CN112239501B - 抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒 - Google Patents

抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN112239501B
CN112239501B CN202011182628.XA CN202011182628A CN112239501B CN 112239501 B CN112239501 B CN 112239501B CN 202011182628 A CN202011182628 A CN 202011182628A CN 112239501 B CN112239501 B CN 112239501B
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
cdr
mutant
mutant combinations
combination
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202011182628.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN112239501A (zh
Inventor
崔鹏
何志强
孟媛
钟冬梅
娄文娟
范凌云
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dongguan Pengzhi Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Dongguan Pengzhi Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dongguan Pengzhi Biotechnology Co Ltd filed Critical Dongguan Pengzhi Biotechnology Co Ltd
Priority to CN202011182628.XA priority Critical patent/CN112239501B/zh
Publication of CN112239501A publication Critical patent/CN112239501A/zh
Priority to KR1020237017479A priority patent/KR20230096021A/ko
Priority to PCT/CN2021/117802 priority patent/WO2022089044A1/zh
Priority to CA3200148A priority patent/CA3200148A1/en
Priority to JP2023526469A priority patent/JP2023551103A/ja
Priority to US18/034,394 priority patent/US20230391853A1/en
Application granted granted Critical
Publication of CN112239501B publication Critical patent/CN112239501B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1002—Coronaviridae
    • C07K16/1003—Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 [SARS‐CoV‐2 or Covid-19]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1002—Coronaviridae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
    • G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒，涉及抗体技术领域。本发明公开的抗新型冠状病毒的抗体包括重链互补决定区和轻链互补决定区。该抗体对新型冠状病毒的N蛋白的亲和力较好，使用该抗体检测新型冠状病毒具有较好的灵敏度和特异性。本发明为新型冠状病毒的检测提供了更为优秀的抗体选择。

Description

抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒
技术领域
本发明涉及抗体技术领域，具体而言，涉及一种抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒。
背景技术
新型冠状病毒2019-nCoV的结构蛋白分为：刺突糖蛋白(S蛋白)、包膜糖蛋白(E蛋白)、膜糖蛋白(M蛋白)和核衣壳蛋白(N蛋白)，这些蛋白包括多个抗原表位。N蛋白与病毒基因组RNA相互缠绕形成病毒核衣壳，在病毒RNA的合成过程中发挥着重要的作用。同时，N蛋白相对保守，在病毒的结构蛋白中所占比例最大，感染早期机体就能产生抗N蛋白的高水平抗体。最后，N蛋白是新型冠状病毒重要的标志蛋白，利用抗原与抗体特异性结合的原理，可通过N蛋白单克隆抗体检测抗原的存在，从而直接证明样本中含有新型冠状病毒，实现新型冠状病毒的检测。
检测的抗体主要分为IgM和IgG两类。目前对新型冠状病毒的这两类抗体的产生和持续时间尚缺乏系统性研究。通常情况下，IgM抗体产生早，一经感染，快速产生，维持时间短，消失快，血液中检测阳性可反应机体处于急性感染状态，可作为早期感染的指标。与核酸检测方法相比，抗体检测样本为血清或血浆，受样本采样的影响较小，有利于早期诊断和排除可疑病例，同时检测快速、方便、适合大规模筛查。
新型冠状病毒2019-nCoV肺炎疫情发生以来，在全球蔓延，严重威胁着人类的生命安全和身体健康。呼吸道飞沫和密切接触传播是新型冠状病毒肺炎主要的传播途径，在相对封闭的环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况中存在经气溶胶传播的可能。2019-nCoV具有很强的传染性，多数患者感染后出现临床症状，但也有部分患者为无症状感染者。人感染了冠状病毒后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。虽然目前对于新型冠状病毒所致疾病没有特异治疗方法，但是轻症、或者无症状患者通过治疗可以大大的提高治愈率，缩短治疗时间。因此，对患者的检测或者鉴定变的尤为重要。
目前主要以核酸检测和病毒基因测序为病原学确诊证据，由于采样、操作以及试剂等多方面因素影响，核酸检测会出现假阴性结果。高度疑似2019新型冠状病毒(2019-nCoV)感染患者的病毒核酸阳性检出率仅为30％～50％。另外，核酸检测对仪器设备、检测场地及环境条件要求高，存在检测时间长、通量低等缺点，不便于目前疫情下的人群大规模检测。因此，迫切需要研发出一种快速便捷检测试剂盒用于临床检测，从而尽快隔离感染人群以阻断病毒传播。因此，抗体检测试剂盒变得更为重要。
目前2019-nCoV N蛋白单克隆抗体产品较少，性能存在差异。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒，该抗体可以特异性结合新型冠状病毒的N蛋白，对其具有较高的亲和力，用该抗体检测新型冠状病毒具有较好的灵敏度和特异性。本发明为新型冠状病毒的检测提供了更为丰富的抗体选择。
本发明是这样实现的：
一方面，本发明提供一种抗新型冠状病毒或其N蛋白的抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段具有如下互补决定区：
CDR-VH1：G-X1-T-F-S-X2-F-X3-M-H；其中：X1是V或F；X2是S或T；X3是G或A；
CDR-VH2：Y-X1-N-S-X2-S-N-X3-I-Y-Y-A-D-T-X4-K；其中：X1是L或I；X2是G或A；X2是I、V或L；X3是I、V或L；
CDR-VH3：X1-R-H-X2-M；其中：X1是A或T；X2是A或V；
CDR-VL1：S-Q-S-X1-D-Y-X2-G-D-S-X3-M；其中：X1是I、V或L；X2是D或N；X3是F或Y；
CDR-VL2：X1-A-S-N-X2-E-S；其中：X1是A或D；X2是I、V或L；
CDR-VL3：Q-X1-S-N-E-X2-P-Y；其中：X1是N、H或Q；X2是D或E。
本发明提供的抗新型冠状病毒的抗体或其功能性片段，具有上述互补决定区结构，上述互补决定区结构可使抗体或其功能性片段能够特异性结合抗新型冠状病毒的N蛋白，对其具有较好的亲和力，用该抗体或其功能性片段检测新型冠状病毒，具有较好的特异性和灵敏度。本发明为新型冠状病毒的检测提供了更为丰富的抗体选择。
在可选的实施方式中，CDR-VH1中，X1是F；CDR-VH2中，X1是I；CDR-VH3中，X1是A；CDR-VL1中，X3是Y。
通过本实施例的实验结果显示，在各互补决定区中的上述突变位点为上述氨基酸残基时，该抗体对抗新型冠状病毒的N蛋白表现出更高的亲和力。
在可选的实施方式中，CDR-VH1中，X2是S。
在可选的实施方式中，CDR-VH1中，X2是T。
在可选的实施方式中，CDR-VH1中，X3是G。
在可选的实施方式中，CDR-VH1中，X3是A。
在可选的实施方式中，CDR-VH2中，X2是G。
在可选的实施方式中，CDR-VH2中，X2是A。
