中筛选到一株能稳定分泌单克隆抗体且单克隆抗体效价最高的细胞株，将其命名为杂交瘤细胞株N-3G3。

杂交瘤细胞株N-3G3，已于2020年5月13日保藏在中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC；地址：中国武汉，武汉大学；邮编：430072)，保藏编号为CCTCC NO：C202075。杂交瘤细胞株N-3G3可分泌抗SARS-COV-2的N蛋白的单克隆抗体，将杂交瘤细胞株N-3G3分泌的单克隆抗体命名为单克隆抗体N-3G3。

实施例2、单克隆抗体N-3G3的制备、纯化以及效价

一、单克隆抗体N-3G3的制备

1、增量培养法

细胞培养基(7.4)的制备方法：向RPMI-1640培养基中添加胎牛血清，胎牛血清的终浓度为20％(质量百分含量)。

将杂交瘤细胞株N-3G3置于细胞培养基中，37℃培养3-4天，细胞培养上清液用Protein A亲和层析纯化，得到单克隆抗体(-20℃保存)。

2、腹水制备

Balb/c小鼠腹腔注射灭菌石蜡油(0.5mL/只)，10天后腹腔注射杂交瘤细胞株N-3G3(5×10⁵个细胞/只)，8-10天后采集腹水，采用Protein A亲和层析纯化，然后转移到透析袋中在pH7.4、0.01M的PBS缓冲液中进行透析，然后收集透析袋中的液体，得到单克隆抗体N-3G3，-20℃保存。

后续步骤以及后续实施例中所用的单克隆抗体N-3G3均为腹水制备得到的。

二、效价检测(间接ELISA法)

1、取酶标板，加入包被液(100μL/孔)，4℃包被过夜。包被液：取SARS-COV-2的N蛋白，用pH9.6、0.05M的碳酸盐缓冲液稀释至蛋白浓度为2μg/mL，即为包被液。

2、完成步骤1后，取所述酶标板，用PBST溶液洗涤4次，然后加入封闭液(200μL/孔)，37℃孵育2小时。封闭液：含1g/100mL BSA的PBST溶液。

3、完成步骤2后，取所述酶标板，用PBST溶液洗涤4次，然后加入抗体稀释液(100μL/孔)，37℃孵育1h。抗体稀释液：取单克隆抗体N-3G3，用pH7.4、0.02M的PBS缓冲液进行10倍梯度稀释，得到不同浓度的抗体稀释液。

4、完成步骤3后，取所述酶标板，用PBST溶液洗涤4次，然后加入HRP标记二抗工作液，37℃孵育1h。HRP标记二抗工作液：HRP标记二抗的1:4000稀释液。HRP标记二抗：洛阳佰奥通实验材料中心，货号为C030205。

5、完成步骤4后，取所述酶标板，用PBST溶液洗涤4次，然后加入过氧化氢OPD底物反应液显色10分钟，然后加入2M硫酸溶液终止显色，然后用酶标仪测定450nm吸光值。

单克隆抗体N-3G3的效价为1：1000000。

三、EC₅₀值检测

抗体稀释液：取单克隆抗体N-3G3，用pH7.4、0.02M的PBS缓冲液稀释至蛋白浓度为10μg/mL，然后进行10倍梯度稀释。

替换抗体稀释液，其他同步骤二。

结果见图1。单克隆抗体的EC₅₀低于27.7ng/mL。

实施例3、胶体金快速检测试纸的制备

一、胶体金标记抗体的制备

1、采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金

用量筒量取495ml去离子水，倒入玻璃两颈瓶中，加入5ml 1g/100mL氯金酸水溶液；在玻璃两颈瓶中放入一个磁力搅拌子，连接球形冷凝管，用可控温电磁加热搅拌器加热至沸腾；边搅动边加入1g/100mL柠檬酸三钠水溶液5ml，金黄色的氯金酸溶液在2分钟内变为紫红色，继续煮沸5分钟，然后自然冷却，即为胶体金溶液。

2、制备胶体金标记的N-3G3抗体

取20体积份胶体金溶液，用0.1M碳酸钾水溶液调pH至7.5，然后加入单克隆抗体N-3G3(每毫升胶体金溶液配比8微克抗体)，室温搅拌反应1小时，然后加入BSA并使其浓度为1g/100mL反应1小时；反应完毕后，置于离心机中4℃、12000rpm离心20分钟，弃除上清，剩余的红色沉淀物用1体积份含1g/100mL BSA的PBS缓冲液(pH7.4、0.02M)重悬，即为胶体金标记的N-3G3抗体溶液，4℃保存。

