CN204422542U - 二联抗体快检试纸条 - Google Patents
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Abstract
本实用新型提供一种二联抗体快检试纸条，包括依次排布的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水部，所述结合物垫为涂覆有以碳量子点标记的，能与待检测抗体特异性结合的抗原的纤维素膜；所述硝酸纤维素膜上依次包被有，能与待检测抗体特异性结合的抗原，能捕获待检测抗体IgM的第二抗体，和能与碳量子点标记抗原相结合的抗体。本实用新型所提供的试纸条，可定性或定量检测样品中的IgM/IgG抗体，能提高现有免疫层析检测技术的灵敏度，适用于多种感染性疾病抗体的快速、高灵敏度检测。
Description
技术领域
本实用新型涉及一种基于以碳量子点标记抗原为示踪物的IgM/IgG二联抗体快检试纸条。
背景技术
免疫层析方法是一种快速诊断技术，具有携带方便、操作简便、成本低廉的特点，目前最为常见的是胶体金试纸条，其一般可以在15分钟内读取检测结果，但该试纸条的灵敏度一般在纳克级，相对较低，并且制作工艺复杂，稳定性和重复性差。以碳量子点标记为示踪物的免疫层析快检是将具有高灵敏度的碳量子标记技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。碳量子点免疫分析技术具有灵敏度高、快速、准确、重复性好等优点。如何能够发挥试纸条现场快速检测的优势，同时提高检测的灵敏度，并对抗原或者抗体的浓度做定量分析，这些都是免疫层析检测领域技术人员迫切需要解决的问题。
实用新型内容
为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本实用新型提出一种基于以碳量子点标记抗原建立的二联抗体(IgG/IgM)快检试纸条及其应用，本发明还涉及二联抗体快检试纸条检测样品中抗体的方法。
本实用新型涉及一种以碳量子点标记抗原为示踪物的IgM/IgG二联抗体快检试纸条，该试纸条包括依次排布的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水部，所述结合物垫为涂覆有以碳量子点标记的，能与待检测抗体特异性结合的抗原（CNP-Ag）的纤维素膜；所述硝酸纤维素膜上依次包被有，能与待检测抗体特异性结合的抗原（Ag）；能捕获待检测抗体IgM的第二抗体（抗IgM抗体）；能与碳量子点标记抗原相结合的抗体。
具体来讲，该结合物垫为涂覆有以碳量子点标记的，能与待检测抗体特异性结合的抗原（CNP-Ag）的玻璃纤维素膜；所述待检测抗体是指弓形虫抗体或巨细胞病毒抗体；所述能与待检测抗体特异性结合的抗原是指弓形虫抗原或巨细胞病毒抗原。
使用本实用新型所提供试纸条进行特异性抗体的检测。该试纸条易于制备，使用方便快捷，将普通免疫检测由几小时缩短到几分钟，而灵敏度却要高于一般胶体金试纸条的和现有技术公开的化学发光试纸条。本实用新型所提供的试纸条可广泛应用于各种生物抗体的检测。
附图说明
图1本实用新型所提供试纸条的示意图。
图中：1：加样区，2：观测区，3：T1线，4：T2线，5：C线，6：卡壳。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本实用新型作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本实用新型并能予以实施，但所举实施例不作为对本实用新型的限定。
本实用新型所使用的所有材料，包括抗原和抗体，都是现有技术中已经存在，本领域技术人员根据现有技术能够获得的材料。本领域技术人员基于实施本实用新型目的需要，也可以从申请人处获得这些材料。本实用新型的发明点在于这些现有技术在试纸条中的布局关系。
本实用新型所提供的基于碳量子点的二联抗体快检试纸条的制备方法简述如下：
在聚氯乙烯（PVC）胶板上顺次相互搭接贴上样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸。将PVC胶板及其贴附的材料切割成4mm宽度的层析试纸条。装入卡壳内，卡壳上开窗口，分为加样区和发光区。样品垫位于加样区，硝酸纤维素膜位于发光区。
本实用新型提供用于检测IgM/IgG二联抗体的快检试纸条，所述样品垫为纤维素膜；所述结合物垫为涂覆有以碳量子点标记的，能与待检测抗体特异性结合的抗原（CNP-Ag）的玻璃纤维素膜；所述硝酸纤维素膜上包被有三条线，分别为T1线，即能与待检测抗体特异性结合的抗原（Ag），与碳量子点所标记抗原相同；T2线，即能捕获待检测抗体IgM的第二抗体（抗IgM抗体）；C线，即能与碳量子点标记抗原相结合的抗体。
本实用新型所提供试纸条的应用示例如下：
本实用新型所提供试纸条，在加样区上加入待检样品后，待检样品中的抗体与结合物垫中的以碳量子点标记的抗原（CNP-Ag）结合形成复合物，在虹吸作用下，复合物向试纸条的另一端方向运动，运动到硝酸纤维素膜上被膜上第一条抗原线（T1线）结合、滞留，在此处形成发光的条带，待检样品中抗体的含量越高发光反应越强；如果待检测样品中含有特异的IgM抗体则与结合物垫中的以碳量子点标记的抗原（CNP-Ag）结合形成以碳量子点标记抗原-IgM抗体的复合物，复合物继续运动被第二条线上包被的能与待检样品中的IgM抗体特异结合的第二抗(T2线)结合、滞留形成发光条带，待检测的抗体含量越高发光反应越强。当T1为阳性，T2也为阳性，样品为IgM阳性；当T1为阳性，T2为阴性，样品为IgG阳性。本实用新型所提供的试纸条，能同时检测待检样品中的IgG和IgM抗体，可用于感染类疾病的诊断。过量的以碳量子点标记的抗原会继续沿着膜的方向运动，运动到包被有能与之特异性结合的抗体处被结合、滞留形成质控线，即C线。该质控线是用于衡量方法有效与否的标准，若C线处没有发光条带，表明该检测系统失效，检测结果判定为无效。