在可选的实施方式中，CDR-VH2中，X3是I。
在可选的实施方式中，CDR-VH2中，X3是V。
在可选的实施方式中，CDR-VH2中，X3是L。
在可选的实施方式中，CDR-VH2中，X4是I。
在可选的实施方式中，CDR-VH2中，X4是V。
在可选的实施方式中，CDR-VH2中，X4是L。
在可选的实施方式中，CDR-VH3中，X2是A。
在可选的实施方式中，CDR-VH3中，X2是V。
在可选的实施方式中，CDR-VL1中，X1是I。
在可选的实施方式中，CDR-VL1中，X1是V。
在可选的实施方式中，CDR-VL1中，X1是L。
在可选的实施方式中，CDR-VL1中，X2是D。
在可选的实施方式中，CDR-VL1中，X2是N。
在可选的实施方式中，CDR-VL2中，X1是A。
在可选的实施方式中，CDR-VL2中，X1是D。
在可选的实施方式中，CDR-VL2中，X2是I。
在可选的实施方式中，CDR-VL2中，X2是V。
在可选的实施方式中，CDR-VL2中，X2是L。
在可选的实施方式中，CDR-VL1中，X1是N。
在可选的实施方式中，CDR-VL1中，X1是H。
在可选的实施方式中，CDR-VL1中，X1是Q。
在可选的实施方式中，CDR-VL2中，X2是D。
在可选的实施方式中，CDR-VL2中，X2是E。
在可选的实施方式中，所述抗体或其功能性片段的各互补决定区选自如下突变组合1-68中的任意一种：
Figure BDA0002750598310000031
Figure BDA0002750598310000041
Figure BDA0002750598310000051
在可选的实施方式中，所述抗体或其功能性片段与抗新型冠状病毒的N蛋白以KD≤8×10-9mol/L的亲和力结合。
在可选的实施方式中，KD≤7×10-10mol/L。
在可选的实施方式中，KD≤8×10-9mol/L、KD≤7×10-9mol/L、KD≤6×10-9mol/L、KD≤5×10-9mol/L、KD≤4×10-9mol/L、KD≤3×10-9mol/L、KD≤2×10-9mol/L、KD≤1×10-9mol/L、KD≤9×10-10mol/L、KD≤8×10-10mol/L、KD≤7×10-10mol/L、KD≤6×10-10mol/L、KD≤5×10-10mol/L、KD≤4×10-10mol/L、KD≤3×10-10mol/L、KD≤2×10-10mol/L、KD≤1×10-10mol/L、KD≤9×10-11mol/L或KD≤8×10-11mol/L。
在可选的实施方式中，8.75×10-11mol/L≤KD≤7.08×10-10mol/L。
KD的检测参考本发明实施例中的方法进行。
在可选的实施方式中，CDR-VH1中，X1是V；CDR-VH2中，X1是L；CDR-VH3中，X1是T；CDR-VL1中，X3是F。
在可选的实施方式中，所述抗体或其功能性片段的各互补决定区选自如下突变组合69-76中的任意一种：
Figure BDA0002750598310000052
在可选的实施方式中，所述抗体包括序列依次如SEQ ID NO:1-4所示的轻链骨架区FR1-L、FR2-L、FR3-L及FR4-L，和/或，序列依次如SEQ ID NO:5-8所示的重链骨架区FR1-H、FR2-H、FR3-H及FR4-H。
通常情况下，重链可变区(VH)和轻链的可变区(VL)可由以下编号的CDR与FR按如下组合排列连接获得：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
需要说明的是，在其他的实施例中，本发明提供的抗体或其功能性片段的各骨架区氨基酸序列可以与上述对应骨架区(SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7或8)可以具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性。例如，FR1-H的氨基酸序列还可以是SEQ ID NO:15。
在可选的实施方式中，所述抗体还包含恒定区。
在可选的实施方式中，所述恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE和IgD中的任意一者的恒定区。
在可选的实施方式中，所述恒定区的种属来源为牛、马、乳牛、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人。
在可选的实施方式中，所述恒定区来源于小鼠。
在可选的实施方式中，所述恒定区的轻链恒定区(CL)序列如SEQ ID NO:9所示，所述恒定区的重链恒定区(CH)序列如SEQ ID NO:10所示。
需要说明的是，在其他的实施例中，本发明提供的抗体的恒定区序列可以与上述恒定区(SEQ ID NO:9或10)可以具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性。例如，重链恒定区还可以是SEQ ID NO:16。
在可选的实施方式中，所述功能性片段选自所述抗体的VHH、F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv中的任意一种。
上述抗体的功能性片段通常具有与其来源抗体相同的结合特异性。本领域技术人员根据本发明记载的内容容易理解到，上述抗体的功能性片段可以通过比如酶消化的方法(包括胃蛋白酶或木瓜蛋白酶)和/或通过化学还原分裂二硫键的方法获得。在本发明公开了完整抗体的结构基础上，本领域技术人员容易获得上述的功能性片段。
上述抗体的功能性片段还可以通过也是本领域技术人员所知的重组遗传学技术或通过例如自动肽合成仪，比如Applied BioSystems等销售的自动肽合成仪合成获得。
另一方面，本发明提供一种检测新型冠状病毒或其N蛋白的试剂或试剂盒，其包括如上任一项所述的抗体或其功能性片段。
在可选的实施方式中，上述试剂或试剂盒中所述抗体或其功能性片段标记有可被检测的标记物。
可被检测的标记物是指具有能够被肉眼直接观察或被仪器检测或探测到的特性例如发光、显色、放射性等特性的一类物质，通过该特性可以实现对相应目标物的定性或定量检测。
在可选的实施方式中，所述可被检测的标记物包括但不限于荧光染料、催化底物显色的酶、放射性同位素、化学发光试剂和纳米颗粒类标记物。
在实际的使用过程中，本领域技术人员可以根据检测条件或实际需要选择合适的标记物，无论使用何种标记物，其均属于本发明的保护范围。
在可选的实施方式中，所述荧光染料包括但不限于荧光素类染料及其衍生物(例如包括但不限于异硫氰酸荧光素(FITC)羟基光素(FAM)、四氯光素(TET)等或其类似物)、罗丹明类染料及其衍生物(例如包括但不限于红色罗丹明(RBITC)、四甲基罗丹明(TAMRA)、罗丹明B(TRITC)等或其类似物)、Cy系列染料及其衍生物(例如包括但不限于Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy3等或其类似物)、Alexa系列染料及其衍生物(例如包括但不限于AlexaFluor350、405、430、488、532、546、555、568、594、610、33、647、680、700、750等或其类似物)和蛋白类染料及其衍生物(例如包括但不限于藻红蛋白(PE)、藻蓝蛋白(PC)、别藻蓝蛋白(APC)、多甲藻黄素-叶绿素蛋白(preCP)等)。
在可选的实施方式中，所述催化底物显色的酶包括但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、碳酸酐酶、乙酰胆碱酯酶以及6-磷酸葡萄糖脱氧酶。
在可选的实施方式中，所述放射性同位素包括但不限于212Bi、131I、111In、90Y、186Re、211At、125I、188Re、153Sm、213Bi、32P、94mTc、99mTc、203Pb、67Ga、68Ga、43Sc、47Sc、110mIn、97Ru、62Cu、64Cu、67Cu、68Cu、86Y、88Y、121Sn、161Tb、166Ho、105Rh、177Lu、172Lu和18F。
在可选的实施方式中，所述化学发光试剂包括但不限于鲁米诺及其衍生物、光泽精、甲壳动物荧光素及其衍生物、联吡啶钌及其衍生物、吖啶酯及其衍生物、二氧环乙烷及其衍生物、洛粉碱及其衍生物和过氧草酸盐及其衍生物。
在可选的实施方式中，所述纳米颗粒类标记物包括但不限于纳米颗粒、胶体、有机纳米颗粒、磁性纳米颗粒、量子点纳米颗粒和稀土络合物纳米颗粒。
在可选的实施方式中，所述胶体包括但不限于胶体金属、分散型染料、染料标记的微球和乳胶。
在可选的实施方式中，所述胶体金属包括但不限于胶体金、胶体银和胶体硒。
另一方面，本发明提供一种编码上述抗体或其功能性片段的核酸分子。
另一方面，本发明提供含有上述核酸分子的载体。
另一方面，本发明提供含有上述载体的重组细胞。
另一方面，本发明提供一种制备抗体或其功能性片段的方法，其包括：培养如上所述的重组细胞，从培养产物中分离纯化得到所述抗体或其功能性片段。