二、胶体金试纸条的制备

1、制备检测垫

取硝酸纤维素膜，采用BioDot的XYZ3050喷膜系统将C溶液喷至质控线(C线)位置，将T溶液喷至检测线(T线)位置，于相对湿度为10％以下的干燥车间抽湿4小时，得到检测垫。采用pH7.4、0.02M的PBS缓冲液，将羊抗鼠IgG抗体配制为浓度1mg/ml的溶液，即为C溶液。采用pH7.4、0.02M的PBS缓冲液，将单克隆抗体N-3G3配制为浓度2mg/ml的溶液(以蛋白浓度计)，即为T溶液。羊抗鼠IgG抗体：洛阳佰奥通实验材料中心，货号为C020201。

2、制备胶体金垫

(1)取玻璃纤维纸，置于含0.2g/100mL Tween-20、1g/100mL BSA、2g/100mL蔗糖的pH7.4、0.02M的PBS缓冲液中37℃浸泡半小时，然后于相对湿度为10％以下的干燥车间抽湿4小时。

(2)完成步骤(1)后，取所述玻璃纤维纸，采用BioDot的XYZ3050喷膜系统喷涂金标抗体溶液，然后于相对湿度为10％以下的干燥车间抽湿4小时，得到胶体金垫。金标抗体溶液：取步骤一制备的胶体金标记的N-3G3抗体溶液，用含0.2g/100mL Tween-20、1g/100mLBSA、2g/100mL蔗糖的pH7.4、0.02M的PBS缓冲液稀释，使胶体金标记的N-3G3抗体的浓度为2μg/ml(以蛋白浓度计)。

3、试纸条的组装

在10万级洁净和干燥的车间中进行试纸条的组装。

试纸条包括底板(又称为背衬)、胶体金垫(又称为样品垫)、检测垫和吸水垫。沿样品流动方向，胶体金垫、检测垫和吸水垫依次固定于底板上(相邻垫之间略重叠)。

沿样品流动方向作为试纸条的长度方向，与长度方向垂直的方向作为试纸条的宽度方向。试纸条的宽度为3.5mm。试纸条的总长度为6cm，其中胶体金垫的长度为2cm，检测垫的长度为2.5cm，吸水垫的长度为2cm。C线靠近吸水垫、远离胶体金垫。T线靠近胶体金垫、远离吸水垫。

吸水垫的材质为吸水纸。

底板仅起支撑作用，常规材质均可，例如PVC。

三、试纸条的使用方法

将60μl待检样品垂直缓慢滴入胶体金试纸条的加样端(胶体金试纸条的加样端即胶体金垫中靠近游离端的部分)，室温水平放置10-15分钟，然后进行如下结果判断：

C线显色，表示结果可信；

如果T线显色，说明待检样品中含有SARS-COV-2的N蛋白，从而判断受试者为SARS-COV-2感染者；

如果T线不显色，说明待检样品中不含有SARS-COV-2的N蛋白，从而判断受试者为非SARS-COV-2感染者。

四、试纸条的工作原理

C线上的羊抗鼠IgG抗体捕获胶体金标记的N-3G3抗体，从而显色；

如果待检样品中含有SARS-COV-2的N蛋白，SARS-COV-2的N蛋白将与胶体金垫上的胶体金标记的N-3G3抗体形成复合物，经过检测垫时，T线上的N-3G3抗体通过与SARS-COV-2的N蛋白的特异性结合捕获复合物从而显色；

如果待检样品中不含有SARS-COV-2的N蛋白，经过检测垫时，T线上的N-3G3抗体无法捕获胶体金标记的N-3G3抗体，从而不显色。

实施例4、荧光快速检测试纸的制备

一、荧光微球标记抗体的制备

1、制备羧基修饰的荧光微球

将苯乙烯和甲基丙烯酸甲脂按1:1的体积比混合，加入稀土络合物Eu(TTA)₃Phen并使其在体系中的浓度为1g/100mL，超声混匀，得到a液。将羧基化聚乙烯醇和碳酸氢钠溶于水，使羧基化聚乙烯醇的浓度为0.05g/100mL、碳酸氢钠的浓度为0.05g/100mL，得到b液。将1体积份a液加入10体积份b液中，然后超声15分钟，然后通氮气30分钟搅拌除氧，然后加热至80℃，然后加入过硫酸钾并使其在体系中的浓度为0.1g/100mL(实际情况中，0.01-0.1g/100mL均可),然后反应12小时，然后依次进行过滤、离心和去离子水清洗，得到羧基修饰的荧光微球。

