CN205027759U - 三联抗体快检试纸条 - Google Patents
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Abstract
本实用新型提供一种三联抗体快检试纸条，包括依次排布的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水部，所述结合物垫为涂覆有以碳量子点标记的，与待检测抗体特异结合的抗原的纤维膜；所述硝酸纤维素膜上依次包被有，与待检测抗体特异结合的抗原、捕获待检测抗体IgM的抗体、捕获待检测抗体IgA的抗体，以及待检测抗体所对应抗原的特异性抗体。本实用新型所提供的试纸可同时定性或定量检测样品中的IgG/IgM/IgA抗体。提高现有免疫层析检测技术的灵敏度，应用于多种感染性疾病多种抗体的快速、高灵敏度检测。
Description
技术领域
本实用新型涉及一种碳量子点标记抗原三联抗体(IgG/IgM/IgA)快检试纸条。
背景技术
免疫层析方法是一种快速诊断技术，具有携带方便、操作简便、成本低廉的特点，目前最为常见的是胶体金试纸条，其一般可以在15分钟内读取检测结果，但该试纸条的灵敏度一般在纳克级，相对较低。碳量子点免疫分析是将具有高灵敏度的碳量子标记技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。碳量子点免疫分析技术具有灵敏度高、快速、准确、重复性好等优点。如何能够发挥试纸条现场快速检测的优势，同时提高检测的灵敏度，并对抗原或者抗体的浓度做定量分析，这些都是免疫层析检测领域技术人员迫切需要解决的问题。
实用新型内容
为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本实用新型提出一种基于以碳量子点标记抗原建立的三联抗体(IgG/IgM/IgA)快检试纸条及其应用，本发明还涉及三联抗体(IgG/IgM/IgA)快检试纸条检测样品中抗体的方法。
该试纸条包括依次排布的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水部，所述结合物垫为涂覆有以碳量子点标记的，与待检测抗体特异结合的抗原（CNP-Ag）的纤维膜；所述硝酸纤维素膜上依次包被有，与待检测抗体特异结合的抗原（Ag）、捕获待检测抗体IgM的抗体、捕获待检测抗体IgA的抗体，以及待检测抗体所对应抗原的特异性抗体(Ab)。
具体来讲，所述结合物垫为涂覆有以碳量子点标记的，与待检测抗体特异结合的抗原（CNP-Ag）的玻璃纤维膜；所述待检测抗体为肺炎支原体抗体或EB病毒抗体；所述与待检测抗体特异结合的抗原（Ag）为肺炎支原体抗原或EB病毒抗原。
该试纸条易于制备，使用方便快捷，将普通免疫检测由几小时缩短到几分钟，而灵敏度却要高于一般胶体金试纸条的和现有技术公开的化学发光试纸条。本实用新型所提供的试纸条可广泛应用于各种病原体抗体进行同时检测。
附图说明
图1本实用新型所提供试纸条的示意图。
图中：1：加样区，2：观测区，3：T1线，4：T2线，5：T3线，6：C线，7：卡壳。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本实用新型作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本实用新型并能予以实施，但所举实施例不作为对本实用新型的限定。
本实用新型所使用的所有材料，包括抗原和抗体，都是现有技术中已经存在，本领域技术人员根据现有技术能够获得的材料。本领域技术人员基于实施本实用新型目的需要，也可以从申请人处获得这些材料。本实用新型的发明点在于这些现有技术在试纸条中的布局关系。
本实用新型所提供的基于以碳量子点标记抗原建立的三联抗体(IgG/IgM/IgA)快检试纸条的制备方法简述如下：
在聚氯乙烯（PVC）胶板上顺次相互搭接贴上样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸。将PVC胶板及其贴附的材料切割成4mm宽度的层析试纸条。装入卡壳内，卡壳上开窗口，分为加样区和显色区。样品垫位于加样区，硝酸纤维素膜位于显色区。
本实用新型提供用于检测抗体的试纸条，所述样品垫为玻璃纤维膜；所述结合物垫为涂覆有以碳量子点标记的，与待检测抗体特异结合的抗原（CNP-Ag）的玻璃纤维膜；所述硝酸纤维素膜上包被有三条线，分别为T1线，即与待检测抗体特异结合的抗原（Ag），与碳量子点所标记抗原相同；T2线，即捕获待检测抗体IgM的抗体（即，二抗）；T3线，即捕获待检测抗体IgA的抗体（即，二抗）；C线，即待检测抗体所对应抗原的特异性抗体(Ab)。
本实用新型所提供试纸条的应用示例如下：