在本发明公开了抗体或其功能性片段的氨基酸序列的基础上，本领域技术人员容易想到采用基因工程技术或其他技术(化学合成、杂交瘤细胞)制备得到该抗体或其功能性片段，例如从能够重组表达如上任一项所述的抗体或其功能性片段的重组细胞的培养产物中分离纯化得到该抗体或其功能性片段，这对本领域技术人员来说是容易实现的，基于此，无论采用何种技术制备本发明的抗体或其功能性片段，其均属于本发明的保护范围。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为实施例1的抗新型冠状病毒的抗体的还原性SDS-PAGE的结果。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。尽管与本文描述的那些方法和材料类似或等同的任何方法和材料都可用于本文的制剂或单位剂量的实践或测试，但现在描述一些方法和材料。除非另有说明，否则本文采用或考虑的技术是标准方法。材料、方法和实例仅是说明性而非限制性的。
除非另外指明，否则实践本发明将采用细胞生物学、分子生物学(包含重组技术)、微生物学、生物化学和免疫学的常规技术，所述常规技术在本领域技术人员的能力范围内。文献中充分解释了这种技术，如《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:ALaboratory Manual)》，第二版(Sambrook等人，1989)；《寡核苷酸合成(OligonucleotideSynthesis)》(M.J.Gait编，1984)；《动物细胞培养(Animal Cell Culture)》(R.I.Freshney编，1987)；《酶学方法(Methods in Enzymology)》(学术出版社有限公司(Academic Press，Inc.)；《实验免疫学手册(Handbook of Experimental Immunology)》(D.M.Weir和C.C.Blackwell编)；《哺乳动物细胞用基因转移载体(Gene Transfer Vectors forMammalian Cells)》(J.M.Miller和M.P.Calos编，1987)；《当代分子生物学方法(CurrentProtocols in Molecular Biology)》(F.M.Ausubel等人编，1987)；《PCR:聚合酶链反应(PCR:The Polymerase Chain Reaction)》(Mullis等人编，1994)；以及《当代免疫学方法(Current Protocols in Immunology)》(J.E.Coligan等人编，1991)，所述文献中的每个文献均通过引用明确并入本文中。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例中限制性内切酶、Prime Star DNA聚合酶购自Takara公司。MagExtractor-RNA提取试剂盒购自TOYOBO公司。BD SMARTTMRACE cDNA Amplification Kit试剂盒购自Takara公司。pMD-18T载体购自Takara公司。质粒提取试剂盒购自天根公司。引物合成和基因测序由Invitrogen公司完成。
1重组质粒的构建
(1)抗体基因制备
从分泌抗新型冠状病毒N蛋白的抗体的杂交瘤细胞株中提取mRNA，通过RT-PCR方法获得DNA产物，该产物用rTaq DNA聚合酶进行加A反应后插入到pMD-18T载体中，转化到DH5α感受态细胞中，长出菌落后分别取Heavy Chain及Light Chain基因克隆，各4个克隆送基因测序公司进行测序。
(2)抗体可变区基因的序列分析
将上述测序得到的基因序列放在IMGT抗体数据库中进行分析，并利用VNTI11.5软件进行分析确定重链和轻链引物对扩增出的基因都是正确的，其中Light Chain扩增出的基因片段中，VL基因序列为342bp，属于VkII基因家族，其前方有57bp的前导肽序列；HeavyChain引物对扩增出的基因片段中，VH基因序列为336bp，属于VH1基因家族，其前方有57bp的前导肽序列。
(3)重组抗体表达质粒的构建
pcDNATM3.4
Figure BDA0002750598310000091
vector为构建的重组抗体真核表达载体，该表达载体已经引入HindIII、BamHI、EcoRI等多克隆酶切位点，并命名为pcDNA3.4A表达载体，后续简称3.4A表达载体；根据上述pMD-18T中抗体可变区基因测序结果，设计该抗体的VL和VH基因特异性引物，两端分别带有HindIII、EcoRI酶切位点和保护碱基，通过PCR扩增方法扩出0.72kb的Light Chain基因片段和1.41kb的Heavy Chain基因片段。
Heavy Chain和Light Chain基因片段分别采用HindIII/EcoRI双酶切，3.4A载体采用HindIII/EcoRI双酶切，将片段和载体纯化回收后Heavy Chain基因和Light Chain基因分别连接3.4A表达载体中，分别得到Heavy Chain和Light Chain的重组表达质粒。
2稳定细胞株筛选
(1)重组抗体表达质粒瞬时转染CHO细胞，确定表达质粒活性
质粒用超纯水稀释至400ng/ml，调节CHO细胞1.43×107cells/ml于离心管中，100μL质粒与700μL细胞混合，转入电转杯，电转，第3、5、7天取样计数，第7天收样检测。
包被液稀释2019-nCoV N蛋白抗原到1μg/ml，每孔100μL，4℃过夜；次日，洗涤液清洗2次，拍干；加入封闭液(20％BSA+80％PBS)，每孔120μL，37℃，1h，拍干；加入稀释后的细胞上清，100μL/孔，37℃，30min(部分上清1h)；洗涤液清洗5次，拍干；加入羊抗鼠IgG-HRP，每孔100μL，37℃，30min；洗涤液清洗5次，拍干；加入显色液A液(50μL/孔，含柠檬酸+醋酸钠+乙酰苯胺+过氧化脲)，加入显色液B液(50μL/孔，含柠檬酸+EDTA·2Na+TMB+浓HCL)，10min；加入终止液(50μL/孔，含EDTA·2Na+浓H2SO4)；酶标仪上450nm(参考630nm)处读OD值。结果显示细胞上清稀释1000倍后反应OD仍大于1.0，未加细胞上清孔反应OD小于0.1，表明质粒瞬转后产生的抗体对2019-nCoV N蛋白抗原有活性。
(2)重组抗体表达质粒线性化
准备下述试剂：Buffer 50μL、DNA 100μg/管、PuvⅠ酶10μL、无菌水补至500μL，37℃水浴酶切过夜；先用等体积酚/氯仿/异戊醇(下层)25:24:1，再用氯仿(水相)依次进行抽提；0.1倍体积(水相)3M醋酸钠和2倍体积乙醇冰上沉淀，70％乙醇漂洗沉淀，去除有机溶剂，待乙醇挥发完全用适量的灭菌水进行复融，最后进行浓度的测定。
(3)重组抗体表达质粒稳定转染，加压筛选稳定细胞株
质粒用超纯水稀释至400ng/ml，调节CHO细胞1.43×107cells/ml于离心管中，100μL质粒与700μL细胞混合，转入电转杯，电转，次日计数；25umol/L MSX 96孔加压培养约25天。
显微镜下观察标记长有细胞的克隆孔,并记录汇合度；取培养上清，送样检测；挑选抗体浓度、相对浓度高的细胞株转24孔，3天左右转6孔；3天后保种批培，调整细胞密度0.5×106cells/ml，2.2ml进行批培养，细胞密度0.3×106cells/ml，2ml进行保种；7天6孔批培上清送样检测，挑选抗体浓度及细胞直径较小的细胞株转TPP保种传代。
3重组抗体生产
(1)细胞扩培
细胞复苏之后先在125ml规格的摇瓶中培养，接种体积为30ml，培养基为100％Dynamis培养基，放置于转速120r/min，温度为37℃，二氧化碳为8％的摇床中。培养72h，以50万cells/ml接种密度接种扩培，扩培体积根据生产需求进行计算，培养基为100％Dynamis培养基。之后每72h扩培一次。当细胞量满足生产需求时，严格控制接种密度为50万cells/ml左右进行生产。
(2)摇瓶生产及纯化
摇瓶参数：转速120r/min，温度为37℃，二氧化碳为8％。流加补料：在摇瓶中培养至72h时开始每天补料，HyCloneTM Cell BoostTM Feed 7a每天流加初始培养体积的3％，Feed 7b每天流加量为初始培养体积的千分之一，一直补到第12天(第12天补料)。葡萄糖在第六天补加3g/L。第13天收样。用proteinA亲和层析柱进行亲和纯化。取4μg纯化的抗体进行还原性SDS-PAGE，4μg外来对照抗体作为对照，电泳图如下图1所示，在还原性SDS-PAGE后显示两条带，1条Mr为50KD(重链，SEQ ID NO:14)，另一条Mr为28KD(轻链，SEQ ID NO:13)。
实施例2
抗体的性能检测
(1)实施例1抗体及其突变体的活性检测
分析实施例1的抗体(WT)序列，其重链可变区如SEQ ID NO:12所示，其中，其中，重链可变区上的各互补决定区的氨基酸序列如下：
CDR-VH1：G-V(X1)-T-F-S-T(X2)-F-A(X3)-M-H；
CDR-VH2：Y-L(X1)-N-S-A(X2)-S-N-L(X3)-I-Y-Y-A-D-T-L(X4)-K；
CDR-VH3：T(X1)-R-H-A(X2)-M；
其轻链可变区如SEQ ID NO:11所示，其中，轻链可变区上的各互补决定区的氨基酸序列如下：
CDR1-VL：S-Q-S-I(X1)-D-Y-D(X2)-G-D-S-F(X3)-M；
CDR-VL2：D(X1)-A-S-N-V(X2)-E-S；
CDR-VL3：Q-H(X1)-S-N-E-D(X2)-P-Y。
在实施例1的抗新型冠状病毒抗体(WT)基础上，在互补决定区中对于抗体活性有关的位点进行突变，其中，X1、X2、X3、X4均为突变位点。见下表1。
表1与抗体活性有关的突变位点
Figure BDA0002750598310000111
对表1中的抗体结合活性检测：