绘制被检测物的浓度与碳量子点发光的光强标准曲线，可以对待检样品中抗体浓度做定量分析。
使用本实用新型所提供试纸条进行特异性抗体的检测。该试纸条易于制备，使用方便快捷，将普通免疫检测由几小时缩短到几分钟，而灵敏度却要高于一般胶体金试纸条的和现有技术公开的化学发光试纸条。本实用新型所提供的试纸条可广泛应用于各种生物抗体的检测。
检测试纸条的制备：
1、将待检测目标抗体的对应抗原用碳二亚胺（EDC）方法链接到碳量子点(CNP)上，分离、纯化后稀释至工作浓度，涂于玻璃纤维结合物垫上，37度干燥2小时后备用。
2、将能与蛋白质特异结合的硝酸纤维素膜粘附到PVC胶板的中间位置上备用。样品垫（玻璃纤维膜），结合有被碳量子点标记的抗原的结合物垫，硝酸纤维素膜和吸水纸按照顺序，依次相互搭接贴在PVC胶板上；
3、采用三维平面划膜仪将所需要的T1线抗原、T2线抗IgM抗体和C线与以碳量子点标记抗原特异结合的抗体，按照浓度为0.2～0.5mg/mL左右包被在硝酸纤维素膜上。仪器参数设置为1微升/厘米，T1线、T2线和C线的宽度间隔为4毫米；37度2小时备用。
4、按顺序分别将样品垫，结合物垫粘附到PVC胶板上硝酸纤维素膜的一端，再将吸水纸粘附到PVC胶板上硝酸纤维素膜上的另一端；在切条机上将PVC胶板及其贴附的材料切成4mm宽度的层析试纸条备用。
5、将切割好的试纸条，装在卡壳内，卡壳上开有加样区和发光区，样品垫对准加样区，T1线、T2线和C线区域对准发光区。
6、将组装好的试纸条装在铝箔袋中密封常温保存，备用。
抗体检测
滴加3滴血液样品（100μl）于加样孔（样品垫）中，10分钟之后进行测量。
结果判断：
当T1为阳性，T2也为阳性，样品为IgM阳性；
当T1为阳性，T2为阴性，样品为IgG阳性。
当T1为阴性，T2为阴性，样品为阴性
当C线处未显示出发光条带时表明该检测系统无效。
实施例1弓形体IgM/IgG二联抗体快检
采用上述工艺和方法所制备的试纸条对临床确诊的弓形虫抗体阴性血清200份、弓形虫抗体IgM阳性血清150份和弓形虫抗体IgG阳性血清152份分别进行了检测，结果符合率较高。
| 测试标本 | 测试结果 | 符合率（%） | |
| IgM阳性样品 | 150 | 150 | 100 |
| IgG阳性样品 | 152 | 152 | 100 |
| 阴性样品 | 200 | 200 | 100 |
实施例2：巨细胞IgM/IgG二联抗体快检
采用上述工艺和方法所制备的试纸条对临床确诊的巨细胞病毒抗体阴性血清200份、巨细胞病毒抗体IgG阳性血清163份和巨细胞病毒抗体IgM阳性血清150份分别进行了检测，结果符合率较高。
| 测试标本 | 测试结果 | 符合率（%） | |
| IgG阳性样品 | 163 | 163 | 100 |
| IgM阳性样品 | 150 | 150 | 100 |
| 阴性样品 | 200 | 198 | 99 |
以上所述实施例仅是为充分说明本实用新型而所举的较佳的实施例，本实用新型的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本实用新型基础上所作的等同替代或变换，均在本实用新型的保护范围之内。
Claims (5)
1.二联抗体快检试纸条，包括依次排布的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水部，其特征在于，所述结合物垫为涂覆有以碳量子点标记的，能与待检测抗体特异性结合的抗原的纤维素膜；所述硝酸纤维素膜上依次包被有，能与待检测抗体特异性结合的抗原，能捕获待检测抗体IgM的第二抗体，和能与碳量子点标记抗原相结合的抗体。
2.权利要求1所述试纸条，其特征在于，所述结合物垫为涂覆有以碳量子点标记的，能与待检测抗体特异性结合的抗原的玻璃纤维素膜。
3.权利要求1所述试纸条，其特征在于，所述待检测抗体是指弓形虫抗体或巨细胞病毒抗体。
4.权利要求1所述试纸条，其特征在于，所述能与待检测抗体特异性结合的抗原是指弓形虫抗原或巨细胞病毒抗原。
5.权利要求1-4任一项所述试纸条，其特征在于，所述试纸条还包括卡壳。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105181661A (zh) * | 2015-08-11 | 2015-12-23 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 荧光定量联合检测弓形虫IgG、IgM抗体试剂盒 |
| CN112881695A (zh) * | 2021-03-16 | 2021-06-01 | 首都医科大学附属北京友谊医院 | 一种血清CENPF抗体（IgG和IgM）检测胶体金试纸条 |
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2013
- 2013-10-31 CN CN201320685044.3U patent/CN204422542U/zh not_active Expired - Lifetime
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