CN102192982A - 血液样品的快速免疫检测方法及检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种血液样品的快速免疫检测方法及检测试剂盒，该方法包括去除所述样品中的红细胞的步骤，所述的去除红细胞的步骤是通过使全血样品流过其中包被固定了抗红细胞抗体或抗红细胞抗体的活性片段的固相载体，在样品流经所述固相载体的过程中，红细胞与抗红细胞抗体或抗红细胞抗体的活性片段结合从而被截留在该固相载体中；所述的固相载体由经封闭处理的吸水介质组成。本发明的血液样品的快速免疫检测方法及检测试剂盒，可以很有效地截留血液样品中的红细胞，与现有技术相比，可以直接以全血为样品进行检测，克服了只能以血清为样品的血清化验法的局限性，节省血量和检测时间，并且检测灵敏度高。

Description

血液样品的快速免疫检测方法及检测试剂盒
技术领域
本发明属于诊断免疫分析技术领域。
背景技术
血清学化验法是当前最主要的医用快速诊断方法之一。血清学化验法的基本检测原理为采用酶联免疫法检测患者的血清样品中的各项指标(如某种免疫球蛋白含量)。
目前，血清学化验法能够在短时间内(10-30分钟)完成检测，达到快速诊断的目的。然而，该方法需要以血清为样本。通常血清样本是由全血制备而来，1毫升的全血只能制备约0.3毫升实验用血清，并且需要耗时30分钟到60分钟。对于比较特殊的情况，例如采血量有限的情况(如儿科)很难制备获得足量的血清样品，或者时间紧迫的情况(如急救)，没有时间来制备血清样品。
因此，以血清为样品的血清化验法具有很大的局限性。若能够直接以全血作为样品，可以极大地节省血量和检测时间。然而，全血不能直接用于以血清为样品的诊断法，由于全血中的红细胞的红颜色会覆盖住酶联免疫法的显色反应的检测结果。
现有技术中也曾介绍过两种去除全血中红细胞的方法，其中一种是多聚糖吸附法，利用多聚糖与红细胞的相互作用把红细胞截留；另一种是采用一种水溶性的特种氨基酸(血球分离剂)把红细胞截留。而这些方法都存在着类似的问题，不能有效地去除全血中的红细胞。
发明内容
本发明的一方面提供了一种去除全血样品中的红细胞的方法，该方法主要是通过使全血样品流过其中包被固定了抗红细胞抗体或抗红细胞抗体的活性片段的固相载体，在样品流经所述固相载体的过程中，红细胞与抗红细胞抗体或抗红细胞抗体的活性片段结合从而被截留在该固相载体中；所述的固相载体由经封闭处理的吸水介质组成。
采用上述技术方案的去除全血样品中的红细胞的方法，当血液样品加入到固相载体中，红细胞被抗红细胞抗体或抗红细胞抗体的活性片段吸附，其他的血液成分则可以自由流动，从而达到红细胞的分离。一方面可以很有效地截留全血样品中的红细胞，解决现有技术中因红细胞无法去除而导致无法使用全血为样品进行快速诊断的问题；另一方面，采用了经封闭处理的吸水介质作为固相载体，在有效截留红细胞的同时，基本不会造成样品中的其他组分的流失。
优选的，所述的吸水介质为多孔层析介质，其平均孔径为1-100微米；所述的封闭处理是采用动物血清或者表面活性剂的溶液来处理。
所述的封闭处理为本领域技术人员所熟知的固相载体处理技术，主要是通过动物血清或者表面活性剂的溶液来处理，其中表明活性剂溶液可以选用本领域技术人员所熟知的一些能够用于处理固相载体的溶液，例如BSA溶液。
更优选的，所述的固相载体为滤纸、硝酸纤维素膜、尼龙膜、聚乙烯膜、无纺布。
优选的，所述的抗红细胞抗体为单克隆抗体或多克隆抗体，所述的抗红细胞抗体的活性片段为单克隆或多克隆抗体的F(ab’)2、Fab’、Fab片段。