包被液(主要成分NaHCO3)稀释2019-nCoV N蛋白抗原到1μg/ml进行微孔板包被，每孔100μl，4℃过夜；次日，洗涤液清洗2次，拍干；加入封闭液(20％BSA+80％PBS)，每孔120μl，37℃，1h，拍干；加入稀释后的表1中的单克隆抗体，100μl/孔，37℃，30min-60min；洗涤液清洗5次，拍干；加入羊抗鼠IgG-HRP，每孔100μl，37℃，30min；洗涤液(PBS)清洗5次，拍干；加入显色液A液(50μl/孔，含2.1g/L柠檬酸、12.25g/L柠檬酸、0.07g/L乙酰苯胺和0.5g/L过氧化脲)，加入显色液B液(50μl/孔，含1.05g/L柠檬酸、0.186g/LEDTA·2Na、0.45g/LTMB和0.2ml/L浓HCl)，10min；加入终止液(50μl/孔，含0.75g/EDTA·2Na和10.2ml/L浓H2SO4)；酶标仪上450nm(参考630nm)处读OD值。结果见下表2。
表2 WT抗体及其突变体的活性数据
抗体浓度(ng/ml) 5000 1000 500 250 125 0.00
WT 1.165 1.061 0.985 0.650 0.284 0.029
突变1 1.382 1.251 1.148 0.858 0.493 0.028
突变2 1.3014 1.2518 1.145 0.854 0.507 0.023
突变3 1.2201 1.296 1.195 0.802 0.501 0.025
突变4 1.284 1.291 1.156 0.864 0.484 0.022
突变5 1.204 1.130 1.052 0.743 0.358 0.090
从表2结果可以看出，WT和突变体都有较好的结合活性，其中，突变1的活性最佳。
(2)抗体及其突变体的亲和力检测
(a)在突变1的基础上，对各CDR区的其他位点进行突变，各突变的序列见下表3。
表3与抗体亲和力有关的突变位点
Figure BDA0002750598310000112
Figure BDA0002750598310000121
Figure BDA0002750598310000131
亲和力分析
利用AMC传感器，将纯化出来的抗体用PBST稀释到10μg/mL，2019-nCoV N蛋白抗原用PBST进行梯度稀释：1.41μg/mL、0.70μg/mL、0.35μg/mL、0.18μg/mL、0.09μg/mL、0.04μg/mL。
运行流程：缓冲液1(PBST)中平衡60s，抗体溶液中固化抗体300s，缓冲液2(PBST)中孵育180s，抗原溶液中结合420s，缓冲液2中解离1200s，用10mM pH 1.69GLY溶液及缓冲液3进行传感器再生，输出数据。KD表示平衡解离常数即亲和力；kon表示结合速率；kdis表示解离速率。结果见下表4。
表4亲和力检测数据
Figure BDA0002750598310000132
Figure BDA0002750598310000141
Figure BDA0002750598310000151
表4数据显示，突变1及其系列突变体都具有较好的亲和力，说明在突变1的基础上按表3的突变方式突变得到的抗体都具有较好的亲和力。
(b)在WT的基础上，对其他位点进行突变，并检测各突变体的亲和力，各突变的序列见下表5，对应的亲和力数据见表6。
表5以WT为骨架进行的突变
Figure BDA0002750598310000152
表6 WT抗体及其突变体的亲和力检测结果
Figure BDA0002750598310000153
Figure BDA0002750598310000161
表6数据显示，WT及其系列突变体对抗原也具有不错的亲和力，说明在WT的基础上，按表5的突变方式突变得到的抗体都具有不错的亲和力。
(3)裸抗稳定性考核
将上述抗体置于4℃(冰箱)、-80℃(冰箱)、37℃(恒温箱)放置21天，取7天、14天、21天样品进行状态观察，并对21天样品进行活性检测，结果显示三种考核条件下抗体放置21天均未见明显蛋白状态变化，活性也未随考核温度的升高呈下降趋势，说明上述抗体稳定。下表7突变1抗体为考核21天的酶免活性检测OD结果。
表7
样品浓度(ng/ml) 500 250 0
4℃，21天样品 1.189 0.951 0.030
-80℃，21天样品 1.250 0.998 0.033
37℃，21天样品 1.165 0.905 0.047
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 东莞市朋志生物科技有限公司
<120> 抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒
<160> 16
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala
20 25
<210> 2
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 3
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 4
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 4
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
1 5 10
<210> 5
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 5
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 6
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 6
Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 7
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 7
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe Leu
1 5 10 15
Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 8
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 8
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 9
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 9
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln
1 5 10 15
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr
20 25 30
Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln
35 40 45
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg
65 70 75 80
His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro
85 90 95
Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
100 105
<210> 10
<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 10
Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala
1 5 10 15
Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
50 55 60
Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val
65 70 75 80
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
85 90 95
Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro
100 105 110
Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
115 120 125
Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser
130 135 140
Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu
145 150 155 160
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
165 170 175
Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn
180 185 190
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro
195 200 205