实际应用中，也可用如下方法制备a液：将苯乙烯和甲基丙烯酸甲脂按1:1的体积比混合，加入CdSe/ZnS量子点并使其在体系中的浓度为0.5g/100mL，超声混匀，得到a液。

2、活化

取10mg羧基修饰的荧光微球，用pH4.7、0.1M的MES缓冲液洗涤并离心，然后用1mlpH4.7、0.1M的MES缓冲液重悬，加入EDC(使其在体系中的浓度为5mM)和NHS(使其在体系中的浓度为10mM)，室温避光反应半小时，得到活化后羧基修饰的荧光微球。EDC：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺。NHS：N-羟基丁二酰亚胺。

3、制备荧光微球标记抗体

(1)取步骤2得到的活化后羧基修饰的荧光微球，用pH8.5、50mM的硼砂缓冲液洗涤。

(2)取单克隆抗体N-3G3(抗体含量为0.7mg)和完成步骤(1)的微球，在pH8.5、50mM的硼砂缓冲液中充分混匀，室温避光反应2小时(抗体和微球形成稳定的肽键共价结合从而得到偶联物)，然后加入BSA并使其在体系中的浓度为1g/100mL以封闭剩余活性羧基位点，室温避光反应0.5小时，然后用pH7.4、0.02M的PBS缓冲液洗涤、重悬，得到荧光微球标记的N-3G3抗体溶液(浓度为5mg/ml，以微球浓度计)，4℃保存。

二、荧光试纸条的制备

1、制备检测垫

同实施例3的步骤二的1。

2、制备荧光垫

(1)取玻璃纤维纸，置于含0.2g/100mL Tween-20、1g/100mL BSA、2g/100mL蔗糖的pH7.4、0.02M的PBS缓冲液中37℃浸泡半小时，于相对湿度为10％以下的干燥车间抽湿4小时。

(2)完成步骤(1)后，取所述玻璃纤维纸，采用BioDot的XYZ3050喷膜系统喷涂荧光标记抗体溶液，于相对湿度为10％以下的干燥车间抽湿4小时，得到荧光垫。荧光标记抗体溶液：取步骤一制备的荧光微球标记的N-3G3抗体溶液，用含0.2g/100mL Tween-20、1g/100mL BSA、2g/100mL蔗糖的pH7.4、0.02M的PBS缓冲液稀释，使荧光微球标记的N-3G3抗体的浓度为2μg/ml(以蛋白浓度计)。

3、试纸条的组装

在10万级洁净和干燥的车间中进行试纸条的组装。

试纸条包括底板(又称为背衬)、荧光垫(又称为样品垫)、检测垫和吸水垫。沿样品流动方向，荧光垫、检测垫和吸水垫依次固定于底板上(相邻垫之间略重叠)。

沿样品流动方向作为试纸条的长度方向，与长度方向垂直的方向作为试纸条的宽度方向。试纸条的宽度为3.5mm。试纸条的总长度为6cm，其中荧光垫的长度为2cm，检测垫的长度为2.5cm，吸水垫的长度为2cm。C线靠近吸水垫、远离荧光垫。T线靠近荧光垫、远离吸水垫。

吸水垫的材质为吸水纸。

底板仅起支撑作用，常规材质均可，例如PVC。

三、试纸条的使用方法

将60μl待检样品垂直缓慢滴入荧光试纸条的加样端(荧光试纸条的加样端即荧光垫中靠近游离端的部分)，室温水平放置10-15分钟，然后进行如下结果判断：

C线显色，表示结果可信；

如果T线显色，说明待检样品中含有SARS-COV-2的N蛋白，从而判断受试者为SARS-COV-2感染者；

如果T线不显色，说明待检样品中不含有SARS-COV-2的N蛋白，从而判断受试者为非SARS-COV-2感染者。

四、试纸条的工作原理

C线上的羊抗鼠IgG抗体捕获荧光微球标记的N-3G3抗体，从而显色；

如果待检样品中含有SARS-COV-2的N蛋白，SARS-COV-2的N蛋白将与荧光垫上的荧光微球标记的N-3G3抗体形成复合物，经过检测垫时，T线上的N-3G3抗体通过与SARS-COV-2的N蛋白的特异性结合捕获复合物从而显色；