本发明另一方面提供了一种血液样品的快速免疫检测方法，该方法包括去除所述样品中的红细胞的步骤以及随后的酶联免疫检测步骤，所述的去除红细胞的步骤是通过使全血样品流过其中包被固定了抗红细胞抗体或抗红细胞抗体的活性片段的固相载体，在样品流经所述固相载体的过程中，红细胞与抗红细胞抗体或抗红细胞抗体的活性片段结合从而被截留在该固相载体中；
在本发明的一个具体实施方式中，血液样品为全血样品。
本发明还提供了一种血液样品的快速免疫检测试剂盒，该试剂盒包括一被固定在固态底板上的侧向流动装置，该装置按样品流动方向依次包括加样区、标记区、捕获区、吸收区，所述的加样区为包被固定了抗红细胞抗体或抗红细胞抗体的活性片段的固相载体；所述的固相载体由经封闭处理的吸水介质组成；所述的吸收区能够吸引装置中的样品朝吸收区定向流动；所述的标记区装载了能够与流经的样品中的待检测物质特异性结合的酶标记抗体；所述的捕获区的固相载体上包被固定了能够特异性结合所述酶标记抗体的抗体。
血液样品被加到加样区后，活细胞与加样区的抗红细胞抗体或抗红细胞抗体的活性片段结合而被截留，除红细胞外的其他成分由于受吸收区的吸引而定向流动。在标记区内，待检测物质与酶标记抗体(偶联了显色物的特异性抗体)的特异性结合；在标记区形成的待检测物质-酶标记抗体复合物继续流动到捕获区，该复合物被事先包被固定在捕获区固相载体上的能够特异性结合所述酶标记抗体的抗体捕获，在捕获区显出有色条带，从而达到定性检测血液样品中特定物质的目的。
在本发明的一个具体实施方式中，快速免疫检测试剂盒检测的血液样品为全血样品。
上述的待检测物质可以是白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞等细胞；也可以是多肽、蛋白质；也可以是抗原、半抗原、抗体；也可以是激素、淋巴因子、维生素、药物、代谢物及其相应受体和结合物、类固醇、维生素等。
采用本发明的血液样品的快速免疫检测方法及检测试剂盒，可以很有效地截留血液样品中的红细胞，解决了现有技术中因红细胞无法去除而导致无法使用全血为样品进行快速诊断的问题。与现有技术相比，可以直接以全血为样品进行检测，克服了只能以血清为样品的血清化验法的局限性，节省血量和检测时间，并且检测灵敏度高。
附图说明
附图1为本发明的血液样品的快速免疫检测试剂盒的示意图。
具体实施方式
以下结合实施例来进一步阐述本发明的血液样品的快速免疫检测方法及检测试剂盒。
如图1所示，血液样品的快速免疫检测试剂盒的示意图。该试剂盒包括一被固定在固态底板上的侧向流动装置，该装置按样品流动方向依次包括加样区、标记区、捕获区、吸收区(所有区均固定在一整块固态底板上)。
抗红细胞抗体被包被固定在加样区内。加样区的固相载体为平均孔径为60微米的无纺布，并经过BSA溶液来封闭处理；标记区的固相载体与加样区相同；捕获区的固相载体为硝酸纤维素膜。整个装置的长度为110毫米左右，宽度为10毫米左右，厚度为0.5毫米左右。
实施例1
本实施例中，采用上述检测试剂盒进行对比试验，检验其截留红细胞的功能。
取三个上述的检测试剂盒，分别为试剂盒A、B、C；
试剂盒A：将兔抗人抗红细胞IgG抗体包被固定在加样区内(包被方法为直接将抗体与加样区的不吸水介质冷冻冻干在一起)。
试剂盒B：兔IgG抗体包被固定在加样区内(包被方法同试剂盒A)。
试剂盒C：没有抗体包被在加样区内。
然后在三个试剂盒的加样区内各加一滴全血(每个试剂盒添加的是相同的全血，约40微升)。实验结果参见表1，结果表明兔抗人抗红细胞IgG能够有效地把红细胞截留在加样区里。
表1
Figure GSA00000025496700041
实施例2
采用上述检测试剂盒，以及本发明的血液样品的快速免疫检测方法来检测全血中的IgE含量。
本实施例中的检测试剂盒，兔抗人抗红细胞IgG抗体包被固定在加样区内(包被方法为直接将抗体与加样区的不吸水介质冷冻冻干在一起)；标记区里载有(非固定的形式)偶联了蓝色微球的鼠抗人IgE的单克隆抗体；捕获区里包被固定有羊抗人IgE的多克隆抗体。