本实用新型所提供试纸条，在加样区上加入待检样品后，如果待检样品中含有待检测抗体，通过层析作用，碳量子点标记的抗原与待检样品中的特异性抗体结合形成复合物，总抗体被膜上第一条抗原线（T1）结合、滞留；抗原抗体复合物可被第二条线(T2)上包被的能与待检样品中的IgM抗体特异结合的二抗结合、滞留；抗原抗体复合物可被第三条线(T3)上包被的能与待检样品中的IgA抗体特异结合的二抗结合、滞留。当第一条线为阳性，第二条线也为阳性，样品为IgM阳性；当第一条线为阳性，第二条线为阴性，第三条线为阳性时，样品为IgA阳性；当第一条线为阳性，第二条线为阴性，第三条线也为阴性时，样品为IgG阳性。
本实用新型所提供试纸条，可对待检样品中的IgG\IgM\IgA抗体分别进行检测，用以对特殊疾病的诊断。质控线（C线）为：能与以碳量子点标记的抗原相结合的抗体。该质控线(C)是用于衡量方法有效与否的标准，若C线处没有发光条带，表明该检测系统失效，检测结果判定为无效。
绘制被检测物的浓度与碳量子点发光的光强标准曲线，可以对待检样品中抗体浓度做定量或定性分析。
使用本实用新型所提供的试纸条可以对特异性抗体IgG/IgM/IgA同时检测，对待检样品中抗体浓度做定量或定性分析。
该试纸条易于制备，使用方便快捷，将普通免疫检测由几小时缩短到几分钟，而灵敏度却要高于一般胶体金试纸条的和现有技术公开的化学发光试纸条。本实用新型所提供的试纸条可广泛应用于各种病原体抗体进行同时检测。
实施例1
检测试纸条的制备：
1、将待检测目标抗体的对应抗原用碳二亚胺（EDC）方法链接到碳量子点(CNP)上，分离、纯化后稀释至工作浓度，涂于玻璃纤维结合物垫上，37度干燥2小时后备用。
2、将样品垫（玻璃纤维膜），结合有被量子点标记的抗原的结合物垫，硝酸纤维素膜和吸水纸按照顺序，依次相互搭接贴在PVC胶板上；
3、采用三维平面划膜仪将所要包被的T线和C线的抗原和抗体，按照浓度为0.2～0.5mg/mL左右包被在硝酸纤维素膜上，C线为量子点标记抗原的抗体，T1线为碳原子点标记抗原，T2线为待检测抗体IgM的抗体，即IgM二抗，T3线为待检测抗体IgA的抗体，即IgA二抗，仪器参数设置为1微升/厘米，C和T线的宽度间隔为4毫米；
4、将PVC胶板及其贴附的材料切成4mm宽度的层析试纸条；
5、将切割好的试纸条，装在卡壳内，卡壳上开有加样区和显色区，样品垫对准加样区，T线和C线区域对准显色区；
6、将组装好的试纸条装在铝箔袋中，内装一个干燥剂和滴管，进行密封常温保存。
抗体检测
具体操作步骤如下：
滴加3滴血液样品100μL于加样孔（样品垫），10分钟之后，放置于蛋白凝胶成像仪上进行读出。
结果判断：
当第一条线为阳性，第二条线也为阳性，样品为IgM阳性；
当第一条线为阳性，第二条线为阴性，第三条线为阳性时，样品为IgA阳性；
当第一条线为阳性，第二条线为阴性，第三条线也为阴性时，样品为IgG阳性。
无效：反应完成后，若在Cline处未显示发光条带，证明该检测系统无效。
采用所制备的试纸条对临床确诊的肺炎支原体抗体IgG阳性血清150份、肺炎支原体抗体IgM阳性血清150、肺炎支原体抗体IgA阳性血清66份阳性和肺炎支原体抗体阴性血清200份进行了检测，结果符合率较高。
采用所制备的试纸条对临床确诊的EB病毒（epstein-barrvirus,EBV）抗体IgG阳性血清150份、EB病毒抗体IgM阳性血清150、EB病毒抗体IgA阳性血清63份阳性和EB病毒抗体阴性血清200份进行了检测，结果符合率较高。
以上所述实施例仅是为充分说明本实用新型而所举的较佳的实施例，本实用新型的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本实用新型基础上所作的等同替代或变换，均在本实用新型的保护范围之内。
Claims (5)
1.三联抗体快检试纸条，包括依次排布的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水部，其特征在于，所述结合物垫为涂覆有以碳量子点标记的，与待检测抗体特异结合的抗原的纤维膜；所述硝酸纤维素膜上依次包被有，与待检测抗体特异结合的抗原、捕获待检测抗体IgM的抗体、捕获待检测抗体IgA的抗体，以及待检测抗体所对应抗原的特异性抗体。
2.权利要求1所述试纸条，其特征在于，所述结合物垫为涂覆有以碳量子点标记的，与待检测抗体特异结合的抗原的玻璃纤维膜。
3.权利要求1所述试纸条，其特征在于，所述待检测抗体为肺炎支原体抗体或EB病毒抗体。
4.权利要求1所述试纸条，其特征在于，所述与待检测抗体特异结合的抗原为肺炎支原体抗原或EB病毒抗原。
5.权利要求1-4任一项所述试纸条，其特征在于，所述试纸条还包括卡壳。
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