如果待检样品中不含有SARS-COV-2的N蛋白，经过检测垫时，T线上的N-3G3抗体无法捕获荧光微球标记的N-3G3抗体，从而不显色。

实施例5、试纸条的性能

一、检测灵敏度

待检样品：取SARS-COV-2的N蛋白，用含1g/100mL BSA的7.4、0.02M PBS缓冲液稀释，使SARS-COV-2的N蛋白的浓度分别为1000、100、10、1、0.1、0.01或0.001ng/mL。

分别采用实施例3制备的试纸条或实施例4制备的试纸条检测各个待检样品。

结果见表1。胶体金快速检测试纸条的灵敏度为0.1ng/mL，荧光快速检测试纸条的灵敏度为0.01ng/mL。

表1

二、精密性检测

待检样品：取SARS-COV-2的N蛋白，用含1g/100mL BSA的7.4、0.02M PBS缓冲液稀释，使SARS-COV-2的N蛋白的浓度分别为0.1、1或10ng/mL。

分别采用实施例3制备的试纸条或实施例4制备的试纸条检测各个待检样品。

每个待检样品重复检测10次，测试结果无差异。

三、交叉反应测试

供试微生物：HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、甲型H1N1、甲型H3N2、甲型H5N1、甲型H7N9、甲型H9N2、乙型Victoria、乙型Yamagata、麻疹病毒、腮腺炎病毒、风疹病毒、水痘-带状疱疹病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌。供试微生物均为获自中国食品药品检定研究院的参考品或CDC的参考品，病毒均为灭活病毒。

分别采用实施例3制备的试纸条或实施例4制备的试纸条对供试微生物进行检测。结果表明，均为阴性，即对各供试微生物均无交叉反应。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

Claims (10)

1.杂交瘤细胞株N-3G3，其保藏编号为CCTCC NO：C202075。

2.权利要求1所述的杂交瘤细胞株N-3G3分泌的单克隆抗体。

3.权利要求1所述杂交瘤细胞株N-3G3在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a)、(b)或(c)：

(a)检测SARS-CoV-2的N蛋白；

(b)检测SARS-CoV-2；

(c)检测待测样本中是否含有SARS-CoV-2。

4.权利要求2所述单克隆抗体在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a)、(b)或(c)：

(a)检测SARS-CoV-2的N蛋白；

(b)检测SARS-CoV-2；

(c)检测待测样本中是否含有SARS-CoV-2。

5.一种试剂盒，包括权利要求1所述杂交瘤细胞株N-3G3；所述试剂盒的功能为如下(a)、(b)、或(c)：

(a)检测SARS-CoV-2的N蛋白；

(b)检测SARS-CoV-2；

(c)检测待测样本中是否含有SARS-CoV-2。

6.一种试剂盒，包括权利要求2所述单克隆抗体；所述试剂盒的功能为如下(a)、(b)或(c)：

(a)检测SARS-CoV-2的N蛋白；

(b)检测SARS-CoV-2；

(c)检测待测样本中是否含有SARS-CoV-2。

7.一种胶体金试纸条，其特征在于：胶体金垫上包被胶体金标记的N-3G3抗体，检测垫的T线上包被N-3G3抗体，检测垫的C线上包被抗鼠IgG抗体；所述N-3G3抗体为权利要求2所述单克隆抗体。

8.一种荧光试纸条，其特征在于：荧光垫上包被荧光微球标记的N-3G3抗体，检测垫的T线上包被N-3G3抗体，检测垫的C线上包被抗鼠IgG抗体；所述N-3G3抗体为权利要求2所述单克隆抗体。

9.权利要求7或8所述试纸条在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a)、(b)或(c)：

(a)检测SARS-CoV-2的N蛋白；

(b)检测SARS-CoV-2；

(c)检测待测样本中是否含有SARS-CoV-2。

10.一种试剂盒，包括权利要求7或8所述试纸条；所述试剂盒的功能为如下(a)、(b)或(c)：

(a)检测SARS-CoV-2的N蛋白；

(b)检测SARS-CoV-2；

(c)检测待测样本中是否含有SARS-CoV-2。

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