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln
210 215 220
Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val
225 230 235 240
Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val
245 250 255
Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln
260 265 270
Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn
275 280 285
Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
290 295 300
Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His
305 310 315 320
Ser Pro Gly Lys
<210> 11
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 11
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Ile Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 12
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 12
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Val Thr Phe Ser Thr Phe
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Leu Asn Ser Ala Ser Asn Leu Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 13
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 13
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Ile Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln
115 120 125
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln
145 150 155 160
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg
180 185 190
His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro
195 200 205
Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210 215
<210> 14
<211> 438
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 14
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Val Thr Phe Ser Thr Phe
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Leu Asn Ser Ala Ser Asn Leu Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly
115 120 125
Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu
145 150 155 160
Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr
165 170 175
Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu
180 185 190
Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr
210 215 220
Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
225 230 235 240
Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp
245 250 255
Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp
260 265 270
Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
275 280 285
Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp
290 295 300
Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro
305 310 315 320
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala
325 330 335
Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp
340 345 350
Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile
355 360 365
Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn
370 375 380
Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys
385 390 395 400
Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys
405 410 415
Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu
420 425 430
Ser His Ser Pro Gly Lys
435
<210> 15
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 15
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Phe Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 16
<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 16
Thr Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala
1 5 10 15
Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
50 55 60
Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val
65 70 75 80
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
85 90 95
Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro
100 105 110
Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
115 120 125
Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser
130 135 140
Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu
145 150 155 160
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
165 170 175
Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn
180 185 190
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro
195 200 205
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln
210 215 220
Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val
225 230 235 240
Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val
245 250 255
Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln
260 265 270
Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn
275 280 285
Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
290 295 300
Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His
305 310 315 320
Ser Pro Gly Lys

Claims (28)

1.一种抗新型冠状病毒或其N蛋白的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段包括如下互补决定区：
CDR-VH1：G-X1-T-F-S-X2-F-X3-M-H；其中：X1是F；X2是S或T；X3是G或A；
CDR-VH2：Y-X1-N-S-X2-S-N-X3-I-Y-Y-A-D-T-X4-K；其中：X1是I；X2是G或A；X3是I、V或L；X4是I、V或L；
CDR-VH3：X1-R-H-X2-M；其中：X1是A；X2是A或V；
CDR-VL1：S-Q-S-X1-D-Y-X2-G-D-S-X3-M；其中：X1是I、V或L；X2是D或N；X3是Y；
CDR-VL2：X1-A-S-N-X2-E-S；其中：X1是A或D；X2是I、V或L；
CDR-VL3：Q-X1-S-N-E-X2-P-Y；其中：X1是N、H或Q；X2是D或E；其中，所述抗体或其功能性片段与新型冠状病毒的N蛋白以KD≤8×10-9mol/L的亲和力结合。
2.一种抗新型冠状病毒或其N蛋白的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段包括如下互补决定区：
CDR-VH1：G-X1-T-F-S-X2-F-X3-M-H；其中：X1是F；
CDR-VH2：Y-X1-N-S-X2-S-N-X3-I-Y-Y-A-D-T-X4-K；其中：X1是I；
CDR-VH3：X1-R-H-X2-M；其中：X1是A；
CDR-VL1：S-Q-S-X1-D-Y-X2-G-D-S-X3-M；其中：X3是Y；
CDR-VL2：X1-A-S-N-X2-E-S；
CDR-VL3：Q-X1-S-N-E-X2-P-Y；
所述抗体或其功能性片段的各互补决定区选自如下突变组合1-68中的任意一种：
CDR-VH1 X2/X3 CDR-VH2 X2/X3/X4 CDR-VH3 X2 CDR-VL1 X1/X2 CDR-VL2 X1/X2 CDR-VL3 X1/X2 突变组合1 T/A A/L/L A I/D D/V H/D 突变组合2 T/G A/V/I V V/D D/L H/E 突变组合3 S/A A/I/V V L/D D/I N/D 突变组合4 S/G G/V/L A I/N A/V N/E 突变组合5 T/A G/I/I V V/N A/L Q/D 突变组合6 S/G A/I/V A L/N A/I Q/E 突变组合7 T/G G/L/L A I/N A/L Q/D 突变组合8 T/A G/V/L V V/D D/V N/D 突变组合9 S/A A/L/V V L/N A/I H/D 突变组合10 T/A G/I/L A I/D D/L Q/E 突变组合11 T/A A/L/V A V/N A/V N/E 突变组合12 T/G A/L/I V L/D D/I H/E 突变组合13 T/G A/I/I V I/D D/L Q/E 突变组合14 T/G A/L/V A L/N A/V H/D 突变组合15 T/G G/L/L A V/D D/V N/E 突变组合16 S/G G/L/L V V/N A/L Q/D 突变组合17 S/G G/V/L V L/D D/I H/E 突变组合18 S/A G/L/I A I/N A/I N/D 突变组合19 T/G G/I/I A V/D D/I N/D 突变组合20 T/G G/V/V V I/N D/L Q/E 突变组合21 S/A A/L/V V L/D D/V H/D 突变组合22 T/G G/V/L A V/N A/I N/E 突变组合23 S/A A/V/L A I/D A/L Q/D 突变组合24 T/G A/L/L V L/N A/V H/E 突变组合25 S/G A/V/I V L/D D/L Q/E 突变组合26 T/G G/V/V A I/N A/L N/D 突变组合27 T/G A/I/L A V/D D/V H/E 突变组合28 S/A G/L/I V L/N A/V Q/D 突变组合29 S/G G/V/I V I/D D/I N/E 突变组合30 T/A A/V/V A V/N A/I H/D 突变组合31 T/A G/L/V A I/D A/V N/D 突变组合32 T/G G/V/I V L/N D/L N/E 突变组合33 T/A G/I/I V V/D A/L H/D 突变组合34 S/G G/I/V A V/N D/I H/E 突变组合35 T/A G/L/I A L/D A/I Q/D 突变组合36 S/G G/L/V V I/N D/V Q/E 突变组合37 S/G A/I/I V I/N D/I N/E 突变组合38 T/G G/I/V A V/D D/L Q/D 突变组合39 T/G G/V/L A L/N D/V H/E 突变组合40 T/G G/L/L V I/D A/I N/D 突变组合41 T/A G/L/L V V/N A/L Q/E 突变组合42 S/G G/I/V A L/D A/V H/D 突变组合43 T/A A/I/I A I/D A/L Q/E 突变组合44 S/G G/V/L V I/N D/V H/D 突变组合45 T/A A/V/V V L/D A/I N/E 突变组合46 S/A A/I/L A L/N D/L Q/D 突变组合47 S/G G/I/V A V/D A/V H/E 突变组合48 S/A G/V/V V V/N D/I N/D 突变组合49 T/G A/I/L V L/D D/I N/D 突变组合50 S/A G/I/V A I/N D/L Q/E 突变组合51 S/A G/V/V A V/D D/V H/D 突变组合52 S/G A/I/I V L/N A/I N/E 突变组合53 T/A A/L/V V I/D A/L Q/D 突变组合54 T/A A/I/I A V/N A/V H/E 突变组合55 S/A A/V/L A L/N D/L Q/E 突变组合56 T/G G/V/V V L/D A/V N/D 突变组合57 S/A A/V/I V V/N D/V H/E 突变组合58 T/G A/I/V A V/D A/L Q/D 突变组合59 S/G A/I/I A I/N D/I N/E 突变组合60 T/G G/V/I V I/D A/I H/D 突变组合61 S/G G/L/V V V/N A/V Q/E 突变组合62 T/A A/L/V A L/D D/L Q/D 突变组合63 T/G G/I/V V I/N A/V N/D 突变组合64 S/G A/V/I V V/D D/V H/D 突变组合65 T/A G/L/V A L/N A/L Q/E 突变组合66 S/G A/I/I A I/D D/I N/E 突变组合67 T/G G/V/I V V/N A/I H/E 突变组合68 T/G A/I/V A L/D D/L Q/D
。
3.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段与新型冠状病毒的N蛋白以KD≤8×10-9mol/L的亲和力结合。
4.根据权利要求2所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段与新型冠状病毒的N蛋白以KD≤7×10-10mol/L的亲和力结合。
5.一种抗新型冠状病毒或其N蛋白的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段包括如下互补决定区：
CDR-VH1：G-X1-T-F-S-X2-F-X3-M-H；其中：X1是V；
CDR-VH2：Y-X1-N-S-X2-S-N-X3-I-Y-Y-A-D-T-X4-K；其中：X1是L；
CDR-VH3：X1-R-H-X2-M；其中：X1是T；
CDR-VL1：S-Q-S-X1-D-Y-X2-G-D-S-X3-M；其中：X3是F；
CDR-VL2：X1-A-S-N-X2-E-S；
CDR-VL3：Q-X1-S-N-E-X2-P-Y；
所述抗体或其功能性片段的各互补决定区选自如下突变组合69-76中的任意一种：
CDR-VH1 X2/X3 CDR-VH2X2/X3/X4 CDR-VH3 X2 CDR-VL1 X1/X2 CDR-VL2 X1/X2 CDR-VL3 X1/X2 突变组合69 T/A A/L/L A I/D D/V H/D 突变组合70 T/G G/L/I V I/N D/V Q/D 突变组合71 S/A G/V/L A L/N D/V N/D 突变组合72 S/G G/L/L A V/N A/V Q/D 突变组合73 S/G A/L/L V L/D D/L Q/E 突变组合74 S/G G/I/L V L/D D/L H/E 突变组合75 T/A A/L/I A L/D A/L H/D 突变组合76 T/G G/I/L V V/D A/I N/E
。