样品为5份肝素化全血(本底IgE 10IU/ml)，分别添加了200、100、50、20、10IU/ml的IgE。取5个上述的检测试剂盒，对应的，将5份样品(各约40微升)分别加到各个试剂盒的加样区，开始检测。实验结果参见表2，结果表明以全血为样品的快速免疫检测方法能够检测出全血中IgE的含量(表2的结果是当量相关的)，检测灵敏度达到了10IU/ml的IgE。
表2
本发明的血液样品的快速免疫检测方法及检测试剂盒并不局限于上述的实施例，凡根据本发明的精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (9)

1.一种去除全血样品中的红细胞的方法，其特征在于：该方法主要是通过使全血样品流过其中包被固定了抗红细胞抗体或抗红细胞抗体的活性片段的固相载体，在样品流经所述固相载体的过程中，红细胞与抗红细胞抗体或抗红细胞抗体的活性片段结合从而被截留在该固相载体中；
所述的固相载体由经封闭处理的吸水介质组成。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的吸水介质为多孔层析介质，其平均孔径为1-100微米；所述的封闭处理是采用动物血清或者表面活性剂的溶液来处理。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的固相载体为滤纸、硝酸纤维素膜、尼龙膜、聚乙烯膜、无纺布。
4.如权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于：所述的抗红细胞抗体为单克隆抗体或多克隆抗体，所述的抗红细胞抗体的活性片段为单克隆或多克隆抗体的F(ab’)2、Fab’、Fab片段。
5.一种血液样品的快速免疫检测方法，该方法包括去除所述样品中的红细胞的步骤以及随后的酶联免疫检测步骤，其特征在于：所述的去除红细胞的步骤是通过使全血样品流过其中包被固定了抗红细胞抗体或抗红细胞抗体的活性片段的固相载体，在样品流经所述固相载体的过程中，红细胞与抗红细胞抗体或抗红细胞抗体的活性片段结合从而被截留在该固相载体中；
所述的固相载体由经封闭处理的吸水介质组成。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述的吸水介质为多孔层析介质，其平均孔径为1-100微米；所述的封闭处理是采用动物血清或者表面活性剂的溶液来处理。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述的固相载体为滤纸、硝酸纤维素膜、尼龙膜、聚乙烯膜、无纺布。
8.如权利要求5、6或7所述的方法，其特征在于：所述的抗红细胞抗体为单克隆抗体或多克隆抗体，所述的抗红细胞抗体的活性片段为单克隆或多克隆抗体的F(ab’)2、Fab’、Fab片段。
9.一种血液样品的快速免疫检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括一被固定在固态底板上的侧向流动装置，该装置按样品流动方向依次包括加样区、标记区、捕获区、吸收区，
所述的加样区为包被固定了抗红细胞抗体或抗红细胞抗体的活性片段的固相载体；所述的固相载体由经封闭处理的吸水介质组成；
所述的吸收区能够吸引装置中的样品朝吸收区定向流动；
所述的标记区装载了能够与流经的样品中的待检测物质特异性结合的酶标记抗体；
所述的捕获区的固相载体上包被固定了能够特异性结合所述酶标记抗体的抗体。
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