6.根据权利要求1-5任一项所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体包括序列依次如SEQ ID NO:1-4所示的轻链骨架区FR1-L、FR2-L、FR3-L及FR4-L，和/或，序列依次如SEQ ID NO:5-8所示的重链骨架区FR1-H、FR2-H、FR3-H及FR4-H，或所述抗体包括序列如SEQ ID NO:15所示的FR1-H。
7.根据权利要求6所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体还包含恒定区。
8.根据权利要求7所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE和IgD中的任意一者的恒定区。
9.根据权利要求7所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述恒定区的种属来源为牛、马、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅或人。
10.根据权利要求9所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述恒定区的种属来源为乳牛。
11.根据权利要求9所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述恒定区的种属来源为火鸡或斗鸡。
12.根据权利要求9所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述恒定区的种属来源为小鼠。
13.根据权利要求7所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述恒定区的轻链恒定区序列如SEQ ID NO:9所示，所述恒定区的重链恒定区序列如SEQ ID NO:10所示或如SEQID NO:16所示。
14.根据权利要求7所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述功能性片段选自所述抗体的F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv中的任意一种。
15.一种检测新型冠状病毒或其N蛋白的试剂或试剂盒，其特征在于，其包括如权利要求1-14任一项所述的抗体或其功能性片段。
16.根据权利要求15所述的试剂或试剂盒，其特征在于，所述抗体或其功能性片段标记有可被检测的标记物。
17.根据权利要求16所述的试剂或试剂盒，其特征在于，所述可被检测的标记物选自荧光染料、催化底物显色的酶、放射性同位素、化学发光试剂和纳米颗粒类标记物。
18.根据权利要求17所述的试剂或试剂盒，其特征在于，所述荧光染料选自荧光素类染料及其衍生物、罗丹明类染料及其衍生物、Cy系列染料及其衍生物、Alexa系列染料及其衍生物和蛋白类染料及其衍生物。
19.根据权利要求17所述的试剂或试剂盒，其特征在于，所述催化底物显色的酶选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、碳酸酐酶、乙酰胆碱酯酶以及6-磷酸葡萄糖脱氧酶。
20.根据权利要求17所述的试剂或试剂盒，其特征在于，所述放射性同位素选自212Bi、131I、111In、90Y、186Re、211At、125I、188Re、153Sm、213Bi、32P、94mTc、99mTc、203Pb、67Ga、68Ga、43Sc、47Sc、110mIn、97Ru、62Cu、64Cu、67Cu、68Cu、86Y、88Y、121Sn、161Tb、166Ho、105Rh、177Lu、172Lu和18F。
21.根据权利要求17所述的试剂或试剂盒，其特征在于，所述化学发光试剂选自鲁米诺及其衍生物、光泽精、甲壳动物荧光素及其衍生物、联吡啶钌及其衍生物、吖啶酯及其衍生物、二氧环乙烷及其衍生物、洛粉碱及其衍生物和过氧草酸盐及其衍生物。
22.根据权利要求17所述的试剂或试剂盒，其特征在于，所述纳米颗粒类标记物选自纳米颗粒和胶体。
23.根据权利要求22所述的试剂或试剂盒，其特征在于，所述胶体选自胶体金属、分散型染料、染料标记的微球和乳胶。
24.根据权利要求23所述的试剂或试剂盒，其特征在于，所述胶体金属选自胶体金、胶体银和胶体硒。
25.根据权利要求22所述的试剂或试剂盒，其特征在于，所述纳米颗粒选自有机纳米颗粒、磁性纳米颗粒、量子点纳米颗粒和稀土络合物纳米颗粒。
26.一种载体，其特征在于，其含有编码如权利要求1-14任一项所述的抗体或其功能性片段的核酸片段。
27.一种重组细胞，其特征在于，其含有权利要求26所述的载体。
28.一种制备如权利要求1-14任一项所述的抗体或其功能性片段的方法，其特征在于，其包括：培养权利要求27所述的重组细胞，从培养产物中分离纯化得到所述抗体或其功能性片段。
CN202011182628.XA 2020-10-29 2020-10-29 抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒 Active CN112239501B (zh)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011182628.XA CN112239501B (zh) 2020-10-29 2020-10-29 抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒
KR1020237017479A KR20230096021A (ko) 2020-10-29 2021-09-10 신종 코로나바이러스에 대한 항체, 신종 코로나바이러스의 검출을 위한 시약 및 키트
PCT/CN2021/117802 WO2022089044A1 (zh) 2020-10-29 2021-09-10 抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒
CA3200148A CA3200148A1 (en) 2020-10-29 2021-09-10 Antibody against novel coronavirus, and reagent and kit for detecting novel coronavirus
JP2023526469A JP2023551103A (ja) 2020-10-29 2021-09-10 新型コロナウイルスに対する抗体、新型コロナウイルスを検出する試薬及びキット
US18/034,394 US20230391853A1 (en) 2020-10-29 2021-09-10 Antibody against Novel Coronavirus, and Reagent and Kit for Detecting Novel Coronavirus

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011182628.XA CN112239501B (zh) 2020-10-29 2020-10-29 抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112239501A CN112239501A (zh) 2021-01-19
CN112239501B true CN112239501B (zh) 2022-01-07

Family

ID=74168427

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011182628.XA Active CN112239501B (zh) 2020-10-29 2020-10-29 抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20230391853A1 (zh)
JP (1) JP2023551103A (zh)
KR (1) KR20230096021A (zh)
CN (1) CN112239501B (zh)
CA (1) CA3200148A1 (zh)
WO (1) WO2022089044A1 (zh)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112239501B (zh) * 2020-10-29 2022-01-07 东莞市朋志生物科技有限公司 抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒
CN116769042A (zh) 2021-06-17 2023-09-19 东莞市朋志生物科技有限公司 嵌合的免疫球蛋白
CN115838417B (zh) * 2021-09-18 2023-06-27 东莞市朋志生物科技有限公司 一种抗新冠突变型n蛋白的抗体、其制备方法和用途
CN115197316B (zh) * 2021-11-08 2023-05-16 东莞市朋志生物科技有限公司 抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒
CN114409767A (zh) * 2021-12-08 2022-04-29 广东菲鹏生物有限公司 一种鉴别新冠突变型抗原的抗体、试剂及方法
CN114236139A (zh) * 2021-12-30 2022-03-25 苏州和锐生物科技有限公司 一种TNF-α生物制剂的抗体检测试剂盒、制备方法
CN114264827A (zh) * 2021-12-30 2022-04-01 苏州和锐生物科技有限公司 一种白介素生物制剂的抗体检测试剂盒及制备方法
CN116444657B (zh) * 2022-01-10 2023-10-31 东莞市朋志生物科技有限公司 抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒
CN116836279B (zh) * 2022-03-23 2024-02-13 东莞市朋志生物科技有限公司 抗四碘甲状腺素的抗体、检测四碘甲状腺素的试剂和试剂盒
CN116925216B (zh) * 2022-04-11 2024-09-24 东莞市朋志生物科技有限公司 抗血清淀粉样蛋白a抗体、检测血清淀粉样蛋白a的试剂和试剂盒
CN115028715B (zh) * 2022-06-23 2023-08-18 生工生物工程（上海）股份有限公司 一种抗新型冠状病毒的抗体或其抗原结合片段、试剂盒及应用
CN117886929A (zh) * 2022-10-08 2024-04-16 东莞市朋志生物科技有限公司 抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒的试剂和试剂盒
CN115806611B (zh) * 2022-11-16 2023-07-25 杭州华葵金配生物科技有限公司 抗新型冠状病毒n蛋白的抗体及其应用
CN115894674B (zh) * 2022-12-20 2023-07-25 厦门润康源生物科技有限公司 一种用于检测冠状病毒的抗体及制备方法和应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111560070A (zh) * 2020-05-27 2020-08-21 江苏省疾病预防控制中心(江苏省公共卫生研究院) 针对新型冠状病毒np蛋白的抗体及其检测应用
CN111704666A (zh) * 2020-04-22 2020-09-25 北京科卫临床诊断试剂有限公司 新型冠状病毒n蛋白的配对单克隆抗体及其应用
CN111733141A (zh) * 2020-06-19 2020-10-02 清华大学深圳国际研究生院 一种可分泌抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞、单克隆抗体及应用
CN111748033A (zh) * 2020-05-27 2020-10-09 江苏省疾病预防控制中心(江苏省公共卫生研究院) 一种与新型冠状病毒np蛋白结合的分离抗体、包含其的检测试剂盒

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1829736A (zh) * 2003-04-10 2006-09-06 希龙公司 严重急性呼吸道综合征冠状病毒
ES2529736T3 (es) * 2003-04-10 2015-02-25 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Composición inmunogénica que comprende una proteína espicular del coronavirus del SARS
WO2004092208A2 (en) * 2003-04-15 2004-10-28 Her Majesty The Queen In Right Of Canada As Represented By The Minister Of Health Sars-related proteins
US20060240515A1 (en) * 2003-07-21 2006-10-26 Dimitrov Dimiter S Soluble fragments of the SARS-CoV spike glycoprotein
RU2609627C2 (ru) * 2014-09-26 2017-02-02 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Высокоаффинные и агрегационно стабильные антитела на основе вариабельных доменов vl и производного vhh
CN105457024B (zh) * 2014-10-13 2021-03-16 李小彦 抗butyrophilin-3人源化抗体及其使用
CN112239501B (zh) * 2020-10-29 2022-01-07 东莞市朋志生物科技有限公司 抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒
CN112239500B (zh) * 2020-10-29 2022-01-07 东莞市朋志生物科技有限公司 抗新型冠状病毒的抗体和检测新型冠状病毒的试剂盒

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111704666A (zh) * 2020-04-22 2020-09-25 北京科卫临床诊断试剂有限公司 新型冠状病毒n蛋白的配对单克隆抗体及其应用
CN111560070A (zh) * 2020-05-27 2020-08-21 江苏省疾病预防控制中心(江苏省公共卫生研究院) 针对新型冠状病毒np蛋白的抗体及其检测应用
CN111748033A (zh) * 2020-05-27 2020-10-09 江苏省疾病预防控制中心(江苏省公共卫生研究院) 一种与新型冠状病毒np蛋白结合的分离抗体、包含其的检测试剂盒
CN111733141A (zh) * 2020-06-19 2020-10-02 清华大学深圳国际研究生院 一种可分泌抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞、单克隆抗体及应用

Also Published As

Publication number Publication date
KR20230096021A (ko) 2023-06-29
CN112239501A (zh) 2021-01-19
JP2023551103A (ja) 2023-12-07
US20230391853A1 (en) 2023-12-07
CA3200148A1 (en) 2022-05-05
WO2022089044A1 (zh) 2022-05-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112239501B (zh) 抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒
CN112239500B (zh) 抗新型冠状病毒的抗体和检测新型冠状病毒的试剂盒
CN111574631B (zh) 针对硫氧还蛋白的抗体、缀合物和检测试剂盒
CN114276441B (zh) 抗乙型流感病毒的抗体及其制备方法和检测试剂盒
WO2023078447A1 (zh) 抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒
CN114276440A (zh) 针对乙型流感病毒的抗体和检测试剂盒
CN114316032B (zh) 抗乙型流感病毒的抗体、检测乙型流感病毒的试剂和试剂盒
CN114181303B (zh) 抗甲型流感病毒的抗体和试剂盒
CN114075277B (zh) 抗甲型流感病毒的抗体和检测甲型流感病毒的试剂盒
CN114181304A (zh) 抗甲型流感病毒的抗体、检测试剂盒以及制备方法
CN116444657B (zh) 抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒
CN117088982B (zh) 抗甲基苯丙胺抗体、检测甲基苯丙胺的试剂和试剂盒
CN114605537B (zh) 抗胃泌素释放肽的抗体、检测试剂与试剂盒
CN114605550B (zh) 抗ca19-9的抗体、其应用和检测ca19-9的试剂盒
CN114516915B (zh) 抗n末端脑钠肽前体的抗体以及制备抗体的方法
CN114478759A (zh) 抗人血红蛋白的抗体及其应用和诊断试剂盒
CN114478764A (zh) 抗amh的抗体、检测amh的试剂和试剂盒
CN114605533B (zh) 抗恶性疟原虫hrp-ii的抗体、检测恶性疟原虫的试剂和试剂盒
CN114181302B (zh) 针对甲型流感病毒的抗体、试剂盒和载体
CN114075278B (zh) 抗Flu-A的抗体及其制备方法和检测试剂盒
CN114075280B (zh) 抗ngal的单克隆抗体及其应用和检测试剂盒
CN114516913B (zh) 抗n末端脑钠肽前体的抗体和检测试剂盒
CN116836273B (zh) 抗血清淀粉样蛋白a抗体、检测血清淀粉样蛋白a的试剂和试剂盒
CN117088975B (zh) 抗白蛋白抗体、检测白蛋白的试剂和试剂盒
CN117285639B (zh) 一种抗乙基葡萄糖醛酸苷抗体、检测乙基葡萄糖醛酸苷的试剂和试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant